JPH08173181A - ヘテロ分岐シクロデキストリンの製造方法 - Google Patents
ヘテロ分岐シクロデキストリンの製造方法Info
- Publication number
- JPH08173181A JPH08173181A JP33511394A JP33511394A JPH08173181A JP H08173181 A JPH08173181 A JP H08173181A JP 33511394 A JP33511394 A JP 33511394A JP 33511394 A JP33511394 A JP 33511394A JP H08173181 A JPH08173181 A JP H08173181A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hetero
- cyclodextrin
- group
- galactosyl
- oligosaccharide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 シクロデキストリンと還元末端がマルトース
以上のマルトオリゴ糖単位を有するヘテロオリゴ糖を含
有する溶液に、枝切り酵素を作用させることを特徴とす
る下記一般式（Ｉ）で表されるヘテロ分岐シクロデキス
トリン（式中、Ｒはシクロデキストリンの６位水酸基を
示し、Ｘ1 およびＸ2 は水素原子またはガラクトシル
基，マンノシル基およびＮ−アセチルグルコサミニル基
のいずれかであり、共に水素原子である場合を除く。ま
た、ｎは１〜４の整数を示す。）の製造方法。 【化１】 【効果】 本発明によれば、枝切り酵素の縮合作用を利
用して、ＣＤ分子中のグルコースにα−１，６結合で還
元末端がマルトース以上のマルトオリゴ糖単位を有する
ヘテロオリゴ糖が結合しているヘテロ分岐ＣＤを効率よ
く得ることができる。
以上のマルトオリゴ糖単位を有するヘテロオリゴ糖を含
有する溶液に、枝切り酵素を作用させることを特徴とす
る下記一般式（Ｉ）で表されるヘテロ分岐シクロデキス
トリン（式中、Ｒはシクロデキストリンの６位水酸基を
示し、Ｘ1 およびＸ2 は水素原子またはガラクトシル
基，マンノシル基およびＮ−アセチルグルコサミニル基
のいずれかであり、共に水素原子である場合を除く。ま
た、ｎは１〜４の整数を示す。）の製造方法。 【化１】 【効果】 本発明によれば、枝切り酵素の縮合作用を利
用して、ＣＤ分子中のグルコースにα−１，６結合で還
元末端がマルトース以上のマルトオリゴ糖単位を有する
ヘテロオリゴ糖が結合しているヘテロ分岐ＣＤを効率よ
く得ることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヘテロ分岐シクロデキ
ストリンの製造方法に関し、詳しくは側鎖の還元末端が
マルトース以上のマルトオリゴ糖単位を有するヘテロ分
岐シクロデキストリンの製造方法に関する。
ストリンの製造方法に関し、詳しくは側鎖の還元末端が
マルトース以上のマルトオリゴ糖単位を有するヘテロ分
岐シクロデキストリンの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】シク
ロデキストリン（以下、ＣＤと略記する。）は、グルコ
ースがα−１，４結合で連なった環状デキストリンであ
り、グルコース６，７または８個より成るそれぞれα
−，β−およびγ−ＣＤが良く知られている。最近、Ｃ
Ｄの溶解度を改善するため、これらＣＤ分子中のグルコ
ースにα−１，６結合でグルコシル基，マルトシル基あ
るいはマルトオリゴシル基などを結合させた分岐ＣＤが
合成されている。これらＣＤおよび分岐ＣＤには分子内
部に空洞があり、しかもこの空洞内部が疎水性になって
いるため、包接作用があり、各種油性物質を取り込む性
質を有している。そのため、この性質を利用して不安
定物質の安定化、揮発性物質の保持、異臭のマスキ
ング、難・不溶性物質の可溶化など、種々の用途が考
えられている。最近、医薬品工業の分野では薬剤の副作
用を少なくするため、糖質の細胞認識性に着目して、こ
れをドラッグ・デリバリーシステムの薬剤運搬体の標識
細胞へのセンサーとして利用する研究が活発に行われて
いる。特に、ガラクトース、マンノースなどは生体内の
各部位に強い親和性を示すことが良く知られている。
ロデキストリン（以下、ＣＤと略記する。）は、グルコ
ースがα−１，４結合で連なった環状デキストリンであ
り、グルコース６，７または８個より成るそれぞれα
−，β−およびγ−ＣＤが良く知られている。最近、Ｃ
Ｄの溶解度を改善するため、これらＣＤ分子中のグルコ
ースにα−１，６結合でグルコシル基，マルトシル基あ
るいはマルトオリゴシル基などを結合させた分岐ＣＤが
合成されている。これらＣＤおよび分岐ＣＤには分子内
部に空洞があり、しかもこの空洞内部が疎水性になって
いるため、包接作用があり、各種油性物質を取り込む性
質を有している。そのため、この性質を利用して不安
定物質の安定化、揮発性物質の保持、異臭のマスキ
ング、難・不溶性物質の可溶化など、種々の用途が考
えられている。最近、医薬品工業の分野では薬剤の副作
用を少なくするため、糖質の細胞認識性に着目して、こ
れをドラッグ・デリバリーシステムの薬剤運搬体の標識
細胞へのセンサーとして利用する研究が活発に行われて
いる。特に、ガラクトース、マンノースなどは生体内の
各部位に強い親和性を示すことが良く知られている。
【０００３】これまでに本発明者らは、α−ガラクトシ
ダーゼ，β−ガラクトシダーゼおよびα−マンノシダー
ゼの糖転移作用を利用して、グルコシルＣＤ，マルトシ
ルＣＤ等の分岐ＣＤの側鎖にガラクトースまたはマンノ
ースを結合させたヘテロ分岐ＣＤを合成してきた。しか
し、この方法では目的物質の収率が低く、その上該物質
を単離するための分画操作にコストがかかりすぎるとい
う欠点がある。さらに、一般的に生体内では側鎖がある
程度長い方が組織や細胞に対する親和性が高いため、長
鎖のヘテロ分岐ＣＤの合成が望まれるが、上記の方法で
は長鎖のヘテロ分岐ＣＤは合成しにくいという欠点があ
る。そこで、本発明者らはヘテロ分岐ＣＤの上述の如き
溶解性に優れているという特性に注目し、効率良くヘテ
ロ分岐ＣＤを合成すべく種々検討を重ねた。
ダーゼ，β−ガラクトシダーゼおよびα−マンノシダー
ゼの糖転移作用を利用して、グルコシルＣＤ，マルトシ
ルＣＤ等の分岐ＣＤの側鎖にガラクトースまたはマンノ
ースを結合させたヘテロ分岐ＣＤを合成してきた。しか
し、この方法では目的物質の収率が低く、その上該物質
を単離するための分画操作にコストがかかりすぎるとい
う欠点がある。さらに、一般的に生体内では側鎖がある
程度長い方が組織や細胞に対する親和性が高いため、長
鎖のヘテロ分岐ＣＤの合成が望まれるが、上記の方法で
は長鎖のヘテロ分岐ＣＤは合成しにくいという欠点があ
る。そこで、本発明者らはヘテロ分岐ＣＤの上述の如き
溶解性に優れているという特性に注目し、効率良くヘテ
ロ分岐ＣＤを合成すべく種々検討を重ねた。
【０００４】まず、酵素の糖転移作用を利用し、受容体
としてマルトース，マルトトリオース，マルトテトラオ
ースなどのマルトオリゴ糖またはそれらの混合物を用
い、供与体として乳糖を用いるときはβ−ガラクトシダ
ーゼを、マンノビオースを供与体として用いるときはマ
ンノシダーゼを、キトビオースを用いるときはＮ−アセ
チル−グルコサミニダーゼを作用させることによって、
還元末端がマルトース以上のマルトオリゴ糖単位を有す
るヘテロオリゴ糖を合成した後、枝切り酵素の縮合作用
を利用してα−，β−およびγ−ＣＤのグルコシル基に
α結合で該ヘテロオリゴ糖を結合させたヘテロ分岐ＣＤ
の合成法を完成した。さらに、このうち特にクレブジエ
ラ属微生物由来のプルラナーゼは、α−，β−およびγ
−ＣＤのグルコシル基に、α−１，６結合で１分子の還
元末端がマルトース以上のマルトオリゴ糖単位を有する
ヘテロオリゴ糖を結合させたヘテロ分岐ＣＤを効率良く
合成することを見出し、この知見に基づいて本発明を完
成したのである。
としてマルトース，マルトトリオース，マルトテトラオ
ースなどのマルトオリゴ糖またはそれらの混合物を用
い、供与体として乳糖を用いるときはβ−ガラクトシダ
ーゼを、マンノビオースを供与体として用いるときはマ
ンノシダーゼを、キトビオースを用いるときはＮ−アセ
チル−グルコサミニダーゼを作用させることによって、
還元末端がマルトース以上のマルトオリゴ糖単位を有す
るヘテロオリゴ糖を合成した後、枝切り酵素の縮合作用
を利用してα−，β−およびγ−ＣＤのグルコシル基に
α結合で該ヘテロオリゴ糖を結合させたヘテロ分岐ＣＤ
の合成法を完成した。さらに、このうち特にクレブジエ
ラ属微生物由来のプルラナーゼは、α−，β−およびγ
−ＣＤのグルコシル基に、α−１，６結合で１分子の還
元末端がマルトース以上のマルトオリゴ糖単位を有する
ヘテロオリゴ糖を結合させたヘテロ分岐ＣＤを効率良く
合成することを見出し、この知見に基づいて本発明を完
成したのである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、シク
ロデキストリンと還元末端がマルトース以上のマルトオ
リゴ糖単位を有するヘテロオリゴ糖を含有する溶液に、
枝切り酵素を作用させることを特徴とする下記一般式
（Ｉ）で表されるヘテロ分岐シクロデキストリン（式
中、Ｒはシクロデキストリンの６位水酸基を示し、Ｘ1
およびＸ2 は水素原子またはガラクトシル基，マンノシ
ル基およびＮ−アセチルグルコサミニル基のいずれかで
あり、共に水素原子である場合を除く。また、ｎは１〜
４の整数を示す。）の製造方法に関するものである。
ロデキストリンと還元末端がマルトース以上のマルトオ
リゴ糖単位を有するヘテロオリゴ糖を含有する溶液に、
枝切り酵素を作用させることを特徴とする下記一般式
（Ｉ）で表されるヘテロ分岐シクロデキストリン（式
中、Ｒはシクロデキストリンの６位水酸基を示し、Ｘ1
およびＸ2 は水素原子またはガラクトシル基，マンノシ
ル基およびＮ−アセチルグルコサミニル基のいずれかで
あり、共に水素原子である場合を除く。また、ｎは１〜
４の整数を示す。）の製造方法に関するものである。
【０００６】
【化２】
【０００７】本発明に用いるＣＤは、α−，β−および
γ−ＣＤのいずれでもよく、これらの混合物であっても
よい。また、本発明に用いる還元末端がマルトース以上
のマルトオリゴ糖単位を有するヘテロオリゴ糖（以下、
糖供与体と記す。）としては、マルトオリゴ糖にα−ガ
ラクトシダーゼまたはβ−ガラクトシダーゼの糖転移作
用により合成されるガラクトシル・マルトオリゴ糖、あ
るいはα−マンノシダーゼの糖転移作用により合成され
るマンノシル・マルトオリゴ糖、あるいはＮ−アセチル
グルコサミニダーゼの糖転移作用により合成されるＮ−
アセチルグルコサミニル・マルトオリゴ糖およびそれら
の混合物なども用いることができる。
γ−ＣＤのいずれでもよく、これらの混合物であっても
よい。また、本発明に用いる還元末端がマルトース以上
のマルトオリゴ糖単位を有するヘテロオリゴ糖（以下、
糖供与体と記す。）としては、マルトオリゴ糖にα−ガ
ラクトシダーゼまたはβ−ガラクトシダーゼの糖転移作
用により合成されるガラクトシル・マルトオリゴ糖、あ
るいはα−マンノシダーゼの糖転移作用により合成され
るマンノシル・マルトオリゴ糖、あるいはＮ−アセチル
グルコサミニダーゼの糖転移作用により合成されるＮ−
アセチルグルコサミニル・マルトオリゴ糖およびそれら
の混合物なども用いることができる。
【０００８】次に、本発明に用いる枝切り酵素として
は、上記糖供与体である還元末端がマルトース以上のマ
ルトオリゴ糖単位を有するヘテロオリゴ糖とＣＤを含有
する溶液に作用させたとき、その糖供与体をＣＤにα結
合で縮合させ、ヘテロ分岐ＣＤを合成するものであれば
よく、その起源を問わずいずれも使用可能である。通常
は、プルラナーゼ，イソアミラーゼ等が用いられる。本
発明に用いる枝切り酵素は、自然界に広く分布している
ものであり、例えばプルラナーゼは、クレブジエラ属微
生物，バチルス属微生物，エアロバクター・エアロゲネ
ス，エンテロバクター・エアロゲネスなどの微生物由来
の酵素がよく知られており、イソアミラーゼとしてはシ
ュードモナス・アミロデラモサなどの微生物由来の酵素
がよく知られている。
は、上記糖供与体である還元末端がマルトース以上のマ
ルトオリゴ糖単位を有するヘテロオリゴ糖とＣＤを含有
する溶液に作用させたとき、その糖供与体をＣＤにα結
合で縮合させ、ヘテロ分岐ＣＤを合成するものであれば
よく、その起源を問わずいずれも使用可能である。通常
は、プルラナーゼ，イソアミラーゼ等が用いられる。本
発明に用いる枝切り酵素は、自然界に広く分布している
ものであり、例えばプルラナーゼは、クレブジエラ属微
生物，バチルス属微生物，エアロバクター・エアロゲネ
ス，エンテロバクター・エアロゲネスなどの微生物由来
の酵素がよく知られており、イソアミラーゼとしてはシ
ュードモナス・アミロデラモサなどの微生物由来の酵素
がよく知られている。
【０００９】本発明の反応系において、ＣＤと糖供与体
を含む溶液（水溶液または懸濁液）は、ＣＤの濃度が約
１〜５０％（ｗ／ｗ），糖供与体の濃度が約１〜９０％
（ｗ／ｗ）であることが望ましく、かつＣＤに対する糖
供与体の比率（重量）は、使用する糖供与体の種類によ
って異なるが、０．１〜５０倍の範囲、好ましくは１〜
５倍の範囲とするのが適当である。反応液のｐＨは３〜
１０、好ましくは４〜９、温度は２０〜７０℃、好まし
くは３０〜６０℃に調整して反応させることが適当であ
る。また、使用酵素量は反応時間と密接な関係があるの
で、通常は５〜１００時間で反応が終了するような酵素
量とすればよいが、これらに限定されるものではない。
を含む溶液（水溶液または懸濁液）は、ＣＤの濃度が約
１〜５０％（ｗ／ｗ），糖供与体の濃度が約１〜９０％
（ｗ／ｗ）であることが望ましく、かつＣＤに対する糖
供与体の比率（重量）は、使用する糖供与体の種類によ
って異なるが、０．１〜５０倍の範囲、好ましくは１〜
５倍の範囲とするのが適当である。反応液のｐＨは３〜
１０、好ましくは４〜９、温度は２０〜７０℃、好まし
くは３０〜６０℃に調整して反応させることが適当であ
る。また、使用酵素量は反応時間と密接な関係があるの
で、通常は５〜１００時間で反応が終了するような酵素
量とすればよいが、これらに限定されるものではない。
【００１０】以上のような方法で反応させて得られた反
応生成物から目的とするヘテロ分岐ＣＤを採取するに
は、通常の手法によればよく、その１例を示すと、上記
反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
にかけて、ＣＤへの転移生成物を分取した後、ＨＰＬＣ
のリテンションタイムを標準物質と比較し、さらにＦＡ
Ｂ−ＭＳ，13Ｃ−ＮＭＲ，メチル化分析により構造を調
べ、転移生成物のＣＤ分子中のグルコースにα−１，６
結合で、還元末端がマルトース以上のマルトオリゴ糖単
位を有するヘテロオリゴ糖が結合しているヘテロ分岐Ｃ
Ｄであることを確認する。こうして製造されたヘテロ分
岐ＣＤは、ドラッグ・デリバリーシステムの薬剤運搬体
等としての利用が期待される。
応生成物から目的とするヘテロ分岐ＣＤを採取するに
は、通常の手法によればよく、その１例を示すと、上記
反応生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
にかけて、ＣＤへの転移生成物を分取した後、ＨＰＬＣ
のリテンションタイムを標準物質と比較し、さらにＦＡ
Ｂ−ＭＳ，13Ｃ−ＮＭＲ，メチル化分析により構造を調
べ、転移生成物のＣＤ分子中のグルコースにα−１，６
結合で、還元末端がマルトース以上のマルトオリゴ糖単
位を有するヘテロオリゴ糖が結合しているヘテロ分岐Ｃ
Ｄであることを確認する。こうして製造されたヘテロ分
岐ＣＤは、ドラッグ・デリバリーシステムの薬剤運搬体
等としての利用が期待される。
【００１１】
【実施例】次に、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ （１）縮合反応 既知の方法により得られたガラクトシル・マルトトリオ
ース（４3 −Ｏ−β−ガラクトシル−マルトトリオー
ス）８ｇおよびβ−ＣＤ２ｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ６．０）１５ｍｌに懸濁させた後、クレブジエラ属微
生物由来のプルラナーゼ（天野製薬株式会社製）を６３
４単位加え、６０℃にて７２時間反応させた。反応終了
後、酵素を熱失活させた溶液を高速液体クロマトグラフ
ィーにかけて縮合生成物４９５ｍｇを分取した。
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ （１）縮合反応 既知の方法により得られたガラクトシル・マルトトリオ
ース（４3 −Ｏ−β−ガラクトシル−マルトトリオー
ス）８ｇおよびβ−ＣＤ２ｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ６．０）１５ｍｌに懸濁させた後、クレブジエラ属微
生物由来のプルラナーゼ（天野製薬株式会社製）を６３
４単位加え、６０℃にて７２時間反応させた。反応終了
後、酵素を熱失活させた溶液を高速液体クロマトグラフ
ィーにかけて縮合生成物４９５ｍｇを分取した。
【００１２】（２）構造解析 ＦＡＢ−ＭＳ分析により、m/z １７８１の分子イオンピ
ーク（［Ｍ−Ｈ］- ）とβ−ＣＤに由来するm/z １１３
３にフラグメントイオンピークが検出された。また、13
Ｃ−ＮＭＲ分析では、β−ＣＤのグルコシル基の６位炭
素に由来するシグナルが１本低磁場側に大きくシフトし
ていることより、β−ＣＤのグルコシル基の６位の水酸
基が結合に関与していることが確認された（図１）。以
上の結果とメチル化分析より、マルトトリオースの非還
元末端側グルコシル基の４位にガラクトシル基がβ結合
したガラクトシル・マルトトリオースがβ−ＣＤにα−
１，６結合した構造であると確認された。
ーク（［Ｍ−Ｈ］- ）とβ−ＣＤに由来するm/z １１３
３にフラグメントイオンピークが検出された。また、13
Ｃ−ＮＭＲ分析では、β−ＣＤのグルコシル基の６位炭
素に由来するシグナルが１本低磁場側に大きくシフトし
ていることより、β−ＣＤのグルコシル基の６位の水酸
基が結合に関与していることが確認された（図１）。以
上の結果とメチル化分析より、マルトトリオースの非還
元末端側グルコシル基の４位にガラクトシル基がβ結合
したガラクトシル・マルトトリオースがβ−ＣＤにα−
１，６結合した構造であると確認された。
【００１３】実施例２ （１）縮合反応 既知の方法により得られたガラクトシル・マルトテトラ
オース（４4 −Ｏ−β−ガラクトシル−マルトテトラオ
ース）８ｇおよびβ−ＣＤ２ｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ６．０）１５ｍｌに懸濁させた後、クレブジエラ
属微生物由来のプルラナーゼ（天野製薬株式会社製）を
６３４単位加え、６０℃にて７２時間反応させた。反応
終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速液体クロマトグ
ラフィーにかけて縮合生成物４３０ｍｇを分取した。
オース（４4 −Ｏ−β−ガラクトシル−マルトテトラオ
ース）８ｇおよびβ−ＣＤ２ｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ６．０）１５ｍｌに懸濁させた後、クレブジエラ
属微生物由来のプルラナーゼ（天野製薬株式会社製）を
６３４単位加え、６０℃にて７２時間反応させた。反応
終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速液体クロマトグ
ラフィーにかけて縮合生成物４３０ｍｇを分取した。
【００１４】（２）構造解析 ＦＡＢ−ＭＳ分析により、m/z １９４３の分子イオンピ
ーク（［Ｍ−Ｈ］- ）とβ−ＣＤに由来するm/z １１３
３にフラグメントイオンピークが検出された。また、13
Ｃ−ＮＭＲ分析では、β−ＣＤのグルコシル基の６位炭
素に由来するシグナルが１本低磁場側に大きくシフトし
ていることより、β−ＣＤのグルコシル基の６位の水酸
基が結合に関与していることが確認された（図２）。以
上の結果とメチル化分析より、マルトテトラオースの非
還元末端側グルコシル基の４位にガラクトシル基がβ結
合したガラクトシル・マルトテトラオースがβ−ＣＤに
α−１，６結合した構造であると確認された。
ーク（［Ｍ−Ｈ］- ）とβ−ＣＤに由来するm/z １１３
３にフラグメントイオンピークが検出された。また、13
Ｃ−ＮＭＲ分析では、β−ＣＤのグルコシル基の６位炭
素に由来するシグナルが１本低磁場側に大きくシフトし
ていることより、β−ＣＤのグルコシル基の６位の水酸
基が結合に関与していることが確認された（図２）。以
上の結果とメチル化分析より、マルトテトラオースの非
還元末端側グルコシル基の４位にガラクトシル基がβ結
合したガラクトシル・マルトテトラオースがβ−ＣＤに
α−１，６結合した構造であると確認された。
【００１５】実施例３ （１）縮合反応 既知の方法により得られたガラクトシル・マルトペンタ
オース（４5 −Ｏ−β−ガラクトシル−マルトペンタオ
ース）８ｇおよびβ−ＣＤ２ｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ６．０）１５ｍｌに懸濁させた後、クレブジエラ
属微生物由来のプルラナーゼ（天野製薬株式会社製）を
６３４単位加え、６０℃にて７２時間反応させた。反応
終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速液体クロマトグ
ラフィーにかけて縮合生成物３９０ｍｇを分取した。
オース（４5 −Ｏ−β−ガラクトシル−マルトペンタオ
ース）８ｇおよびβ−ＣＤ２ｇを５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ６．０）１５ｍｌに懸濁させた後、クレブジエラ
属微生物由来のプルラナーゼ（天野製薬株式会社製）を
６３４単位加え、６０℃にて７２時間反応させた。反応
終了後、酵素を熱失活させた溶液を高速液体クロマトグ
ラフィーにかけて縮合生成物３９０ｍｇを分取した。
【００１６】（２）構造解析 ＦＡＢ−ＭＳ分析により、m/z ２１０５の分子イオンピ
ーク（［Ｍ−Ｈ］- ）とβ−ＣＤに由来するm/z １１３
３にフラグメントイオンピークが検出された（図３）。
また、13Ｃ−ＮＭＲ分析では、β−ＣＤのグルコシル基
の６位炭素に由来するシグナルが１本低磁場側に大きく
シフトしていることより、β−ＣＤのグルコシル基の６
位の水酸基が結合に関与していることが確認された（図
４）。以上の結果とメチル化分析より、マルトペンタオ
ースの非還元末端側グルコシル基の４位にガラクトシル
基がβ結合したガラクトシル・マルトペンタオースがβ
−ＣＤにα−１，６結合した構造であると確認された。
ーク（［Ｍ−Ｈ］- ）とβ−ＣＤに由来するm/z １１３
３にフラグメントイオンピークが検出された（図３）。
また、13Ｃ−ＮＭＲ分析では、β−ＣＤのグルコシル基
の６位炭素に由来するシグナルが１本低磁場側に大きく
シフトしていることより、β−ＣＤのグルコシル基の６
位の水酸基が結合に関与していることが確認された（図
４）。以上の結果とメチル化分析より、マルトペンタオ
ースの非還元末端側グルコシル基の４位にガラクトシル
基がβ結合したガラクトシル・マルトペンタオースがβ
−ＣＤにα−１，６結合した構造であると確認された。
【００１７】
【発明の効果】本発明によれば、枝切り酵素の縮合作用
を利用して、ＣＤ分子中のグルコースにα−１，６結合
で還元末端がマルトース以上のマルトオリゴ糖単位を有
するヘテロオリゴ糖が結合しているヘテロ分岐ＣＤを効
率よく得ることができる。
を利用して、ＣＤ分子中のグルコースにα−１，６結合
で還元末端がマルトース以上のマルトオリゴ糖単位を有
するヘテロオリゴ糖が結合しているヘテロ分岐ＣＤを効
率よく得ることができる。
【図１】 実施例１のヘテロ分岐ＣＤの13Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルである。
ペクトルである。
【図２】 実施例２のヘテロ分岐ＣＤの13Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルである。
ペクトルである。
【図３】 実施例３のヘテロ分岐ＣＤのＦＡＢ−ＭＳス
ペクトルである。
ペクトルである。
【図４】 実施例３のヘテロ分岐ＣＤの13Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルである。
ペクトルである。
Claims (4)
- 【請求項１】 シクロデキストリンと還元末端がマルト
ース以上のマルトオリゴ糖単位を有するヘテロオリゴ糖
を含有する溶液に、枝切り酵素を作用させることを特徴
とする下記一般式（Ｉ）で表されるヘテロ分岐シクロデ
キストリン（式中、Ｒはシクロデキストリンの６位水酸
基を示し、Ｘ1 およびＸ2 は水素原子またはガラクトシ
ル基，マンノシル基およびＮ−アセチルグルコサミニル
基のいずれかであり、共に水素原子である場合を除く。
また、ｎは１〜４の整数を示す。）の製造方法。 【化１】 - 【請求項２】 枝切り酵素が、プルラナーゼまたはイソ
アミラーゼから選ばれたものであることを特徴とする請
求項１記載の製造方法。 - 【請求項３】 枝切り酵素が、クレブジエラ属微生物由
来のプルラナーゼであることを特徴とする請求項１記載
の製造方法。 - 【請求項４】 ヘテロオリゴ糖が、ガラクトシル・マル
トオリゴ糖，マンノシル・マルトオリゴ糖およびＮ−ア
セチルグルコサミニル・マルトオリゴ糖のいずれかであ
ることを特徴とする請求項１記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33511394A JPH08173181A (ja) | 1994-12-21 | 1994-12-21 | ヘテロ分岐シクロデキストリンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33511394A JPH08173181A (ja) | 1994-12-21 | 1994-12-21 | ヘテロ分岐シクロデキストリンの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08173181A true JPH08173181A (ja) | 1996-07-09 |
Family
ID=18284921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33511394A Pending JPH08173181A (ja) | 1994-12-21 | 1994-12-21 | ヘテロ分岐シクロデキストリンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08173181A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0818469A2 (en) * | 1996-07-11 | 1998-01-14 | Ensuiko Sugar Refining Company, Limited | Branched cyclodextrins and method for producing them |
-
1994
- 1994-12-21 JP JP33511394A patent/JPH08173181A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0818469A2 (en) * | 1996-07-11 | 1998-01-14 | Ensuiko Sugar Refining Company, Limited | Branched cyclodextrins and method for producing them |
| US5763598A (en) * | 1996-07-11 | 1998-06-09 | Ensuiko Sugar Refining Co., Ltd. | Branched cyclodextrins and method for producing them |
| EP0818469A3 (en) * | 1996-07-11 | 1998-08-05 | Ensuiko Sugar Refining Company, Limited | Branched cyclodextrins and method for producing them |
| KR100407043B1 (ko) * | 1996-07-11 | 2004-05-31 | 엔스이코 세이토 가부시키가이샤 | 분지 사이클로 덱스트린 및 그 제조방법 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Monsan et al. | Enzymatic synthesis of oligosaccharides | |
| US4859590A (en) | Enzymatic synthesis of cyclodextrins using α-glucosyl fluoride as substrate for cyclodextrin α(1→4)glucosyltransferase | |
| EP0307534B1 (en) | A heterogeneous multiple-branched cyclodextrin and method for the preparation thereof | |
| JP3078923B2 (ja) | 新規分岐シクロデキストリンおよびその製造方法 | |
| JP3865436B2 (ja) | 分岐シクロデキストリンの製造方法 | |
| US5366879A (en) | Method of preparing branched cyclodextrin | |
| US4910137A (en) | Twig branched cyclodextrin | |
| JP2886249B2 (ja) | ガラクトシル―マルトオリゴ糖誘導体、その製造法およびα―アミラーゼ活性測定方法 | |
| JPH08173181A (ja) | ヘテロ分岐シクロデキストリンの製造方法 | |
| JP2863263B2 (ja) | 分岐シクロデキストリンの側鎖部分にβ―結合でガラクトシル基を転移結合させた新規ヘテロ分岐シクロデキストリン及びその製造方法 | |
| JPS623795A (ja) | 分枝状シクロデキストリンの製造方法 | |
| JP3637086B2 (ja) | マンノシル−シクロデキストリンの製法 | |
| JP3064031B2 (ja) | 新規オリゴ糖およびその製造法 | |
| JP2863262B2 (ja) | 分岐シクロデキストリンの側鎖部分にα―結合でガラクトシル基を転移結合させた新規ヘテロ分岐シクロデキストリン及びその製造方法 | |
| JP3122203B2 (ja) | 新規ヘテロ分岐シクロデキストリンおよびその製造方法 | |
| JP3655325B2 (ja) | マンノシル−シクロデキストリンの新規製造方法 | |
| JP3086076B2 (ja) | 新規ガラクトシル−分岐シクロデキストリン | |
| JP3637085B2 (ja) | マンノシル−シクロデキストリンの製造方法 | |
| JP3168311B2 (ja) | グルコシルサイクロデキストリン類の製造方法 | |
| JP3995774B2 (ja) | 新規α−フコシダーゼ | |
| JP3637088B2 (ja) | ヘテロオリゴ糖３糖類の製造方法 | |
| JP2021122193A (ja) | 糖合成用限外ろ過デバイス | |
| JPH08325304A (ja) | 新規分岐シクロデキストリンおよびその製造方法 | |
| JPH0791310B2 (ja) | オリゴ糖およびその製造方法 | |
| JPH0570472A (ja) | 新規オリゴ糖及びその製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20041026 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20041221 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20050208 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |