JPH0795850A

JPH0795850A - 乳児用調製乳

Info

Publication number: JPH0795850A
Application number: JP6155222A
Authority: JP
Inventors: Takeshi Kato; 健加藤; Yukihiro Takada; 幸宏高田; Naomichi Kobayashi; 直道小林; Isahiro Kawasaki; 功博川崎; Hiroaki Matsuyama; 博昭松山; Hiroshi Kawakami; 浩川上; Masatoshi Yahiro; 政利八尋
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 1993-06-14
Filing date: 1994-06-14
Publication date: 1995-04-11
Anticipated expiration: 2016-12-10
Also published as: JP3238009B2

Abstract

(57)【要約】【目的】骨形成効果を強化した乳児用調製乳の提供。【構成】インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）を
配合した乳児用調製乳。ＩＧＦ−１の配合量は、粉乳の
場合２４〜１，１５０μｇ／１００ｇ、液体調製乳の場
合３〜１５０μｇ／１００ｍｌが適当である。【効果】ＩＧＦ−１の作用により人工栄養児の骨の成
長を助け、骨粗鬆症等の骨疾患を予防することができ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、インスリン様増殖因子
−１を配合して骨形成効果を強化した乳児用調製乳に関
する。本発明の乳児用調製乳は、インスリン様増殖因子
−１の作用によってヒト骨芽細胞などの正常細胞を増殖
させ、乳幼児の丈夫な骨形成を促進強化することができ
る。

【０００２】

【従来の技術】近年、幼児や児童の骨が弱く骨折しやす
いことが問題となっている。また、高齢化に伴って骨粗
鬆症、骨折及び腰痛などの各種骨疾患の患者も増加して
いる現状にある。これらの原因として、カルシウムの摂
取不足、カルシウム吸収能の低下、活性型ビタミンＤ３
分泌の不足及びホルモンのアンバランスなどが指摘され
ている。そのため、これらの疾患を防止するためのカル
シウム補給を目的とした各種カルシウム剤が開発されて
いる。またさらに、骨粗鬆症などの骨疾患を防止するた
めには、乳児期を含めた成長期に骨量を増加させて最大
骨量をできるだけ高めておくことが有効であるというこ
とが明らかになり、乳児栄養においても骨を強化する目
的で乳児用調製乳に炭酸カルシウムなどの各種カルシウ
ム剤が添加されるようになってきている。しかしなが
ら、牛乳中に含まれるカルシウムは母乳中に含まれるカ
ルシウムに比べて吸収性が悪いという報告があり（Ｇｕ
ｒｒ，Ｍ．Ｉ．、Ｊ．ＤａｉｒｙＲｅｓ．、第４８
巻、５１９〜５５４頁、１９８１年）、実際に、これら
の乳児用調製乳に添加されたカルシウム剤の中には、消
化管内で不溶性の塩を形成して十分に体内で吸収されな
いものもある。

【０００３】一方、インスリン様増殖因子(insulin-lik
e growth factor)−１（以下、ＩＧＦ−１と略記する）
は、ソマトメジンのクラスに属する分子量約７，８００
の生理活性ポリペプチドであって、ウシＩＧＦ−１とヒ
トＩＧＦ−１は同一の構造を有することが知られている
（Ｇ．Ｌ．Ｆｒａｎｃｉｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、
第２５１巻、９５〜１０３頁、１９８８年）。また、ヒ
トＩＧＦ−１については、遺伝子組み換えによって生産
する方法も多数知られており、それらのＩＧＦ−１の構
造はヒトＩＧＦ−１の構造と全く同じであることも知ら
れている。さらに、ＩＧＦ−１は骨代謝において重要な
因子であって、骨芽細胞を活性化し骨を強化する作用を
有することが知られている（斎藤史郎ら、日本臨牀、第
４８巻第１２号、２７７９〜２７８４頁、１９９０
年）。そして、消化管にはＩＧＦ−１に対するレセプタ
ーが存在することが明らかになり、経口摂取されたＩＧ
Ｆ−１が消化管レセプターを介して作用することが示唆
されている（高野和寿恵、ホルモンと臨床、第３９巻第
１２号、３１〜３７頁、１９９１年）。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、母乳栄
養児と人工栄養児の骨形成について比較検討したとこ
ろ、人工栄養児の骨形成が必ずしも十分でないとの認識
を持つに至った。そこで、その要因を解明すべく、市販
の乳児用調製粉乳中に含まれているＩＧＦ−１の量につ
いて分析したところ、母乳中に含まれているＩＧＦ−１
の量の約４０％程度であることを見出した。また、培養
骨芽細胞様株（ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１）を用いて母乳と乳児
用調製乳の細胞増殖試験を行ったところ、乳児用調製乳
の細胞増殖活性は母乳の細胞増殖活性の約７０％程度で
あることを見出した。そして、乳児用調製乳に不足する
ＩＧＦ−１を補うことで人工栄養児の骨形成を促進でき
ることを見出し、本発明を完成するに至った。したがっ
て、本発明は、ヒト骨芽細胞などの正常細胞を増殖させ
て乳幼児の丈夫な骨形成を促進する作用を有するＩＧＦ
−１を配合して骨形成効果を強化した乳児用調製乳を提
供することを課題とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明の特徴は、ＩＧＦ
−１を乳児用調製乳に配合して骨形成効果を強化したこ
とにある。ここで言う乳児用調製乳は、大別すると乳児
用調製粉乳と乳児用液体調製乳であり、乳児用調製粉乳
は、乳児用調製粉乳、未熟児用調製粉乳、フォローアッ
プミルク、医薬用特殊調製粉乳及びその他の乳児の人工
哺育に用いる粉乳類を意味し、また、乳児用液体調製乳
は、乳児の人工哺育を目的として調製した液状の調製乳
を意味する。また、本発明で用いるＩＧＦ−１として
は、母乳や牛乳から分離したＩＧＦ−１あるいは、遺伝
子組み換え技術によって生産したＩＧＦ−１を挙げるこ
とができる。実用的には、牛乳から分離したＩＧＦ−１
高含有組成物を用いると良い。なお、本発明者らが市販
のラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）キット（アマシャム
社製）で測定したところ、牛乳中に含まれているＩＧＦ
−１の含量は、２０ｎｇ／ｍｌであった。本発明におけ
るＩＧＦ−１は、その単一化合物ばかりではなく、生乳
あるいは乳清蛋白濃縮物などから得られるＩＧＦ−１高
濃度含有物も使用される。

【０００６】以下に、牛乳からＩＧＦ−１高含有組成物
を分離する方法を例示する。乳清を８５℃で２０分間加
熱して得られる上澄み液を分子分画８，０００で限外濾
過し、濃縮液としてＩＧＦ−１高含有組成物を得る。こ
の濃縮液中には、乾燥重量当たり約２０μｇ／ｇのＩＧ
Ｆ−１が含まれている。また、脱脂乳を１２１℃で２秒
間加熱し、陽イオン交換樹脂に通液してＩＧＦ−１を樹
脂に吸着させた後、樹脂を水で十分洗浄し、１モルＮａ
Ｃｌ水溶液で樹脂に吸着したＩＧＦ−１画分を溶出す
る。そして、この溶出液を分子分画８，０００で限外濾
過し、濃縮液としてＩＧＦ−１高含有組成物を得ること
ができる。この濃縮液中には、乾燥重量当たり約２００
μｇ／ｇのＩＧＦ−１が含まれている。これらの方法で
得られた濃縮あるいは乾燥ＩＧＦ−１高含有組成物につ
いては、そのまま、乳児用調製粉乳や乳児用液体調製乳
に用いることができるが、必要に応じて、イオン交換ク
ロマトグラフィーなどの分画手段に付し、さらにＩＧＦ
−１濃度を高めたＩＧＦ−１高含有組成物として用いる
こともできる。また、ＩＧＦ−１は加熱処理に対して安
定であるので、ＩＧＦ−１を含む原料あるいは調製乳を
通常行われている方法で加熱殺菌して用いることもでき
る。

【０００７】次に、ＩＧＦ−１の配合方法について説明
する。乳児用液体調製乳を製造する場合は、原料を滅菌
して調製した溶液に、除菌したＩＧＦ−１濃縮液を添
加、混合し、常法に従って冷却して製品とする。また、
乳児用調製粉乳の場合は、原料を均質化して調製した溶
液に、ＩＧＦ−１を添加、混合し、常法に従って濃縮、
乾燥して製品とするか、あるいは、ＩＧＦ−１を含有す
る除菌濃縮液を凍結乾燥などの手段を用いて粉末化した
後、乳児用調製粉乳と粉々混合して製品とすることもで
きる。

【０００８】本発明では、乳児用調製乳に配合するＩＧ
Ｆ−１の量について、以下のように算出した。通常、未
熟な乳幼児の母乳あるいは乳児用調製乳の摂取量は、体
重１ｋｇ当たり約７０ｍｌ／日とされている。これを体
重１ｋｇ当たりのＩＧＦ−１摂取量に換算すると、母乳
栄養児で約７μｇ／日に対し、人工栄養児で約３μｇ／
日となり、人工栄養児で約４μｇ／日のＩＧＦ−１摂取
不足となる。また、正常な乳幼児では体重１ｋｇ当たり
最大２５０ｍｌ／日の母乳あるいは乳児用調製乳を摂取
するとされているから、人工栄養児の場合、母乳栄養児
と比べて約１５μｇ／日のＩＧＦ−１摂取不足となる。
したがって、これらのＩＧＦ−１摂取の不足分を補うべ
く、ＩＧＦ−１を乳児用調製乳に配合すれば良い。本発
明者らが行った培養骨芽細胞様株（ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１）
を用いた細胞増殖試験の結果によると、母乳と同等の細
胞増殖効果を得るには、母乳の平均ＩＧＦ−１濃度の７
０％以上が必要であり、１７００％以上添加してもそれ
以上の細胞増殖効果を得ることはできないことも明らか
になった。これらを勘案して、本発明で母乳と同等の効
果を乳児用調製乳に賦与するために配合するＩＧＦ−１
の量は、乳児用調製乳調製時の固形率を１３〜１６重量
％として、乳児用調製粉乳の場合は２４〜１，１５０μ
ｇ／１００ｇ、乳児用液体調製乳の場合は３〜１５０μ
ｇ／１００ｍｌを基準とした。

【０００９】母乳、牛乳及び乳児用調製乳溶液１００μ
ｌをそれぞれ別々に酸−エタノール溶液（８７．５％エ
タノールと１２．５％２Ｎ塩酸とを混合した溶液）４０
０μｌに溶解し、良く攪拌した後、３０分間室温でイン
キュベートした。その後、１，８６０×ｇで遠心分離
し、上清１００μｌを得た。この上清１００μｌに０．
８５５モルのトリス塩基４０μｌを加え、良く攪拌した
後、さらに、測定用緩衝液（アマシャム社製、ＲＩＡキ
ット）１，２６０μｌを加えて良く攪拌し、全量１，４
００μｌの測定用サンプルを得た。このサンプル１００
μｌを用いて、ＲＩＡキット（アマシャム社製）で測定
した。

【００１０】次に、参考例及び実施例を示して本発明を
具体的に説明する。

【参考例１】市販の乳清蛋白濃縮物（ＷＰＣ）を１０％
の濃度になるように蒸留水で十分溶解した溶液（ｐＨ
６．８）４０ｌを８５℃で２０分間加熱した後、１７，
０００×Ｇで遠心分離して上澄み液を得た。次に、この
上澄み液を分子分画８，０００で限外濾過して濃縮し、
凍結乾燥してＩＧＦ−１高含有粉末１３１ｇを得た。こ
の粉末に含まれるＩＧＦ−１濃度をＲＩＡで測定したと
ころ、２３μｇ／ｇであった。

【００１１】

【参考例２】ウシの生乳４０ｌを１２１℃で２秒加熱殺
菌した後、この加熱殺菌乳を陽イオン交換樹脂（商品
名：スルホン化キトパール、富士紡績（株）製）を充填
したカラム（直径５ｃｍ×高さ２５ｃｍ）に１５ｍｌ／
分の流速で通液し、ＩＧＦ−１を樹脂に吸着させた。次
に、このカラムを脱イオン水で十分洗浄した後、１モル
ＮａＣｌでＩＧＦ−１画分を溶出し、この溶出画分を分
子分画８，０００で限外濾過及びダイアフィルトレーシ
ョンを行って脱塩、濃縮し、凍結乾燥してＩＧＦ−１高
含有粉末８５ｇを得た。この粉末に含まれるＩＧＦ−１
濃度をＲＩＡで測定したところ、２１３μｇ／ｇであっ
た。

【００１２】

【参考例３】参考例１及び２の方法で得られたＩＧＦ−
１高含有粉末、母乳、牛乳、市販の乳児用調製粉乳につ
いて、ＲＩＡによりＩＧＦ−１含量を測定した。その結
果を表１に示す。なお、ＩＧＦ−１高含有粉末及び市販
の乳児用調製粉乳については、固形率が１３％となるよ
う純水に溶解したものを用いた。

【００１３】

【表１】 ──────────────────────────────── 試料ＩＧＦ−１濃度（μｇ／ｍｌ） ──────────────────────────────── 母乳０．１１ウシ生乳０．０２市販乳児用調製粉乳０．０４参考例１のＩＧＦ−１高含有粉末２．９８参考例２のＩＧＦ−１高含有粉末２７．６４ ────────────────────────────────

【００１４】

【実施例１】乳清蛋白濃縮物１５．９ｋｇ、乳糖４５．
９ｋｇ、ビタミン類及びミネラル類１ｋｇを水６５０ｋ
ｇに溶解した後、脱塩脱脂乳２５７ｋｇと混合し、さら
に生クリーム７ｋｇ、植物油２３．９ｋｇを添加、混合
し、均質化して得られた溶液を常法に従って殺菌、均質
化した原料溶液を調製した。一方、参考例１に示した方
法で調製したＩＧＦ−１高含有粉末２．５ｋｇを殺菌水
２００ｋｇに溶解した後、除菌フィルターで除菌したＩ
ＧＦ−１溶液を調製した。そして、これらの溶液を混合
した後、噴霧乾燥して乳児用調製粉乳１２０ｋｇを得
た。このようにして得られた乳児用調製粉乳には、７
７．３μｇ／１００ｇのＩＧＦ−１が含まれていた。

【００１５】

【実施例２】乳清蛋白濃縮物１５．９ｋｇ、乳糖４５．
９ｋｇ、ビタミン類及びミネラル類１ｋｇを水３５２ｋ
ｇに溶解した後、脱塩脱脂乳２５７ｋｇと混合し、さら
に生クリーム７ｋｇ、植物油２３．９ｋｇを添加、混合
し、均質化して得られた溶液を常法に従って滅菌した原
料溶液を調製した。一方、参考例２に示した方法で調製
したＩＧＦ−１高含有粉末０．２ｋｇを滅菌水２０ｋｇ
に溶解した後、除菌フィルターで除菌したＩＧＦ−１溶
液を調製した。そして、これらの溶液を混合して乳児用
液体調製乳７２０ｋｇを得た。このようにして得られた
乳児用液体調製乳には、１０．５μｇ／１００ｍｌのＩ
ＧＦ−１が含まれていた。

【００１６】

【試験例１】母乳、市販の乳児用調製粉乳、参考例１及
び２の方法で得られたＩＧＦ−１高含有粉末、市販の乳
児用調製粉乳に参考例１あるいは２の方法で得られたＩ
ＧＦ−１高含有粉を添加した乳児用調製粉乳について、
骨芽細胞の増殖促進効果を調べた。培養骨芽細胞様株
（ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１）を９６穴の平底細胞培養プレート
に撤きこみ、０．３％ウシ血清を含むα−ＭＥＭ培地で
培養した。培地１００μｌに対して、以下に示す試料を
それぞれ０．５％濃度に溶解した溶液２μｌ添加し、１
８時間培養した。なお、母乳以外は、固形率が１３％に
なるよう純水に溶解して試験に供した。その後、トリチ
ウムでラベルしたチミジンを添加し、２時間後に細胞に
取り込まれたチミジンの放射活性を測定することによ
り、骨芽細胞の増殖活性を求めた。この活性は、０．３
％牛血清を含むα−ＭＥＭ培地のみで培養した時に細胞
に取り込まれたチミジンの放射活性を１００％とし、各
試料を加えて培養したときの放射活性を算出して示し
た。その結果を表２に示す。

【００１７】試料１：母乳試料２：市販乳児用調製粉乳試料３：ＩＧＦ−１高含有粉末（参考例１）試料４：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 0.008g 試料５：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 0.01 g 試料６：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 0.013g 試料７：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 0.02 g 試料８：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 0.04 g 試料９：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 0.06 g 試料10：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 0.07 g 試料11：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 0.09 g 試料12：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 0.20 g 試料13：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 1.0 g 試料14：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例1) 1.2 g 試料15：ＩＧＦ−１高含有粉末（参考例2) 試料16：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.0009g 試料17：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.001 g 試料18：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.0015g 試料19：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.002 g 試料20：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.004 g 試料21：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.006 g 試料22：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.007 g 試料23：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.008 g 試料24：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.015 g 試料25：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.058 g 試料26：市販乳児用調製粉乳 1.0ｇ＋ＩＧＦ−１高含有
粉末（参考例2) 0.062 g

【００１８】

【表２】

【００１９】上記の試験結果から、市販の乳児用調製粉
乳にＩＧＦ−１を母乳の７０％以上の濃度となるように
配合した乳児用調製粉乳は、母乳と同程度の細胞増殖能
を有し、骨芽細胞増殖促進作用を有することが判った。
しかしながら、ＩＧＦ−１の配合量が母乳の７０％未満
では、市販の乳児用調製粉乳と同程度の細胞増殖能しか
得られず、また、母乳の１７倍量を越えてＩＧＦ−１を
添加しても細胞増殖能に変化がないことが判った。

【００２０】

【発明の効果】本発明の乳児用調製乳に配合するＩＧＦ
−１は、骨強化に効果を有することから、人工栄養児の
骨の成長を助け、さらに、これに伴って発生すると考え
られている各種の骨疾患、特に骨粗鬆症を予防すること
ができる。また、牛乳由来のＩＧＦ−１を用いることに
より、安全性の点でも何ら問題のない乳児用調製乳を安
価に提供することが可能となる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者松山博昭埼玉県川越市新宿町５−11−３ (72)発明者川上浩埼玉県入間郡大井町鶴ケ岡２−６−13− 501 (72)発明者八尋政利東京都東村山市久米川町２−８−13

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】インスリン様増殖因子−１を配合して骨
形成効果を強化した乳児用調製乳。
【請求項２】乳児用調製乳が乳児用調製粉乳である請
求項１記載の調製乳。
【請求項３】インスリン様増殖因子−１を２４〜１，
１５０μｇ／１００ｇの割合で配合した請求項２記載の
調製乳。
【請求項４】乳児用調製乳が乳児用液体調製乳である
請求項１記載の調製乳。
【請求項５】インスリン様増殖因子−１を３〜１５０
μｇ／１００ｍｌの割合で配合した請求項４記載の調製
乳。