JPH08508299A

JPH08508299A - サイトカイン抑制剤

Info

Publication number: JPH08508299A
Application number: JP7513970A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．スト，マーク; イー．ガートン，ビバリー; エイ．ホウトン，リチャード; シー．ローリス，コスタス; アール．タトル，ロナルド
Original assignee: ホウトンファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド
Priority date: 1993-11-12
Filing date: 1994-11-09
Publication date: 1996-09-03
Anticipated expiration: 2013-09-03
Also published as: DE69418181D1; US5420109A; US5888969A; NO952744L; ES2130574T3; ATE179429T1; CA2153584A1; JP2793719B2; DK0679092T3; NO952744D0; JPH10259196A; AU678329B2; AU1174195A; EP0679092A4; FI953378A; EP0679092B1; KR100248033B1; DE69418181T2; NZ276906A; CA2153584C

Abstract

(57)【要約】本発明は、新規なサイトカイン抑制剤を提供し、この薬剤は、サイトカインの生物学的活性を制限または制御する。本発明はまた、サイトカイン抑制ペプチドを含む薬学的組成物、および該薬学的組成物を被験体に投与する方法を提供する。本発明はさらに、被験体においてサイトカイン活性を抑制するために、新規のペプチドを用いる方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】サイトカイン抑制剤発明の背景発明の分野本発明は、一般的にペプチド化学および分子病理学の分野に関し、そして、さらに特定すると、新規なサイトカイン抑制剤に関する。背景サイトカインは、ウィルスまたは細菌感染に対する応答において、および免疫応答中のＴ細胞刺激に対する応答において、マクロファージおよび単球により生産されるタンパク質の１つのクラスである。サイトカインは、通常、組織中に非常に低濃度で存在し、特定の細胞タイプ上の高親和性レセプターへの結合を介してそれらの作用を仲介する。インターロイキン（IL）、インターフェロン（IF）、および腫瘍壊死因子（TN F）のような種々のサイトカインは、免疫および炎症性応答中に生産され、そしてこれらの応答の種々の局面を制御する。免疫または炎症性応答の誘発に続き、種々のサイトカイン濃度が、異なった時間で増加する。例えば、被験体を細菌の内毒素に曝した後に、TNFおよびインターロイキン-６（IL-6）レベルが増加し、数時間の後にIL-1およびIL-8のレベルが増加する。 TNF、IL-1、IL-6、およびIL-8は、宿主の防御応答、細胞調節、および細胞分化を仲介する。例えは、これらのサイトカインは、被験体内に熱を誘発し得、Ｔ細胞およびＢ細胞を活性化し得、そして他のサイトカインのレベルに影響を与え得る。その結果、カスケード効果が生じ、他のサイトカインが最初のサイトカインの生物学的作用を仲介する。これらの４種のサイトカインの活性化は、組織の損傷、および種々の炎症状態（例えば、慢性関節リウマチを含む）で生じる痛みの原因である。慢性関節リウマチでは、TNF、IL-1、IL-6、およびIL-8のレベルは劇的に増加し、そして関節液中で検出され得る。これらのサイトカインの発現により誘発されるサイトカインカスケードによって、リポタンパク質の代謝が抑制され、そして骨および軟骨の分解が生じる。細菌性感染では、IL-8のようなサイトカインは、シグナルとして作用し、好中球のような白血球をサイトカイン発現領域に引き寄せる。一般的に、好中球により酵素およびスーパーオキシドアニオンが放出されることは、感染した細菌を破壊するためには不可欠である。しかし、サイトカインの発現により、高中球が、例えば肺に侵入する場合、好中球の酵素およびスーパーオキシドアニオンの放出によって、致死的であり得る成人呼吸性窮迫症候群に発展し得る。同様に、好中球が、他の組織および器官においてサイトカインの発現に応答して侵入すると、健康な組織が破壊され得る。サイトカインは、多数の生物学的活性を有し、そして１種を超える細胞タイプと相互作用する。さらに、いくつかの細胞は１種を超えるサイトカインのタイプと相互作用する。その結果、ある特定のサイトカインまたは細胞タイプを標的とすることにより、健康な組織に対する損傷を予防することは可能ではない。例えば、１種のサイトカインによる生物学的効果を排除するように設計された個々のサイトカインレセプターまたはレセプターアンタゴニストは、TNF、IL-1、IL-6、およびIL-8により仲介される内毒性ショックによる死亡率を減少させなかった。サイトカインによる組織の損傷を防止するためのより良いアプローチは、全体としていかなるサイトカインの発現もなくすことなく、応答にかかわる全てまたは数種のサイトカインの発現を抑制することである。この方法では、完全な免疫抑制を防止し得、そして恒常性が維持され得る。コルチコステロイドは、サイトカインの発現を効果的に調節する。しかし、コルチコステロイドは、完全な免疫抑制の原因となり得、そして他の有害な副作用（例えば、「消耗（wasting）」症候群、糖尿病および骨粗鬆症を含む）を有し得る。ケトロラク（Tora 炎症および痛みの治療に効果的である。しかし、これらの薬剤は、プロスタグランジンの生産を阻害することにより作用し、胃潰瘍、出血、および腎不全を含む潜在的に深刻な合併症を招き得る。サイトカインの発現により引き起こされる病理学的状態を予防するために、組織中でサイトカインのレベルを容易に制御し得れば有利である。しかし、サイトカインの生理学的効果を改変することは、それらの多面的効果により妨げられてきた。従って、有害な副作用を引き起こすことなく、被験体内でサイトカインの活性を抑制し得る薬剤が必要とされる。本発明は、この必要性を満足し、そしてさらに関連した利点も提供する。発明の要旨本発明は、強力なサイトカイン抑制剤である、新規なペプチドに関する。一般構造、Ｘ₁-Ｘ₂-His-（Ｄ）Phe-Arg-（Ｄ）TrP-Ｘ₃およびＸ₄-His-（Ｄ）Phe-Arg -（Ｄ）Trp-Ｘ₃を有し、ここで、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄が、アミノ酸またはアミノ酸のアナログであり得る、新規なサイトカイン抑制ペプチドが開示される。本発明はまた、以下の構造、（Ｄ）Trpアナログを含む、Ac-His-（Ｄ）Phe-Arg- （Ｄ）Trp（Ch₂NHAc）-Gly-NH₂を有するサイトカイン抑制ペプチドに関する。さらに、本発明は、薬学的に受容可能なキャリアおよびサイトカイン抑制剤を含む薬学的組成物、およびこの薬学的組成物を被験体へ投与する方法に関する。このようなサイトカイン抑制剤を被験体に投与すると、サイトカイン活性は抑制されるが、完全には抑えられない。従って、本発明は、被験体内での完全な免疫抑制を引き起こすことなく、被験体内でサイトカイン活性により引き起こされる健康な組織への損傷を防止または最小化する方法を提供する。発明の詳細な説明本発明は、一般的に、新規なサイトカイン抑制剤に関し、それは、以下の構造を有する： X₁−X₂−His−(D)Phe−Arg−(D)Trp−X₃，ここでここでYがO，H₂またはS；R₁がH，COCH₃，C₂H₅，CH₂Ph，COPh，COO-t-ブチル， COOCH₂Ph，CH₂CO-（ポリエチレングリコール）またはA；R₂がHまたはCOCH₃であり R₃が１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝のアルキル基、あるいは３〜６個の炭素原子を有する環状アルキル基であり； R₄が(CH₂)_m-CONH₂，(CH₂)_m-CONHR₁または(CH₂)_m-CONHA；R₅がOH，OR₃，NH₂，S H，NHCH₃，NHCH₂PhまたはA；およびR₆がHまたはR₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であり、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：を有する炭水化物である。例えば、本発明は、 Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂；Ac-Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Tr p-Gly-NH₂；およびAc-（シクロヘキシル）Gly-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly- NH₂，のようなペプチドを提供し、それらは、サイトカイン活性を抑制し得る。本発明はまた、新規なサイトカイン抑制剤に関し、それは以下の構造を有する： X₄-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-X₃，ここで、ここで、YがO，H₂またはS；R₁がH，COCH₃，C₂H₅，CH₂Ph_,COPh，COO-t-ブチル，COOCH₂Ph，CH₂CO-（ポリエチレングリコール）またはA；R₂がHまたはCOCH₃；R₄ が(CH₂)_m-CONH₂，(CH₂)_m-CONHR₁または(CH₂)_m-CONHA；R₅がOH，OR₃，，NH₂，SH ，NHCH₃，NHCH₂PhまたはA；そしてR₆がHまたはR₃である；そしてここで、「Ph」がC₆H₅であり、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：を有する炭水化物である。例えば、本発明は、 His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂；Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-NH₂；His-(D)Ph e-Arg-(D)Trp-OH；およびシクロ(His-(D)Phe-Arg-(D)Trp) を提供し、それらは、サイトカイン活性を抑制し得る。本明細書で用いる「抑制」という用語は、一般的に理解される意味を有する。すなわち、制御または調節下で限定、制限、維持することである。よって、「サイトカイン抑制剤」とは、サイトカインの生物学的活性を制限または制御する作用を有する薬剤である。例えば、サイトカイン抑制剤は、本明細書中に記載されるように、アミノ酸またはアミノ酸アナログを含むペプチドであり得る。上記の例に加えて、ペプチドサイトカイン抑制剤の他の代表的な例には、以下： 1）Ac-Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-OH； 2）Ac-Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly−OC₂H₅； 3）Ac-Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH-NH₂； 4）AC-Nle-Asn-His-(D)Phe-Arq-(D)Trp-Gly-NH₂； 5）Ac-Nle-Asn-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-OH； 6）Ac-Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NHCH₂CH₂Ph； 7）Ac-Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NHCH₂Ph； 9）Ac-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂； 10）Ac-Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-NH₂； 11）Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂； 12）His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-NH₂； 13）Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-OH；および 14）Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp(CH₂NHAc)-Gly-NH₂，が挙げられ、ここで、（Ｄ）Trp(CH₂NHAc)、つまり（Ｄ）Trpのアナログ中では、Ｈ₂がα-カルボニル酸素を置換する。上記のペプチドサイトカイン抑制剤は、His-（Ｄ）Phe-Arg-（Ｄ）Trp（または（Ｄ）Trpのアナログ）というアミノ酸配列を有するコア構造により、部分的に特徴づけられる。ここで、アミノ酸は、一般的に知られるそれらの３文字の記号により示され、（Ｄ）は、天然に存在するＬ-アミノ酸とは反対の、「Ｄ」配置を有するアミノ酸を意味する。特定の立体配置が示されていない場合は、当業者は、そのアミノ酸が（Ｌ）-アミノ酸であると理解する。上で例示したペプチドでは、「Nle」はノルロイシンについての３文字記号であり、そして「Ph」は、「フェニル」基（C₆H₅）を示す。上記のペプチドのようなサイトカイン抑制剤は、Merrifield（J．Am．Chem．S oc. ，85：2149（1964）、これは本明細書中に参考として援用されている）の固相ペプチド合成方法の改変法を用いて合成された。あるいは、当該分野で周知の標準溶液法（例えば、Bodanszky，M.，PrinciPles of Peptide Synthesis第２改訂版（Springer-Verlag，1988および1993）を参照のこと、これは本明細書中に参考として援用されている）を用いて合成され得る。Merrifieldの方法により調製されるペプチドは、自動化ペプチドシンセサイザー（例えば、Applied Biosys tems 431A-01 Peptide Synthesizer（Mountain View，CA））を用いて、またはH oughten，Proc．Natl．Acad．Sci.，USA 82：5131（1985）（これは、本明細書中に参考として援用されている）に記載のマニュアルのペプチド合成技術を用いて合成され得る。ペプチドを、アミノ酸またはアミノ酸アナログを用いて合成し、それらの活性基を必要に応じて、例えばｔ-ブチルジカルボネート（t-BOC）基、またはフルオレニルメトキシカルボニル（FMOC）基を用いて保護した。アミノ酸およびアミノ酸アナログは、市販品を購入（Sigma Chemical Co.；Advanced Chemtec）し得るか、あるいは当該分野で公知の方法を用いて合成し得る。固相法を用いて合成したペプチドは、樹脂に結合され得る。この樹脂には、4-メチルベンズヒドリルアミン（MBHA）、4-（オキシメチル）-フェニルアセトアミドメチル、および4-（ヒドロキシメチル）フェノキシメチル-コポリ（スチレン-1％ジビニルベンゼン）（Wang樹脂）（これらは全て市販されている）、またはp-ニトロベンゾフェノンオキシムポリマー（オキシム樹脂）（これは、De GradoおよびKaiser，J．Org．Chem．47：3258（1982）（これは本明細書中に参考として援用されている）に記載のように合成され得る）が挙げられる。当業者は、ペプチドに組み込まれるアミノ酸またはアミノ酸アナログの選択は、サイトカイン抑制ペプチドに必要な特定の物理学的、化学的、または生物学的特性に一部依存することを知っている。このような特性は、サイトカイン抑制剤が投与される経路、またはサイトカイン抑制剤が指向する被験体内の位置により、一部決定される。ペプチド中の反応基の選択的な改変はまた、サイトカイン抑制剤に所望の特性を与え得る。ペプチドは樹脂に結合した状態で処理され、アセチル化ペプチドのようなＮ末端改変化合物が得られ得るか、あるいはフッ化水素または等価な開裂試薬を用いて樹脂から除去され得、次いで改変され得る。Ｃ末端カルボキシ基を含む合成化合物（Wang樹脂）は、樹脂から切断された後に、またはある場合には溶液相合成の前に、改変され得る。ペプチドのＮ末端またはＣ末端を改変する方法は、当該分野では周知であり、そして、例えば、Ｎ末端をアセチル化する方法またはＣ末端をアミド化する方法が挙げられる。同様に、アミノ酸またはアミノ酸アナログの側鎖を改変する方法は、ペプチド合成の当業者に周知である。ペプチド上に存在する反応性基に対してなされる改変の選択は、当業者がペプチドに必要とする特性により決定される。環状ペプチドもまた、有効なサイトカイン抑制剤になり得る。環状ペプチドは、例えば、ペプチドのＮ末端のアミノ基とＣ末端のカルボキシル基との間に共有結合の形成を誘発することにより得られ得る。例えば、Hisと（Ｄ）Trpとの間に共有結合の形成を誘発することにより作製され得るペプチド、シクロ（His-（Ｄ）Phe-Arg-（Ｄ）Trp）は、サイトカイン抑制活性を有し得る。あるいは、環状ペプチドは、末端の反応性基と反応性のアミノ酸側鎖との間、または２種の反応性アミノ酸側鎖間に共有結合を形成することにより得られ得る。当業者は、特定の環状ペプチドの選択が、ペプチド上に存在する反応性基および所望のペプチド特性により決定されることを知っている。例えば、環状ペプチドは、インビボでの安定性が増加したサイトカイン抑制剤を提供し得る。新たに合成したペプチドは、逆相高速液体クロマトグラフィー（RP-HPLC）のような方法を用いて精製され得るか（これは以下（実施例Ｉを参照のこと）に詳細に記載されている）、あるいは、ペプチドの大きさまたは電荷に基づいて分離する他の方法を用いて精製され得る。さらに、精製ペプチドは、これらの方法ならびにアミノ酸分析および質量分光測定のような他の周知の方法を用いて特徴づけられ得、これは以下（実施例Ｉを参照のこと）に詳細に記載されている。本発明はまた、サイトカイン抑制剤および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物に関する。薬学的に受容可能なキャリアは、当該分野では周知であり、これには、生理学的緩衝化食塩水のような水溶液、あるいは他の溶媒またはビヒクル（例えば、グリコール、グリセロール、オリーブオイルのようなオイル、または注入可能な有機エステル）が挙げられる。薬学的に受容可能なキャリアは、生理学的に受容可能な化合物を含み得、この化合物は、例えば、サイトカイン抑制剤を安定化させるか、またはこの薬剤の吸収を増加させるように作用する。このような生理学的に受容可能な化合物としては、例えば、炭水化物（例えば、グルコース、スクロース、またはデキストラン）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸またはグルタチオン）、キレート剤、低分子量タンパク質、または他の安定剤あるいは賦形剤（excipient）が挙げられる。当業者は、生理学的に受容可能な化合物を含む薬学的に受容可能なキャリアの選択が、例えは、サイトカイン抑制剤の投与経路、および特定のサイトカイン抑制剤に特有の物理-化学的特性に依存することを知っている。本発明はさらに、被験体内で病理学的に上昇したサイトカイン活性を抑制するために、サイトカイン抑制剤を含む薬学的組成物を被験体に投与する方法に関する。例えば、組成物は、炎症、痛み、悪質液、および病原性免疫性疾患（例えば、関節炎、炎症性腸疾患、および全身性エリテマトーデス）（これらの各々は病理学的に上昇したサイトカイン活性により特徴づけられる）に対する治療として被験体に投与され得る。本明細書で用いる「病理学的に上昇した」という用語は、サイトカイン活性が、このような被験体の正常な集団において予想される活性範囲を超えて上昇することを意味する。例えば、特定の組織におけるIL-1活性の正常な範囲は、母集団から多数の被験体をサンプリングすることにより決定され得る。サイトカイン誘発性病理学的効果により特徴づけられる病理を有する被験体は、その被験体内のサイトカイン活性が、正常な範囲を超えて病理学的に上昇していることを決定することにより、容易に同定され得る。当業者は、病理学的に上昇したサイトカイン活性を有する被験体に、サイトカイン抑制剤を含む薬学的組成物を、例えは、経口、腟内、直腸、または非経日（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、眼窩内、包内、腹腔内、槽内）を含む種々の経路により、あるいは、例えは、皮膚パッチまたは経皮イオン導入法をそれぞれ用いて、皮膚を通しての受動的または促進吸収により投与し得ることを知っている。さらに、組成物は、注入、挿管法により、経口または局所的に投与され得、後者は、例えば、軟膏または散剤を直接付与することにより、受動的であり得、あるいは、例えば、鼻内スプレーまたは吸入剤を用いて、能動的であり得る。サイトカイン抑制剤はまた、局所スプレーとして投与され得、その場合、組成物の１成分は適切な噴射剤である。薬学的組成物はまた、所望であれば、リポソーム、マイクロスフェアまたは他のポリマーマトリクスの中に組み込まれ得る（Gregoriadis ，Liposome Technology，第１巻（CRC Press，Boca Raton，FL 1984）、これは本明細書中に参考として援用されている）。例えば、リン脂質または他の脂質からなるリポソームは、無毒性で、生理学的に受容可能かつ代謝可能なキャリアであり、これは作製および投与するには比較的簡単である。前述のように、サイトカインの発現によって、被験体内の健康な組織が損傷され得、そして極端な場合には、深刻な障害および死を招き得る。サイトカインは、例えば、免疫応答において、または細菌性内毒素誘発敗血症に対する応答において、局在した感染部位で発現し得るか、または全身で発現し得る。サイトカイン発現は、被験体内に発熱（病熱）および痛覚過敏（痛みに対する極端な感度）を誘発し得、さらにマクロファージおよび単球の活性化を誘発し得、これが被験体内で炎症性応答を生じさせるか、またはさらに寄与している。サイトカインの発現は、局在的または全身的であり得るので、当業者は、サイトカイン抑制剤を投与する特定の経路および方法を、被験体内におけるサイトカインの源および分布に基づいて選択する。例えば、細菌性内毒素誘発敗血症のような全身病を患っている被験体において、サイトカイン抑制剤を含む薬学的組成物は、静脈内、経口により、またはサイトカイン抑制剤を全身に分配する別の方法により投与され得る。しかし、急性呼吸窮迫症候群のような局所的なサイトカインの発現により引き起こされる病理を患っている被験体においては、サイトカイン抑制剤は、適切な薬学的に受容可能なキャリアの中に懸濁または溶解され得、そして鼻内スプレーを用いて肺の中に直接投与され得る。サイトカインの生物学的活性を抑制するために、サイトカイン抑制剤は有効な投与量で投与されなければならない。この投与量は、約0.01〜100mg/kg体重である。有効な全投与量は、一回分の投与量として、すなわち、ボーラスとするか、または比較短い時間で輸液するかのいずれかで被験体に投与され得るか、あるいは、分割した治療プロトコールを用いて投与され得る。このプロトコールでは、さらに長い時間にわたって多回用量が投与される。当業者は、被験体内で有効な投与量を得るために必要なサイトカイン抑制剤の濃度が、被験体の年齢および全身の健康状態、ならびに投与経路および投与すべき治療回数を含む多くの要因に依存することを知っている。これらの要因を考慮して、当業者は、サイトカイン活性を抑制するための有効な投与量を得るために、特定の投与量に調節する。サイトカイン抑制剤の例、およびサイトカインに仲介される生物学的な悪影響を防止または最小限にする、サイトカイン抑制剤の有効性を以下に記載し、そして表Ｉおよび表IIにまとめる。以下に記載のように、実施例IIに記載のペプチドのようなサイトカインの抑制剤は、マウス中でサイトカインの発現を効果的に抑制し（実施例IIIおよびＩV）、そして、当該分野においてヒトでの効果が予想され得るものとして認識されているマウス、ラット、およびウサギモデル系を用い、マウス、ラットおよびウサギにおいて、サイトカインが仲介する痛み、腫脹、病熱および致死の緩和を提供する（実施例Ｖ〜XII）。従って、本明細書中に記載される化合物は、病理学（例えば、炎症、痛み、悪質液）および病原性免疫性疾患（例えば、関節炎、炎症性腸疾患、および全身性エリテマトーデス）（これらは、変化したサイトカイン活性により特徴づけられる）の治療のための薬剤として用いられ得る。以下の実施例は、本発明を例示することを意図しており、本発明を制限することは意図していない。実施例Ｉペプチドサイトカイン抑制剤の合成本実施例は、ペプチドサイトカイン抑制剤の固相合成方法を記載する。A．Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-G1v-NH₂ アミノ酸配列 Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly（「EX-1」）を有するペプチドサイトカイン抑制剤は、Merrifield（1964）の固相ペプチド合成法を改変したものを用いて合成した。本質的には、t-BOCグリシン誘導体（Advanced Chem tech； LoUisville，KY）を有するMBHA樹脂を、固相ペプチド合成（Houghten、1985参照）に適した反応容器に添加した。この樹脂を、塩化メチレンで３回洗浄し、そして塩化メチレン中で１〜２％のアニソールを含むトリフルオロ酢酸（TFA）を用いてt-BOC保護基を除去した。次いでこの樹脂を塩化メチレンで洗浄し、ジイソプロピルエチルアミンで処理した。このペプチドを、ジメチルホルムアミド中の3.2当量のN-ホルミル-BOC-保護D- トリプトファンおよび3.0当量のジクロヘキシルカルボジイミドを添加することによって伸張した。反応をニンヒドリンを用いて監視し、そのまま25分間続けた後、塩化メチレンを用いて樹脂を洗浄した。ジ-トルリル（tolulyl）-BOC-アルギニンを用いてこの手順を繰り返し、次いでそれぞれの所望の保護されたアミノ酸について完全なヘプタペプチドが合成されるまでこの手順を繰り返した。ヘプタペプチドの合成に続き、トリプトファン残基上のN-ホルミル保護基を、 DMF中にピペリジンを20％含む溶液で除去し、この樹脂を塩化メチレンで洗浄した。このペプチドを10％アニソールを含む無水フッ化水素（HF）を用いて樹脂から切り離し、反応液を濃縮し、そして残渣を酢酸水溶液で分解した。酢酸画分（分解物を含む）を除去し、残渣を水で洗浄した。洗浄液を酢酸画分に添加し、合併したサンプルを濃縮した。得られた粗製ペプチドを、30分間かけて溶液Ｂの１〜60％の勾配を用いてRP-HPLC（Vydac，C-18カラム）によって精製した（溶液Ａは0.1％TFA／水、溶液Ｂは、0.1％TFA／アセトニトリルである）。このペプチドは、RP-HPLCによって97％の純度であることが決定された（Vydac C-18カラム、24％の溶液Ｂのイソクラティックを用い、溶液Ａおよび溶液Ｂは、上記の通りであり；吸光度は215nmで測定した）。精製したヘプタペプチドの質量を、BioIon 20 Mass Analyzer time of flight detectorを用いるプラズマ吸収質量分析法によって決定した。EX-1ペプチドの質量は、942.7と測定され、それは予想された分子質量（MS(M＋1)-942.2）と本質的に同じであった。Ｂ．His-(D)Phe-Arg-(D)Trp(CH₂NAc)-Gly-NH₂ アミノ酸配列 His-(D)Phe-Arg-(D)Trp(CH₂NAc)-Gly-NH₂を有する本発明のサイトカイン抑制ペプチドは、以下の改変を除き、上記のように合成、精製した。 Boc-(D)Trpを、メチルクロロホルメートおよびN,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩を用いて対応するN,O-ジメチルヒドロキサメートに変換した。トリプトファンアミドを水素化リチウムアルミニウムで還元し、Boc-(D)Trpアルデヒドを得た。 DMF中にBoc-(D)Trpアルデヒドおよびシアノ水素化ホウ素ナトリウムを含む溶液を、酢酸を１％含むDMF中のリンクアミド樹脂に結合したグリシンに添加した。還元的アミノ化を完了した後、樹脂をトリフルオロ酢酸および塩化メチルの１：１の混合物とともに振盪し、Boc基を除去した。残りのアミノ酸を、順次ペプチド合成機（Applied Biosystems）で結合させ、His-(D)Phe-Arg-( D)Trp(CH₂NAc)-Gly-NH₂ペプチドを調製した。このペプチドを樹脂から切り離し、上記のように精製した。実施例II アセチル化ペプチドサイトカイン抑制剤の調製本実施例は、N-アセチル化ペプチドサイトカイン抑制剤の調製法を記載する。ヘプタペプチド、Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Glyを実施例I.A.に記載のように合成したが、新しく合成されたペプチドが樹脂から切り離す前に、ペプチドのアミノ末端を、サンプルを無水酢酸、ジイソプロピルエチルアミン、および塩化メチレンで２時間処理することによりアセチル化した点が異なった。アセチル化に続き、上記のように、このヘプタペプチドを樹脂から切り離し、RP-HPLC によって精製し、そして質量分析により特徴付けした。実施例IIのアセチル化されたヘプタペプチド（本明細書中ではEX-2と命名する）は、純度98％と決定され、その質量は985.2ダルトンと測定された。これは予想した分子質量と同じであった。実施例ＩおよびIIに記載と同様の方法を用い、本発明の他のサイトカイン抑制剤（Ac-（シクロヘキシル）Gly-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂(「EX-3」) ；Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂(「EX-4」)；およびAc-His-(D)Phe-Arg-(D )Trp-NH₂(「EX-5」)を含む）を合成した。Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)T rp(CH₂NAc)-Gly-NH₂は、ペプチドが樹脂から切り離される前に、過剰の無水酢酸を用いてペプチドをアセチル化した点を除き、実施例I.B.に記載の方法を用いて調製した。実施例III マウス中のリポポリサッカライド誘導腫瘍壊死因子レベルの低下本実施例は、リポポリサッカライド（LPS；内毒素）処理したマウスの腫瘍壊死因子（TNF）のレベルを低下させることに関する２つのサイトカイン抑制剤の効果を記載する。体重約20gのBalb/c雌マウスを、コントロールグループと処理するグループの２つのグループに分けた。5mg/mlLPSの0.9％生理食塩水を腹腔内（ip）注射によってコントロールマウスに投与した。処理するグループのマウスには、初めに生理食塩水中の30μgEX-2または150μgEX-3をipに注射し、次いでEX-2またはEX-3 を投与した１分後にコントロールグループについて記載したLPSを与えた。 LPS投与後４時間までの種々の時間に、処理およびコントロールグループのマウスの眼腔から血液サンプルを集めた。3000ｘg、５分間の遠心分離により、血漿を分離し、次いで４容量の１×リン酸緩衝生理食塩水（pH7.4）（１％のウシ血清アルブミンを含む）を用いて希釈した。100μlの血清サンプルをTNF-α（Ge nzyme；Cambridge MA）に関してELISAによりアッセイした。各グループの６匹のマウスの平均（+/-SEM）TNF-αレベルを測定し、TNFレベルの減少率（％）を計算した。表Ｉに示すように、EX-2を用いたマウスの処理は、処理しなかったコントロールマウスに比べてTNF-αのレベルを50％低下させた。同様に、EX-3を用いたマウスの処理は、処理しなかったコントロールマウスに比べてTNF-αのレベルを56％低下させた（表II）。これらの結果は本発明のペプチドがLPS誘導サイトカイン活性を抑制し得ることを示す。実施例IV マウスにおけるリポポリサッカライド誘導インターロイキン-6のレベルの低下本実施例は、LPS処理マウスにおけるインターロイキン-6のレベルを低下させることに関するサイトカイン抑制剤の効果を記載する。 Balb/cマウスをグループ分けし、上記実施例IIIに記載のように処理した。LPS 投与後６時間までの種々の時間に、マウスの眼腔から血液サンプルを入手し、血清を集めて上記のように希釈した。100μlのアリコートを、IL-6のレベルについて、IL-6特異的ELISA（Starnesら、J．Immunol．145：4185-4194（1990）、本明細書中で援用する）を用いてアッセイした。各グループの６匹のマウスの平均（+/-SEM）IL-6レベルを測定し、IL-6レベルの低下率（％）を計算した。表Ｉに示すように、EX-2を用いたマウスの処理は、処理しなかったコントロールマウスに比べてIL-6のレベルを60％低下させた。実施例Ｖカラギーナン誘導の足の腫脹本実施例は、炎症と痛みを緩和することに関する２つのサイトカイン抑制剤を記載する。カラギーナン誘導の足の腫脹を、本明細書中で援用する以下の方法を改変したものを用いて誘導する：HiltzおよびLipton、Peptides 11：979-982（1990）；V inegerら、Fed．Proc.46：118-126（1987）；およびVinegerら、J.Pharmacol.Ex pt. Therap． 166：96-103（1969）。簡単にいうと、成熟雌Balb/cマウスを、7mg/kg ケタミンおよび0.6mg/kgロムパン（rompun）のiP注射により麻酔した。足蹠の厚さを、スプリングロードミクロメーター（Swiss Precision Instruments）を用いて測定した。足蹠の厚さは、1/100インチの単位で表した。初めの測定結果を得た後、マウスの後ろ足の足蹠に0.2mlの生理的食塩水（コントロール）、0.2ml の生理食塩水中の種々の用量のEX-2またはEX-3（処理）を注射した。最初の注射の直後に、0.02mlの0.15％κ-カラギーナン（Sigma Chemical Co.）を注射した。後ろ足の足蹠の厚さを、１時間毎に６時間測定し、厚さの変化を測定して、EX -2を用いた処理による腫脹の縮小割合（％）を計算した。表IおよびIIに示すように、１μgのEX-2または１μgのEX-3は、２時間たった時点でカラギーナン誘導の腫脹を、それぞれ45％または49％縮小した。実施例VI リポポリサッカライド誘導致死本実施例は、LPSの投与によって誘導される敗血症に由来する致死率の減少におけるサイトカイン抑制剤、EX-2およびEX-3の効果を記載する。これらの実験は、RivierらのEndocrinology 125：2800-2805（1989）によって報告された情報（本明細書中で参考として援用する）に基づいて行った。成熟雌 Balb/cマウスに餌と水を無制限に与えた。マウスに、４時間毎に40時間にわたり0.2ml生理食塩水中30 〜300μgのEX-2またはEX-3（処理グループ）または0.2ml生理食塩水のみ（コントロールグループ）をip注射した（各グループ10匹ずつ）。最初の注射の直後に、0.2ml生理食塩水中0.6mgLPS内毒素を各マウスに投与した。LPS注射の後、EX-2 または生理食塩水を、処理したマウスまたはコントロールマウスに、４時間毎に 36時間にわたり投与した。表ＩおよびIIに示すように、3.3mgのEX-2またはEX-3（300μgずつ11回注射）の投与によって、コントロールマウスと比較した生存率はそれぞれ83％または86 ％増加した。これらの結果は、本発明のサイトカイン抑制ペプチドの腹腔内投与が、LPS誘導敗血症による致死率を低下させ得るということを示す。実施例VII インターロイキン-1β誘導痛覚過敏症の低下本実施例は、痛みの予防を提供する際のサイトカイン抑制剤、EX-2の効果を記載する。これらの実験を、本明細書中で参考として援用する以下に記載の方法を改変したものを用いて行った：Poolら、Br.J.Pharmacol．106：489-492（1992）；Foll enfantら、Br.J.Pharmacol．98：41-43（1989）；ならびにRandallおよびSellit o、Arch.Internatl.Pharmacodyn．111：409-419（1957）。成熟雄Sprague-Dawle yラット（175〜275g）を、圧力を変化させてかける器具（IITC Life Sciences； Woodland Hills,CA）を用いる足に圧力をかける技法によって痛覚過敏症について試験した。ラットはトレーニング期間に入る前に住環境に順応させ、３日間慣らした。痛覚過敏症の試験を始める前日に、各ラットを袋（sock）に入れ、圧力を変化させ得る足への圧力試験を２回、15分の間をあけて行った。次の日、そのラットをプレテストして、それぞれのラットが、体全体でもがく、および／または悲鳴を上げるといった逃避反応を示す時の圧力（mm Hg）を測定した。約5〜10％のラットは反応を示さず、それらは更なる実験から排除した。足への圧力に反応したラットを、種々の濃度のEX-2（処理）または生理食塩水のみ（コントロール）を１ml/kgでiP注射することにより前処理した。20分後、1 00μlのIL-1β（IU/100μl）をラットの足の裏の内部に注射することにより投与した。IL-1を投与して２時間後、ラットにさらに２回の足への圧力試験を行い、コントロールラットと比較してEX-2処理ラットに負荷し得る圧力の増加（mm Hg ）を測定した。表Iに示すように、１μgのEX-2を用いた処理は、圧力の量を増加させ、ラットはコントロールラットに比べて125％の圧力に耐えた。実施例VIII 成人呼吸窮迫症候群本実施例は、LPS処理ラットの呼吸窮迫症候群を最小化することにおけるサイトカイン抑制剤、EX-2の効果を記載する。これらの実験は、本明細書中で参考として援用する以下に記載の方法を改変したものを用いて行った：Ulrichら、Am.J.Pathol．141：61-6 8（1992）；およびWhee1denらによるLab.Animals 26：29-37（1992）。雄のHarl an Sprague-Daw1eyラットを70mg/kgケタミンおよび6mg/kgロムパンの混合物をiP 注射することにより麻酔した。それぞれの麻酔したラットの首に２〜３cmの切り込みを入れ、その気管を、周りを取り囲む軟組織を鋭くないように切開することによって露出させた。ラットをほぼ垂直の平板に吊り下げ、露出した気管に１cc シリンジに取り付けた25G x 1/2インチ針を、喉頭より１cm後方の点て挿入することにより、気管内注射を行った。各ラットに0.5ml/kgの生理食塩水か、または0.5ml/kgの10mg/ml（5mg/kg）LPS 内毒素をゆっくりとした気管内投与によって与えた。LPS内毒素投与の直後に、ラットに１ml/kgの生理食塩水（コントロール）または種々の濃度のEX-2を含む生理食塩水（処理）のどちらかをip注射した。ラットを１〜２分間高くした位置にとどめて、LPSおよび生理食塩水が肺に送達されるのを容易にさせた。切り口を閉じて、ラットを回復させた。気管内注射の２および４時間後に、生理食塩水またはEX-2をコントロールおよび処理ラットにそれぞれip投与した。気管内注射の６時間後、ラットを再び麻酔し、心臓穿刺によって全血を採取した。血清を集めて保存した。首と胸を開いて、気管および肺を露出させ、肺を27 G x 3/4インチ針を用いて５mlの生理食塩水で６回洗浄し、洗浄流出物を保存した。 EX-2処理ラットの気管支−肺胞洗浄流出物中の多形核白血球（PMN；好中球）の数を数え、コントロールラットにおける数と比較した。表Ｉに示すように、100μg/kgのEX-2を用いた処理は、LPS処理肺内へのPMNの侵入を58％阻害した。実施例IX インターロイキン-1βまたはリポポリサッカライド誘導の体温上昇の阻害本実施例は、２つの異なる薬剤に応答してラットにおいて体温が上昇することを阻害するサイトカイン抑制剤、EX-2、EX-3、およびEX-4の効果を記載する。雄Wisterラット（45〜75日齢）を室温を26℃（ラットの平熱と熱平衡な温度）に調節した部屋に入れ、試験前24時間は自由に餌および水をとれるようにしてその部屋にとどめた。試験の日の朝、ラットに区別のための印を付け、体重を計った。ラットを、ストレスが最少になるように設計された拘束篭に入れ、熱プローブ（YSIプローブ#402）３〜５cmを直腸に挿入して、ラットの体温を測定した。示度が安定して15秒後に記録した。測定を１時間後に繰り返し、各ラットの基礎となる体温を確立した。基礎となる体温が確立した後、ラットに生理食塩水、IL-1βまたはLSPの内毒素をip注射した。次いで、ラットに生理食塩水（コントロール）かあるいは種々の濃度のEX-2またはEX-3（処理）のどちらかをip注射した。ラットの体温を１時間毎に６時間計測し、IＬ-1βまたはLPSによる体温上昇のEX-2またはEX-3による阻害を測定した。表Ｉに示すように、500μg/kgのEX-2を用いた処理は、IL-1誘導熱を52％阻害した。さらに、LPS注射の６時間後の測定では、50または150μg/kgのEX-2を用いた処理は、LPS誘導熱をそれぞれ45％または52％阻害した。さらに、150μg/kgの E-3を用いた処理は、LPS誘導熱を57％阻害した（表II）。これらの結果は、本発明の種々のサイトカイン抑制ペプチドが効果的に熱を下げ得ることを示している。実施例Ｘアラキドン酸誘導のマウスの耳の腫脹の縮小本実施例は、EX-2およびEX-3が、アラキドン酸誘導のマウスの耳の腫脹を縮小させ得ることを示す。実験は、体重が18〜23グラムの雌のBalb/cマウスを用いて行った。生理食塩水あるいは100μgのEX-2またはEX-3を、アラキドン酸（AA）の局所適用の30分前に、iP投与した。10μl容のピペットを用いて、10μlのAA溶液（100mg/mlエタノール；Calbiochem-Novabiochem；San Diego CA）を、各マウスの右耳の内側と外側の両表面に塗布した。10μlのエタノールのみを、各マウスの左耳の内側と外側の両表面に塗布した。耳の厚さを、AA塗布の直前および60分後に手動のスプリング入りはさみ尺で測定した。耳の厚さの増加を、AA処理した耳で観察される変化からコントロールの耳で観察される変化を引いて計算した。各グループの値（生理食塩水およびコントロール）は、各グループの個々のマウスで観察された腫脹の平均である。腫脹の縮小割合（％）は、生理食塩水コントロールグループで観察された腫脹をもとにしている。表ＩおよびIIに示すように、EX-2およびEX-3は、AA誘導の耳の腫脹をそれそれ72％および62％縮小させた。実施例XI ウサギのモルヒネ誘導呼吸低下の減少本実施例は、EX-2およびEX-3が、モルヒネによって誘導されるウサギの呼吸低下を減少させ得ることを示す。雄Sheltonウサギ（3〜4kg）を拘束して胸部の周り（前肢のすぐ後ろ側）を呼吸変換器（respiraion transducer）（モデルF-RCT：Grass Instruments；Quinc y MA）に据え付けた。変換器をKKGケーブルを介してガラスポリグラフに接続した。耳の末端の血管に25G蝶形針を用いてカニューレを挿入することにより、薬剤投与のための静脈内のラインを確立した。ウサギの呼吸を安定させ、モルヒネ硫酸塩（0.5ml生理食塩水中2mg/kg）を、静脈（iv）注射によって投与し、呼吸の速さと深さを10分間監視した。２回目の投与を行い、次いでその10分後にEX-2またはEX-3（0.5ml生理食塩水中10μg/kg ）をiv投与し、20分間ウサギを監視した。さらに2回のEX-2またはEX-3（1.0ml生理食塩水中20μg/kg）の投与を20分間隔で、すなわち、最初のモルヒネ注射から 40分後および60分後に行った。結果を、基礎となる値からの変化率（％）として計算し、実験終了時（80分後）の処理グループの平均値からコントロールグループの平均値を引いた平均値の違いとして表した。表ＩおよびIIに示すように、EX-2および EX-3は、ウサギのモルヒネ誘導呼吸低下を、それぞれ50％および65％減少させた。実施例XII TNF-αレベルおよびLPS誘導致死率の低下における経口投与したサイトカイン抑制剤の効果本実施例は、マウスのLPS誘導TNF-αレベルおよび致死率の低下における種々のサイトカイン抑制剤の経口効果を記載する。 LPS誘導致死の研究は、Rivierら（前出）によって1989年に報告された情報に基づいて行われた。成熟雌Balb/cマウスに無制限に餌と水を与えた。150μgまたは300μgのEX-2、EX-3、EX-4、またはEX-5を含む100μlの生理食塩水を、４時間毎に40時間にわたり胃管栄養によってマウスに投与した（総用量はそれぞれ1.65 mgおよび3.3mg）。コントロールマウスには100μlの生理食塩水のみを投与した。サイトカイン抑制剤または生理食塩水の第１回目の投与の直後に、0.6mgのLPS を含む0.2mlの生理食塩水をip注射により投与した。生存数の統計的に有意な増加は、コントロールマウス（0%）、あるいはEX-2またはEX-3投与マウス（0%〜11 %）と比較して、EX-4を3.3mg（63％）、EX-5を1.65mg（68%）またはEX-5を3.3mg （44%）受容したマウスで観察された。経口的に投与されたサイトカイン抑制剤がLPS誘導TNF-αレベルを下げる能力も試験した。Balb/c雌マウス（20g）に、150μgまたは300μgのEX-2、EX-3、EX- 4またはEX-5を含む100μlの生理食塩水を胃管栄養によって投与した。コントロールマウスには100μlの生理食塩水のみを投与した。１分後、0.1mgのLPSをip注射により投与した。サンプルを集めてTNF-αのレベルを上記実施例IIIに記載のように測定した。各グループのマウス（n=9〜20）の平均TNF-αレベルを測定し、TNF-αレベルの減少率（％）を計算した。TNF-αレベルは、コントロールマウス（0%）および EX-2受容マウス（26%〜28%）と比較して、150μgのEX-3（49%）；300μgのEX-3 （40%）または300μgのEX-4（44%）を受容したマウスで著しく減少した。これらの結果は、本発明の種々のサイトカイン抑制剤が、経口的に投与された場合でも効果的であることを示す。本発明を上記実施例に関して記載したが、本発明の主旨からはずれることなく種々の改変が可能である。従って、本発明は、以下の請求の範囲によってのみ限定される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ガートン，ビバリーイー. アメリカ合衆国カルフォルニア 92122, サンディエゴ，グルストランドストリート 6114 (72)発明者ホウトン，リチャードエイ. アメリカ合衆国カルフォルニア 92014, デルマル，ランチョビエホドライブ 4939 (72)発明者ローリス，コスタスシー. アメリカ合衆国カルフォルニア 92007, カーディフ，ラグーンビュウドライブ 2636 (72)発明者タトル，ロナルドアール. アメリカ合衆国カリフォルニア 92025, エスコンディド，ビスタデルセンブラド 2704

Claims

【特許請求の範囲】１．サイトカイン抑制ペプチドであって、以下： X₁−X₂−His−(D)Phe−Arg−(D)Trp−X₃，ここで、ここで、 YがO，H₂またはSであり； R₁がH，COCH₃，C₂H₅，CH₂Ph，COPh，COOCH₂Ph，COO-t-ブチル，CH₂CO-（ポリエチレングリコール）またはＡであり； R₂がHまたはCOCH₃であり； R₃が１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝のアルキル基、あるいは３〜６個の炭素原子を有する環状アルキル基であり； R₄が(CH₂)_m-CONH₂，(CH₂)_m-CONHR₁または(CH₂)m-CONHAであり； R₅がOH，OR₃，NH₂，SH，NHCH₃，NHCH₂PhまたはAであり；および R₆がHまたはR₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であり、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：を有する炭水化物である；を含む、ペプチド。２．前記アミノ末端が改変されている、請求項１に記載のペプチド。３．前記アミノ末端がアセチル化により改変されている、請求項２に記載のペプチド。４．前記カルボキシ末端が改変されている、請求項１に記載のペプチド。５．前記カルボキシ末端がアミド化により改変されている、請求項４に記載のペプチド。６．Ｒ₁が、C₂H₅およびCH₂Phからなる群から選択され、そしてＲ₂が、ＨおよびCOCH₃からなる群から選択される、請求項１に記載のペプチド。７．Ｒ₁およびＲ₂が同じモイエティーであり、該モイエティーが、Ｈ、C₂H₅、およびCH₂Phからなる群から選択される、請求項１に記載のペプチド。８．Ｘ₁が、ノルロイシン、ノルバリン、ロイシン、またはイソロイシンからなる群から選択される、請求項１に記載のペプチド。９．Ｒ₅が、Ｘ₁に共有結合しており、該共有結合が環状ペプチドを形成する、請求項１に記載のペプチド。１０．サイトカイン抑制ペプチドであって、以下： X₄−His−(D)Phe−Arg−(D)Trp−X₃，ここで、ここで、 YがO，H₂またはSであり； R₁がH，COCH₃，C₂H₅，CH₂Ph，COPh，COOCH₂Ph，COO-t-ブチル，CH₂CO-（ポリエチレングリコール）またはAであり； R₂がHまたはCOCH₃であり； R₄が(CH₂)m-CONH₂，(CH₂)m-CONHR₁または(CH₂)m-CONHAであり； R₅がOH，OR₃，NH₂，SH，NHCH₃，NHCH₂PhまたはAであり；および R₆がHまたはR₃である；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であり、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：を有する炭水化物である；を含む、ペプチド。１１．前記アミノ末端が改変されている、請求項１０に記載のペプチド。１２．前記アミノ末端がアセチル化により改変されている、請求項１１に記載のペプチド。１３．前記カルボキシ末端が改変されている、請求項１０に記載のペプチド。１４．前記カルボキシ末端がアミド化により改変されている、請求項１３に記載のペプチド。１５．Ｒ₁が、C₂H₅およびCH₂Phからなる群から選択され、そしてＲ₂が、ＨおよびCOCH₃からなる群から選択される、請求項１０に記載のペプチド。１６．Ｒ₁およびＲ₂が同じモイエティーであり、該モイエティーが、Ｈ、C₂H₅ 、およびCH₂Phからなる群から選択される、請求項１０に記載のペプチド。１７．Ｒ₅が、Ｘ₄に共有結合しており、該共有結合が環状ペプチドを形成する、請求項１０に記載のペプチド。１８．Nle−Gln−His−(D)Phe−Arg−(D)Trp−Gly-NH₂を含む、サイトカイン抑制ペプチド。１９．前記ペプチドの前記アミノ末端が、アセチル化されている、請求項１８に記載のペプチド。２０．Ac-（シクロヘキシル）Gly-Gln-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂を含む、サイトカイン抑制ペプチド。２１．His-(D)Phe-Arg-(D)-Trp-Glyを含む、サイトカイン抑制ペプチド。２２．前記カルボキシ末端が、アミド化により改変されている、請求項２１に記載のペプチド。２３．前記ペプチドの前記アミノ末端がアセチル化されている、請求項１８に記載のペプチド。２４．His-(D)Phe-Arg-(D)-Trpを含む、サイトカイン抑制ペプチド。２５．前記アミノ末端が、アセチル化により改変されている、請求項２４に記載のペプチド。２６．前記カルボキシ末端が、アミド化により改変されている、請求項２４に記載のペプチド。２７．シクロ(His-(D)Phe-Arg-(D)Trp)を含む、サイトカイン抑制ペプチド。２８．Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp(CH₂NHAC)-Gly-NH₂を含む、サイトカイン抑制ペプチド。２９．サイトカイン抑制ペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物であって、該ペプチドが、以下： X₁−X₂−His−(D)Phe−Arg−(D)Trp−X₃，ここで、ここで、 YがO，H₂またはSであり； R₁がH，COCH₃，C₂H₅，CH₂Ph，COPh，COOCH₂Ph，COO-t-ブチル，CH₂CO-（ポリエチレングコール）またはAであり； R₂がHまたはCOCH₃であり；Ｒ₃が１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝のアルキル基、あるいは３〜６個の炭素原子を有する環状アルキル基であり； R₄が(CH₂)m-CONH₂，(CH₂)m-CONHR₁または(CH₂)m-CONEAであり； R₅がOH，OR₃，NH₂，SH，NHCH₃，NHCH₂PhまたはAであり；および R₆がHまたはR₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であり、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：を有する炭水化物である；を含む、組成物。３０．サイトカイン抑制ペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物であって、該ペプチドが、以下： X₄−His−(D)Phe−Arg−(D)Trp−X₃，ここで、ここで、 YがO，H₂またはSであり； R₁がH，COCH₃，C₂H₅，CH₂Ph，COPh，COOCH₂Ph，COO-t-ブチル，CH₂CO-（ポリエチレングリコール）またはAであり； R₂がH or COCH₃であり； R₄が(CH₂)_m-CONH₂，(CH₂)_m-CONHR₁または(CH₂)_m-CONHAであり； R₅がOH，OR₃，NH₂，SH，NHCH₃，NHCH₂PhまたはAであり；および R₆がHまたはR₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であり、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：を有する炭水化物である；を含む、組成物。３１．被験体における病理学的に上昇したサイトカイン活性を抑制する方法であって、請求項２９に記載の薬学的組成物の有効量を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。３２．前記病理学的に上昇したサイトカイン活性が、炎症によるものである、請求項３１に記載の方法。３３．前記病理学的に上昇したサイトカイン活性が、悪液質によるものである、請求項３１に記載の方法。３４．前記病理学的に上昇したサイトカイン活性が、病原性免疫性疾患によるものである、請求項３１に記載の方法。３５．前記組成物が、１回より多く投与される、請求項３１に記載の方法。３６．前記組成物が、局所投与される、請求項３１に記載の方法。３７．前記組成物が、非経口投与される、請求項３１に記載の方法。３８．前記組成物が、経口投与される、請求項３１に記載の方法。３９．前記組成物が、経皮イオン導入法を介して投与される、請求項３１に記載の方法。４０．被験体における病理学的に上昇したサイトカイン活性を抑制する方法であって、請求項３０に記載の薬学的組成物の有効量を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。４１．前記病理学的に上昇したサイトカイン活性が、炎症によるものである、請求項４０に記載の方法。４２．前記病理学的に上昇したサイトカイン活性が、悪液質によるものである、請求項４０に記載の方法。４３．前記病理学的に上昇したサイトカイン活性が、病原性免疫性疾患によるものである、請求項４０に記載の方法。４４．前記組成物が、１回より多く投与される、請求項４０に記載の方法。４５．前記組成物が、局所投与される、請求項４０に記載の方法。４６．前記組成物が、非経日投与される、請求項４０に記載の方法。４７．前記組成物が、経日投与される、請求項４０に記載の方法。４８．前記組成物が、経皮イオン導入法を介して投与される、請求項４０に記載の方法。４９．薬学的に受容可能なキャリアおよびサイトカイン抑制ペプチドを含む組成物であって、該ペプチドが、以下： Ac-Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂； Ac-（シクロヘキシル）Gly-Gln--His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂； Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-NH₂；シクロ(His-(D)Phe-Arg-(D)Trp)； His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂；および Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂ からなる群から選択される、組成物。５０．被験体における病理学的に上昇したサイトカイン活性を抑制する方法であって、請求項４９に記載の薬学的組成物の有効量を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。５１．薬学的に受容可能なキャリアおよびサイトカイン抑制ペプチドを含む組成物であって、該ペプチドが以下の配列： Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp(CH₂NHAc)-Gly-NH₂ を有する、組成物。５２．被験体における病理学的に上昇したサイトカイン活性を抑制する方法であって、請求項５１に記載の薬学的組成物の有効量を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。