JPH08100001A - 蛍光標識化セルロース類 - Google Patents
蛍光標識化セルロース類Info
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- JPH08100001A JPH08100001A JP23300894A JP23300894A JPH08100001A JP H08100001 A JPH08100001 A JP H08100001A JP 23300894 A JP23300894 A JP 23300894A JP 23300894 A JP23300894 A JP 23300894A JP H08100001 A JPH08100001 A JP H08100001A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 生体成分等の試料から分析可能な蛍光標識し
たセルロース又はその誘導体を提供する。 【構成】 蛍光標識試薬でその水酸基の一部が修飾され
てなるセルロース又は誘導体。
たセルロース又はその誘導体を提供する。 【構成】 蛍光標識試薬でその水酸基の一部が修飾され
てなるセルロース又は誘導体。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規な蛍光標識したセル
ロースとその誘導体に関する。更に詳しくは、本発明は
生体に投与されたセルロース又はその誘導体の動態を解
明するために有用な、生体試料で分析可能な蛍光標識し
たセルロース又はその誘導体に関する。
ロースとその誘導体に関する。更に詳しくは、本発明は
生体に投与されたセルロース又はその誘導体の動態を解
明するために有用な、生体試料で分析可能な蛍光標識し
たセルロース又はその誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】セルロースやその誘導体は賦形剤、結合
剤、増粘剤、コーティング剤、懸濁剤、乳化剤等として
医薬品添加物に用いられている。又最近これらの新しい
機能性に着目した薬物送達システム（ＤＤＳ）が研究さ
れ一部実用化されている。例えば、ヒドロキシプロピル
セルロース（ＨＰＣ）と薬物との混合粉末組成物を鼻腔
に投与すると、粘膜上でＨＰＣが粘液を吸収してゲルを
形成し、一時的に粘液繊毛輸送を止めるとともに粘液に
より徐々に溶解されて包含された薬物を次第に放出す
る。このようにして、従来の点鼻液剤と比べて投与回数
と薬物量の低減されたＤＤＳが提供され医療に貢献して
いる。
剤、増粘剤、コーティング剤、懸濁剤、乳化剤等として
医薬品添加物に用いられている。又最近これらの新しい
機能性に着目した薬物送達システム（ＤＤＳ）が研究さ
れ一部実用化されている。例えば、ヒドロキシプロピル
セルロース（ＨＰＣ）と薬物との混合粉末組成物を鼻腔
に投与すると、粘膜上でＨＰＣが粘液を吸収してゲルを
形成し、一時的に粘液繊毛輸送を止めるとともに粘液に
より徐々に溶解されて包含された薬物を次第に放出す
る。このようにして、従来の点鼻液剤と比べて投与回数
と薬物量の低減されたＤＤＳが提供され医療に貢献して
いる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上記のＨＰＣのような
セルロース系の基剤は薬物とともに投与され薬物動態を
より合理的なものにするのに有用であるが、基剤自体の
動態を把握することもその生体に対する安全性を評価す
る観点から重要である。そこで、生体に投与した後の生
体組織中のセルロース系基剤を定量する方法の確立が望
まれている。
セルロース系の基剤は薬物とともに投与され薬物動態を
より合理的なものにするのに有用であるが、基剤自体の
動態を把握することもその生体に対する安全性を評価す
る観点から重要である。そこで、生体に投与した後の生
体組織中のセルロース系基剤を定量する方法の確立が望
まれている。
【０００４】このような場合に一部の原子を放射性同位
元素で置換した放射性標識体を使用する方法が常套であ
る。事実、低置換度ＨＰＣのヒドロキシプロポキシル基
の炭素原子の一部が14Ｃに置換された14Ｃ−ＨＰＣが報
告されている（応用薬理１２（１）３３−３９（１９７
６）。このような手段によって生体に投与されたセルロ
ース系基剤の動態を追跡することが可能であるが、当該
標識体は放射性であるためその取扱いに規制があり、薬
物とともに製剤的な加工を施す必要がある場合には設備
的に困難な点が多い。従って製剤化は実施する場合には
非放射性の基剤であることが望ましいが、全てのセルロ
ース系基剤は紫外線を吸収したり蛍光を発したりする微
量分析に適した構造を有しておらず、又多くの糖質関連
物質の存在する生体試料よりセルロース系基剤のみを選
択的に単離することも困難である。
元素で置換した放射性標識体を使用する方法が常套であ
る。事実、低置換度ＨＰＣのヒドロキシプロポキシル基
の炭素原子の一部が14Ｃに置換された14Ｃ−ＨＰＣが報
告されている（応用薬理１２（１）３３−３９（１９７
６）。このような手段によって生体に投与されたセルロ
ース系基剤の動態を追跡することが可能であるが、当該
標識体は放射性であるためその取扱いに規制があり、薬
物とともに製剤的な加工を施す必要がある場合には設備
的に困難な点が多い。従って製剤化は実施する場合には
非放射性の基剤であることが望ましいが、全てのセルロ
ース系基剤は紫外線を吸収したり蛍光を発したりする微
量分析に適した構造を有しておらず、又多くの糖質関連
物質の存在する生体試料よりセルロース系基剤のみを選
択的に単離することも困難である。
【０００５】本発明者らはセルロースとその誘導体に関
して従来の修飾化合物を調査したが、上記の目的に適う
非放射性化合物、例えば蛍光標識したセルロース系基剤
は全く報告がなかった。つまり本発明はセルロースとそ
の誘導体の体内動態を比較的簡易に検討するための非放
射性標識したセルロースとその誘導体を提供することを
課題とする。
して従来の修飾化合物を調査したが、上記の目的に適う
非放射性化合物、例えば蛍光標識したセルロース系基剤
は全く報告がなかった。つまり本発明はセルロースとそ
の誘導体の体内動態を比較的簡易に検討するための非放
射性標識したセルロースとその誘導体を提供することを
課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の課題
を解決するために鋭意研究した結果、セルロース系の基
剤に蛍光発色団を有するイソチオシアン酸エステルを反
応させると、セルロース系基剤の水酸基の一部に蛍光性
イソチオシアン酸エステルがチオカルバモイル結合した
標識体が得られることを初めて知見した。
を解決するために鋭意研究した結果、セルロース系の基
剤に蛍光発色団を有するイソチオシアン酸エステルを反
応させると、セルロース系基剤の水酸基の一部に蛍光性
イソチオシアン酸エステルがチオカルバモイル結合した
標識体が得られることを初めて知見した。
【０００７】しかして本発明は、蛍光標識試薬でその水
酸基の一部が修飾されてなるセルロース又はその誘導体
である。更に具体的には、本発明は、蛍光発色団を有す
るイソチオシアン酸エステルでその水酸基の一部を修飾
されてなるセルロース又はその誘導体である。
酸基の一部が修飾されてなるセルロース又はその誘導体
である。更に具体的には、本発明は、蛍光発色団を有す
るイソチオシアン酸エステルでその水酸基の一部を修飾
されてなるセルロース又はその誘導体である。
【０００８】本発明で用いられる蛍光発色団を有するイ
ソチオシアン酸エステルとしては、例えばフルオレセイ
ンイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ローダミンイソチ
オシアネート（ＲＩＴＣ）、エオシンイソチオシアネー
ト（ＥＩＴＣ）、キノリジノフルオレセインイソチオシ
アネート（ＱＦＩＴＣ）又はテトラメチルーダミンイソ
チオシアネート（ＴＭＲＩＴＣ）等を挙げることがで
き、これらの蛍光標識試薬は公知であり市販品として入
手できる。
ソチオシアン酸エステルとしては、例えばフルオレセイ
ンイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ローダミンイソチ
オシアネート（ＲＩＴＣ）、エオシンイソチオシアネー
ト（ＥＩＴＣ）、キノリジノフルオレセインイソチオシ
アネート（ＱＦＩＴＣ）又はテトラメチルーダミンイソ
チオシアネート（ＴＭＲＩＴＣ）等を挙げることがで
き、これらの蛍光標識試薬は公知であり市販品として入
手できる。
【０００９】本発明で用いられるセルロースとその誘導
体としてはヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒ
ドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチ
ルセルロース、結晶セルロース、メチルセルロース、エ
チルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース
フタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセ
テートサクシネート、カルメロース、カルメロースカル
シウム、カルメロースナトリウム、クロスカルメロース
ナトリウム、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸
フタル酸セルロース又はヒドロキシエチルセルロース等
を挙げることができる。
体としてはヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒ
ドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチ
ルセルロース、結晶セルロース、メチルセルロース、エ
チルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース
フタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセ
テートサクシネート、カルメロース、カルメロースカル
シウム、カルメロースナトリウム、クロスカルメロース
ナトリウム、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸
フタル酸セルロース又はヒドロキシエチルセルロース等
を挙げることができる。
【００１０】一般にセルロース誘導体はセルロース骨格
中の水酸基が、炭素数１〜２のアルキル基、炭素数２〜
３のヒドロキシアルキル基、又はカルボキシメチル基或
いはそのアルカリ金属塩の少なくとも一つで置換された
セルロースアルキルエーテル、及びセルロース又はその
セルロースアルキルエーテルの水酸基と酢酸、コハク酸
或いはフタル酸との単独又は混合エステルからなる。
中の水酸基が、炭素数１〜２のアルキル基、炭素数２〜
３のヒドロキシアルキル基、又はカルボキシメチル基或
いはそのアルカリ金属塩の少なくとも一つで置換された
セルロースアルキルエーテル、及びセルロース又はその
セルロースアルキルエーテルの水酸基と酢酸、コハク酸
或いはフタル酸との単独又は混合エステルからなる。
【００１１】セルロース誘導体の水酸基の置換率は、ヒ
ドロキシプロピルセルロースでヒドロキシプロポキシル
基が５３．４〜７７．５％、低置換度ヒドロキシプロピ
ルセルロースでヒドロキシプロポキシル基が５．０〜１
６．０％、ヒドロキシプロピルメチルセルロースでメト
キシル基１９．０〜２４．０％／ヒドロキシプロポキシ
ル基４．０〜１２．０％、メトキシル基２７．０〜３
０．０％／ヒドロキシプロポキシル基４．０〜７．５
％、又はメトキシル基２８．０〜３０．０％／ヒドロキ
シプロポキシル基７．０〜１２．０％、メチルセルロー
スでメトキシル基が２６．０〜３３．０％、エチルセル
ロースでエトキシル基が４６．５〜５１．０％、ヒドロ
キシプロピルメチルセルロースフタレートでメトキシル
基１８．０〜２２．０％／ヒドロキシプロポキシル基
５．０〜９．０％／カルボキシベンゾイル基２７．０〜
３５．０％／又はメトキシル基２０．０〜２４．０％／
ヒドロキシプロポキシル基６．０〜１０．０％／カルボ
キシベンゾイル基２１．０〜２７．０％、ヒドロキシプ
ロピルメチルセルロースアセテートサクシネートでメト
キシル基１２．０〜２８．０％／ヒドロキシプロポキシ
ル基４．０〜２３．０％／アセチル基２．０〜１６．０
％／サクシノイル基４．０〜２８．０％、カルボキシメ
チルエチルセルロースでカルボキシメチル基８．９〜１
４．９％／エトキシル基３２．５〜４３．０％、酢酸フ
タル酸セルロースでアセチル基１７．０〜２２．０％／
カルボキシベンゾイル基３０．０〜４０．０％、ヒドロ
キシエチルセルロースでヒドロキシエトキシル基が３
０．０〜７０．０％と規定されており、その中で置換度
や分子量の違いからいくつかのグレードが製造されてい
る。又カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメ
ロースナトリウム及びクロスカルメロースナトリウムは
置換度の規定はないが、やはり置換度や分子量の異なる
いくつかのグレードが市販されている。例えば、ヒドロ
キシプロピルセルロース（ＨＰＣ）は日本曹達からＨＰ
Ｃ−ＳＳＬ、ＳＬ、−Ｌ、−Ｍ、−Ｈの５つのグレード
が販売されており、分子量や置換度の違いを反映して２
％水溶液（２０℃）粘度がそれぞれ２．０〜２．９セン
チポイズ（ｃｐｓ）、３．０〜５．９ｃｐｓ、６．０〜
１０．０ｃｐｓ、１５０〜４００ｃｐｓ、１０００〜４
０００ｃｐｓと規定されている。又他社からはこれらと
は分子量や置換度の異なったＨＰＣが提供される。
ドロキシプロピルセルロースでヒドロキシプロポキシル
基が５３．４〜７７．５％、低置換度ヒドロキシプロピ
ルセルロースでヒドロキシプロポキシル基が５．０〜１
６．０％、ヒドロキシプロピルメチルセルロースでメト
キシル基１９．０〜２４．０％／ヒドロキシプロポキシ
ル基４．０〜１２．０％、メトキシル基２７．０〜３
０．０％／ヒドロキシプロポキシル基４．０〜７．５
％、又はメトキシル基２８．０〜３０．０％／ヒドロキ
シプロポキシル基７．０〜１２．０％、メチルセルロー
スでメトキシル基が２６．０〜３３．０％、エチルセル
ロースでエトキシル基が４６．５〜５１．０％、ヒドロ
キシプロピルメチルセルロースフタレートでメトキシル
基１８．０〜２２．０％／ヒドロキシプロポキシル基
５．０〜９．０％／カルボキシベンゾイル基２７．０〜
３５．０％／又はメトキシル基２０．０〜２４．０％／
ヒドロキシプロポキシル基６．０〜１０．０％／カルボ
キシベンゾイル基２１．０〜２７．０％、ヒドロキシプ
ロピルメチルセルロースアセテートサクシネートでメト
キシル基１２．０〜２８．０％／ヒドロキシプロポキシ
ル基４．０〜２３．０％／アセチル基２．０〜１６．０
％／サクシノイル基４．０〜２８．０％、カルボキシメ
チルエチルセルロースでカルボキシメチル基８．９〜１
４．９％／エトキシル基３２．５〜４３．０％、酢酸フ
タル酸セルロースでアセチル基１７．０〜２２．０％／
カルボキシベンゾイル基３０．０〜４０．０％、ヒドロ
キシエチルセルロースでヒドロキシエトキシル基が３
０．０〜７０．０％と規定されており、その中で置換度
や分子量の違いからいくつかのグレードが製造されてい
る。又カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメ
ロースナトリウム及びクロスカルメロースナトリウムは
置換度の規定はないが、やはり置換度や分子量の異なる
いくつかのグレードが市販されている。例えば、ヒドロ
キシプロピルセルロース（ＨＰＣ）は日本曹達からＨＰ
Ｃ−ＳＳＬ、ＳＬ、−Ｌ、−Ｍ、−Ｈの５つのグレード
が販売されており、分子量や置換度の違いを反映して２
％水溶液（２０℃）粘度がそれぞれ２．０〜２．９セン
チポイズ（ｃｐｓ）、３．０〜５．９ｃｐｓ、６．０〜
１０．０ｃｐｓ、１５０〜４００ｃｐｓ、１０００〜４
０００ｃｐｓと規定されている。又他社からはこれらと
は分子量や置換度の異なったＨＰＣが提供される。
【００１２】本発明に使用したセルロース及びその誘導
体には提供されるすべてのグレードが含まれる。
体には提供されるすべてのグレードが含まれる。
【００１３】本発明の蛍光発色団を有するイソチオシア
ン酸エステルとセルロース又はその誘導体との反応は下
記の式で表される。
ン酸エステルとセルロース又はその誘導体との反応は下
記の式で表される。
【００１４】
【化１】
【００１５】反応はセルロース又はその誘導体がジメチ
ルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などに溶解する場合、これ
にイソチオシアン酸エステルを加えて溶液中で実施する
ことができる。例えばＨＰＣの２％（ｗ／ｖ）ＤＭＳＯ
溶液にピリジンとジラウリル酸ジｎ―ブチル錫を加え、
さらにＨＰＣの１０分の１量のＦＩＴＣ（アイソマーＩ
型）を添加して９５℃で２時間攪拌しながら反応させた
時、ＨＰＣに対する重量比で約０．２％の修飾率（この
時分子量分布２５〜４０万のＨＰＣ―Ｈ １分子中に平
均して１ないし２個のＦＩＴＣが付加）のＦＩＴＣ―Ｈ
ＰＣが得られた。この反応条件についてはデキストラン
のＦＩＴＣ標識方法を参考にした。（Carbohydrate Re
s. ３０ ３７５−８（１９７３））。
ルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などに溶解する場合、これ
にイソチオシアン酸エステルを加えて溶液中で実施する
ことができる。例えばＨＰＣの２％（ｗ／ｖ）ＤＭＳＯ
溶液にピリジンとジラウリル酸ジｎ―ブチル錫を加え、
さらにＨＰＣの１０分の１量のＦＩＴＣ（アイソマーＩ
型）を添加して９５℃で２時間攪拌しながら反応させた
時、ＨＰＣに対する重量比で約０．２％の修飾率（この
時分子量分布２５〜４０万のＨＰＣ―Ｈ １分子中に平
均して１ないし２個のＦＩＴＣが付加）のＦＩＴＣ―Ｈ
ＰＣが得られた。この反応条件についてはデキストラン
のＦＩＴＣ標識方法を参考にした。（Carbohydrate Re
s. ３０ ３７５−８（１９７３））。
【００１６】又セルロース系の基剤の中には適当な溶剤
のないものがある。そのような場合に固相反応によって
セルロース系基剤の蛍光標識化を行うことができる。例
えばＨＰＣはトルエンに溶解しないが、ＨＰＣ１００ｇ
を２５０ｍｌのトルエンに浸してわずかに膨潤させ、こ
れにＦＩＴＣを５０分の１量添加して９５℃で２時間攪
拌しながら反応させた時、重量比約１％の修飾率（この
時分子量２５〜４０万のＨＰＣ―Ｈ １分子中に平均し
て５〜１０個のＦＩＴＣが付加）のＦＩＴＣ―ＨＰＣが
得られた。
のないものがある。そのような場合に固相反応によって
セルロース系基剤の蛍光標識化を行うことができる。例
えばＨＰＣはトルエンに溶解しないが、ＨＰＣ１００ｇ
を２５０ｍｌのトルエンに浸してわずかに膨潤させ、こ
れにＦＩＴＣを５０分の１量添加して９５℃で２時間攪
拌しながら反応させた時、重量比約１％の修飾率（この
時分子量２５〜４０万のＨＰＣ―Ｈ １分子中に平均し
て５〜１０個のＦＩＴＣが付加）のＦＩＴＣ―ＨＰＣが
得られた。
【００１７】これらの標識化反応によってセルロース骨
格の未置換の水酸基又はセルロース誘導体に導入された
ヒドロキシアルキル基末端の水酸基が蛍光性イソチオシ
アン酸エステルとチオカルバモイル結合すると推定され
る。そして修飾される割合は分子量１万あたり５×１０
-4〜２個の蛍光性イソチオシアン酸エステルを含むと推
定され、これ未満或いはこれを越えるものも理論的には
可能であるが、生体試料からの分析が困難になったり、
体内動態の検討に不適当になると考えられる。
格の未置換の水酸基又はセルロース誘導体に導入された
ヒドロキシアルキル基末端の水酸基が蛍光性イソチオシ
アン酸エステルとチオカルバモイル結合すると推定され
る。そして修飾される割合は分子量１万あたり５×１０
-4〜２個の蛍光性イソチオシアン酸エステルを含むと推
定され、これ未満或いはこれを越えるものも理論的には
可能であるが、生体試料からの分析が困難になったり、
体内動態の検討に不適当になると考えられる。
【００１８】こうして得られた本発明の蛍光発色団を有
するイソチオシアン酸エステルで標識したセルロース又
はその誘導体は、溶解性、吸水性、分子量分布等の性質
が未修飾のものとほぼ同等で、生体での動態を検討する
ための標識体として妥当なものであった。
するイソチオシアン酸エステルで標識したセルロース又
はその誘導体は、溶解性、吸水性、分子量分布等の性質
が未修飾のものとほぼ同等で、生体での動態を検討する
ための標識体として妥当なものであった。
【００１９】
【実施例】以下の実施例により本発明をより詳細に説明
するが、本発明をこれにより限定するものではない。
するが、本発明をこれにより限定するものではない。
【００２０】［実施例１］本実施例は、溶液中でヒドロ
キシプロピルセルロース（ＨＰＣ―Ｈ）をフルオレセイ
ン５―イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で蛍光標識し、
標識体としての妥当性を評価するためその諸性質を調べ
たものである。
キシプロピルセルロース（ＨＰＣ―Ｈ）をフルオレセイ
ン５―イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で蛍光標識し、
標識体としての妥当性を評価するためその諸性質を調べ
たものである。
【００２１】（１）日本曹達のＨＰＣ―Ｈ微粉タイプ４
０ｇを２ｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解
し、ピリジン３０ｍｌ、ジラウリル酸ジｎ―ブチル錫
（IV）８０００ｍｇを加え９５℃に加温した。これにフ
ルオレセイン５―イソチオシアネート（同仁製）４ｇを
添加して９５℃で２時間攪拌しながら反応させた。２時
間後反応液を７５℃の熱水４０ｌ中に注いで標識された
ＨＰＣを析出させ、洗浄、濾別した。さらに熱水中での
洗浄を繰り返し濾別したゲル状の標識化ＨＰＣを一度乾
燥させた。これをエタノールに溶解後エタノールと水の
３：２混合液に対し透析し、透析終了後熱水中で析出し
濾別して得られたゲルを乾燥した。これをエタノールに
１％溶液として溶解し、整粒のため噴霧乾燥機（ヤマト
科学、ＧＳ―３１）で平均径２．２μｍ、幾何標準偏差
２．４の微粉に造粒した。
０ｇを２ｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解
し、ピリジン３０ｍｌ、ジラウリル酸ジｎ―ブチル錫
（IV）８０００ｍｇを加え９５℃に加温した。これにフ
ルオレセイン５―イソチオシアネート（同仁製）４ｇを
添加して９５℃で２時間攪拌しながら反応させた。２時
間後反応液を７５℃の熱水４０ｌ中に注いで標識された
ＨＰＣを析出させ、洗浄、濾別した。さらに熱水中での
洗浄を繰り返し濾別したゲル状の標識化ＨＰＣを一度乾
燥させた。これをエタノールに溶解後エタノールと水の
３：２混合液に対し透析し、透析終了後熱水中で析出し
濾別して得られたゲルを乾燥した。これをエタノールに
１％溶液として溶解し、整粒のため噴霧乾燥機（ヤマト
科学、ＧＳ―３１）で平均径２．２μｍ、幾何標準偏差
２．４の微粉に造粒した。
【００２２】このようにして得られたＦＩＴＣ―ＨＰＣ
―Ｈ微粉を０．０５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
８）―０．１５Ｍ塩化ナトリウムに溶解して０．０１％
（ｗ／ｖ）溶液とし、これを同じ緩衝液を溶離液とする
ゲル濾過クロマトグラフィー（カラム：東ソ―ＴＳＫｇ
ｅ１Ｇ６０００ＰＷXL７．８×３００ｍｍ）に１５０μ
ｌ注入した。対照としてＨＰＣ―Ｈの０．０１％（ｗ／
ｖ）溶液を注入した。これを蛍光検出器と示差屈折計検
出器で分析し、結果を図１、図２に示した。図１は溶液
中で標識したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ａ）及びＨＰＣ―
Ｈ（ｃ）の蛍光検出器による分析結果を示す。また図２
は溶液中で標識したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ａ）及びＨ
ＰＣ―Ｈ（ｃ）の示差屈折計検出器による分析結果を示
す。図１、図２の（ａ）からＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈは示
差屈折計検出器で検出されたＨＰＣピークに一致し微量
分析に適した感度の蛍光ピークを生じ、蛍光標識された
ことが確認された。又図１、図２の（ｂ）から示差屈折
計検出器による分析で、ＦＩＴＣ―ＨＰＣ―ＨとＨＰＣ
―Ｈはほぼ一致した溶出挙動を示しＦＩＴＣ標識により
ほとんど分子量が変化していないことが示された。
―Ｈ微粉を０．０５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
８）―０．１５Ｍ塩化ナトリウムに溶解して０．０１％
（ｗ／ｖ）溶液とし、これを同じ緩衝液を溶離液とする
ゲル濾過クロマトグラフィー（カラム：東ソ―ＴＳＫｇ
ｅ１Ｇ６０００ＰＷXL７．８×３００ｍｍ）に１５０μ
ｌ注入した。対照としてＨＰＣ―Ｈの０．０１％（ｗ／
ｖ）溶液を注入した。これを蛍光検出器と示差屈折計検
出器で分析し、結果を図１、図２に示した。図１は溶液
中で標識したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ａ）及びＨＰＣ―
Ｈ（ｃ）の蛍光検出器による分析結果を示す。また図２
は溶液中で標識したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ａ）及びＨ
ＰＣ―Ｈ（ｃ）の示差屈折計検出器による分析結果を示
す。図１、図２の（ａ）からＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈは示
差屈折計検出器で検出されたＨＰＣピークに一致し微量
分析に適した感度の蛍光ピークを生じ、蛍光標識された
ことが確認された。又図１、図２の（ｂ）から示差屈折
計検出器による分析で、ＦＩＴＣ―ＨＰＣ―ＨとＨＰＣ
―Ｈはほぼ一致した溶出挙動を示しＦＩＴＣ標識により
ほとんど分子量が変化していないことが示された。
【００２３】（２）ＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ微粉と、同じ
ように噴霧乾燥機で造粒したＨＰＣ―Ｈ微粉を０．２５
ｇずつ坪量して５０ｍｌの純水中に一様に加えて攪拌し
ながら溶解し、１０，２０，３０，６０，１２０，２４
０分後及び１日後にサンプリングして０．４５μｍのフ
ィルターを通過したものを定量して、溶解速度を比較し
た。いずれの粉体も２４０分でほぼ完全に溶解し、その
過程の溶解速度はほぼ同じであった。
ように噴霧乾燥機で造粒したＨＰＣ―Ｈ微粉を０．２５
ｇずつ坪量して５０ｍｌの純水中に一様に加えて攪拌し
ながら溶解し、１０，２０，３０，６０，１２０，２４
０分後及び１日後にサンプリングして０．４５μｍのフ
ィルターを通過したものを定量して、溶解速度を比較し
た。いずれの粉体も２４０分でほぼ完全に溶解し、その
過程の溶解速度はほぼ同じであった。
【００２４】（３）噴霧乾燥で造粒したＦＩＴＣ―ＨＰ
Ｃ―ＨとＨＰＣ―Ｈを減圧下乾燥した後、５５％ＲＨ及
び７５％ＲＨで２〜５日調湿して重量変化により吸湿性
を比較した。その結果ＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈは５５％Ｒ
Ｈで約４％、７５％ＲＨで約１０％の重量増加があり、
ＨＰＣ―Ｈとほぼ同等の吸湿性を示した。
Ｃ―ＨとＨＰＣ―Ｈを減圧下乾燥した後、５５％ＲＨ及
び７５％ＲＨで２〜５日調湿して重量変化により吸湿性
を比較した。その結果ＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈは５５％Ｒ
Ｈで約４％、７５％ＲＨで約１０％の重量増加があり、
ＨＰＣ―Ｈとほぼ同等の吸湿性を示した。
【００２５】（４）このようにして得られたＦＩＴＣ―
ＨＰＣ―ＨのＦＩＴＣ含量はＦＩＴＣ含量が既知のＦＩ
ＴＣ―デキストランと相対的な蛍光強度の比較で求めた
ところ約０．２％であった。
ＨＰＣ―ＨのＦＩＴＣ含量はＦＩＴＣ含量が既知のＦＩ
ＴＣ―デキストランと相対的な蛍光強度の比較で求めた
ところ約０．２％であった。
【００２６】［実施例２］本実施例は、固相反応によっ
てＨＰＣ―ＨをＦＩＴＣで蛍光標識したものである。
てＨＰＣ―ＨをＦＩＴＣで蛍光標識したものである。
【００２７】（１）ＨＰＣ―Ｈ微粉タイプ（日本曹達）
１００ｇとＦＩＴＣ２ｇを粉末の状態で一様に混合し、
２５０ｍｌのトルエンに浸した。この際ＨＰＣはわずか
に膨潤するが溶解せずＦＩＴＣも大部分が懸濁状態であ
った。これを９５℃に加熱して２時間攪拌しながら反応
させた。反応終了後固相を濾別し、さらに２５０ｍｌの
トルエンで加熱洗浄した。濾別し減圧下で乾燥した固相
を、熱した０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
８）―０．１５Ｍ塩化ナトリウムに分散させてさらに加
温し、未反応のＦＩＴＣ等の不純物を溶出させて、精製
したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈを濾別した。これを乾燥して
ＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈを得た。
１００ｇとＦＩＴＣ２ｇを粉末の状態で一様に混合し、
２５０ｍｌのトルエンに浸した。この際ＨＰＣはわずか
に膨潤するが溶解せずＦＩＴＣも大部分が懸濁状態であ
った。これを９５℃に加熱して２時間攪拌しながら反応
させた。反応終了後固相を濾別し、さらに２５０ｍｌの
トルエンで加熱洗浄した。濾別し減圧下で乾燥した固相
を、熱した０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
８）―０．１５Ｍ塩化ナトリウムに分散させてさらに加
温し、未反応のＦＩＴＣ等の不純物を溶出させて、精製
したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈを濾別した。これを乾燥して
ＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈを得た。
【００２８】このようにして得られた固相で標識したＦ
ＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈを実施例１と同様に蛍光検出器と示
差屈折計検出器で分析し、結果を図１及び図２に示し
た。図１中（ｂ）は固相で標識したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―
Ｈの蛍光検出器による分析結果を示し、図２中（ｂ）は
固相で標識したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈの示差屈折計検出
器による分析結果を示す。図１（ｂ）、（ｃ）から固相
で標識したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈは未修飾のＨＰＣ―Ｈ
と一致した蛍光ピークを生じ、又実施例１の溶液中で標
識したものと同様の挙動を示すことが判る。
ＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈを実施例１と同様に蛍光検出器と示
差屈折計検出器で分析し、結果を図１及び図２に示し
た。図１中（ｂ）は固相で標識したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―
Ｈの蛍光検出器による分析結果を示し、図２中（ｂ）は
固相で標識したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈの示差屈折計検出
器による分析結果を示す。図１（ｂ）、（ｃ）から固相
で標識したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈは未修飾のＨＰＣ―Ｈ
と一致した蛍光ピークを生じ、又実施例１の溶液中で標
識したものと同様の挙動を示すことが判る。
【００２９】このようにして得られたＦＩＴＣ―ＨＰＣ
―ＨのＦＩＴＣ含量は、蛍光強度の相対比較から約１％
であると推定された。
―ＨのＦＩＴＣ含量は、蛍光強度の相対比較から約１％
であると推定された。
【００３０】（２）このＦＩＴＣ―ＨＰＣを、ＳＤラッ
トより摘出した肺組織（湿重量約１．１ｇ）に添加し、
１５ｍｌの０．０２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
８）中でホモジェナイズして遠心分離した上清を回収、
これにアセトニトリルを等容量加えて除タンパクして、
ゲル濾過クロマトグラフィーで分析した時、初期添加量
６００ｎｇのＦＩＴＣ―ＨＰＣが分析可能であった。又
注入量から計算される検出限界量は３ｎｇであった。以
上の結果よりＨＰＣの蛍光標識化によって目的とした生
体試料からの微量分析が可能となった。
トより摘出した肺組織（湿重量約１．１ｇ）に添加し、
１５ｍｌの０．０２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
８）中でホモジェナイズして遠心分離した上清を回収、
これにアセトニトリルを等容量加えて除タンパクして、
ゲル濾過クロマトグラフィーで分析した時、初期添加量
６００ｎｇのＦＩＴＣ―ＨＰＣが分析可能であった。又
注入量から計算される検出限界量は３ｎｇであった。以
上の結果よりＨＰＣの蛍光標識化によって目的とした生
体試料からの微量分析が可能となった。
【図１】図１は実施例１及び２における、溶液中で標識
したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ａ）、固相で標識したＦＩ
ＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ｂ）、及びＨＰＣ―Ｈ（ｃ）の蛍光
検出器による分析結果を示す。
したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ａ）、固相で標識したＦＩ
ＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ｂ）、及びＨＰＣ―Ｈ（ｃ）の蛍光
検出器による分析結果を示す。
【図２】図２は実施例１及び２における、溶液中で標識
したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ａ）、固相で標識したＦＩ
ＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ｂ）、及びＨＰＣ―Ｈ（ｃ）の示差
屈折計検出器による分析結果を示す。
したＦＩＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ａ）、固相で標識したＦＩ
ＴＣ―ＨＰＣ―Ｈ（ｂ）、及びＨＰＣ―Ｈ（ｃ）の示差
屈折計検出器による分析結果を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 藤井 隆雄 東京都日野市旭が丘４丁目３番２号 帝人 株式会社東京研究センター内
Claims (3)
- 【請求項１】 蛍光標識試薬でその水酸基の一部が修飾
されてなるセルロース又はその誘導体。 - 【請求項２】 蛍光標識試薬がフルオレセインイソチオ
シアネート、ローダミンイソチオシアネート、エオシン
イソチオシアネート、キノリジノフルオレセインイソチ
オシアネート、又はテトラメチルローダミンイソチオシ
アネートである請求項１記載のセルロース又はその誘導
体。 - 【請求項３】 セルロース又はその誘導体が、ヒドロキ
シプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、結晶
セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒ
ドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロ
キシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネー
ト、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメロ
ースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、カル
ボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロー
ス又はヒドロキシエチルセルロースである請求項１又は
２に記載のセルロース又はその誘導体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23300894A JPH08100001A (ja) | 1994-09-28 | 1994-09-28 | 蛍光標識化セルロース類 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23300894A JPH08100001A (ja) | 1994-09-28 | 1994-09-28 | 蛍光標識化セルロース類 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08100001A true JPH08100001A (ja) | 1996-04-16 |
Family
ID=16948376
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23300894A Pending JPH08100001A (ja) | 1994-09-28 | 1994-09-28 | 蛍光標識化セルロース類 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08100001A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998012246A1 (de) * | 1996-09-18 | 1998-03-26 | GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) | Formgegenstand mit reaktiven funktionen |
| WO2011065350A1 (ja) * | 2009-11-24 | 2011-06-03 | 日本曹達株式会社 | ヒドロキシアルキルセルロース微粒子 |
| JP2012026879A (ja) * | 2010-07-23 | 2012-02-09 | Konica Minolta Holdings Inc | 蛍光標識剤、並びにこれを用いた結合体及びバイオアッセイ法 |
| CN108884638A (zh) * | 2016-03-22 | 2018-11-23 | 奥布专科学院 | 作为光学增白剂的多糖衍生物 |
| CN111410696A (zh) * | 2020-05-06 | 2020-07-14 | 闽江学院 | 一锅法制备荧光纳米纤维素的方法 |
| CN114805613A (zh) * | 2022-06-01 | 2022-07-29 | 南京林业大学 | 一种用于检测Fe3+的乙基纤维素基黄酮醇类荧光探针及其制备方法与应用 |
| CN116425858A (zh) * | 2023-03-01 | 2023-07-14 | 浙江大学 | 一种荧光修饰的司美格鲁肽衍生物及其制备方法与应用 |
-
1994
- 1994-09-28 JP JP23300894A patent/JPH08100001A/ja active Pending
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998012246A1 (de) * | 1996-09-18 | 1998-03-26 | GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) | Formgegenstand mit reaktiven funktionen |
| US9090714B2 (en) | 2009-11-24 | 2015-07-28 | Nippon Soda Co., Ltd. | Method of making hydroxyalkylcellulose microparticles |
| JPWO2011065350A1 (ja) * | 2009-11-24 | 2013-04-11 | 日本曹達株式会社 | ヒドロキシアルキルセルロース微粒子 |
| US8568787B2 (en) | 2009-11-24 | 2013-10-29 | Nippon Soda Co., Ltd. | Hydroxyalkylcellulose microparticles |
| JP2015071783A (ja) * | 2009-11-24 | 2015-04-16 | 日本曹達株式会社 | ヒドロキシアルキルセルロース微粒子 |
| WO2011065350A1 (ja) * | 2009-11-24 | 2011-06-03 | 日本曹達株式会社 | ヒドロキシアルキルセルロース微粒子 |
| JP2012026879A (ja) * | 2010-07-23 | 2012-02-09 | Konica Minolta Holdings Inc | 蛍光標識剤、並びにこれを用いた結合体及びバイオアッセイ法 |
| JP2019512563A (ja) * | 2016-03-22 | 2019-05-16 | オーボ アカデミー ユニヴァーシティー | 蛍光増白剤としての多糖誘導体 |
| CN108884638A (zh) * | 2016-03-22 | 2018-11-23 | 奥布专科学院 | 作为光学增白剂的多糖衍生物 |
| US10988716B2 (en) | 2016-03-22 | 2021-04-27 | Abo Akademi University | Polysaccharide derivatives as optical brightening agents |
| CN111410696A (zh) * | 2020-05-06 | 2020-07-14 | 闽江学院 | 一锅法制备荧光纳米纤维素的方法 |
| CN111410696B (zh) * | 2020-05-06 | 2022-03-08 | 闽江学院 | 一锅法制备荧光纳米纤维素的方法 |
| CN114805613A (zh) * | 2022-06-01 | 2022-07-29 | 南京林业大学 | 一种用于检测Fe3+的乙基纤维素基黄酮醇类荧光探针及其制备方法与应用 |
| CN116425858A (zh) * | 2023-03-01 | 2023-07-14 | 浙江大学 | 一种荧光修饰的司美格鲁肽衍生物及其制备方法与应用 |
| CN116425858B (zh) * | 2023-03-01 | 2024-04-19 | 浙江大学 | 一种荧光修饰的司美格鲁肽衍生物及其制备方法与应用 |
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