JPH10259196A

JPH10259196A - サイトカイン抑制剤

Info

Publication number: JPH10259196A
Application number: JP10034745A
Authority: JP
Inventors: Mark J Suto; ジェイ．ストマーク; Beverly E Girten; イー．ガートンビバリー; Richard A Houghten; エイ．ホウトンリチャード; Costas C Loullis; シー．ローリスコスタス; Ronald R Tuttle; アール．タトルロナルド
Original assignee: HOUGHTEN PHARMACEUT Inc
Current assignee: HOUGHTEN PHARMACEUT Inc
Priority date: 1993-11-12
Filing date: 1998-02-17
Publication date: 1998-09-29
Anticipated expiration: 2017-12-16
Also published as: CA2153584C; EP0679092A4; KR100248033B1; CA2153584A1; DK0679092T3; EP0679092B1; DE69418181D1; DE69418181T2; US6245738B1; ATE179429T1; WO1995013086A1; NO952744L; JP3357883B2; GR3030382T3; ES2130574T3; FI953378A0; AU678329B2; NO952744D0; AU1174195A; US5888969A

Abstract

(57)【要約】【課題】サイトカインの生物学的活性を制限または制
御する新規なサイトカイン抑制剤を提供すること。【解決手段】式X₁-X₂-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-X₃また
はX₄-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-X₃で表されるペプチドな
らびにこのペプチドを含む薬学的組成物が提供される。
ここでX₁、X₂、X₃およびX₄は所定の構造式で表されるア
ミノ酸またはアミノ酸アナログなどである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、一般的にペプチド
化学および分子病理学の分野に関し、そして、さらに特
定すると、新規なサイトカイン抑制剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】サイトカインは、ウイルスまたは細菌感
染に対する応答において、および免疫応答中のＴ細胞刺
激に対する応答において、マクロファージおよび単球に
より生産されるタンパク質の１つのクラスである。サイ
トカインは、通常、組織中に非常に低濃度で存在し、特
定の細胞タイプ上の高親和性レセプターへの結合を介し
てそれらの作用を仲介する。

【０００３】インターロイキン(IL)、インターフェロン
(IF)、および腫瘍壊死因子(TNF)のような種々のサイト
カインは、免疫および炎症性応答中に生産され、そして
これらの応答の種々の局面を制御する。免疫または炎症
性応答の誘発に続き、種々のサイトカイン濃度が、異な
った時間で増加する。例えば、被験体を細菌の内毒素に
曝した後に、TNFおよびインターロイキン-６(IL-6)レベ
ルが増加し、数時間の後にIL-1およびIL-8のレベルが増
加する。

【０００４】TNF、IL-1、IL-6、およびIL-8は、宿主の
防御応答、細胞調節、および細胞分化を仲介する。例え
ば、これらのサイトカインは、被験体内に熱を誘発し
得、Ｔ細胞およびＢ細胞を活性化し得、そして他のサイ
トカインのレベルに影響を与え得る。その結果、カスケ
ード効果が生じ、他のサイトカインが最初のサイトカイ
ンの生物学的作用を仲介する。

【０００５】これらの４種のサイトカインの活性化は、
組織の損傷、および種々の炎症状態(例えば、慢性関節
リウマチを含む)で生じる痛みの原因である。慢性関節
リウマチでは、TNF、IL-1、IL-6、およびIL-8のレベル
は劇的に増加し、そして関節液中で検出され得る。これ
らのサイトカインの発現により誘発されるサイトカイン
カスケードによって、リポタンパク質の代謝が抑制さ
れ、そして骨および軟骨の分解が生じる。細菌性感染で
は、IL-8のようなサイトカインは、シグナルとして作用
し、好中球のような白血球をサイトカイン発現領域に引
き寄せる。一般的に、好中球により酵素およびスーパー
オキシドアニオンが放出されることは、感染した細菌を
破壊するためには不可欠である。しかし、サイトカイン
の発現により、高中球が、例えば肺に侵入する場合、好
中球の酵素およびスーパーオキシドアニオンの放出によ
って、致死的であり得る成人呼吸性窮迫症候群に発展し
得る。同様に、好中球が、他の組織および器官において
サイトカインの発現に応答して侵入すると、健康な組織
が破壊され得る。

【０００６】サイトカインは、多数の生物学的活性を有
し、そして１種を超える細胞タイプと相互作用する。さ
らに、いくつかの細胞は１種を超えるサイトカインのタ
イプと相互作用する。その結果、ある特定のサイトカイ
ンまたは細胞タイプを標的とすることにより、健康な組
織に対する損傷を予防することは可能ではない。例え
ば、１種のサイトカインによる生物学的効果を排除する
ように設計された個々のサイトカインレセプターまたは
レセプターアンタゴニストは、TNF、IL-1、IL-6、およ
びIL-8により仲介される内毒性ショックによる死亡率を
減少させなかった。

【０００７】サイトカインによる組織の損傷を防止する
ためのより良いアプローチは、全体としていかなるサイ
トカインの発現もなくすことなく、応答にかかわる全て
または数種のサイトカインの発現を抑制することであ
る。この方法では、完全な免疫抑制を防止し得、そして
恒常性が維持され得る。コルチコステロイドは、サイト
カインの発現を効果的に調節する。しかし、コルチコス
テロイドは、完全な免疫抑制の原因となり得、そして他
の有害な副作用(例えば、「消耗(wasting)」症候群、糖尿
病および骨粗鬆症を含む)を有し得る。ケトロラク(Tora
dol(登録商標)；Syntex)のような非ステロイドの抗炎症
性薬剤もまた、炎症および痛みの治療に効果的である。
しかし、これらの薬剤は、プロスタグランジンの生産を
阻害することにより作用し、胃潰瘍、出血、および腎不
全を含む潜在的に深刻な合併症を招き得る。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】サイトカインの発現に
より引き起こされる病理学的状態を予防するために、組
織中でサイトカインのレベルを容易に制御し得れば有利
である。しかし、サイトカインの生理学的効果を改変す
ることは、それらの多面的効果により妨げられてきた。
従って、有害な副作用を引き起こすことなく、被験体内
でサイトカインの活性を抑制し得る薬剤が必要とされ
る。本発明は、この必要性を満足し、そしてさらに関連
した利点も提供する。

【０００９】本発明の目的は、サイトカインの生物学的
活性を制限または制御する新規なサイトカイン抑制剤を
提供することにある。本発明のさらなる目的は、サイト
カイン抑制ペプチドを含む薬学的組成物、および該薬学
的組成物を被験体に投与する方法を提供することにあ
る。本発明のさらなる目的は、被験体においてサイトカ
イン活性を抑制するために、新規のペプチドを用いる方
法を提供することにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明は、強力なサイト
カイン抑制剤である、新規なペプチドに関する。一般構
造、Ｘ₁-Ｘ₂-His-(Ｄ)Phe-Arg-(Ｄ)Trp-Ｘ₃およびＸ₄-H
is-(Ｄ)Phe-Arg-(Ｄ)Trp-Ｘ₃を有し、ここで、Ｘ₁、
Ｘ₂、Ｘ₃およびＸ₄が、アミノ酸またはアミノ酸のアナ
ログであり得る、新規なサイトカイン抑制ペプチドが開
示される。本発明はまた、以下の構造、(Ｄ)Trpアナロ
グを含む、Ac-His-(Ｄ)Phe-Arg-(Ｄ)Trp(Ch₂NHAc)-Gly-
NH₂を有するサイトカイン抑制ペプチドに関する。

【００１１】さらに、本発明は、薬学的に受容可能なキ
ャリアおよびサイトカイン抑制剤を含む薬学的組成物、
およびこの薬学的組成物を被験体へ投与する方法に関す
る。このようなサイトカイン抑制剤を被験体に投与する
と、サイトカイン活性は抑制されるが、完全には抑えら
れない。従って、本発明は、被験体内での完全な免疫抑
制を引き起こすことなく、被験体内でサイトカイン活性
により引き起こされる健康な組織への損傷を防止または
最小化する方法を提供する。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明は、一般的に、新規なサイ
トカイン抑制剤に関し、それは、以下の構造を有する： X₁-X₂-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-X₃、ここで、Ｘ₁が

【００１３】

【化１５】

【００１４】、Ｈ、またはCOCH₃であり；Ｘ₂が

【００１５】

【化１６】

【００１６】であり；およびＸ₃が

【００１７】

【化１７】

【００１８】、NH₂またはOHであり；ここで、ＹがO、H₂
またはS；Ｒ₁がＨ、COCH₃、C₂H₅、CH₂Ph、COPh、COO-t-
ブチル、COOCH₂Ph、CH₂CO-(ポリエチレングリコール)ま
たはA；Ｒ₂がＨまたはCOCH₃であり；Ｒ₃が１〜６個の炭
素原子を有する直鎖または分枝のアルキル基、あるいは
３〜６個の炭素原子を有する環状アルキル基であり；Ｒ
₄が(CH₂)_m-CONH₂、(CH₂)_m-CONHR₁または(CH₂)_m-CONHA；
Ｒ₅がOH、OR₃、NH₂、SH、NHCH₃、NHCH₂PhまたはA；およ
びＲ₆がＨまたはＲ₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆
H₅であり、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、
１、２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：

【００１９】

【化１８】

【００２０】を有する炭水化物である。例えば、本発明
は、

【００２１】

【化１９】

【００２２】のようなペプチドを提供し、それらは、サ
イトカイン活性を抑制し得る。

【００２３】本発明はまた、新規なサイトカイン抑制剤
に関し、それは以下の構造を有する： X₄-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-X₃、ここで、Ｘ₄が

【００２４】

【化２０】

【００２５】、ＨまたはCOCH₃であり；およびＸ₃が

【００２６】

【化２１】

【００２７】、NH₂またはOHであり；ここで、ＹがO、H₂
またはS；Ｒ₁がＨ、COCH₃、C₂H₅、CH₂Ph、COPh、COO-t-
ブチル、COOCH₂Ph、CH₂CO-(ポリエチレングリコール)ま
たはA；Ｒ₂がＨまたはCOCH₃；Ｒ₄が(CH₂)_m-CONH₂、(C
H₂)_m-CONHR₁または(CH₂)_m-CONHA；Ｒ₅がOH、OR₃、NH₂、
SH、NHCH₃、NHCH₂PhまたはA；そしてＲ₆がＨまたはＲ₃
である；そしてここで、「Ph」がC₆H₅であり、「ｍ」が１、
２、または３であり、「ｎ」が０、１、２、または３であ
り、そして「Ａ」が以下の一般式：

【００２８】

【化２２】

【００２９】を有する炭水化物である。例えば、本発明
は、

【００３０】

【化２３】

【００３１】を提供し、それらは、サイトカイン活性を
抑制し得る。

【００３２】本明細書で用いる「抑制」という用語は、一
般的に理解される意味を有する。すなわち、制御または
調節下で限定、制限、維持することである。よって、
「サイトカイン抑制剤」とは、サイトカインの生物学的活
性を制限または制御する作用を有する薬剤である。例え
ば、サイトカイン抑制剤は、本明細書中に記載されるよ
うに、アミノ酸またはアミノ酸アナログを含むペプチド
であり得る。上記の例に加えて、ペプチドサイトカイン
抑制剤の他の代表的な例には、以下：

【００３３】

【化２４】

【００３４】が挙げられ、ここで、(Ｄ)Trp(CH₂NHAc)、
つまり(Ｄ)Trpのアナログ中では、Ｈ₂がα-カルボニル
酸素を置換する。

【００３５】上記のペプチドサイトカイン抑制剤は、Hi
s-(Ｄ)Phe-Arg-(Ｄ)Trp(または(Ｄ)Trpのアナログ)とい
うアミノ酸配列を有するコア構造により、部分的に特徴
づけられる。ここで、アミノ酸は、一般的に知られるそ
れらの３文字の記号により示され、(Ｄ)は、天然に存在
するＬ-アミノ酸とは反対の、「Ｄ」配置を有するアミノ
酸を意味する。特定の立体配置が示されていない場合
は、当業者は、そのアミノ酸が(Ｌ)-アミノ酸であると
理解する。上で例示したペプチドでは、「Nle」はノルロ
イシンについての３文字記号であり、そして「Ph」は、
「フェニル」基(C₆H₅)を示す。

【００３６】上記のペプチドのようなサイトカイン抑制
剤は、Merrifield(J. Am. Chem. Soc., 85:2149 (196
4)、これは本明細書中に参考として援用されている)の
固相ペプチド合成方法の改変法を用いて合成された。あ
るいは、当該分野で周知の標準溶液法(例えば、Bodansz
ky, M., Principles of Peptide Synthesis 第２改訂版
(Springer-Verlag, 1988および1993)を参照のこと、こ
れは本明細書中に参考として援用されている)を用いて
合成され得る。Merrifieldの方法により調製されるペプ
チドは、自動化ペプチドシンセサイザー(例えば、Appli
ed Biosystems 431A-01 Peptide Synthesizer(Mountain
View, CA))を用いて、またはHoughten, Proc. Natl. A
cad. Sci., USA 82:5131 (1985)(これは、本明細書中に
参考として援用されている)に記載のマニュアルのペプ
チド合成技術を用いて合成され得る。

【００３７】ペプチドを、アミノ酸またはアミノ酸アナ
ログを用いて合成し、それらの活性基を必要に応じて、
例えばｔ-ブチルジカルボネート(ｔ-BOC)基、またはフ
ルオレニルメトキシカルボニル(FMOC)基を用いて保護し
た。アミノ酸およびアミノ酸アナログは、市販品を購入
(Sigma Chemical Co.; Advanced Chemtec)し得るか、あ
るいは当該分野で公知の方法を用いて合成し得る。固相
法を用いて合成したペプチドは、樹脂に結合され得る。
この樹脂には、4-メチルベンズヒドリルアミン(MBHA)、
4-(オキシメチル)-フェニルアセトアミドメチル、およ
び4-(ヒドロキシメチル)フェノキシメチル-コポリ(スチ
レン-1％ジビニルベンゼン)(Wang樹脂)(これらは全て市
販されている)、またはp-ニトロベンゾフェノンオキシ
ムポリマー(オキシム樹脂)(これは、De GradoおよびKai
ser, J. Org. Chem. 47:3258 (1982)(これは本明細書中
に参考として援用されている)に記載のように合成され
得る)が挙げられる。

【００３８】当業者は、ペプチドに組み込まれるアミノ
酸またはアミノ酸アナログの選択は、サイトカイン抑制
ペプチドに必要な特定の物理学的、化学的、または生物
学的特性に一部依存することを知っている。このような
特性は、サイトカイン抑制剤が投与される経路、または
サイトカイン抑制剤が指向する被験体内の位置により、
一部決定される。

【００３９】ペプチド中の反応基の選択的な改変はま
た、サイトカイン抑制剤に所望の特性を与え得る。ペプ
チドは樹脂に結合した状態で処理され、アセチル化ペプ
チドのようなＮ末端改変化合物が得られ得るか、あるい
はフッ化水素または等価な開裂試薬を用いて樹脂から除
去され得、次いで改変され得る。Ｃ末端カルボキシ基を
含む合成化合物(Wang樹脂)は、樹脂から切断された後
に、またはある場合には溶液相合成の前に、改変され得
る。ペプチドのＮ末端またはＣ末端を改変する方法は、
当該分野では周知であり、そして、例えば、Ｎ末端をア
セチル化する方法またはＣ末端をアミド化する方法が挙
げられる。同様に、アミノ酸またはアミノ酸アナログの
側鎖を改変する方法は、ペプチド合成の当業者に周知で
ある。ペプチド上に存在する反応性基に対してなされる
改変の選択は、当業者がペプチドに必要とする特性によ
り決定される。

【００４０】環状ペプチドもまた、有効なサイトカイン
抑制剤になり得る。環状ペプチドは、例えば、ペプチド
のＮ末端のアミノ基とＣ末端のカルボキシル基との間に
共有結合の形成を誘発することにより得られ得る。例え
ば、Hisと(Ｄ)Trpとの間に共有結合の形成を誘発するこ
とにより作製され得るペプチド、シクロ(His-(Ｄ)Phe-A
rg-(Ｄ)Trp)は、サイトカイン抑制活性を有し得る。あ
るいは、環状ペプチドは、末端の反応性基と反応性のア
ミノ酸側鎖との間、または２種の反応性アミノ酸側鎖間
に共有結合を形成することにより得られ得る。当業者
は、特定の環状ペプチドの選択が、ペプチド上に存在す
る反応性基および所望のペプチド特性により決定される
ことを知っている。例えば、環状ペプチドは、インビボ
での安定性が増加したサイトカイン抑制剤を提供し得
る。

【００４１】新たに合成したペプチドは、逆相高速液体
クロマトグラフィー(RP-HPLC)のような方法を用いて精
製され得るか(これは以下(実施例Ｉを参照のこと)に詳
細に記載されている)、あるいは、ペプチドの大きさま
たは電荷に基づいて分離する他の方法を用いて精製され
得る。さらに、精製ペプチドは、これらの方法ならびに
アミノ酸分析および質量分光測定のような他の周知の方
法を用いて特徴づけられ得、これは以下(実施例Ｉを参
照のこと)に詳細に記載されている。

【００４２】本発明はまた、サイトカイン抑制剤および
薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物に関す
る。薬学的に受容可能なキャリアは、当該分野では周知
であり、これには、生理学的緩衝化食塩水のような水溶
液、あるいは他の溶媒またはビヒクル(例えば、グリコ
ール、グリセロール、オリーブオイルのようなオイル、
または注入可能な有機エステル)が挙げられる。

【００４３】薬学的に受容可能なキャリアは、生理学的
に受容可能な化合物を含み得、この化合物は、例えば、
サイトカイン抑制剤を安定化させるか、またはこの薬剤
の吸収を増加させるように作用する。このような生理学
的に受容可能な化合物としては、例えば、炭水化物(例
えば、グルコース、スクロース、またはデキストラ
ン)、酸化防止剤(例えば、アスコルビン酸またはグルタ
チオン)、キレート剤、低分子量タンパク質、または他
の安定剤あるいは賦形剤(excipient)が挙げられる。当
業者は、生理学的に受容可能な化合物を含む薬学的に受
容可能なキャリアの選択が、例えば、サイトカイン抑制
剤の投与経路、および特定のサイトカイン抑制剤に特有
の物理-化学的特性に依存することを知っている。

【００４４】本発明はさらに、被験体内で病理学的に上
昇したサイトカイン活性を抑制するために、サイトカイ
ン抑制剤を含む薬学的組成物を被験体に投与する方法に
関する。例えば、組成物は、炎症、痛み、悪質液、およ
び病原性免疫性疾患(例えば、関節炎、炎症性腸疾患、
および全身性エリテマトーデス)(これらの各々は病理学
的に上昇したサイトカイン活性により特徴づけられる)
に対する治療として被験体に投与され得る。本明細書で
用いる「病理学的に上昇した」という用語は、サイトカイ
ン活性が、このような被験体の正常な集団において予想
される活性範囲を超えて上昇することを意味する。例え
ば、特定の組織におけるIL-1活性の正常な範囲は、母集
団から多数の被験体をサンプリングすることにより決定
され得る。サイトカイン誘発性病理学的効果により特徴
づけられる病理を有する被験体は、その被験体内のサイ
トカイン活性が、正常な範囲を超えて病理学的に上昇し
ていることを決定することにより、容易に同定され得
る。

【００４５】当業者は、病理学的に上昇したサイトカイ
ン活性を有する被験体に、サイトカイン抑制剤を含む薬
学的組成物を、例えば、経口、腟内、直腸、または非経
口(例えば、静脈内、筋肉内、皮下、眼窩内、包内、腹
腔内、槽内)を含む種々の経路により、あるいは、例え
ば、皮膚パッチまたは経皮イオン導入法をそれぞれ用い
て、皮膚を通しての受動的または促進吸収により投与し
得ることを知っている。さらに、組成物は、注入、挿管
法により、経口または局所的に投与され得、後者は、例
えば、軟膏または散剤を直接付与することにより、受動
的であり得、あるいは、例えば、鼻内スプレーまたは吸
入剤を用いて、能動的であり得る。サイトカイン抑制剤
はまた、局所スプレーとして投与され得、その場合、組
成物の１成分は適切な噴射剤である。薬学的組成物はま
た、所望であれば、リポソーム、マイクロスフェアまた
は他のポリマーマトリクスの中に組み込まれ得る(Grego
riadis, Liposome Technology, 第１巻(CRC Press, Boc
a Raton, FL 1984)、これは本明細書中に参考として援
用されている)。例えば、リン脂質または他の脂質から
なるリポソームは、無毒性で、生理学的に受容可能かつ
代謝可能なキャリアであり、これは作製および投与する
には比較的簡単である。

【００４６】前述のように、サイトカインの発現によっ
て、被験体内の健康な組織が損傷され得、そして極端な
場合には、深刻な障害および死を招き得る。サイトカイ
ンは、例えば、免疫応答において、または細菌性内毒素
誘発敗血症に対する応答において、局在した感染部位で
発現し得るか、または全身で発現し得る。サイトカイン
発現は、被験体内に発熱(病熱)および痛覚過敏(痛みに
対する極端な感度)を誘発し得、さらにマクロファージ
および単球の活性化を誘発し得、これが被験体内で炎症
性応答を生じさせるか、またはさらに寄与している。

【００４７】サイトカインの発現は、局在的または全身
的であり得るので、当業者は、サイトカイン抑制剤を投
与する特定の経路および方法を、被験体内におけるサイ
トカインの源および分布に基づいて選択する。例えば、
細菌性内毒素誘発敗血症のような全身病を患っている被
験体において、サイトカイン抑制剤を含む薬学的組成物
は、静脈内、経口により、またはサイトカイン抑制剤を
全身に分配する別の方法により投与され得る。しかし、
急性呼吸窮迫症候群のような局所的なサイトカインの発
現により引き起こされる病理を患っている被験体におい
ては、サイトカイン抑制剤は、適切な薬学的に受容可能
なキャリアの中に懸濁または溶解され得、そして鼻内ス
プレーを用いて肺の中に直接投与され得る。

【００４８】サイトカインの生物学的活性を抑制するた
めに、サイトカイン抑制剤は有効な投与量で投与されな
ければならない。この投与量は、約0.01〜100mg/kg体重
である。有効な全投与量は、一回分の投与量として、す
なわち、ボーラスとするか、または比較短い時間で輸液
するかのいずれかで被験体に投与され得るか、あるい
は、分割した治療プロトコールを用いて投与され得る。
このプロトコールでは、さらに長い時間にわたって多回
用量が投与される。当業者は、被験体内で有効な投与量
を得るために必要なサイトカイン抑制剤の濃度が、被験
体の年齢および全身の健康状態、ならびに投与経路およ
び投与すべき治療回数を含む多くの要因に依存すること
を知っている。これらの要因を考慮して、当業者は、サ
イトカイン活性を抑制するための有効な投与量を得るた
めに、特定の投与量に調節する。

【００４９】サイトカイン抑制剤の例、およびサイトカ
インに仲介される生物学的な悪影響を防止または最小限
にする、サイトカイン抑制剤の有効性を以下に記載し、
そして表１および表２にまとめる。以下に記載のよう
に、実施例IIに記載のペプチドのようなサイトカインの
抑制剤は、マウス中でサイトカインの発現を効果的に抑
制し(実施例IIIおよびIV)、そして、当該分野において
ヒトでの効果が予想され得るものとして認識されている
マウス、ラット、およびウサギモデル系を用い、マウ
ス、ラットおよびウサギにおいて、サイトカインが仲介
する痛み、腫脹、病熱および致死の緩和を提供する(実
施例Ｖ〜XII)。従って、本明細書中に記載される化合物
は、病理学(例えば、炎症、痛み、悪質液)および病原性
免疫性疾患（例えば、関節炎、炎症性腸疾患、および全
身性エリテマトーデス）（これらは、変化したサイトカ
イン活性により特徴づけられる)の治療のための薬剤と
して用いられ得る。

【００５０】以下の実施例は、本発明を例示することを
意図しており、本発明を制限することは意図していな
い。

【００５１】

【実施例】実施例I ペプチドサイトカイン抑制剤の合成本実施例は、ペプチドサイトカイン抑制剤の固相合成方
法を記載する。

【００５２】Ａ． Nle - Gln - His - (D)Phe - Arg -
(D)Trp - Gly-NH₂ アミノ酸配列 Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly
(「EX-1」)を有するペプチドサイトカイン抑制剤は、Me
rrifield(1964)の固相ペプチド合成法を改変したものを
用いて合成した。本質的には、t-BOCグリシン誘導体（A
dvanced Chemtech; Louisville, KY）を有するMBHA樹脂
を、固相ペプチド合成（Houghten、1985参照）に適した
反応容器に添加した。この樹脂を、塩化メチレンで３回
洗浄し、そして塩化メチレン中で１〜２％のアニソール
を含むトリフルオロ酢酸(TFA)を用いてt-BOC保護基を除
去した。次いでこの樹脂を塩化メチレンで洗浄し、ジイ
ソプロピルエチルアミンで処理した。

【００５３】このペプチドを、ジメチルホルムアミド中
の3.2当量のN-ホルミル-BOC-保護D-トリプトファンおよ
び3.0当量のジクロヘキシルカルボジイミドを添加する
ことによって伸張した。反応をニンヒドリンを用いて監
視し、そのまま25分間続けた後、塩化メチレンを用いて
樹脂を洗浄した。ジ-トルリル(tolulyl)-BOC-アルギニ
ンを用いてこの手順を繰り返し、次いでそれぞれの所望
の保護されたアミノ酸について完全なヘプタペプチドが
合成されるまでこの手順を繰り返した。

【００５４】ヘプタペプチドの合成に続き、トリプトフ
ァン残基上のN-ホルミル保護基を、DMF中にピペリジン
を20％含む溶液で除去し、この樹脂を塩化メチレンで洗
浄した。このペプチドを10％アニソールを含む無水フッ
化水素(HF)を用いて樹脂から切り離し、反応液を濃縮
し、そして残渣を酢酸水溶液で分解した。酢酸画分（分
解物を含む）を除去し、残渣を水で洗浄した。洗浄液を
酢酸画分に添加し、合併したサンプルを濃縮した。得ら
れた粗製ペプチドを、30分間かけて溶液Ｂの１〜60％の
勾配を用いてRP-HPLC(Vydac, C-18カラム)によって精製
した（溶液Ａは0.1％TFA／水、溶液Ｂは、0.1％TFA／ア
セトニトリルである）。

【００５５】このペプチドは、RP-HPLCによって97％の
純度であることが決定された（VydacC-18カラム、24％
の溶液Ｂのイソクラティックを用い、溶液Ａおよび溶液
Ｂは、上記の通りであり；吸光度は215nmで測定し
た）。精製したヘプタペプチドの質量を、BioIon 20 Ma
ss Analyzer time of flight detectorを用いるプラズ
マ吸収質量分析法によって決定した。EX-1ペプチドの質
量は、942.7と測定され、それは予想された分子質量(MS
(M+1)=942.2)と本質的に同じであった。

【００５６】Ｂ． His - (D)Phe - Arg - (D)Trp(CH₂N
Ac) - Gly-NH₂ アミノ酸配列 His-(D)Phe-Arg-(D)Trp(CH₂NAc)-Gly-NH
₂を有する本発明のサイトカイン抑制ペプチドは、以下
の改変を除き、上記のように合成、精製した。Boc-(D)T
rpを、メチルクロロホルメートおよびN,O-ジメチルヒド
ロキシルアミン塩酸塩を用いて対応するN,O-ジメチルヒ
ドロキサメートに変換した。トリプトファンアミドを水
素化リチウムアルミニウムで還元し、Boc-(D)Trpアルデ
ヒドを得た。

【００５７】DMF中にBoc-(D)Trpアルデヒドおよびシア
ノ水素化ホウ素ナトリウムを含む溶液を、酢酸を１％含
むDMF中のリンクアミド樹脂に結合したグリシンに添加
した。還元的アミノ化を完了した後、樹脂をトリフルオ
ロ酢酸および塩化メチルの１：１の混合物とともに振盪
し、Boc基を除去した。残りのアミノ酸を、順次ペプチ
ド合成機(Applied Biosystems)で結合させ、His-(D)Phe
-Arg-(D)Trp(CH₂NAc)-Gly-NH₂ペプチドを調製した。こ
のペプチドを樹脂から切り離し、上記のように精製し
た。

【００５８】実施例II アセチル化ペプチドサイトカイン抑制剤の調製本実施例は、N-アセチル化ペプチドサイトカイン抑制剤
の調製法を記載する。

【００５９】ヘプタペプチド、Nle-Gln-His-(D)Phe-Arg
-(D)Trp-Glyを実施例I.A.に記載のように合成したが、
新しく合成されたペプチドが樹脂から切り離す前に、ペ
プチドのアミノ末端を、サンプルを無水酢酸、ジイソプ
ロピルエチルアミン、および塩化メチレンで２時間処理
することによりアセチル化した点が異なった。アセチル
化に続き、上記のように、このヘプタペプチドを樹脂か
ら切り離し、RP-HPLCによって精製し、そして質量分析
により特徴付けした。実施例IIのアセチル化されたヘプ
タペプチド（本明細書中ではEX-2と命名する）は、純度
98％と決定され、その質量は985.2ダルトンと測定され
た。これは予想した分子質量と同じであった。

【００６０】実施例IおよびIIに記載と同様の方法を用
い、本発明の他のサイトカイン抑制剤（Ac-(シクロヘキ
シル)Gly-Gln-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂(「EX-
3」);Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-Gly-NH₂(「EX-4」);
およびAc-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-NH₂(「EX-5」)を含
む)を合成した。Ac-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp(CH₂NAc)-Gl
y-NH₂は、ペプチドが樹脂から切り離される前に、過剰
の無水酢酸を用いてペプチドをアセチル化した点を除
き、実施例I.B.に記載の方法を用いて調製した。

【００６１】実施例III マウス中のリポポリサッカライド誘導腫瘍壊死因子レベ
ルの低下本実施例は、リポポリサッカライド(LPS;内毒素)処理し
たマウスの腫瘍壊死因子(TNF)のレベルを低下させるこ
とに関する２つのサイトカイン抑制剤の効果を記載す
る。

【００６２】体重約20gのBalb/c雌マウスを、コントロ
ールグループと処理するグループの２つのグループに分
けた。5mg/mlLPSの0.9％生理食塩水を腹腔内(ip)注射に
よってコントロールマウスに投与した。処理するグルー
プのマウスには、初めに生理食塩水中の30μgEX-2また
は150μgEX-3をipに注射し、次いでEX-2またはEX-3を投
与した１分後にコントロールグループについて記載した
LPSを与えた。

【００６３】LPS投与後４時間までの種々の時間に、処
理およびコントロールグループのマウスの眼腔から血液
サンプルを集めた。3000 x g、５分間の遠心分離によ
り、血漿を分離し、次いで４容量の１×リン酸緩衝生理
食塩水(pH7.4)（１％のウシ血清アルブミンを含む）を
用いて希釈した。100μlの血清サンプルをTNF-α(Genzy
me; Cambridge MA)に関してELISAによりアッセイした。

【００６４】各グループの６匹のマウスの平均(+/- SE
M)TNF-αレベルを測定し、TNFレベルの減少率（％）を
計算した。表１に示すように、EX-2を用いたマウスの処
理は、処理しなかったコントロールマウスに比べてTNF-
αのレベルを50％低下させた。同様に、EX-3を用いたマ
ウスの処理は、処理しなかったコントロールマウスに比
べてTNF-αのレベルを56％低下させた(表２)。これらの
結果は本発明のペプチドがLPS誘導サイトカイン活性を
抑制し得ることを示す。

【００６５】実施例IV マウスにおけるリポポリサッカライド誘導インターロイ
キン-6のレベルの低下本実施例は、LPS処理マウスにおけるインターロイキン-
6のレベルを低下させることに関するサイトカイン抑制
剤の効果を記載する。

【００６６】Balb/cマウスをグループ分けし、上記実施
例IIIに記載のように処理した。LPS投与後６時間までの
種々の時間に、マウスの眼腔から血液サンプルを入手
し、血清を集めて上記のように希釈した。100μlのアリ
コートを、IL-6のレベルについて、IL-6特異的ELISA（S
tarnesら、J.Immunol. 145:4185-4194 (1990)、本明細
書中で援用する）を用いてアッセイした。

【００６７】各グループの６匹のマウスの平均(+/- SE
M)IL-6レベルを測定し、IL-6レベルの低下率（％）を計
算した。表１に示すように、EX-2を用いたマウスの処理
は、処理しなかったコントロールマウスに比べてIL-6の
レベルを60％低下させた。

【００６８】

【表１】

【００６９】

【表２】

【００７０】実施例Ｖカラギーナン誘導の足の腫脹本実施例は、炎症と痛みを緩和することに関する２つの
サイトカイン抑制剤を記載する。

【００７１】カラギーナン誘導の足の腫脹を、本明細書
中で援用する以下の方法を改変したものを用いて誘導す
る：HiltzおよびLipton、Peptides 11:979-982 (1990);
Vinegerら、Fed. Proc. 46:118-126 (1987); およびVi
negerら、J.Pharmacol.Expt.Therap. 166:96-103 (196
9) 。簡単にいうと、成熟雌Balb/cマウスを、7mg/kgケ
タミンおよび0.6mg/kgロムパン(rompun)のip注射により
麻酔した。足蹠の厚さを、スプリングロードミクロメー
ター(Swiss Precision Instruments)を用いて測定し
た。足蹠の厚さは、1/100インチの単位で表した。初め
の測定結果を得た後、マウスの後ろ足の足蹠に0.2mlの
生理的食塩水（コントロール）、0.2mlの生理食塩水中
の種々の用量のEX-2またはEX-3（処理）を注射した。最
初の注射の直後に、0.02mlの0.15％κ-カラギーナン(Si
gma Chemical Co.)を注射した。

【００７２】後ろ足の足蹠の厚さを、１時間毎に６時間
測定し、厚さの変化を測定して、EX-2を用いた処理によ
る腫脹の縮小割合（％）を計算した。表１および２に示
すように、1μgのEX-2または1μgのEX-3は、２時間たっ
た時点でカラギーナン誘導の腫脹を、それぞれ45％また
は49％縮小した。

【００７３】実施例VI リポポリサッカライド誘導致死本実施例は、LPSの投与によって誘導される敗血症に由
来する致死率の減少におけるサイトカイン抑制剤、EX-2
およびEX-3の効果を記載する。

【００７４】これらの実験は、RivierらのEndocrinolog
y 125:2800-2805 (1989)によって報告された情報（本明
細書中で参考として援用する）に基づいて行った。成熟
雌Balb/cマウスに餌と水を無制限に与えた。マウスに、
４時間毎に40時間にわたり0.2ml生理食塩水中30〜300μ
gのEX-2またはEX-3（処理グループ）または0.2ml生理食
塩水のみ（コントロールグループ）をip注射した（各グ
ループ10匹ずつ）。最初の注射の直後に、0.2ml生理食
塩水中0.6mgLPS内毒素を各マウスに投与した。LPS注射
の後、EX-2または生理食塩水を、処理したマウスまたは
コントロールマウスに、４時間毎に36時間にわたり投与
した。

【００７５】表１および２に示すように、3.3mgのEX-2
またはEX-3(300μgずつ11回注射)の投与によって、コン
トロールマウスと比較した生存率はそれぞれ83％または
86％増加した。これらの結果は、本発明のサイトカイン
抑制ペプチドの腹腔内投与が、LPS誘導敗血症による致
死率を低下させ得るということを示す。

【００７６】実施例VII インターロイキン-1β誘導痛覚過敏症の低下本実施例は、痛みの予防を提供する際のサイトカイン抑
制剤、EX-2の効果を記載する。

【００７７】これらの実験を、本明細書中で参考として
援用する以下に記載の方法を改変したものを用いて行っ
た：Poolら、Br.J.Pharmacol. 106:489-492 (1992); Fo
llenfantら、Br.J.Pharmacol. 98:41-43 (1989); なら
びにRandallおよびSellito、Arch.Internatl.Pharmacod
yn. 111:409-419 (1957)。成熟雄Sprague-Dawleyラット
(175〜275g)を、圧力を変化させてかける器具(IITC Lif
e Sciences;WoodlandHills,CA)を用いる足に圧力をかけ
る技法によって痛覚過敏症について試験した。ラットは
トレーニング期間に入る前に住環境に順応させ、３日間
慣らした。痛覚過敏症の試験を始める前日に、各ラット
を袋(sock）に入れ、圧力を変化させ得る足への圧力試
験を２回、15分の間をあけて行った。次の日、そのラッ
トをプレテストして、それぞれのラットが、体全体でも
がく、および／または悲鳴を上げるといった逃避反応を
示す時の圧力(mm Hg)を測定した。約5〜10％のラットは
反応を示さず、それらは更なる実験から排除した。

【００７８】足への圧力に反応したラットを、種々の濃
度のEX-2（処理）または生理食塩水のみ（コントロー
ル）を1ml/kgでip注射することにより前処理した。20分
後、100μlのIL-1β(1U/100μl)をラットの足の裏の内
部に注射することにより投与した。IL-1を投与して２時
間後、ラットにさらに２回の足への圧力試験を行い、コ
ントロールラットと比較してEX-2処理ラットに負荷し得
る圧力の増加（mm Hg）を測定した。表１に示すよう
に、1μgのEX-2を用いた処理は、圧力の量を増加させ、
ラットはコントロールラットに比べて125％の圧力に耐
えた。

【００７９】実施例VIII 成人呼吸窮迫症候群本実施例は、LPS処理ラットの呼吸窮迫症候群を最小化
することにおけるサイトカイン抑制剤、EX-2の効果を記
載する。

【００８０】これらの実験は、本明細書中で参考として
援用する以下に記載の方法を改変したものを用いて行っ
た：Ulrichら、Am.J.Pathol. 141:61-68 (1992);および
WheeldenらによるLab.Animals 26:29-37 (1992)。雄のH
arlan Sprague-Dawleyラットを70mg/kgケタミンおよび6
mg/kgロムパンの混合物をip注射することにより麻酔し
た。それぞれの麻酔したラットの首に２〜３cmの切り込
みを入れ、その気管を、周りを取り囲む軟組織を鋭くな
いように切開することによって露出させた。ラットをほ
ぼ垂直の平板に吊り下げ、露出した気管に1ccシリンジ
に取り付けた25Gx 1/2インチ針を、喉頭より1cm後方の
点で挿入することにより、気管内注射を行った。

【００８１】各ラットに0.5ml/kgの生理食塩水か、また
は0.5ml/kgの10mg/ml(5mg/kg)LPS内毒素をゆっくりとし
た気管内投与によって与えた。LPS内毒素投与の直後
に、ラットに1ml/kgの生理食塩水（コントロール）また
は種々の濃度のEX-2を含む生理食塩水（処理）のどちら
かをip注射した。ラットを１〜２分間高くした位置にと
どめて、LPSおよび生理食塩水が肺に送達されるのを容
易にさせた。切り口を閉じて、ラットを回復させた。気
管内注射の２および４時間後に、生理食塩水またはEX-2
をコントロールおよび処理ラットにそれぞれip投与し
た。

【００８２】気管内注射の６時間後、ラットを再び麻酔
し、心臓穿刺によって全血を採取した。血清を集めて保
存した。首と胸を開いて、気管および肺を露出させ、肺
を27G x 3/4インチ針を用いて5mlの生理食塩水で６回洗
浄し、洗浄流出物を保存した。

【００８３】EX-2処理ラットの気管支−肺胞洗浄流出物
中の多形核白血球(PMN;好中球)の数を数え、コントロー
ルラットにおける数と比較した。表１に示すように、10
0μg/kgのEX-2を用いた処理は、LPS処理肺内へのPMNの
侵入を58％阻害した。

【００８４】実施例IX インターロイキン-1βまたはリポポリサッカライド誘導
の体温上昇の阻害本実施例は、２つの異なる薬剤に応答してラットにおい
て体温が上昇することを阻害するサイトカイン抑制剤、
EX-2、EX-3、およびEX-4の効果を記載する。

【００８５】雄Wisterラット(45〜75日齢)を室温を26℃
（ラットの平熱と熱平衡な温度）に調節した部屋に入
れ、試験前24時間は自由に餌および水をとれるようにし
てその部屋にとどめた。試験の日の朝、ラットに区別の
ための印を付け、体重を計った。ラットを、ストレスが
最少になるように設計された拘束篭に入れ、熱プローブ
(YSIプローブ# 402)３〜５cmを直腸に挿入して、ラット
の体温を測定した。示度が安定して15秒後に記録した。
測定を１時間後に繰り返し、各ラットの基礎となる体温
を確立した。

【００８６】基礎となる体温が確立した後、ラットに生
理食塩水、IL-1βまたはLSPの内毒素をip注射した。次
いで、ラットに生理食塩水（コントロール）かあるいは
種々の濃度のEX-2またはEX-3（処理）のどちらかをip注
射した。ラットの体温を１時間毎に６時間計測し、IL-1
βまたはLPSによる体温上昇のEX-2またはEX-3による阻
害を測定した。

【００８７】表１に示すように、500μg/kgのEX-2を用
いた処理は、IL-1誘導熱を52％阻害した。さらに、LPS
注射の６時間後の測定では、50または150μg/kgのEX-2
を用いた処理は、LPS誘導熱をそれぞれ45％または52％
阻害した。さらに、150μg/kgのEX-3を用いた処理は、L
PS誘導熱を57％阻害した（表２）。これらの結果は、本
発明の種々のサイトカイン抑制ペプチドが効果的に熱を
下げ得ることを示している。

【００８８】実施例Ｘアラキドン酸誘導のマウスの耳の腫脹の縮小本実施例は、EX-2およびEX-3が、アラキドン酸誘導のマ
ウスの耳の腫脹を縮小させ得ることを示す。

【００８９】実験は、体重が18〜23グラムの雌のBalb/c
マウスを用いて行った。生理食塩水あるいは100μgのEX
-2またはEX-3を、アラキドン酸(AA)の局所適用の30分前
に、ip投与した。10μl容のピペットを用いて、10μlの
AA溶液(100mg/mlエタノール;Calbiochem-Novabiochem;
San Diego CA)を、各マウスの右耳の内側と外側の両表
面に塗布した。10μlのエタノールのみを、各マウスの
左耳の内側と外側の両表面に塗布した。

【００９０】耳の厚さを、AA塗布の直前および60分後に
手動のスプリング入りはさみ尺で測定した。耳の厚さの
増加を、AA処理した耳で観察される変化からコントロー
ルの耳で観察される変化を引いて計算した。各グループ
の値（生理食塩水およびコントロール）は、各グループ
の個々のマウスで観察された腫脹の平均である。腫脹の
縮小割合（％）は、生理食塩水コントロールグループで
観察された腫脹をもとにしている。表１および２に示す
ように、EX-2およびEX-3は、AA誘導の耳の腫脹をそれぞ
れ72％および62％縮小させた。

【００９１】実施例XI ウサギのモルヒネ誘導呼吸低下の減少本実施例は、EX-2およびEX-3が、モルヒネによって誘導
されるウサギの呼吸低下を減少させ得ることを示す。

【００９２】雄Sheltonウサギ(3〜4kg)を拘束して胸部
の周り（前肢のすぐ後ろ側）を呼吸変換器(respiraion
transducer)(モデルF-RCT; Grass Instruments; Quincy
MA)に据え付けた。変換器をEKGケーブルを介してガラ
スポリグラフに接続した。耳の末端の血管に25G蝶形針
を用いてカニューレを挿入することにより、薬剤投与の
ための静脈内のラインを確立した。

【００９３】ウサギの呼吸を安定させ、モルヒネ硫酸塩
(0.5ml生理食塩水中2mg/kg）を、静脈(iv)注射によって
投与し、呼吸の速さと深さを10分間監視した。２回目の
投与を行い、次いでその10分後にEX-2またはEX-3(0.5ml
生理食塩水中10μg/kg)をiv投与し、20分間ウサギを監
視した。さらに2回のEX-2またはEX-3(1.0ml生理食塩水
中20μg/kg)の投与を20分間隔で、すなわち、最初のモ
ルヒネ注射から40分後および60分後に行った。

【００９４】結果を、基礎となる値からの変化率（％）
として計算し、実験終了時(80分後)の処理グループの平
均値からコントロールグループの平均値を引いた平均値
の違いとして表した。表１および２に示すように、EX-2
およびEX-3は、ウサギのモルヒネ誘導呼吸低下を、それ
ぞれ50％および65％減少させた。

【００９５】実施例XII TNF-αレベルおよびLPS誘導致死率の低下における経口
投与したサイトカイン抑制剤の効果本実施例は、マウスのLPS誘導TNF-αレベルおよび致死
率の低下における種々のサイトカイン抑制剤の経口効果
を記載する。

【００９６】LPS誘導致死の研究は、Rivierら（前出）
によって1989年に報告された情報に基づいて行われた。
成熟雌Balb/cマウスに無制限に餌と水を与えた。150μg
または300μgのEX-2、EX-3、EX-4、またはEX-5を含む10
0μlの生理食塩水を、４時間毎に40時間にわたり胃管栄
養によってマウスに投与した（総用量はそれぞれ1.65mg
および3.3mg）。コントロールマウスには100μlの生理
食塩水のみを投与した。サイトカイン抑制剤または生理
食塩水の第１回目の投与の直後に、0.6mgのLPSを含む0.
2mlの生理食塩水をip注射により投与した。生存数の統
計的に有意な増加は、コントロールマウス(0%)、あるい
はEX-2またはEX-3投与マウス(0%〜11%)と比較して、EX-
4を3.3mg (63%)、EX-5を1.65mg(68%)またはEX-5を3.3mg
(44%)受容したマウスで観察された。

【００９７】経口的に投与されたサイトカイン抑制剤が
LPS誘導TNF-αレベルを下げる能力も試験した。Balb/c
雌マウス(20g)に、150μgまたは300μgのEX-2、EX-3、E
X-4またはEX-5を含む100μlの生理食塩水を胃管栄養に
よって投与した。コントロールマウスには100μlの生理
食塩水のみを投与した。１分後、0.1mgのLPSをip注射に
より投与した。サンプルを集めてTNF-αのレベルを上記
実施例IIIに記載のように測定した。

【００９８】各グループのマウス(n=9〜20)の平均TNF-
αレベルを測定し、TNF-αレベルの減少率（％）を計算
した。TNF-αレベルは、コントロールマウス(0%)および
EX-2受容マウス(26%〜28%)と比較して、150μgのEX-3(4
9%)；300μgのEX-3(40%)または300μgのEX-4(44%)を受
容したマウスで著しく減少した。これらの結果は、本発
明の種々のサイトカイン抑制剤が、経口的に投与された
場合でも効果的であることを示す。

【００９９】本発明を上記実施例に関して記載したが、
本発明の主旨からはずれることなく種々の改変が可能で
ある。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲によっ
てのみ限定される。

【０１００】

【発明の効果】本発明によれば、新規なサイトカイン抑
制剤が提供される。この薬剤は、サイトカインの生物学
的活性を制限または制御する。本発明によればまた、サ
イトカイン抑制ペプチドを含む薬学的組成物、および該
薬学的組成物を被験体に投与する方法が提供される。本
発明によればさらに、被験体においてサイトカイン活性
を抑制するために、新規のペプチドを用いる方法が提供
される。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１０年３月４日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【化１】、Ｈ、またはCOCH₃であり；Ｘ₂が

【化２】であり；およびＸ₃が

【化３】またはNH₂であり；ここで、ＹがＯ、H₂またはSであり；Ｒ₁がＨ、COCH₃、C₂H₅、CH₂
Ph、COPh、COOCH₂Ph、COO-t-ブチル、CH₂CO-(ポリエチ
レングリコール)、またはAであり；Ｒ₂がＨまたはCOCH₃
であり；Ｒ₃が１〜６個の炭素原子を有する直鎖または
分枝のアルキル基であり；Ｒ₄が(CH₂)_m-CONH₂、(CH₂)_m-
CONHR₁または(CH₂)_m-CONHAであり；Ｒ₅がOH、OR₃、N
H₂、SH、NHCH₃、NHCH₂PhまたはAであり；およびＲ₆がＨ
またはＲ₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であ
り、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、
２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：

【化４】を有する炭水化物である、組成物。

【化５】、Ｈ、またはCOCH₃であり；およびＸ₃が

【化６】またはNH₂であり；ここで、ＹがO、H₂、またはSであり；Ｒ₁がＨ、COCH₃、C₂H₅、CH
₂Ph、COPh、COOCH₂Ph、COO-t-ブチル、CH₂CO-(ポリエチ
レングリコール)、またはAであり；Ｒ₂がＨまたはCOCH₃
であり；Ｒ₃が１〜６個の炭素原子を有する直鎖または
分枝のアルキル基であり；Ｒ₄が(CH₂)_m-CONH₂、(CH₂)_m-
CONHR₁または(CH₂)_m-CONHAであり；Ｒ₅がOH、OR₃、N
H₂、SH、NHCH₃、NHCH₂PhまたはAであり；およびＲ₆がＨ
またはＲ₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であ
り、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、
２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：

【化７】を有する炭水化物である、組成物。

【化８】、Ｈ、またはCOCH₃であり；Ｘ₂が

【化９】であり；およびＸ₃が

【化１０】またはNH₂であり；ここで、ＹがＯ、H₂またはSであり；Ｒ₁がＨ、COCH₃、C₂H₅、CH₂
Ph、COPh、COOCH₂Ph、COO-t-ブチル、CH₂CO-(ポリエチ
レングリコール)、またはAであり；Ｒ₂がＨまたはCOCH₃
であり；Ｒ₃が１〜６個の炭素原子を有する直鎖または
分枝のアルキル基であり；Ｒ₄が(CH₂)_m-CONH₂、(CH₂)_m-
CONHR₁または(CH₂)_m-CONHAであり；Ｒ₅がOH、OR₃、N
H₂、SH、NHCH₃、NHCH₂PhまたはAであり；およびＲ₆がＨ
またはＲ₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であ
り、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、
２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：

【化１１】を有する炭水化物である、組成物。

【化１２】、Ｈ、またはCOCH₃であり；およびＸ₃が

【化１３】またはNH₂であり；ここで、ＹがO、H₂、またはSであり；Ｒ₁がＨ、COCH₃、C₂H₅、CH
₂Ph、COPh、COOCH₂Ph、COO-t-ブチル、CH₂CO-(ポリエチ
レングリコール)、またはAであり；Ｒ₂がＨまたはCOCH₃
であり；Ｒ₃が１〜６個の炭素原子を有する直鎖または
分枝のアルキル基であり；Ｒ₄が(CH₂)_m-CONH₂、(CH₂)_m-
CONHR₁または(CH₂)_m-CONHAであり；Ｒ₅がOH、OR₃、N
H₂、SH、NHCH₃、NHCH₂PhまたはAであり；およびＲ₆がＨ
またはＲ₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であ
り、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、
２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：

【化１４】を有する炭水化物である、組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 598021513 Ｂｕｉｌｄｉｎｇ２，Ｒｏｏｍ 138, 3550 ＧｅｎｅｒａｌＡｔｏｍｉｃｓＣｏｕｒｔ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ 92121，ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ (72)発明者マークジェイ．ストアメリカ合衆国カリフォルニア 92129, サンディエゴ，ピクルスストリート 12465 (72)発明者ビバリーイー．ガートンアメリカ合衆国カリフォルニア 92122, サンディエゴ，グルストランドストリート 6114 (72)発明者リチャードエイ．ホウトンアメリカ合衆国カリフォルニア 92014, デルマル，ランチョビエホドライブ 4939 (72)発明者コスタスシー．ローリスアメリカ合衆国カリフォルニア 92007, カーディフ，ラグーンビュウドライブ 2636 (72)発明者ロナルドアール．タトルアメリカ合衆国カリフォルニア 92025, エスコンディド，ビスタデルセンブラド 2704

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次式： X₁-X₂-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-X₃ で表されるペプチドであって、ここで、Ｘ₁が【化１】、Ｈ、またはCOCH₃であり；Ｘ₂が【化２】であり；およびＸ₃が【化３】、NH₂、またはOHであり；ここで、ＹがO、H₂またはSであり；Ｒ₁がＨ、COCH₃、C₂H₅、CH₂P
h、COPh、COOCH₂Ph、COO-t-ブチル、CH₂CO-(ポリエチレ
ングリコール)、またはAであり；Ｒ₂がＨまたはCOCH₃で
あり；Ｒ₃が１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分
枝のアルキル基、あるいは３〜６個の炭素原子を有する
環状アルキル基であり；Ｒ₄が(CH₂)_m-CONH₂、(CH₂)_m-CO
NHR₁または(CH₂)_m-CONHAであり；Ｒ₅がOH、OR₃、NH₂、S
H、NHCH₃、NHCH₂Ph、またはAであり；およびＲ₆がＨま
たはＲ₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であり、
「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、２、ま
たは３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：【化４】を有する炭水化物であり；ただし、ＹがOの場合；Ｒ₁がCH₂CO-(ポリエチレングリコール)ま
たはＡであるか；あるいはＲ₄が(CH₂)_m-CONHAである
か；あるいはＲ₅がＡである、ペプチド。
【請求項２】前記アミノ末端が改変されている、請求
項１に記載のペプチド。
【請求項３】前記アミノ末端がアセチル化により改変
されている、請求項２に記載のペプチド。
【請求項４】前記カルボキシル末端が改変されてい
る、請求項１に記載のペプチド。
【請求項５】前記カルボキシル末端がアミド化により
改変されている、請求項４に記載のペプチド。
【請求項６】Ｒ₁が、Ｈ、C₂H₅およびCH₂Phからなる群
から選択され、そしてＲ₂が、ＨおよびCOCH₃からなる群
から選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項７】Ｒ₁およびＲ₂が各々、Ｈである、請求項
６に記載のペプチド。
【請求項８】Ｘ₁が、ノルロイシン、ノルバリン、ロ
イシン、またはイソロイシンからなる群から選択され
る、請求項１に記載のペプチド。
【請求項９】Ｒ₅が、Ｘ₁に共有結合しており、該共有
結合が環状ペプチドを形成する、請求項１に記載のペプ
チド。
【請求項１０】次式： X₄-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-X₃ で表されるペプチドであって、ここで、Ｘ₄が【化５】、Ｈ、またはCOCH₃であり；およびＸ₃が【化６】、NH₂、またはOHであり；ここで、ＹがO、H₂またはSであり；Ｒ₁がＨ、COCH₃、C₂H₅、CH₂P
h、COPh、COOCH₂Ph、COO-t-ブチル、CH₂CO-(ポリエチレ
ングリコール)、またはAであり；Ｒ₂がＨまたはCOCH₃で
あり；Ｒ₄が(CH₂)_m-CONH₂、(CH₂)_m-CONHR₁または(CH₂)_m
-CONHAであり；Ｒ₅がOH、OR₃、NH₂、SH、NHCH₃、NHCH₂P
h、またはAであり；およびＲ₆がＨまたはＲ₃であり；そ
して、ここで、「Ph」がC₆H₅であり、「ｍ」が１、２、また
は３であり、「ｎ」が０、１、２、または３であり、そし
て「Ａ」が以下の一般式：【化７】有する炭水化物であり；ただしＹがOの場合；Ｒ₁がCH₂C
O-(ポリエチレングリコール)またはＡであるか；あるい
はＲ₄が(CH₂)_m-CONHAであるか；あるいはＲ₅がＡであ
る、ペプチド。
【請求項１１】前記アミノ末端が改変されている、請
求項１０に記載のペプチド。
【請求項１２】前記アミノ末端がアセチル化により改
変されている、請求項１１に記載のペプチド。
【請求項１３】前記カルボキシル末端が改変されてい
る、請求項１０に記載のペプチド。
【請求項１４】前記カルボキシル末端がアミド化によ
り改変されている、請求項１３に記載のペプチド。
【請求項１５】Ｒ₁が、Ｈ、C₂H₅およびCH₂Phからなる
群から選択され、そしてＲ₂が、ＨおよびCOCH₃からなる
群から選択される、請求項１０に記載のペプチド。
【請求項１６】Ｒ₁およびＲ₂が各々、Ｈである、請求
項１５に記載のペプチド。
【請求項１７】Ｒ₅が、Ｘ₄に共有結合しており、該共
有結合が環状ペプチドを形成する、請求項１０に記載の
ペプチド。
【請求項１８】ペプチドおよび薬学的に受容可能なキ
ャリアを含むサイトカイン活性抑制のための薬学的組成
物であって、該ペプチドが、次式： X₁-X₂-His-(D)Phe-Arg-(D)Trp-X₃ で表され、ここで、Ｘ₁が【化８】、Ｈ、またはCOCH₃であり；Ｘ₂が【化９】であり；およびＸ₃が【化１０】、NH₂、またはOHであり；ここで、ＹがＯ、H₂またはSであり；Ｒ₁がＨ、COCH₃、C₂H₅、CH₂
Ph、COPh、COOCH₂Ph、COO-t-ブチル、CH₂CO-(ポリエチ
レングリコール)、またはAであり；Ｒ₂がＨまたはCOCH₃
であり；Ｒ₃が１〜６個の炭素原子を有する直鎖または
分枝のアルキル基、あるいは３〜６個の炭素原子を有す
る環状アルキル基であり；Ｒ₄が(CH₂)_m-CONH₂、(CH₂)_m-
CONHR₁または(CH₂)_m-CONHAであり；Ｒ₅がOH、OR₃、N
H₂、SH、NHCH₃、NHCH₂PhまたはAであり；およびＲ₆がＨ
またはＲ₃であり；そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であ
り、「ｍ」が１、２、または３であり、「ｎ」が０、１、
２、または３であり、そして「Ａ」が以下の一般式：【化１１】を有する炭水化物であり；ただし、ＹがOの場合；Ｒ₁がCH₂CO-(ポリエチレングリコール)ま
たはＡであるか；あるいはＲ₄が(CH₂)_m-CONHAである
か；あるいはＲ₅がＡである、組成物。
【請求項１９】ペプチドおよび薬学的に受容可能なキ
ャリアを含むサイトカイン活性抑制のための薬学的組成
物であって、該ペプチドが、次式：Ｘ_４−Ｈｉｓ−（Ｄ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−（Ｄ）Ｔｒｐ−
Ｘ_３で表され、ここで、Ｘ_４が【化１２】、Ｈ、またはCOCH₃であり；およびＸ₃が【化１３】、NH₂、またはOHであり；ここで、ＹがO、H₂、またはSであり；Ｒ₁がＨ、COCH₃、C₂H₅、CH
₂Ph、COPh、COOCH₂Ph、COO-t-ブチル、CH₂CO-(ポリエチ
レングリコール)、またはAであり；Ｒ₂がＨまたはCOCH₃
であり；Ｒ₄が(CH₂)_m-CONH₂、(CH₂)_m-CONHR₁または(C
H₂)_m-CONHAであり；Ｒ₅がOH、OR₃、NH₂、SH、NHCH₃、NH
CH₂PhまたはAであり；およびＲ₆がＨまたはＲ₃であり；
そして、ここで、「Ph」がC₆H₅であり、「ｍ」が１、２、ま
たは３であり、「ｎ」が０、１、２、または３であり、そ
して「Ａ」が以下の一般式：【化１４】を有する炭水化物であり；ただしＹがOの場合；Ｒ₁がCH
₂CO-(ポリエチレングリコール)またはＡであるか；ある
いはＲ₄が(CH₂)_m-CONHAであるか；あるいはＲ₅がＡであ
る、組成物。
【請求項２０】被験体における病理学的に上昇したサ
イトカイン活性を抑制するための、請求項１８に記載の
薬学的組成物。
【請求項２１】前記病理学的に上昇したサイトカイン
活性が、炎症によるものである、請求項２０に記載の薬
学的組成物。
【請求項２２】前記病理学的に上昇したサイトカイン
活性が、悪液質によるものである、請求項２０に記載の
薬学的組成物。
【請求項２３】前記病理学的に上昇したサイトカイン
活性が、病原性免疫性疾患によるものである、請求項２
０に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】前記組成物が、１回より多く投与され
る、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】前記組成物が、局所投与される、請求
項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】前記組成物が、非経口投与される、請
求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２７】前記組成物が、経口投与される、請求
項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】前記組成物が、経皮イオン導入法を介
して投与される、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】被験体における病理学的に上昇したサ
イトカイン活性を抑制するための、請求項１９に記載の
薬学的組成物。
【請求項３０】前記病理学的に上昇したサイトカイン
活性が、炎症によるものである、請求項２９に記載の薬
学的組成物。
【請求項３１】前記病理学的に上昇したサイトカイン
活性が、悪液質によるものである、請求項２９に記載の
薬学的組成物。
【請求項３２】前記病理学的に上昇したサイトカイン
活性が、病原性免疫性疾患によるものである、請求項２
９に記載の薬学的組成物。
【請求項３３】前記組成物が、１回より多く投与され
る、請求項２９に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】前記組成物が、局所投与される、請求
項２９に記載の薬学的組成物。
【請求項３５】前記組成物が、非経口投与される、請
求項２９に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】前記組成物が、経口投与される、請求
項２９に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】前記組成物が、経皮イオン導入法を介
して投与される、請求項２９に記載の薬学的組成物。