JPH08211037A - 固相免疫分析のための使い捨ての親和性クロマトグラフィー反応容器 - Google Patents
固相免疫分析のための使い捨ての親和性クロマトグラフィー反応容器Info
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- JPH08211037A JPH08211037A JP7296890A JP29689095A JPH08211037A JP H08211037 A JPH08211037 A JP H08211037A JP 7296890 A JP7296890 A JP 7296890A JP 29689095 A JP29689095 A JP 29689095A JP H08211037 A JPH08211037 A JP H08211037A
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- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 免疫検定の迅速な履行を可能にし、取扱いが
容易で事前の較正を必要としない親和性クロマトグラフ
ィー反応容器を提供すること。 【解決手段】 被測定成分を含む液体が浸透できる上部
および下部の多孔質の分離装置２ａ，２ｂと、これら分
離装置の間に配設された受媒質ベッド３とを備えた固相
免疫分析のための使い捨ての親和性クロマトグラフィー
反応容器の上端及び下端は開口している。被測定成分と
反応する免疫論的な反応成分が受媒質ベッドに結合され
るとともに、その受媒質ベッドの体積が６００μｌまで
とされている。受媒質ベッドに結合された免疫論的な反
応成分の量は大量であり、上部および下部の分離装置の
少なくとも一方が、前記液体が前記受媒質ベッドから流
れ出る前に前記被測定成分と前記反応成分との、結合平
衡状態における定量的な結合を生ぜしめるように前記液
体の流れを制御するような液体浸透性を有している。
容易で事前の較正を必要としない親和性クロマトグラフ
ィー反応容器を提供すること。 【解決手段】 被測定成分を含む液体が浸透できる上部
および下部の多孔質の分離装置２ａ，２ｂと、これら分
離装置の間に配設された受媒質ベッド３とを備えた固相
免疫分析のための使い捨ての親和性クロマトグラフィー
反応容器の上端及び下端は開口している。被測定成分と
反応する免疫論的な反応成分が受媒質ベッドに結合され
るとともに、その受媒質ベッドの体積が６００μｌまで
とされている。受媒質ベッドに結合された免疫論的な反
応成分の量は大量であり、上部および下部の分離装置の
少なくとも一方が、前記液体が前記受媒質ベッドから流
れ出る前に前記被測定成分と前記反応成分との、結合平
衡状態における定量的な結合を生ぜしめるように前記液
体の流れを制御するような液体浸透性を有している。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、固相免疫分析のた
めの使い捨て反応容器に関する。
めの使い捨て反応容器に関する。
【０００２】
【従来の技術】親和性クロマトグラフィーは生物分子の
予備純化に広く応用される技術であり、決定されるべき
分子と補結合強調体( complementary binding partner
) との間の特異的な相互作用が行われる。このような
方法の一般的な実施において、純化されるべき生物分子
を含む試料すなわちサンプルはクロマトグラフ展開カラ
ムに付与され、このカラムは相補的の結合強調体の１つ
を固体受媒質（solid substrate)に結合させて含んでい
る。一組の補結合強調体の例は酵素との受媒質、抗体と
ハプテンおよび抗原のそれぞれ、および相補的ＤＮＡま
たはＲＮＡ単鎖である。免疫親和クロマトグラフィーに
おいては、定量化のために抗原およびハプテンのそれぞ
れと補体としての抗体の間の相互作用が使用される。
予備純化に広く応用される技術であり、決定されるべき
分子と補結合強調体( complementary binding partner
) との間の特異的な相互作用が行われる。このような
方法の一般的な実施において、純化されるべき生物分子
を含む試料すなわちサンプルはクロマトグラフ展開カラ
ムに付与され、このカラムは相補的の結合強調体の１つ
を固体受媒質（solid substrate)に結合させて含んでい
る。一組の補結合強調体の例は酵素との受媒質、抗体と
ハプテンおよび抗原のそれぞれ、および相補的ＤＮＡま
たはＲＮＡ単鎖である。免疫親和クロマトグラフィーに
おいては、定量化のために抗原およびハプテンのそれぞ
れと補体としての抗体の間の相互作用が使用される。
【０００３】これまでの親和クロマトグラフィーを使用
した免疫検定においては再使用可能なカラムが一般に使
用され、このカラムは固体受媒質に結合された抗体また
は抗原（以下にリガンドと称する）を有している。分析
されるべき試料は高圧のもとでクロマトグラフカラムを
通して圧縮され、迅速なクロマトグラフ処理を保証する
ようになされる。免疫検定のための高圧液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）の応用は、例えば「分析化学」、
１９８５、第５７巻、第２７５４〜２７５６頁にドゥ・
エルヴィス、Ｗ．Ｕ．氏により、および「分析化学」、
１９８３、第５５巻、第７７１〜７７５頁にスポーツマ
ン、Ｊ．Ｒ．氏他により記載されている。しかしなが
ら、免疫検定のためにＨＰＬＣを使用することは幾つか
の欠点を有する。一方でこの技術には安価な器具の使用
が必要とされ、他方で分析のためのクロマトグラフィー
カラムは高度の技術的要求に合致しなければならない。
カラムはＨＰＬＣにおいて付与される高圧に耐えねばな
らないとともに、この技術の合理的な履行を可能にする
ために再使用できねばならない。しかしながら、カラム
の再使用は、新しい試料がその同じカラムで分析可能と
される前に、付加的な測定を必要とする。ＤＥ−ＯＳ
３７ １１ ８９４にて公表されたように、再使用可能
なカラムは先行試験において置換され且つまた不完全に
溶出した受媒質の影響を防止するために毎回の分析の前
に再生されねばならない。
した免疫検定においては再使用可能なカラムが一般に使
用され、このカラムは固体受媒質に結合された抗体また
は抗原（以下にリガンドと称する）を有している。分析
されるべき試料は高圧のもとでクロマトグラフカラムを
通して圧縮され、迅速なクロマトグラフ処理を保証する
ようになされる。免疫検定のための高圧液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）の応用は、例えば「分析化学」、
１９８５、第５７巻、第２７５４〜２７５６頁にドゥ・
エルヴィス、Ｗ．Ｕ．氏により、および「分析化学」、
１９８３、第５５巻、第７７１〜７７５頁にスポーツマ
ン、Ｊ．Ｒ．氏他により記載されている。しかしなが
ら、免疫検定のためにＨＰＬＣを使用することは幾つか
の欠点を有する。一方でこの技術には安価な器具の使用
が必要とされ、他方で分析のためのクロマトグラフィー
カラムは高度の技術的要求に合致しなければならない。
カラムはＨＰＬＣにおいて付与される高圧に耐えねばな
らないとともに、この技術の合理的な履行を可能にする
ために再使用できねばならない。しかしながら、カラム
の再使用は、新しい試料がその同じカラムで分析可能と
される前に、付加的な測定を必要とする。ＤＥ−ＯＳ
３７ １１ ８９４にて公表されたように、再使用可能
なカラムは先行試験において置換され且つまた不完全に
溶出した受媒質の影響を防止するために毎回の分析の前
に再生されねばならない。
【０００４】ＤＥ−ＯＳ ２４ ４８ ４１１には、固
相免疫分析のための反応容器が記載されている。しかし
ながら定量測定の前に、多数回の使用を意図されるこの
容器は被測定成分の標準による較正を必要とする。しか
も長い培養時間がこの反応容器には必要とされる。受媒
質上の免疫論的補結合強調体に対する被測定成分の十分
な結合を保証するために、６時間〜２日が推奨される。
しかしながらこの結合反応は常に、合理的な履行を保証
するような１〜２日を要する結合平衡に到達する前に終
結する。結合反応がこのように早期に終結する結果、標
準溶液との比較分析が必要になる。
相免疫分析のための反応容器が記載されている。しかし
ながら定量測定の前に、多数回の使用を意図されるこの
容器は被測定成分の標準による較正を必要とする。しか
も長い培養時間がこの反応容器には必要とされる。受媒
質上の免疫論的補結合強調体に対する被測定成分の十分
な結合を保証するために、６時間〜２日が推奨される。
しかしながらこの結合反応は常に、合理的な履行を保証
するような１〜２日を要する結合平衡に到達する前に終
結する。結合反応がこのように早期に終結する結果、標
準溶液との比較分析が必要になる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、免疫
検定の迅速な履行を可能にし、取扱いが容易で、事前の
較正もしくは再生をしないで容易に使用できるような固
相免疫分析のための使い捨て反応容器を提供することで
ある。
検定の迅速な履行を可能にし、取扱いが容易で、事前の
較正もしくは再生をしないで容易に使用できるような固
相免疫分析のための使い捨て反応容器を提供することで
ある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、被測定成分を
含む液体が浸透できる上部および下部の多孔質の分離装
置と、これら分離装置の間に配設された受媒質ベッドと
を備えた固相免疫分析のための使い捨ての親和性クロマ
トグラフィー反応容器において、前記反応容器の上端及
び下端が開口し、前記被測定成分と反応する少なくとも
１種類の免疫論的な反応成分が前記受媒質ベッドに結合
されるとともに、その受媒質ベッドの体積が６００μｌ
までとされており、また、前記受媒質ベッドに結合され
た免疫論的な反応成分の量が大量であって、上部および
下部の分離装置の少なくとも一方が、前記液体が前記受
媒質ベッドから流れ出る前に前記被測定成分と前記免疫
論的な反応成分との、結合平衡状態における定量的な結
合を生ぜしめるように前記液体の流れを制御するような
液体浸透性を有していることを特徴とする反応容器を提
供する。
含む液体が浸透できる上部および下部の多孔質の分離装
置と、これら分離装置の間に配設された受媒質ベッドと
を備えた固相免疫分析のための使い捨ての親和性クロマ
トグラフィー反応容器において、前記反応容器の上端及
び下端が開口し、前記被測定成分と反応する少なくとも
１種類の免疫論的な反応成分が前記受媒質ベッドに結合
されるとともに、その受媒質ベッドの体積が６００μｌ
までとされており、また、前記受媒質ベッドに結合され
た免疫論的な反応成分の量が大量であって、上部および
下部の分離装置の少なくとも一方が、前記液体が前記受
媒質ベッドから流れ出る前に前記被測定成分と前記免疫
論的な反応成分との、結合平衡状態における定量的な結
合を生ぜしめるように前記液体の流れを制御するような
液体浸透性を有していることを特徴とする反応容器を提
供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】図１（ａ）および（ｂ）に与えら
れた寸法は単なる例である。ここに記載された使い捨て
反応容器１およびその使い捨て反応容器１の使用方法
は、既知の反応容器および方法にそれぞれ比較して幾つ
かのかなりの利点を有する。使い捨て反応容器１は、免
疫反応によって決定することのできる成分の定量測定の
迅速履行を可能にする。この反応容器１の取扱いは非常
に簡単で、ＨＰＬＣのように高価な器具の使用を必要と
しない。更に、優れた結果が前述した使い捨て反応容器
１によって得られるのであり、免疫論的な反応成分を結
合して有する受媒質３（以下において受媒質ベッドと称
する）の消費量は極めて少ない。受媒質ベッド体積８、
すなわち上部および下部の分離装置２ａおよび２ｂの間
の５０μｌの体積、を有する使い捨て反応容器１が好ま
しく使用される。小さな受媒質ベッド体積は少量の溶出
液の使用を可能にし、この結果、溶出による希釈作用が
小さく維持され、従って大量の溶出体積を必要とするそ
の他の方法に比較して検出限界が低減されない。この観
点から、受媒質ベッド体積は６００μｌまでとされる。
れた寸法は単なる例である。ここに記載された使い捨て
反応容器１およびその使い捨て反応容器１の使用方法
は、既知の反応容器および方法にそれぞれ比較して幾つ
かのかなりの利点を有する。使い捨て反応容器１は、免
疫反応によって決定することのできる成分の定量測定の
迅速履行を可能にする。この反応容器１の取扱いは非常
に簡単で、ＨＰＬＣのように高価な器具の使用を必要と
しない。更に、優れた結果が前述した使い捨て反応容器
１によって得られるのであり、免疫論的な反応成分を結
合して有する受媒質３（以下において受媒質ベッドと称
する）の消費量は極めて少ない。受媒質ベッド体積８、
すなわち上部および下部の分離装置２ａおよび２ｂの間
の５０μｌの体積、を有する使い捨て反応容器１が好ま
しく使用される。小さな受媒質ベッド体積は少量の溶出
液の使用を可能にし、この結果、溶出による希釈作用が
小さく維持され、従って大量の溶出体積を必要とするそ
の他の方法に比較して検出限界が低減されない。この観
点から、受媒質ベッド体積は６００μｌまでとされる。
【０００８】更に、前述した反応容器１は決定されるべ
き成分若しくは被測定成分と免疫論的な反応成分との間
の結合平衡における定量測定（終点測定）を可能にす
る。この結合平衡は使い捨て反応容器１における１分間
の培養時間内に既に到達されている。この迅速平衡は、
上部および（または）下部の分離装置２ａおよび２ｂ、
少量の受媒質ベッド体積８、および受媒質に対する免疫
論的な反応成分の大量の付与によって可能となる。上部
および（または）下部の分離装置は選択された受媒質ベ
ッド体積と関連して制御された流れを発生し、また、受
媒質に反応成分を大量に付与する結果として、決定され
るべき成分は１分間内に、すなわち流れる液体が受媒質
ベッド体積を離れるよりも前に反応成分と定量的にほぼ
結合される。それ故に標準基準との比較分析が不要にな
る。更に、使い捨て反応容器１をすぐに使用できるか
ら、試料の迅速分析が可能になる。何故ならば、免疫論
的な反応成分を有する受媒質３が標準化可能であり、使
い捨て反応容器１を使用前に較正することがないからで
ある。受媒質３は圧力に対して安定的である必要はな
い。何故ならば、使い捨て反応容器１はＨＰＬＣを付与
せずに試料の迅速分析を可能にするからである。受媒質
として親和クロマトグラフィーの全ての共通材料が考慮
できる。好ましい受媒質材料はポリメリック糖、プラス
チック、またはシリケートであり、特に好ましい材料は
アガローズ(agarose) である。受媒質３に付与される免
疫論的反応成分は共有結合的並びに吸着的に受媒質に結
合できる。免疫論的反応成分はハプテン、抗原および抗
体を含む群から選択できる。ポリクロナール（polyclon
al) 並びにモノクロナール(monoclonal)抗体が使用でき
る。
き成分若しくは被測定成分と免疫論的な反応成分との間
の結合平衡における定量測定（終点測定）を可能にす
る。この結合平衡は使い捨て反応容器１における１分間
の培養時間内に既に到達されている。この迅速平衡は、
上部および（または）下部の分離装置２ａおよび２ｂ、
少量の受媒質ベッド体積８、および受媒質に対する免疫
論的な反応成分の大量の付与によって可能となる。上部
および（または）下部の分離装置は選択された受媒質ベ
ッド体積と関連して制御された流れを発生し、また、受
媒質に反応成分を大量に付与する結果として、決定され
るべき成分は１分間内に、すなわち流れる液体が受媒質
ベッド体積を離れるよりも前に反応成分と定量的にほぼ
結合される。それ故に標準基準との比較分析が不要にな
る。更に、使い捨て反応容器１をすぐに使用できるか
ら、試料の迅速分析が可能になる。何故ならば、免疫論
的な反応成分を有する受媒質３が標準化可能であり、使
い捨て反応容器１を使用前に較正することがないからで
ある。受媒質３は圧力に対して安定的である必要はな
い。何故ならば、使い捨て反応容器１はＨＰＬＣを付与
せずに試料の迅速分析を可能にするからである。受媒質
として親和クロマトグラフィーの全ての共通材料が考慮
できる。好ましい受媒質材料はポリメリック糖、プラス
チック、またはシリケートであり、特に好ましい材料は
アガローズ(agarose) である。受媒質３に付与される免
疫論的反応成分は共有結合的並びに吸着的に受媒質に結
合できる。免疫論的反応成分はハプテン、抗原および抗
体を含む群から選択できる。ポリクロナール（polyclon
al) 並びにモノクロナール(monoclonal)抗体が使用でき
る。
【０００９】使い捨て反応容器１の好ましい設計におい
て、免疫論的反応成分を有する受媒質３は２つの分離装
置の間に配置され、この上部および（または）下部の分
離装置２ａ，２ｂは多孔質フリット(frit)である。上部
および（または）下部のフリット２ａ，２ｂの孔寸法は
約０．０５μｍから約１００μｍまでとされ、約０．２
μｍから約１００μｍが好ましく、２μｍの孔寸法が特
に好ましい。フリット２ａ，２ｂの材料はプラスチッ
ク、金属およびガラスを含む群から選択され、プラスチ
ックが好ましく、ポリエチレンおよびテフロン（商標）
が特に好ましい。他の好ましい設計においては、上部お
よび下部の分離装置２ａ，２ｂは２つの等しい多孔性の
フリットである。他の好ましい設計においては、上部お
よび（または）下部のフリットの層厚さは約０．０５mm
〜約２mmであり、約０．２mm〜約２mmが好ましく、約１
mmの層厚さが特に好ましい。容器材料４は圧力に対して
安定している必要はない。何故ならば、使い捨て反応容
器１は高圧を受けないからである。それ故に更に金属の
ような耐圧材料以外にも、ガラス、天然材料、プラスチ
ックのような耐圧でない材料を、使い捨て反応容器１を
製造するのに考慮できる。好ましいプラスチックはポリ
エチレン、ポリプロピレンおよび（または）ポリスチレ
ンであり、好ましい金属は多孔質アルミニウムおよびス
テンレス鋼である。
て、免疫論的反応成分を有する受媒質３は２つの分離装
置の間に配置され、この上部および（または）下部の分
離装置２ａ，２ｂは多孔質フリット(frit)である。上部
および（または）下部のフリット２ａ，２ｂの孔寸法は
約０．０５μｍから約１００μｍまでとされ、約０．２
μｍから約１００μｍが好ましく、２μｍの孔寸法が特
に好ましい。フリット２ａ，２ｂの材料はプラスチッ
ク、金属およびガラスを含む群から選択され、プラスチ
ックが好ましく、ポリエチレンおよびテフロン（商標）
が特に好ましい。他の好ましい設計においては、上部お
よび下部の分離装置２ａ，２ｂは２つの等しい多孔性の
フリットである。他の好ましい設計においては、上部お
よび（または）下部のフリットの層厚さは約０．０５mm
〜約２mmであり、約０．２mm〜約２mmが好ましく、約１
mmの層厚さが特に好ましい。容器材料４は圧力に対して
安定している必要はない。何故ならば、使い捨て反応容
器１は高圧を受けないからである。それ故に更に金属の
ような耐圧材料以外にも、ガラス、天然材料、プラスチ
ックのような耐圧でない材料を、使い捨て反応容器１を
製造するのに考慮できる。好ましいプラスチックはポリ
エチレン、ポリプロピレンおよび（または）ポリスチレ
ンであり、好ましい金属は多孔質アルミニウムおよびス
テンレス鋼である。
【００１０】実際的な目的のために、使い捨て反応容器
１の一端に突出部５を設け、この反応容器を保持駆動装
置内に取付け自動搬送できるようにすることができる。
これは自動化された試料処理装置で使用するのに必要で
ある。また、使い捨て反応容器１の突出部５と反対側の
端部に小径の連結部を設け、それを他の使い捨て反応容
器とソケット−スイッチ連結するための連結部とするの
が好ましい。これは例えば幾つかの使い捨て反応容器１
を直列状に連結して、第１の容器の出口６を簡単な雄雌
連結によって第２の容器の入口に連結することを容易に
する。更に、使い捨て反応容器１はキャップ７および９
によって閉じることができる。前述した使い捨て反応容
器１を使用する方法は、一般的な方法に比べて格段に簡
単化され、迅速な定量および定性分析を可能にする。こ
れは、決定されるべき成分の測定が使い捨て反応容器１
の使用済み受媒質の事前の較正もしくは再生を必要とし
ないことによって、また、標準溶液の一連の基準測定が
全く必要とされないこと等によって、可能となる。この
簡単容易な取扱いは、試料およびその他の溶液を通常の
研究用器具を使用して、あるいはピペット操作の自動化
によって付与できるようにした結果である。
１の一端に突出部５を設け、この反応容器を保持駆動装
置内に取付け自動搬送できるようにすることができる。
これは自動化された試料処理装置で使用するのに必要で
ある。また、使い捨て反応容器１の突出部５と反対側の
端部に小径の連結部を設け、それを他の使い捨て反応容
器とソケット−スイッチ連結するための連結部とするの
が好ましい。これは例えば幾つかの使い捨て反応容器１
を直列状に連結して、第１の容器の出口６を簡単な雄雌
連結によって第２の容器の入口に連結することを容易に
する。更に、使い捨て反応容器１はキャップ７および９
によって閉じることができる。前述した使い捨て反応容
器１を使用する方法は、一般的な方法に比べて格段に簡
単化され、迅速な定量および定性分析を可能にする。こ
れは、決定されるべき成分の測定が使い捨て反応容器１
の使用済み受媒質の事前の較正もしくは再生を必要とし
ないことによって、また、標準溶液の一連の基準測定が
全く必要とされないこと等によって、可能となる。この
簡単容易な取扱いは、試料およびその他の溶液を通常の
研究用器具を使用して、あるいはピペット操作の自動化
によって付与できるようにした結果である。
【００１１】更に、手操作方法、自動操作方法がこの反
応容器１を応用することによって改善される。この方法
において、試料の付与およびこの方法における他の段階
は自動化した試料処理装置によって遂行される。このよ
うな処理装置は例えば工場における抗体製造のオンライ
ン製造処理制御に使用される。この方法においては、試
料は約６〜８時間間隔にて自動的に付与され、培養媒体
中の抗体濃度がこの使い捨て反応容器１を使用して長時
間にわたって迅速且つ簡単に連続して測定できる。本発
明の使い捨て反応容器１を使用する抗体生成制御装置が
図２に概略的に示されている。ここにおいて使い捨て反
応容器１は自動試料処理装置の中に含まれている。本発
明の反応容器を使用した方法は、試料を付与した後に反
応容器１に高圧をかけずに迅速に遂行できる。しかしな
がら、例えば遠心力またはポンプ駆動によって低い吸引
力または加圧力を生ぜしめ、さらに迅速に遂行するよう
にすることもできる。
応容器１を応用することによって改善される。この方法
において、試料の付与およびこの方法における他の段階
は自動化した試料処理装置によって遂行される。このよ
うな処理装置は例えば工場における抗体製造のオンライ
ン製造処理制御に使用される。この方法においては、試
料は約６〜８時間間隔にて自動的に付与され、培養媒体
中の抗体濃度がこの使い捨て反応容器１を使用して長時
間にわたって迅速且つ簡単に連続して測定できる。本発
明の使い捨て反応容器１を使用する抗体生成制御装置が
図２に概略的に示されている。ここにおいて使い捨て反
応容器１は自動試料処理装置の中に含まれている。本発
明の反応容器を使用した方法は、試料を付与した後に反
応容器１に高圧をかけずに迅速に遂行できる。しかしな
がら、例えば遠心力またはポンプ駆動によって低い吸引
力または加圧力を生ぜしめ、さらに迅速に遂行するよう
にすることもできる。
【００１２】必要ならば、幾つかの使い捨て反応容器１
を直列または並列に連結できる。これは、例えばそれぞ
れの単一試料における幾つかのパラメータの同時測定、
幾つかの試料の同時分析を可能にする。幾つかの使い捨
て反応容器の直列的な連結は、例えばアレルギー試験の
遂行に有利である。これにおいては、異なる抗原（アレ
ルゲン）が各個のカラムに付与され、次にこれらのカラ
ムが直列に連結され、アレルゲン反応を成立させるＩｇ
Ｅ級の抗体を含む試料が第１の反応容器に付与される。
試料は異なるアレルゲンを含む異なる反応容器１を通し
て連続して流される。試料のＩｇＥはアレルギー誘発抗
原を含む反応容器内で結合し、例えば蛍光検査によって
検出できる。このようにして、１つの単体試料が多くの
異なる可能性のあるアレルゲンによって同時に試験でき
る。
を直列または並列に連結できる。これは、例えばそれぞ
れの単一試料における幾つかのパラメータの同時測定、
幾つかの試料の同時分析を可能にする。幾つかの使い捨
て反応容器の直列的な連結は、例えばアレルギー試験の
遂行に有利である。これにおいては、異なる抗原（アレ
ルゲン）が各個のカラムに付与され、次にこれらのカラ
ムが直列に連結され、アレルゲン反応を成立させるＩｇ
Ｅ級の抗体を含む試料が第１の反応容器に付与される。
試料は異なるアレルゲンを含む異なる反応容器１を通し
て連続して流される。試料のＩｇＥはアレルギー誘発抗
原を含む反応容器内で結合し、例えば蛍光検査によって
検出できる。このようにして、１つの単体試料が多くの
異なる可能性のあるアレルゲンによって同時に試験でき
る。
【００１３】
【実例】以下の実例は本発明を説明するものである。 例１ 手操作による方法の実施 図１に示したようなポリプロピレンで作られた使い捨て
反応容器１は以下の成分を含んでいた。すなわち、テフ
ロン（商標）（孔寸法は約２μｍ、層厚さは約１mm）で
作られた２つのフリット２ａおよび２ｂの間には、０．
５ＭのＮａＣｌ中の共有結合したポリクロナールのマウ
スの抗ヒトＩｇＧと橋かけされた市販のシアノブロマイ
ド活性のアガロースを含む懸濁液約１００μｌが配置さ
れる。この懸濁液の１００μｌは５０μｌの最終受媒質
ベッド体積８を形成する。単位mlの受媒質ベッド当りの
結合能力は約７０μｇのヒトＩｇＧである。１０ｍＭの
燐酸塩緩衝剤 pＨ７．２、１５０ｍＭのＮａＣｌが平衡
緩衝剤（ＥＢ）として使用され、１Ｍのプロピオン酸が
溶出緩衝剤（ＥＬ）として使用され、１０％の胎児犢血
清(fetal calf serum （ＦＣＳ））を有するＲＰＭＩ媒
体が細胞培養媒体（ＣＭ）として使用された。最初に、
０．５μｇ〜５０μｇのヒトＩｇＧをＣＭに含む５０μ
ｌの試料が反応容器に付与された。これは１mlのＥＢで
洗浄されて溶出液が廃棄され、その後０．５mlのＥＬで
溶出された。溶出液は蛍光検査のためにクヴェットに集
められ、検出装置にて測定された。決定されるべきヒト
ＩｇＧの試料成分の定量測定のために、較正曲線が予め
設定された。０μｇ／mlから１０００μｇ／mlまでのＩ
ｇＧ濃度、好ましく０μｇ／ml〜１００μｇ／ml、が較
正曲線の設定のために使用され、また ａ） 紫外線検出装置にて２５０〜３００nmの範囲、好
ましくは２８０nmでの死滅、 ｂ） あるいは蛍光検出装置にて２５０〜２９０nmの励
起波長および３２０nm以上の放射波長での相対的な蛍光
強さ、が測定された。
反応容器１は以下の成分を含んでいた。すなわち、テフ
ロン（商標）（孔寸法は約２μｍ、層厚さは約１mm）で
作られた２つのフリット２ａおよび２ｂの間には、０．
５ＭのＮａＣｌ中の共有結合したポリクロナールのマウ
スの抗ヒトＩｇＧと橋かけされた市販のシアノブロマイ
ド活性のアガロースを含む懸濁液約１００μｌが配置さ
れる。この懸濁液の１００μｌは５０μｌの最終受媒質
ベッド体積８を形成する。単位mlの受媒質ベッド当りの
結合能力は約７０μｇのヒトＩｇＧである。１０ｍＭの
燐酸塩緩衝剤 pＨ７．２、１５０ｍＭのＮａＣｌが平衡
緩衝剤（ＥＢ）として使用され、１Ｍのプロピオン酸が
溶出緩衝剤（ＥＬ）として使用され、１０％の胎児犢血
清(fetal calf serum （ＦＣＳ））を有するＲＰＭＩ媒
体が細胞培養媒体（ＣＭ）として使用された。最初に、
０．５μｇ〜５０μｇのヒトＩｇＧをＣＭに含む５０μ
ｌの試料が反応容器に付与された。これは１mlのＥＢで
洗浄されて溶出液が廃棄され、その後０．５mlのＥＬで
溶出された。溶出液は蛍光検査のためにクヴェットに集
められ、検出装置にて測定された。決定されるべきヒト
ＩｇＧの試料成分の定量測定のために、較正曲線が予め
設定された。０μｇ／mlから１０００μｇ／mlまでのＩ
ｇＧ濃度、好ましく０μｇ／ml〜１００μｇ／ml、が較
正曲線の設定のために使用され、また ａ） 紫外線検出装置にて２５０〜３００nmの範囲、好
ましくは２８０nmでの死滅、 ｂ） あるいは蛍光検出装置にて２５０〜２９０nmの励
起波長および３２０nm以上の放射波長での相対的な蛍光
強さ、が測定された。
【００１４】マーカー分子が使用されるならば、検出波
長はそのマーカーに対して調整されるようになされる。
細胞培養媒体単独の測定値が試料の測定値から差し引か
れた。この測定の実際的な遂行において、反応容器１を
通してのそれぞれの試料の溶出流れは、最も簡単な場合
で重力により発生させることができる。この流れを加速
するために、以下の代替例が考慮できる。すなわち、 ａ） 圧力：これは最も簡単な場合で使い捨て注射器を
使用して発生でき、注射器はルアーロック(luer-lock)
連結によって反応容器１と連結される。更に、圧力は手
操作供給器のようなその他の器具で発生できる。 ｂ） 真空圧：これは通常の真空ポンプを反応容器の出
口に連結して発生できる。 ｃ） 遠心力：この変形例においては、試料、洗浄液お
よび溶出液は例えば予め定めた破断点を有する別の室内
に導かれ、適当な遠心力の付加によって予め定めた破断
点を経て与えられた遠心力で液体が反応容器へ流され
る。
長はそのマーカーに対して調整されるようになされる。
細胞培養媒体単独の測定値が試料の測定値から差し引か
れた。この測定の実際的な遂行において、反応容器１を
通してのそれぞれの試料の溶出流れは、最も簡単な場合
で重力により発生させることができる。この流れを加速
するために、以下の代替例が考慮できる。すなわち、 ａ） 圧力：これは最も簡単な場合で使い捨て注射器を
使用して発生でき、注射器はルアーロック(luer-lock)
連結によって反応容器１と連結される。更に、圧力は手
操作供給器のようなその他の器具で発生できる。 ｂ） 真空圧：これは通常の真空ポンプを反応容器の出
口に連結して発生できる。 ｃ） 遠心力：この変形例においては、試料、洗浄液お
よび溶出液は例えば予め定めた破断点を有する別の室内
に導かれ、適当な遠心力の付加によって予め定めた破断
点を経て与えられた遠心力で液体が反応容器へ流され
る。
【００１５】例２ 全自動による方法の遂行 使用した装置は以下の要素で作られた。すなわちＨＰＬ
Ｃ試料形成装置（ＡＢＩＭＥＤ ＡＳＰＥＣ装置）、使
い捨て反応容器１、流動セルを備えた蛍光すなわち紫外
線検出装置、およびデータ処理のためのコンピュータ。
分析は以下のように遂行された。すなわち細胞培養によ
る試料形成が共通の試料形成装置によって遂行された。
フィルタ（ＡＳＰＥＣ装置の）による細胞の分離および
使い捨て反応容器１を備えた棚を廃棄位置に位置決めし
た後、試料が付与され、反応容器はＥＢで洗浄され、そ
して反応容器を備えた棚が溶出位置に位置決めされた。
決定されるべき成分の溶出は１段階にて行われた。決定
されるべき成分は溶出溶液中を流れ検出装置に送られ、
測定された。使用された体積は例１の体積と同じであっ
た。
Ｃ試料形成装置（ＡＢＩＭＥＤ ＡＳＰＥＣ装置）、使
い捨て反応容器１、流動セルを備えた蛍光すなわち紫外
線検出装置、およびデータ処理のためのコンピュータ。
分析は以下のように遂行された。すなわち細胞培養によ
る試料形成が共通の試料形成装置によって遂行された。
フィルタ（ＡＳＰＥＣ装置の）による細胞の分離および
使い捨て反応容器１を備えた棚を廃棄位置に位置決めし
た後、試料が付与され、反応容器はＥＢで洗浄され、そ
して反応容器を備えた棚が溶出位置に位置決めされた。
決定されるべき成分の溶出は１段階にて行われた。決定
されるべき成分は溶出溶液中を流れ検出装置に送られ、
測定された。使用された体積は例１の体積と同じであっ
た。
【図１】（ａ）は、２つの分離装置を含み、それらの間
に免疫論的な反応成分が結合された受媒質ベッドが配設
されている、本発明実施例の使い捨て反応容器の縦断面
図。（ｂ）は、使い捨て反応容器の頂面図。
に免疫論的な反応成分が結合された受媒質ベッドが配設
されている、本発明実施例の使い捨て反応容器の縦断面
図。（ｂ）は、使い捨て反応容器の頂面図。
【図２】抗体生成制御のためのオンライン装置の概略
図。
図。
１ 反応容器 ２ａ 分離装置 ２ｂ 分離装置 ３ 受媒質ベッド ５ 突出部
Claims (20)
- 【請求項１】 被測定成分を含む液体が浸透できる上部
および下部の多孔質の分離装置と、これら分離装置の間
に配設された受媒質ベッドとを備えた固相免疫分析のた
めの使い捨ての親和性クロマトグラフィー反応容器にお
いて、 前記反応容器の上端及び下端が開口し、前記被測定成分
と反応する少なくとも１種類の免疫論的な反応成分が前
記受媒質ベッドに結合されるとともに、その受媒質ベッ
ドの体積が６００μｌまでとされており、また、前記受
媒質ベッドに結合された免疫論的な反応成分の量が大量
であって、上部および下部の分離装置の少なくとも一方
が、前記液体が前記受媒質ベッドから流れ出る前に前記
被測定成分と前記免疫論的な反応成分との、結合平衡状
態における定量的な結合を生ぜしめるように前記液体の
流れを制御するような液体浸透性を有していることを特
徴とする反応容器。 - 【請求項２】 請求項１による反応容器において、該反
応容器の即時使用を可能にするために免疫論的な反応成
分を含む受媒質ベッドが標準化されていることを特徴と
する反応容器。 - 【請求項３】 請求項１または請求項２による反応容器
であって、ポリメリック糖、プラスチックまたはシリケ
ートを含む群から受媒質材料を選択することを特徴とす
る反応容器。 - 【請求項４】 請求項３による反応容器であって、ポリ
メリック糖としてアガロースを特徴とする反応容器。 - 【請求項５】 請求項１による反応容器であって、受媒
質に免疫論的な反応成分を共有結合または吸着結合する
ことを特徴とする反応容器。 - 【請求項６】 請求項５による反応容器であって、ハプ
テン、抗原および抗体を含む群から免疫論的な反応成分
を選択することを特徴とする反応容器。 - 【請求項７】 請求項６による反応容器であって、ポリ
クロナール抗体を特徴とする反応容器。 - 【請求項８】 請求項６による反応容器であって、モノ
クロナール抗体を特徴とする反応容器。 - 【請求項９】 請求項１による反応容器であって、少な
くとも一方の分離装置に多孔質フリットまたは膜部材を
使用することを特徴とする反応容器。 - 【請求項１０】 請求項９による反応容器であって、フ
リットが０．２μｍ〜１００μｍの孔寸法を有すること
を特徴とする反応容器。 - 【請求項１１】 請求項９による反応容器であって、フ
リットが０．０５mm〜２mmの層厚さを有することを特徴
とする反応容器。 - 【請求項１２】 請求項１１による反応容器であって、
層厚さが１mmであることを特徴とする反応容器。 - 【請求項１３】 請求項９から請求項１２までの何れか
１項による反応容器であって、フリットがプラスチッ
ク、金属またはガラスで作られていることを特徴とする
反応容器。 - 【請求項１４】 請求項１３による反応容器であって、
プラスチック材料としてポリエチレンまたはポリテトラ
フルオロエチレン、また、金属として多孔質アルミニウ
ムまたはステンレス鋼を使用することを特徴とする反応
容器。 - 【請求項１５】 請求項１から請求項１４までの何れか
１項による反応容器であって、プラスチック、金属およ
び天然材料を含む群から容器材料が選択されることを特
徴とする反応容器。 - 【請求項１６】 請求項１５による反応容器であって、
プラスチック材料としてポリエチレン、ポリプロピレン
およびポリスチレンのうち少なくとも１つを使用するこ
とを特徴とする反応容器。 - 【請求項１７】 請求項１から請求項１６までの何れか
１項による反応容器であって、反応容器の一端に形成さ
れ、自動搬送のために保持移動装置に反応容器を取付け
ることができるようにする突出部を有することを特徴と
する反応容器。 - 【請求項１８】 請求項１から請求項１７までの何れか
１項による反応容器であって、突出部と反対端部の容器
直径よりも小さな直径の連結部を有することを特徴とす
る反応容器。 - 【請求項１９】 請求項１８による反応容器であって、
幾つかの反応容器を直列に連結するために雄雌連結部で
反応容器の反対端部を連結できるようになされたことを
特徴とする反応容器。 - 【請求項２０】 請求項１から請求項１９までの何れか
１項による反応容器であって、受媒質ベッド体積が５０
μｌであることを特徴とする反応容器。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4029460 | 1990-09-17 | ||
| DE4126436A DE4126436A1 (de) | 1990-09-17 | 1991-08-09 | Einwegreaktionsgefaess fuer die festphasenimmunanalytik und verfahren zur messung von ueber immunreaktionen bestimmbaren komponenten |
| DE41264363 | 1991-08-09 | ||
| DE40294609 | 1991-08-09 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3514307A Division JP2902111B2 (ja) | 1990-09-17 | 1991-09-02 | 固相免疫検定のための使い捨て反応容器および免疫反応により検出可能な成分の測定方法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08211037A true JPH08211037A (ja) | 1996-08-20 |
| JP3119802B2 JP3119802B2 (ja) | 2000-12-25 |
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ID=25896954
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3514307A Expired - Fee Related JP2902111B2 (ja) | 1990-09-17 | 1991-09-02 | 固相免疫検定のための使い捨て反応容器および免疫反応により検出可能な成分の測定方法 |
| JP07296890A Expired - Fee Related JP3119802B2 (ja) | 1990-09-17 | 1995-11-15 | 固相免疫分析のための使い捨ての親和性クロマトグラフィー反応容器 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3514307A Expired - Fee Related JP2902111B2 (ja) | 1990-09-17 | 1991-09-02 | 固相免疫検定のための使い捨て反応容器および免疫反応により検出可能な成分の測定方法 |
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|---|---|
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| JP (2) | JP2902111B2 (ja) |
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| AU (1) | AU651617B2 (ja) |
| DE (2) | DE4126436A1 (ja) |
| DK (1) | DK0557288T3 (ja) |
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| GR (1) | GR3019173T3 (ja) |
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| JP2017517012A (ja) * | 2014-05-20 | 2017-06-22 | エスピーイーウェア・コーポレイションＳＰＥｗａｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | 微細溶出のベッドの設計によるサンプル抽出装置 |
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| US20040200909A1 (en) | 1999-05-28 | 2004-10-14 | Cepheid | Apparatus and method for cell disruption |
| EP1208189B1 (en) | 1999-05-28 | 2004-10-06 | Cepheid | Device and method for analysing liquid samples |
| US9073053B2 (en) | 1999-05-28 | 2015-07-07 | Cepheid | Apparatus and method for cell disruption |
| US6664104B2 (en) | 1999-06-25 | 2003-12-16 | Cepheid | Device incorporating a microfluidic chip for separating analyte from a sample |
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