JPH08502670A

JPH08502670A - 口液採取装置およびキット

Info

Publication number: JPH08502670A
Application number: JP6506409A
Authority: JP
Inventors: アール．ティーム，トーマス; エス．ゴールドスタイン，アンドリュー; シー．ピアセンティーニ，ステファン; エム．クリムコウ，ナネット
Original assignee: エピトープ，インコーポレイテッド
Priority date: 1992-08-25
Filing date: 1993-08-13
Publication date: 1996-03-26
Also published as: HU9500583D0; CA2142600A1; HUT72565A; BR9306979A; FI950767A; US5573009A; WO1994004078A1; DE69322969D1; US5830410A; FI950767A0; AU672823B2; NO950681D0; US5479937A; ATE175333T1; AU5008493A; EP0656763A1; NO950681L; EP0656763B1

Abstract

(57)【要約】検査のための物質を含有する口液を得る装置（８）。１つの実施態様では、装置は、端部に吸収パッド（１０）を接着させたプランジャー（１１）を有する注射器（１２）を備えている。装置（８）を含む検査アセンブリもまた開示される。

Description

【発明の詳細な説明】口液採取装置およびキット１．発明の分野本発明は、検査のための口液を得る装置および方法に関する。２．参考文献 Parry，J.V.ら、Lancet 2:72-75 （1987） Thieme，T.ら、J.Clin．Microbiol．20:1076-1079（1992a） Thieme,T.ら、”Oral Fluid Sampling for Determination of HIV-I Antibody Serostatus（ＨＩＶ−Ｉ抗体の血清状態を測定するための口液サンプリング） ”，Abstract from VIII Int'l Conf．on AIDS，pg．C328（1992b）３．発明の背景体液を検査して診断値の物質が存在するかどうかを調べるために数多くの分析方法および装置が一般に用いられている。選択される体液としては血液および尿がある。血液を検査液として用いる利点は、分析物が比較的高い濃度であることが多く、このような濃度の測定が患者の健康についての情報を提供し得ることが多いということである。尿は、検査対象の血液成分（例えば、低分子量の薬物またはホルモン）が尿形成中に濃縮されるときに診断検査用として役立つ。しかし、分析物の尿濃度は、通常は、血液中の分析物の生理学的活性量を反映しない。唾液は、通常は、医療診断において体液としては使用されないが、数多くの研究（Parryら；Thiemeら、1992 a，b）により、唾液および他の種類の口液が、ヒトまたは動物の様々な病原に特異的な抗体または抗原を含む診断検査用の信頼性のある試料を提供し得ることが示されている。口液はまた、身体レベルの天然のホルモンまたは治療用およびその他の薬物を測定するのに役立つことが示されている。口液のサンプリングが血液および尿のサンプリングに勝る１つの利点は、試料を得るのが便利であることである。血液の場合のように訓練された静脈切開専門家を必要とせず、また、尿の場合のように、試料の採取における守秘義務および保管のための特別な取り決めを必要としない。さらに、口液試料の採取では、血液に汚染された注射針およびチューブを取り扱うという危険も回避される。口液を採取するための装置については既に記載されている。米国特許第4,418,702号および4,580,577号には、口液を吸収するための吸収パッド、およびパッドから液を抽出するための筒部−ピストンアレンジメントが示されている。米国特許第4,774,962号には、唾液を吸収するための吸収パッド、ならびに遠心分離によってパッドから口液を取り出すための遠心管および管インサートが記載されている。米国特許第5,056,521号には、口液中のグルコースの監視に用いるための装置が記載されている。この装置は、ピストンに固定された非反応性の吸収剤綿棒を有する筒部−ピストンアレンジメントを備えている。筒部とピストンとは、液体試料を綿棒から絞り出してグルコース監視用計器に送るために用いられる。４．発明の要旨本発明は、１つの局面においては、診断目的で口液を採取する装置を包含する。該装置は、口液から検査物質を回収するための吸収パッドと、該パッドに吸収された口液をパッドから抽出する構造（手段）とを有する。詳しくは、吸収された口液をパッドから抽出する構造は、筒部を有する注射器と、パッドが接着されるプランジャーとを有する。吸収パッドは、保存剤、塩、芳香剤、および口液の成分がパッドに不特異的に結合するのを防ぐ阻害剤などの様々な添加剤を含有し得る。１つの好適な実施態様では、パッドには高張性溶液の塩を染み込ませる。これについては後にさらに述べる。別の好適な実施態様では、注射器はさらに、筒部の出口端部の液体通路と、通路内に含まれ、口液が筒部から排出されるとき口液に放出される検出試薬とを有する。通路は、筒部に着脱可能に取り付けられたカートリッジによって範囲が画定され得る。関連する１つの局面では、本発明は、口液中の検査物質をアッセイするためのアッセイアセンブリを備えている。アセンブリは上述のパッドー注射器構造と、この構造から排出される口液を受容するための検出ユニットとを備えている。検出ユニットは固相支持体と、これに接着し、口液が筒部からユニットへと排出されるとき口液中の検査物質に特異的に結合する結合剤とを有する。検出ユニットは注射器の出口端部に取り付け可能とされ得るか、または個別の液体受容構造として用いられ得る。アセンブリはさらに、注射器の筒部を検出ユニットと液体連通状態で連結する通路を有する。通路は、口液が筒部から排出されるとき口液中に放出される検出試薬を含み得る。好ましくは、検出試薬は、口液中の検査物質と反応し、口液中の検査物質の濃度に依存して支持体上に検出可能な信号を生成する。アセンブリの１つの好適な実施態様では、固相支持体は浸透性の膜であり、検出ユニットはさらに、膜と接触する位置にもたらされると、膜支持体を通して液体を引き出し得る吸収物質を有する。１つの構成では、検査物質は、公知の病原によって感染の症状を示す抗体である。結合剤は、検査抗体と免疫反応する抗原であり得、この場合は、アセンブリはさらに、検査物質の抗体が固相支持体に結合するとき、この抗体に結合するリポータ標識の試薬を含み得る。あるいは、結合剤は選択的にヒト抗体に結合し得る。この場合には、アセンブリはさらに、検査物質の抗体と免疫反応するリポータ標識の抗原を含み得る。検査物質の抗体と結合する結合剤の１つの例としてはプロテインＡがある。別の構成では、検査物質は、公知の病原によって感染の症状を示す抗原である。結合剤は、この検査抗原と免疫反応する抗体で有り得る。この場合には、アセンブリはさらに、検査物質の抗原が固相支持体に結合すると共に、この抗原に結合するリポータ標識の試薬を含み得る。別の局面では、本発明は、口液試料中の検査物質と、マーカー物質、すなわち口液が検査されていることを積極的に示す物質との両方を同時にアッセイするための固相支持体表面を含み得る。検査物質およびマーカー物質各々と結合する第１および第２結合剤は、表面の、少なくとも一部は重複しない領域に配置され得る。好ましくは、２つの結合領域は「＋」記号の２本の棒を形成する。上記のおよび他の本発明の目的および特徴は、添付の図面を参照した以下の本発明の詳細な説明でさらに十分に明かとなる。図面の簡単な説明図１Ａおよび図１Ｂは、本発明の実施例による口液採取装置の側断面図であって、装置の筒部にプランジャーを挿入する前（図１Ａ）と挿入した後（図１Ｂ）とを示す。図２は、図１の装置のプランジャーとパッドとの組立図である。図３Ａおよび図３Ｂは、カートリッジと注射器の筒部との変形実施例を示す。図４は、本発明の検査アセンブリの側断面図を示す。図５は、本発明の検査アセンブリの別の実施例の側断面図を示す。図６Ａ〜図６Ｃは、本発明の、口液中の検査物質を検出するための固相形式の例を示す。図７は、口液中の検査物質とマーカー物質とを同時にアッセイするための固相支持体表面のアレンジメントを示す。発明の詳細な説明Ａ．口液採取装置図１Ａおよび図１Ｂは、本発明により構成される口液採取装置８を示す。本装置は、一般には、口液採取器として機能する吸収パッド１０と、パッドを装着するプランジャー１１と、注射器筒部１２と、本実施例では取り付けられている着脱可能な試薬カートリッジ１３とを備えている。プランジャー１１は、プランジャー胴部１４と、プランジャーの内側端部に位置する密封ガスケット１５と、プランジャーの外側端部に位置する親指タブ１６とを有する。図２はプランジャーとパッドとの組立図である。図示するように、プランジャー胴部は、通常は、内側端部に隣接した位置に一対の半径方向の拡張部１８、２０を有し、端部にはフィンガー突出部２２が形成されている。胴部および親指タブは、通常は、好ましくは、適切なポリマーを射出成形することによって形成される。ガスケット１５は、プランジャーにかぶさるように設計された柔らかいゴムまたは柔軟なポリマー材料よりなり、図示するように、拡張部１８、２０によって定位置に保持され、突出部２２がガスケットの端部を貫いて延びる。ガスケットの直径は、筒部１２の内壁とぴったりと液密状態を形成するような大きさとされる。パッド１０は、人間の口内で用いられるのに適したシリコンゴム接着剤などのような従来の接着剤によって、プランジャー１１の内側端部に接着される。パッドは、図２に示すように、ガスケット１５の内側面および突出部２２のパッド内に受容される部分を含む接触表面で胴部に接着される。パッドは、口内で使用するのに適した数多くの吸収材料のいずれによっても形成され得る。好ましくは、パッドは、歯科で通常用いられるような、厚い吸収綿ロールまたはペーパーである。このようなパッドの１例としては、Patterson De ntal Co．（Minneapolis，MN）が販売する1.5インチのNo.2中級綿ロールがある。セルロース、ポリウレタン、ポリエステル、およびレーヨンもまた使用される。本発明の１つの実施例では、パッドは、高張液の塩を、口液中の免疫ブロブリンなどの高濃度の検査物質を回収するのに有効な量で染み込ませている。本明細書において参考のため援用されている米国特許第5,103,836 号に詳述されているように、高張液を用いることにより、完全には理解されていない口内の他の液体から区別して、免疫ブロブリンが一定して産生される。高張液を用いることにより、蒸留水を用いる場合に比べて８〜１６倍増加した免疫グロブリンを得ることができる。高張液は、血液中のイオン強度より高いイオン強度を有する塩溶液である。一般に、本発明の高張液の調製で用いられる塩は約1.5重量％から約５重量％、好ましくは3.5重量％の量で存在する。高張液の調製で用いられ得る塩は、アルカリ金属化合物およびアルカリ土金属化合物を含む。好適な塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、および塩化カルシウムがある。塩化ナトリウムは毒性が最も少なく、最も安価でまた最も味がよいことが分かっている。高張液はまた、唾液分泌を刺激するための化合物または成分を含み得る。唾液分泌を刺激し得る化合物は酸味を示すことが分かっている。このような化合物は弱い有機酸を含む。弱い有機酸のうち、クエン酸、アスコルビン酸、および酢酸が好適である。クエン酸およびアスコルビン酸は、約0.05重量％から0.5重量％の濃度で用いるのが好適である。酢酸の好適な濃度範囲は約0.5重量％から3.0重量％である。採取された試料の劣化を抑えるために、高張液は保存剤を含有し得る。このような保存剤は、抗体分子の破壊の原因となり得るタンパク質加水分解を行う酵素活性を阻害するように作用し得る。保存剤として考えられる化合物には、抗細菌剤、抗真菌剤、静細菌剤、静真菌剤、および酵素阻害剤が含まれる。好適な実施態様では、安息香酸、ソルビン酸、またはこれらの塩が抗真菌剤として用いられる。静細菌剤としては、高濃度の塩および高張液を低いｐＨで維持し得る化合物が考えられる。このような塩としては、チメロサール（すなわちメルチオレート）、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、およびアジ化ナトリウムが含まれる。他の好適な保存剤としては、医薬品およびうがい薬で典型的に用いられる保存剤が含まれる。例えば、エチルアルコールおよびグルコン酸クロルヘキシジンが含まれる。別のクラスの好適な抗微生物および抗ウィルス剤としては、局所性殺菌剤としてまたはうがい薬に用いられ得る洗浄剤がある。１つの例としては塩化ベンザルコニウムがある。これらの保存剤を約0.01重量％から約0.2重量％の範囲内で使用するのが好適である。パッドには公知の手段によって高張液を染み込ませ得る。本発明の高張液をパッドに染み込ませるためには、パッドを高張液に浸して高張液の塩をパッド内におよびパッド上に吸収させ、次にパッドを高張溶液から取り出して乾燥させる。典型的には、パッドを高張液に浸し約１mlの溶液を吸収させる。もしくは、高張液をパッドに散布することにより、十分な量、好ましくは約１mlを吸収させる。余分な液は振り落として、パッドを５０℃で２時間、送風対流乾燥オーブン中に放置するか、または、送風しないで８０℃で６〜１２時間オーブン中に放置する。乾燥すると、高張液の塩を含む特別処理のパッドが形成される。パッドの調製において、保存剤として、塩化ベンザルコニウム、塩化アセチルピリジニウム、またはグルコン酸クロルヘキシジンなどの塩を用いると好適である。パッドを構成する材料のほとんどは、非特異的にタンパク質に結合する。従って、免疫グロブリンの中には望ましくはないがパッドに結合するものもあり、阻害剤を用いることによってタンパク質がパッドに結合するのを阻害するのが望ましい。血液はそれ自体の阻害剤（すなわち、ヒト血清アルブミン）を含有しているため、血液試料の採取においては、非特異的結合は通常は問題にはならない。口部での試料採取における非特異的結合を減らすために、パッドに染み込ませる高張液に阻害剤を添加し得る。阻害剤は、通常は、別のタンパク質が固相表面に非特異的に結合することを防ぐために用いられる可溶タンパク質である。阻害剤として添加され得る化合物としては、アルブミンおよびゼラチンがあるが、水溶で非毒性であればいかなるタンパク質でも、用いるアッセイに悪影響を与えない限り、阻害剤として使用することができる。ウシのゼラチンを用いるのが好適である。一般には、阻害剤を、本発明の高張液に、約0.01重量％から0.2重量％の濃度で添加し得る。次に、このような含有物の高張液を上述のようにパッドに染み込ませる。パッドの調製に用いられる好適な溶液は以下の組成を有する。再び図１Ａおよび図１Ｂを参照して、注射器筒部１２は、図２Ａに示すように、パッドとプランジャーのガスケットとを受容し得る長さと、ガスケット１５をぴったりと適合した状態で受容してこれらの間に液密状態を形成し得る直径とを有する内壁２４を形成する。筒部は、フランジ付きの半径方向に拡張した開口部２６を有し、これにより、口液を採取した後、パッドを筒部に挿入するのが容易となる。筒部の反対側の内側端部には、液体浸透性フィルターとして作用するフリット２８が配備され、これにより、プランジャーを筒部に押し入れるとき、パッドに吸収された口液が通過して筒部から排出され得る。筒部の端部の出口ポート３０は、カートリッジ１３を受容するための受け口となる。カートリッジ１３を含まない装置の実施態様では、標準的な注射器の構成におけるように、筒部の出口端部を先細にして狭い出口とし得る。本明細書では、注射器はまた、パッドに吸収された口液を抽出する手段としても言及される。本発明のプランジャー−パッドアセンブリの寸法の一例は以下の通りである。プランジャー１１は、密封ガスケット１５の長さを含めて長さが約３インチ、直径が約0.12インチである。吸収パッド１０は長さが約1.5インチで、直径が0.375 インチである。柔らかいゴム製ガスケットを用いる場合は、ガスケットの直径は 0.5インチ、長さは約0.25インチが適切であり、これにより、内径が約0.4375インチの注射器筒部が形成される。カートリッジ１３は、筒部の受け口にぴったりと適合する環状プラグ３２を備え、これにより、カートリッジを筒部にしっかりと保持する。チャンバー部を貫通する内部通路３３には、口液がカートリッジを通して排出されるとき、好ましくは遊離成分として口液に放出される検出試薬を染み込ませた試薬ディスク３４が配備されている。試薬は、後述するように、口液中の選択された分析物を検出するために用いられる。さらに、後述するように、試薬は特定の種類の固相アッセイで使用するのに適した、ゼラチン、乳カゼイン、またはウシ血清アルブミンなどの阻害剤を含み得る。１つの実施例では、リポータ標識の抗体または抗原を、0.5％のゼラチンと３０％のスクロースとを含有する水溶液に数mgs/mlの濃度で溶解させる（口液がカートリッジを貫通するときタンパク質の溶解を容易にするため）。カートリッジ内の試薬ディスクは、カートリッジチャンバー内の液体浸透性フリット３５および３６間に配置される。カートリッジおよび筒部の別の実施例を図３Ａおよび図３Ｂに示す。例えば、図３Ａに示すように、筒部出口３８は雄部としてのLuer （商標）取り付け具３９であって、カートリッジ４２の対応する雌部取り付け具４０に取り付けられ得る。カートリッジは、検出試薬を染み込ませた剛性のフリット４４を有する。類似した配置を図３Ｂに示すが、この場合は、筒部出口４８の雄部としてのLuer （商標）取り付け具４６は、筒部の本体内に入れ込まれている。また、図３Ｂの筒部の形状は、筒部の内壁が出口端部に向かって先細となり、これにより、パッドが圧縮されるとき筒部に残る口液の量が減少する。カートリッジ内のストリップ５０は吸湿性試薬ストリップであって、筒部を通る口液によって濡らされるとき、口液中に分析物が存在すると検出可能な色変化を示す。グルコースなどの分析物は、Ｈ₂Ｏ₂の存在により検出可能な色変化を示すぺルオキシダーゼ系と結合したグルコースオキシダーゼなどの、公知の酵素を用いて検出し得る。図１〜図３に示すカートリッジの実施態様の各々では、内部チャンバーが、カートリッジ１３の内部通路３３のような通路を形成し、この通路は、口液が筒部から排出されるとき該口液中に放出される（図１および図２）、または通路を通る該口液と混合される（図３）検出試薬または試薬手段を含み得る。変形例としては、検出試薬を含む通路は、個別のカートリッジを必要とせずに、筒部の出口端部に、例えば筒部の出口の側壁に沿った位置に配備され得る。口腔からの物質を図１Ａおよび図１Ｂに示すような採取装置により採取するために、プランジャー−パッドアセンブリを患者の口に、パッドが完全に口の中に位置するように配置する。パッドを下頬と歯茎との間に配置すると、歯肉のリンパ組織から生じる分泌物および粘膜下リンパ組織および唾液腺リンパ組織から生じる分泌物の吸収が容易となる。パッドを約１０秒間、歯茎間で前後に擦り、次に約３０秒から２分の間パッドを定位置に保持することによって試料を採取するのが好適である。パッドに口液を染み込ませた後、パッドを口から取り出して、プランジャー−パッドアセンブリを、パッドの端部を先にして、注射器の筒部に挿入し、これにより、口液をパッドから抽出することができる。口液は、好ましくは適切な保存液中に保存して後で分析を行うことができる。あるいは、口液を検出試薬と混合させるか、もしくは（試薬での検出を行わないで）直接、または固相の検出装置に配備した試薬と混合させた後で排出させ得る。これについては、下記のセクションＢで述べる。あるいは、口液に混入される試薬は、溶液相の均質アッセイによって口液中の分析物をアッセイするように設計され得る。例えば、口液中の抗原特異的抗体の検出に用いられるアッセイは、多種類の均質アッセイ形式に基づいて、例えば、結合酵素、蛍光消光、またはＥＭＩＴ構成（Gosling，J.，Clin Chem，36（8）：1408（1990））に基づいて行われ得る。別の例としては、アッセイは口液中の分析物を免疫沈降させて、免疫沈降物でコートされた着色マイクロスフェアなどの検出可能な凝着生成物を生成してもよい。上記のことから、本発明の様々な目的および特徴が達成される。装置は病院、クリニック、または家庭での使用にも適しており、口内試料を容易に採取し直ちにアッセイすることが可能である。装置ではまた、プランジャー−パッドアセンブリは試料の採取後、注射器筒部に挿入され、注射器筒部に納められたままで処置されるため、使用者が試料に接触する危険が低減する。Ｂ．口液アッセイアセンブリ別の局面では、本発明は、口液中の検査物質を検出するアセンブリを包含する。アセンブリは、一般には、上述の種類の吸収パッド注射器装置と、吸収パッドから排出される口液を受容するようにされた検出ユニットとを含む。検出ユニットは、検出ユニット内に含まれる固相支持体と、この固相支持体に付着し、口液が筒部からユニットに排出されるとき口液中の検査物質に特異的に結合する結合剤とを有する。口液中の分析物、例えば抗原または免疫グロブリンンの濃度は、支持体に結合した分析物の量によって決定される。１つの実施態様では、アセンブリは、上記セクションＡで述べたような通路を有し、通路は、（a）口液が注射器から排出されるとき放出され、また、（b）固相表面に結合する分析物と共に検出可能な固相結合反応を起こすのに必要な１つ以上の試薬化合物を含有する、検出試薬を含む。アッセイ形式の選択は、問題の検査物質の性質に依存する。このような検査物質としては、薬物または薬物代謝産物、例えば、コカイン、ニコチン、またはその代謝産物、Ｂ型肝炎表面抗原のようなウィルスおよび細菌の抗原、免疫グロブリン、特にＩｇＧおよびＩｇＭ、およびβ−ＨＣＧのようなホルモンなどの様々な免疫反応性分析物が含まれる。選択された結合剤を固相支持体に吸着または共有結合により付着させる方法はよく知られており、オバルブミンなどのビオチン化されたタンパク質を膜に吸着させること、続いて、ストレプタビジン誘導体化形態で結合剤を付着させること、抗体を、例えば結合される抗体のＦ _c部に対して特異的な抗体を介して支持体に付着させること、および、例えば様々な利用可能な二官能性結合試薬を用いて膜上の表面誘導体化可能基へ共有結合により付着させることを包含する。本発明のアッセイアセンブリの２つの実施態様を図４および図５に示す。両図面には、注射器５４とカートリッジ５６とを有する注射器採取装置５２の下部分が示されている。採取装置は、上記のセクションＡで述べた構成と同じ構成を有する。図４の実施態様では、参照番号６０で示す検出ユニットは、カートリッジから排出される口液を受容するためのカートリッジに取り付け可能である。カートリッジは、固相支持体に結合するために分析物分子と競争するリポータ標識分子などの検出試薬を含有し得る。ユニット６０は、一般的には、図示するように、カートリッジの出口側に取り付け可能であり、また、これと液体連通する入力ポート６３を有するハウジング６２を備えている。固相支持体すなわち膜６４がハウジング内に支持され、注射器装置から排出される口液を受容するような位置に置かれる。吸収パッド６６は、アコーディオン状構造６８内の膜６４の下方に懸垂され、膜の下側と接触する位置にもたらされると、パッドは膜を通して口液を吸引する。図５は、窓７４を通して覗き見ることができる膜７２を有する検出ユニット７０を示す。窓と膜の両方がケーシング７５内に支持されている。膜の下方に位置する吸収パッド７６は、ケーシングの底部を変形させることによって膜の下側と接触する位置にもたらされ、膜を通して液体を吸引する。図４および図５に示すアセンブリの実施態様における検出ユニットは注射器装置に取り付け可能であり、注射器からの口液を直接受容する。本発明はまた、検出ユニットを分離した構造とし、例えば、口液および他の検出試薬をユニット内の膜に塗布することによって、口液を受容するように設計することも考えられる。アセンブリ内で用いられ得る様々なアッセイ構成を図６Ａ、図６Ｂ）および図６Ｃに示す。図６Ａでは、検査物質８０（抗体）は、支持体に結合する抗原８４に免疫特異的に結合することによって固相支持体８２上に捕捉される。次に、捕捉された分析物は、リポータ標識の抗ヒト抗体８６によって検出され得る。図６Ｂは、検査抗体９０を検出するための固相支持体８８を示す。分析物の抗体は、プロテインＡまたは抗ヒト免疫グロブリンなどの、固相支持体上に付着した結合剤９２によって固相膜に結合する。結合した分析物の抗体は、この検査抗体と免疫反応するリポータ標識の抗原９４によって検出され得る。図６Ｃは、口液中の抗原である分析物９８を検出するのに用いる固相支持体９６を示す。ユニット内の結合剤は抗原特異的抗体１００である。支持体に結合した抗原である分析物は、分析物の第２エピトープ部位と免疫反応するリポータ標識の抗体を含む検出試薬により検出され得る。あるいは、検出試薬は、固相支持体の結合剤に結合するために分析物抗原と競争するリポータ標識の抗原であり得る。上記の検出試薬におけるリポータは、適切な基質を添加することによって検出可能な酵素、または蛍光リポータであると好都合である。口液中の検査物質のためのアッセイは、さらに後述するように、マーカー物質のための同時に行うアッセイを含む。本発明の固相支持体表面を用いる口液試料のための典型的なアッセイでは、検査物質はＨＩＶ−１ぺプチドと免疫反応する抗体であり、マーカー物質はトランスフェリンである。固相支持体表面は、膜表面の第１領域に付着した、ヒト抗体を結合させるためのプロテインＡと、膜表面の第２領域に付着したトランスフェリンを捕捉するための抗トランスフェリン抗体とを有する。ＨＩＶ−１抗体およびトランスフェリンを検出するためには、アッセイは、検査ＨＩＶ−１抗体に特異的に結合するＨＩＶ−１ぺプチドのセイヨウワサビペルオキシダーゼ複合体と、第１の抗トランスフェリン抗体が同じトランスフェリン分子に結合しているかどうかに関わらずトランスフェリンに結合し得る抗トランスフェリン抗体のセイヨウワサビペルオキシダーゼ複合体とを含む。好ましくは、ニワトリの抗体はプロテインＡに結合しないため、第２抗トランスフェリン抗体はニワトリから由来する。リポータ標識の試薬は、試薬カートリッジ内に配置される試薬ディスクに乾燥形態で染み込ませ得る。次にカートリッジを本発明の口液採取装置に取り付ける。口液試料をこの装置を用いて患者から採取し、注射器筒部からこれに取り付けられた試薬カートリッジを通して絞り出す。口液がカートリッジを通るとき、リポータ標識の試薬は液体によって取り込まれて溶解し、これにより、試薬は検査物質およびマーカー物質と各々反応し得る。カートリッジの出口の方向は、試薬／口液混合物が固相支持体表面に接触するようにされる。混合物は２〜３滴（〜300μｌ）で十分である。混合物は、検査物質とマーカー物質とが固相支持体表面の各々の検出試薬および各々の結合領域に結合し得るのに十分な時間（〜５分間）、固相支持体表面に保持される。次に混合物を表面から取り除く。別の実施態様では、検査物質はHelicobacter pylori抗体であり、リポータ標識の試薬はリポータ標識のHelicobacter pylori抗原である。固相支持体表面が上述の本発明のアッセイアセンブリの検出ユニットの一部である場合は、混合物は、吸収パッドを固相支持体の下側と接触させて支持体を通して液体を引き出すことによって取り出され得る。最後に、過酸化水素とセイヨウワサビペルオキシダーゼの色原体基質（本実施例ではテトラメチルベンジジン）とを含有する溶液を膜に接触させる。検査物質またはマーカー物質を介して固相支持体に結合されるセイヨウワサビペルオキシダーゼは、ペルオキシダーゼが結合する領域に着色沈降物を生成する。マーカー物質および／または試験物質が存在するかどうかは、固相支持体表面に生成されるパターンにより決定される。本発明の１つの特定の局面では、口液試料は、いっでも口液中に存在するマーカー物質も同時にアッセイされ、これによって、検査物質のアッセイの結果を確証する。試料中のこのようなマーカー物質を検出することにより、試料が口液を含有することが積極的に示される。適切なマーカー物質としては、トランスフェリン、アルブミン、セルロプラスミン、およびアミラーゼなどが含まれる（”Hu man Saliva（ヒトの唾液）：Clinical Chemistry and Microbiology，Vols．I a nd II，Tenovuo，J．O．編、CRC Press，Boca Raton，Florida（1989）参照）。検査物質が血液由来（例えば、IgG）でもあるときは、血液由来のマーカー物質（例えば、アルブミンおよびトランスフェリン）が特に有用である。好ましくは、検査物質およびマーカー物質は共に、アッセイアセンブリを用いてアッセイされ、固相支持体は平坦な表面を有する。好ましくは、固相支持体は、例えば、ニトロセルロースまたはニフッ化ポリビニリデンなどの材料により作製され得る微孔膜である。検査物質およびマーカー物質各々のための第１および第２結合剤は、検査物質およびマーカー物資の固相支持体表面への結合が区別され得るように、表面上の少なくとも一部は異なる（重複しない）領域に配置される。このような結合試薬を共有結合手段および非共有結合手段の両方によって結合する方法は、当該分野ではよく知られている。好ましくは、上記の領域は、アッセイの結果が目視により直ちに分かるような識別可能なパターンを生じるように構成される。前述の実施例ではリポータとしてセイヨウワサビペルオキシダーゼが用いられたが、他の酵素および非酵素のリポータを用いることもできる。さらに、同じリポータを用いるのは好都合ではあるが、検査物質を検出するのに用いられるリポータはマーカー物質を検出するのに用いられるものと同じである必要はない。さらに、他の結合形式を利用することも可能である。例えば、口液中のＢ型肝炎表面抗原のアッセイでは、固相支持体上の結合剤は抗原に免疫反応する第１抗体であり、検出試薬はリポータ標識の第２抗体であり得る。アッセイの結果を伝える固相支持体の表面パターンの１つの例を図７に示す。同図の棒形状の領域１０４および１０６は固相支持体１０８の領域であって、これらは、各々、トランスフェリンなどの選択された口液マーカーおよび抗原特異的分析物などの選択された口液分析物に対して免疫特異的であるか、さもなくばこれらと反応する結合剤により誘導体化されるかまたは処理される。図示するように、２つの領域は「＋」記号を形成するように配置される。マーカー領域１０４は発色するが分析物領域１０６は発色しない場合は「−」パターンが生成され、試料液体は口液マーカーは含有するが検査される分析物は含有しないことを示す。分析物が存在するときは、「＋」記号が観察される。本発明を特定の実施態様に関して述べたが、本発明から離れることなく様々な変更および改変がなされ得る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＮＯ，ＲＵ，ＵＳ (72)発明者ピアセンティーニ，ステファンシー. アメリカ合衆国オレゴン 97202，ポートランド，エス．イー． 35ティーエイチプレイス 3719 (72)発明者クリムコウ，ナネットエム. アメリカ合衆国オレゴン 97005，ビーバートン，エス．ダブリュー． 119ティーエイチ 3020 【要約の続き】

Claims

【特許請求の範囲】１．検査のための物質を含有する口液を得る装置であって、口液から検査物質を回収するための吸収パッドと、該パッドに吸収された口液を該パッドから抽出する手段であって、筒部よりなる注射器と、該吸収パッドを接着させる内側端部を有するプランジャーとを備えた手段と、該筒部の出口端部に設けられ、口液が筒部から排出されるとき該口液に放出される検出試薬手段を含む液体通路と、を備えた装置。２．前記液体通路は、前記筒部に着脱可能に取り付けられるカートリッジによって範囲が画定される、請求項１に記載の装置。３．前記検出試薬手段は、前記筒部の出口の側壁に沿って配置される、請求項１に記載の装置。４．前記試験物質は抗原特異的抗体であり、また、前記検出試薬手段は、該抗体に特異的に結合する抗原を含む、請求項１、２、または３に記載の装置。５．前記抗原はリポータ標識である、請求項４に記載の装置。６．前記検査物質は選択された抗原であり、また、前記検出試薬手段は抗原特異的抗体を含む、請求項１、２、または３に記載の装置。７．前記抗原特異的抗体はリポータ標識である、請求項６に記載の装置。８．前記通路に取り付け可能な検出ユニットをさらに備え、該検出ユニットは、前記吸収パッドから絞り出される口液を受容するようにされ、（i）固相支持体と、（ii）該固相支持体に付着した結合剤とを有し、該結合剤は、口液が前記筒部から該ユニットに排出されるとき該口液中の検査物質に特異的に結合しまた該検査物質を固定する、請求項１、２、または３に記載の装置。９．前記検査物質は、公知の病原によって感染の症状を示す抗体であり、前記結合剤は、該抗体と免疫反応する抗原であり、また、該検査物質の抗体が前記固相支持体に結合するとき該検査物質の抗体に結合するリポータ標識の試薬をさらに含む、請求項８に記載のアセンブリ。１０．前記リポータ標識の試薬は前記液体通路内に配置される、請求項９に記載のアセンブリ。１１．前記検査物質は、公知の病原によって感染の症状を示す抗体であり、前記結合剤はヒト抗体に結合し、また、該検査物質の抗体と免疫反応を行うリポータ標識の抗原をさらに含む、請求項８に記載のアセンブリ。１２．前記リポータ標識の抗原は前記液体通路内に配置される、請求項１１に記載のアセンブリ。１３．前記結合剤はプロテインＡである、請求項１１に記載のアセンブリ。１４．前記検査物質はＨＩＶ−１抗体であり、前記リポータ標識の試薬はリポータ標識のＨＩＶ−１ぺプチドである、請求項１１、１２、またはび１３に記載のアセンブリ。１５．前記検査物質はHelicobacter pylori抗体であり、前記リポータ標識の試薬はリポータ標識のHelicobacter pylori抗原である、請求項１１、１２、または１３に記載のアセンブリ。１６．前記通路は、前記筒部および検出ユニットに着脱可能に連結されるカートリッジによって範囲が画定される、請求項８に記載のアセンブリ。１７．前記検出試薬手段は、前記口液中の検査物質と反応する試薬を含み、これにより、該口液中の該検査物質の濃度に依存するレベルの、該物質の前記固相支持体への結合を現出する、請求項８または１６に記載のアセンブリ。１８．前記固相支持体は浸透性の膜であり、前記検出ユニットは、該膜と接触する位置にもたらされ得る吸収材料をさらに備えた、請求項８に記載のアセンブリ。１９．口液試料中の検査物質およびマーカー物質を同時にアッセイするためのアセンブリであって、前記固相支持体は膜であり、口液中の検査物質に特異的に結合する第１結合剤が付着する第１領域と、該口液中のマーカー物質に特異的に結合する第２結合剤が付着し、該第１領域と少なくとも一部は重複しない第２領域と、該第１領域に結合する検査物質を可視化する手段と、該第２領域に結合するマーカー物質を可視化する手段と、を備え、該マーカー物質は含有するが該検査物質は含有しない口液により、該固相支持体表面上にパターンが形成され、該パターンは、該マーカー物質および該検査物質の両方を含有する口液により形成されるパターンとは異なる、アセンブリ。２０．口液試料中の検査物質およびマーカー物質を同時にアッセィするために用いられる固相支持体表面であって、口液中の検査物質に特異的に結合する第１結合剤が付着する第１領域と、該口液中のマーカー物質に特異的に結合する第２結合剤が付着し、該第１領域と少なくとも一部は重複しない第２領域と、該第１領域に結合する検査物質を可視化する手段と、該第２領域に結合するマーカー物質を可視化する手段と、を備え、該マーカー物質は含有するが該検査物質は含有しない口液により、該固相支持体表面上にパターンが形成され、該パターンは、該マーカー物質および該検査物質の両方を含有する口液により形成されるパターンとは異なる、固相支持体表面。２１．前記第１および第２領域は棒形状であり、重複して「＋」記号を形成する、請求項２２に記載の固相支持体表面。