CN104031097A - 一种含有唾液酸基团的脂质衍生物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，提供了一种可广泛用于微粒制剂修饰的含有唾液酸基团的脂质衍生物，具有式（1）所描述的结构，并且其中的R₁代表-OH，-HNCOCH₃，-NHCOCH₂OH中的一种；R₂-HN片段来自R₂-NH₂，R₂-NH₂是含有伯胺基团的化合物。本发明提供的含有唾液酸基团的脂质衍生物可以用于多种微粒制剂的表面修饰，并赋予所修饰制剂靶向分布的能力。

Description

一种含有唾液酸基团的脂质衍生物及其应用

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种含有唾液酸基团的脂质衍生物，其制备方法以及应用，尤其是用于微粒制剂的制备和修饰。

背景技术

唾液酸（sialic acid, SA）是一类含有 9个碳原子并具有吡喃糖结构的酸性氨基糖，系统命名为 5-氨基-3, 5-二脱氧-D-甘油-D-半乳壬酮糖。根据 5号碳上取代基的不同构成了不同的唾液酸衍生物。主要的三种唾液酸为Neu5Ac、Neu5Gc和KDN，其中Neu5Ac在脊椎动物体内最为常见。它们的结构如下所示。

SA普遍存在于哺乳动物的细胞膜表面，如人红细胞及血管内皮细胞表面均由其高度覆盖。研究表明，红细胞经唾液酸酶处理后其寿命从原来的120天锐减到几个小时（Deninno MP. The Synthesis and Glycosidation of-Acetylneuraminic Acid[J]. Synthesis, 1991,1991(8): 583-593.）。另外，许多病原体利用SA“装扮”自身，以掩蔽其抗原表位，抑制补体旁路途径的激活，降低了免疫原性，从而成功逃脱宿主免疫系统的攻击（Charland N, Kobisch M, Martineau‐Doizé B, et al. Role of capsular sialic acid in virulence and resistance to phagocytosis of Streptococcus suis capsular type 2[J]. FEMS Immunology & Medical Microbiology, 1996,14(4): 195-203. Madico G, Ngampasutadol J, Gulati S, et al. Factor H binding and function in sialylated pathogenic neisseriae is influenced by gonococcal, but not meningococcal, porin[J]. The Journal of Immunology, 2007,178(7): 4489.）。肿瘤的转移也与SA的“免疫伪装”作用有关（Suzuki M, Nakayama J, Suzuki A, et al. Polysialic acid facilitates tumor invasion by glioma cells[J]. Glycobiology, 2005,15(9): 887.）。

自然界的SA衍生物中，SA往往通过2位碳上的羟基与蛋白质或磷脂分子进行连接。目前对SA的构效研究认为，SA结构中2位碳上所连接的羧基对其体内活性的发挥具有关键作用，是其与选择素等受体作用的关键基团（Thomas G. Marron, Thomas J. Woltering, Gabriele Weitz-Schmidt. C-Mannose Derivatives as Potent Mimics of Sialyl Lewis X，Tetrahedron Letters, Vol. 37, No. 50, pp. 9037-9040, 1996），因此见于报道的专利或学术论文均是通过SA的2位碳上的羟基或者是5位碳上的N原子与其他片段进行连接。专利US005243035A中报道了一种SA脂质衍生物，其是通过将SA的2位碳上的羟基进行烷基化取代而获得的。其合成步骤多、难度大。本发明中，我们使用SA的羧基与带有伯氨基片段的脂质化合物进行偶联，不仅反应活性高、副反应少、收率高、产物易于纯化，更为意外是是，所获得的含有唾液酸基团的脂质衍生物可以用于微粒制剂的制备及修饰，并赋予该制剂特殊的体内性质。我们的研究表明本发明中所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物用于脂质体、乳剂等微粒制剂的修饰时，具有极好的肿瘤靶向性和脑靶向性。

发明内容

本发明提供了一种可广泛用于微粒制剂修饰的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，具有式（1）所描述的结构。

并且其中的R₁代表-OH，-HNCOCH₃，-NHCOCH₂OH中的一种；R₂-HN片段来自R₂-NH₂，R₂-NH₂是含有伯胺基团的化合物。

作为优选的一组含有唾液酸基团的脂质衍生物，具有式（1）所描述的结构，其中R₁代表-OH、-HNCOCH₃、-NHCOCH₂OH中的一种；R₂-HN片段来自R₂-NH₂，R₂-NH₂是磷脂酰基乙醇胺、直链或支链烷基伯胺、磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基中的一种，并且所述磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基中聚乙二醇片段的分子量为1000-10000道尔顿。

作为更优选的一组含有唾液酸基团的脂质衍生物，具有式（1）所描述的结构，其中R₁代表-OH、-HNCOCH₃、-NHCOCH₂OH中的一种；R₂-HN片段来自R₂-NH₂，R₂-NH₂是二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺、蛋黄磷脂酰基乙醇胺、硬脂酰油酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰亚油酰磷脂酰乙醇胺、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、棕榈酰亚油酰磷脂酰乙醇胺、二癸酰磷脂酰乙醇胺、二辛酰磷脂酰乙醇胺、二己酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基（DSPE-PEG-NH2）、二棕榈酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基（DPPE-PEG-NH2）、二油酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基（DOPE-PEG-NH2）、二月桂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基（DMPE-PEG-NH2）、二十二胺、二十胺、十八胺、十六胺、十四胺、十二胺或3-甲基-n-戊胺。并且所述磷脂酰乙醇胺聚乙二醇氨基中聚乙二醇片段的分子量为1000-10000道尔顿。

作为特别优选，本发明所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物具有式（1）所描述的结构，其中R₁为-HNCOCH₃；R₂-HN片段来自R₂-NH₂，R₂-NH₂选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、十八胺、十六胺、十四胺、十二胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000氨基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇5000氨基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000氨基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇5000氨基中的一种。

作为特别优选的个别的化合物，本发明所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物具有式（1）所描述的结构，其中R₁为-HNCOCH₃；R₂-HN片段来自R₂-NH₂，R₂-NH₂选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000氨基和十八胺中的一种。

本发明所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物采用如下方法合成：将唾液酸（Nen5Ac，Neu5Gc或者KDN）1位上的羧基用EDC/NHS进行活化，之后该活化的羧基与伯胺基团化合物的伯胺基团进行偶联，得到含有唾液酸基团的脂质衍生物。具体化合物的合成方法参见“具体实施方式”部分。

本发明还提供了所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物的应用，所述含有唾液酸基团的脂质衍生物可以单独或与其他物质联合用于制备乳剂、微乳、脂质体、固体脂质纳米粒、囊泡、胶束或纳米结构载体。该含有唾液酸基团的脂质衍生物在微粒制剂中充当表面活性剂，具体而言，即将此化合物单独作为表面活性剂或是添加到构建乳剂、微乳、脂质体、固体脂质纳米粒、囊泡、胶束或纳米结构载体的膜材料中来制备制剂。

本发明带来的有益结果

本发明提供的含有唾液酸基团的脂质衍生物可以用于多种微粒制剂的表面修饰，并赋予所修饰制剂靶向分布的能力。

附图说明

图1 Neu5Ac-ODA质谱图

图2 Neu5Ac-ODA氢谱图

图3 Neu5Ac-ODA红外图谱

图4 Neu5Ac-DSPE红外图谱

图5 Neu5Ac-PEG-DSPE红外图谱

图6 Neu5Ac -ODA修饰的TN乳剂静脉给药后Wistar大鼠体内药时曲线。其中，●注射处方1制剂组，■注射处方2制剂组，▲注射处方3制剂组。

图7 Neu5Ac-DSPE修饰的匹衫琼脂质体静脉给药后Wistar大鼠体内药时曲线。其中，●注射PXT-CL组，■注射PXT-SA-CL溶液组，▲注射PXT-SL组，▼注射PXT-SA-SL组，◆注射PXT 溶液组。

图8 S180荷瘤小鼠在给予Neu5Ac-DSPE修饰的匹衫琼脂质体后的肿瘤体积增长曲线。其中，●注射生理盐水组，■注射PXT溶液组，▲注射PXT-SL组，▼注射PXT-SA-SL组。

具体实施方式：

实施例中所用各成分的简称如下：

TN 维生素E烟酸酯

PXT 马来酸匹衫琼

Q₁₀ 辅酶Q₁₀

MCT 中链甘油三酸酯

GMS 十八(烷)酸丙三醇酯

CH 胆固醇

S75 大豆磷脂S75

HSPC 氢化大豆磷脂

DMF 二甲基甲酰胺

EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

NHS N-羟基琥珀酰亚胺

ODA 十八胺

HAD 十六胺

TDA 十四胺

LA 十二胺

DA 十胺

PEG 聚乙二醇

DSPE 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺

DPPE 二棕榈酰磷脂酰乙醇胺

mPEG-DSPE 聚乙二醇单甲醚-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺

mPEG-DPPE 聚乙二醇单甲醚-二棕榈酰磷脂酰胆碱乙醇胺

mPEG-DMPE 聚乙二醇单甲醚-二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺

下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。

材料来源：

Neu5Ac，Neu5Gc，KDN纯度＞95，HPLC检测，购买自Sigma-Aldrich Corp美国。戊胺（PA）、十胺（DA）、十二胺（LA）、十四胺（TDA）、十六胺（HDA）、十八胺（ODA）购买自Sigma-Aldrich Corp美国。DSPE、DPPE、DMPE、DOPE、DEPE、POPE、DSPE-PEG₁₀₀₀-NH₂、DSPE-PEG₂₀₀₀-NH₂、DSPE-PEG₅₀₀₀-NH₂、DSPE-PEG₁₀₀₀₀-NH₂、DPPE-PEG₂₀₀₀-NH₂，购买自Avanti及Nanocs Inc。其他试剂为分析纯或色谱纯。

检测手段：

本发明中所制备制剂的粒径及Zeta电位使用PSS NICOMP 380 激光粒度测定仪测定。

实施例1 Neu5Ac-ODA的合成

室温下使用15 mL DMF溶解93 mg Neu5Ac（0.3 mmol），之后加入114 mg EDC·HCl（0.6 mmol）和69 mg NHS（0.6 mmol），室温下磁力搅拌2 h进行活化。活化完成后将反应体系加温至60℃后加入27 mg ODA（0.1 mmol），氮气保护下于该温度磁力搅拌8 h。反应完成后将体系降至室温，用蒸馏水稀释至80 mL后进行透析（透析介质为蒸馏水，透析袋截留分子量 8000 Da），对透析袋内物质进行冻干得到产物Neu5Ac-ODA，使用二氯甲烷对产物进行重结晶，得到纯品。结构如下：

质谱：m/z 595.2，Neu5Ac-ODA+Cl₃₅峰；m/z 597.1，Neu5Ac-ODA+Cl₃₇ 峰； m/z 577.0，Neu5Ac-ODA-H+H₂O峰；未见ODA的峰。 谱图见附图1。

氢谱：SA骨架上的9个非活泼氢和ODA烷基链上的氢得到归属。(CD₃OD，δ ppm) ，3.31为CD₃OD的溶剂峰，0.90（t,3H,H-11），1.20-1.40(s,30H,烷基链)，1.50-1.60(m,2H,H-2)，2.03(s,3H,H-10)，2.27-2.29(m,1H,H-3`)，2.86(d,1H,H-3)，3.20(t,2H,H-1)，3.55(d,1H,H-7)，3.62-3.74(m,2H, H-9`,H-8)，3.76-3.88(m,2H,H-9,H-5) ，3.98-4.12(m,2H,H-6,H-4)。谱图见附图2。

Neu5Ac-ODA的红外谱图中，1725cm^-1、1756cm^-1两个Neu5Ac的羧基峰消失，同时具备2918cm^-1、2850cm^-1的烷基链上的C-H伸缩振动峰（来自ODA）和3415cm^-1的仲胺峰（来自Neu5Ac）。说明该产物中同时具有SA的基团和ODA的基团。谱图见附图3。

由于Neu5Ac、Neu5Gc和KDN具有相似的溶解性质及羧基反应活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的Neu5Gc和KDN代替Neu5Ac，可以合成得到Neu5Gc-ODA，KDN-ODA。

Neu5Gc-ODA质谱：m/z 611.3，Neu5 Gc -ODA+³⁵Cl峰；m/z 613.1，Neu5 Gc -ODA+³⁷Cl 峰；未见ODA的峰。

KDN-ODA质谱：m/z 554.4，KDN -ODA+³⁵Cl峰；m/z 556.1，KDN -ODA+³⁷Cl 峰；未见ODA的峰。

实施例2 Neu5Ac- LA的合成

室温下使用15 mL DMF溶解93 mg Neu5Ac（0.3 mmol），之后加入114 mg EDC·HCl（0.6 mmol）和69 mg NHS（0.6 mmol），室温下磁力搅拌2 h进行活化。活化完成后将反应体系加温至60℃后加入19 mg LA（0.1 mmol），氮气保护下于该温度磁力搅拌8 h。反应完成后将体系降至室温，用蒸馏水稀释至80 mL后进行透析（透析介质为蒸馏水，透析袋截留分子量 8000 Da），对透析袋内物质进行冻干得到产物Neu5Ac-LA。使用热的三氯甲烷洗涤产物可除去其中的少量残余的LA，获得高纯度的产物。

质谱：m/z 511.2，Neu5Ac-LA+³⁵Cl峰；m/z 513.1，Neu5Ac-LA+³⁷Cl 峰；未见LA的峰。

由于碳链长度在8~22的烷基伯胺具有相似的溶解度和相似的伯氨基反应活性。因此在本实施例中，使用相同摩尔量的十胺（DA）、十四胺（TDA）或十六胺（HDA）代替十二胺（LA），使用相同的投料比例和反应条件，可以获得Neu5Ac-DA、Neu5Ac-TDA或Neu5Ac-HDA。

实施例3 Neu5Ac -DSPE的合成

室温下使用4 mL DMF溶解40 mg Neu5Ac，之后加入40 mg EDC·HCl和24mg NHS，室温下磁力搅拌2 h进行活化。使用4 mL 氯仿溶解20 mg DSPE，加入26 μL 三乙胺，升温至40℃溶解。室温下将DSPE的氯仿溶液逐渐加入到Neu5Ac的DMF溶液中，剧烈搅拌2 h得到雾状混悬液。之后在搅拌条件下将此混悬液缓慢加热至70℃，待体系澄清后停止加热。该体系放至室温后无析出，用3倍体积的水稀释后进行透析（透析袋截留分子量 1000 Da），对透析袋内物质进行冻干得到Neu5Ac -DSPE。

质谱：m/z 1038.9，Neu5Ac-DSPE峰；m/z 1038.1，Neu5Ac-DSPE - ¹H峰； m/z 1117.9，Neu5Ac-DSPE + ⁷⁹Br峰；

红外：Neu5Ac-DSPE的红外谱图中，1725cm^-1、1756cm^-1两个Neu5Ac的羧基峰消失。具有2918cm^-1、2850cm^-1的烷基链上的C-H伸缩振动峰（来自DSPE），1739 cm^-1的酯键峰（来自DSPE）和3415cm^-1的仲胺峰（来自Neu5Ac）。说明该产物中同时具有SA的基团和DSPE的基团。谱图见附图4。

在该实施例中，使用相同物质的量的DPPE、DOPE和DMPE代替DSPE，按照相同的投料比和反应操作，得到Neu5Ac-DPPE、Neu5Ac-DOPE和Neu5Ac- DMPE。同样的，使用相同摩尔量的Neu5Gc或KDN代替Neu5Ac，可以获得Neu5Gc-DSPE或KDN-DSPE。

实施例4 Neu5Ac- PEG₂₀₀₀-DSPE 的合成

室温下使用5 mL 蒸馏水溶解31 mg Neu5Ac（0.1 mmol），之后加入50 mg EDC·HCl（0.3 mmol）和35 mg NHS（0.3 mmol），活化30 min后向体系中加入28 mg PEG2000-DSPE（0.01 mmol），氮气保护下于室温下磁力搅拌12 h。反应完成后，使用蒸馏水为透析介质，用截留分子量为1000 Da的透析袋对反应体系进行透析，透析完成后对透析袋内物质进行冻干得到Neu5Ac- PEG2000-DSPE。

红外：Neu5Ac-PEG₂₀₀₀-DSPE的红外谱图中，1725cm^-1、1756cm^-1两个Neu5Ac的羧基峰消失。具有2918cm^-1、2850cm^-1的烷基链上的C-H伸缩振动峰（来自PEG₂₀₀₀-DSPE）；1739 cm^-1的酯键峰（来自PEG₂₀₀₀-DSPE）；3415cm^-1的仲胺峰（来自Neu5Ac）；1114 cm^-1（来自PEG片段）；842 cm^-1（来自PEG片段）说明该产物中同时具有SA的基团和PEG₂₀₀₀-DSPE的基团。谱图见附图5。

实施例5 Neu5Ac -ODA修饰乳剂的制备及脑靶向性研究

处方见下表：

其中处方1为长循环SA靶向乳剂，处方2为SA修饰乳剂，处方3为常规乳剂。

制备工艺：将处方量的MCT、TN、S75、Neu5Ac-ODA、mPEG2000-DSPE放置于10 mL西林瓶中，于65℃搅拌溶解作为油相。将处方量水相（5.0 ml无菌注射用水）65 ℃预热备用。搅拌下将水相快速注入油相，孵育10 min，即得初乳。初乳经探头超声处理后（200 w×2 min,400 w×8 min），依次过0.45μm、0.22 μm微孔滤膜整粒。

使用NICOMP SL380ZL对乳剂的粒径进行测定。

处方1：114.0nm，CV 0.363；

处方2：138.5nm，CV 0.168；

处方3：139.7nm，CV 0.361；

含量测定中处方1~3含量分别为标示含量（4mg/mL）的90%~95%。

体内分布研究：

雄性Wistar大鼠，体重200-250g，随机分成不同组别，每组3只。不同组大鼠分别给予处方1-3的制剂，给药剂量以TN计为20mg/Kg。注射后1min，5min，15min，30min，1h，2h，4h经眼眶静脉丛取血。采血结束后，颈椎脱臼处死取出脑。

血浆样品处理：精密移取血浆样品100 μL于1.5 mL离心管中，加入内标（维生素E醋酸酯）的甲醇溶液100 μL （100μg·mL-1）、甲醇100 μL及正己烷600 μL；涡旋5 min混合提取后于10000 rpm离心10 min；移取正己烷层500 μL，氮气挥干正己烷。挥干后物质以流动相100 μL复溶，涡旋1 min混匀，于10,000 rpm离心10 min，取上清液20 μL进样分析。

组织样品处理：称取0.5g组织样品于7mL离心管中，加1ml 生理盐水，以组织捣碎机将组织捣碎至无结块。取捣碎后的样品0.2mL于4mL离心管中，加入内标液100μl，甲醇300 μL 、正己烷1.2mL 。涡旋5 min混匀，于10000 rpm离心10 min，移取正己烷层1.0mL ，氮气挥干。加入流动相100 μL ，涡旋1 min混匀，于10000 rpm离心10 min，取上清液，进行HPLC分析。

标准曲线制作：精密移取空白血浆100 μL于1.5 mL离心管中，加入100 μL内标溶液以及TN的系列标准溶液（2.0、10.0、20.0、50.0、 100.0、200.0、500.0及1000、0 μg·mL-1）100 μL及正己烷600 μL，其余均按“血浆样品处理方法”项下实验步骤操作，记录TN及内标峰面积，以药物与内标峰面积比值A（A维生素E烟酸酯 / A维生素E醋酸酯）对药物浓度C（μg·mL-1）进行线性回归，得标准曲线方程：A=0.068813C+0.023573 （r=0.9931）由此可知，在2~1000.0 μg·mL-1的浓度范围内峰面积比值A与浓度C线性关系良好。药时曲线见附图6。

各处方脑部TN浓度分别为：处方1：18.7±3.2 μg/g；处方2：29.0±2.2 μg/g；处方3：0.8±0.3μg/g。可见Neu5Ac-ODA修饰载体可以明显增加其中所装载药物的脑分布。

实施例6 Neu5Ac-DSPE修饰脂质体的制备

本实施例所用脂质体处方见下表

制备工艺如下：65 ℃水浴中，用10%乙醇（v/v）溶解处方量膜材，挥去部分乙醇后，以中速注入预热至相同温度的枸橼酸-枸橼酸钠溶液（浓度为200 mM，pH为4.0），孵育20 min，制得脂质体初品，经200 W超声初步混合处理2 min后，400 W超声分散4 min（工作1 s，间歇1 s），依次通过0.8、0.45μm的微孔滤膜，即得空白脂质体。 取空白脂质体混悬液若干，加入适量Na₃PO₄ 溶液（浓度为500 mM）及灭菌注射用水，混合均匀，调节外水相pH至7.0，即得pH梯度脂质体。以药脂比1：10（w/w）将梯度脂质体与马来酸匹杉琼溶液（浓度为4.0 mg/mL）混合，60℃下水浴搅拌孵育10 min后取出置于冰水浴中终止载药即得马来酸匹杉琼脂质体。测得该脂质体制剂包封率为99.8%，粒径为110 nm。

药动学实验：将15只雄性Wistar大鼠随机分为5组，分别注射PXT-CL、PXT-SA-CL、PXT-SL和PXT-SA-SL，剂量均为10 mg PXT/kg。给药后在不同时间点从眼眶静脉取血，使用HPLC对血浆药物浓度进行检测。取血浆样品100 μL，加入10 μL浓度为100 μg·mL-1的盐酸米托蒽醌溶液作为内标，再加入100 μL蛋白沉淀剂[乙腈-甲醇(含0.5 mol·L1 HCl) = 10∶90, v/v]，涡旋5 min混匀，放置5 min后，11000 rpm离心12 min，取上清液进行HPLC分析。色谱柱：Diamonsil C18柱（4.6 × 250 mm, 5 μm，迪马公司）；流动相：乙腈-庚烷磺酸钠溶液（庚烷磺酸钠 2.01 g，冰乙酸 4.5 mL，重蒸水500 mL）体积比为34:66；检测波长：590 nm；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：20 μL。

Wistar大鼠给予不同制剂后药时曲线见附图7，可见由PEG修饰的SA靶向脂质体具有和长循环脂质体（仅由PEG修饰）相似的血液循环时间。

抗肿瘤实验：

将24只接种S180肿瘤的小鼠随机分为4组，每组6只。第0天接种，接种后于第3、6、9天以10 mg·kg-1的剂量分别尾静脉注射生理盐水(NS)、马来酸匹杉琼溶液（PXT solution）、PXT-SL 和PXT-SA-SL，给药后动物正常饲养，隔日记录小鼠体重并观察小鼠生长状态，并于第10天处死小鼠，完整剥离皮下肿瘤，按以下公式计算抑瘤率。

重量抑瘤率% = (WN-WS) / WN×100 %。其中，WN：对照组平均瘤重；WS：给药组瘤重。

抑瘤率见下表：

不同PXT制剂的抑瘤效果 (n = 6).

^a p Value vs. NS组

^b p Value vs. PXT溶液治疗组

^c p Value vs. PXT-S治疗组

将 24 只接种 S180 肿瘤的小鼠随机分为 5 组，即对照组(NS)，PXT溶液组（PXT solution），长循环脂质体组（PXT-SL），以及具有SA靶向基团的长循环脂质体组（PXT-SA-SL），分别于接种后的3,6,9天尾静脉给药，剂量均为10 mg PXT/kg。隔日用游标卡尺测量肿瘤长径（a）和短径（b），按公式 V=（a×b ²）×1/2 计算肿瘤体积，肿瘤生长曲线见附图8。由肿瘤生长情况可知，SA修饰的脂质体具有最优的抗肿瘤效果。

实施例7 Neu5Ac-PEG2000-DSPE胶束的制备

胶束的处方

Q10 6mg

S75 60mg

SA-PEG2000-DSPE 30mg

5%葡萄糖注射液加至 5 mL

制备工艺：将处方量的Q₁₀、S75和SA-PEG₂₀₀₀-DSPE（由实施例所合成）用适量乙醇溶解，将乙醇挥干后，在60℃水浴超声情况下加入处方量5%葡萄糖注射液即得。使用粒径测定仪测得所得胶束平均粒径约为25 nm±4 nm。

实施例8 Neu5Ac-ODA固体脂质纳米粒的制备

TN 10 mg

GMS 50 mg

S75 18 mg

Neu5Ac-ODA 7 mg

5%葡萄糖注射液加至 5 mL

采用熔融-乳化法制备固体脂质纳米粒：称取处方量的 TN，S75，GMS，以及Neu5Ac-ODA 于适量无水乙醇中 65 水浴条件下溶解作为油相，挥除乙醇后，搅拌条件下注入加热至相同温度的水相（5%葡萄糖注射液），继续于 65 水浴中搅拌孵育 10 min 后即得初乳。初乳进一步经 200 W 超声处理 2 min 后，400 W 超声分散 3 min（工作 3 s，间歇 3 s），0.22 μm 的微孔滤膜过滤后，冷却至室温即得载药固体脂质纳米粒。

Claims (8)

1.一种含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，具有式（I）的结构：

(I)

并且结构中R₁代表-OH，-HNCOCH₃，-NHCOCH₂OH中的一种；R₂-HN片段来自R₂-NH₂，R₂-NH₂是含有伯胺基团的化合物。

2.如权利要求1所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述R₂-NH₂是磷脂酰基乙醇胺、直链或支链烷基伯胺、磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基中的一种。

3.如权利要求2所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述磷脂酰乙醇胺聚乙二醇氨基中聚乙二醇片段的分子量为1000-10000道尔顿。

4.如权利要求2所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述R₂-NH₂是二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺、蛋黄磷脂酰基乙醇胺、硬脂酰油酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰亚油酰磷脂酰乙醇胺、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、棕榈酰亚油酰磷脂酰乙醇胺、二癸酰磷脂酰乙醇胺、二辛酰磷脂酰乙醇胺、二己酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基、二棕榈酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基、二油酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基、二月桂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基、二十二胺、二十胺、十八胺、十六胺、十四胺、十二胺或3-甲基-n-戊胺。

5.如权利要求3所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述R₁为-HNCOCH₃。

6.如权利要求5所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述R₂-NH₂选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、十八胺、十六胺、十四胺、十二胺、十胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000氨基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇5000氨基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000氨基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇5000氨基中的一种。

7.如权利要求6所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述R₂-NH₂选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000氨基、十八胺中的一种。

8.权利要求1-7中任何一项所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物单独或与其他物质联合在制备和修饰微粒制剂中的应用。