JPH0779788A - ポリ−３−ヒドロキシ酪酸の抽出法 - Google Patents
ポリ−３−ヒドロキシ酪酸の抽出法Info
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- JPH0779788A JPH0779788A JP5230334A JP23033493A JPH0779788A JP H0779788 A JPH0779788 A JP H0779788A JP 5230334 A JP5230334 A JP 5230334A JP 23033493 A JP23033493 A JP 23033493A JP H0779788 A JPH0779788 A JP H0779788A
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 テトラヒドロフランまたはその誘導体を抽出
溶剤として菌体からポリ−３−ヒドロキシ酪酸を抽出す
る。 【効果】 安全で、入手しやすく、しかも安価な抽出溶
剤を用い、乾燥菌体あるいは湿菌体の如何を問わず、こ
れら菌体からポリ−３−ヒドロキシ酪酸を高収率で抽出
できる。しかも抽出後の溶液を室温に冷却するだけでポ
リ−３−ヒドロキシ酪酸をゲル化あるいは析出させるこ
とが出来、容易に回収することが可能である。
溶剤として菌体からポリ−３−ヒドロキシ酪酸を抽出す
る。 【効果】 安全で、入手しやすく、しかも安価な抽出溶
剤を用い、乾燥菌体あるいは湿菌体の如何を問わず、こ
れら菌体からポリ−３−ヒドロキシ酪酸を高収率で抽出
できる。しかも抽出後の溶液を室温に冷却するだけでポ
リ−３−ヒドロキシ酪酸をゲル化あるいは析出させるこ
とが出来、容易に回収することが可能である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、菌体内に蓄積した３−
ヒドロキシ酪酸単位からなるポリ−３−ヒドロキシ酪酸
（以下ＰＨＢと記す）を菌体から抽出する方法に関す
る。更に詳しくは、テトラヒドロフランまたはその誘導
体を抽出溶剤として用い、菌体からＰＨＢを溶剤抽出す
る方法に関するものである。
ヒドロキシ酪酸単位からなるポリ−３−ヒドロキシ酪酸
（以下ＰＨＢと記す）を菌体から抽出する方法に関す
る。更に詳しくは、テトラヒドロフランまたはその誘導
体を抽出溶剤として用い、菌体からＰＨＢを溶剤抽出す
る方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ポリ−３−ヒドロキシ酪酸は、数多くの
微生物のエネルギー貯蔵物質として菌体内部に蓄積さ
れ、生物分解性と生物適合性をもつ熱可塑性高分子であ
る。近年、合成プラスチックが環境汚染や資源循環の観
点から深刻な社会問題となっている。それ故、ＰＨＢ
は、“クリーン”プラスチックとして注目され、使用期
間が比較的短い商品の包装や手術糸、骨折固定用材など
の医療材料および医薬や農薬を徐々に放出する徐放性シ
ステムなど多方面への応用可能な有用な天然高分子であ
り長年にわたり期待されている。
微生物のエネルギー貯蔵物質として菌体内部に蓄積さ
れ、生物分解性と生物適合性をもつ熱可塑性高分子であ
る。近年、合成プラスチックが環境汚染や資源循環の観
点から深刻な社会問題となっている。それ故、ＰＨＢ
は、“クリーン”プラスチックとして注目され、使用期
間が比較的短い商品の包装や手術糸、骨折固定用材など
の医療材料および医薬や農薬を徐々に放出する徐放性シ
ステムなど多方面への応用可能な有用な天然高分子であ
り長年にわたり期待されている。
【０００３】ＰＨＢの製造は、細菌例えばシュードモナ
ス（Pseudomonas ）属、アルカリゲネス（Alcaligenes
）属、プロトモナス（Protomonas）属、アゾトバクタ
ー（ Azotobacter）属、ノカルジア（Nocardia）属等の
細菌を培養し菌体内にＰＨＢを顆粒状に蓄積せしめた
後、菌体を培養液より集菌し、その菌体から分離精製し
て行われる。
ス（Pseudomonas ）属、アルカリゲネス（Alcaligenes
）属、プロトモナス（Protomonas）属、アゾトバクタ
ー（ Azotobacter）属、ノカルジア（Nocardia）属等の
細菌を培養し菌体内にＰＨＢを顆粒状に蓄積せしめた
後、菌体を培養液より集菌し、その菌体から分離精製し
て行われる。
【０００４】菌体からのＰＨＢの分離精製は、菌体と抽
出溶剤とを接触させ菌体よりＰＨＢを抽出する方法と、
菌体のＰＨＢ以外の成分を酵素などで取り除く方法が知
られている。溶剤抽出に従来用いられている溶剤として
クロロホルム（特開昭57-65193号）、塩化メチレン（特
開昭57-65193号）、ピリジン（米国特許第3036959 ）な
どが知られている。しかし、これらの溶剤では、乾燥菌
体からしか抽出できず湿菌体からＰＨＢを抽出できない
ため培養液から得られた菌体を乾燥する工程が必要とな
ってくる。また、抽出後得られた抽出液に、メタノール
等のＰＨＢを溶解しない溶剤を添加しＰＨＢを析出させ
なければならない。その際、そのＰＨＢ非溶解性溶剤を
多量に必要とし、非常に大きな製造設備が必要となり経
済的な方法とはいい難い。特開平2-69187 には溶剤によ
る湿菌体からのＰＨＢの抽出方法が記載されているが、
ここで用いられる溶剤はいずれも特殊なものであり経済
性等の点で工業的に不十分である。
出溶剤とを接触させ菌体よりＰＨＢを抽出する方法と、
菌体のＰＨＢ以外の成分を酵素などで取り除く方法が知
られている。溶剤抽出に従来用いられている溶剤として
クロロホルム（特開昭57-65193号）、塩化メチレン（特
開昭57-65193号）、ピリジン（米国特許第3036959 ）な
どが知られている。しかし、これらの溶剤では、乾燥菌
体からしか抽出できず湿菌体からＰＨＢを抽出できない
ため培養液から得られた菌体を乾燥する工程が必要とな
ってくる。また、抽出後得られた抽出液に、メタノール
等のＰＨＢを溶解しない溶剤を添加しＰＨＢを析出させ
なければならない。その際、そのＰＨＢ非溶解性溶剤を
多量に必要とし、非常に大きな製造設備が必要となり経
済的な方法とはいい難い。特開平2-69187 には溶剤によ
る湿菌体からのＰＨＢの抽出方法が記載されているが、
ここで用いられる溶剤はいずれも特殊なものであり経済
性等の点で工業的に不十分である。
【０００５】一方、溶剤抽出法による精製では菌株によ
る差異が見られないのに比べ、ＰＨＢ以外の成分を酵素
などで可溶化して取り除く精製法では湿菌体を使用する
ことができるが、酵素、界面活性剤等の効果が菌株によ
り著しく異なり、高純度のＰＨＢを得るためには数多く
の工程が必要になる場合がある 。
る差異が見られないのに比べ、ＰＨＢ以外の成分を酵素
などで可溶化して取り除く精製法では湿菌体を使用する
ことができるが、酵素、界面活性剤等の効果が菌株によ
り著しく異なり、高純度のＰＨＢを得るためには数多く
の工程が必要になる場合がある 。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来
技術における上記したような課題を解決し、安価で入手
しやすい溶剤を用いて湿菌体のままでＰＨＢを抽出で
き、しかもその抽出溶液からＰＨＢを容易に得ることが
できる抽出方法を提供することである。
技術における上記したような課題を解決し、安価で入手
しやすい溶剤を用いて湿菌体のままでＰＨＢを抽出で
き、しかもその抽出溶液からＰＨＢを容易に得ることが
できる抽出方法を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者等は、
安価で入手しやすい溶剤を用いて湿菌体のままでＰＨＢ
を抽出でき、しかもその抽出溶液からＰＨＢを容易に得
ることができる抽出方法について鋭意検討を重ねた結
果、意外にも室温ではＰＨＢをほとんど溶解しないテト
ラヒドロフラン及びその誘導体が、６０℃以上、好まし
くは８０℃以上ではＰＨＢの良溶剤となってＰＨＢを高
濃度に溶解することを見出した。また、これらの溶剤が
乾燥菌体だけでなく、湿菌体からも高収率で抽出可能で
あることも見いだした。更に、溶解したＰＨＢは溶解液
を冷却することでほとんど全て析出またはゲル化し、多
量のＰＨＢ非溶解性溶剤を用いずとも高純度のＰＨＢが
得られることを見いだした。本発明に使用される抽出溶
剤はテトラヒドロフラン及びその誘導体がある。テトラ
ヒドロフランの誘導体としては、２−メチルテトラヒド
ロフラン、３−メチルテトラヒドロフランなどが挙げら
れる。これらの溶剤のうち、テトラヒドロフランおよび
３−メチルテトラヒドロフランが本発明の抽出溶剤とし
て特に好ましい。
安価で入手しやすい溶剤を用いて湿菌体のままでＰＨＢ
を抽出でき、しかもその抽出溶液からＰＨＢを容易に得
ることができる抽出方法について鋭意検討を重ねた結
果、意外にも室温ではＰＨＢをほとんど溶解しないテト
ラヒドロフラン及びその誘導体が、６０℃以上、好まし
くは８０℃以上ではＰＨＢの良溶剤となってＰＨＢを高
濃度に溶解することを見出した。また、これらの溶剤が
乾燥菌体だけでなく、湿菌体からも高収率で抽出可能で
あることも見いだした。更に、溶解したＰＨＢは溶解液
を冷却することでほとんど全て析出またはゲル化し、多
量のＰＨＢ非溶解性溶剤を用いずとも高純度のＰＨＢが
得られることを見いだした。本発明に使用される抽出溶
剤はテトラヒドロフラン及びその誘導体がある。テトラ
ヒドロフランの誘導体としては、２−メチルテトラヒド
ロフラン、３−メチルテトラヒドロフランなどが挙げら
れる。これらの溶剤のうち、テトラヒドロフランおよび
３−メチルテトラヒドロフランが本発明の抽出溶剤とし
て特に好ましい。
【０００８】すなわち、本発明は菌株を問わず、ＰＨＢ
を含有する菌体よりＰＨＢを抽出精製する方法におい
て、テトラヒドロフランまたはその誘導体を抽出溶剤と
して用いることを特徴とするＰＨＢの抽出法に関するも
のである。また、本発明におけるＰＨＢを含有する菌体
とは、ＰＨＢを菌体内に蓄積した細菌細胞であり、この
ような細菌として例えば、アゾトバクター ビネランデ
ィー（Azotobacter vinelandii）、アルカリゲネス ユ
ウトロフス（Alcaligenes eutrophus ）、プロトモナス
エクストルクエンス（Protomonas extorquens ）等に
属するものが挙げられる。その菌体は上記の細菌をグル
コース、フラクトース、メタノール、酢酸、酪酸などの
炭素源、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、ペプト
ンなどの窒素源、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム等
のリン酸源およびその他細菌の増殖に必要なミネラル、
微量栄養源を含む培地で、炭素源以外の菌体増殖に必須
の栄養素などが増殖の制限因子となるようにして好気的
に培養し、その培養液から遠心分離等の方法で集菌して
得られる。もちろん、その菌体を更に乾燥したもの、ま
たはメタノール、アセトン等の脂質溶剤で洗浄乾燥した
ものも菌体として用いることができる。
を含有する菌体よりＰＨＢを抽出精製する方法におい
て、テトラヒドロフランまたはその誘導体を抽出溶剤と
して用いることを特徴とするＰＨＢの抽出法に関するも
のである。また、本発明におけるＰＨＢを含有する菌体
とは、ＰＨＢを菌体内に蓄積した細菌細胞であり、この
ような細菌として例えば、アゾトバクター ビネランデ
ィー（Azotobacter vinelandii）、アルカリゲネス ユ
ウトロフス（Alcaligenes eutrophus ）、プロトモナス
エクストルクエンス（Protomonas extorquens ）等に
属するものが挙げられる。その菌体は上記の細菌をグル
コース、フラクトース、メタノール、酢酸、酪酸などの
炭素源、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、ペプト
ンなどの窒素源、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム等
のリン酸源およびその他細菌の増殖に必要なミネラル、
微量栄養源を含む培地で、炭素源以外の菌体増殖に必須
の栄養素などが増殖の制限因子となるようにして好気的
に培養し、その培養液から遠心分離等の方法で集菌して
得られる。もちろん、その菌体を更に乾燥したもの、ま
たはメタノール、アセトン等の脂質溶剤で洗浄乾燥した
ものも菌体として用いることができる。
【０００９】本発明の方法により実際に菌体から抽出溶
剤を用いてＰＨＢを抽出する際、その抽出溶剤が、菌体
を除く全液体に対して７０重量％以上含有されていれば
良い。すなわち、３０重量％未満の範囲であれば、湿菌
体により持ち込まれる水のようなＰＨＢ非溶解性溶剤が
含まれていても良い。ＰＨＢ非溶解性溶剤の割合が３０
重量％を超える場合、ＰＨＢの溶解性が低くなったり、
ＰＨＢ溶液の粘度が高くなったり、ＰＨＢの劣化をもた
らしたりするおそれがあるので好ましくない。抽出溶剤
は、最終的にＰＨＢ濃度が３〜１０％になるように加え
るのが適当である。その抽出温度は、６０℃以上、好ま
しくは８０℃以上である。
剤を用いてＰＨＢを抽出する際、その抽出溶剤が、菌体
を除く全液体に対して７０重量％以上含有されていれば
良い。すなわち、３０重量％未満の範囲であれば、湿菌
体により持ち込まれる水のようなＰＨＢ非溶解性溶剤が
含まれていても良い。ＰＨＢ非溶解性溶剤の割合が３０
重量％を超える場合、ＰＨＢの溶解性が低くなったり、
ＰＨＢ溶液の粘度が高くなったり、ＰＨＢの劣化をもた
らしたりするおそれがあるので好ましくない。抽出溶剤
は、最終的にＰＨＢ濃度が３〜１０％になるように加え
るのが適当である。その抽出温度は、６０℃以上、好ま
しくは８０℃以上である。
【００１０】純粋なＰＨＢを得るために、ＰＨＢを含有
する菌体を、好ましくは発酵槽溶液の遠心分離によって
発酵槽溶液から単離する。単離された菌体を本発明によ
る抽出剤の１つ中で攪はんし、６０〜１３０℃の温度に
加熱し、２０〜８０分この温度で抽出する。この際、Ｐ
ＨＢ濃度は３〜１０％に、水分濃度は３０％を超えない
ようにする。次いでＰＨＢを溶解含有した抽出溶剤を不
溶性菌体と分離する。この際、ＰＨＢを溶解含有した抽
出溶剤は加圧状態であり、分離を行うときは加圧状態で
行っても良いが、６０℃まで冷却した後分離しても良
い。これは、６０℃に保温してあれば数時間、少なくと
も２時間は溶解したＰＨＢが析出してこないからであ
る。分離は常法で行うことができる。この場合加熱され
た濾過器を使用するのが有利である。というのは分離が
この方法で問題なく簡単に行われるからである。その後
ＰＨＢを含有する分離された溶液を室温程度に冷却し、
溶解したＰＨＢを完全にゲル化または析出させる。ＰＨ
Ｂの単離は、冷却したＰＨＢ溶解溶液から液体を濾過、
遠心分離など通常の方法で行われる。単離されたＰＨＢ
を水、メタノール、エタノール、アセトン、またはその
混合物で後洗浄し、次いで乾燥する。ＰＨＢの乾燥は、
常法、たとえば気流乾燥、真空乾燥などで行われる。
する菌体を、好ましくは発酵槽溶液の遠心分離によって
発酵槽溶液から単離する。単離された菌体を本発明によ
る抽出剤の１つ中で攪はんし、６０〜１３０℃の温度に
加熱し、２０〜８０分この温度で抽出する。この際、Ｐ
ＨＢ濃度は３〜１０％に、水分濃度は３０％を超えない
ようにする。次いでＰＨＢを溶解含有した抽出溶剤を不
溶性菌体と分離する。この際、ＰＨＢを溶解含有した抽
出溶剤は加圧状態であり、分離を行うときは加圧状態で
行っても良いが、６０℃まで冷却した後分離しても良
い。これは、６０℃に保温してあれば数時間、少なくと
も２時間は溶解したＰＨＢが析出してこないからであ
る。分離は常法で行うことができる。この場合加熱され
た濾過器を使用するのが有利である。というのは分離が
この方法で問題なく簡単に行われるからである。その後
ＰＨＢを含有する分離された溶液を室温程度に冷却し、
溶解したＰＨＢを完全にゲル化または析出させる。ＰＨ
Ｂの単離は、冷却したＰＨＢ溶解溶液から液体を濾過、
遠心分離など通常の方法で行われる。単離されたＰＨＢ
を水、メタノール、エタノール、アセトン、またはその
混合物で後洗浄し、次いで乾燥する。ＰＨＢの乾燥は、
常法、たとえば気流乾燥、真空乾燥などで行われる。
【００１１】
【実施例】次に本発明を実施例によりさらに具体的に説
明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるもの
ではない。 実施例１ プロトモナス エクストルクエンス (Protomonas exto
rquens) Ｋ（微工研菌寄第８３９５号）をメタノールを
唯一の炭素源とする完全合成培地を用いて、窒素供給を
菌体増殖の制限因子になるようにして回分培養を行い、
その発酵槽溶液の遠心分離によって湿菌体を得た。この
湿菌体は、水分含有率８２重量％、菌体乾燥重量に対す
るＰＨＢ含有率５９．５％であり、菌体中ＰＨＢの分子
量は２×１０5 であった。この湿菌体２２．９ｇとテト
ラヒドロフラン５０ｍｌとを耐圧管中に入れ、１２０℃
で６０分処理した。その後６０℃に冷却した後、６０℃
に加温した吸引濾過器で不溶性菌体を分離した後、溶液
を室温まで冷却した。冷却によってＰＨＢは完全にゲル
化して沈澱した。沈澱したゲルを吸引濾取した後、メタ
ノールを加えて十分に攪はんして洗浄した。次いで、ゲ
ルを吸引濾過、乾燥し１．８８ｇ（理論値の７７％に相
当する）のＰＨＢ粉末を得た。得られた粉末の純度は約
１００％であり、分子量は１．５×１０5 であった。
明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるもの
ではない。 実施例１ プロトモナス エクストルクエンス (Protomonas exto
rquens) Ｋ（微工研菌寄第８３９５号）をメタノールを
唯一の炭素源とする完全合成培地を用いて、窒素供給を
菌体増殖の制限因子になるようにして回分培養を行い、
その発酵槽溶液の遠心分離によって湿菌体を得た。この
湿菌体は、水分含有率８２重量％、菌体乾燥重量に対す
るＰＨＢ含有率５９．５％であり、菌体中ＰＨＢの分子
量は２×１０5 であった。この湿菌体２２．９ｇとテト
ラヒドロフラン５０ｍｌとを耐圧管中に入れ、１２０℃
で６０分処理した。その後６０℃に冷却した後、６０℃
に加温した吸引濾過器で不溶性菌体を分離した後、溶液
を室温まで冷却した。冷却によってＰＨＢは完全にゲル
化して沈澱した。沈澱したゲルを吸引濾取した後、メタ
ノールを加えて十分に攪はんして洗浄した。次いで、ゲ
ルを吸引濾過、乾燥し１．８８ｇ（理論値の７７％に相
当する）のＰＨＢ粉末を得た。得られた粉末の純度は約
１００％であり、分子量は１．５×１０5 であった。
【００１２】実施例２ 実施例１と同様な手法で得られた水分含有率６７重量
％、菌体乾燥重量に対するＰＨＢ含有率５９．５％、菌
体中ＰＨＢの分子量が２×１０5 である湿菌体１５．６
ｇと３−メチルテトラヒドロフラン５０ｍｌとを耐圧管
に入れ、１２０℃で６０分処理した。その後６０℃に冷
却した後、６０℃に加温した吸引濾過器で不溶性菌体を
分離した後、溶液を室温まで冷却した。この場合ＰＨＢ
は完全にゲル化し沈澱した。その沈澱したゲルを吸引濾
取した後、メタノールを加え十分に攪はんして洗浄し
た。次いで、ゲルを吸引濾過、乾燥し、２．４８ｇ（理
論値の８１％に相当する）のＰＨＢ粉末を得た。得られ
た粉末の純度は約１００％であり、分子量は１．６×１
０5 であった。
％、菌体乾燥重量に対するＰＨＢ含有率５９．５％、菌
体中ＰＨＢの分子量が２×１０5 である湿菌体１５．６
ｇと３−メチルテトラヒドロフラン５０ｍｌとを耐圧管
に入れ、１２０℃で６０分処理した。その後６０℃に冷
却した後、６０℃に加温した吸引濾過器で不溶性菌体を
分離した後、溶液を室温まで冷却した。この場合ＰＨＢ
は完全にゲル化し沈澱した。その沈澱したゲルを吸引濾
取した後、メタノールを加え十分に攪はんして洗浄し
た。次いで、ゲルを吸引濾過、乾燥し、２．４８ｇ（理
論値の８１％に相当する）のＰＨＢ粉末を得た。得られ
た粉末の純度は約１００％であり、分子量は１．６×１
０5 であった。
【００１３】実施例３ 実施例１と同様な湿菌体をテトラヒドロフランを抽出溶
剤に用い、実施例１で示した抽出操作を８０℃で行い、
その後６０℃に冷却した後、６０℃に加温した吸引濾過
器で不溶性菌体を分離した後、溶液を室温まで冷却し
た。冷却によって沈澱したゲルを吸引濾取した後、メタ
ノールを加え十分に攪はんして洗浄した。次いで吸引濾
過、乾燥し１．９２ｇのＰＨＢ（理論値の７８％に相当
する）の粉末を得た。その粉末の純度は約１００％であ
り、分子量は１．８×１０5 であった。
剤に用い、実施例１で示した抽出操作を８０℃で行い、
その後６０℃に冷却した後、６０℃に加温した吸引濾過
器で不溶性菌体を分離した後、溶液を室温まで冷却し
た。冷却によって沈澱したゲルを吸引濾取した後、メタ
ノールを加え十分に攪はんして洗浄した。次いで吸引濾
過、乾燥し１．９２ｇのＰＨＢ（理論値の７８％に相当
する）の粉末を得た。その粉末の純度は約１００％であ
り、分子量は１．８×１０5 であった。
【００１４】実施例４ プロトモナス エクストルクエンス (Protomonas exto
rquens) Ｋ（微工研菌寄第８３９５号）を実施例１で示
したのと同様にメタノールを炭素源とし、窒素供給を菌
体増殖の制限因子になるようにして回分培養を行い、そ
の発酵槽溶液の遠心分離によって得られた湿菌体を凍結
乾燥し、菌体乾燥重量に対するＰＨＢ含有率が４４％、
菌体中ＰＨＢの分子量が１．４×１０5 である乾燥菌体
を得た。この乾燥菌体２．５ｇを２０ｍｌのテトラヒド
ロフランに懸濁し、１２０℃、６０分抽出を行った。そ
の後６０℃に冷却した後、６０℃に加温した吸引濾過器
で不溶性菌体を分離した後、溶液を室温まで冷却した。
この冷却によってＰＨＢは完全にゲル化して沈澱した。
沈澱したゲルを吸引濾取した後、メタノールを加え十分
に攪はんして洗浄した。次いで、ゲルを吸引濾過、乾燥
し、０．９７ｇ（理論値の８８％に相当する）のＰＨＢ
粉末を得た。得られた粉末の純度は９８％であり、分子
量は１．３×１０5 であった。
rquens) Ｋ（微工研菌寄第８３９５号）を実施例１で示
したのと同様にメタノールを炭素源とし、窒素供給を菌
体増殖の制限因子になるようにして回分培養を行い、そ
の発酵槽溶液の遠心分離によって得られた湿菌体を凍結
乾燥し、菌体乾燥重量に対するＰＨＢ含有率が４４％、
菌体中ＰＨＢの分子量が１．４×１０5 である乾燥菌体
を得た。この乾燥菌体２．５ｇを２０ｍｌのテトラヒド
ロフランに懸濁し、１２０℃、６０分抽出を行った。そ
の後６０℃に冷却した後、６０℃に加温した吸引濾過器
で不溶性菌体を分離した後、溶液を室温まで冷却した。
この冷却によってＰＨＢは完全にゲル化して沈澱した。
沈澱したゲルを吸引濾取した後、メタノールを加え十分
に攪はんして洗浄した。次いで、ゲルを吸引濾過、乾燥
し、０．９７ｇ（理論値の８８％に相当する）のＰＨＢ
粉末を得た。得られた粉末の純度は９８％であり、分子
量は１．３×１０5 であった。
【００１５】実施例５ アルカリゲネス ユウトロフス (Alcaligenes eutrophu
s) NCIB 11509をグルコースを炭素源とし、窒素供給を
菌体増殖の制限因子になるようにして好気的に回分培養
を行い、その発酵槽溶液の遠心分離によって得られた湿
菌体を凍結乾燥し、菌体乾燥重量に対するＰＨＢ含有率
が５３％、菌体中ＰＨＢの分子量が３．０×１０5 であ
る乾燥菌体を得た。この乾燥菌体３．０ｇをテトラヒド
ロフラン４０ｍｌに懸濁し、１２０℃、６０分抽出を行
った。その後６０℃に冷却した後、６０℃に加温した吸
引濾過器で不溶性菌体を分離した後、溶液を室温まで冷
却した。この冷却によってＰＨＢは完全にゲル化して沈
澱した。沈澱したゲルを吸引濾取した後、メタノールを
加え十分に攪はんして洗浄した。次いで、ゲルを吸引濾
過、乾燥し、１．３５ｇ（理論値の８５％に相当する）
のＰＨＢ粉末を得た。得られた粉末の純度は９９％であ
り、分子量は２．５×１０5 であった。
s) NCIB 11509をグルコースを炭素源とし、窒素供給を
菌体増殖の制限因子になるようにして好気的に回分培養
を行い、その発酵槽溶液の遠心分離によって得られた湿
菌体を凍結乾燥し、菌体乾燥重量に対するＰＨＢ含有率
が５３％、菌体中ＰＨＢの分子量が３．０×１０5 であ
る乾燥菌体を得た。この乾燥菌体３．０ｇをテトラヒド
ロフラン４０ｍｌに懸濁し、１２０℃、６０分抽出を行
った。その後６０℃に冷却した後、６０℃に加温した吸
引濾過器で不溶性菌体を分離した後、溶液を室温まで冷
却した。この冷却によってＰＨＢは完全にゲル化して沈
澱した。沈澱したゲルを吸引濾取した後、メタノールを
加え十分に攪はんして洗浄した。次いで、ゲルを吸引濾
過、乾燥し、１．３５ｇ（理論値の８５％に相当する）
のＰＨＢ粉末を得た。得られた粉末の純度は９９％であ
り、分子量は２．５×１０5 であった。
【００１６】実施例におけるＰＨＢの分子量の測定は、
ゲルクロマトグラフィー（ShodexGPC K, 90 cmカラム、
溶媒：クロロホルム, 1.0ml/min 、ポリスチレンスタン
ダード、ＲＩ検出）によって行った。また菌体のＰＨＢ
含有率、得られたＰＨＢの純度の測定は、ＰＨＢをメチ
ルエステル化してガスクロマトグラフィーにより行っ
た。水分含有率は、乾燥減量により測定した。
ゲルクロマトグラフィー（ShodexGPC K, 90 cmカラム、
溶媒：クロロホルム, 1.0ml/min 、ポリスチレンスタン
ダード、ＲＩ検出）によって行った。また菌体のＰＨＢ
含有率、得られたＰＨＢの純度の測定は、ＰＨＢをメチ
ルエステル化してガスクロマトグラフィーにより行っ
た。水分含有率は、乾燥減量により測定した。
【００１７】
【発明の効果】本発明により、安全で、入手が容易で、
しかも安価な溶剤を用いて乾燥菌体、湿菌体のいずれか
らも少なくとも９８％の極めて高純度のＰＨＢを良好な
収率で取得可能となる。また、抽出後、ＰＨＢ溶解溶液
を冷却するのみで溶解したＰＨＢのほとんど全てがゲル
化または析出し、容易に回収できる。
しかも安価な溶剤を用いて乾燥菌体、湿菌体のいずれか
らも少なくとも９８％の極めて高純度のＰＨＢを良好な
収率で取得可能となる。また、抽出後、ＰＨＢ溶解溶液
を冷却するのみで溶解したＰＨＢのほとんど全てがゲル
化または析出し、容易に回収できる。
Claims (3)
- 【請求項１】 ポリ−３−ヒドロキシ酪酸を含有する菌
体からポリ−３−ヒドロキシ酪酸を抽出するに際して、
テトラヒドロフランまたはその誘導体を抽出溶剤として
使用することを特徴とするポリ−３−ヒドロキシ酪酸の
抽出法。 - 【請求項２】 抽出温度を６０℃以上とする請求項１記
載の抽出法。 - 【請求項３】 抽出溶剤が、テトラヒドロフランまたは
３−メチルテトラヒドロフランである請求項１記載の抽
出法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5230334A JPH0779788A (ja) | 1993-09-16 | 1993-09-16 | ポリ−３−ヒドロキシ酪酸の抽出法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5230334A JPH0779788A (ja) | 1993-09-16 | 1993-09-16 | ポリ−３−ヒドロキシ酪酸の抽出法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0779788A true JPH0779788A (ja) | 1995-03-28 |
Family
ID=16906215
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5230334A Pending JPH0779788A (ja) | 1993-09-16 | 1993-09-16 | ポリ−３−ヒドロキシ酪酸の抽出法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0779788A (ja) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5821299A (en) * | 1996-02-16 | 1998-10-13 | The Proctor & Gamble Company | Solvent extraction of polyhydroxy-alkanoates from biomass facilitated by the use of marginal nonsolvent |
| EP0871761A1 (en) | 1995-08-21 | 1998-10-21 | The Procter & Gamble Company | Solvent extraction of polyhydroxy-alkanoates from biomass |
| US6071998A (en) * | 1997-07-22 | 2000-06-06 | Metabolix, Inc. | Polyhydroxyalkanoate molding compositions |
| WO2002016284A2 (en) | 2000-08-23 | 2002-02-28 | Metabolix, Inc. | Low molecular weight polyhydroxyalkanoate molding compositions |
| US6368836B2 (en) * | 1998-04-08 | 2002-04-09 | Metabolix, Inc. | Method of decolorizing or deodorizing polyhydroxyalkanoates from biomass with ozone |
| US7314740B2 (en) | 2002-04-26 | 2008-01-01 | Kaneka Corporation | Method of separating poly-3-hydroxyalkanoic acid |
| US7435566B2 (en) | 2002-09-30 | 2008-10-14 | Kaneka Corporation | Method of purifying 3-hyroxyalkanoic acid copolymer |
| US7455999B2 (en) | 1998-01-22 | 2008-11-25 | Metabolix, Inc. | Transgenic systems for the manufacture of poly (3-hydroxy-butyrate-co-3-hydroxyhexanoate) |
| WO2010067543A1 (ja) | 2008-12-09 | 2010-06-17 | 株式会社カネカ | ポリ－３－ヒドロキシアルカン酸の製造方法およびその凝集体 |
| WO2010067541A1 (ja) | 2008-12-09 | 2010-06-17 | 株式会社カネカ | ポリ－３－ヒドロキシアルカン酸の生産方法 |
| JP2013518165A (ja) * | 2010-01-29 | 2013-05-20 | ラボラトワール エクスパンシアンス | 固液抽出 |
| WO2017221755A1 (ja) | 2016-06-23 | 2017-12-28 | 株式会社カネカ | ポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 |
-
1993
- 1993-09-16 JP JP5230334A patent/JPH0779788A/ja active Pending
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0871761A1 (en) | 1995-08-21 | 1998-10-21 | The Procter & Gamble Company | Solvent extraction of polyhydroxy-alkanoates from biomass |
| US5942597A (en) * | 1995-08-21 | 1999-08-24 | The Procter & Gamble Company | Solvent extraction of polyhydroxyalkanoates from biomass |
| US5821299A (en) * | 1996-02-16 | 1998-10-13 | The Proctor & Gamble Company | Solvent extraction of polyhydroxy-alkanoates from biomass facilitated by the use of marginal nonsolvent |
| US6071998A (en) * | 1997-07-22 | 2000-06-06 | Metabolix, Inc. | Polyhydroxyalkanoate molding compositions |
| US6214920B1 (en) | 1997-07-22 | 2001-04-10 | Metabolix, Inc. | Polyhydroxyalkanoate molding compositions |
| US8049065B2 (en) | 1998-01-22 | 2011-11-01 | Metabolix, Inc. | Transgenic systems for the manufacture of poly(2-hydroxy-butyrate-co-3-hydroxyhexanoate) |
| US7455999B2 (en) | 1998-01-22 | 2008-11-25 | Metabolix, Inc. | Transgenic systems for the manufacture of poly (3-hydroxy-butyrate-co-3-hydroxyhexanoate) |
| US7504556B2 (en) | 1998-01-22 | 2009-03-17 | Metabolix, Inc. | Transgenic systems for the manufacture of poly(2-hydroxy-butyrate-co-3-hydroxyhexanoate) |
| US6368836B2 (en) * | 1998-04-08 | 2002-04-09 | Metabolix, Inc. | Method of decolorizing or deodorizing polyhydroxyalkanoates from biomass with ozone |
| WO2002016284A2 (en) | 2000-08-23 | 2002-02-28 | Metabolix, Inc. | Low molecular weight polyhydroxyalkanoate molding compositions |
| US7314740B2 (en) | 2002-04-26 | 2008-01-01 | Kaneka Corporation | Method of separating poly-3-hydroxyalkanoic acid |
| US7435566B2 (en) | 2002-09-30 | 2008-10-14 | Kaneka Corporation | Method of purifying 3-hyroxyalkanoic acid copolymer |
| WO2010067541A1 (ja) | 2008-12-09 | 2010-06-17 | 株式会社カネカ | ポリ－３－ヒドロキシアルカン酸の生産方法 |
| WO2010067543A1 (ja) | 2008-12-09 | 2010-06-17 | 株式会社カネカ | ポリ－３－ヒドロキシアルカン酸の製造方法およびその凝集体 |
| US9249258B2 (en) | 2008-12-09 | 2016-02-02 | Kaneka Corporation | Method for producing poly-3-hydroxyalkanoic acid and agglomerates thereof |
| JP2013518165A (ja) * | 2010-01-29 | 2013-05-20 | ラボラトワール エクスパンシアンス | 固液抽出 |
| WO2017221755A1 (ja) | 2016-06-23 | 2017-12-28 | 株式会社カネカ | ポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 |
| US11440823B2 (en) | 2016-06-23 | 2022-09-13 | Kaneka Corporation | Method for producing polyhydroxyalkanoic acid |
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