JPH08233818A - イムノアッセイにおける検量方法及び患者体液の試験方法 - Google Patents
イムノアッセイにおける検量方法及び患者体液の試験方法Info
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- JPH08233818A JPH08233818A JP7333547A JP33354795A JPH08233818A JP H08233818 A JPH08233818 A JP H08233818A JP 7333547 A JP7333547 A JP 7333547A JP 33354795 A JP33354795 A JP 33354795A JP H08233818 A JPH08233818 A JP H08233818A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 イムノアッセイにおける妨害因子による偏り
を減少させること。 【解決手段】 乾式試験要素を用いてイムノアッセイを
実施する場合に特定の妨害因子によって引き起こされる
偏りを減少させる方法であって、（ａ）既知量の特定の
妨害因子と既知量の標的アナライトを含む少なくとも１
種の液体による濃度変化の速度が、既知量の標的アナラ
イトを含むが妨害因子は無視できる量でしか存在しない
液体による濃度変化の速度と、交差するか又は差が最小
になる時間を確定することによって、標的アナライトの
イムノアッセイを検量する工程と、（ｂ）工程（ａ）で
確定した交差時間に対応する時間において、患者試料の
未知量の標的アナライトの検定を実施する工程とを含
む。
を減少させること。 【解決手段】 乾式試験要素を用いてイムノアッセイを
実施する場合に特定の妨害因子によって引き起こされる
偏りを減少させる方法であって、（ａ）既知量の特定の
妨害因子と既知量の標的アナライトを含む少なくとも１
種の液体による濃度変化の速度が、既知量の標的アナラ
イトを含むが妨害因子は無視できる量でしか存在しない
液体による濃度変化の速度と、交差するか又は差が最小
になる時間を確定することによって、標的アナライトの
イムノアッセイを検量する工程と、（ｂ）工程（ａ）で
確定した交差時間に対応する時間において、患者試料の
未知量の標的アナライトの検定を実施する工程とを含
む。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、乾式スライド試験
要素を用いた妨害因子（特にヘモグロビン）の影響を受
けやすいイムノアッセイの検量及び試験方法に関する。
要素を用いた妨害因子（特にヘモグロビン）の影響を受
けやすいイムノアッセイの検量及び試験方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】通常、イムノアッセイは速度検定として
行われる、すなわち、時間経過による変化の割合、例え
ば色素濃度の増加速度又は低下速度として測定される。
この色素による化学的方法は、例えば、酵素を利用して
ロイコ色素を触媒反応により着色色素へ変換する方法と
することができる。このためによく用いられる種類の酵
素はオキシダーゼ、好ましくはペルオキシダーゼ（又は
ＰＯＤ）である。該ペルオキシダーゼは西洋ワサビペル
オキシダーゼ（以降、ＨＲＰと称する）であることが最
も好ましい。イムノアッセイには、過剰量のＰＯＤを使
用することができる他のアッセイとは異なり、限られた
量のＰＯＤを測定する方法がある。（過剰量によればＰ
ＯＤに類似する又はこれと反応する妨害因子(interfere
nt) に対する感受性は比較的低下することは当然であ
る。）通常、イムノアッセイは「競争法」又は「サンド
イッチ法」のいずれかで行われる。「競争法」では、測
定すべき標的アナライトの標識化類似体を、該標的アナ
ライト又は標的アナライト類似体のいずれかと反応しう
る一定量の適当な固定化抗体に対し、該アナライトと競
争するように配する。該類似体上の標識は、「遊離し
た」形でも、また複合化された（すなわち、反応した）
形でも、いずれにおいても適宜検出することができる。
そうすると、その信号の大きさによって、試験した試料
中の標的アナライトの量がわかる。
行われる、すなわち、時間経過による変化の割合、例え
ば色素濃度の増加速度又は低下速度として測定される。
この色素による化学的方法は、例えば、酵素を利用して
ロイコ色素を触媒反応により着色色素へ変換する方法と
することができる。このためによく用いられる種類の酵
素はオキシダーゼ、好ましくはペルオキシダーゼ（又は
ＰＯＤ）である。該ペルオキシダーゼは西洋ワサビペル
オキシダーゼ（以降、ＨＲＰと称する）であることが最
も好ましい。イムノアッセイには、過剰量のＰＯＤを使
用することができる他のアッセイとは異なり、限られた
量のＰＯＤを測定する方法がある。（過剰量によればＰ
ＯＤに類似する又はこれと反応する妨害因子(interfere
nt) に対する感受性は比較的低下することは当然であ
る。）通常、イムノアッセイは「競争法」又は「サンド
イッチ法」のいずれかで行われる。「競争法」では、測
定すべき標的アナライトの標識化類似体を、該標的アナ
ライト又は標的アナライト類似体のいずれかと反応しう
る一定量の適当な固定化抗体に対し、該アナライトと競
争するように配する。該類似体上の標識は、「遊離し
た」形でも、また複合化された（すなわち、反応した）
形でも、いずれにおいても適宜検出することができる。
そうすると、その信号の大きさによって、試験した試料
中の標的アナライトの量がわかる。
【０００３】別のイムノアッセイ様式である「サンドイ
ッチ」イムノアッセイ又はイムノメトリックアッセイで
は、標的アナライトを、該標的アナライトの異なるエピ
トープ部位に結合する２種以上のレセプター分子、例え
ば抗体、と接触させる。レセプター分子の一方を適当に
標識化しておき、もう一方を固体支持体に固定化してお
くか又はそれに固定化できるようにしておくことが典型
的である。標的アナライトの量は、標的アナライトと２
種のレセプターとの間で結合された複合体の量に直接比
例する。これらのアッセイのいずれの場合も、ＨＲＰを
使用する場合にはこれが「標識」の一部となる。このた
め、イムノアッセイでは、過剰量のＨＲＰを存在させる
ことにより妨害因子の存在による変化を克服することは
できない。
ッチ」イムノアッセイ又はイムノメトリックアッセイで
は、標的アナライトを、該標的アナライトの異なるエピ
トープ部位に結合する２種以上のレセプター分子、例え
ば抗体、と接触させる。レセプター分子の一方を適当に
標識化しておき、もう一方を固体支持体に固定化してお
くか又はそれに固定化できるようにしておくことが典型
的である。標的アナライトの量は、標的アナライトと２
種のレセプターとの間で結合された複合体の量に直接比
例する。これらのアッセイのいずれの場合も、ＨＲＰを
使用する場合にはこれが「標識」の一部となる。このた
め、イムノアッセイでは、過剰量のＨＲＰを存在させる
ことにより妨害因子の存在による変化を克服することは
できない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】当該技術分野では、こ
のようなペルオキシダーゼによる化学的方法は、イムノ
アッセイに採用した場合、ヘモグロビンのような物質に
よって妨害を受けることが知られている。すなわち、ヘ
モグロビンがいくらかでも存在すると、多かれ少なかれ
偏り(bias)の原因となる。液体によるイムノアッセイで
は、通常この偏りを希釈によって補正する。しかしなが
ら、スライド試験要素を用いる場合には、このような希
釈による補正を利用することができない。その理由は、
手順を複雑にし、誤差を追加し、また元来低濃度の特定
のアナライトの濃度をさらに低下させるからである。血
液試料中にはヘモグロビンが未知量で存在する場合が多
く、このようなイムノアッセイにおいてヘモグロビンに
よる予想できない偏りを何とか補正することが、長年に
わたる課題であった。確かに、ヘモグロビンの（もしあ
れば）存在量を最初に確認しておけば補正は可能である
が、この確認をイムノアッセイの実施前に行いたいと思
う実験者はほとんどいない。
のようなペルオキシダーゼによる化学的方法は、イムノ
アッセイに採用した場合、ヘモグロビンのような物質に
よって妨害を受けることが知られている。すなわち、ヘ
モグロビンがいくらかでも存在すると、多かれ少なかれ
偏り(bias)の原因となる。液体によるイムノアッセイで
は、通常この偏りを希釈によって補正する。しかしなが
ら、スライド試験要素を用いる場合には、このような希
釈による補正を利用することができない。その理由は、
手順を複雑にし、誤差を追加し、また元来低濃度の特定
のアナライトの濃度をさらに低下させるからである。血
液試料中にはヘモグロビンが未知量で存在する場合が多
く、このようなイムノアッセイにおいてヘモグロビンに
よる予想できない偏りを何とか補正することが、長年に
わたる課題であった。確かに、ヘモグロビンの（もしあ
れば）存在量を最初に確認しておけば補正は可能である
が、この確認をイムノアッセイの実施前に行いたいと思
う実験者はほとんどいない。
【０００５】
【課題を解決するための手段】我々は、ヘモグロビンに
よる妨害の特性をいくつか発見し、このおかげで上記の
問題を解決することができた。すなわち、我々が発見し
た点は、（１）一定濃度のヘモグロビンのような妨害因
子の影響速度、すなわち偏り効果が、アナライトの濃度
に依存して変動する点と、（２）特定量の標的アナライ
トと一定量の、例えば２５０ｍｇ／ｄｌの妨害因子、例
えばヘモグロビンとによって発生する信号の変化速度
が、同量の標的アナライトと零量の妨害因子（ヘモグロ
ビン）とによって発生する信号の速度変化よりも迅速
に、時間と共に低下する点である。後者の意味するとこ
ろは、我々は、任意量のすべてのイムノアッセイのアナ
ライトについて、ヘモグロビンによる偏りが零又は最小
定常状態になる、後に定義する時間の交差点(cross-ove
r point)が存在することを発見したということである。
とりわけ、本発明を成すに至ったものは後者の交差時間
である。
よる妨害の特性をいくつか発見し、このおかげで上記の
問題を解決することができた。すなわち、我々が発見し
た点は、（１）一定濃度のヘモグロビンのような妨害因
子の影響速度、すなわち偏り効果が、アナライトの濃度
に依存して変動する点と、（２）特定量の標的アナライ
トと一定量の、例えば２５０ｍｇ／ｄｌの妨害因子、例
えばヘモグロビンとによって発生する信号の変化速度
が、同量の標的アナライトと零量の妨害因子（ヘモグロ
ビン）とによって発生する信号の速度変化よりも迅速
に、時間と共に低下する点である。後者の意味するとこ
ろは、我々は、任意量のすべてのイムノアッセイのアナ
ライトについて、ヘモグロビンによる偏りが零又は最小
定常状態になる、後に定義する時間の交差点(cross-ove
r point)が存在することを発見したということである。
とりわけ、本発明を成すに至ったものは後者の交差時間
である。
【０００６】より具体的には、本発明の一態様による
と、基質と所定の限定された量で存在するペルオキシダ
ーゼとを含み検出可能な濃度変化を異なる速度で生ぜし
める検出試薬を含有する乾式試験要素を用いてイムノア
ッセイを実施する場合に特定の妨害因子によって引き起
こされる偏りを減少させる方法が提供される。本発明の
方法は、（ａ）既知量の特定の妨害因子と既知量の標的
アナライトを含む少なくとも１種の液体と接触した該標
的アナライトに対する第一組の試験要素が生ぜしめる濃
度変化の速度が、既知量の標的アナライトを含むが妨害
因子は無視できる量でしか存在しない液体と接触した、
前記第一組の試験要素と実質的に同等である第二組の試
験要素が生ぜしめる濃度変化の速度と、交差するか又は
差が最小になる時間を確定することによって、標的アナ
ライトのイムノアッセイを検量する工程と、（ｂ）工程
（ａ）で確定した交差時間に対応する時間において、前
記第一組又は第二組の試験要素のうちの選ばれた要素と
接触する該試料によって引き起こされる該選ばれた要素
における変化速度を読み取ることによって、患者試料の
未知量の標的アナライトの検定を実施する工程とを含
む。
と、基質と所定の限定された量で存在するペルオキシダ
ーゼとを含み検出可能な濃度変化を異なる速度で生ぜし
める検出試薬を含有する乾式試験要素を用いてイムノア
ッセイを実施する場合に特定の妨害因子によって引き起
こされる偏りを減少させる方法が提供される。本発明の
方法は、（ａ）既知量の特定の妨害因子と既知量の標的
アナライトを含む少なくとも１種の液体と接触した該標
的アナライトに対する第一組の試験要素が生ぜしめる濃
度変化の速度が、既知量の標的アナライトを含むが妨害
因子は無視できる量でしか存在しない液体と接触した、
前記第一組の試験要素と実質的に同等である第二組の試
験要素が生ぜしめる濃度変化の速度と、交差するか又は
差が最小になる時間を確定することによって、標的アナ
ライトのイムノアッセイを検量する工程と、（ｂ）工程
（ａ）で確定した交差時間に対応する時間において、前
記第一組又は第二組の試験要素のうちの選ばれた要素と
接触する該試料によって引き起こされる該選ばれた要素
における変化速度を読み取ることによって、患者試料の
未知量の標的アナライトの検定を実施する工程とを含
む。
【０００７】別の態様によると、西洋ワサビペルオキシ
ダーゼと基質を用いて経時変化する色素濃度を生ぜしめ
るイムノアッセイにおいて標的アナライトを試験するた
めの検量値におけるヘモグロビンによる偏りを減少させ
る検量方法が提供される。この方法は、（ａ）同組成の
複数のスライド試験要素の一部を用いて複数の時間につ
いて、予め選定した異なる２種の既知量の標的アナライ
トと零量のヘモグロビンとを含む少なくとも２種の液体
によって得られる色素濃度の変化速度を確定する工程
と、（ｂ）同組成のさらに別のスライド試験要素を用い
て複数の時間について、前記少なくとも２種の液体のい
ずれにも同等に予め選定した無視できない量のヘモグロ
ビンを加えた少なくとも２種の液体によって得られる色
素濃度の変化速度を確定する工程と、（ｃ）前記無視で
きない量のヘモグロビンを含有する前記少なくとも２種
の液体についての変化速度が、対応するヘモグロビンを
含まない２種の液体についての変化速度と交差する又は
差が最小になる時間点を求めることにより、偏りが最も
少ない交差時間を得る工程と、（ｄ）前記少なくとも２
種の液体の一方について、これに対応する初期の変化速
度を示す後の試料液の試験のための最適読取り時間とし
て、前記交差時間を選定する工程とを含む。
ダーゼと基質を用いて経時変化する色素濃度を生ぜしめ
るイムノアッセイにおいて標的アナライトを試験するた
めの検量値におけるヘモグロビンによる偏りを減少させ
る検量方法が提供される。この方法は、（ａ）同組成の
複数のスライド試験要素の一部を用いて複数の時間につ
いて、予め選定した異なる２種の既知量の標的アナライ
トと零量のヘモグロビンとを含む少なくとも２種の液体
によって得られる色素濃度の変化速度を確定する工程
と、（ｂ）同組成のさらに別のスライド試験要素を用い
て複数の時間について、前記少なくとも２種の液体のい
ずれにも同等に予め選定した無視できない量のヘモグロ
ビンを加えた少なくとも２種の液体によって得られる色
素濃度の変化速度を確定する工程と、（ｃ）前記無視で
きない量のヘモグロビンを含有する前記少なくとも２種
の液体についての変化速度が、対応するヘモグロビンを
含まない２種の液体についての変化速度と交差する又は
差が最小になる時間点を求めることにより、偏りが最も
少ない交差時間を得る工程と、（ｄ）前記少なくとも２
種の液体の一方について、これに対応する初期の変化速
度を示す後の試料液の試験のための最適読取り時間とし
て、前記交差時間を選定する工程とを含む。
【０００８】本発明のさらに別の態様によると、西洋ワ
サビペルオキシダーゼとロイコ色素を用いて経時変化す
る色素濃度を生ぜしめるイムノアッセイにおいて患者体
液を標的アナライトについて試験するためのヘモグロビ
ンによる偏りを減少する方法が提供される。この方法
は、（ａ）上記した検量方法により算出された最適読取
り時間として定めた少なくとも一つの交差時間点を有す
る分析装置において、特定の患者体液の未知量のアナラ
イトについて濃度の経時変化の速度を確定する工程と、
（ｂ）前記定めた交差時間のいずれよりも以前に固定し
た時間点を初期読取り時間として選定する工程と、
（ｃ）工程（ａ）で確定した値から工程（ｂ）で選定し
た時間点に対する初期速度を確定する工程と、（ｄ）工
程（ｃ）で確定した初期速度に対して、該初期速度に対
応する最適交差読取り時間を確定する工程と、（ｅ）工
程（ａ）で測定した速度から、前記最適読取り時間にお
ける患者試料の変化速度を確定する工程とを含む。
サビペルオキシダーゼとロイコ色素を用いて経時変化す
る色素濃度を生ぜしめるイムノアッセイにおいて患者体
液を標的アナライトについて試験するためのヘモグロビ
ンによる偏りを減少する方法が提供される。この方法
は、（ａ）上記した検量方法により算出された最適読取
り時間として定めた少なくとも一つの交差時間点を有す
る分析装置において、特定の患者体液の未知量のアナラ
イトについて濃度の経時変化の速度を確定する工程と、
（ｂ）前記定めた交差時間のいずれよりも以前に固定し
た時間点を初期読取り時間として選定する工程と、
（ｃ）工程（ａ）で確定した値から工程（ｂ）で選定し
た時間点に対する初期速度を確定する工程と、（ｄ）工
程（ｃ）で確定した初期速度に対して、該初期速度に対
応する最適交差読取り時間を確定する工程と、（ｅ）工
程（ａ）で測定した速度から、前記最適読取り時間にお
ける患者試料の変化速度を確定する工程とを含む。
【０００９】以下の議論は特定の好ましい実施態様に関
するものであり、ｘ量の標的アナライトと無視できない
量のヘモグロビンとを含む第一の液体と、前記ｘ量の標
的アナライトと零量のヘモグロビンとを含む第二の液体
とについて、交差時間を確定するものである。さらに、
本発明は、ヘモグロビン以外の妨害因子については、或
いは第二の液体が無視できる量の（本明細書中では０〜
５０ｍｇ／ｄｌを意味する）ヘモグロビンを有し且つ、
これら２種の液体がそれらの速度が正確に同等になる時
間には到達しない場合には、有用である。このように、
本明細書中の用語「交差」とは、それぞれ２種の液体を
有するスライド試験要素の変化速度が実質的に同等であ
る場合、又はそれらが偏りが最小である最小差定常状態
に最初に到達した場合の、極低濃度の標的アナライトに
対して特に起こりうる状態を意味する。
するものであり、ｘ量の標的アナライトと無視できない
量のヘモグロビンとを含む第一の液体と、前記ｘ量の標
的アナライトと零量のヘモグロビンとを含む第二の液体
とについて、交差時間を確定するものである。さらに、
本発明は、ヘモグロビン以外の妨害因子については、或
いは第二の液体が無視できる量の（本明細書中では０〜
５０ｍｇ／ｄｌを意味する）ヘモグロビンを有し且つ、
これら２種の液体がそれらの速度が正確に同等になる時
間には到達しない場合には、有用である。このように、
本明細書中の用語「交差」とは、それぞれ２種の液体を
有するスライド試験要素の変化速度が実質的に同等であ
る場合、又はそれらが偏りが最小である最小差定常状態
に最初に到達した場合の、極低濃度の標的アナライトに
対して特に起こりうる状態を意味する。
【００１０】さらに、好ましい実施態様によるアッセイ
は、特定のイムノアッセイに対する色素濃度の変化速度
が特に好ましいアナライトについて示したように経時低
下し、且つその最適読取り時間値が、ヘモグロビン濃度
が既知の３種の検量液体から得られた二つより多い、す
なわち三つの交差点を用いて決定される連続した多項式
曲線として示されることを特徴とする。さらに、本発明
は、アナライトの種類とは無関係に、また最適読取り時
間が、検量体の二つより多い交差点又は二つだけから得
られたそれぞれ多項式関数又は線形関数として計算され
たグラフプロット又は参照用テーブルであるかには関係
なく、イムノアッセイ化学法がＰＯＤを使用して色素濃
度を生ぜしめる限り、サンドイッチ法及び競争法のイム
ノアッセイに有用である。
は、特定のイムノアッセイに対する色素濃度の変化速度
が特に好ましいアナライトについて示したように経時低
下し、且つその最適読取り時間値が、ヘモグロビン濃度
が既知の３種の検量液体から得られた二つより多い、す
なわち三つの交差点を用いて決定される連続した多項式
曲線として示されることを特徴とする。さらに、本発明
は、アナライトの種類とは無関係に、また最適読取り時
間が、検量体の二つより多い交差点又は二つだけから得
られたそれぞれ多項式関数又は線形関数として計算され
たグラフプロット又は参照用テーブルであるかには関係
なく、イムノアッセイ化学法がＰＯＤを使用して色素濃
度を生ぜしめる限り、サンドイッチ法及び競争法のイム
ノアッセイに有用である。
【００１１】こうして、本発明は、ヘモグロビンによる
偏りを補正した特に好ましいイムノアナライト、すなわ
ちフェニトイン及びジゴキシンについて記載する。他の
妨害因子による偏りについては、その妨害因子（以降、
「特定の妨害因子」と称する）によって、その無視でき
る量と無視できない量との両方で試験した場合に変化速
度測定値の本明細書で定義する交差時間点が得られるな
らば、同様に減少させることができる。このような妨害
因子の別の例として、ゲンチシン酸、アスコルビン酸、
ジピロン、等の還元性試薬が含まれる。フェニトイン及
びジゴキシンのアッセイに好適なスライド試験要素に
は、下記のものが含まれる。
偏りを補正した特に好ましいイムノアナライト、すなわ
ちフェニトイン及びジゴキシンについて記載する。他の
妨害因子による偏りについては、その妨害因子（以降、
「特定の妨害因子」と称する）によって、その無視でき
る量と無視できない量との両方で試験した場合に変化速
度測定値の本明細書で定義する交差時間点が得られるな
らば、同様に減少させることができる。このような妨害
因子の別の例として、ゲンチシン酸、アスコルビン酸、
ジピロン、等の還元性試薬が含まれる。フェニトイン及
びジゴキシンのアッセイに好適なスライド試験要素に
は、下記のものが含まれる。
【００１２】ジゴキシンを検出するためのスライド試験
要素 ジゴキシンを検出するための要素を、従前はイーストマ
ン・コダック社に属していたクリニカル・ダイアグノス
ティックス・ディビジョンから商品名「Ｅｋｔａｃｈｅ
ｍ」（登録商標）で市販されているスライド試験要素の
常用の手順と一般構造を採用し、但し以下の塗布組成に
よって作製した。以下に詳細に記載するグラビア及びレ
セプターコーティングは、多孔質展開コーティング中に
拡散し、乾式多孔質展開層の境界付近に別の区域を形成
した。要素の構造 ：（ ）内は乾燥被覆量（ｇ／ｍ2 ）
要素 ジゴキシンを検出するための要素を、従前はイーストマ
ン・コダック社に属していたクリニカル・ダイアグノス
ティックス・ディビジョンから商品名「Ｅｋｔａｃｈｅ
ｍ」（登録商標）で市販されているスライド試験要素の
常用の手順と一般構造を採用し、但し以下の塗布組成に
よって作製した。以下に詳細に記載するグラビア及びレ
セプターコーティングは、多孔質展開コーティング中に
拡散し、乾式多孔質展開層の境界付近に別の区域を形成
した。要素の構造 ：（ ）内は乾燥被覆量（ｇ／ｍ2 ）
【００１３】〔グラビアコーティング〕 ジゴキシン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（６×１
０-6） 牛血清アルブミン（２．１５×１０-4） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（９．９５×１０-3） ３−（Ｎ−モルフォリノ）−プロパンスルホン酸緩衝剤
（ｐＨ７）（４．５０×１０-3） ＴＲＩＴＯＮ（商品名）Ｘ−１００非イオン性界面活性
剤（４．３０×１０-3） ポリアクリルアミド（１．０８×１０-3） ４，５−ジヒドロキシ−３−（６，８−ジスルホ−２−
ナフチルアゾ）−２，７−ナフタレンジスルホン酸ナト
リウム（５．３８×１０-2）
０-6） 牛血清アルブミン（２．１５×１０-4） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（９．９５×１０-3） ３−（Ｎ−モルフォリノ）−プロパンスルホン酸緩衝剤
（ｐＨ７）（４．５０×１０-3） ＴＲＩＴＯＮ（商品名）Ｘ−１００非イオン性界面活性
剤（４．３０×１０-3） ポリアクリルアミド（１．０８×１０-3） ４，５−ジヒドロキシ−３−（６，８−ジスルホ−２−
ナフチルアゾ）−２，７−ナフタレンジスルホン酸ナト
リウム（５．３８×１０-2）
【００１４】〔展開層〕 ポリ（ビニルトルエン−コ−メタクリル酸）（重量比９
８：２）ビーズ（平均粒径３０μｍ）（１３０） ポリ（アクリル酸メチル−コ−２−アクリルアミド−２
−メチルプロパンスルホン酸ナトリウム−コ−２−アセ
トアセトキシエチルメタクリレート）（重量比９０：
４：６）（２．５８３） Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミ
ノエタンスルホン酸緩衝剤（ｐＨ７）（０．２１９） ジメドン（０．４５） ４，５−ビス（４−ジメチルアミノフェニル）−２−
（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−イ
ミダゾール系ロイコ色素（０．２） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（０．２２） 牛血清アルブミン（１．０） マンニトール（１．０） 硫酸バナジル（０．０４） グリセロール（２．０） ポリ〔スチレン−コ−ｐ−（２−クロロエチル−スルホ
ニルメチル）スチレン（重量比９５：５）ビーズ（平均
粒径０．５μｍ）に共有結合させた抗ジゴキシンモノク
ローナル抗体（０．０１５）
８：２）ビーズ（平均粒径３０μｍ）（１３０） ポリ（アクリル酸メチル−コ−２−アクリルアミド−２
−メチルプロパンスルホン酸ナトリウム−コ−２−アセ
トアセトキシエチルメタクリレート）（重量比９０：
４：６）（２．５８３） Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミ
ノエタンスルホン酸緩衝剤（ｐＨ７）（０．２１９） ジメドン（０．４５） ４，５−ビス（４−ジメチルアミノフェニル）−２−
（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−イ
ミダゾール系ロイコ色素（０．２） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（０．２２） 牛血清アルブミン（１．０） マンニトール（１．０） 硫酸バナジル（０．０４） グリセロール（２．０） ポリ〔スチレン−コ−ｐ−（２−クロロエチル−スルホ
ニルメチル）スチレン（重量比９５：５）ビーズ（平均
粒径０．５μｍ）に共有結合させた抗ジゴキシンモノク
ローナル抗体（０．０１５）
【００１５】〔試薬層コーティング〕 硬膜ゼラチン（１０．１５） Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミ
ノエタンスルホン酸緩衝剤（ｐＨ７）（４．５８） ＴＲＩＴＯＮ（商品名）Ｘ−１００非イオン界面活性剤
（０．０２） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（０．４４） 〔ポリ（エチレンテレフタレート）支持体〕
ノエタンスルホン酸緩衝剤（ｐＨ７）（４．５８） ＴＲＩＴＯＮ（商品名）Ｘ−１００非イオン界面活性剤
（０．０２） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（０．４４） 〔ポリ（エチレンテレフタレート）支持体〕
【００１６】ジフェニルヒダントイン（フェニトイン）
を検出するためのスライド試験要素 上記のジゴキシン用要素と類似した、但しジフェニルヒ
ダントインの検出に適した試薬を有する要素を作製し
た。これらの要素は常用の方法と装置により塗布し、以
下の基本的塗布組成と構造を有するものとした。要素の構造 ：（ ）内は乾燥被覆量（ｇ／ｍ2 ）
を検出するためのスライド試験要素 上記のジゴキシン用要素と類似した、但しジフェニルヒ
ダントインの検出に適した試薬を有する要素を作製し
た。これらの要素は常用の方法と装置により塗布し、以
下の基本的塗布組成と構造を有するものとした。要素の構造 ：（ ）内は乾燥被覆量（ｇ／ｍ2 ）
【００１７】〔グラビアコーティング〕 ジフェニルヒダントイン−西洋ワサビペルオキシダーゼ
複合体（６×１０-6）牛血清アルブミン（２．１５×１
０-4） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（９．９５×１０-3） ３−（Ｎ−モルフォリノ）−プロパンスルホン酸緩衝剤
（ｐＨ７）（４．５０×１０-3） ＴＲＩＴＯＮ（商品名）Ｘ−１００非イオン性界面活性
剤（４．３０×１０-3） ポリアクリルアミド（１．０８×１０-3） ４，５−ジヒドロキシ−３−（６，８−ジスルホ−２−
ナフチルアゾ）−２，７−ナフタレンジスルホン酸ナト
リウム（５．３８×１０-2）
複合体（６×１０-6）牛血清アルブミン（２．１５×１
０-4） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（９．９５×１０-3） ３−（Ｎ−モルフォリノ）−プロパンスルホン酸緩衝剤
（ｐＨ７）（４．５０×１０-3） ＴＲＩＴＯＮ（商品名）Ｘ−１００非イオン性界面活性
剤（４．３０×１０-3） ポリアクリルアミド（１．０８×１０-3） ４，５−ジヒドロキシ−３−（６，８−ジスルホ−２−
ナフチルアゾ）−２，７−ナフタレンジスルホン酸ナト
リウム（５．３８×１０-2）
【００１８】〔展開層〕 ポリ（ビニルトルエン−コ−メタクリル酸）（重量比９
８：２）ビーズ（平均粒径３０μｍ）（１３０） ポリ（アクリル酸メチル−コ−２−アクリルアミド−２
−メチルプロパンスルホン酸ナトリウム−コ−２−アセ
トアセトキシエチルメタクリレート）（重量比９０：
４：６）（２．５８３） Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミ
ノエタンスルホン酸緩衝剤（ｐＨ７）（０．２１９） Ｏｌｉｎ界面活性剤１０Ｇ非イオン界面活性剤（０．２
３８） ジメドン（０．４５） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（０．２２） 牛血清アルブミン（１．０） マンニトール（１．０） 硫酸バナジル（０．０４） グリセロール（２．０）
８：２）ビーズ（平均粒径３０μｍ）（１３０） ポリ（アクリル酸メチル−コ−２−アクリルアミド−２
−メチルプロパンスルホン酸ナトリウム−コ−２−アセ
トアセトキシエチルメタクリレート）（重量比９０：
４：６）（２．５８３） Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミ
ノエタンスルホン酸緩衝剤（ｐＨ７）（０．２１９） Ｏｌｉｎ界面活性剤１０Ｇ非イオン界面活性剤（０．２
３８） ジメドン（０．４５） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（０．２２） 牛血清アルブミン（１．０） マンニトール（１．０） 硫酸バナジル（０．０４） グリセロール（２．０）
【００１９】〔レセプター層〕 ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド−コ−２−ヒド
ロキシエチルメタクリレート−コ−Ｎ，Ｎ’−メチレン
ビスアクリルアミド）（重量比８５：１０：５）（０，
５） ４，５−ビス（４−ジメチルアミノフェニル）−２−
（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−イ
ミダゾール系ロイコ色素（０．２） Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミ
ノエタンスルホン酸緩衝剤（ｐＨ７）（０．１） ＴＲＩＴＯＮ（商品名）Ｘ−１００非イオン界面活性剤
（０．０２） ＴＥＴＲＯＮＩＣ（商品名）Ｔ９０８非イオン界面活性
剤（０．０２） Ｏｌｉｎ界面活性剤１０Ｇ非イオン界面活性剤（０．０
１） ジメドン（０．０５） ポリ〔スチレン−コ−ｐ−（２−クロロエチル−スルホ
ニルメチル）スチレン（重量比９５：５）ビーズ（平均
粒径１．０μｍ）に共有結合させた抗ジフェニルヒダン
トインモノクローナル抗体（０．０１５）
ロキシエチルメタクリレート−コ−Ｎ，Ｎ’−メチレン
ビスアクリルアミド）（重量比８５：１０：５）（０，
５） ４，５−ビス（４−ジメチルアミノフェニル）−２−
（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−イ
ミダゾール系ロイコ色素（０．２） Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミ
ノエタンスルホン酸緩衝剤（ｐＨ７）（０．１） ＴＲＩＴＯＮ（商品名）Ｘ−１００非イオン界面活性剤
（０．０２） ＴＥＴＲＯＮＩＣ（商品名）Ｔ９０８非イオン界面活性
剤（０．０２） Ｏｌｉｎ界面活性剤１０Ｇ非イオン界面活性剤（０．０
１） ジメドン（０．０５） ポリ〔スチレン−コ−ｐ−（２−クロロエチル−スルホ
ニルメチル）スチレン（重量比９５：５）ビーズ（平均
粒径１．０μｍ）に共有結合させた抗ジフェニルヒダン
トインモノクローナル抗体（０．０１５）
【００２０】〔試薬層〕 硬膜ゼラチン（１０．１５） Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミ
ノエタンスルホン酸緩衝剤（ｐＨ７）（４．５８） ＴＲＩＴＯＮ（商品名）Ｘ−１００非イオン界面活性剤
（０．０２） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（０．４４） 〔ポリ（エチレンテレフタレート）支持体〕
ノエタンスルホン酸緩衝剤（ｐＨ７）（４．５８） ＴＲＩＴＯＮ（商品名）Ｘ−１００非イオン界面活性剤
（０．０２） ３’，５’−ジクロロ−４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド（０．４４） 〔ポリ（エチレンテレフタレート）支持体〕
【００２１】従来技術 ここで図１を参照するが、従来技術（ほとんどが溶液ア
ッセイである）では、曲線１０Ａ対曲線１０Ｂ、又は曲
線２０Ａ対曲線２０Ｂに示されるように、ヘモグロビン
妨害因子の存在によって「正」の偏りが発生しているこ
とがわかる。（曲線２０Ａと１０Ａとの違いは、曲線２
０Ａは、曲線１０Ａのアナライト存在量の２倍のアナラ
イトが存在した場合の速度のプロットである点のみであ
る。）しかしながら、これらの曲線はＴ＝Ｔ1 まで追跡
されているだけであり、その間の曲線１０Ａと曲線１０
Ｂは本質的に相互平行であり、また曲線２０Ａと曲線２
０Ｂも本質的に相互平行である（競争アッセイにおい
て）。
ッセイである）では、曲線１０Ａ対曲線１０Ｂ、又は曲
線２０Ａ対曲線２０Ｂに示されるように、ヘモグロビン
妨害因子の存在によって「正」の偏りが発生しているこ
とがわかる。（曲線２０Ａと１０Ａとの違いは、曲線２
０Ａは、曲線１０Ａのアナライト存在量の２倍のアナラ
イトが存在した場合の速度のプロットである点のみであ
る。）しかしながら、これらの曲線はＴ＝Ｔ1 まで追跡
されているだけであり、その間の曲線１０Ａと曲線１０
Ｂは本質的に相互平行であり、また曲線２０Ａと曲線２
０Ｂも本質的に相互平行である（競争アッセイにおい
て）。
【００２２】本発明 我々は、ジゴキシンやフェニトインを標的としたよう
な、乾式スライド試験要素を用いたある種のペルオキシ
ダーゼを利用した標的イムノアッセイについて、速度の
実験を時間Ｔ＞Ｔ1 まで行うと、対をなした曲線が交差
時間Ｔ2 又はＴ3（但し、Ｔ2 及びＴ3 ＞Ｔ1 ）に向か
って集中することがわかった。例えば、図２では、曲線
１０Ａ’は時間Ｔ2 において曲線１０Ｂ’の速度と実質
的に等しくなり、また曲線２０Ａ’は時間Ｔ3 において
曲線２０Ｂ’の速度と実質的に等しくなる。（これらの
場合、「交差」は実質的に等しい点となるが、本明細書
中既に記載したように、「交差」は定常状態の差が最小
である時点であってもよい。）図１の場合と同様、曲線
１０Ａ’と曲線２０Ａ’には、明確に定められた量、例
えば２５０ｍｇ／ｄＬのヘモグロビン妨害因子がそれぞ
れに存在しており、一方、曲線１０Ｂ’と曲線２０Ｂ’
にはまったく存在していない。曲線２０Ａ’と曲線２０
Ｂ’は、曲線１０Ａ’と曲線１０Ｂ’のアナライト量の
２倍のアナライト量を示すものである。
な、乾式スライド試験要素を用いたある種のペルオキシ
ダーゼを利用した標的イムノアッセイについて、速度の
実験を時間Ｔ＞Ｔ1 まで行うと、対をなした曲線が交差
時間Ｔ2 又はＴ3（但し、Ｔ2 及びＴ3 ＞Ｔ1 ）に向か
って集中することがわかった。例えば、図２では、曲線
１０Ａ’は時間Ｔ2 において曲線１０Ｂ’の速度と実質
的に等しくなり、また曲線２０Ａ’は時間Ｔ3 において
曲線２０Ｂ’の速度と実質的に等しくなる。（これらの
場合、「交差」は実質的に等しい点となるが、本明細書
中既に記載したように、「交差」は定常状態の差が最小
である時点であってもよい。）図１の場合と同様、曲線
１０Ａ’と曲線２０Ａ’には、明確に定められた量、例
えば２５０ｍｇ／ｄＬのヘモグロビン妨害因子がそれぞ
れに存在しており、一方、曲線１０Ｂ’と曲線２０Ｂ’
にはまったく存在していない。曲線２０Ａ’と曲線２０
Ｂ’は、曲線１０Ａ’と曲線１０Ｂ’のアナライト量の
２倍のアナライト量を示すものである。
【００２３】この図２の交差現象は、もちろん、この特
定濃度、例えば曲線１０Ａ’及び曲線１０Ｂ’の１倍量
の標的アナライトについては、ヘモグロビンによる偏り
が最小となる点であって、未知試料の速度を読み取るべ
き最適な時点である。もちろん、アナライト濃度もヘモ
グロビンの量も前もってはわからないので、本発明の残
りの手順は、読取りの「最適」時間が、標的アナライト
の正確な量に対する交差時間と正確には同じにならない
場合にこれに近づくように選定する手順である。こうし
て、ヘモグロビン由来の偏りが最小限に抑えられる。
定濃度、例えば曲線１０Ａ’及び曲線１０Ｂ’の１倍量
の標的アナライトについては、ヘモグロビンによる偏り
が最小となる点であって、未知試料の速度を読み取るべ
き最適な時点である。もちろん、アナライト濃度もヘモ
グロビンの量も前もってはわからないので、本発明の残
りの手順は、読取りの「最適」時間が、標的アナライト
の正確な量に対する交差時間と正確には同じにならない
場合にこれに近づくように選定する手順である。こうし
て、ヘモグロビン由来の偏りが最小限に抑えられる。
【００２４】次に図３を参照しながら、本発明の検量部
分を説明する。検量は、常用の手法に従い、同じ標的免
疫アナライト用、例えばジゴキシン用のすべて実質的に
同等な一組のスライド試験要素を用意し、そして分析装
置で、濃度の異なる（Ｃ1 、Ｃ2 及びＣ3 ）標的免疫ア
ナライトを含む二つ又は三つの検量液を試験し、前記試
験要素組の一部を用いてそれらの経時変化の速度を求め
る。この試験により図３の曲線３０Ｂ、４０Ｂ及び５０
Ｂがそれぞれ得られる。これらの液体は無視できる量、
例えば、零量のヘモグロビンを含むものである。
分を説明する。検量は、常用の手法に従い、同じ標的免
疫アナライト用、例えばジゴキシン用のすべて実質的に
同等な一組のスライド試験要素を用意し、そして分析装
置で、濃度の異なる（Ｃ1 、Ｃ2 及びＣ3 ）標的免疫ア
ナライトを含む二つ又は三つの検量液を試験し、前記試
験要素組の一部を用いてそれらの経時変化の速度を求め
る。この試験により図３の曲線３０Ｂ、４０Ｂ及び５０
Ｂがそれぞれ得られる。これらの液体は無視できる量、
例えば、零量のヘモグロビンを含むものである。
【００２５】本発明の一態様によると、その検量手順に
は、この他に、同じ分析装置で前記組合せのスライド試
験要素の他方を用い、濃度Ｃ1 、Ｃ2 及びＣ3 をそれぞ
れ有し且つ無視できない量、例えば２５０ｍｇ／ｄＬの
ヘモグロビンを含む検量液を使用して、曲線３０Ａ、４
０Ａ及び５０Ａを確定する工程が加わる。（便宜上、こ
のヘモグロビンの無視できない量はこれらのさらに別の
検量液のすべてについて同量としているが、必ずしもそ
の必要はない。すなわち、あるものを２５０ｍｇ／ｄＬ
とし、別のものを２００ｍｇ／ｄＬとしてもよい。）後
に説明する「最適」交差点のプロット６０は、この場合
垂直ではないので、少なくとも２組の速度曲線、すなわ
ち、３０Ａ、３０Ｂと４０Ａ、４０Ｂの両組、又は３０
Ａ、３０Ｂと５０Ａ、５０Ｂの両組、又は４０Ａ、４０
Ｂと５０Ａ、５０Ｂの両組、を確定することが好まし
い。図３に示したように曲線６０が線形にならない場合
を考慮して、３組すべての曲線又はデータ点を確定する
ことが最も好ましい。（直線は、このような曲線が２組
だけあれば適切に規定できる。）
は、この他に、同じ分析装置で前記組合せのスライド試
験要素の他方を用い、濃度Ｃ1 、Ｃ2 及びＣ3 をそれぞ
れ有し且つ無視できない量、例えば２５０ｍｇ／ｄＬの
ヘモグロビンを含む検量液を使用して、曲線３０Ａ、４
０Ａ及び５０Ａを確定する工程が加わる。（便宜上、こ
のヘモグロビンの無視できない量はこれらのさらに別の
検量液のすべてについて同量としているが、必ずしもそ
の必要はない。すなわち、あるものを２５０ｍｇ／ｄＬ
とし、別のものを２００ｍｇ／ｄＬとしてもよい。）後
に説明する「最適」交差点のプロット６０は、この場合
垂直ではないので、少なくとも２組の速度曲線、すなわ
ち、３０Ａ、３０Ｂと４０Ａ、４０Ｂの両組、又は３０
Ａ、３０Ｂと５０Ａ、５０Ｂの両組、又は４０Ａ、４０
Ｂと５０Ａ、５０Ｂの両組、を確定することが好まし
い。図３に示したように曲線６０が線形にならない場合
を考慮して、３組すべての曲線又はデータ点を確定する
ことが最も好ましい。（直線は、このような曲線が２組
だけあれば適切に規定できる。）
【００２６】曲線３０Ａ、３０Ｂと４０Ａ、４０Ｂと５
０Ａ、５０Ｂについてデータ点を確定したならば、次の
工程は、それぞれの曲線組がその交差時間に到達する時
間点を求めることである。図３では、それらは、ある組
の中で変化速度（点Ｐ2 、Ｐ 3 及びＰ4 で示す）が実質
的に等しくなる時点であって、それぞれ時間Ｔ2 、Ｔ 3
及びＴ4 である。これらの時間は、試料液中の特定の濃
度の免疫アナライトに対する、このような濃度が既知で
あるか又は概算できた場合の、各々の最適読取り時間で
ある。すなわち、本発明は、これらの交差点のうち対応
するアナライト濃度の交差点を一つだけ選ぶことによ
り、別のアナライト濃度において用いられる読取り時間
とは無関係に、実施することができる。
０Ａ、５０Ｂについてデータ点を確定したならば、次の
工程は、それぞれの曲線組がその交差時間に到達する時
間点を求めることである。図３では、それらは、ある組
の中で変化速度（点Ｐ2 、Ｐ 3 及びＰ4 で示す）が実質
的に等しくなる時点であって、それぞれ時間Ｔ2 、Ｔ 3
及びＴ4 である。これらの時間は、試料液中の特定の濃
度の免疫アナライトに対する、このような濃度が既知で
あるか又は概算できた場合の、各々の最適読取り時間で
ある。すなわち、本発明は、これらの交差点のうち対応
するアナライト濃度の交差点を一つだけ選ぶことによ
り、別のアナライト濃度において用いられる読取り時間
とは無関係に、実施することができる。
【００２７】最も好ましくは、交差点の試験を二つや三
つだけで行うのではなく、これらの点の間やその外側
で、例えばさらに初期の時間において外挿を行い、図３
の曲線６０を作成することである。すなわち、次の工程
は、Ｃ1 、Ｃ2 及びＣ3 以外のアナライト濃度について
対応する交差時間点を算出することである。これは、も
ちろん、点Ｐ2 、Ｐ3 及びＰ4 に最もよく適合する曲線
を得ることにより、その他の交差点を内挿することによ
って行われる。一般に、このような曲線は、多項式：
（最適読取り）時間＝Ａ0 ＋Ａ1 ・速度＋Ａ2 ・（速
度）2 〔但し、Ａ0 、Ａ1 、Ａ2 は定数である。〕によ
って特徴付けられる。データ点が、例えばＰ2とＰ3 、
Ｐ2 とＰ4 又はＰ3 とＰ4 のように二つしかない場合に
は、この曲線は式：時間＝Ａ0 ＋Ａ1 ・速度の直線にな
る。曲線６０は、その形状に係わらず、定められた交差
時間点を表し、これによって、濃度及びヘモグロビン含
有量が未知である患者試料を後に試験するための最適読
取り時間の一覧表を作成することができる。
つだけで行うのではなく、これらの点の間やその外側
で、例えばさらに初期の時間において外挿を行い、図３
の曲線６０を作成することである。すなわち、次の工程
は、Ｃ1 、Ｃ2 及びＣ3 以外のアナライト濃度について
対応する交差時間点を算出することである。これは、も
ちろん、点Ｐ2 、Ｐ3 及びＰ4 に最もよく適合する曲線
を得ることにより、その他の交差点を内挿することによ
って行われる。一般に、このような曲線は、多項式：
（最適読取り）時間＝Ａ0 ＋Ａ1 ・速度＋Ａ2 ・（速
度）2 〔但し、Ａ0 、Ａ1 、Ａ2 は定数である。〕によ
って特徴付けられる。データ点が、例えばＰ2とＰ3 、
Ｐ2 とＰ4 又はＰ3 とＰ4 のように二つしかない場合に
は、この曲線は式：時間＝Ａ0 ＋Ａ1 ・速度の直線にな
る。曲線６０は、その形状に係わらず、定められた交差
時間点を表し、これによって、濃度及びヘモグロビン含
有量が未知である患者試料を後に試験するための最適読
取り時間の一覧表を作成することができる。
【００２８】本発明の別の態様によると、図４に示した
曲線６０を用いて、このような患者試料の試験が行われ
る。前記の同じスライド試験要素の組の別のものを使用
し、患者試料を付着させ、検量時と同じ種類の分析装置
で変化速度を検出する。少なくとも時間Ｔ（初期）から
時間Ｔ（最終）にかけて、曲線Ｓ（「試料」用）で表さ
れる広範囲のデータ点の組を確定する。読取り時間の初
期範囲に含まれる（例、最初の３０秒間の平均）固定時
間Ｔ（初期）において、その試料について対応する変化
速度Ｒ（初期）を確定する。そのＲ（初期）の値から、
曲線６０上の対応する最適読取り時間Ｔ（最適読取り）
を選定する（矢印１００）。次いで、その最適読取り時
間に対応する曲線Ｓ上の点から、その最適時間における
「最終の」変化速度を確定し（矢印２００）、その後、
常套手法により（検量表から）濃度値へ変換する。
曲線６０を用いて、このような患者試料の試験が行われ
る。前記の同じスライド試験要素の組の別のものを使用
し、患者試料を付着させ、検量時と同じ種類の分析装置
で変化速度を検出する。少なくとも時間Ｔ（初期）から
時間Ｔ（最終）にかけて、曲線Ｓ（「試料」用）で表さ
れる広範囲のデータ点の組を確定する。読取り時間の初
期範囲に含まれる（例、最初の３０秒間の平均）固定時
間Ｔ（初期）において、その試料について対応する変化
速度Ｒ（初期）を確定する。そのＲ（初期）の値から、
曲線６０上の対応する最適読取り時間Ｔ（最適読取り）
を選定する（矢印１００）。次いで、その最適読取り時
間に対応する曲線Ｓ上の点から、その最適時間における
「最終の」変化速度を確定し（矢印２００）、その後、
常套手法により（検量表から）濃度値へ変換する。
【００２９】別法として、Ｔ（初期）を、これをすべて
のアッセイを通して使用する場合には、曲線６０によっ
て包含される時間の中で決めてもよい。ヘモグロビンに
よる偏りを最小限に抑えるものが読取り時間であること
が、図３中の点線曲線Ｓ’としてプロットした仮想例か
らわかる。実際にそのアナライト濃度を、曲線４０Ｂに
近い位置にあるＣ2 と仮定する。時間Ｔ（初期）におい
て、初期速度を確定する（矢印３００）。これにより、
曲線６０上で最適読取り時間Ｔ（最適）が得られ、次い
で曲線Ｓ’から矢印３０２で示したように最終速度Ｒ
（最終）が得られる。しかしながら、この値は、ヘモグ
ロビンによる偏りが皆無である最終速度ではない。とい
うのは、偏りが零の最終速度の読みは、Ｒ（最終）より
上にあるＲ（最適）であるからである。Ｒ（最適）は、
もちろん、曲線Ｓが曲線４０Ｂと交差する実際の交差点
ＰS に対応する値である。にもかかわらず、このＲ（最
終）の値は、曲線Ｓ’から選定されうる他の大部分の読
み、例えばＴ（不良）における読みよりも、はるかにＲ
（最適）に近い値となる。
のアッセイを通して使用する場合には、曲線６０によっ
て包含される時間の中で決めてもよい。ヘモグロビンに
よる偏りを最小限に抑えるものが読取り時間であること
が、図３中の点線曲線Ｓ’としてプロットした仮想例か
らわかる。実際にそのアナライト濃度を、曲線４０Ｂに
近い位置にあるＣ2 と仮定する。時間Ｔ（初期）におい
て、初期速度を確定する（矢印３００）。これにより、
曲線６０上で最適読取り時間Ｔ（最適）が得られ、次い
で曲線Ｓ’から矢印３０２で示したように最終速度Ｒ
（最終）が得られる。しかしながら、この値は、ヘモグ
ロビンによる偏りが皆無である最終速度ではない。とい
うのは、偏りが零の最終速度の読みは、Ｒ（最終）より
上にあるＲ（最適）であるからである。Ｒ（最適）は、
もちろん、曲線Ｓが曲線４０Ｂと交差する実際の交差点
ＰS に対応する値である。にもかかわらず、このＲ（最
終）の値は、曲線Ｓ’から選定されうる他の大部分の読
み、例えばＴ（不良）における読みよりも、はるかにＲ
（最適）に近い値となる。
【００３０】ある特定の標的免疫アナライトに対する最
適読取り時間曲線６０が垂直又は実質的に垂直である場
合には、そのアナライトのすべてのアッセイに用いるた
めの一つの交差点を同定するために確定すべき必要な曲
線組は一つだけである。この状態を図５に示す。これに
はまた、一対の曲線が交わらずに最小差定常状態ΔＲが
確立された交差状態をも示されている。このように、こ
の仮想ケースでは、濃度ＣX のアナライトと２００又は
５ｍｇ／ｄＬのヘモグロビンを含む検量液についてプロ
ットすることにより、速度が実質的に等しくなる交差点
を時間Ｔ1 に有するそれぞれ曲線７０Ａと曲線７０Ｂを
作成している。別の組の検量液を濃度Ｃ X の５倍濃度に
おいてプロットし、曲線８０Ａと曲線８０Ｂ（曲線８０
Ａは、無視できない量である１８０ｍｇ／ｄＬのヘモグ
ロビンを含む液体についてのものである）を作成してい
る。次いで、交差時間点を、最小差定常状態ΔＲが最初
に得られた時間Ｔ2 に確定する。これにより、ほぼ垂直
である最適読取り時間の曲線（直線）６０’が得られ
る。こうすると、以降は、患者試料液のこの特定のイム
ノアッセイのすべての試験に対する最適読取り時間とし
て使用するために、二つの読取り時間Ｔ1 又はＴ2 のい
ずれか一方が選定される。（その場合、曲線６０’上の
他方の時間点は無視される。）曲線６０’がまったく垂
直である場合には、このように最適読取り時間を一つだ
け選定する方法を採用することが最適であることはもち
ろんである。しかしながら、標的免疫アナライトの通常
の濃度範囲にわたりＴ2 −Ｔ1 の変動が１０秒以内にあ
る場合には、この方法は有用な近似法となる。
適読取り時間曲線６０が垂直又は実質的に垂直である場
合には、そのアナライトのすべてのアッセイに用いるた
めの一つの交差点を同定するために確定すべき必要な曲
線組は一つだけである。この状態を図５に示す。これに
はまた、一対の曲線が交わらずに最小差定常状態ΔＲが
確立された交差状態をも示されている。このように、こ
の仮想ケースでは、濃度ＣX のアナライトと２００又は
５ｍｇ／ｄＬのヘモグロビンを含む検量液についてプロ
ットすることにより、速度が実質的に等しくなる交差点
を時間Ｔ1 に有するそれぞれ曲線７０Ａと曲線７０Ｂを
作成している。別の組の検量液を濃度Ｃ X の５倍濃度に
おいてプロットし、曲線８０Ａと曲線８０Ｂ（曲線８０
Ａは、無視できない量である１８０ｍｇ／ｄＬのヘモグ
ロビンを含む液体についてのものである）を作成してい
る。次いで、交差時間点を、最小差定常状態ΔＲが最初
に得られた時間Ｔ2 に確定する。これにより、ほぼ垂直
である最適読取り時間の曲線（直線）６０’が得られ
る。こうすると、以降は、患者試料液のこの特定のイム
ノアッセイのすべての試験に対する最適読取り時間とし
て使用するために、二つの読取り時間Ｔ1 又はＴ2 のい
ずれか一方が選定される。（その場合、曲線６０’上の
他方の時間点は無視される。）曲線６０’がまったく垂
直である場合には、このように最適読取り時間を一つだ
け選定する方法を採用することが最適であることはもち
ろんである。しかしながら、標的免疫アナライトの通常
の濃度範囲にわたりＴ2 −Ｔ1 の変動が１０秒以内にあ
る場合には、この方法は有用な近似法となる。
【００３１】
【実施例】以下の実施例では、上記のジゴキシン及びフ
ェニトイン用スライド試験要素を使用し、従前はイース
トマン・コダック社に属していたクリニカル・ダイアグ
ノスティックス・ディビジョンから市販されている「Ｅ
ｋｔａｃｈｅｍ Ｅ−２５０」分析装置で、後記量のア
ナライトと零量又は後記量のヘモグロビンとにより得ら
れた検量液を用いて試験した。
ェニトイン用スライド試験要素を使用し、従前はイース
トマン・コダック社に属していたクリニカル・ダイアグ
ノスティックス・ディビジョンから市販されている「Ｅ
ｋｔａｃｈｅｍ Ｅ−２５０」分析装置で、後記量のア
ナライトと零量又は後記量のヘモグロビンとにより得ら
れた検量液を用いて試験した。
【００３２】実施例１：フェニトイン この実施例では、以下の配合組成の検量液を使用した。液体１ １％ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）マトリックスに、
２．０μｇ／Ｌのフェニトインを添加し、これを二部に
分けて、一方はヘモグロビンを含ませず、他方には２５
０ｍｇ／ｄＬのヘモグロビンを加えて、一対の液体を形
成した。液体２ １％ＰＶＰマトリックスに、１２．０μｇ／Ｌのフェニ
トインを添加した。これを二部に分けて、一方はヘモグ
ロビンを含ませず、他方には２５０ｍｇ／ｄＬのヘモグ
ロビンを加えて、一対の液体を形成した。液体３ １％ＰＶＰマトリックスに、４０μｇ／Ｌのフェニトイ
ンを添加した。これを二部に分けて、一方はヘモグロビ
ンを含ませず、他方には２５０ｍｇ／ｄＬのヘモグロビ
ンを加えて、一対の液体を形成した。
２．０μｇ／Ｌのフェニトインを添加し、これを二部に
分けて、一方はヘモグロビンを含ませず、他方には２５
０ｍｇ／ｄＬのヘモグロビンを加えて、一対の液体を形
成した。液体２ １％ＰＶＰマトリックスに、１２．０μｇ／Ｌのフェニ
トインを添加した。これを二部に分けて、一方はヘモグ
ロビンを含ませず、他方には２５０ｍｇ／ｄＬのヘモグ
ロビンを加えて、一対の液体を形成した。液体３ １％ＰＶＰマトリックスに、４０μｇ／Ｌのフェニトイ
ンを添加した。これを二部に分けて、一方はヘモグロビ
ンを含ませず、他方には２５０ｍｇ／ｄＬのヘモグロビ
ンを加えて、一対の液体を形成した。
【００３３】図６は、３組の検量液によって得られる最
適読取り時間の検量プロットとその曲線６０’であり、
それぞれ曲線３０Ａ”、３０Ｂ”；４０Ａ”、４０
Ｂ”；及び５０Ａ”、５０Ｂ”で示した。すなわち、曲
線３０Ａ”及び３０Ｂ”は液体１に対し、曲線４０Ａ”
及び４０Ｂ”は液体２に対し、そして曲線５０Ａ”及び
５０Ｂ”は液体２に対するものである。各組において、
Ａ曲線は２５０ｍｇ／ｄＬのヘモグロビンを含む適当な
液体を表し、またＢ曲線はヘモグロビン存在量が零であ
る適当な液体を表す。（図６及び図７では、反応開始時
間はＴ＝０秒の０．３分前とした。）各検量液に添加さ
れたフェニトインの量はプロット上に記載されている。
次いで、時間０．５分における初期速度Ｒi を検出した
場合（例、Ｒ i ＝０．０７）に、曲線６０”を最適読取
り時間値として使用した。これにより、次いで、約０．
８８分のＴ（最適）が得られ、その後これを用いて曲線
Ｓ”から実際の試料についてＲ（最終）速度の読み０．
０６３を読み取る。このＲ（最終）をフェニトイン濃度
計算値約７．９μｇ／ｍＬに変換する。 （曲線６０”は、数学的には以下のように表現できる：Ａ Ｔ（最適）＝２．４１−２０．６２５（初期速度） ここで、Ｔ（最適）＝すべての変化速度の読みに対して
得られた読取り時間、また初期速度は、例えば０．５分
時に初期値として早期に得られた読みである。） 図６の有用性は検量体のみの使用で説明することもでき
る。最初に、すべての読みを、通常のように、定められ
た時間、例えば１分時に任意に行った場合の結果を考え
る。その場合の結果を以下に示す。
適読取り時間の検量プロットとその曲線６０’であり、
それぞれ曲線３０Ａ”、３０Ｂ”；４０Ａ”、４０
Ｂ”；及び５０Ａ”、５０Ｂ”で示した。すなわち、曲
線３０Ａ”及び３０Ｂ”は液体１に対し、曲線４０Ａ”
及び４０Ｂ”は液体２に対し、そして曲線５０Ａ”及び
５０Ｂ”は液体２に対するものである。各組において、
Ａ曲線は２５０ｍｇ／ｄＬのヘモグロビンを含む適当な
液体を表し、またＢ曲線はヘモグロビン存在量が零であ
る適当な液体を表す。（図６及び図７では、反応開始時
間はＴ＝０秒の０．３分前とした。）各検量液に添加さ
れたフェニトインの量はプロット上に記載されている。
次いで、時間０．５分における初期速度Ｒi を検出した
場合（例、Ｒ i ＝０．０７）に、曲線６０”を最適読取
り時間値として使用した。これにより、次いで、約０．
８８分のＴ（最適）が得られ、その後これを用いて曲線
Ｓ”から実際の試料についてＲ（最終）速度の読み０．
０６３を読み取る。このＲ（最終）をフェニトイン濃度
計算値約７．９μｇ／ｍＬに変換する。 （曲線６０”は、数学的には以下のように表現できる：Ａ Ｔ（最適）＝２．４１−２０．６２５（初期速度） ここで、Ｔ（最適）＝すべての変化速度の読みに対して
得られた読取り時間、また初期速度は、例えば０．５分
時に初期値として早期に得られた読みである。） 図６の有用性は検量体のみの使用で説明することもでき
る。最初に、すべての読みを、通常のように、定められ
た時間、例えば１分時に任意に行った場合の結果を考え
る。その場合の結果を以下に示す。
【００３４】
【表１】
【００３５】表１における偏りは、交差時間に関して、
読取り時間の１分が、液体１の場合は遅すぎであり、液
体２と液体３の場合には早すぎであることからきてお
り、検量体ではなく実際の試料であった場合には未知の
何かが存在することはもちろんである。しかしながら、
上記の方程式Ａを使用し、曲線の最初のデータ点を「初
期速度Ｒ（初期）」として使用する場合には、表２に示
したように偏りのはるかに改善された結果が得られる。
読取り時間の１分が、液体１の場合は遅すぎであり、液
体２と液体３の場合には早すぎであることからきてお
り、検量体ではなく実際の試料であった場合には未知の
何かが存在することはもちろんである。しかしながら、
上記の方程式Ａを使用し、曲線の最初のデータ点を「初
期速度Ｒ（初期）」として使用する場合には、表２に示
したように偏りのはるかに改善された結果が得られる。
【００３６】
【表２】
【００３７】別法として、フェニトインアッセイを次の
実施例に記載した方法で検量し、検定することはできる
が、範囲の両端が最適化されていないので明らかに最適
ではない。実施例２ 同様の検量曲線（図７）を、ジゴキシン用試験要素とジ
ゴキシンを含む検量液とを使用して、実施例１と同様の
方法で作成した。
実施例に記載した方法で検量し、検定することはできる
が、範囲の両端が最適化されていないので明らかに最適
ではない。実施例２ 同様の検量曲線（図７）を、ジゴキシン用試験要素とジ
ゴキシンを含む検量液とを使用して、実施例１と同様の
方法で作成した。
【００３８】こうして、曲線３０Ａ’”及び３０Ｂ’”
は、アナライトを１ｎｇ／ｍＬのジゴキシンとしたこと
を除いて、実施例１に記載したように調製した液体１を
表すものである。曲線４０Ａ’”及び４０Ｂ’”は、ア
ナライトを２ｎｇ／ｍＬのジゴキシンとしたことを除い
て、実施例１に記載したように調製した液体２を表すも
のである。曲線５０Ａ’”及び５０Ｂ’”は、アナライ
トを４ｎｇ／ｍＬのジゴキシンとしたことを除いて、実
施例１に記載したように調製した液体３を表すものであ
る。図６の場合と同様、Ａ曲線は２５０ｍｇ／ｄＬのヘ
モグロビンを含む適当な液体を表し、またＢ曲線はヘモ
グロビン存在量が零である適当な液体を表す。
は、アナライトを１ｎｇ／ｍＬのジゴキシンとしたこと
を除いて、実施例１に記載したように調製した液体１を
表すものである。曲線４０Ａ’”及び４０Ｂ’”は、ア
ナライトを２ｎｇ／ｍＬのジゴキシンとしたことを除い
て、実施例１に記載したように調製した液体２を表すも
のである。曲線５０Ａ’”及び５０Ｂ’”は、アナライ
トを４ｎｇ／ｍＬのジゴキシンとしたことを除いて、実
施例１に記載したように調製した液体３を表すものであ
る。図６の場合と同様、Ａ曲線は２５０ｍｇ／ｄＬのヘ
モグロビンを含む適当な液体を表し、またＢ曲線はヘモ
グロビン存在量が零である適当な液体を表す。
【００３９】最適読取り時間曲線６０’”を図示したよ
うにプロットした。この曲線は、すべてのジゴキシンア
ッセイに対して単一の最適時間点を選定することを正当
化するに十分な垂直性を示す。こうして、すべての濃度
のジゴキシンについて、反応開始から０．７分時点のＴ
（最適）を使用して実験を行うと成功した。 〔曲線６０’”は、以下の数学式を有する：Ｂ Ｔ（最適）＝０．７１９−２．７５（初期速度）〕 さらに説明するものとして、図７の検量体を、任意の読
取り時間０．５分を用いて「未知量」として取り扱っ
た。これらの結果を以下の表３に示す。
うにプロットした。この曲線は、すべてのジゴキシンア
ッセイに対して単一の最適時間点を選定することを正当
化するに十分な垂直性を示す。こうして、すべての濃度
のジゴキシンについて、反応開始から０．７分時点のＴ
（最適）を使用して実験を行うと成功した。 〔曲線６０’”は、以下の数学式を有する：Ｂ Ｔ（最適）＝０．７１９−２．７５（初期速度）〕 さらに説明するものとして、図７の検量体を、任意の読
取り時間０．５分を用いて「未知量」として取り扱っ
た。これらの結果を以下の表３に示す。
【００４０】
【表３】
【００４１】（液体３の偏りが零であることは、液体３
の交差時間と０．５分とが偶然に一致したためであ
る。） 他方で、方程式Ｂを、「初期速度」として各曲線の第一
のデータ点と共に使用すると、以下の表４のような結果
になり、偏りが表３の場合よりも改善される。
の交差時間と０．５分とが偶然に一致したためであ
る。） 他方で、方程式Ｂを、「初期速度」として各曲線の第一
のデータ点と共に使用すると、以下の表４のような結果
になり、偏りが表３の場合よりも改善される。
【００４２】
【表４】
【００４３】
【発明の効果】本発明の有利な技術的特徴は、ＰＯＤ検
出法により速度イムノアッセイを行うことができると同
時に、ある種の妨害因子が存在すると通常発生する偏り
が減少する点である。
出法により速度イムノアッセイを行うことができると同
時に、ある種の妨害因子が存在すると通常発生する偏り
が減少する点である。
【図１】従来技術による、ヘモグロビンを含む場合と含
まない場合の特定濃度の免疫アナライトについて時間に
対して濃度変化の速度をプロットしたグラフである。
まない場合の特定濃度の免疫アナライトについて時間に
対して濃度変化の速度をプロットしたグラフである。
【図２】本発明による、ヘモグロビンを含む場合と含ま
ない場合の特定濃度の免疫アナライトについて時間に対
して濃度変化の速度をプロットしたグラフである。
ない場合の特定濃度の免疫アナライトについて時間に対
して濃度変化の速度をプロットしたグラフである。
【図３】本発明の検量法を説明する、図２に類似した時
間に対して濃度変化の速度をプロットしたグラフであ
る。
間に対して濃度変化の速度をプロットしたグラフであ
る。
【図４】図３の最適読取り時間曲線を利用して未知濃度
の患者試料を検定する方法を説明する、図３に類似した
グラフである。
の患者試料を検定する方法を説明する、図３に類似した
グラフである。
【図５】別の実施態様を説明する、図３に類似したグラ
フである。
フである。
【図６】フェニトインについての実施例を説明する、図
３に類似したグラフである。
３に類似したグラフである。
【図７】ジゴキシンについての実施例を説明する、図３
に類似したグラフである。
に類似したグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ポール アーサー キルダール−ブラント アメリカ合衆国，ニューヨーク 14580, ウェブスター，クラウン ポイント ドラ イブ 1233 (72)発明者 トーマス チャールズ アーター アメリカ合衆国，ニューヨーク 14612, ロチェスター，アンディロン レーン 217
Claims (3)
- 【請求項１】 基質と所定の限定された量で存在するペ
ルオキシダーゼとを含み検出可能な濃度変化を異なる速
度で生ぜしめる検出試薬を含有する乾式試験要素を用い
てイムノアッセイを実施する場合に特定の妨害因子によ
って引き起こされる偏りを減少させる方法であって、 （ａ）既知量の特定の妨害因子と既知量の標的アナライ
トを含む少なくとも１種の液体と接触した該標的アナラ
イトに対する第一組の試験要素が生ぜしめる濃度変化の
速度が、既知量の標的アナライトを含むが妨害因子は無
視できる量でしか存在しない液体と接触した、前記第一
組の試験要素と実質的に同等である第二組の試験要素が
生ぜしめる濃度変化の速度と、交差するか又は差が最小
になる時間を確定することによって、標的アナライトの
イムノアッセイを検量する工程と、 （ｂ）工程（ａ）で確定した交差時間に対応する時間に
おいて、前記第一組又は第二組の試験要素のうちの選ば
れた要素と接触する該試料によって引き起こされる該選
ばれた要素における変化速度を読み取ることによって、
患者試料の未知量の標的アナライトの検定を実施する工
程とを含む方法。 - 【請求項２】 西洋ワサビペルオキシダーゼと基質を用
いて経時変化する色素濃度を生ぜしめるイムノアッセイ
において標的アナライトを試験するための検量値におけ
るヘモグロビンによる偏りを減少させる検量方法であっ
て、 （ａ）同組成の複数のスライド試験要素の一部を用いて
複数の時間について、予め選定した異なる２種の既知量
の標的アナライトと零量のヘモグロビンとを含む少なく
とも２種の液体によって得られる色素濃度の変化速度を
確定する工程と、 （ｂ）同組成のさらに別のスライド試験要素を用いて複
数の時間について、前記少なくとも２種の液体のいずれ
にも同等に予め選定した無視できない量のヘモグロビン
を加えた少なくとも２種の液体によって得られる色素濃
度の変化速度を確定する工程と、 （ｃ）非零量のヘモグロビンを含有する前記少なくとも
２種の液体についての変化速度が、対応するヘモグロビ
ンを含まない２種の液体についての変化速度と交差する
又は差が最小になる時間における交差点を求めることに
より、偏りが最も少ない交差時間を得る工程と、 （ｄ）前記少なくとも２種の液体の一方について、これ
に対応する初期の変化速度を示す後の試料液の試験のた
めの最適読取り時間として、前記交差時間を選定する工
程とを含む検量方法。 - 【請求項３】 西洋ワサビペルオキシダーゼとロイコ色
素を用いて経時変化する色素濃度を生ぜしめるイムノア
ッセイにおいて患者体液を標的アナライトについて試験
するための方法であって、 （ａ）請求項２に記載の検量方法により算出された最適
読取り時間として定めた少なくとも一つの交差時間点を
有する分析装置において、特定の患者体液の未知量のア
ナライトについて濃度の経時変化の速度を確定する工程
と、 （ｂ）前記定めた交差時間のいずれよりも以前に固定し
た時間点を初期読取り時間として選定する工程と、 （ｃ）工程（ａ）で確定した値から工程（ｂ）で選定し
た時間点に対する初期速度を確定する工程と、 （ｄ）工程（ｃ）で確定した初期速度に対して、該初期
速度に対応する最適交差読取り時間を確定する工程と、 （ｅ）工程（ａ）で測定した速度から、前記最適読取り
時間における患者試料の変化速度を確定する工程とを含
む方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US363099 | 1989-06-07 | ||
| US08/363,099 US5571682A (en) | 1994-12-22 | 1994-12-22 | Calibrating and testing immunoassays to minimize interferences |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08233818A true JPH08233818A (ja) | 1996-09-13 |
| JP3672991B2 JP3672991B2 (ja) | 2005-07-20 |
Family
ID=23428799
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33354795A Expired - Fee Related JP3672991B2 (ja) | 1994-12-22 | 1995-12-21 | イムノアッセイにおける検量方法及び患者体液の試験方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5571682A (ja) |
| EP (1) | EP0718626B1 (ja) |
| JP (1) | JP3672991B2 (ja) |
| AT (1) | ATE206519T1 (ja) |
| AU (1) | AU4056395A (ja) |
| CA (1) | CA2165935C (ja) |
| DE (1) | DE69523027T2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| US6175752B1 (en) | 1998-04-30 | 2001-01-16 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8974386B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-03-10 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8480580B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-07-09 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8688188B2 (en) | 1998-04-30 | 2014-04-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8465425B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-06-18 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US6949816B2 (en) | 2003-04-21 | 2005-09-27 | Motorola, Inc. | Semiconductor component having first surface area for electrically coupling to a semiconductor chip and second surface area for electrically coupling to a substrate, and method of manufacturing same |
| US8346337B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-01-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US6560471B1 (en) | 2001-01-02 | 2003-05-06 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US7189520B2 (en) * | 2002-12-12 | 2007-03-13 | Strategic Diagnostics Inc. | Compositions and methods for detecting animal byproduct in feed |
| JP4285012B2 (ja) * | 2003-01-31 | 2009-06-24 | 株式会社日立製作所 | 学習状況判断プログラム及びユーザ状況判断システム |
| US20080071158A1 (en) | 2006-06-07 | 2008-03-20 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Analyte monitoring system and method |
| US9023599B2 (en) * | 2011-09-25 | 2015-05-05 | Chang Gung Medical Foundation, Linkou Branch | Method of detecting the presence of pneumococcal neuraminidases in Streptococcus pneumoniae-infected samples |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US4184923A (en) * | 1977-11-03 | 1980-01-22 | Eastman Kodak Company | Reduction of gentisic acid interference in analytical elements |
| JPS58140636A (ja) * | 1982-02-16 | 1983-08-20 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 赤血球膜電位の測定法 |
| US4835110A (en) * | 1985-12-23 | 1989-05-30 | Beckman Instruments, Inc. | Method for enhancing analysis timing in kinetic nephelometry |
| US5171688A (en) * | 1988-08-30 | 1992-12-15 | Cholestech Corporation | Self-corrected assay device |
| JPH02167446A (ja) * | 1988-09-01 | 1990-06-27 | Konica Corp | 液体試料分析方法 |
| JP2646731B2 (ja) * | 1989-02-28 | 1997-08-27 | 株式会社島津製作所 | 生化学分析方法 |
| EP0606950A3 (en) * | 1993-01-13 | 1995-07-12 | Eastman Kodak Co | Method for determining the reaction rate of analytes. |
-
1994
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