CN106188169B - 一种含有唾液酸基团的脂质衍生物的合成及其在药物制剂中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种可广泛用于微粒制剂修饰的含有唾液酸基团的脂质衍生物，具有式（1）所描述的结构:（1）并且其中的R1代表‑OH，‑HNCOCH3，‑NHCOCH2OH中的一种；HN‑R2‑S片段来自SH‑R2‑NH2，SH‑R2‑NH2是含有伯胺基团和巯基基团的化合物；R3片段来自含有α，β‑不饱和共轭羰基的化合物；R4片段来自R4‑H，R4‑H是含有羟基或伯胺基团的化合物。本发明提供的含有唾液酸基团的脂质衍生物可以用于多种微粒制剂的表面修饰，并赋予所修饰制剂靶向分布的能力。

Description

一种含有唾液酸基团的脂质衍生物的合成及其在药物制剂中 的应用
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种含有唾液酸基团的脂质衍生物，其制备方法以及应用，尤其 是用于微粒制剂的制备和修饰。
背景技术
唾液酸(Sialic acid，SA)是一类神经氨酸的衍生物其系统命名为5-氨基-3,5-二脱氧-D-甘油-D-半乳壬 酮糖。最主要的3种SA衍生物为N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)、N-乙酰羟神经氨酸(Neu5Gc)和3-脱氧-D- 甘油-D-半乳壬酮糖(KDN)，其余的SA衍生物均由这3种化合物衍生而来，其中Neu5Ac最为常见，唾 液酸的结构式如下：
SA在自然界分布很广，存在于许多生物体内。随着生物进化程度的增加，SA在生物体内的含量及其 衍生物类型亦增加，哺乳动物的脑脊液和黏液中SA含量最多(VIMR E,STEENBERGEN S,CIESLEWICZ M.Biosynthesis of the polysialic acid capsuleinEscherichia coli K1[J].Journal of Industrial Microbiology& Biotechnology,1995,15(4):352-360.)。但对于进化程度较低的生物，如原生动物、星虫、环节动物、节肢动物等，其体内均极少或没有SA存在。SA主要存在于寡糖、糖蛋白和糖脂的末端，其所处位置决定了它 在细胞之间或细胞与胞外分子间的相互识别中扮演着关键角色(WIEDERSCHAIN G Y.Essentials of glycobi ology[J].Biochemistry(Moscow),2009,74(9):1056-1056.BONDIOLI L,RUOZI B,BELLETTI D,et al.Si alic acid as a potentialapproach for the protection and targeting of nanocarriers[J].Expert Opinionon Drug Delivery,2011,8(7):921-937.)。有意义的是，SA分子既能扮演“避免识别”的角色，也能扮演“介导识别” 的角色。
一方面，SA具有“免疫伪装”的作用。SA普遍存在于哺乳动物的细胞膜表面，如人红细胞及血管内皮 细胞表面均高度唾液酸化。研究表明，红细胞经唾液酸酶处理后，其寿命从原来的120天锐减到几个小时 (Deninno MP.The Synthesis and Glycosidation of-Acetylneuraminic Acid[J].Synthesis,1991,1991(8):583-59 3.)。另外，许多病原体利用SA“装扮”自身，以掩蔽其抗原表位，从而成功逃脱宿主免疫系统的攻击(Ch arland N,Kobisch M,Martineau‐DoizéB,et al.Role of capsular sialic acid in virulenceand resistance to p hagocytosis of Streptococcus suis capsular type 2[J].FEMSImmunology&Medical Microbiology,1996,14(4): 195-203.Madico G,Ngampasutadol J,Gulati S,et al.Factor H binding and function in sialylated pathogenicneisseriae is influenced by gonococcal,but not meningococcal,porin[J].TheJournal of Immunology,2007,17 8(7):4489.)。肿瘤的转移也与SA的“免疫伪装”作用有关(SUZUKI M,NAKAYAMA J,SUZUKI A,et al.P olysialic acid facilitates tumorinvasion by glioma cells[J].Glycobiology,2005,15(9):887-894.)。
而在更多的时候，SA则介导了体内众多的相互识别作用。目前，脊椎动物体内明确的结合SA的凝集 素主要有属于c型凝集素的选择素(Selectin)和属于I型凝集素的唾液酸结合免疫球蛋白超家族Siglec。
Selectin在炎症过程中的白细胞对血管内皮的粘附，淋巴细胞和骨髓干细胞的归巢，自身免疫疾病的 发生和肿瘤的进展中都发挥着重要作用(EHRHARDT C,KNEUER C,BAKOWSKY U.Selectins—an emergi ng target for drug delivery[J].Advanced drugdelivery reviews,2004,56(4):527-549.JUBELI E,MOINE L, VERGNAUD-GAUDUCHON J,etal.E-selectin as a target for drug delivery and molecular imaging[J].Jour nalof Controlled Release,2012,158(2):194-206.KNEUER C,EHRHARDT C,RADOMSKI M W,etal.S electins–potential pharmacological targets？[J].Drug discovery today,2006,11(21):1034-1040.)。Selectin家族 包括E-、P-和L-selectin三个成员。其中E-selectin主要表达在激活的内皮细胞表面，当内皮细胞受到IL- 1β、TNF-α、LPS等刺激后，E-selectin的表达大大增加，这种增加是在转录水平上诱导的。P-selectin贮存 在内皮细胞的Weibel-Palade小体和血小板的α颗粒中，当细胞受组织胺、凝血酶、过氧化物、蛋白激酶c、 补体C5b9、二磷酸腺苷、IL-1β、TNF-α、LPS等刺激活化后分泌到细胞表面。L-selectin表达于正常白细 胞表面，主要为非活性状态的淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞(位嘉,范宇,付丽.选择素 及其配体与肿瘤转移关系的研究进展[J].中华病理学杂志,2007,36(8):560-562.)。此外，Selectin在肿瘤细 胞和肿瘤血管内皮细胞表面也高表达，并通过对肿瘤细胞和血管内皮细胞间相互作用的调节介导肿瘤转移 (SCHAUERR.Sialic acids as regulators of molecular and cellular interactions[J].Current opinion in structural biology,2009,19(5):507-514.)。
Siglec是主要表达于造血系统和免疫系统中的一个聚糖结合蛋白家族，其名称的英文含义是具有结合 SA特性的凝集素(I.Vorobiev,V.Matskevich,S.Kovnir,N.Orlova,V.Knorre,S.Jain,D.Genkin,A.Gabi bov,A.Miroshnikov,Chemical polysialylation:design of conjugated human oxyntomodulin with a prolonged a norexic effect invivo,Biochimie,(2012).)。目前发现的Siglec不少于16种，并主要表达在单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞的表面。其中的Siglec-l(也称Sialoadhesin，Sn)是最早发现的家族成员，对其研究也 最为透彻，已经证明其在肿瘤相关巨噬细胞(Tumor assocatedmacrophages，TAM)表面高表达(N.Des ai,V.Trieu,R.Yao,E.Labao,T.De,P.Soon-Shiong,601Increased transport of nanoparticle albumin-bound paclitaxel(ABI-007)byendothelial gp60-mediated caveolar transcytosis:a pathway inhibited by Taxol,Europea n Journal of Cancer Supplements,2(2004)182.)。而Siglec-7在血液中的单核细胞表面高表达，研究表明肾 肿瘤细胞进入血液后可以通过与Siglec-7的相互识别而粘附于单核细胞表面，并最终沉积在肺部而实现转 移(A.Ito,K.Handa,D.A.Withers,M.Satoh,S.-i.Hakomori,Binding specificity of siglec7to disialoganglio sidesof renal cell carcinoma:possible role of disialogangliosides in tumorprogression,FEBS letters,498(200 1)116-120.)。因此血液中的SA修饰制剂可能通过干扰这种识别而阻止肿瘤的转移(S.Hakomori,K.Han da,Glycosphingolipid-dependentcross-talk between glycosynapses interfacing tumor cells with their hostcells: essential basis to define tumor malignancy,FEBS letters,531(2002)88-92.)。针对SA在药物传递系统中的 靶向应用已有相关陆续报道，2007年，Jayant等将PEG、阿霉素(Doxorubicin，DOX)和SA进行偶联以 构建前药SA-PEG-DOX，其中，SA通过9位羟基与PEG末端所偶联的柠檬酸的羧基进行连接。荧光显微 镜的观测发现，相比于DOX和PEG-DOX，SA-PEG-DOX与A2870细胞共培养时具有更快的摄取速度和 更强的细胞毒性(Jayant S,Khandare JJ,Wang Y,et al.Targeted sialic acid-doxorubicin prodrugs forintracell ular delivery and cancer treatment[J].Pharmaceutical Research,2007,24(11):2120-2130.)。2010年，Bondioli 等将2位碳原子巯基衍生化的SA偶联于乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒上，增强了纳米粒被单核细胞吞噬的 能力(Bondioli L,Costantino L,Ballestrazzi A,et al.PLGA nanoparticles surface decorated with the sialic acid,N-acetylneuraminic acid[J].Biomaterials,2010,31(12):3395-3403.)。2013年，Gajbhiye等构建了一种TDD S用于靶向递送齐多夫定至艾滋病病毒感染者的巨噬细胞。他们将SA的羧基与树枝状大分子的氨基通过 酰胺键偶联，体内外实验均表明SA的引入能够显著增加药物在巨噬细胞/淋巴结的分布量(Gajbhiye V,G anesh N,Barve J,etal.Synthesis,characterization and targeting potential of zidovudine loadedsialic acid con jugated-mannosylated poly(propyleneimine)dendrimers[J].European Journal Of Pharmaceutical Sciences,2013, 48(4):668-679.)。20年来，药剂学工作者的不断探索和发现表明，SA衍生物在药物递送系统中极具应用 前景。
专利US005243035A中报道了一种SA脂质衍生物，其是通过将SA的2位碳上的羟基进行烷基化取 代而获得的。其合成步骤多、难度大。本课题组前期研究中，将SA的1位羧基和十八胺的氨基酰胺化， 将其修饰于包载抗肿瘤药物匹杉琼(pixantrone，Pix)的脂质体表面，并用其进行药效学研究。实验结果 表明，伴随这肿瘤组织中TAM数量减少，SA修饰的普通脂质体出现了肿瘤脱落及伤口愈合的现象(Z.S he,T.Zhang,X.Wang,X.Li,Y.Song,X.Cheng,Z.Huang,Y.Deng,The anticancer efficacy of pixantrone- loadedliposomes decorated with sialic acid–octadecylamine conjugate,Biomaterials,35(2014)5216-5225.)。本 发明中，我们将带羟基或伯胺基团的脂质片段与含有α，β-不饱和共轭羰基的化合物偶联，然后利用α，β- 不饱和共轭羰基与带巯基的化合物发生点击反应而偶联，最终将SA的羧基与此合成脂质片段的伯胺发生 酰胺化反应而偶联。SA羧基直接与含有羟基或伯胺基团的脂质片段连接时，接枝率较低，本发明分三步 反应，第一步采用活性较高的酰氯等与脂质的羟基反应，反应效率要远高于羧酸直接与羟基或伯胺基团的 反应效率；第二步采用巯基与α，β-不饱和共轭羰基的化合物偶联，此反应属于点击反应，具有产率高、反 应条件简单、反应速度快的优点；第三步将SA羧基与合成的脂质末端的伯胺偶联，此为酰胺化反应，在 反应速率和产率上都要优于酯化反应。此外，在SA和脂质片段中间加入“Spacer”(Vodovozova,E.,et al., Antitumour activity of cytotoxic liposomesequipped with selectin ligand SiaLe X,in a mouse mammary aden ocarcinomamodel.European Journal of Cancer,2000.36(7):p.942-949.)，在修饰微粒制剂时，SA伸展于微 粒表面更远的距离，更易于被受体识别(Allen,T.M.,Liposomal drugdelivery.Current Opinion in Colloid &Interface Science,1996.1(5):645-651.)。相比于前期合成的SA-ODA，本次专利中的SA-AE-AC-CH和S A-AE-AC-ODA毒性要低于SA-ODA，更为意外的是，所获得的含有唾液酸基团的脂质衍生物用于微粒制 剂的制备及修饰时，赋予该制剂特殊的体内性质。我们的研究表明本发明中所述的含有唾液酸基团的脂质 衍生物用于脂质体、乳剂等微粒制剂的修饰时，具有极好的肿瘤靶向性。
发明内容
本发明提供了一种可广泛用于微粒制剂修饰的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，具有式(1) 所描述的结构。
并且其中的R1代表-OH，-HNCOCH3，-NHCOCH2OH中的一种；HN-R2-S片段来自SH-R2-NH2，SH- R2-NH2是含有伯胺基团和巯基基团的化合物；R3片段来自含有α，β-不饱和共轭羰基的化合物；R4片段来 自R4-H，R4-H是含有羟基或伯胺基团的化合物。
作为优选的一组含有唾液酸基团的脂质衍生物，具有式(1)所描述的结构，其中R1代表-OH、 -HNCOCH3、-NHCOCH2OH中的一种；SH-R2-NH2是含有伯胺和巯基的直链或支链烷烃、巯基聚乙二醇氨 基中的一种，并且所述巯基聚乙二醇氨基中聚乙二醇片段的分子量为100-10000道尔顿；R3片段是含有α， β-不饱和共轭羰基的化合物；R4片段来自R4-H，R4-H选自磷脂酰甘油、直链或支链烷基醇、磷脂酰基乙 醇胺聚乙二醇羟基、磷脂酰基乙醇胺、直链或支链烷基伯胺、磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基中的一种，并 且所述磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基和磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基中聚乙二醇片段的分子量为 1000-10000道尔顿。
作为更优选的一组含有唾液酸基团的脂质衍生物，具有式(1)所描述的结构，其中R1代表-OH、-H NCOCH3、-NHCOCH2OH中的一种；SH-R2-NH片段来自SH-R2-NH2，SH-R2-NH2选自2-巯基乙胺、3-巯 基-1-丙胺、2-巯基-1-丙胺、4-巯基-1-丁胺、3-巯基-1-丁胺、2-巯基-1-丁胺、1-巯基-2-丁胺、1-巯基-3-丁胺、 5-巯基-1-戊胺、4-巯基-1-戊胺、3-巯基-1-戊胺、2-巯基-1-戊胺、5-巯基-2-戊胺、1-巯基-3-戊胺、1-巯基-2- 戊胺、6-巯基-1-己胺、5-巯基-1-己胺、4-巯基-1-己胺、3-巯基-1-己胺、2-巯基-1-己胺、1-巯基-5-己胺、1- 巯基-4-己胺、1-巯基-3-己胺、1-巯基-2-己胺、巯基聚乙二醇氨基中的一种，且所述巯基聚乙二醇氨基中聚 乙二醇片段的分子量为100-10000道尔顿；R3片段选自丙烯酰氯、2-甲基丙烯酰氯、2-丁烯酰氯、丙烯酸 酐、2-甲基丙烯酸酐、丁烯酸酐、2-甲基丁烯酸酐、丙烯酸、2-甲基丙烯酸、2-丁烯酸、2-甲基-2-丁烯酸、 2-戊烯酸、2-甲基-2-戊烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、2-甲基丙烯酸甲酯和2-甲基丙烯酸乙酯、2-丁烯 酸甲酯、2-丁烯酸乙酯、2-甲基2-丁烯酸甲酯、2-甲基2-丁烯酸乙酯、2-戊烯酸甲酯、2-戊烯酸乙酯。R4- H选自二硬脂酰基磷脂酰甘油、二棕榈酰基磷脂酰甘油、二油酰基磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二 肉豆蔻酰磷脂酰甘油、大豆磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰基甘油、硬脂酰油酰磷脂酰甘油、硬脂酰亚油酰磷脂酰甘油、棕榈酰油酰磷脂酰甘油、棕榈酰亚油酰磷脂酰甘油、二癸酰磷脂酰甘油、二辛酰磷脂酰甘油、二 己酰磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二棕榈酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、 二油酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二月桂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二十四醇、二十二醇、 二十醇、十八醇、十六醇、十四醇、十二醇、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇 胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺、蛋 黄磷脂酰基乙醇胺、硬脂酰油酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰亚油酰磷脂酰乙醇胺、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、 棕榈酰亚油酰磷脂酰乙醇胺、二癸酰磷脂酰乙醇胺、二辛酰磷脂酰乙醇胺、二己酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂 酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基(DSPE-PEG-NH2)、二棕榈酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基(DPPE- PEG-NH2)、二油酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基(DOPE-PEG-NH2)、二月桂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙 二醇氨基(DMPE-PEG-NH2)、二十二胺、二十胺、十八胺、十六胺、十四胺、十二胺或3-甲基-n-戊胺中 的一种，并且所述磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基和磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基中聚乙二醇片段的分子量 为1000-10000道尔顿。
作为特别优选，本发明所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物具有式(1)所描述的结构，其中R1为 -HNCOCH3；SH-R2-NH片段来自SH-R2-NH2，SH-R2-NH2选自2-巯基乙胺、3-巯基-1-丙胺、4-巯基-1-丁 胺、5-巯基-1-戊胺、6-巯基-1-己胺、巯基聚乙二醇氨基，且所述巯基聚乙二醇氨基中聚乙二醇片段的分子 量为200-800道尔顿；R3片段来自丙烯酰氯、2-甲基丙烯酰氯、2-丁烯酰氯、丙烯酸酐、丁烯酸酐；R4片 段来自R4-H，R4-H选自十八醇、十六醇、十四醇、十二醇、二硬脂酰基磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘 油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000羟基、二硬脂 酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇5000羟基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇10000羟基、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、十八胺、十六胺、十四胺、十二胺、二硬脂酰基磷脂酰乙 醇胺聚乙二醇2000氨基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇5000氨基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二 醇2000氨基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇5000氨基中的一种。
作为特别优选的个别的化合物，本发明所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物具有式(1)所描述的结 构，其中R1为-HNCOCH3；SH-R2-HN片段来自SH-R2-NH2，R2-NH2选自巯基乙胺、3-巯基-1-丙胺；R3片段来自丙烯酰氯、2-甲基丙烯酰氯和2-丁烯酰氯。R4片段来自R4-H，R4-H选自胆固醇、十八醇、二硬 脂酰基磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000羟基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰 基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000氨基和十八胺中的一种。
本发明所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物采用如下方法合成，方法一：第一步，将唾液酸(Nen5A c，Neu5Gc或者KDN)1位上的羧基用4-ppy进行活化，之后该活化的羧基与两端带有伯胺基团和巯基基 团化合物的伯胺基团进行偶联，得到唾液酸带有巯基基团的衍生物；第二步，将含有羟基或伯胺基团的化 合物与α，β-不饱和共轭羰基化合物在TEA催化下，α，β-不饱和共轭羰基的羰基与含有羟基或伯胺基团的 化合物的羟基或伯胺偶联，得到含有α，β-不饱和共轭羰基的衍生物；第三步，将此α，β-不饱和共轭羰基 的衍生物与唾液酸带有巯基基团的衍生物在碱性条件下反应，得到含有唾液酸基团的脂质衍生物。方法二：第一步，将含有羟基或伯胺基团的化合物与α，β-不饱和共轭羰基化合物在TEA催化下，α，β-不饱和共轭 羰基的羰基与含有羟基或伯胺基团化合物的羟基或伯胺偶联，得到含有α，β-不饱和共轭羰基的衍生物；第 二步，将两端分别带有巯基和伯胺的化合物与此α，β-不饱和共轭羰基的衍生物在质子性溶剂中反应，巯基 会与α，β-不饱和共轭羰基的衍生物上的不饱和键偶联，生成带伯胺基团的脂质衍生物；第三步，将唾液酸 (Nen5Ac，SA)1位上的羧基用EDC/NHS进行活化，之后该活化的羧基与带伯胺基团的脂质衍生物进行 偶联，得到含有唾液酸基团的脂质衍生物。
具体化合物的合成方法参见“具体实施方式”部分。
本发明还提供了所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物的应用，所述含有唾液酸基团的脂质衍生物可以 单独或与其他物质联合用于制备乳剂、微乳、脂质体、固体脂质纳米粒、囊泡、胶束或纳米结构载体。该 含有唾液酸基团的脂质衍生物在微粒制剂中充当表面活性剂，具体而言，即将此化合物单独作为表面活性 剂或是添加到构建乳剂、微乳、脂质体、固体脂质纳米粒、囊泡、胶束或纳米结构载体的膜材料中来制备 制剂。
本发明带来的有益结果
本发明提供的含有唾液酸基团的脂质衍生物可以用于多种微粒制剂的表面修饰，并赋予所修饰制剂靶 向分布的能力。
附图说明
图1Neu5Ac-AE质谱图
图2Neu5Ac-AE红外图
图3AC-CH质谱图
图4AC-CH红外图谱
图5AC-CH氢谱图
图6AC-ODA质谱图
图7AC-ODA红外图
图8AC-ODA氢谱图
图9AE-AC-CH质谱图
图10AE-AC-CH红外图谱
图11AP-AC-CH质谱图
图12AE-AC-ODA质谱图
图13AE-AC-ODA红外图
图14AE-AC-ODA氢谱图
图15Neu5Ac-AE-AC-CH质谱图
图16Neu5Ac-AE-AC-CH氢谱图
图17Neu5Ac-AE-AC-CH红外图谱
图18Neu5Ac-AP-AC-CH质谱图
图19Neu5Ac-AE-AC-ODA质谱图
图20Neu5Ac-AE-AC-ODA红外图
图21Neu5Ac-AE-AC-ODA氢谱图
图22DiR脂质体静脉给药后Wistar大鼠体内药时曲线图。其中，●注射DiR-CL制剂组，■注射DiR-PL 制剂组，▲注射DiR-SAL制剂组
图23不同表阿霉素制剂抗S180肿瘤实验的肿瘤生长曲线图
图24不同伊立替康制剂抗S180肿瘤实验的肿瘤生长曲线图
具体实施方式：
实施例中所用各成分的简称如下：
4-PPY 4-吡咯烷基吡啶
TEA 三乙胺
AE 2-巯基乙胺
AP 3-巯基-1-丙胺
MB 4-巯基-1-丁胺
AT 5-巯基-1-戊胺
AH 6-巯基-1-己胺
TN 维生素E烟酸酯
MCT 中链甘油三酸酯
GMS 十八(烷)酸丙三醇酯
CH 胆固醇
SA 十八醇
CA 十六醇
MA 十四醇
LAA 十二醇
E80 蛋黄卵磷脂E80
AC 丙烯酰氯
BC 丁烯酰氯
MAC 2-甲基丙烯酰氯DCM 二氯甲烷
ODA 十八胺
HAD 十六胺
TDA 十四胺
LA 十二胺
DA 十胺
EPI 表阿霉素
HSPC 氢化大豆磷脂
DMF N,N-二甲基甲酰胺
EDC 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
NHS N-羟基琥珀酰亚胺
EPG 蛋黄磷脂酰甘油
DTX 多西他塞
EPI 表阿霉素
DMP 地塞米松棕榈酸酯
Tween-80 吐温-80
S-80 司盘-80
Q10 辅酶Q10
PEG 聚乙二醇
CF 钙黄绿素
mPEG2000-DSPE 甲氧基聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
Neu5Ac-PEG2000-DSPE 唾液酸-聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
TN 维生素E烟酸酯
HO-PEG-DSPE 聚乙二醇羟基-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
DSPG 二硬脂酰磷脂酰甘油
DPPG 二棕榈酰磷脂酰甘油
DMPG 二肉豆蔻酰磷脂酰甘油
DOPG 二油酰磷脂酰甘油
DSPE 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
DPPE 二棕榈酰磷脂酰乙醇胺
mPEG-DSPE 聚乙二醇单甲醚-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
mPEG-DPPE 聚乙二醇单甲醚-二棕榈酰磷脂酰胆碱乙醇胺
mPEG-DMPE 聚乙二醇单甲醚-二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例， 对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
材料来源：
Neu5Ac、Neu5Gc、KDN纯度＞95，HPLC检测，购买自Sigma-Aldrich Corp美国。十二醇、十四醇、 十六醇、十八醇、戊胺(PA)、十胺(DA)、十二胺(LA)、十四胺(TDA)、十六胺(HDA)、十八胺(ODA) 购买自Sigma-Aldrich Corp美国。2-巯基乙胺、丙烯酰氯购买自北京百灵威科技有限公司，3-巯基-1-丙胺、 4-巯基-1-丁胺、5-巯基-1-戊胺、6-巯基-1-己胺购买自南京爱里凯德化工有限公司，胆固醇购买自南京新百 药业有限公司。DSPG、DPPG、DMPG、DOPG、DSPE-PEG1000-OH、DSPE-PEG2000-OH、DSPE-PEG5000-OH、 DSPE-PEG10000-OH、DSPE、DPPE、DMPE、DOPE、DEPE、POPE、DSPE-PEG1000-NH2、DSPE-PEG2000-NH2、 DSPE-PEG5000-NH2、DSPE-PEG10000-NH2、DPPE-PEG2000-NH2，购买自Avanti及Nanocs Inc。其他试剂为 分析纯或色谱纯。
检测手段：
本发明中所制备制剂的粒径及Zeta电位使用PSS NICOMP 380激光粒度测定仪测定，核磁检测使用 ARX-300核磁共振仪(德国)，红外检测采用IFS-55傅立叶变换红外光谱仪(瑞士)， 质谱检测使用AB Sciex 4000QTRAP离子阱质谱(美国AB SCIEX公司)。
实施例1 Neu5Ac-AE的合成
称取Neu5Ac(1.55g，5mmol)，置于100mL茄形瓶中，加入40mL DMF，加热溶解，加入4-PPY (0.74g，5mmol)，再加入1mLTEA，60℃水浴搅拌反应6h。将反应液转移至10mLEP管中，2000rpm 离心5min，倾去上层清液，用无水乙醚洗涤3次，N2吹干后，真空保干得到白色粉末状固体，即 Neu5Ac-4PPY。称取Neu5Ac-4PPY活化酯(439mg，1mmol)溶于15mL DMF中，加热至60℃，抽真空， 充N2。另称取AE(232mg，3mmol)加入Neu5Ac-4-PPY活化酯体系中，抽真空，充N2，60℃水浴搅拌 反应，反应1h后停止，先用0.45μm的有机膜将反应液体系中的微小不溶物质过滤掉，得到澄清的反应 液，以反应体系/无水乙醚(1/5，v/v)的比例沉淀反应体系，有大量白色固体析出，2000rpm离心3min， 白色沉淀物质用无水乙醚洗3次，N2吹干后真空保干，得到白色固体即Neu5Ac-AE。
结构如下式：
质谱：m/z 369.1，Neu5Ac-AE+1H峰，未见Neu5Ac和AE的峰。谱图见附图1。
红外：Neu5Ac-AE的红外谱图中，伯胺的伸缩振动双峰消失，出现宽而广的羟基峰，1725cm-1处的 羰基峰消失，1625cm-1出现酰胺键的羰基峰。谱图见附图2。
由于Neu5Ac、Neu5Gc和KDN具有相似的溶解性质及羧基反应活性，因此我们使用一致的反应条件， 使用相同摩尔比例的Neu5Gc和KDN代替Neu5Ac，可以合成得到Neu5Gc-AE，KDN-AE。
Neu5Gc-AE质谱：m/z 385.1，Neu5Gc-AE+1H峰；未见Neu5Gc和AE的峰。
KDN-AE质谱：m/z 328.1，KDN-AE+1H峰；未见KDN和AE的峰。
实施例2 Neu5Ac-AP的合成
称取Neu5Ac(1.55g，5mmol)，置于100mL茄形瓶中，加入40mL DMF和搅拌子，加热溶解，加 入4-PPY(0.74g，5mmol)，再加入1mL TEA，60℃水浴搅拌反应6h。将反应液转移2000rpm离心5min， 倾去上层清液，用无水乙醚洗涤3次，N2吹干后，真空保干得到白色粉末状固体，即Neu5Ac-4PPY。称 取Neu5Ac-4PPY活化酯(439mg，1mmol)溶于15mLDMF中，加热至60℃，抽真空，充N2。另称取 AP(273mg，3mmol)加入Neu5Ac-4PPY活化酯体系中，抽真空，充N2，60℃水浴搅拌反应，反应1h 后停止，先用0.45μm的有机膜将反应液体系中的微小不溶物质过滤掉，得到澄清的反应液，以反应体系/ 无水乙醚(1/5，v/v)的比例沉淀反应体系，有大量白色固体析出，2000rpm离心3min，白色沉淀物质用 无水乙醚洗3次，N2吹干后真空保干，得到白色固体即Neu5Ac-AP。
Neu5Ac-AP质谱：m/z 385.1，Neu5Gc-AP+1H峰；未见Neu5Gc和AP的峰。
由于碳链长度在2～12的巯基伯胺和NH2-PEG400-SH在上述体系下具有相似的溶解度和相似的伯氨基 反应活性。因此在本实施例中，使用相同摩尔量的4-巯基-1-丁胺(MB)、5-巯基-1-戊胺(AT)、6-巯基-1- 己胺(AH)、NH2-PEG400-SH使用相同的投料比例和反应条件，可以获得Neu5Ac-MB、Neu5Ac-AT和 Neu5Ac-AH、Neu5Ac-PEG400-SH。同样，使用相同摩尔量的Neu5Gc和KDN代替Neu5Ac，可以得到 Neu5Gc-AP、Neu5Gc-MB、Neu5Gc-AT和Neu5Gc-AH、Neu5Gc-PEG400-SH以及。KDN-AP、KDN-MB、 KDN-AT和KDN-AH、KDN-PEG400-SH
实施例3 AC-CH的合成
称取CH(386mg，1mmol)于茄形瓶中，加入DCM使其溶解，加入417μL的TEA，抽真空，充 N2，冰水浴搅拌20min，量取AC(245μL，3mmol)冰水浴条件逐滴加入AC的DCM溶液于茄形瓶中， 抽取反应体系的空气，充N2，冰水浴搅拌1h，室温反应24h。真空旋转除去DCM。用水将其转移至烧杯 中，将其转移至10mLEP管中，2000rpm离心弃上清，将下层淡黄色样沉淀冻干，得到产物AC-CH。
结构见下式：
质谱：m/z 463.3561，AC-CH+23Na峰，表明成功合成AC-CH。谱图见附图3。
红外：CH的羟基伸缩振动峰(3424.4cm-1)在产物AC-CH中消失，而AC-CH的红外中出现了1720.7 cm-1和1638.3cm-1的峰，分别对映的是C＝O和C＝C的伸缩振动峰，说明CH的羟基与AC的丙烯酰基进 行了偶联。谱图见附图4。
核磁：CH骨架上的非活泼氢和AC烷基链上的氢得到归属。(CD3Cl3,δppm)，7.26为CD3Cl3的溶剂 峰，2.4(d,2H,H-4)，4.6(quint,1H,H-3)，5.4(t,1H,H-6)，5.8(d,1H,H-a)，6.1(t,1H,H-c)，6.4(d,1H,H-b)，0.68-2.1 为CH其余烷基上的氢峰。
谱图见附图5。
由于2-甲基丙烯酰氯(MAC)和2-丁烯酰氯(BC)在上述体系下与丙烯酰氯(AC)具有相似的溶解 性质及反应活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的MAC、BC代替AC，可以合成得 到MAC-CH、BC-CH。
实施例4 AC-ODA的合成
称取ODA(269mg，1mmol)于茄形瓶中，加入DCM使其溶解，加入417μL的TEA，抽真空，充 N2，冰水浴搅拌20min，量取AC(245μL，3mmol)冰水浴条件逐滴加入AC的DCM溶液于茄形瓶中， 抽取反应体系的空气，充N2，冰水浴搅拌1h，室温反应24h。真空旋转除去DCM。用水将其转移至烧杯 中，将其转移至10mLEP管中，2000rpm离心弃上清，将下层淡黄色样沉淀冻干，得到产物AC-ODA。 结构见下式：
质 谱：m/z 346.3，AC-ODA+23Na峰。谱图见附图6。
红外：ODA的氨基伸缩振动峰(3424.4cm-1)在产物AC-ODA中消失，而AC-ODA的红外中出现了 1625.8cm-1和1656.1cm-1的峰，分别对映的是C＝O和C＝C的伸缩振动峰，说明ODA的氨基与AC的丙 烯酰基进行了偶联。谱图见附图7。
核磁：ODA骨架上的非活泼氢和AC烷基链上的氢得到归属。(CD3Cl3,δppm)，7.26为CD3Cl3的溶 剂峰，0.85(t,3H,H-1),1.53(t,2H,H-17)，3.32(t,2H,H-18)，5.61(d,1H,H-a)，5.62(d,1H,H-b)，6.25(d,1H,H-20)， 0.90-1.60为ODA上其余的烷基峰。谱图见附图8。
由于2-甲基丙烯酰氯(MAC)和2-丁烯酰氯(BC)在上述体系下与丙烯酰氯(AC)具有相似的溶解 性质及反应活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的MAC、BC代替AC，可以合成得 到MAC-ODA、BC-ODA。
实施例5 AC-LA的合成
称取LA(185mg，1mmol)于茄形瓶中，加入DCM使其溶解，加入417μL的TEA，抽真空，充N2， 冰水浴搅拌20min，量取AC(245μL，3mmol)冰水浴条件逐滴加入AC的DCM溶液于茄形瓶中，抽取 反应体系的空气，充N2，冰水浴搅拌1h，室温反应24h。真空旋转除去DCM。用水将其转移至烧杯中， 将其转移至10mLEP管中，2000rpm离心弃上清，将下层淡黄色样沉淀冻干，得到产物AC-LA。
质谱：m/z 262.4，AC-LA+23Na峰。
由于碳链长度在8～22的烷基伯胺具有相似的溶解度和相似的伯氨基反应活性。因此在本实施例中， 使用相同摩尔量的十胺(DA)、十四胺(TDA)或十六胺(HDA)代替十二胺(LA)，使用相同的投料比 例和反应条件，可以获得AC-DA、AC-TDA或AC-HDA。同理由于2-甲基丙烯酰氯(MAC)和2-丁烯酰 氯(BC)在上述体系下与丙烯酰氯(AC)具有相似的溶解性质及反应活性，因此我们使用一致的反应条 件，使用相同摩尔比例的MAC、BC代替AC，可以合成得到MAC-DA、MAC-LA、MAC-TDA、MAC-HAD、 BC-DA、BC-LA、BC-TDA、BC-HAD。
实施例6 AC-SA的合成
称取SA(271mg，1mmol)于茄形瓶中，加入氯仿使其溶解，加入417μL的TEA，抽真空，充N 2，冰水浴搅拌30min，量取AC(245μL，3mmol)冰水浴条件逐滴加入AC的氯仿溶液于茄形瓶中， 抽取反应体系的空气，充N2，冰水浴搅拌1h，室温反应12h。真空旋转除去氯仿。用蒸馏水洗涤纯化产 物，得到产物AC-SA。结构如下式：
质谱：m/z 325.3，AC-CH+1H峰；m/z 347.3，AC-CH+23Na峰。
核磁：AC骨架上的3个非活泼氢和SA烷基链上的氢得到归属。(CD3OD，δppm),3.31为CD3OD 的溶剂峰,0.86(t,2H,H-5),1.5(quint,2H,H-4),3.91(t,2H,H-3),5.78(d,1H,H-1’),6.10(t,1H,H-2),6.45(d,1H,H-1), 1.2-1.5(s,30H,烷基链)。
由于十六醇(CA)、十四醇(MA)和十二醇(LA)在上述体系下与十八醇(SA)具有相似的溶解性 质及羟基反应活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的CA、MA、LAA代替SA，可以 合成得到AC-CA、AC-MA、AC-LAA。同理由于2-甲基丙烯酰氯(MAC)和2-丁烯酰氯(BC)在上述体 系下与丙烯酰氯(AC)具有相似的溶解性质及反应活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比 例的MAC、BC代替AC，可以合成得到MAC-SA、MAC-CA、MAC-MA、MAC-LAA、BC-CA、BC-MA、 BC-LAA、BC-SA。
实施例7 AC-DSPG的合成
室温下使用1mL氯仿溶解AC(50μL，0.6mmol)，用氯仿：甲醇＝4:1的比例溶解80mgDSPG， 加入26μL三乙胺。冰水浴条件下将AC的氯仿溶液逐渐加入到DSPG溶液中，充N2保护，室温磁力搅 拌反应24h。反应结束后，用4倍体积的水稀释后进行透析(透析袋截留分子量1KDa)，对透析袋内物 质进行冻干得到AC-DSPG。结构见下式：
质谱：m/z 909.5，AC-DSPG+1H峰；m/z 931.5，AC-DSPG+23Na峰；
核磁：AC骨架上的3个非活泼氢和DSPG上的氢得到归属。(DMSO,δppm)，2.5为DMSO的溶剂 峰，0.89(t,6H,H-15,H-16)，1.26-1.33(s,56H,烷基链)，1.61(quint,2H,H-13,H-14)，2.08(m,1H,H-6)，2.32-2.3 5(m,4H,H-11,H-12)，3.38-4.08(t,2H,H-7)，4.28-4.58(m,4H,H-8,H-10)，4.30-4.55(t,2H,H-5)，5.62(s,1H,H-9)， 5.83(d,2H,H-1,H-2)，6.10-6.13(d,2H,H-3,H-4)，6.40-6.50(d,2H,H-1’,H-2’)。
在该实施例中，使用相同物质的量的DPPG、DOPG和DMPG代替DSPG，按照相同的投料比和反应 操作，可以得到AC-DPPG、AC-DOPG和AC-DMPG。同理由于2-甲基丙烯酰氯(MAC)和2-丁烯酰氯 (BC)在上述体系下与丙烯酰氯(AC)具有相似的溶解性质及反应活性，因此我们使用一致的反应条件， 使用相同摩尔比例的MAC、BC代替AC，可以合成得到MAC-DSPG、MAC-DPPG、MAC-DMPG、 BC-DPPG、BC-DOPG、BC-DMPG。
实施例8 AC-DSPE的合成
室温下使用1mL氯仿溶解AC(50μL，0.6mmol)，用氯仿溶解80mg DSPE，加入30μL三乙胺， 升温至40℃溶解。冰水浴条件下将AC的氯仿溶液逐渐加入到DSPE溶液中，充N2保护，室温磁力搅拌 反应24h。反应结束后，用4倍体积的水稀释后进行透析(透析袋截留分子量1KDa)，对透析袋内物质 进行冻干得到AC-DSPE。结构见下式：
质谱：m/z 802.6，AC-DSPE+1H峰；m/z 824.6，AC-DSPE+23Na峰；m/z 880.5，AC-DSPE+79Br峰；
核磁：AC骨架上的3个非活泼氢和DSPE上的氢得到归属。(DMSO，δppm)，2.5为DMSO的溶剂 峰，0.87(m,6H,H-12,H-13)，1.22-1.33(s,56H,烷基链)，1.68(m,2H,H-10,H-11)，2.30-2.37(m,4H,H-8,H-9)，3. 21(t,2H,H-3)，4.10-4.38(m,4H,H-4,H-5)，4.40-4.51(t,2H,H-7)，5.27(m,1H,H-6)，5.72(d,1H,H-1)，6.11(d,1H, H-1’)，6.46(t,1H,H-2)。
在该实施例中，使用相同物质的量的DPPE、DOPE和DMPE代替DSPE，按照相同的投料比和反应 操作，可以得到AC-DPPE、AC-DOPE和AC-DMPE。
同理由于2-甲基丙烯酰氯(MAC)和2-丁烯酰氯(BC)在上述体系下与丙烯酰氯(AC)具有相似的溶解 性质及反应活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的MAC、BC代替AC，可以合成得 到MAC-DPPE、MAC-DOPE、MAC-DMPE、BC-DPPE、BC-DOPE、BC-DMPE。
实施例9 AC-PEG2000-DSPE的合成
室温下使用4mL DMF溶解50μLAC，用6mL DMF溶解56mg HO-PEG2000-DSPE，加入26μL三乙 胺。冰水浴条件下将AC的DMF溶液逐渐加入到HO-PEG2000-DSPE的DMF溶液中，充N2保护，室温磁 力搅拌反应24h。反应结束后，用4倍体积的水稀释反应液后进行透析(透析袋截留分子量1KDa)，蒸馏 水为透析介质，透析24h，透析结束后对透析袋内物质进行冻干得到AC-PEG2000-DSPE。结构式如下式所 示：
核磁：AC上的3个非活泼氢和PEG2000-DSPE上的氢得到归属。(CD3OD，δppm)，3.31为CD3OD 的溶剂峰，0.96(t,6H,H-14,H-15)，1.60(m,32H,H-12,H-13)，2.32-2.35(t,4H,H-10,H-11)，3.16(t,2H,H-5)， 4.09(t,2H,H-6)，4.17-4.42(d,2H,H-4,H-7,H-9,H-4)，5.31(s,1H,H-8)，6.10(quint,1H,H-2)，5.83-6.41(dd,2H,H-1)。
在该实施例中，使用相同物质的量的DSPE-PEG1000-OH、DSPE-PEG5000-OH、DSPE-PEG10000-OH以及 DSPE-PEG1000-NH2、DSPE-PEG5000-NH2、DSPE-PEG10-000-NH2、DSPE-PEG2000-NH2代替DSPE-PEG2000-OH， 按照相同的投料比和反应操作，可以得到AC-PEG1000-DSPE、AC-PEG5000-DSPE和AC-PEG10000-DSPE、 AC-PEG2000-DSPE。同理由于2-甲基丙烯酰氯(MAC)和2-丁烯酰氯(BC)在上述体系下与丙烯酰氯(AC) 具有相似的溶解性质及反应活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的MAC、BC代替 AC，可以合成得到MAC-PEG1000-DSPE、MAC-PEG5000-DSPE、MAC-PEG10000-DSPE、MAC-PEG2000-DSPE、 BC-PEG1000-DSPE、BC-PEG5000-DSPE、BC-PEG10000-DSPE、BC-PEG2000-DSPE。
实施例10 AE-AC-CH的合成
称取AC-CH(220mg，0.5mmol)置于100mL茄形瓶中，加入20mL无水乙醇，加热溶解。称取 AE(154mg，2mmol)加入至AC-CH溶液中，抽取反应体系的空气，充N2保护，室温磁力搅拌反应12h。 真空旋转除去乙醇，加入30～40mL蒸馏水，蒸馏水透析24h后冻干。结构如下式；
质谱：m/z 518.5，AE-AC-CH+1H峰；m/z 540.6+23Na峰。谱图见附图9。
红外：AE 3347cm-1和3431cm-1处的胺基伸缩振动双峰在产物AE-AC-CH中出现，AE2507.5cm-1处 的巯基峰在产物AE-AC-CH中消失，同时AC-CH 1720.7cm-1处的不饱和酸酯的羰基峰在产物中出现在 1730.3cm-1处，说明AE的巯基与AC-CH的丙烯酰基发生了迈克尔加成反应。谱图见附图10。
由于碳链长度在2～12的巯基伯胺和NH2-PEG400-SH在上述体系下具有相似的溶解度和相似的伯氨基 反应活性。因此在本实施例中，使用相同摩尔量的3-巯基-1-丙胺(AP)、4-巯基-1-丁胺(MB)、5-巯基-1- 戊胺(AT)、6-巯基-1-己胺(AH)、NH2-PEG400-SH和反应条件，可以获得AP-AC-CH、MB-AC-CH、AT-AC-CH、 AH-AC-CH、NH2-PEG400-AC-CH。
AP-AC-CH质谱：m/z 532.4，AP-AC-CH+1H峰，未见AC-CH和AE的峰。见附图11。
同理由于MAC-CH、BC-CH在上述体系下与AC-CH具有相似的溶解性质及反应活性，因此我们使用 一致的反应条件，使用相同摩尔比例的MAC-CH、BC-CH代替AC-CH，可以合成得到AE-MAC-CH、 AE-BC-CH。
实施例11 AE-AC-ODA的合成
称取AC-ODA(162mg，0.5mmol)置于100mL茄形瓶中，加入20mL无水乙醇，加热溶解。称取 AE(154mg，2mmol)加入至AC-ODA溶液中，抽取反应体系的空气，充N2保护，室温磁力搅拌反应 12h。真空旋转除去乙醇，加入30～40mL蒸馏水，蒸馏水透析24h后冻干。
结构如下式：
质谱：m/z401.4，AE-AC-ODA+1H峰；m/z423.3+23Na峰，表明成功合成AE-AC-ODA。谱图见附图 12。
红外：AE 3347cm-1和3431cm-1处的胺基伸缩振动双峰在产物AE-AC-ODA中出现，AE2507.5cm-1处的巯基峰在产物AE-AC-ODA中消失，同时AC-ODA 1625.8cm-1处的不饱和酰胺的羰基峰在产物中出现 在1626.3cm-1处，说明AE的巯基与AC-ODA的丙烯酰基发生了迈克尔加成反应。谱图见附图13。
核磁：ODA骨架上的非活泼氢和AC烷基链上的氢得到归属。(DMSO，δppm)，2.5为DMSO的溶 剂峰，0.85(t,3H,H-6)，2.35(t,2H,H-4)，2.70-2.80(m,4H,H-2,H-3)，3.01(t,2H,H-5)，3.05(t,2H,H-1)，0.90-1.30 为ODA上的烷基链。谱图见附图14。
由于碳链长度在2～12的巯基伯胺和NH2-PEG400-SH在上述体系下具有相似的溶解度和相似的伯氨基 反应活性。因此在本实施例中，使用相同摩尔量的3-巯基-1-丙胺(AP)、4-巯基-1-丁胺(MB)、5-巯基-1- 戊胺(AT)、6-巯基-1-己胺(AH)、NH2-PEG400-SH和反应条件，可以获得AP-AC-ODA、MB-AC-ODA、 AT-AC-ODA、AH-AC-ODA、NH2-PEG400-AC-ODA。
同理由于MAC-ODA、BC-ODA在上述体系下与AC-ODA具有相似的溶解性质及反应活性，因此我 们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的MAC-ODA、BC-ODA代替AC-ODA，可以合成得到 AE-MAC-ODA、AE-BC-ODA。
实施例12AE-AC-SA的合成
称取AC-SA(162mg，0.5mmol)置于100mL茄形瓶中，加入15mL无水乙醇，加热溶解。称取AE (116mg，1.5mmol)加入至AC-SA溶液中，抽取反应体系的空气，充N2保护，室温磁力搅拌反应12h。 真空旋转除去乙醇，使用蒸馏水对产物进行重结晶，得到产物AE-AC-SA。
质谱：m/z 402.3，AE-AC-SA+1H峰；m/z 440.3，AE-AC-SA+23Na峰。
核磁：AE和AC上的非活泼氢和AC-SA烷基链上的氢得到归属。(CD3OD，δppm)，3.31为CD3OD 的溶剂峰，0.89(t,3H,H-9)，1.26(m,2H,H-8)，1.36(m,2H,H-7)，1.58(m,2H,H-6),2.55(t,2H,H-4)，2.76(t,2H,H -2)，2.81(t,2H,H-3)，3.01(t,2H,H-1)，4.13(t,2H,H-5)，1.1-1.3(m,26H,烷基链)。
由于十六醇(CA)、十四醇(MA)和十二醇(LA)在上述体系下与十八醇(SA)具有相似的溶解性 质及羟基反应活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的AC-CA、AC-MA、AC-LA代替 SA，可以合成得到AE-AC-CA、AE-AC-MA、AE-AC-LA。同样，使用相同摩尔量的3-巯基1-丙胺(AP)、 4-巯基-1-丁胺(MB)、5-巯基-1-戊胺(AT)、6-巯基-1-己胺(AH)、NH2-PEG400-SH和反应条件，可以得 到AP-AC-SA、MB-AC-SA、AT-AC-SA、AH-AC-SA、NH2-PEG400-AC-SA。
同理由于MAC-SA、BC-SA在上述体系下与BC-SA具有相似的溶解性质及反应活性，因此我们使用 一致的反应条件，使用相同摩尔比例的MAC-SA、BC-SA代替AC-SA，可以合成得到AE-MAC-SA、 AE-BC-SA。
实施例13AE-AC-DSPE的合成
称取AC-DSPE(88mg，0.1mmol)置于100mL茄形瓶中，加入15mL氯仿溶解。称取AE(31mg， 0.4mmol)溶解于适量甲醇中，加入至AC-DSPG溶液中，抽取反应体系的空气，充N2保护，室温磁力搅 拌反应24h。真空旋转除去部分溶剂，使用蒸馏水对产物进行重结晶，得到产物AE-AC-DSPG。结构式见 下式：
质谱：m/z 879.6，AE-AC-DSPE+1H峰；m/z 901.6，AE-AC-DSPE+23Na峰；
核磁：AE和AC上的非活泼氢和AC-SA烷基链上的氢得到归属。(CD3OD，δppm)，3.31为CD3O D的溶剂峰，0.88(m,6H,H-14,H-15)，1.26-1.34(m,56H,烷基链),1.65-1.70(m,4H,H-12,H-13)，2.56(t,2H,H-4)， 2.69-2.72(m,4H,H-3,H-2)，2.31-2.36(m,4H,H-10,H-11)，3.00(t,2H,H-1)，3.51(t,2H,H-5)，4.12-4.43(m,6H,H-6， H-7,H-9)，5.25(m,1H,H-8)。
在该实施例中，使用相同物质的量的AC-DPPE、AC-DOPE和AC-DMPE代替AC-DSPE，按照相同 的投料比和反应操作，得到AE-AC-DPPE、AE-AC-DOPE和AE-AC-DMPE。同样的，使用相同摩尔量的 3-巯基1-丙胺(AP)、4-巯基-1-丁胺(MB)、5-巯基-1-戊胺(AT)、6-巯基-1-己胺(AH)、NH2-PEG400-SH 和反应条件，可以获得AP-AC-DSPE、MB-AC-DSPE、AT-AC-DSPE、AH-AC-DSPE和NH2-PEG400-AC-DSPE。
同理由于MAC-DSPE、BC-DSPE在上述体系下与AC-DSPE具有相似的溶解性质及反应活性，因此我 们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的MAC-DSPE、BC-DSPE代替AC-DSPE，可以合成得到 AE-MAC-DSPE、AE-BC-DSPE。
实施例14AE-AC-DSPG的合成
称取AC-DSPG(454mg，0.5mmol)置于100mL茄形瓶中，加入15mL叔丁醇和5mL水，加热 溶解。称取AE(154mg，2mmol)加入至AC-DSPG溶液中，抽取反应体系的空气，充N2保护，室温 磁力搅拌反应24h。真空旋转除去部分溶剂，使用蒸馏水对产物进行重结晶，得到产物AE-AC-DSPG。
质谱：m/z 1037.6，AE-AC-DSPG+1H峰；m/z 1059.6，AE-AC-DSPG+23Na峰。谱图见附图16。
核磁：AE和AC上的非活泼氢和AC-DSPG烷基链上的氢得到归属。(DM-SO,δppm)，2.5为DMSO 的溶剂峰，0.80-0.90(t,6H,H-16,H-17)，2.58-2.62(t,4H,H-7,H-8)，2.68-2.71(t,4H,H-3,H-4)，2.81(t,4H,H-5,H-6)， 3.00-3.05(t,4H,H-1,H-2)，4.12-4.42(m,12H,H-9,H-10,H-11,H-13,H-14,H-15)，5.26(t,1H,H-12)，1.26-1.33(m,60 H,烷基链)。
在该实施例中，使用相同物质的量的AC-DPPG、AC-DOPG和AC-DMPG代替AC-DSPG，按照相同 的投料比和反应操作，得到AE-AC-DPPG、AE-AC-DOPG和AE-AC-DMPG。同样的，使用相同摩尔量的 3-巯基1-丙胺(AP)、4-巯基-1-丁胺(MB)、5-巯基-1-戊胺(AT)、6-巯基-1-己胺(AH)、NH2-PEG400-SH 和反应条件，可以获得AP-AC-DSPG、MB-AC-DSPG、AT-AC-DSPG、AH-AC-DSPG和 NH2-PEG400-AC-DSPG。
同理由于MAC-DSPG、BC-DSPG在上述体系下与AC-DSPG具有相似的溶解性质及反应活性，因此 我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的MAC-DSPG、BC-DSPG代替AC-DSPG，可以合成得到 AE-MAC-DSPG、AE-BC-DSPG。
实施例15AE-AC-PEG2000-DSPE的合成
称取140mgAC-PEG2000-DSPE置于100mL茄形瓶中，加入25mL无水乙醇，加热溶解。称取154mg AE加入至AC-PEG2000-DSPE溶液中，抽取反应体系的空气，充N2保护，室温磁力搅拌反应24h。真空旋 转除去部分乙醇，加入蒸馏水稀释反应液后进行透析(透析袋截留分子量1KDa)，蒸馏水为透析介质，透 析24h，透析结束后对透析袋内物质进行冻干得到AE-AC-PEG2000-DSPE。
核磁：AE 和AC上的非活泼氢和AC-PEG2000-DSPE上的氢得到归属。(CD3OD,δppm)，3.31为CD3OD的溶剂峰， 0.98(t,6H,H-1,H-2)，1.60-1.70(m,32H,H-3,H-4)，2.32-2.36(t,32H,H-5,H-6)，2.5(t,2H,H-14)，2.71(t,2H,H-16)， 2.80(t,2H,H-15)，3.00(t,2H,H-17)，3.24(t,2H,H-10)，4.09(t,2H,H-9)，4.13-4.42(m,184H,H-7,H-8,H-12,H-13)， 5.21(m,1H,H-18)。
在该实施例中，使用相同物质的量的AC-PEG1000-DSPE、AC-PEG5000-DSP-E、AC-PEG10000-DSPE代替 AC-PEG2000-DSPE，按照相同的投料比和反应操作，得到AE-AC-PEG1000-DSPE、AE-AC-PEG5000-DSPE、A E-AC-PEG10000-DSP-E。同样的，使用相同摩尔量的3-巯基1-丙胺(AP)、4-巯基-1-丁胺(MB)、5-巯基-1 -戊胺(AT)、6-巯基-1-己胺(AH)和反应条件，可以获得AP-AC-PE-G2000-DSPE、MB-AC-PEG2000-DSPE、 AT-AC-PEG2000-DSPE、AH-AC-PEG2000-DSPE。
同理由于MAC-PEG2000-DSPE、BC-PEG2000-DSPE在上述体系下与AC-PEG2000-DSPE具有相似的溶解 性质及反应活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的MAC-PEG2000-DSPE、 BC-PEG2000-DSPE代替AC-PEG2000-DSPG，可以合成得到AE-MAC-PEG2000-DSPE、AE-BC-PEG2000-DSPE。
实施例16 Neu5Ac–AE–AC-CH的合成方法一
称取Neu5Ac(56mg，0.18mmol)置于50mL茄形瓶中，加入DMF加热溶解。另取加入EDC(1 03mg，0.54mmol)和NHS(62mg，0.54mmol)，室温磁力搅拌1h。称取AE-AC-CH(31mg，0.06mmol)溶于4mL DMF后加入茄形瓶中，抽真空，充N2保护，60℃水浴加热反应24h。反应完成后， 用蒸馏水将反应体系稀释4倍，蒸馏水透析24h后冻干，使用正己烷对产物进行重结晶，得到纯品。结 构如下式：
质谱：m/z 809.5，Neu5Ac-AE-AC-CH+1H峰；m/z 831.5，Neu5Ac-AE-A-C-CH+23Na峰；m/z 847.5， Neu5Ac-AE-AC-CH+39K峰。谱图见附图15。
核磁：SA骨架上的9个非活泼氢和AE-AC-CH上的氢得到归属。(CD3OD，δppm)，3.31为CD3OD 的溶剂峰，1.86(s,3H,H-4)，2.14(d,2H,H-1)，2.60(t,2H,H-12)，2.7(t,2H,H-10)，2.81(t,2H,H-11)，3.41(q,1H, H-7)，3.50(d,2H,H-8)，3.62～3.72(t,2H,H-9,H-6,H-3)，3.99(quint,1H,H-13)，4.04(d,1H,H-15)，4.32(q,1H,H-2)， 5.39(m,1H,H-14)，其余各峰与CH相似。谱图见附图16
红外：在3340cm-1左右处Neu5Ac羧基中的羟基伸缩振动峰在产物Neu5Ac-AE-AC-CH中变为较宽的 羟基峰，而AE-AC-CH上3300cm-1左右的胺基伸缩振动双峰在产物Neu5Ac-AE-AC-CH中消失，说明 Neu5Ac的羧基与AE-AC-CH的氨基发生了偶联，而Neu5Ac-AE-AC-CH中较宽的羟基峰推测是Neu5Ac 基团上的乙酰基和羟基所导致。谱图见附图17。
在该实施例中，使用相同物质的量的Neu5Gc和KDN代替Neu5Ac，按照相同的投料比和反应操作， 得到Neu5Gc-AE-AC-CH、KDN-AE-AC-CH；同样的，使用相同摩尔量的AP-AC-CH、MB-AC-CH、AT- AC-CH、AH-AC-CH、NH2-P-EG400-AC-CH代替AE-AC-CH，可以合成得到Neu5Ac-AP-AC-CH、Neu5Ac -M-B-AC-CH、Neu5Ac-AT-AC-CH、Neu5Ac-AH-AC-CH、Neu5Ac-NH2-PEG400-AC-CH。
同理由于AE-MAC-CH、AE-BC-CH在上述体系下与AE-AC-CH具有相似的溶解性质及反应活性，因 此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的AE-MAC-CH、AE-BC-CH代替AE-AC-CH，可以合成 得到Neu5Ac-AE-MAC-CH、Neu5Ac-AE-BC-CH。
Neu5Gc-AE-AC-CH质谱：m/z 825.5，Neu5Gc-CH+1H峰；m/z 847.5，Neu5Gc-CH+23Na峰，未见Neu5Gc 和AE-AC-CH的峰。
KDN-AE-AC-CH质谱：m/z 768.5，KDN-AE+1H峰；m/z 790.5，KDN-AE+23Na峰未见KDN和AE- AC-CH的峰。
Neu5Ac-AP-AC-CH质谱：m/z 845.5，Neu5Ac-CH+1Na峰，谱图见附图18。
实施例17 Neu5Ac-AE-AC-CH的合成方法二
称取Neu5Ac-AE(386mg，1mmol)置于100mL茄形瓶中，加入10mL甲醇溶解，抽真空，充N2保护。另称取AC-CH(220mg，0.5mmol)置于另一100mL茄形瓶中，加入无水乙醇，60℃水浴加热溶 解至澄清透明，加入137μLTEA，再将SA-SH溶液加入到AC-CH溶液中，室温搅拌反应5h。旋干大部 分醇液，加入剩余液体4倍体积量的蒸馏水，再用稀盐酸将体系调节至中性，将白色混悬液转移至透析袋 中(截留分子量1KDa)，蒸馏水为透析介质，透析24h后冻干。
在该实施例中，使用相同物质的量的Neu5Ac-AP、Neu5Ac-MB、Neu5Ac-AT和Neu5Ac-AH、Neu5Ac -PEG400-SH代替Neu5Ac-AE，得到Neu5Ac-AP-AC-CH、Neu5Ac-MB-AC-CH、Neu5Ac-AT-AC-CH和Neu 5Ac-AH-AC-CH、Neu5A-c-PEG400-AC-CH。同样的，使用相同摩尔量的Neu5Gc-AE或KDN-AE代替Ne- u5Ac-AE，可以获得Neu5Gc-AE-AC-CH、KDN-AE-AC-CH。
实施例12 Neu5Ac-AE-AC-ODA的合成方法
称取Neu5Ac(56mg，0.18mmol)置于50mL茄形瓶中，加入DMF加热溶解。另取加入EDC(103 mg，0.54mmol)和NHS(62mg，0.54mmol)，室温磁力搅拌1h。称取AE-AC-ODA(24mg，0.06mmol) 溶于4mL DMF后加入茄形瓶中，抽真空，充N2保护，60℃水浴加热反应12h。反应完成后，用蒸馏水 将反应体系稀释4倍，蒸馏水透析24h后冻干，使用氯仿对产物进行重结晶，得到纯品。结构如下式：
质谱：m/z 714.4，Neu5Ac-AE-AC-ODA+23Na峰。谱图见附图19。
红外：在3442.3cm-1左右处Neu5Ac羧基中的羟基伸缩振动峰在产物Neu5Ac-AE-AC-ODA中变为较 宽的羟基峰，而AE-AC-ODA上3400cm-1左右的胺基伸缩振动双峰在产物Neu5Ac-AE-AC-ODA中消失， 说明Neu5Ac的羧基与AE-AC-ODA的氨基发生了偶联，而Neu5Ac-AE-AC-ODA中较宽的羟基峰推测是 Neu5Ac基团上的乙酰基和羟基所导致。谱图见附图20。
核磁：SA骨架上的9个非活泼氢和AE-AC-ODA上的氢得到归属。(DMSO，δppm)，2.5为DMSO 的溶剂峰，1.83(s,3H,H-4)，2.44(d,2H,H-1)，2.55(t,2H,H- 12)，2.72(t,2H,H-11)，2.98(t,2H,H-10)，3.00(t,2H,H-13)，3.08(m,1H,H-7)，3.50(d,2H,H-8)，3.62～3.87(m,2H, H-9,H-6,H-3)，其余各峰与ODA相似。谱图见附图21。
在该实施例中，使用相同物质的量的Neu5Gc和KDN代替Neu5Ac，按照相同的投料比和反应操作， 得到Neu5Gc-AE-AC-ODA、KDN-AE-AC-ODA；同样的，使用相同摩尔量的AP-AC-ODA、MB-AC-ODA、 AT-AC-ODA、AH-AC-ODA、NH2-PEG400-AC-ODA代替AE-AC-ODA，可以合成得到Neu5Ac-AP-AC-OD A、Neu5Ac-MB-AC-ODA、Neu5Ac-AT-AC-ODA、Neu5Ac-AH-AC-ODA、Neu5Ac-NH2-PEG400-AC-ODA。
同理由于AE-MAC-ODA、AE-BC-ODA在上述体系下与AE-AC-ODA具有相似的溶解性质及反应活 性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的AE-MAC-ODA、AE-BC-ODA代替AE-AC-ODA， 可以合成得到Neu5Ac-AE-MAC-ODA、Neu5Ac-AE-BC-ODA。
实施例18 Neu5Ac-AE-AC-SA的合成
称取Neu5Ac(56mg，0.18mmol)置于50mL茄形瓶中，加入DMF加热溶解。另取加入EDC(1 03mg，0.54mmol)和NHS(62mg，0.54mmol)，室温磁力搅拌1h。称取AE-AC-SA(24mg，0.06mmol)溶于4mL DMF后加入茄形瓶中，抽真空，充N2保护，60℃水浴加热反应12h。反应完成后， 用蒸馏水将反应体系稀释4倍，蒸馏水透析24h后冻干，使用二氯甲烷对产物进行重结晶，得到纯品。
质谱：m/z 691.4，Neu5Ac-AE-AC-SA+1H峰；m/z 713.4，Neu5Ac-AE-AC-SA+23Na峰。
核磁：Neu5Ac骨架上的9个非活泼氢和AE-AC-SA上的氢得到归属。(C-D3OD，δppm)，3.31为C D3OD的溶剂峰，1.26-1.43(m,60H,烷基链)，1.61(t,2H,H-10)，1.96(s,3H,H-1)，2.15(d,2H,H-8)，3.13-3.21(t, 2H,H-10,H-12)，3.53-3.59(m,3H,H-2,H-3)，3.60(d,1H,H-4,H-6)，3.87-3.90(t,2H,H-9,H-11)，3.97(t,2H,H-13)， 4.12(m,1H,H-5)，5.37(m,2H,H-7)。
在该实施例中，使用相同物质的量的Neu5Gc和KDN代替Neu5Ac，按照相同的投料比和反应操作， 得到Neu5Gc-AE-AC-SA、KDN-AE-AC-SA；同样的，使用相同摩尔量的AP-AC-SA、MB-AC-SA、AT-A C-SA、AH-AC-SA、NH2-P-EG400-AC-SA代替AE-AC-SA，可以合成得到Neu5Ac-AP-AC-SA。Neu5Ac-M B-AC-SA、Neu5Ac-AT-AC-SA、Neu5Ac-AH-AC-SA、Neu5Ac-NH2-PEG400-AC-SA。
同理由于AE-MAC-SA、AE-BC-SA在上述体系下与AE-AC-SA具有相似的溶解性质及反应活性，因 此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的AE-MAC-SA、AE-BC-SA代替AE-AC-SA，可以合成 得到Neu5Ac-AE-MAC-SA、Neu5Ac-AE-BC-SA。
实施例19 Neu5Ac-AE-AC-DSPG的合成
称取Neu5Ac(56mg，0.18mmol)置于50mL茄形瓶中，加入DMF加热溶解。另取加入EDC(103 mg，0.54mmol)和NHS(62mg，0.54mmol)，室温磁力搅拌1h。称取63mgAE-AC-DSPG溶于3mL 甲醇和3mL水后加至茄形瓶中，抽真空，充N2保护，60℃水浴加热反应24h。反应完成后，用蒸馏水将 反应体系稀释4倍，蒸馏水透析24h后冻干，使用二氯甲烷对产物进行重结晶，得到纯品。
质谱：m/z 1619.8，Neu5Ac-AE-AC-DSPG+1H峰；m/z 1641.8，Neu5Ac-AE-AC-DSPG+23Na峰；m/ z 1617.8，Neu5Ac-AE-AC-DSPG-1H峰；m/z 1653.8，Ne-u5Ac-AE-AC-DSPG+35Cl峰。
核磁：Neu5Ac骨架上的9个非活泼氢和AE-AC-DSPG上的氢得到归属。(CD3-OD，δppm)，3.31为 CD3OD的溶剂峰，0.86(t,6H,H-31,H-32)，1.99-2.10(s,6H,H-1,H-2)，2.14-2.20(d,4H,H-15,H-16)，2.32-2.35(t, 4H,H-29,H-30)，3.13-3.20(t,4H,H-19,H-20)，3.48(m,2H,H-5,H-6)，3.53-3.59(m,2H,H-3,H-4)，3.60-3.70(m,2H, H-7,H-8,H-11,H-12)，3.80-3.87(t,4H,H-17,H-18)，4.10-4.12(m,2H,H-9,H-10)，4.13-4.50(d,4H,H-28,H-27,H-25, H-26)，5.26-5.30(m,1H,H-33,H-34)，5.37(m,2H,H-13,H-14)，5.62(m,1H,H-23)，5.85(m,2H,H-24)，6.79(m,1 H,H-21)，7.35(m,2H,H-22)。
在该实施例中，使用相同物质的量的Neu5Gc和KDN代替Neu5Ac，按照相同的投料比和反应操作， 得到Neu5Gc-AE-AC-DSPG、KDN-AE-AC-DSPG；同样的，使用相同摩尔量的AP-AC-DSPG、MB-AC-DSPG、 AT-AC-DSPG、AH-AC-DSPG、NH2-PEG400-AC-DSPG代替AE-AC-DSPG，可以合成得到 Neu5Ac-AP-AC-DSPG、Neu5Ac-MB-AC-DSPG、Neu5Ac-AT-AC-DSPG、Neu5Ac-AH-AC-DSPG、 Neu5Ac-NH2-PEG400-AC-DSPG。
同理由于AE-MAC-DSPG、AE-BC-DSPG在上述体系下与AE-AC-DSPG具有相似的溶解性质及反应 活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的AE-MAC-DSPG、AE-BC-DSPG代替 AE-AC-DSPG，可以合成得到Neu5Ac-AE-MAC-DSPG、Neu5Ac-AE-BC-DSPG。
实施例20 Neu5Ac-AE-AC-DSPE的合成
称取Neu5Ac(56mg，0.18mmol)置于50mL茄形瓶中，加入DMF加热溶解。另取加入EDC(103 mg，0.54mmol)和NHS(62mg，0.54mmol)，室温磁力搅拌1h。称取60mgAE-AC-DSPE于6mLDMF 中，加热至60℃溶解，转移至茄形瓶中，抽真空，充N2保护，60℃水浴加热反应24h。反应完成后，用 蒸馏水将反应体系稀释4倍，蒸馏水透析24h后冻干，使用氯仿对产物进行重结晶，得到纯品。结构式见 下式：
质谱：m/z 1170.7，Neu5Ac-AE-AC-DSPE+1H峰；m/z 1192.7，Neu5Ac-AE-AC-DSPE+23Na峰；m/ z 1168.7，Neu5Ac-AE-AC-DSPE-1H峰；m/z 1204.7，Neu5-Ac-AE-AC-DSPE+35Cl峰。
核磁：Neu5Ac骨架上的9个非活泼氢和AE-AC-DSPG上的氢得到归属。(CD3OD，δppm)，3.31为 CD3OD的溶剂峰，0.88(t,6H,H-22,H-23)，1.25-1.33(s,56H,烷基链)，1.67(m,4H,H-20,H-21)，1.98(s,3H,H-1), 2.13(d,2H,H-8)，2.30-2.35(t,4H,H-18,H-19)，2.54(t,2H,H-12)，2.70-2.73(m,4H,H-10,H-11)，3.46(t,2H,H-1-3)， 3.57(t,2H,H-9),3.55(d,1H,H-4),3.62-3.74(m,2H,H-2,H-3),3.76-3.88(m,1H,H-6)，3.98-4.12(m,2H,H-5,H-7)， 4.15-4.45(m,6H,H-15,H-17,H19)，5.25(m,1H,H-16).
在该实施例中，使用相同物质的量的Neu5Gc和KDN代替Neu5Ac，按照相同的投料比和反应操作， 得到Neu5Gc-AE-AC-DSPE、KDN-AE-AC-DSPE；同样的，使用相同摩尔量的AP-AC-DSPE、MB-AC-DS PE、AT-AC-DSPE、AH-AC-DSPE、NH2-PEG400-AC-DSPE代替AE-AC-DSPE，可以合成得到Neu5Ac-AP- A-C-DSPE、Neu5Ac-MB-AC-DSPE、Neu5Ac-AT-AC-DSPE、Neu5Ac-AH-AC-DS-PE、Neu5Ac-NH2-PEG400-AC-DSPE。
同理由于AE-MAC-DSPE、AE-BC-DSPE在上述体系下与AE-AC-DSPE具有相似的溶解性质及反应活 性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的AE-MAC-DSPE、AE-BC-DSPE代替AE-AC-DSPE， 可以合成得到Neu5Ac-AE-MAC-DSPE、Neu5Ac-AE-BC-DSPE。
实施例21Neu5Ac-AE-AC-PEG2000-DSPE的合成
称取Neu5Ac(56mg，0.18mmol)置于50mL茄形瓶中，加入DMF加热溶解。另取加入EDC(103 mg，0.54mmol)和NHS(62mg，0.54mmol)，室温磁力搅拌1h。称取174mgAE-AC-PEG2000-DSPE溶 于6mLDMF后加入茄形瓶中，抽真空，充N2保护，室温磁力搅拌反应24h。反应完成后，用蒸馏水将 反应体系稀释4倍，蒸馏水透析24h后冻干，得到Neu5Ac-AE-AC-PEG2000-DSPE。
核磁：Neu5Ac骨架上的9个非活泼氢和AE-AC-PEG2000-DSPE上的氢得到归属。(CD3OD，δppm)， 3.31为CD3OD的溶剂峰，0.98(t,6H,H-1,H-2)，1.68(m,4H,H-3,H-4)，2.12(d,2H,H-19)，2.35-2.32(t,4H,H-5, H-6)，2.58-2.83(4H,H-14,H-15)，2.68(t,2H,H-16)，3.21(t,2H,H-11)，3.48(m,1H,H-24)，3.53-3.59(d,2H,H-25)， 3.60-3.70(m,1H,H-21,H-23)，4.09(t,2H,H-10)，4.12(d,1H,22-H)，4.13-4.42(d,4H,H-7,H-9,H-12,H-13,H-17,H-20)，4.35(m,1H)，5.26(m,1H,H-8)。
在该实施例中，使用相同物质的量的Neu5Gc和KDN代替Neu5Ac，按照相同的投料比和反应操作， 得到Neu5Gc-AE-AC-PEG2000-DSPE、KDN-AE-AC-PE-G2000-DSPE；同样的，使用相同摩尔量的AE-AC-P EG1000-DSPE、AE-AC-PEG50-00-DSPE、AE-AC-PEG10000-DSPE代替AE-AC-PEG2000-DSPE，可以合成得到N -eu5Gc-AE-AC-PEG1000-DSPE、Neu5Gc-AE-AC-PEG5000-DSPE、Neu5Gc-AE-AC-PEG10000-DSPE；同理，使 用相同物质的量的AP-AC-PEG2000-DSPE、MB-AC-P-EG2000-DSPE、AT-AC-PEG2000-DSPE、AH-AC-PEG2000-DSPE代替AE-AC-PEG2-000-DSPE，可以得到Neu5Ac-AP-AC-PEG2000-DSPE、Neu5Ac-MB-AC-PEG2000-D SPE、Neu5Ac-AT-AC-PEG2000-DSPE、Neu5Ac-AH-AC-PEG2000-DSPE。
同理由于AE-MAC-PEG2000-DSPE、AE-BC-PEG2000-DSPE在上述体系下与AE-AC-PEG2000-DSPE具有 相似的溶解性质及反应活性，因此我们使用一致的反应条件，使用相同摩尔比例的AE-MAC-PEG2000-DSPE、 AE-BC-PEG2000-DSPE代替AE-AC-PEG2000-DSPE，可以合成得到Neu5Ac-AE-MAC-PEG2000-DSPE、 Neu5Ac-AE-BC-PEG2000-DSPE。
实施例22 Neu5Ac-AE-AC-CH修饰装载表阿霉素脂质体的制备
脂质体处方及基本理化性质见下表。
制备工艺如下：称取脂质体膜材置于西林瓶中，加入500μL无水乙醇并于65℃水浴中搅拌溶解。待 膜材及药物溶解后，敞开体系，继续搅拌挥除大部分无水乙醇。以0.5mL·s-1的速度将预热至相同温度的 柠檬酸-柠檬酸钠溶液(200mM，pH 4.0)注入膜材中，注入5mL。65℃水浴搅拌20min，得到脂质体 初品。将初品超声分散处理(功率和时间：200W×2min+400W×6min，工作1s间歇1s)，后， 依次通过0.80、0.45、0.22μm微孔滤膜，即得空白脂质体(磷脂浓度为50mg·mL-1)。取空白脂质体混 悬液适量，加入磷酸钠溶液(500mM)调节外水相pH，再加入适量灭菌注射用水，混合均匀，即得pH 梯度脂质体。按照药脂比1:10(wt/wt)将上述梯度脂质体与4.0mg·mL-1EPI药物溶液混合，60℃水浴搅 拌孵育，20min后取出，置于冰水浴2min终止载药，即得表阿霉素脂质体(EPI-L)。
药动学实验：取12只健康雄性Wistar大鼠，随机分成4组，每组3只，分别通过尾静脉注射DiR-CL、DiR-PL、 DiR-SAEL、DiR-SA-ODA，DiR给药剂量为0.6mg·kg-1，并于给药后0.016、0.083、0.25、0.5、1、2、4、 8、12和24h眼眶取血于肝素抗凝管中，4500rpm离心10min分离血浆，取所得血浆样品100μL，加入 900μL无水乙醇，涡旋5min，10000rpm离心10min，取上清液600μL至另一EP管中，继续10000rpm 离心10min。取上清液200μL上样于96孔板中，在激发波长λex＝750nm和发射波长λem＝790nm下测定 荧光强度F，并计算血浆中DiR浓度C及注射剂量百分比(Injected dose，％ID)，以％ID对时间作图，得 药动学曲线图，Wistar大鼠给予不同制剂后药时曲线见附图22。
S180抗肿瘤实验：
将36只荷瘤小鼠随机分为6组，即对照组(Control，5％葡萄糖注射液，10mL·kg-1)、EPI-S组、EP I-CL组、EPI-PL组、EPI-SAEL组和EPI-SA-ODA组，每组6只。各组小鼠均于肿瘤体积到达100mm3后(接种后第4天)开始尾静脉注射给药，每3天1次，共给药5次(接种后第4、7、10、13和16天)， 各组的单次给药剂量均为5mg EPI·kg-1。治疗期间每天记录小鼠死亡事件，隔天称量小鼠体质量并测量 肿瘤长径(a)和短径(b)。
评价指标
肿瘤体积(Tumor volume，V，mm3)：V＝0.5×a×b2；
肿瘤生长曲线下面积(Area under tumor growth curve，AUTGC，mm3·d)，使用Graphpad Prism ver sion 5.1软件的Area under curve积分方法进行计算；
肿瘤抑制率(Tumor inhibition rate，TIR)，包括体积抑瘤率(TIRV，％)以及肿瘤生长曲线下面积抑 瘤率(TIRAUTGC，％)：
TIRV＝(VControl group-VTreated group)/VControl group×100％；
TIRAUTGC＝(AUTGCControl group-AUTGCTreated group)/AUTGCControl group×100％；
将各治疗组所记录的肿瘤体积对接种后天数作图，肿瘤生长曲线见附图23，在30天的试验周期内， 试验组均显著抑制了小鼠肿瘤的生长，抑制作用从强到弱依次为EPI-SAEL>EPI-SA-ODA>EPI-PL> EPI-CL>EPI-S，由肿瘤生长情况可知，Neu5Ac-AE-AC-CH修饰的EPI脂质体具有最优的抗肿瘤效果。 肿瘤抑制率见下表：
胸腺指数和脾指数：
给药方案
将36只荷瘤小鼠随机分为6组，即对照组(Control，5％葡萄糖注射液，10mL·kg-1)、EPI-S组、EPI-CL 组、EPI-PL组、EPI-SAEL和EPI-SA-ODA组，每组6只。各组小鼠均于肿瘤体积到达100mm3后(约接 种后第4天)开始尾静脉注射给药，每3天1次，共给药5次(接种后第4、7、10、13和16天)，各组 的单次给药剂量均为5mg EPI·kg-1。于末次给药后第2天将小鼠颈锥脱臼处死，称体质量，取胸腺和脾脏 并称定质量，计算脾指数(脾脏质量/体质量)和胸腺
指数(胸腺质量/体质量)，结果见下表。
ap代表与5％Glu组的脾指数相比；
bp代表与EPI-S组的脾指数相比；
cp代表与EPI-CL组的脾指数相比；
dp代表与EPI-PL组的脾指数相比；
ep代表与EPI-SAEL组的脾指数相比；
fp代表与EPI-SA-ODA组的脾指数相比；
gp代表与5％Glu组的胸腺指数相比；
hp代表与EPI-S组的胸腺指数相比；
ip代表与EPI-CL组的胸腺指数相比；
jp代表与EPI-PL组的胸腺指数相比；
kp代表与EPI-SAEL组的胸腺指数相比；
lp代表与EPI-SA-ODA组的胸腺指数相比；
与对照组脾指数相比，EPI-S和EPI-CL组极显著性降低(p<0.01)，EPI-SA-ODA组显著性降低(p<0.05)； 与EPI-S溶液组相比，EPI-PL、EPI-SAEL和EPI-SA-ODA组具有极显著性差异(p<0.01)，而EPI-CL组 只具有显著性差异(p<0.05)；与EPI-CL组相比，EPI-SAEL组存在极显著性差异(p<0.01)，而EPI-PL和 EPI-SA-ODA组只存在显著性差异(p<0.05)；同时EPI-SAEL和EPI-SA-ODA的脾指数存在显著性差异 (p<0.05)。比较各组胸腺指数可以发现，与对照组相比，EPI-S、EPI-CL和EPI-SA-ODA组具有极显著性 差异(p<0.01)，EPI-PL和EPI-SAEL组具有显著性差异(p<0.05)；与EPI-S组相比，EPI-CL组胸腺指数 无显著性差异(p>0.05)，EPI-PL、EPI-SAEL和EPI-SA-ODA组均具有显著性差异(p<0.05)；与EPI-CL 组相比，只有EPI-SAEL组具有显著性差异(p<0.05)；EPI-SAEL和EPI-SA-ODA组存在显著性差异 (p<0.05)。综合脾指数和胸腺指数的结果，可知材料Neu5Ac-AE-AC-CH和Neu5Ac-ODA修饰的脂质体显 著降低了EPI对免疫器官的毒性，并且Neu5Ac-AE-AC-CH比Neu5Ac-ODA修饰的EPI脂质体具有更低的 毒性。
实施例23 Neu5Ac-AE-AC-CH、Neu5Ac-AE-AC-ODA修饰装载伊立替康脂质体的制备
脂质体处方及基本理化性质见下表：
制备工艺如下：
按上表中的处方称取脂质体膜材置于10mL西林瓶中，加入500μL无水乙醇并于65℃水浴中搅拌溶 解。待膜材及药物溶解后，敞开体系，继续搅拌以挥除大部分无水乙醇。以0.5mL·s-1的速度将预热至相 同温度的的乙二胺四乙酸铵溶液(200mM，pH 6.5)注入膜材中，注入5mL。65℃水浴搅拌20min，得 到脂质体初品。将初品超声分散处理(功率和时间：200W×2min+400W×6min，工作1s间歇1s)， 后，依次通过0.80、0.45、0.22μm微孔滤膜，即得空白脂质体(磷脂浓度为60mg·mL-1)。取该空白脂质 体混悬液0.3mL，上样于经离心预处理的3mL阴阳混合树脂柱(阴:阳＝2:1(v/v))，停留10min，2000rpm 离心4min，之后加0.2mL重蒸水于柱顶，2000rpm离心4min，继续加0.1mL重蒸水于柱顶，2000rpm 离心4min，合并洗脱液，得到具有NH4EDTA跨膜离子梯度的空白脂质体混悬液。按照药脂比1:4(wt/wt) 将上述梯度脂质体与5.0mg·mL-1CPT-11药物溶液混合，60℃水浴搅拌孵育，10min后取出置于冰水浴2 min终止载药，即得盐酸伊立替康脂质体(CPT-11-L)。
S180抗肿瘤实验：
将42只荷瘤小鼠随机分为7组，即对照组(Control，5％葡萄糖注射液，10mL·kg-1)、S组、CL组、 PL组、SAEL、SA-ODA和SA-AE-ODA组，每组6只。各组小鼠均于肿瘤体积到达100mm3后(接种后 第4天)开始尾静脉注射给药，每3天1次，共给药5次(接种后第4、7、10、13和16天)，各组伊立 替康的单次给药剂量均为20mg·kg-1。治疗期间每天记录小鼠死亡事件，隔天称量小鼠体质量并测量肿瘤 长径(a)和短径(b)。
评价指标同“实施例22”。
将各治疗组所记录的肿瘤体积对接种后天数作图，肿瘤生长曲线见附图24，在20天的试验周期内， 试验组抑制作用从强到弱依次为SA-AE-ODA>SAEL>PL>CL>SA-ODA>S，其中SA-ODA组的抑制率 和溶液组相当，远不如Neu5Ac-AE-AC-CH和Neu5Ac-AE-AC-ODA修饰的伊立替康脂质体，提示 Neu5Ac-AE-AC-CH和Neu5Ac-AE-AC-ODA可能具有更好的肿瘤靶向性。
肿瘤抑制率见下表：
实施例24 Neu5Ac-AE-AC-DSPE修饰装载DTX脂质体的制备
制备工艺如下：称取脂质体膜材及药物置于西林瓶中，加入500μL无水乙醇并于65℃水浴中搅拌溶 解。待膜材及药物溶解后，敞开体系，继续搅拌以挥除大部分无水乙醇。以0.5mL·s-1的速度将预热至相 同温度水化介质注入膜材中，注入5mL。65℃水浴搅拌20min，得到脂质体初品。将初品超声分散处理 (功率和时间：200W×2min+400W×2min，工作1s间歇1s)，后，依次通过0.80、0.45、0.22 μm微孔滤膜，即得DTX脂质体。实验结果表明，所得DTX的平均粒径为69.2±3.8nm，4℃放置1个 月粒径无明显变化，无药物析出，表明制剂稳定性良好。
实施例25 SA衍生物急性毒性初步考察
SA衍生物溶液的制备：取SA衍生物适量，加入50.0mg蛋黄卵磷脂E80，500μL无水乙醇溶解，加 灭菌注射用水稀释至5mL，过0.22μm微孔滤膜即得。
SA衍生物急性毒性考察方案：
81只小鼠随机分为27组，每组3只，即Neu5Ac-AE-AC-CH、Neu5Ac-AP-AC-CH、Neu5Ac-AE-BC-CH、 Neu5Ac-AP-BC-CH、Neu5Ac-AE-AC-ODA、Neu5Ac-AP-AC-ODA、Neu5Ac-AE-BC-ODA、 Neu5Ac-AP-BC-ODA(由实施例所合成)九个制剂组，每个制剂组又分为高、中、低三个剂量组， Neu5Ac-ODA制剂组为药效学试验中Neu5Ac-ODA给药剂量的10、5和1倍，即Neu5Ac-ODA组的高、 中、低分别为0.125、6.25×10-2和1.25×10-2mmol·kg-1，Neu5Ac-AE-AC-CH、Neu5Ac-AP-AC-CH、 Neu5Ac-AE-BC-CH、Neu5Ac-AP-BC-CH、Neu5Ac-AE-AC-ODA、Neu5Ac-AP-AC-ODA、 Neu5Ac-AE-BC-ODA、Neu5Ac-AP-BC-ODA制剂组为药效学试验中给药制剂中材料的100、50和10倍。 各组小鼠以不同剂量给予相应的制剂，尾静脉给药后，1h内即时记录各组小鼠的死亡时间，随后每隔1h 记录小鼠死亡时间，至24h结束试验。计算各组小鼠的平均存活时间，结果见下表。
*A.S.代表小鼠存活时间超过24h.
由上表可知，材料Neu5Ac-ODA在0.125mmol·kg-1的给药剂量下，小鼠存活时间短于1min，提示 了其潜在的毒性；材料Neu5Ac-AE-AC-CH、Neu5Ac-AP-AC-CH、Neu5Ac-AE-BC-CH、Neu5Ac-AP-BC- CH、Neu5Ac-AE-AC-ODA、Neu5Ac-AP-AC-ODA、Neu5Ac-AE-BC-ODA、Neu5Ac-AP-BC-ODA在药效 学100倍的剂量即1.25mmol·kg-1剂量下，仍未出现小鼠死亡现象，其致死剂量可能远远高于1.25mmol·k g-1。此外，分别对上述材料以1.25mmol·kg-1的剂量腹腔注射，均未观察到小鼠死亡现象，充分体现了上 述实施例中合成材料低毒性的优势，另一方面也提示了材料合成路径的不同，其毒性也可能不同。
实施例26 Neu5Ac-AE-AC-DSPE修饰DMP乳剂
制备工艺：将处方量水相55℃预热备用。将处方量油相(MCT、DMP、E80、Neu5Ac-AE-AC-DSPE) 于55℃下搅拌至全部溶解。搅拌下将预热至相同温度的水相加入油相，高速分散，即得初乳。探头超声 (200w×2min+400w×6min)处理后，过0.22μm微孔滤膜除菌即得(修饰密度约为总磷脂量的5％，n/n)。 实验结果表明，所得DMP乳剂的平均粒径为120.3±2.5nm，4℃放置1个月粒径无明显变化，也无分层 和乳滴合并现象，表明制剂稳定性良好。
实施例27 Neu5Ac-AE-AC-CH修饰固体脂质纳米粒
制备方法：适量乙醇溶解处方量的GMS、E80、TN、Neu5Ac-AE-AC-CH并于65℃搅拌下熔融；挥干 乙醇，恒速注入预热至相同温度的5％葡萄糖溶液，孵育10min；之后探头超声8min，超声工艺为200 w条件下2min，400w条件下6min，过0.22μm微孔滤膜。实验结果表明，固体纳米粒的粒径为156. 8±3.2nm，包封率为90.6±1.7％，4℃放置1个月粒径和包封率无明显变化，表明制剂稳定性良好。
实施例28 Neu5Ac-AE-AC-CH修饰囊泡
制备方法：60℃下将处方量Tween-80、S-80、CH、Neu5Ac-AE-AC-CH用适量乙醇溶解，挥干乙醇 后，搅拌条件下加入溶解有CF的灭菌注射用水溶液，使用凝胶层析除去外水相的CF，即得到包封有CF 的由SA脂质衍生物修饰的囊泡。实验结果表明，所得囊泡的平均粒径为100.6±2.8nm，4℃放置1个 月粒径无明显变化，表明制剂稳定性良好。
实施例29 Neu5Ac-AP-BC-DSPE修饰胶束
称取一定量的紫杉醇、Neu5Ac-AP-BC-DSPE共同溶解在DMSO中，药物与载体的质量比为1:15、1:30 及1:50，在磁力搅拌下缓慢滴入去离子水，继续搅拌30min。将所得的溶液装入透析袋中，室温下用去离 子水透析48h，除去DMSO，过0.45和0.22μm的微孔滤膜除去未包封的紫杉醇。采用PSSNICOMP 380激 光测定仪测定各组制剂的平均粒径在50～80nm之间，小于100nm，其中在比例为1:30中载药量为0.008， 包封率为23.6％，72h内未见结晶析出，稳定性良好。
实施例30 Neu5Ac-AE-AC-CH修饰TN乳剂
制备工艺：将处方量水相55℃预热备用。将处方量油相(MCT、DMP、E80、Neu5Ac-AE-AC-CH) 于55℃下搅拌至全部溶解。搅拌下将预热至相同温度的水相加入油相，高速分散，即得初乳。探头超声 (200w×2min+400w×6min)处理后，过0.80、0.45、0.22μm微孔滤膜即得(修饰密度约为总磷脂量的5％， n/n)。实验结果表明，所得TN乳剂的平均粒径为138.3±2.5nm，4℃放置1个月粒径无明显变化，也无 分层和乳滴合并现象，表明制剂稳定性良好。
实施例31 Neu5Ac-AE-AC-PEG2000-DSPE胶束的制备
制备工艺：将处方量的Q10、E80和Neu5Ac-AE-AC-PEG2000-DSPE(由实施例所合成)用适量乙醇溶解， 将乙醇挥干后，在60℃水浴超声情况下加入处方量注射用水即得。使用粒径测定仪测得所得胶束粒径为 24±3nm。
实施例31 Neu5Ac-AE-AC-SA修饰的DTX脂质体的制备
制备工艺：将处方量的EPG、DTX和Neu5Ac-AE-AC-SA(由实施例所合成)用适量乙醇溶解，65℃ 将乙醇挥去一部分后，在65℃水浴下加入处方量注射用水，65℃水浴搅拌20min，得到脂质体初品。将 初品超声分散处理(400W×2min，工作1s间歇1s)后，依次通过0.45、0.22μm微孔滤膜，即得DTX 脂质体。使用粒径测定仪测得所得DTX脂质体粒径为72±5nm。
实施例31 Neu5Ac-AE-MAC-DSPE混合胶束制备
称取上述处方量的TPGS、DTX、Neu5Ac-AE-MAC-DSPE共同溶解在无水乙醇中。快速注入注射用水5.0 mL，振荡混匀，过0.22μm微孔滤膜即得载药胶束。采用PSSNICOMP 380激光测定仪测定各组制剂的平 均粒径在20～40nm之间，载药量为0.028，包封率为98.0％，72h内未见结晶析出，稳定性良好。

Claims (9)

1.一种含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，具有式(I)的结构：
并且结构中R1代表-OH，-HNCOCH3，-NHCOCH2OH中的一种；S-R2-HN片段来自SH-R2-NH2，SH-R2-NH2是含有伯胺和巯基的直链或支链烷烃、巯基聚乙二醇氨基中的一种；R3片段来自含有α，β-不饱和共轭羰基的化合物，所述α，β-不饱和共轭羰基的化合物是丙烯酰氯、2-甲基丙烯酰氯、2-丁烯酰氯、丙烯酸酐、2-甲基丙烯酸酐、丁烯酸酐、2-甲基丁烯酸酐、丙烯酸、2-甲基丙烯酸、2-丁烯酸、2-甲基-2-丁烯酸、2-戊烯酸、2-甲基-2-戊烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、2-甲基丙烯酸甲酯和2-甲基丙烯酸乙酯、2-丁烯酸甲酯、2-丁烯酸乙酯、2-甲基2-丁烯酸甲酯、2-甲基2-丁烯酸乙酯、2-戊烯酸甲酯、2-戊烯酸乙酯；R4片段来自R4-H，R4-H是含有羟基或伯胺基团的化合物，选自二硬脂酰基磷脂酰甘油、二棕榈酰基磷脂酰甘油、二油酰基磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、大豆磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰甘油、硬脂酰油酰磷脂酰甘油、硬脂酰亚油酰磷脂酰甘油、棕榈酰油酰磷脂酰甘油、棕榈酰亚油酰磷脂酰甘油、二癸酰磷脂酰甘油、二辛酰磷脂酰甘油、二己酰磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二棕榈酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二油酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二月桂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二十四醇、二十二醇、二十醇、十八醇、十六醇、十四醇、十二醇、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂酰乙醇胺、蛋黄磷脂酰基乙醇胺、硬脂酰油酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰亚油酰磷脂酰乙醇胺、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、棕榈酰亚油酰磷脂酰乙醇胺、二癸酰磷脂酰乙醇胺、二辛酰磷脂酰乙醇胺、二己酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基、二棕榈酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基、二油酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基、二月桂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇氨基、二十二胺、二十胺、十八胺、十六胺、十四胺、十二胺或3-甲基-n-戊胺。
2.如权利要求1所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述SH-R2-NH2是2-巯基乙胺、3-巯基-1-丙胺、2-巯基-1-丙胺、4-巯基-1-丁胺、3-巯基-1-丁胺、2-巯基-1-丁胺、1-巯基-2-丁胺、1-巯基-3-丁胺、5-巯基-1-戊胺、4-巯基-1-戊胺、3-巯基-1-戊胺、2-巯基-1-戊胺、5-巯基-2-戊胺、1-巯基-3-戊胺、1-巯基-2-戊胺、6-巯基-1-己胺、5-巯基-1-己胺、4-巯基-1-己胺、3-巯基-1-己胺、2-巯基-1-己胺、1-巯基-5-己胺、1-巯基-4-己胺、1-巯基-3-己胺、1-巯基-2-己胺、巯基聚乙二醇氨基，所述巯基聚乙二醇氨基中聚乙二醇片段的分子量为100-10000道尔顿。
3.如权利要求1所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述R1为-HNCOCH3。
4.如权利要求3所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述SH-R2-NH2选自2-巯基乙胺、3-巯基-1-丙胺、2-巯基-1-丙胺、4-巯基-1-丁胺、3-巯基-1-丁胺、2-巯基-1-丁胺、1-巯基-2-丁胺、1-巯基-3-丁胺、5-巯基-1-戊胺、4-巯基-1-戊胺、3-巯基-1-戊胺、2-巯基-1-戊胺、5-巯基-2-戊胺、1-巯基-3-戊胺、1-巯基-2-戊胺、6-巯基-1-己胺、5-巯基-1-己胺、4-巯基-1-己胺、3-巯基-1-己胺、2-巯基-1-己胺、1-巯基-5-己胺、1-巯基-4-己胺、1-巯基-3-己胺、1-巯基-2-己胺、巯基聚乙二醇氨基中的一种，所述α，β-不饱和共轭羰基的化合物是丙烯酰氯、2-甲基丙烯酰氯、2-丁烯酰氯、丙烯酸酐、2-甲基丙烯酸酐、丁烯酸酐、2-甲基丁烯酸酐、丙烯酸、2-甲基丙烯酸、2-丁烯酸、2-甲基-2-丁烯酸、2-戊烯酸、2-甲基-2-戊烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、2-甲基丙烯酸甲酯和2-甲基丙烯酸乙酯、2-丁烯酸甲酯、2-丁烯酸乙酯、2-甲基2-丁烯酸甲酯、2-甲基2-丁烯酸乙酯、2-戊烯酸甲酯、2-戊烯酸乙酯中的一种，所述R4-H是选自二硬脂酰基磷脂酰甘油、二棕榈酰基磷脂酰甘油、二油酰基磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、大豆磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰基甘油、硬脂酰油酰磷脂酰甘油、硬脂酰亚油酰磷脂酰甘油、棕榈酰油酰磷脂酰甘油、棕榈酰亚油酰磷脂酰甘油、二癸酰磷脂酰甘油、二辛酰磷脂酰甘油、二己酰磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二棕榈酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二油酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二月桂酰基磷脂酰基乙醇胺聚乙二醇羟基、二十四醇、二十二醇、二十醇、十八醇、十六醇、十四醇、十二醇、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、十八胺、十六胺、十四胺、十二胺、十胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000氨基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇5000氨基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000氨基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇5000氨基中的一种。
5.如权利要求4所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述SH-R2-NH2选自2-巯基乙胺、3-巯基1-丙胺、4-巯基-1-丁胺、5-巯基-1-戊胺、6-巯基-1-己胺、巯基聚乙二醇氨基中的一种。
6.如权利要求4所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述SH-R2-NH2选自2-巯基乙胺、3-巯基1-丙胺、4-巯基-1-丁胺、5-巯基-1-戊胺、6-巯基-1-己胺、NH2-PEG400-SH中的一种。
7.如权利要求4所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述α，β-不饱和共轭羰基的化合物选自丙烯酰氯、2-甲基丙烯酰氯、2-丁烯酰氯。
8.如权利要求4所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物，其特征在于，所述R4-H选自胆固醇、十八醇、二硬脂酰基磷脂酰甘油、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000羟基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000氨基、十八胺中的一种。
9.权利要求1-8中任何一项所述的含有唾液酸基团的脂质衍生物单独或与其他物质联合在制备和修饰微粒制剂中的应用。
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