JPH07108234B2 - 歯周病診断用アッセイ装置及びｂａｎａ加水分解検出方法及びｂａｎａ加水分解検出用アッセイ装置の利用方法及び歯周病決定方法及びｂａｎａ加水分解検出用固相アッセイ装置の調整方法及びｂａｎａ加水分解検出用アッセイ装置 - Google Patents
歯周病診断用アッセイ装置及びｂａｎａ加水分解検出方法及びｂａｎａ加水分解検出用アッセイ装置の利用方法及び歯周病決定方法及びｂａｎａ加水分解検出用固相アッセイ装置の調整方法及びｂａｎａ加水分解検出用アッセイ装置Info
- Publication number
- JPH07108234B2 JPH07108234B2 JP2021907A JP2190790A JPH07108234B2 JP H07108234 B2 JPH07108234 B2 JP H07108234B2 JP 2021907 A JP2021907 A JP 2021907A JP 2190790 A JP2190790 A JP 2190790A JP H07108234 B2 JPH07108234 B2 JP H07108234B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bana
- assay device
- sample
- periodontal disease
- solid phase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/70—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases the product, e.g. phenol, naphthol being diazotised in situ, e.g. with Fast Red
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/30—Naphthyl amides, e.g. beta-NA, 2-NA, 4-methoxy-beta-naphthylamine, i.e. 4MNA
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/976—Trypsin; Chymotrypsin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Dental Tools And Instruments Or Auxiliary Dental Instruments (AREA)
- Dental Preparations (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Measurement Of The Respiration, Hearing Ability, Form, And Blood Characteristics Of Living Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 本発明は歯肉下歯垢内の歯周疾患の原因となる微生物の
存在を確認する改良固相アッセイに関するものである。
存在を確認する改良固相アッセイに関するものである。
探針深さ（probing depth）、付着損失（attachment lo
ss）及び、特に探針時の出血が伝統的に歯周疾患のイン
ジケーターとして用いられている。しかしながら、これ
らの臨床的パラメーターは歯肉下歯垢内の細菌組成物に
関する情報を提供するよりもむしろ、過去の疾患経験及
び組織の炎症状態を反映するものである。
ss）及び、特に探針時の出血が伝統的に歯周疾患のイン
ジケーターとして用いられている。しかしながら、これ
らの臨床的パラメーターは歯肉下歯垢内の細菌組成物に
関する情報を提供するよりもむしろ、過去の疾患経験及
び組織の炎症状態を反映するものである。
一般的微生物字的方法は歯垢中は歯周疾患病原体の確認
のために有効であるが、時間がかかり、その実施には専
門家を必要とする、という欠点を有する。暗視野顕微鏡
を用いると、特徴的形態又は運動を示す微生物を観察、
計数することができ、臨床パラメーターと相関づけるこ
とができる。しかしながら臨床医は顕微鏡検査を費用効
率的に（cost effective）行う時間がないことが多い。
そこで、疾患のインジケーター微生物を確認できる、日
常的に使用しやすい迅速且つ簡単な微生物学的試験が強
く所望される。
のために有効であるが、時間がかかり、その実施には専
門家を必要とする、という欠点を有する。暗視野顕微鏡
を用いると、特徴的形態又は運動を示す微生物を観察、
計数することができ、臨床パラメーターと相関づけるこ
とができる。しかしながら臨床医は顕微鏡検査を費用効
率的に（cost effective）行う時間がないことが多い。
そこで、疾患のインジケーター微生物を確認できる、日
常的に使用しやすい迅速且つ簡単な微生物学的試験が強
く所望される。
微生物学的研究の結果、歯周疾患の臨床症状をもった患
者ではスピロヘータ、Bacteroides gingivalis及びBact
eroides forsythusが高い比率で存在し［Pickett et a
l.,J.Dent.Res.,65,195（1986）;Dzink et al.,J.Chin.
Periodontal.12（1986）,648−659（1985）及びSlots e
t al J.Clin,Periodontol.,12,540−552（1985）］、こ
れら微生物は効果的治療及び保守（メンテナンス）の後
に減少することが判明した［Loesche et al.,J.Periodo
ntol.,55,325−335（1984）］。したがって、これらの
存在を確認、或いは除去する試験は、臨床医が治療法が
正しいかどうかを調べるのに役立つ。なぜならば試験結
果が陰性ならば、これらの微生物が顕著に抑制され、又
は歯肉下歯垢から除去されたことが明らかになるからで
ある。
者ではスピロヘータ、Bacteroides gingivalis及びBact
eroides forsythusが高い比率で存在し［Pickett et a
l.,J.Dent.Res.,65,195（1986）;Dzink et al.,J.Chin.
Periodontal.12（1986）,648−659（1985）及びSlots e
t al J.Clin,Periodontol.,12,540−552（1985）］、こ
れら微生物は効果的治療及び保守（メンテナンス）の後
に減少することが判明した［Loesche et al.,J.Periodo
ntol.,55,325−335（1984）］。したがって、これらの
存在を確認、或いは除去する試験は、臨床医が治療法が
正しいかどうかを調べるのに役立つ。なぜならば試験結
果が陰性ならば、これらの微生物が顕著に抑制され、又
は歯肉下歯垢から除去されたことが明らかになるからで
ある。
歯周炎と関係する最も重要な三種類の細菌、Bacteroide
s gingivalis,Treponema denticola（スピロヘータ）及
びBacteroides forsythusは、トリプリン基質Ｎ−ベン
ゾイル−DL−アルギニン−２−ナフチルアミド（BANA）
を加水分解する特異な能力をもっている。
s gingivalis,Treponema denticola（スピロヘータ）及
びBacteroides forsythusは、トリプリン基質Ｎ−ベン
ゾイル−DL−アルギニン−２−ナフチルアミド（BANA）
を加水分解する特異な能力をもっている。
Loescheらによる研究［J.Periodontol.,58,266−273（1
987）］は、或り単一の部位から得られる歯肉下歯垢に
よるトリプシン基質Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−
２−ナフチルアミド（BANA）の加水分解が、歯垢サンプ
ル中のスピロヘータの数及び割合と非常によく相関して
おり、臨床疾患のインジケータとして役立つことを示し
た。Bretz及びLoesche,J.Dent.Res.,66（11）1668−167
2（1987）は、集めた（pooled）歯肉下歯垢サンプルを
用いてこのような研究を進めた。彼等の疾患発見法は液
相アッセイの利用を含み、このアッセイはサンプルを一
晩BANA溶液と共にpH7.0でインキューベートし、変色し
ない深紅色発色剤の添加によって加水分解を検出するも
のである。このアッセイでは、これらサンプルの85％に
おいて指標的色変化をおこすのに一晩のインキュベーシ
ョンが必要であることがわかった。
987）］は、或り単一の部位から得られる歯肉下歯垢に
よるトリプシン基質Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−
２−ナフチルアミド（BANA）の加水分解が、歯垢サンプ
ル中のスピロヘータの数及び割合と非常によく相関して
おり、臨床疾患のインジケータとして役立つことを示し
た。Bretz及びLoesche,J.Dent.Res.,66（11）1668−167
2（1987）は、集めた（pooled）歯肉下歯垢サンプルを
用いてこのような研究を進めた。彼等の疾患発見法は液
相アッセイの利用を含み、このアッセイはサンプルを一
晩BANA溶液と共にpH7.0でインキューベートし、変色し
ない深紅色発色剤の添加によって加水分解を検出するも
のである。このアッセイでは、これらサンプルの85％に
おいて指標的色変化をおこすのに一晩のインキュベーシ
ョンが必要であることがわかった。
本発明によると、歯周疾患の原因となる微生物の存在の
検出に役立つ、Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−２−
ナフチルアミド（BANA）加水分解を発見する固相アッセ
イが提供される。
検出に役立つ、Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−２−
ナフチルアミド（BANA）加水分解を発見する固相アッセ
イが提供される。
そのアッセイは、 ａ）歯肉下歯垢サンプルを得るために、Ｎ−ベンゾイル
−DL−アルギニン−２−ナフチルアミド（BANA）のpH8
〜９−緩衝溶液を浸み込ませた第一の要素と； ｂ）吸着ファスト・ブラックＫ塩を含むナイロン−又は
ニトロセルロース膜から成る第二の要素から成り：歯肉
下歯垢サンプルを第一の要素上に置き、それから濡れて
いる第二の要素と密に接触させ、一緒にした要素をイン
キュベーション時間５〜30分間50〜60℃でインキュベー
トすると、第二の要素に色の変化がおき、BANA加水分解
がおきたことを示す。
−DL−アルギニン−２−ナフチルアミド（BANA）のpH8
〜９−緩衝溶液を浸み込ませた第一の要素と； ｂ）吸着ファスト・ブラックＫ塩を含むナイロン−又は
ニトロセルロース膜から成る第二の要素から成り：歯肉
下歯垢サンプルを第一の要素上に置き、それから濡れて
いる第二の要素と密に接触させ、一緒にした要素をイン
キュベーション時間５〜30分間50〜60℃でインキュベー
トすると、第二の要素に色の変化がおき、BANA加水分解
がおきたことを示す。
本発明は、歯周疾患をおこす微生物の存在を見つけるBA
NA加水分解を発見する固相アッセイを用いる。
NA加水分解を発見する固相アッセイを用いる。
ａ）患者から歯肉下歯垢のサンプル（一つ又は複数）を
集め； ｂ）上記サンプルをＮ−ベンゾイル−DL−アルギニン−
２−ナフチルアミド（BANA）のpH8〜９−緩衝溶液を浸
み込ませたこのアッセイの第一要素に塗布し； ｃ）吸着ファスト・ブラックＫ塩を含むナイロン−又は
ニトロセルロース膜から成るアッセイの第二要素を濡ら
し； ｄ）上記第一要素を上記第二要素と密に接触させ； ｅ）一緒にした第一及び第二の要素をインキュベーショ
ン時間５〜30分間50〜60℃でインキュベートし； ｆ）第二要素を観察して、BANA加水分解がおきたことを
示す色の変化を見出す諸段階から成る方法をも含む。
集め； ｂ）上記サンプルをＮ−ベンゾイル−DL−アルギニン−
２−ナフチルアミド（BANA）のpH8〜９−緩衝溶液を浸
み込ませたこのアッセイの第一要素に塗布し； ｃ）吸着ファスト・ブラックＫ塩を含むナイロン−又は
ニトロセルロース膜から成るアッセイの第二要素を濡ら
し； ｄ）上記第一要素を上記第二要素と密に接触させ； ｅ）一緒にした第一及び第二の要素をインキュベーショ
ン時間５〜30分間50〜60℃でインキュベートし； ｆ）第二要素を観察して、BANA加水分解がおきたことを
示す色の変化を見出す諸段階から成る方法をも含む。
よって、本発明の主な目的は、BANA加水分解を発見する
固相アッセイを提供することである。
固相アッセイを提供することである。
発明のもう一つの目的は、固相アッセイを用いて歯周疾
患の原因となる微生物の存在を見つけ、モニターする方
法を提供することである。
患の原因となる微生物の存在を見つけ、モニターする方
法を提供することである。
発明のもう一つの目的は、一般的歯科診療所訪問のよう
な比較的短時間に実施し得る、歯周疾患発見並びにモニ
ターのための固相アッセイを提供することである。
な比較的短時間に実施し得る、歯周疾患発見並びにモニ
ターのための固相アッセイを提供することである。
発明のまた別の目的は、目で容易に読める歯周疾患の発
見及びモニターのための固相アッセイを提供することで
ある。
見及びモニターのための固相アッセイを提供することで
ある。
発明のまた別の目的は、日常的歯科医訪問中に歯科職員
によって容易に且つ速かに行われ得る、歯周疾患の発見
及びモニターのための固相アッセイを提供することであ
る。
によって容易に且つ速かに行われ得る、歯周疾患の発見
及びモニターのための固相アッセイを提供することであ
る。
発明のもう一つの目的は、患者のファイルに保存しやす
い永久的安定的記録をつくる、歯周疾患の発見及びモニ
ターのための固相アッセイを提供することである。
い永久的安定的記録をつくる、歯周疾患の発見及びモニ
ターのための固相アッセイを提供することである。
本発明のまた別の目的は、日常的歯科診療時間中に歯科
職員が容易かつ速かに行うことのできる、歯周疾患発見
およびモニターのための固相アッセイを提供することで
ある。
職員が容易かつ速かに行うことのできる、歯周疾患発見
およびモニターのための固相アッセイを提供することで
ある。
本発明のこれらの及びその他の目的及び利点は次の発明
の詳細な説明からより明らかになる。
の詳細な説明からより明らかになる。
広義では、本発明はＮ−ベンゾイル−DL−アルギニン−
２−ナフチルアミド（BANA）加水分解を発見するための
固相アッセイ、その製法及びその使用法に向けられてい
る。
２−ナフチルアミド（BANA）加水分解を発見するための
固相アッセイ、その製法及びその使用法に向けられてい
る。
固相アッセイは、患者の歯肉下歯垢サンプルを受けとっ
た、Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−２−ナフチルア
ミド（BANA）pH8〜９−緩衝溶液を吸着した第一要素
と、吸着ファスト・ブラックＫ塩を含むナイロン−又は
ニトロセルロース膜である第二要素とを含んで成る。BA
NAを加水分解する微生物を含む歯肉下歯垢サンプルを第
一要素上に置くと加水分解がおきる。水で活性化した第
二要素が第一要素と接触すると、加水分解反応生成物、
β−ナフチラミンが第二要素であるナイロン−又はニト
ロセルロース膜に移動し、ファスト・ブラックＫ塩を変
色させる。これは容易に認められる。
た、Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−２−ナフチルア
ミド（BANA）pH8〜９−緩衝溶液を吸着した第一要素
と、吸着ファスト・ブラックＫ塩を含むナイロン−又は
ニトロセルロース膜である第二要素とを含んで成る。BA
NAを加水分解する微生物を含む歯肉下歯垢サンプルを第
一要素上に置くと加水分解がおきる。水で活性化した第
二要素が第一要素と接触すると、加水分解反応生成物、
β−ナフチラミンが第二要素であるナイロン−又はニト
ロセルロース膜に移動し、ファスト・ブラックＫ塩を変
色させる。これは容易に認められる。
発明は固相アッセイの製法にも関係している。これを達
成するにはBANAのpH8〜９−緩衝溶液を第一要素に吸着
させ、ファスト・ブラックＫ塩溶液をナイロン−又はニ
トロセルロース第二要素に吸着させる。両要素共乾燥し
ている。概してそれらは、本発明の方法により使用する
まで、光、空気、水、その他の汚染物がそれらの表面に
達しないような方法で包装される。
成するにはBANAのpH8〜９−緩衝溶液を第一要素に吸着
させ、ファスト・ブラックＫ塩溶液をナイロン−又はニ
トロセルロース第二要素に吸着させる。両要素共乾燥し
ている。概してそれらは、本発明の方法により使用する
まで、光、空気、水、その他の汚染物がそれらの表面に
達しないような方法で包装される。
その上本発明はBANA−加水分解を発見する固相アッセイ
を用いて歯周疾患の原因となる微生物の存在を発見する
方法に関係している。
を用いて歯周疾患の原因となる微生物の存在を発見する
方法に関係している。
この方法は、患者から歯肉下歯垢サンプル（１又は複
数）を集め、上記サンプルをＮ−ベンゾイル−DL−アル
ギニン−２−ナフチルアミド（BANA）のpH8〜９−緩衝
溶液を浸み込ませたアッセイの第一要素に塗布すること
を含む。その後、吸着ファスト・ブラックＫ塩を含むナ
イロン−又はニトロセルロース膜であるアッセイの第二
要素を濡らし、第一要素と密に接触させる。一緒にした
要素を、約５〜30分間のインキュベーション時間、50〜
60℃でインキュベートする。インキュベーション時間の
終了後、一緒になっている第一及び第二要素を分離し、
第二要素を観察して色の変化を見つける。第二要素の色
の変化はBANAの加水分解がおきたことを示す。これは、
BANAを加水分解できる歯周疾患をおこす微生物の存在を
示す。
数）を集め、上記サンプルをＮ−ベンゾイル−DL−アル
ギニン−２−ナフチルアミド（BANA）のpH8〜９−緩衝
溶液を浸み込ませたアッセイの第一要素に塗布すること
を含む。その後、吸着ファスト・ブラックＫ塩を含むナ
イロン−又はニトロセルロース膜であるアッセイの第二
要素を濡らし、第一要素と密に接触させる。一緒にした
要素を、約５〜30分間のインキュベーション時間、50〜
60℃でインキュベートする。インキュベーション時間の
終了後、一緒になっている第一及び第二要素を分離し、
第二要素を観察して色の変化を見つける。第二要素の色
の変化はBANAの加水分解がおきたことを示す。これは、
BANAを加水分解できる歯周疾患をおこす微生物の存在を
示す。
本発明の固相アッセイは、治療前、治療中及び治療後の
歯周組織の健康を確かめることができる。こうして歯科
医と患者は歯周組織の状態を速かに客観的に評価するこ
とができる。治療期間後、試験結果が陽性のままである
場合、その後治療計画を改良してその後の組織破壊を最
小にすることができる。
歯周組織の健康を確かめることができる。こうして歯科
医と患者は歯周組織の状態を速かに客観的に評価するこ
とができる。治療期間後、試験結果が陽性のままである
場合、その後治療計画を改良してその後の組織破壊を最
小にすることができる。
その上、本発明の固相アッセイは、実際に疾患関連性微
生物に感染しているがまだその疾患の臨床的微症をあら
わしていない部位を見出す能力をもっている。この方法
で、アッセイは、歯科医、衛生士及び患者に、おこり得
る臨床的歯周疾患の発現を阻止又は最小にするためには
口腔衛生及び／又は予防の強化が必要であることを早期
に警告することができる。
生物に感染しているがまだその疾患の臨床的微症をあら
わしていない部位を見出す能力をもっている。この方法
で、アッセイは、歯科医、衛生士及び患者に、おこり得
る臨床的歯周疾患の発現を阻止又は最小にするためには
口腔衛生及び／又は予防の強化が必要であることを早期
に警告することができる。
このアッセイの潜在的用途は、患者の教育に関して歯科
医及び衛生士を助けることである。患者は歯周疾患の原
因及びその治療を理解することがむづかしいことが多
い。
医及び衛生士を助けることである。患者は歯周疾患の原
因及びその治療を理解することがむづかしいことが多
い。
彼等が不快又は病気を示唆するその他の症状を感じてい
ない場合は特にそうである。彼等の疾患の存在及び程度
を部位特異的に可視化する手段があれば、それは口腔衛
生及び専門的歯の手入れに向けて彼等の行動を改善する
のに役立つ。
ない場合は特にそうである。彼等の疾患の存在及び程度
を部位特異的に可視化する手段があれば、それは口腔衛
生及び専門的歯の手入れに向けて彼等の行動を改善する
のに役立つ。
本発明の固相アッセイの第一要素は、水吸着性基質材料
から成る。このような材料は典型的にはセルロース−又
はポリエステル紙材料から成る。紙及び、特に、紙パッ
ドは、種々の適した重さ及び吸収性のものが市販されて
いるという点で便利である；これらの多くはFDAが診断
的使用を承認している。それらは比較的安い材料であ
り、本発明の固相アッセイに用いられる水溶性、酵素感
受性試薬を吸収し、乾燥後安定化させるという機能をも
っている。適した紙材料は、ワットマン社（Whatman C
o.）及びシュライヘル・シュール社（Schleicher and S
chuell Corp.）から入手できるセルロース紙、及びＥ＆
Ｄ、コーポレーションから販売されているようなポリエ
ステル紙である。特に好ましいセルロース紙はＳ＆Ｓ＃
903及びワットマン3MMと呼ばれるものである。もちろん
これらの代りに他の同様の商標の紙材料を、固相アッセ
イの実施可能性に影響を与えることなく本発明の実施に
用いることができる。
から成る。このような材料は典型的にはセルロース−又
はポリエステル紙材料から成る。紙及び、特に、紙パッ
ドは、種々の適した重さ及び吸収性のものが市販されて
いるという点で便利である；これらの多くはFDAが診断
的使用を承認している。それらは比較的安い材料であ
り、本発明の固相アッセイに用いられる水溶性、酵素感
受性試薬を吸収し、乾燥後安定化させるという機能をも
っている。適した紙材料は、ワットマン社（Whatman C
o.）及びシュライヘル・シュール社（Schleicher and S
chuell Corp.）から入手できるセルロース紙、及びＥ＆
Ｄ、コーポレーションから販売されているようなポリエ
ステル紙である。特に好ましいセルロース紙はＳ＆Ｓ＃
903及びワットマン3MMと呼ばれるものである。もちろん
これらの代りに他の同様の商標の紙材料を、固相アッセ
イの実施可能性に影響を与えることなく本発明の実施に
用いることができる。
本発明に用いられるＮ−ベンゾイル−DL−アルギニン−
２−ナフチルアミド（BANA）は、シグマ・ケミカル社
（Sigma Chemical Co.）（St.Louis,MO）のような会社
から供給される市販の基質である。この基質はそれに対
応する酵素によって加水分解され、β−ナフチラミンを
生成する。この加水分解はこのアッセイの振舞にとって
重要である。それはpH約８〜９で最適におこる。この理
由で、本発明の実施において、発明の固相アッセイはpH
8〜９のトリス緩衝液を用いる。この緩衝液は、生物学
的反応に対する適性及び一般的入手し易さのために、非
常に好ましい緩衝材料である。必要な８〜９のpHを提供
するその他の同様な緩衝性材料又は−作用物質、たとえ
ば燐酸ナトリウム及び−カリウム、硝酸塩及びカルボン
酸塩を使用できるのはもちろんである。pHが8.5ないし
8.8の範囲に保たれるのが好ましい。BANAの第一要素
に、約100〜200mg/ft2（0.11〜0.22mg/cm2）又は約30〜
60mg/アッセイの濃度を与えるように塗布するのが好ま
しい。
２−ナフチルアミド（BANA）は、シグマ・ケミカル社
（Sigma Chemical Co.）（St.Louis,MO）のような会社
から供給される市販の基質である。この基質はそれに対
応する酵素によって加水分解され、β−ナフチラミンを
生成する。この加水分解はこのアッセイの振舞にとって
重要である。それはpH約８〜９で最適におこる。この理
由で、本発明の実施において、発明の固相アッセイはpH
8〜９のトリス緩衝液を用いる。この緩衝液は、生物学
的反応に対する適性及び一般的入手し易さのために、非
常に好ましい緩衝材料である。必要な８〜９のpHを提供
するその他の同様な緩衝性材料又は−作用物質、たとえ
ば燐酸ナトリウム及び−カリウム、硝酸塩及びカルボン
酸塩を使用できるのはもちろんである。pHが8.5ないし
8.8の範囲に保たれるのが好ましい。BANAの第一要素
に、約100〜200mg/ft2（0.11〜0.22mg/cm2）又は約30〜
60mg/アッセイの濃度を与えるように塗布するのが好ま
しい。
本発明の第二要素はナイロン−又はニトロセルロース膜
から成る。このナイロン−又はニトロセルロース膜は、
本発明の固相アッセイの発色剤であるファスト・ブラッ
クＫ塩を担持する。適したニトロセルロース膜は、シュ
ライヘル＆シュール社から供給される。BA95、0.45μｍ
と呼ばれるものである。適したナイロン膜は、シュライ
ヘル＆シュール社から“ナイロン66"又はポールナイロ
ン66（BiodyneATM）として販売されているものである。
ナイロン−又はニトロセルロース膜は負に帯電してい
る。したがってこれらの材料は著しく酸性で、ファスト
・ブラックＫ塩発色剤をBANAの加水分解産物であるβ−
ナフチラミンに結合させるには好都合である。その上こ
れらのナイロン及びニトロセルロース膜は多量のファス
ト・ブラックＫ塩発色剤を吸着することができる。これ
は固相アッセイの感度にとって重要である。ナイロン−
又はニトロセルロース膜は、ファスト・ブラックＫ塩を
市販製品に含まれるその安定剤と共に吸着することもで
きる。ファスト・ブラックＫ塩発色剤の安定剤、たとえ
ば塩化亜鉛（ZnCl2）と、ファスト・ブラックＫ塩とを
共に吸着する能力があれば、最初の試薬の安定性をもっ
た最終第二要素が生成する。これは明らかに最終（完
成）固相アッセイの保存寿命を貢献する。
から成る。このナイロン−又はニトロセルロース膜は、
本発明の固相アッセイの発色剤であるファスト・ブラッ
クＫ塩を担持する。適したニトロセルロース膜は、シュ
ライヘル＆シュール社から供給される。BA95、0.45μｍ
と呼ばれるものである。適したナイロン膜は、シュライ
ヘル＆シュール社から“ナイロン66"又はポールナイロ
ン66（BiodyneATM）として販売されているものである。
ナイロン−又はニトロセルロース膜は負に帯電してい
る。したがってこれらの材料は著しく酸性で、ファスト
・ブラックＫ塩発色剤をBANAの加水分解産物であるβ−
ナフチラミンに結合させるには好都合である。その上こ
れらのナイロン及びニトロセルロース膜は多量のファス
ト・ブラックＫ塩発色剤を吸着することができる。これ
は固相アッセイの感度にとって重要である。ナイロン−
又はニトロセルロース膜は、ファスト・ブラックＫ塩を
市販製品に含まれるその安定剤と共に吸着することもで
きる。ファスト・ブラックＫ塩発色剤の安定剤、たとえ
ば塩化亜鉛（ZnCl2）と、ファスト・ブラックＫ塩とを
共に吸着する能力があれば、最初の試薬の安定性をもっ
た最終第二要素が生成する。これは明らかに最終（完
成）固相アッセイの保存寿命を貢献する。
本発明において第二要素の一成分として用いられるファ
スト・ブラックＫ塩は、シグマケミカル社（St.Louis,M
O）のような化学品会社から供給される市販品である。
それは、アゾ−ジアゾ色素発色剤のカテゴリーに入る。
ジアゾニウム塩とアリルアミンとのカップリング反応の
至適pHは約６である。この至適pHは、本発明の固相アッ
セイの実施可能性及び安定性に大きく貢献する。本発明
の加水分解は約８〜９という至適pHでおこるから、使用
する発色剤の至適pHと加水分解反応との間にはあまり差
がないということが重要である。これより低い至適pHを
もった発色剤を用いたならば、加水分解がおきるpHでは
発色剤の物理的劣化がおこるであろう。これは明らか
に、結果的に、固相アッセイの正しくない読みに通ず
る。ファスト・ダーク・ブルーＲのような他の等価の発
色剤をファスト・ブラックＫ塩発色剤の代り本発明の実
施に用いることができるが、それらは至適pHの要求を満
していなければならない。すなわちそれらは、約６〜９
の間の至適pHをもっていなければならない。ファスト・
ブラックＫ塩は、一般的には約20〜30mg/ft2（0.02〜0.
03mg/cm2）又は６〜9mg/アッセイの濃度で本発明の固相
アッセイに使用される。
スト・ブラックＫ塩は、シグマケミカル社（St.Louis,M
O）のような化学品会社から供給される市販品である。
それは、アゾ−ジアゾ色素発色剤のカテゴリーに入る。
ジアゾニウム塩とアリルアミンとのカップリング反応の
至適pHは約６である。この至適pHは、本発明の固相アッ
セイの実施可能性及び安定性に大きく貢献する。本発明
の加水分解は約８〜９という至適pHでおこるから、使用
する発色剤の至適pHと加水分解反応との間にはあまり差
がないということが重要である。これより低い至適pHを
もった発色剤を用いたならば、加水分解がおきるpHでは
発色剤の物理的劣化がおこるであろう。これは明らか
に、結果的に、固相アッセイの正しくない読みに通ず
る。ファスト・ダーク・ブルーＲのような他の等価の発
色剤をファスト・ブラックＫ塩発色剤の代り本発明の実
施に用いることができるが、それらは至適pHの要求を満
していなければならない。すなわちそれらは、約６〜９
の間の至適pHをもっていなければならない。ファスト・
ブラックＫ塩は、一般的には約20〜30mg/ft2（0.02〜0.
03mg/cm2）又は６〜9mg/アッセイの濃度で本発明の固相
アッセイに使用される。
本発明の固相アッセイの製造の実施に任意に加えられる
ものは、ファスト・ブラックＫ塩溶液に加えられる、ニ
イロン−又はニトロセルロース膜によって吸着される安
定剤である。一般的には、ポリマー安定剤が用いられ
る。これらは分子量6000〜8000をもつ市販のポリエチレ
ングリコールで、ガントレツＲ（GantrezＲ）の商標で
売られているようなポリエチレン酸、たとえばガントレ
ツＲＳ−95（GAF Corp.から供給される）である。これ
らのポリマー安定剤を、約0.05〜1.0重量％ファスト・
ブラックＫ塩溶液に加える。ポリマー安定剤は、分解に
より生じた水を全部吸着し、使用するまでの貯蔵期間中
第二要素（ナイロン−又はニトロセルロース膜）を安定
化する。ポリマー安定剤はその他に、ナイロン−又はニ
トロセルロース膜−ファスト・ブラックＫ塩発色剤要素
を、本発明のアッセイの実地に使用する直前に円滑に活
性化する湿潤剤としてもはたらく。
ものは、ファスト・ブラックＫ塩溶液に加えられる、ニ
イロン−又はニトロセルロース膜によって吸着される安
定剤である。一般的には、ポリマー安定剤が用いられ
る。これらは分子量6000〜8000をもつ市販のポリエチレ
ングリコールで、ガントレツＲ（GantrezＲ）の商標で
売られているようなポリエチレン酸、たとえばガントレ
ツＲＳ−95（GAF Corp.から供給される）である。これ
らのポリマー安定剤を、約0.05〜1.0重量％ファスト・
ブラックＫ塩溶液に加える。ポリマー安定剤は、分解に
より生じた水を全部吸着し、使用するまでの貯蔵期間中
第二要素（ナイロン−又はニトロセルロース膜）を安定
化する。ポリマー安定剤はその他に、ナイロン−又はニ
トロセルロース膜−ファスト・ブラックＫ塩発色剤要素
を、本発明のアッセイの実地に使用する直前に円滑に活
性化する湿潤剤としてもはたらく。
その他に、本発明のアッセイの第二要素への任意の添加
物はジアゾ染料安定剤である。このようなジアゾ染料安
定剤は、普通、ジアゾ型の色素発色剤の市販溶液に加え
られている。ファスト・ブラックＫ塩はジアゾ型染料で
ある。典型的なジアゾ染料安定剤は、1.5−ナフチレン
ジズルフォン酸及びその塩、並びに塩化亜鉛及びその他
の遷移金属塩化物のようなものである。これらの染料安
定剤はメーカーから購入したファスト・ブラックＫ塩中
に存在しているかも知れないし、ファスト・ブラックＫ
塩−ナイロン−又はニトロセルロース第二要素の製造中
に加えてもよい。このような染料安定剤は約0.1〜1.0重
量％加えられるのが普通である。
物はジアゾ染料安定剤である。このようなジアゾ染料安
定剤は、普通、ジアゾ型の色素発色剤の市販溶液に加え
られている。ファスト・ブラックＫ塩はジアゾ型染料で
ある。典型的なジアゾ染料安定剤は、1.5−ナフチレン
ジズルフォン酸及びその塩、並びに塩化亜鉛及びその他
の遷移金属塩化物のようなものである。これらの染料安
定剤はメーカーから購入したファスト・ブラックＫ塩中
に存在しているかも知れないし、ファスト・ブラックＫ
塩−ナイロン−又はニトロセルロース第二要素の製造中
に加えてもよい。このような染料安定剤は約0.1〜1.0重
量％加えられるのが普通である。
本発明のその他の任意の実施態様は、第一要素上のサン
プル保持手段の使用である。このようなサンプル保持手
段にはいろいろの種類がある。特に適したサンプル保持
手段の種類は特に、第一要素が紙パッドから成る場合に
は型押えくぼ（embossed dimple）の型のサンプル保持
手段である。典型的には、このようなえくぼは、トリス
・緩衝BANAを吸着する前の紙パッドに、えくぼを型押す
る装置を製造することによって型押される。紙パッドに
型押されたこのようなえくぼは反応容量を減らして最小
にし、歯肉下歯垢サンプルを歯科器具から固相アッセイ
に塗布するのを容易にする。
プル保持手段の使用である。このようなサンプル保持手
段にはいろいろの種類がある。特に適したサンプル保持
手段の種類は特に、第一要素が紙パッドから成る場合に
は型押えくぼ（embossed dimple）の型のサンプル保持
手段である。典型的には、このようなえくぼは、トリス
・緩衝BANAを吸着する前の紙パッドに、えくぼを型押す
る装置を製造することによって型押される。紙パッドに
型押されたこのようなえくぼは反応容量を減らして最小
にし、歯肉下歯垢サンプルを歯科器具から固相アッセイ
に塗布するのを容易にする。
ファスト・ブラックＫ塩とβ−ナフチラミンとのカップ
リングによって生成する色は、サーモン色を背景にした
暗藍色である。この組み合わせは、サンプルサイズが小
さいときは特に、識別しやすく、刺し跡のような色を生
成する。
リングによって生成する色は、サーモン色を背景にした
暗藍色である。この組み合わせは、サンプルサイズが小
さいときは特に、識別しやすく、刺し跡のような色を生
成する。
概して、本発明の固相アッセイの準備をする場合、個々
の要素をつくり、それからプラスチック−又はその他の
しっかりした裏張りに接着剤でくっつける。概してこの
裏張りはポリスチレン−カードであり、要素を両面接着
テープを用いて付着する。要素はそれぞれ裏張りのミシ
ン目（perforation）の各側に付着し、裏張りがミシン
目に沿って折りたたまれたときBANA第一要素がファスト
・ブラックＫ塩第二要素上に直接重なるようにする。こ
れにより二つのことが達成される：各包装に、アッセイ
の二要素が両方共含まれるから、歯科開業医が同じ型の
二つの要素を使用する機会はない；そして概してプラス
チック裏張りがミシン目を含み、第二要素がこのヒンジ
点で正確に“折りたたまれ”、このアッセイの実施に必
要な二要素を密に接触させる段階を行うことができる。
の要素をつくり、それからプラスチック−又はその他の
しっかりした裏張りに接着剤でくっつける。概してこの
裏張りはポリスチレン−カードであり、要素を両面接着
テープを用いて付着する。要素はそれぞれ裏張りのミシ
ン目（perforation）の各側に付着し、裏張りがミシン
目に沿って折りたたまれたときBANA第一要素がファスト
・ブラックＫ塩第二要素上に直接重なるようにする。こ
れにより二つのことが達成される：各包装に、アッセイ
の二要素が両方共含まれるから、歯科開業医が同じ型の
二つの要素を使用する機会はない；そして概してプラス
チック裏張りがミシン目を含み、第二要素がこのヒンジ
点で正確に“折りたたまれ”、このアッセイの実施に必
要な二要素を密に接触させる段階を行うことができる。
このようなプラスチック−又はその他のしっかりした裏
張りのおかげで完成アッセイを患者の歯科的記録へ挿入
することもできる。要素は、“サンプリング”カード
（約３〜５サンプルを保管する）又は“全口腔テスト
（whole−mouth test）”カード（約30〜32サンプルを
保管）をつくるのに都合のよい大きさである。
張りのおかげで完成アッセイを患者の歯科的記録へ挿入
することもできる。要素は、“サンプリング”カード
（約３〜５サンプルを保管する）又は“全口腔テスト
（whole−mouth test）”カード（約30〜32サンプルを
保管）をつくるのに都合のよい大きさである。
本発明の固相アッセイの加水分解は約50〜60℃の温度で
最も容易におこる。したがって、この温度範囲の熱源が
アッセイの実施のために必要である。一般的にはこれは
ドライヒート−インキュベーターによって提供される。
この代りに、熱に水道水浴（約50〜60℃の温度）をアッ
セイの実施のために用いることができる。この温度の使
用は完了までの時間を短縮し、試験の感度を改善する。
なぜならばこの温度で加水分解が最も速くおこり、その
他の副産物が減少するからである。
最も容易におこる。したがって、この温度範囲の熱源が
アッセイの実施のために必要である。一般的にはこれは
ドライヒート−インキュベーターによって提供される。
この代りに、熱に水道水浴（約50〜60℃の温度）をアッ
セイの実施のために用いることができる。この温度の使
用は完了までの時間を短縮し、試験の感度を改善する。
なぜならばこの温度で加水分解が最も速くおこり、その
他の副産物が減少するからである。
4.好ましい実施例 以下の実施例は、本発明の固相アッセイの製法及びその
使用法を詳細に説明する。本開示の目的及び意図から逸
脱することなく材料並びに方法に多くの変更が加えられ
得ることが熟練せる当業者には当然理解できる。
使用法を詳細に説明する。本開示の目的及び意図から逸
脱することなく材料並びに方法に多くの変更が加えられ
得ることが熟練せる当業者には当然理解できる。
実施例１ 固相アッセイの製法 材料： シュライヘル・シュール紙＃903 シュライヘル・シュール純ニトロセルロース BA95,0.45μｍ ファスト・ブラックＫ塩（ジクマ） BANA基質（シグマ） トリス塩基 1.0M塩酸 ポリエチレングリコール（６−8000mw）［シグマ］ 中−秤量皿（medium weigh pans） 両面接着テープ（3M） 熱水浴 方法： 紙及びニトロセルロース膜を５×5cm平方に切る。
BANA紙の製造 44mgBANAを1mlジメチルズルフオキシドに溶かすことに
よってBANA溶液をつくる。その後この溶液を15mMトリス
−HCl,pH8.5,で1:50に希釈する。生成溶液1mlを中−秤
量皿の底に入れ、この上に正方形の紙＃903を置く。約
２分間で吸収がおきる。液体を含んだこの紙をそれから
ガラス面上に置き、室温で脱水機を用いて脱水すること
によって水分を除去する。
よってBANA溶液をつくる。その後この溶液を15mMトリス
−HCl,pH8.5,で1:50に希釈する。生成溶液1mlを中−秤
量皿の底に入れ、この上に正方形の紙＃903を置く。約
２分間で吸収がおきる。液体を含んだこの紙をそれから
ガラス面上に置き、室温で脱水機を用いて脱水すること
によって水分を除去する。
注意：紙は平らで用いてもよいし、グロメットプライヤ
ー又はその他の適当な成形器具を用いて一連のえくぼを
その上に成形してもよい。これを行うには、BANA含浸前
に、グロメットプライヤーを部分的に二層の紙に押し込
み貫通を避ける。
ー又はその他の適当な成形器具を用いて一連のえくぼを
その上に成形してもよい。これを行うには、BANA含浸前
に、グロメットプライヤーを部分的に二層の紙に押し込
み貫通を避ける。
ファスト・ブラック−ニトロセルロース膜の製法 ファスト・ブラックをナイロン−又はニトロセルロース
正方形膜に吸着させる。そのためには正方形の膜９枚
を、0.2％ファスト・ブラックＫ塩を含む10％ポリエチ
レングリコール水溶液（6000〜8000分子量）20ml中に入
れる。この溶液を、使用前に、綿栓をしたカラムを通過
させて不溶性物質を除去することによって澄明にする。
正方形膜に吸着させる。そのためには正方形の膜９枚
を、0.2％ファスト・ブラックＫ塩を含む10％ポリエチ
レングリコール水溶液（6000〜8000分子量）20ml中に入
れる。この溶液を、使用前に、綿栓をしたカラムを通過
させて不溶性物質を除去することによって澄明にする。
膜を蒸溜水中で１時間濡らすことによって吸着の準備を
する。それから濡れた膜とファスト・ブラック溶液とを
中−秤量皿中で一緒にし、アルミホイールでおおい、37
℃水浴中に２〜６時間置く。この後、ピンセットを用い
て膜を一枚の瀘紙上に置き、一晩、周囲室温で乾かす。
する。それから濡れた膜とファスト・ブラック溶液とを
中−秤量皿中で一緒にし、アルミホイールでおおい、37
℃水浴中に２〜６時間置く。この後、ピンセットを用い
て膜を一枚の瀘紙上に置き、一晩、周囲室温で乾かす。
この時点で、BANA紙及びファスト・ブラック−ニトロセ
ルロース膜をそれぞれ１枚づつ用いる試験の用意ができ
たことになる。
ルロース膜をそれぞれ１枚づつ用いる試験の用意ができ
たことになる。
感度 この30分試験法を用いて、濃度既知のウシ膵トリプシン
（III型シグマケミカル，約11,680BAEE単位/mg蛋白質）
のトリプシン様活性を評価した場合、検出限界は５μ
スポットあたり10〜50ナノグラムである。これは、37℃
で18〜22時間行われる液体ベース試験の感度の約100倍
の改善を示す。
（III型シグマケミカル，約11,680BAEE単位/mg蛋白質）
のトリプシン様活性を評価した場合、検出限界は５μ
スポットあたり10〜50ナノグラムである。これは、37℃
で18〜22時間行われる液体ベース試験の感度の約100倍
の改善を示す。
BANA基質のトリプシン加水分解速度を、精製Treponema
denticola酵素のそれと比較して測定した；参照、オー
タ（Ohta,k）、マキネン（Makinen,K.K.）及びロッシュ
（Loesche,W.J.）の“合成トリプシン基質を加水分解で
きるTreponema denticolaによって産生される酵素の精
製及び特徴づけ（Purification and Characterization
of an Enzyme Produced by Treponema denticola Capab
le of Hydrolyzing synthetic Trypsin Substrate
s）”、Infection and Immunity、53巻213−220ペー
ジ、（1986）。この11.7という比は、試験の感度がこの
酵素では117−585ナノグラムであることを意味する。
denticola酵素のそれと比較して測定した；参照、オー
タ（Ohta,k）、マキネン（Makinen,K.K.）及びロッシュ
（Loesche,W.J.）の“合成トリプシン基質を加水分解で
きるTreponema denticolaによって産生される酵素の精
製及び特徴づけ（Purification and Characterization
of an Enzyme Produced by Treponema denticola Capab
le of Hydrolyzing synthetic Trypsin Substrate
s）”、Infection and Immunity、53巻213−220ペー
ジ、（1986）。この11.7という比は、試験の感度がこの
酵素では117−585ナノグラムであることを意味する。
実施例２ BANA紙の製法 トリス緩衝液を蒸溜水に加え、溶解するまで混合する。
その溶液に2NHClを適下して、pH範囲8.8±0.2にする。B
ANA（5.5g/）をメタノール（90％W/V）に加え、BANA
が溶解するまで混合する。トリス緩衝溶液（0.1L）をBA
NAメタノール溶液（0.9L）にゆっくり加える。徹底的に
混合する。
その溶液に2NHClを適下して、pH範囲8.8±0.2にする。B
ANA（5.5g/）をメタノール（90％W/V）に加え、BANA
が溶解するまで混合する。トリス緩衝溶液（0.1L）をBA
NAメタノール溶液（0.9L）にゆっくり加える。徹底的に
混合する。
ワットマン3MM紙を用い、６インチ（15.2cm）幅の紙90
直線フィート（27.4m）あたり１リットルの割合で上記
溶液を紙にコーティングする。温度180゜Ｆ（82℃）で
乾かす。
直線フィート（27.4m）あたり１リットルの割合で上記
溶液を紙にコーティングする。温度180゜Ｆ（82℃）で
乾かす。
ファスト・ブラックＫ塩−ナイロンの製法 ガントレツＲＳ−95をゆっくりと、撹拌しながらメタノ
ールに加える。この溶液に1.5−ナフチレンジスルフォ
ン酸ナトリウムを加える。混合後、ファスト・ブラック
Ｋ塩を加え、15〜20分間振とうする。生成した溶液をぴ
ったりおおい、遮光し、できるだけ早くコーディングプ
ロセスに用いる。
ールに加える。この溶液に1.5−ナフチレンジスルフォ
ン酸ナトリウムを加える。混合後、ファスト・ブラック
Ｋ塩を加え、15〜20分間振とうする。生成した溶液をぴ
ったりおおい、遮光し、できるだけ早くコーディングプ
ロセスに用いる。
Pallナイロン膜（Biodyne ATM）を用い、上記溶液を先
ず40ミクロンフィルターを通し、それからこの膜に、0.
1〜１フィート（３〜30cm）／分の速度、１リットル/18
0直線フィート（54.9m）×６インチ（15.2m）膜の割合
でコーディングし、温度170゜Ｆ（77℃）で乾燥する。
含浸は光を減らした条件下で行われる（光度は２フット
カンデラ以下である）。乾燥した含浸ナイロン膜は13
％の相対温度で保存される。コーテッド紙及び含浸ナイ
ロン膜を幅２インチ（5cm）の片に切り、各１片づつ
を、4.5インチ（11.4cm）×5.25インチ（13.3cm）ポリ
スチレンカード上で重ねる（laminate）。
ず40ミクロンフィルターを通し、それからこの膜に、0.
1〜１フィート（３〜30cm）／分の速度、１リットル/18
0直線フィート（54.9m）×６インチ（15.2m）膜の割合
でコーディングし、温度170゜Ｆ（77℃）で乾燥する。
含浸は光を減らした条件下で行われる（光度は２フット
カンデラ以下である）。乾燥した含浸ナイロン膜は13
％の相対温度で保存される。コーテッド紙及び含浸ナイ
ロン膜を幅２インチ（5cm）の片に切り、各１片づつ
を、4.5インチ（11.4cm）×5.25インチ（13.3cm）ポリ
スチレンカード上で重ねる（laminate）。
実施例３ 試験法： 歯肉上歯垢を除去し、棄てた後、キューレットを用いて
１患者につき３〜４箇所から歯肉下歯垢サンプルを集
め、合一する。歯垢はソレンセン（Sorensen）燐酸緩衝
液中に集める。サンプルをBANA含有−第一要素の数箇所
に塗布する。ファスト・ブラック−ナイロン−又はニト
ロセルロース膜第二要素（蒸溜水で濡らすことによって
活性化する）を、サンプル含有BANA第一要素上に置く。
一緒にした要素を55℃の乾燥熱インキュベーター中に15
分間置く。別法として、一緒にした要素を熱い水道水浴
中に（約55〜59℃）約30分間置いてもよい。必要な時間
経過後、要素をインキュベーター又は浴からとり出し、
分離し、ファスト・ブラック−ナイロン−又はニトロセ
ルロース膜第二要素を調べる。ファスト・ブラック−ナ
イロン−又はニトロセルロース膜第二要素上に暗青色の
スポットが存在すれば、それはBANA加水分解を示し、か
つ歯周疾患をおこす微生物の存在を示す。
１患者につき３〜４箇所から歯肉下歯垢サンプルを集
め、合一する。歯垢はソレンセン（Sorensen）燐酸緩衝
液中に集める。サンプルをBANA含有−第一要素の数箇所
に塗布する。ファスト・ブラック−ナイロン−又はニト
ロセルロース膜第二要素（蒸溜水で濡らすことによって
活性化する）を、サンプル含有BANA第一要素上に置く。
一緒にした要素を55℃の乾燥熱インキュベーター中に15
分間置く。別法として、一緒にした要素を熱い水道水浴
中に（約55〜59℃）約30分間置いてもよい。必要な時間
経過後、要素をインキュベーター又は浴からとり出し、
分離し、ファスト・ブラック−ナイロン−又はニトロセ
ルロース膜第二要素を調べる。ファスト・ブラック−ナ
イロン−又はニトロセルロース膜第二要素上に暗青色の
スポットが存在すれば、それはBANA加水分解を示し、か
つ歯周疾患をおこす微生物の存在を示す。
実施例４ 固相アッセイと、歯周疾患の臨床診断との相関性 10歯垢サンプルをミシガンの研究所職員から得＃１−1
0）、15歯垢サンプルをデトロイドの患者から得た（＃1
1−25）。測定パラメーターとして、健康か病気かの臨
床医の判断、ポケット深さ、探針時の出血、強拡大視野
（hpf）あたりのスピロヘータ数（１スピロヘータ/hpf
は約１×106微生物である）、ファスト・ブラック固相
アッセイの色の強さ、一晩液相アッセイによって行われ
たBANA反応の色の強さが含まれる。
0）、15歯垢サンプルをデトロイドの患者から得た（＃1
1−25）。測定パラメーターとして、健康か病気かの臨
床医の判断、ポケット深さ、探針時の出血、強拡大視野
（hpf）あたりのスピロヘータ数（１スピロヘータ/hpf
は約１×106微生物である）、ファスト・ブラック固相
アッセイの色の強さ、一晩液相アッセイによって行われ
たBANA反応の色の強さが含まれる。
歯垢を110μの液体中に集め、渦状に撹拌することに
よって分散させ、10μをとり、スピロヘータのみを顕
微鏡で数えた。別に50μをとり、液相アッセイでBANA
と共に一晩インキューベータした。残る50μを遠没
し、生成したペレットを固相アッセイにかけ、水を用い
る方法で30分間発現させる。結果を以下の１表に示す。
よって分散させ、10μをとり、スピロヘータのみを顕
微鏡で数えた。別に50μをとり、液相アッセイでBANA
と共に一晩インキューベータした。残る50μを遠没
し、生成したペレットを固相アッセイにかけ、水を用い
る方法で30分間発現させる。結果を以下の１表に示す。
ファスト・ブラック固相アッセイが液相アッセイとは異
なり、ファスト・ブラック固相アッセイが正しくないよ
うにみえる試料（歯垢）が二つある。サンプル４では、
臨床医は歯垢を健康な部位からのものと判断し、スピロ
ヘータは検出されず、液相アッセイは陰性であった。し
かしファスト・ブラック固相アッセイは弱い陽性であっ
た。これは間違った陽性である。サンプル13では、臨床
医はその部位を疾患と判断し、それは探針で出血し、高
レベルのスピロヘータをもち、液相アッセイで弱い陽性
であった。しかしファスト・ブラック固相アッセイによ
ると陰性であった。これは間違った陰性である。
なり、ファスト・ブラック固相アッセイが正しくないよ
うにみえる試料（歯垢）が二つある。サンプル４では、
臨床医は歯垢を健康な部位からのものと判断し、スピロ
ヘータは検出されず、液相アッセイは陰性であった。し
かしファスト・ブラック固相アッセイは弱い陽性であっ
た。これは間違った陽性である。サンプル13では、臨床
医はその部位を疾患と判断し、それは探針で出血し、高
レベルのスピロヘータをもち、液相アッセイで弱い陽性
であった。しかしファスト・ブラック固相アッセイによ
ると陰性であった。これは間違った陰性である。
全体として、25サンプル中23において、二つの試験と大
部分の臨床パラメーターとは一致した。一連のχ二乗分
析は、これらの試験と種々の臨床的パラメーターとの間
に高度に有意な関係を示している。ファスト・ブラック
固相アッセイ及び液相アッセイが陰性であるのに、臨床
的指標は主として疾患部位のそれであるというサンプル
が三つある（＃7,8,19）。そのいづれの場合にもスピロ
ヘータ数/hpfは１以下か又は１であり、歯垢サンプルが
少な過ぎて、用いたインキュベーション時間では、反応
を与えることができなかったことを示唆している。これ
は、マルチ−サンプリング法によって最小にすることが
できる非常に少量の歯垢サンプルでは、常に問題とな
る。
部分の臨床パラメーターとは一致した。一連のχ二乗分
析は、これらの試験と種々の臨床的パラメーターとの間
に高度に有意な関係を示している。ファスト・ブラック
固相アッセイ及び液相アッセイが陰性であるのに、臨床
的指標は主として疾患部位のそれであるというサンプル
が三つある（＃7,8,19）。そのいづれの場合にもスピロ
ヘータ数/hpfは１以下か又は１であり、歯垢サンプルが
少な過ぎて、用いたインキュベーション時間では、反応
を与えることができなかったことを示唆している。これ
は、マルチ−サンプリング法によって最小にすることが
できる非常に少量の歯垢サンプルでは、常に問題とな
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｇ //(Ｃ１２Ｑ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:01） (56)参考文献 西独国特許公開明細書1923194（ＤＥ, Ａ) Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ，58 （４），1987，Ｐ．266−273 「化学大辞典７」共立出版（昭39−１− 15）Ｐ．626−628 Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，81 （２）1984，Ｐ．161−166 (54)【発明の名称】 歯周病診断用アッセイ装置及びＢＡＮＡ加水分解検出方法及びＢＡＮＡ加水分解検出用アッセイ 装置の利用方法及び歯周病決定方法及びＢＡＮＡ加水分解検出用固相アッセイ装置の調整方法及 びＢＡＮＡ加水分解検出用アッセイ装置
Claims (28)
- 【請求項１】Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−２−ナ
フチルアミド（BANA）加水分解の検出により歯周病の診
断をするアッセイ装置であって、 前記Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−２−ナフチルア
ミド（BANA）のpH8〜９の緩衝液を含浸した固相マトリ
ックス材料で形成した、患者からの歯肉下歯垢のサンプ
ルを受容する第一要素と、 発色剤であるファスト・ブラックＫ塩を含浸吸着する固
相のナイロン又はニトロセルロース膜を含む第二要素と
を有し、 この第一要素と水で湿らせた上記第二要素とを緊密に接
触させた後、歯肉下歯垢サンプルを上記第一要素上に直
接配置し、これら組み合わせた第一要素及び第二要素上
で50〜60℃にて５〜30分間酵素反応を起こさせることに
より、BANA加水分解が生じたこと及び患者が歯周病を羅
患してことを示す色の変化が上記第二要素上で生じるよ
うにしたアッセイ装置。 - 【請求項２】前記第一要素がセルロース紙パツドを含む
請求項１記載のアッセイ装置。 - 【請求項３】前記第一要素が、歯肉下歯垢サンプルを受
容するのに適したサンプル保持手段を含む請求項２記載
のアッセイ装置。 - 【請求項４】前記サンプル保持手段が、第一要素に型押
されたえくぼ（dimple）である請求項３に記載のアッセ
イ装置。 - 【請求項５】前記緩衝液がトリス緩衝液である請求項１
に記載のアッセイ装置。 - 【請求項６】前記ナイロン−又はニトロセルロース膜か
らなる第二要素が、付加的にポリマー安定剤を含む請求
項１に記載のアッセイ。 - 【請求項７】歯肉下歯垢サンプルでＮ−ベンゾイル−DL
−アルギニン−２−ナフチルアミド（BANA）加水分解を
検出する方法であって、 前記Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−２−ナフチルア
ミド（BANA）のpH8〜９の緩衝液を含浸したマトリック
ス材料で形成された、歯肉下歯垢サンプルを受容する第
一固相要素上に、患者からの歯肉下歯垢サンプルを直接
配置する段階と、 発色剤であるファスト・ブラックＫ塩を含浸吸着するナ
イロン又はニトロセルロース膜で形成された第二固相要
素を水で湿潤させる段階と、 上記第一要素を湿潤した第二要素に緊密に接触して配置
する段階と、 これら組み合わせた第一要素及び第二要素上で50〜60℃
にて５〜30分間酵素反応を起こさせる段階とを有し、 これによりBANA加水分解が生じたこと及び患者が歯周病
を羅患していることを示す色の変化が前記第二要素上で
起こるようにした方法。 - 【請求項８】前記第一要素がセルロース紙パッドである
請求項７記載の方法。 - 【請求項９】前記第一要素が、歯肉下歯垢サンプルを受
容するのに適したサンプル保持手段を含む請求項８記載
の方法。 - 【請求項１０】前記サンプル保持手段が、第一要素に型
押されたえくぼである請求項９記載の方法。 - 【請求項１１】前記緩衝液がトリス緩衝液である請求項
７記載の方法。 - 【請求項１２】前記ナイロン−又はニトロセルロース膜
からなる第二要素が、付加的にポリマー安定剤を含む請
求項７に記載の方法。 - 【請求項１３】歯周病の診断のためBANA加水分解検出用
アッセイ装置を利用する方法であって、 ａ）患者から歯肉下歯垢のサンプルを患者から収集する
段階と、 ｂ）Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−２−ナフチルア
ミド（BANA）のpH8〜９の緩衝液を含浸するマトリック
ス材料で形成した、該アッセイ装置の第一固相要素上に
直接上記サンプルを適用する段階と、 ｃ）該アッセイの第二固相要素を水で湿潤させる段階に
おいて、該第二要素が発色剤であるファスト・ブラック
Ｋ塩を含浸吸着するナイロン又はニトロセルロース膜を
含むことと、 ｄ）上記第一要素を上記第二要素に緊密に接触させる段
階と、 ｅ）上記第一及び第二要素上で50〜60℃にて５〜30分間
酵素反応を起こさせる段階と、 ｆ）前記第二要素を観察してBANA加水分解が生じたこと
及び患者が歯周病を羅患していることを示す色の変化を
検出する段階とを含む方法。 - 【請求項１４】前記第一要素がセルロース紙パッドを含
んでなる請求項13記載の方法。 - 【請求項１５】前記第一要素が、付加的にサンプル保持
手段を含む請求項14記載の方法。 - 【請求項１６】前記サンプル保持手段が、第一要素に型
押されたえくぼである請求項15記載の方法。 - 【請求項１７】前記緩衝液がトリス緩衝液である請求項
13記載の方法。 - 【請求項１８】前記ナイロン−又はニトロセルロース膜
からなる第二要素が、付加的にポリマー安定剤を含む請
求項13記載の方法。 - 【請求項１９】前記酵素反応を起こさせる段階が、乾燥
熱インキュベーターで行われる請求項13に記載の方法。 - 【請求項２０】前記酵素反応を起こさせる段階が、高温
水道水槽内で行われる請求項13記載の方法。 - 【請求項２１】固相アッセイ装置を利用することにより
改良した、患者の歯周病の存否を決定する方法であっ
て、該固相アッセイ装置が、 Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−２−ナフチルアミド
（BANA）のpH8〜９の緩衝液を内部に導入したマトリッ
クス材料で形成した、患者からの歯肉下歯垢サンプルを
直接受容する第一要素と、 発色剤であるフアスト・ブラックＫ塩を含浸吸着するナ
イロン又はニトロセルロース膜を含む第二要素とを有
し、 上記第一要素と水で湿らせた上記第二要素とを緊密に接
触させた後、歯肉下歯垢サンプルを直接に上記第一要素
上に配置し、これら組み合わせた第一要素及び第二要素
上で50〜60℃にて５〜30分間酵素反応を起こさせること
により、BANA加水分解が生じたこと及び患者が歯周病を
羅患してことを示す色の変化が上記第二要素上で生じる
ようにした歯周病決定方法。 - 【請求項２２】Ｎ−ベンゾイル−DL−アルギニン−２−
ナフチルアミド（BANA）加水分解検出用固相アッセイ装
置の調整方法であって、 マトリックス材料で形成した第一要素上にＮ−ベンゾイ
ル−DL−アルギニン−２−ナフチルアミド（BANA）のpH
8〜９の緩衝液を吸収させる段階と、 上記第一要素を乾燥させる段階と、 ナイロン又はニトロセルロース膜で形成された第二要素
上に発色剤であるフアスト・ブラックＫ塩の溶液を吸着
させる段階と、 上記第二要素を乾燥させる段階とを含む調整方法。 - 【請求項２３】前記第一要素がセルロース紙パッドであ
る請求項22記載の調整方法。 - 【請求項２４】前記第一要素が、付加的にサンプル保持
手段を含む請求項23記載の調整方法。 - 【請求項２５】前記サンプル保持手段が第一要素に型押
されたえくぼである請求項24記載の調整方法。 - 【請求項２６】前記緩衝液がトリス緩衝液である請求項
22に記載の調整方法。 - 【請求項２７】前記ファスト・ブラックＫ塩溶液が、付
加的にポリマー安定剤を含む請求項22に記載の調整方
法。 - 【請求項２８】歯肉下歯垢サンプルでＮ−ベンゾイル−
DL−アルギニン−２−ナフチルアミド（BANA）加水分解
を検出するアッセイ装置であって、 前記歯肉下歯垢サンプルを受容するＮ−ベンゾイル−DL
−アルギニン−２−ナフチルアミド（BANA）のpH8〜９
緩衝液を含浸した固相マトリックス材料で形成された第
一要素において、BANAが歯肉下歯垢サンプル中の歯周病
原細菌の存在下でβ−ナフチルアミドを放出するよう加
水分解可能であることと、 吸着される発色剤を含有する固相のナイロン又はニトロ
セルロース膜を含む第二要素において、発色剤が該発色
剤と放出されたβ−ナフチルアミドとの間のカップリン
グ反応に対してpH6〜９の間にpH最適値を有することと
を含み、これら第一要素及び第二要素が相互に接触する
ように配置されているアッセイ装置。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US30314589A | 1989-01-30 | 1989-01-30 | |
| US303,145 | 1989-01-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02261396A JPH02261396A (ja) | 1990-10-24 |
| JPH07108234B2 true JPH07108234B2 (ja) | 1995-11-22 |
Family
ID=23170722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021907A Expired - Fee Related JPH07108234B2 (ja) | 1989-01-30 | 1990-01-30 | 歯周病診断用アッセイ装置及びｂａｎａ加水分解検出方法及びｂａｎａ加水分解検出用アッセイ装置の利用方法及び歯周病決定方法及びｂａｎａ加水分解検出用固相アッセイ装置の調整方法及びｂａｎａ加水分解検出用アッセイ装置 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0380932B1 (ja) |
| JP (1) | JPH07108234B2 (ja) |
| AT (1) | ATE141647T1 (ja) |
| AU (1) | AU619070B2 (ja) |
| CA (1) | CA2008065C (ja) |
| DE (1) | DE69028126T2 (ja) |
| ZA (1) | ZA90593B (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5223403A (en) * | 1985-05-31 | 1993-06-29 | University Of Michigan | Device for diagnosing periodontal disease |
| JP4246799B2 (ja) * | 1997-04-11 | 2009-04-02 | 富士フイルム株式会社 | 酵素の測定方法 |
| JP2013185858A (ja) | 2012-03-06 | 2013-09-19 | Gc Corp | 外膜ヴェシクルを用いた歯周病原細菌の検査方法及び測定用器具 |
| CN109009235B (zh) * | 2018-06-22 | 2023-10-13 | 四川大学 | 一种龈下厌氧菌群采集器及使用方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1923194U (de) | 1965-06-10 | 1965-09-09 | Heinrich Heicke | Dreiwegeventil, insbesondere fuer gaszentralheizungsgeraete. |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2007917A1 (en) * | 1968-05-06 | 1970-01-16 | Warner Lambert Pharmaceutical | Detector for periodontal diseases characterized by the - presence of the enzyme beta delta galactosidase |
| DE1923194A1 (de) * | 1969-05-07 | 1970-11-26 | Establishment Bornex | Bewehrte Spannquarzsandplatte |
| GB8803109D0 (en) * | 1988-02-11 | 1988-03-09 | Deltanine Research Ltd | Improvements in/relating to clinical testing monitoring & pharmaceutical compositions for treatment of auto-immune diseases |
-
1990
- 1990-01-10 DE DE69028126T patent/DE69028126T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-01-10 EP EP90100409A patent/EP0380932B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-01-10 AT AT90100409T patent/ATE141647T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-01-11 AU AU47900/90A patent/AU619070B2/en not_active Ceased
- 1990-01-18 CA CA002008065A patent/CA2008065C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-01-26 ZA ZA90593A patent/ZA90593B/xx unknown
- 1990-01-30 JP JP2021907A patent/JPH07108234B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1923194U (de) | 1965-06-10 | 1965-09-09 | Heinrich Heicke | Dreiwegeventil, insbesondere fuer gaszentralheizungsgeraete. |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 「化学大辞典７」共立出版（昭３９−１−１５）Ｐ．６２６−６２８ |
| Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，８１（２）１９８４，Ｐ．１６１−１６６ |
| ＪＰｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ，５８（４），１９８７，Ｐ．２６６−２７３ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA90593B (en) | 1990-10-31 |
| CA2008065A1 (en) | 1990-07-30 |
| DE69028126D1 (de) | 1996-09-26 |
| AU4790090A (en) | 1990-08-30 |
| CA2008065C (en) | 1998-09-15 |
| EP0380932B1 (en) | 1996-08-21 |
| DE69028126T2 (de) | 1997-01-23 |
| EP0380932A3 (en) | 1991-11-06 |
| ATE141647T1 (de) | 1996-09-15 |
| AU619070B2 (en) | 1992-01-16 |
| JPH02261396A (ja) | 1990-10-24 |
| EP0380932A2 (en) | 1990-08-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2763635B2 (ja) | 生体液中のジアミンの検出 | |
| US5223403A (en) | Device for diagnosing periodontal disease | |
| US20120277553A1 (en) | Spectrophotometric measurement in color-based biochemical and immunological assays | |
| JPH04237500A (ja) | ケトン体の検定のための組成物及び方法 | |
| Chapple et al. | A new ultrasensitive chemiluminescent assay for the site‐specific quantification of alkaline phosphatase in gingival crevicular fluid | |
| JPH01107155A (ja) | 歯科診断器具と診断方法 | |
| US20030100842A1 (en) | Method and kit for indicating the level of bad breath | |
| CA1320419C (en) | Diagnostic methods, product and kits for detecting periodontal diseases | |
| US20040029205A1 (en) | Diagnostic system for differentiating sputum from saliva | |
| JPH07108234B2 (ja) | 歯周病診断用アッセイ装置及びｂａｎａ加水分解検出方法及びｂａｎａ加水分解検出用アッセイ装置の利用方法及び歯周病決定方法及びｂａｎａ加水分解検出用固相アッセイ装置の調整方法及びｂａｎａ加水分解検出用アッセイ装置 | |
| US20120077278A1 (en) | Methods and kits for detecting, diagnosing and monitoring diseases | |
| JPS6171000A (ja) | 歯肉疾患の存在を発見する方法及びそのためのキツト | |
| Bimstein et al. | Leukocyte esterase and protein levels in saliva, as indicators of gingival and periodontal diseases in children | |
| US5116735A (en) | Diagnosing periodontal disease by measuring proteolytic activity of periodontopathogenic bacteria | |
| CA1070227A (en) | Measurement of alkaline phosphatase levels in body fluids | |
| JP2002514306A (ja) | インビトロアレルギー診断のためのストリップテスト | |
| CA1276531C (en) | Diagnostic saliva test for detecting periodontal disease | |
| EP1173555A1 (en) | Method and kit for indicating the level of bad breath | |
| JPH04229198A (ja) | 歯周疾患検査方法 | |
| JP2005073650A (ja) | 口腔内微生物の分析方法 | |
| JP3413199B2 (ja) | 歯周病病原性細菌のタンパク質加水分解活性の測定系 | |
| RU2271539C2 (ru) | Спектрофотометрические измерения в биохимических и иммунологических испытаниях, основанных на наличии окраски | |
| CN115896237A (zh) | 用于尿素酶活性快速筛查的凝胶试剂、试剂盒及快速筛查方法 | |
| Bhatia et al. | Recent Chairside Diagnostic Kits Used in Periodontics | |
| JPH05176796A (ja) | 歯周疾患検査方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081122 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091122 Year of fee payment: 14 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |