JPH0827176A - シアリルリン脂質の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】シアリルリン脂質の製造方法において、従来方
法に比べて高い収率の得られる新たな製造方法を提供す
る。 【構成】 一般式（１）で表される化合物と一般式
（２）で表される化合物とを、グリコシル化反応により
結合させた後に、アセチル基を、次いでＹで表される保
護基をはずすことにより成る、一般式（４）で表される
シアリルリン脂質を製造する方法。 ［式中、Ｒ_１，Ｒ_２は−ＯＨまたは−ＯＣＯＲ（ＲはＣ
_１〜Ｃ_２９のアルキル基）を；ＹはＣ_１〜Ｃ_４のアルキ
ル基またはベンジル基を；ＺはＣｌまたはＢｒを；Ａｃ
はアセチル基を示し、ｎは１〜２０の整数である］

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はシアル酸とリン脂質とを
結合せしめたシアル酸誘導体の、効率の良い製造方法に
関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、シアル酸の種々の生理作用に注目
し、シアル酸の大量調製法やその応用に関する研究が進
められている。一方、リン脂質は近年、ドラッグデリバ
リーシステムに有用なリポソームへの応用研究が進めら
れている。シアル酸の持つ種々の生理作用とリン脂質の
生理作用或いは物理的特性を合わせ持つ化合物として、
一般式（４）

【化７】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、及びｎは前記と同意義である。）
で表されるシアル酸誘導体およびその製造法が特開平５
−１３２４９６号において開示されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
製造方法は反応の煩雑さのみならず、最終目的物質の回
収率が低いといった問題点を有しており、特にホスホリ
パーゼＤ（以下ＰＬＤと略す）での酵素反応での目的化
合物の収率、および最終ステップであるシアル酸残基の
カルボキシル基の保護基脱離反応において収率が著しく
低下するといった問題点を有していた。すなわち、より
簡便でかつ回収率の高い製造方法の開発が待たれてい
た。従って、本発明の目的は、一般式（４）

【化８】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、及びｎは前記と同意義である。）
で表されるシアル酸誘導体の簡便でかつ回収率の高い製
造方法を提供する事にある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の課
題を達成するために鋭意研究を重ねた結果、リン脂質に
スペーサーとなるアルカンジオールを結合させたもの
と、シアル酸とをグリコシル化することにより上記シア
リルリン脂質を高回収率で得ることに成功し本発明を完
成するに至った。即ち、本発明の要旨は一般式（１）

【化９】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物と一般式（２）

【化１０】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は相異なる置換基で水
酸基、又は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直
鎖又は分岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数
を示す。）で表される化合物とを、グリコシル化反応に
より結合させた後に、アセチル基をはずすことにより得
られる一般式（３）

【化１１】 （式中のＹ、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、及びｎは前記と同意義であ
る。）で表される化合物から、Ｙで表される保護基をは
ずすことを特徴とする一般式（４）

【化１２】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、及びｎは前記と同意義である。）
で表されるシアリルリン脂質の製造方法に関する。本発
明の一般式（４）で表されるシアリルリン脂質におい
て、Ｒ₁ およびＲ₂は同一または異なって水酸基、また
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示し好ましくは炭素数５〜２３の直鎖ま
たは分岐アルキル基が良い。炭素数が３０以上になると
アルキル基の疎水性が強くなりすぎる等の問題があ
る。）を示す。具体的には、例えば卵黄、大豆由来のリ
ン脂質や、それらを水素添加したもの、またラウロイル
基、ミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル
基、オレオイル基、リノレイル基、アラキドニル基、エ
イコサペンタエノイル基、ドコサヘキサエノイル基等の
官能基が挙げられる。

【０００５】また、ｎは１〜２０の整数を表し、好まし
くは４〜１２である。さらに好ましくは６〜１２。ｎが
１２をこえると分子全体としての疎水性が大きくなる等
の問題がある。本発明の一般式（４）で表されるシアリ
ルリン脂質の製造方法は、前記のようにリン脂質とスペ
ーサーとなるアルキルジオールをＰＬＤまたはＰＬＤを
含有する菌体に接触させて、酵素反応によりエステル交
換し得られるリン脂質誘導体（一般式（２）の化合物）
と、既知の方法（ＥＰ−Ａ−０３１９２５３等）により
シアル酸から合成されるシアル酸の反応性誘導体（一般
式（１）の化合物）とを、活性化剤の存在下、０℃以下
の低温度条件でグリコシル化する事によって得られるシ
アリルリン脂質のアセチル体をメタノールなどの溶媒中
アルコキシド又はアンモニアで処理するか、または処理
した後に、触媒存在下で水素添加し保護基をはずす事に
よって行われる。本発明の一般式（４）で表されるシア
リルリン脂質の製造方法を以下に示す。

【化１３】 例えば、具体的にはＰＬＤによる一般式（２）で表され
るリン脂質誘導体（３）の調製は、ＰＬＤとアルキルジ
オール（１）とカルシウム塩をＰＬＤの至適ｐＨに調整
した適当な緩衝液に溶解させる。そこにリン脂質（２）
を有機溶媒に溶解させたものを加え、数時間から数週間
反応させることによりエステル交換反応が完結する。一
般式（５）で表されるリン脂質（２）において、一般式
中のＸはコリン、エタノールアミン、セリン、イノシト
ール、グリセロールなどの水酸基を有する化合物を示
す。このような物からなるリン脂質として、具体的に例
えばホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノール
アミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシ
トール、ホスファチジルグリセロールなどが挙げられ、
これらの単一化合物又はそれらの混合物でも差し支えな
い。また、大豆由来のもの等植物由来のもの、卵黄由来
のもの等動物由来のもの、合成によって得られたジアシ
ル型のリン脂質、さらにはこれらリン脂質の脂肪酸残基
の一方をホスホリパーゼにより又は化学的に脱アシル化
することにより得られるリゾリン脂質等を使用する事が
できる。その中でも好ましいのは、ホスファチジルコリ
ン，ホスファチジルエタノールアミン，ホスファチジル
セリンである。

【０００６】本発明において使用するＰＬＤは、植物由
来のもの、動物由来のもの、微生物由来のもの等いずれ
でも良く、例えば、微生物由来のものとしては、ストレ
プトマイセス属、ノカルディオプシス属、アクチノマデ
ューラ属のものなどが使用され、好ましくは、ストレプ
トマイセス属が良い。また、ＰＬＤは通常水溶液として
又は適当な緩衝液の溶液として、さらには何らかの担体
に固定して使用される。例えば、酢酸、リン酸、Ｔｒｉ
ｓ−塩酸等の緩衝液、オクチルセファロース（ファルマ
シア社製）、ブチルトヨパール（東ソー社製）等の担体
が好適な例としてあげられる。ＰＬＤを含有する菌体を
使用する場合には、菌体の乾燥物あるいは担体に固定化
した菌体等の態様でも使用できる。ＰＬＤ又はＰＬＤを
含有する菌体を用いての酵素反応では、反応液のｐＨが
重要であり、通常ｐＨ４．０から８．０の範囲で使用す
る酵素の至適ｐＨ±０．５以内に調整するのが好まし
い。ここで用いられるＰＬＤの使用量は、通常リン脂質
１ｇあたり１０〜１００ユニット、好ましくはリン脂質
１ｇあたり２０〜５０ユニットである。また、酵素反応
の温度は通常１５〜５０℃、好ましくは２５〜３５℃で
ある。反応時間は通常０．５〜１２時間、好ましくは１
〜６時間である。更にＰＬＤの酵素活性を高めることを
目的として、必要に応じてカルシウムイオンやバリウム
イオン等の２価の典型金属イオン及び／又はマンガン、
ランタン、セリウム等の遷移金属イオンのハロゲン化
物、炭酸塩、リン酸塩を反応液に対して、通常１０ｍＭ
〜１Ｍ、好ましくは１０ｍＭ〜０．５Ｍ添加しても差し
支えない。酵素反応の形態としては、水系の反応、水相
と有機溶媒相との２相系の反応、有機溶媒系の反応のう
ちいずれかが選択されるが、中でもシアル酸は水に可溶
性、リン脂質は有機溶媒に可溶性でありエマルジョン系
での反応効率が優れているため水相と有機溶媒相との２
相系の反応が好ましい。

【０００７】ここで用いる有機溶媒は、融点４０℃以下
のカルボン酸のアルキルエステル、アルキルエーテル、
脂肪族炭化水素、脂環式炭化水素、芳香族炭化水素、ハ
ロゲン化炭化水素等の中から１種または２種以上混合し
て使用できる。例えば、カルボン酸のアルキルエステル
としては、炭素数２〜６の直鎖又は分岐脂肪酸のアルキ
ル（炭素数１〜８の直鎖または分岐アルキル）エステル
が挙げられ、酢酸メチル、酢酸エチル、吉草酸メチル、
プロピオン酸メチル、酪酸メチル、カプロン酸メチル等
を用いることができ、とりわけ酢酸メチルが好適であ
る。アルキルエーテルとしては、炭素２〜６の直鎖また
は分岐アルキルエーテルが挙げられ、ジエチルエーテ
ル、ジメチルエーテル、エチルメチルエーテル、イソプ
ロピルエーテル等を用いることができ、とりわけジエチ
ルエーテルが好適である。脂肪族炭化水素としては、炭
素数６〜１２の直鎖または分岐脂肪族炭化水素があげら
れ、特にヘキサン、ヘプタン、石油エーテルが好適であ
る。脂環式炭化水素としては、炭素数６〜１２の置換基
を有するか又は有しない脂環式炭化水素があげられ、特
にシクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、シクロオク
タンが好適である。芳香族炭化水素としては炭素数６〜
１２の置換基を有するか又は有しない芳香族炭化水素が
挙げられ、特にベンゼン、トルエン、キシレンが好適で
ある。更にハロゲン化炭化水素としては、炭素数１〜８
の直鎖または分岐アルカンクロル化物、ブロム化物、ヨ
ウ素化物が挙げられるが、特にクロロホルム、四塩化炭
素、塩化メチレンが好適である。

【０００８】一般式（１）で表されるシアル酸の反応性
誘導体（４）と一般式（２）で表されるリン脂質誘導体
（３）との縮合反応は、触媒量０．１〜１０当量の活性
化剤の存在下、有機溶媒中０℃以下の低温で進行し、シ
アリルリン脂質のアセチル体（５）が得られる。本発明
を実施するに適した活性化剤としてはトリフルオロメタ
ンスルホン酸トリメチルシリル（トリメチルシリルトリ
フラート）又は、トリフルオロメタンスルホン酸銀（銀
トリフラート）、炭酸銀などの重金属塩が有効であり、
中でもトリフルオロメタンスルホン酸銀（銀トリフラー
ト）が好ましい。反応に用いる触媒量は０．１〜１０当
量が好ましく、中でも０．１〜５当量がさらに好まし
い。触媒量が０．１当量より少ないと反応速度が遅くな
り１０当量より多いと経済的に不利益等の問題がある。
この反応において有機溶媒は四塩化炭素、クロロホル
ム、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、トルエン、
ベンゼンなどを用いる事ができ、クロロホルム、ジクロ
ロメタン等の塩素系溶媒が有効である。引き続き、得ら
れたシアリルリン脂質のアセチル体（５）をメタノール
などの溶媒中アルコキシドまたはアンモニアで処理し、
アセチル基をはずすことによって脱アセチル体（６）を
得、さらに触媒存在下で水素添加し、脱保護することに
より最終目的物であるシアリルリン脂質（７）を得る。

【０００９】

【実施例】

実施例１ 実施例１の反応経路を以下に示す。

【化１４】 １，８−オクタンジオール（８）４．３９ｇ（３０ｍ
Ｍ）をクロロホルム（安定剤：アミレン）２００ｍｌに
溶解する。次に、ホスファチジルコリン（９）７．９０
ｇ（１０ｍＭ）を加える。さらに、酢酸緩衝液（ｐＨ
５．６）３０ｍｌおよび０．４Ｍ酢酸カルシウム水溶液
３ｍｌを添加する。次に内温を３０〜３５℃に調整し、
ＰＬＤ３７０ユニットを上記の酢酸緩衝液の少量に溶解
して、適宜分割して添加する。反応の進行具合はＴＬＣ
（ＣＨＣｌ₃ ：ＣＨ₃ ＯＨ＝３：１）でモニターし、反
応終了後ロータリーエバポレーターにより濃縮乾固（バ
ス温６０℃）し、少量のメタノール−クロロホルム混液
を添加する。その後カラムクロマトグラフィー（Silica
gel（ａ）ＡｃＯＥｔ、（ｂ）ＣＨＣｌ₃ 、（ｃ）ＣＨ
Ｃｌ₃ ：ＣＨ₃ ＯＨ＝３：１）で精製し、ホスファチジ
ルオクタノール（10）５．６５ｇを得た。ＦＡＢ−ＭＳ
（Ｍ／Ｚ）；８３１（Ｍ−２）、２８３（Ｃ₁₇Ｈ₃₅ＣＯ
₂ ^- ，１００％）

【００１０】既知の方法で合成したシアル酸テトラアセ
チル誘導体ベンジルエステル（１１）２．３４ｇ（４．
０ｍＭ）及びホスファチジルオクタノール（１０）３．
３３ｇ（４．０ｍＭ）を、乾燥したクロロホルム（安定
剤：アミレン）２００ｍｌに溶解し、さらに粉砕リン酸
水素二ナトリウム１．１４ｇ（８．０ｍＭ）および粉末
モレキュラーシーブ４Ａ（乾燥品）２．３４ｇを加え
た。−５０〜−４０℃に冷却した後、同温度付近でトリ
フルオロメタンスルホン酸銀のトルエン溶液（トリフル
オロメタンスルホン酸銀１．０３ｇ（４．０ｍＭ）／ト
ルエン１５ｍｌ）を滴下した。反応液をセライト濾過し
て不溶物を除き、濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフ
ィー（Silica gel ＣＨＣｌ₃ ：ＣＨ₃ ＯＨ＝２０：１
〜１：１）で精製し、化合物（１２）を９００ｍｇ得
た。（収率１６％） ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ／Ｚ）；１３８１（Ｍ−１）、２８３
（Ｃ₁₇Ｈ₃₅ＣＯ₂ ^- １００％） 化合物（１２）２３４ｍｇ（０．１７ｍＭ）をメタノー
ル７０ｍｌに溶解した。氷冷下、カリウムメチラートの
３０％溶液（ＭｅＯＫ４２ｍｇ（０．６０ｍＭ）／Ｍｅ
ＯＨ１００ｍｇ）をゆっくり滴下した。反応の進行具合
はＴＬＣ（ＣＨＣｌ₃ ：ＣＨ₃ ＯＨ：Ｈ₂Ｏ＝７０：３
０：５）でモニターし、反応が終了した後直ちに乾燥し
たＤｏｗｅｘ−５０（Ｈ⁺ ）で中和した。樹脂を濾過
後、濾液を濃縮乾固し粗製物を得、カラムクロマトグラ
フィー（Silica gel，ＣＨＣｌ₃：ＣＨ₃ＯＨ＝２：１）
で精製し、化合物（１３）１１１ｍｇを得た。（収率５
４％） ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ／Ｚ）；１２１２（Ｍ−２），２３８
（Ｃ₁₇Ｈ₃₅ＣＯ₂ ^- ,１００％）

【００１１】化合物（１３）１００ｍｇ（０．０８ｍ
Ｍ）をエタノール３０ｍｌおよびクロロホルム１０ｍｌ
に溶解し、次に１０％パラジウム活性炭素（ｗｅｔ）２
０ｍｇを加え、超音波で十分にほぐした。さらに、０．
０１Ｎ塩酸３滴を添加し、強撹拌下、常圧で約５時間水
素添加を行った。反応終了後、系内を減圧にして水素を
除去し、窒素置換した。その後、パラジウム炭素をセラ
イトを用いて濾過し、濾液を濃縮乾固して粗製物を得
た。このものをカラムクロマトグラフィー（Silicagel
CHCl₃:CH₃OH=70:30）で精製し最終目的物であるシアリ
ルリン脂質（１４）４３．２ｍｇを得た。（収率４６
％） ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ／Ｚ）；１１４５（Ｍ＋Ｎａ−２）、
２８３（Ｃ₁₇Ｈ₃₅ＣＯ₂ ^- ，１００％） このものの収率は、シアル酸のテトラアセチル誘導体ベ
ンジルエステルに対して４％であった。

【００１２】実施例２ 実施例２の反応経路を以下に示す。

【化１５】 まず、シアル酸（１５）３ｇをメタノール３００ｍｌに
溶かし、Ｄｏｗｅｘ−５０（Ｈ⁺ ）３ｇを加え室温で４
時間撹拌反応を行い、反応終了後Ｄｏｗｅｘ−５０（Ｈ
⁺ ）を濾取した。濾液のメタノール溶液を１５ｍｌに濃
縮し、−２０℃でジエチルエーテル６ｍｌを添加し、再
結晶することによりメチル化合物（１６）２．４７ｇを
得た。得られたメチル化合物（１６）に−２０度で塩化
アセチル２５ｇ、無水酢酸３ｇを加え、乾燥塩化水素ガ
スを飽和させ、室温で２０時間撹拌反応を行った。反応
液の溶媒を留去し、ベンゼン、トルエンを用いて完全に
脱水した後、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ヘキ
サンの等量混合物により再結晶し、２−クロロ−テトラ
アセチル誘導体（１７）３ｇを得た。次に、シアル酸の
テトラアセチル誘導体ベンジルエステルの代わりにシア
ル酸の２−クロロ−テトラアセチル誘導体メチルエステ
ル（１７）２．０４ｇを用いる以外は実施例１と全く同
様な操作で反応、精製を行う事により脱アセチル化シア
リルリン脂質メチルエステル（１８）９８０ｍｇを得
た。ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ／Ｚ）；１１３７（Ｍ−１），２
３８（Ｃ₁₇Ｈ₃₅ＣＯ₂ ^- ）脱アセチル化シアリルリン脂
質メチルエステル（１８）４００ｍｇ（０．３５ｍＭ）
をＴＨＦ１０ｍｌ、Ｈ₂ Ｏ５ｍｌの混合溶媒に溶解し、
氷冷下で１Ｎ−ＮａＯＨ０．３ｍｌを加え１時間反応し
た。反応液をＤｏｗｅｘ−５０（Ｈ⁺ ）にて中和（ｐＨ
８）し、樹脂をＨ₂ Ｏで洗浄し、濾液、洗液を合わせて
濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＯＤＳ／Ｈ₂Ｏ、
ＭｅＯＨ）で精製する事により最終目的物であるシアリ
ルリン脂質（１９）１２３ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を
得た。このシアリルリン脂質の収率はシアル酸のテトラ
アセチル誘導体メチルエステルに対して２．８％であっ
た。

【００１３】実施例３ 実施例３の反応経路を以下に示す。

【化１６】 シアル酸の２−クロロ−テトラアセチル誘導体メチルエ
ステルの代わりにシアル酸の２−クロロ−テトラアセチ
ル誘導体ブチルエステル（２０）２．２１ｇを用いる以
外は実施例２と全く同様な操作で反応、精製を行う事に
より脱アセチル化シアリルリン脂質ブチルエステル（２
１）９８０ｍｇを得た。 ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ／Ｚ）；１１７９（Ｍ−１），２３８
（Ｃ₁₇Ｈ₃₅ＣＯ₂ ^- ）脱アセチル化シアリルリン脂質ブ
チルエステル（２１）４２０ｍｇ（０．３６ｍＭ）をＴ
ＨＦ１０ｍｌ、Ｈ₂Ｏ５ｍｌの混合溶媒に溶解し、氷冷
下で１Ｎ−ＮａＯＨ０．３ｍｌを加え１時間反応した。
反応液をＤｏｗｅｘ−５０（Ｈ⁺ ）にて中和（ｐＨ８）
し、樹脂をＨ₂ Ｏで洗浄し、濾液、洗液を合わせて濃縮
し、カラムクロマトグラフィー（ＯＤＳ／Ｈ₂ Ｏ、Ｍｅ
ＯＨ）で精製する事により最終目的物であるシアリルリ
ン脂質（２２）９０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を得た。
このシアリルリン脂質の収率はシアル酸のテトラアセチ
ル誘導体メチルエステルに対して２．０％であった。

【００１４】比較例 本比較例の反応経路を以下に示す。

【化１７】 まず、シアル酸（２３）３ｇをメタノール３００ｍｌに
溶かし、Ｄｏｗｅｘ−５０（Ｈ⁺ ）３ｇを加え室温で４
時間撹拌反応を行い、反応終了後Ｄｏｗｅｘ−５０（Ｈ
⁺ ）を濾取した。濾液のメタノール溶液を１５ｍｌに濃
縮し、−２０℃でジエチルエーテル６ｍｌを添加し、再
結晶することによりメチル化合物（２４）２．４７ｇを
得た。得られたメチル化合物（２４）に−２０℃で塩化
アセチル２５ｇ、無水酢酸３ｇを加え、乾燥塩化水素ガ
スを飽和させ、室温で２０時間撹拌反応を行った。反応
液の溶媒を留去し、ベンゼン、トルエンを用いて完全に
脱水した後、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ヘキ
サンの等量混合物により再結晶し、アセチル化合物（２
５）３ｇを得た。−２０℃下でアセチル化物（２５）を
モレキュラーシーブ４Ａ ６ｇ、Ａｇ₂ＣＯ₃ ５ｇ、
１，８−オクタンジオールモノアセチル体（２６）３ｇ
を添加したジクロロメタン６０ｍｌに溶解し、室温で３
時間撹拌反応させ、グリコシル化を行った。反応液をセ
ライト濾過後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＣＨ₃ＯＨ＝９８：２）で
精製し、グリコシル化合物（２７）１．９ｇを得た（Ｒ
ｆ＝０．６３ Silica gel/ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＣＨ₃ＯＨ＝１
５：１）。

【００１５】得られたグリコシル化合物（２７）１．９
ｇを氷冷下で、完全に脱水したメタノール３０ｍｌに溶
解した。氷冷下でカリウム３００ｍｇを完全に脱水した
メタノール３０ｍｌに加え、カリウムメトキシドとし先
に調製しておいたグリコシル化合物（２７）のメタノー
ル液に添加した。０℃で３時間撹拌反応を行った後、反
応液中に−２０℃Ｄｏｗｅｘ−５０（Ｈ⁺ ）を加えた。
Ｄｏｗｅｘを濾取し、濾液からメタノールを留去し、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ₃：ＣＨ₃
ＯＨ＝５：１）で精製する事によって脱アセチル化合物
（２８）０．９ｇを得た。（Ｒｆ＝０．２５ Silica g
el／ＣＨＣｌ₃ ：ＣＨ₃ ＯＨ＝５：１）。得られた脱ア
セチル化合物（２８）をジエチルエーテル１２０ｍｌ、
水２４ｍｌの混合溶液中で０．４Ｍ酢酸カルシウム６ｍ
ｌ、ＰＬＤ１００ユニット存在下、ジパルミトイルホス
ファチジルコリン（２９）３ｇと３０℃で６時間反応さ
せ、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（ＣＨＣｌ₃：ＣＨ₃ＯＨ＝９：１）により精製して中間
体（３０）０．３ｇを得た。

【００１６】得られた化合物（３０）３２５ｍｇ（０．
３ｍＭ）をＴＨＦ１０ｍｌ、Ｈ₂Ｏ５ｍｌの混合溶媒に
溶解し、氷冷下で１Ｎ−ＮａＯＨ０．３ｍｌを加え１時
間反応した。反応液をＤｏｗｅｘ−５０（Ｈ⁺ ）にて中
和（ｐＨ８）し、樹脂をＨ₂Ｏで洗浄し、濾液、洗液を
合わせて濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＯＤＳ／
Ｈ₂Ｏ、ＭｅＯＨ）で精製する事により目的のシアリル
リン脂質（３１）９．６ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）を得
た。このシアリルリン脂質の収率はシアル酸のテトラア
セチル誘導体メチルエステルに対して０．４％（シアル
酸に対して０．３２７％）であった。

【００１７】本発明の実施態様ならびに目的生成物を挙
げれば以下の通りである。 １．一般式（１）

【化１８】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物と一般式（２）

【化１９】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物とを、グリコシル化反応により
結合させた後に、アセチル基をはずすことにより得られ
る一般式（３）

【化２０】 （式中のＹ、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 及びｎは前記と同意義であ
る。）で表される化合物から、Ｙで表される保護基をは
ずすことを特徴とする一般式（４）

【化２１】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 及びｎは前記と同意義である。）で
表されるシアリルリン脂質の製造方法。 ２．一般式（２）で表される化合物を、一般式（５）

【化２２】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は前記と同意義であり、Ｘはコリ
ン、エタノールアミン、セリン、イノシトール、グリセ
ロール等の水酸基を有する化合物を示す。）で表される
化合物と一般式（６）

【００１８】

【化２３】 （式中、ｎは前記と同意義である。）で表される化合物
とをエステル交換反応する事によって得ることを特徴と
する前記１記載の製造方法。 ３．エステル交換反応をホスホリパーゼＤ或いはホスホ
リパーゼＤを産生する菌体に接触させる事により行う前
記２記載の製造方法。 ４．一般式（１）

【化２４】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物のＹがメチル基、Ｚがクロロ
基である前記１記載の製造方法。 ５．一般式（１）

【化２５】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物のＹがエチル基、Ｚがクロロ
基である前記１記載の製造方法。 ６．一般式（１）

【化２６】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物のＹがプロピル基、Ｚがクロ
ロ基である前記１記載の製造方法。 ７．一般式（１）

【化２７】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物のＹがブチル基、Ｚがクロロ
基である前記１記載の製造方法。 ８．一般式（１）

【化２８】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物のＹがベンジル基、Ｚがクロ
ロ基である前記１記載の製造方法。

【００１９】９．一般式（１）

【化２９】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物のＹがメチル基、Ｚがブロモ
基である前記１記載の製造方法。 １０．一般式（１）

【化３０】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物のＹがエチル基、Ｚがブロモ
基である前記１記載の製造方法。 １１．一般式（１）

【化３１】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物のＹがプロピル基、Ｚがブロ
モ基である前記１記載の製造方法。 １２．一般式（１）

【化３２】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物のＹがブチル基、Ｚがブロモ
基である前記１記載の製造方法。 １３．一般式（１）

【化３３】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基又はベンジル基
を、Ｚはクロロ基又はブロモ基を、Ａｃはアセチル基を
示す。）で表される化合物のＹがベンジル基、Ｚがブロ
モ基である前記１記載の製造方法。

【００２０】１４．一般式（２）

【化３４】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物のＲ₁ およびＲ₂ は同一又は異
なって−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数８〜２４の直鎖ア
ルキル基）である前記１記載の製造方法。 １５．一般式（２）

【化３５】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物のＲ₁ およびＲ₂ は同一又は異
なって−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１２〜２２の直鎖
アルキル基）である前記１記載の製造方法。 １６．一般式（２）

【化３６】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物のＲ₁ およびＲ₂ が同一の−Ｏ
ＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数８〜２４の直鎖アルキル基）
である前記１記載の製造方法。

【００２１】１７．一般式（２）

【化３７】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物のＲ₁ およびＲ₂ が同一の−Ｏ
ＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１２〜２２の直鎖アルキル
基）である前記１記載の製造方法。 １８．一般式（２）

【化３８】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物のＲ₁ が−ＯＣＯＲ（但し、Ｒ
は炭素数８〜２４の直鎖アルキル基）であり、Ｒ₂ が水
酸基である前記１記載の製造方法。 １９．一般式（２）

【化３９】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物のＲ₁ が−ＯＣＯＲ（但し、Ｒ
は炭素数１２〜２２の直鎖アルキル基）であり、Ｒ₂ が
水酸基である前記１記載の製造方法。 ２０．一般式（２）

【化４０】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物のｎが２〜１８である前記１記
載の製造方法。

【００２２】２１．一般式（２）

【化４１】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物のｎが３〜１６である前記１記
載の製造方法。 ２２．一般式（２）

【化４２】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物のｎが３、４、６、８、１０、
１２である前記１記載の製造方法。 ２３．一般式（２）

【化４３】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一又は異なって水酸基、又
は−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又は分
岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
す。）で表される化合物のＲ₁ とＲ₂ が水酸基である前
記１記載の製造方法。 ２４．一般式（２）で表される化合物を、一般式（５）

【００２３】

【化４４】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は前記と同意義であり、Ｘはコリン
である化合物を示す。）で表される化合物と一般式
（６）

【化４５】 （式中、ｎは前記と同意義である。）で表される化合物
とをエステル交換反応する事によって得ることを特徴と
する前記１記載の製造方法。 ２５．一般式（２）で表される化合物を、一般式（５）

【化４６】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は前記と同意義であり、Ｘはコリ
ン、エタノールアミン、セリン、イノシトール、グリセ
ロール等の水酸基である化合物を示す。）で表される化
合物と一般式（６）

【化４７】 （式中、ｎは前記と同意義である。）で表される化合物
とをエステル交換反応する事によって得ることを特徴と
する前記１記載の製造方法。 ２６．一般式（２）で表される化合物を、一般式（５）

【化４８】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は前記と同意義であり、Ｘはエタノ
ールアミンである化合物を示す。）で表される化合物と
一般式（６）

【化４９】 （式中、ｎは前記と同意義である。）で表される化合物
とをエステル交換反応する事によって得ることを特徴と
する前記１記載の製造方法。

【００２４】２７．一般式（２）で表される化合物を、
一般式（５）

【化５０】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は前記と同意義であり、Ｘはセリン
である化合物を示す。）で表される化合物と一般式
（６）

【化５１】 （式中、ｎは前記と同意義である。）で表される化合物
とをエステル交換反応する事によって得ることを特徴と
する前記１記載の製造方法。 ２８．一般式（２）で表される化合物を、一般式（５）

【化５２】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は前記と同意義であり、Ｘはイノシ
トールである化合物を示す。）で表される化合物と一般
式（６）

【化５３】 （式中、ｎは前記と同意義である。）で表される化合物
とをエステル交換反応する事によって得ることを特徴と
する前記１記載の製造方法。 ２９．一般式（２）で表される化合物を、一般式（５）

【化５４】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は前記と同意義であり、Ｘはグリセ
ロールである化合物を示す。）で表される化合物と一般
式（６）

【化５５】 （式中、ｎは前記と同意義である。）で表される化合物
とをエステル交換反応する事によって得ることを特徴と
する前記１記載の製造方法。

【００２５】３０．一般式（２）で表される化合物を、
一般式（５）

【化５６】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は前記と同意義であり、Ｘは水酸基
である化合物を示す。）で表される化合物と一般式
（６）

【化５７】 （式中、ｎは前記と同意義である。）で表される化合物
とをエステル交換反応する事によって得ることを特徴と
する前記１記載の製造方法。 ３１．エステル交換反応をホスホリパーゼＤに接触させ
る事により行う前記２記載の製造方法。 ３２．エステル交換反応をホスホリパーゼＤを産生する
菌体に接触させる事により行う前記２記載の製造方法。 ３３．エステル交換反応をストレプトマイセス属の菌由
来のホスホリパーゼＤに接触させる事により行う前記２
記載の製造方法。 ３４．エステル交換反応をホスホリパーゼＤを産生する
ストレプトマイセス属の菌体に接触させる事により行う
前記２記載の製造方法。 ３５．エステル交換反応をノカルディオプシス属の菌由
来のホスホリパーゼＤに接触させる事により行う前記２
記載の製造方法。 ３６．エステル交換反応をホスホリパーゼＤを産生する
ノカルディオプシス属の菌体に接触させる事により行う
前記２記載の製造方法。 ３７．エステル交換反応をアクチノマデューラ属の菌由
来のホスホリパーゼＤに接触させる事

【００２６】

【発明の効果】本発明のシアリルリン脂質の製造方法に
よって、一般式（１）で表される化合物と一般式（２）
で表される化合物とをグリコシル化反応によって縮合さ
せてからアセチル基をはずした後にＹで表される保護基
をはずすことにより、目的とする一般式（３）で表され
るシアリルリン脂質を従来知られていた方法の５〜１０
倍の収量で合成することができる。本発明の実施例と比
較例におけるシアリルリン脂質の収率の対比を表１に示
す。

【００２７】

【表１】

【００２８】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 石塚 一 大阪市中央区伏見町４丁目４番10号 藤本 化学製品株式会社内 (72)発明者 森 祐一 大阪市中央区伏見町４丁目４番10号 藤本 化学製品株式会社内 (72)発明者 中島 孝雄 兵庫県尼崎市金楽寺町１丁目２番38号 尼 崎化学合成株式会社内 (72)発明者 安部 直冶 兵庫県尼崎市金楽寺町１丁目２番38号 尼 崎化学合成株式会社内 (72)発明者 レカ・ラジュ・ジュネジャ 三重県四日市市赤堀新町９番５号 太陽化 学株式会社内

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（１） 【化１】 （式中、Ｙは炭素数１〜４のアルキル基またはベンジル
   基を、Ｚはクロロ基またはブロモ基を、Ａｃはアセチル
   基を示す。）で表される化合物と一般式（２） 【化２】 （式中、Ｒ₁ およびＲ₂ は同一または異なって水酸基、
   または−ＯＣＯＲ（但し、Ｒは炭素数１〜２９の直鎖又
   は分岐アルキル基を示す）を、ｎは１〜２０の整数を示
   す。）で表される化合物とを、グリコシル化反応により
   結合させた後に、アセチル基をはずすことにより得られ
   る一般式（３） 【化３】 （式中のＹ、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、及びｎは前記と同意義であ
   る。）で表される化合物から、Ｙで表される保護基をは
   ずすことを特徴とする一般式（４） 【化４】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、及びｎは前記と同意義である。）
   で表されるシアリルリン脂質の製造方法。
2. 【請求項２】 一般式（２）で表される化合物が、一般
   式（５） 【化５】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は前記と同意義であり、Ｘはコリ
   ン、エタノールアミン、セリン、イノシトール、グリセ
   ロール等の水酸基を有する化合物を示す。）で表される
   化合物と一般式（６） 【化６】 （式中、ｎは前記と同意義である。）で表される化合物
   とをエステル交換反応する事によって得ることを特徴と
   する請求項１記載の製造方法。
3. 【請求項３】 エステル交換反応がホスホリパーゼＤま
   たはホスホリパーゼＤを産生する菌体に接触させる事に
   より行う請求項２記載の製造方法。