JPH07502013A - 新規なポリペプチドおよびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 新規なポリペプチドおよびその使用 本発明は特定の細菌、特にグラム陰ｆ’ｌ細菌を殺傷することができる殺菌活性 を有する新しいポリペプチドに関する。本発明はまた、医薬組成物および細菌生 育抑制のための使用方法にも関する。

小腸は重要な内分泌器官であり、多くの生理学的に活性を有するペプチドがブタ の組織から単離されている（Ｍｕｔｔ、Ｖ、、Ｃｈｃｎ＋ｉｃａ　５ｃｒｉｐｔ ａ　２６Ｂ、　＋９ｌ−２０７（＋９８６））。　正常な健常条件Ｆでは、小腸 の」下部には殆ど細菌は含まれない。十二指腸より下部では、細菌の濃度はしだ いに増加し、大腸では最大１０口個／９糞の菌体量となる、このような細菌の塊 が感受性の高い宿主臓器と共存しているということは會外である。セクロピンと 呼ばれる小型の基礎的ペプチドは昆虫の免疫において重要な役割りを果しており （Ｂｏｍａｎ、　、１１．Ｇ、　＆　１Ｉｕ１．ｔｍａｒｋ、　ロ、Ｄ、＾ｎｎ 、　Ｒｅｖ−Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　４１．１０３−１２６（１９８７））　、 構造的に無関係のペプチドであるマガイニン（Ｚａｓｌｏｆｆ、Ｍ、、Ｐｒｏｃ 、ＮａｔＬ。

＾ｃａｄ、　Ｓｅｉ、　ＵＳＡ、　８４．５４４９−５４５３０９８７））はカ エルの皮膚を感染から保護している。別の群の抗細菌ペプチドであるデフエンジ ンは、まず哺乳類の顆粒球（Ｓｅｌｓｔｅｄｔ。

１１、Ｅ、、　５ｚｋｌａｒｅｋ、　Ｄ、　＆　１．ｅｈｒｅｒ、　Ｒ，Ｉ、　 Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ。

４５、　１５０−１５４（＋９８４））および好中球（Ｓｅｌｓｔｃｄｔ、Ｍ、 Ｅ、。

Ｂｒｏｗｎ、　０．１１．、　Ｄｅｌａｎｇｅ、　Ｒ，Ｊ、、　Ｉｌａｒｖｉｇ 、Ｓ、Ｓ、　＆　Ｌｅｈｒｅｒ。

Ｒ，Ｉ、、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２６０．４５７９−４５８４（１ ９８５））から単離され、最近では、昆虫（ｉｌａＬｓｕｙｒ＋＋ｎａ、　Ｋ、 　＆　ＮａＬｏｒｉ、　Ｓ、　Ｊ。

Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６３．　１７１１２−１７１１６（１９８８）；１．ａ ｍｂｅｒｔ、Ｊ。

等、、　Ｐｒｎｃ、　Ｎａ目　＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ８６．２６２−２６ ６（＋９８９））からも＋？’、　Ｍされている。更に、ウシ好中球はもう１つ の小型の基礎的ペプチドであるバクテネシンを含有することが解っている（Ｒｎ ｍｃｎ、　Ｄ、　、　５ｋｃｒｌａｖａｊ、口、　Ｒｎｌｎｇｎｃｓｉ。

Ｍ　＆　Ｇｃｎｎａｒｎ、Ｒ，Ｊ、Ｂ１ｎ１．　Ｃｈｅ＋１１．２６３．　９５ ７３−９５７５（１９８８）。両ノｊのデフエンジンおよび小型のバクテネシン は１つ以−にのジスルフィド結合を有し、セクロビンおよびマガイニンはシステ ィンを含有しない。Ｆｒａｎｋ等（Ｊ。

Ｂｉｏｌ、Ｃｈｃｍ、２６５　：　１８８７１−１８８７４）はプロリンおよび アルギニンを高含有量で含有しンステインを含有しない２種類の大型のバクテネ ンンを報告している。

本発明の目的は、細菌の生育、特に、グラム陰性菌の’を一育を抑制することの できる新しい殺菌性ポリペプチドを提ｆｌ（することであるう本明細書では、「 抑制」という用語は殺菌することも包含するものとする。

本発明の別の目的は、上記したポリペプチドを活性成分として含有する組成物を 提供することである。

本発明の更に別の目的は、動物、とくにヒトを含む哺乳類における細菌の生育を 抑制するための治療方法を提供することである。

これらの目的および、以下の記載から明らかなその他の目的のために、本発明は 下記アミノ酸配列：＾ｒｇ−＾「ｇ−＾ｒｇ−ｒ’ｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−１’ ｒｏ−Ｔｙｒ−Ｌｃｕ−１’ｒｏ−＾ｒｇ−Ｐｒｏ−入ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ− １’ｒｏ４’ｈｃ４’ｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−１’ｒｏ−Ｐｒ ｏ−＾ｒｇ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ｒ’ｒｏ−Ｇｌｙ−Ｉ’ｈｃ−Ｐｒｏ−１’ｒＯ −＾ｒｇ−Ｆｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−＾ｒｇ−１’ｈｅ−Ｐｒ。

を有するポリペプチドを提供し、そして、本発明は更に、数個の保存的アミノ酸 の置換およびＣ末端アミドのあるような、官能性誘導体を包含する。

本発明のポリペプチドおよびその官能ｔ’＋誘導体は全て、特に抗菌剤として治 療−１，有用である。即ち、これらは、特にグラ１．陥性菌において、閑の生育 を抑制したり殺菌することが可能であり、種々の治療目的のために有用である。

これは、後述する実施例において更に詳細に説明する。

本発明の活性ポリペプチドは治療または予防の用途のための、ヒトまたは家畜用 の薬剤として用いるために製剤できる。活性製剤は、通常は、経［−１投与、肛 門投与、すなわち非経腸投与により、例えば、個体、半個体または液体であるよ うな薬学的に許容される担体と組合せて活性威容を含ａする薬学的な製剤または 組成物の形態で注射により、または、経口投与の場合のようにカプセルに充填す ることもてきる。投与は局所投与で行なってもよい。医薬製剤の例としては、錠 剤、ドロップ、溶液および座剤をあげることができる。通割は、活性成分は、製 剤の少量部分、例えば約０．１〜約５０重量％を構成する。

経ｒ」投与のための投与単位の形態で医薬組成物を調製するためには、本発明の ポリペプチドを固体、粉末または他の形態の担体、例えば乳糖、サッカロース、 ソルビトール、マン二Ｆ・−ル、殿粉、例えば馬鈴薯殿粉、コーンスターチ、マ イロペクヂン、セルロース誘導体またはゼラチンと混合することができ、そして 、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウム、ま たはポリエチレングリコールワックスも含有してよく、圧縮成形して錠剤の形態 または糖衣錠としてよい。投与ｊｐ位は腸溶性のコーティング形態でもよい。

坦体または希釈剤を数層用いることにより、徐放性の錠剤を調製できる。

経１］投与のため、または注射のための液体製剤は、エリキシル、ンロップまた は懸濁液の形態で調製でき、例えば活性成分０．１〜２０重景％、砂糖およびエ タノール、水、グリセロール、プロピレングリコールおよび場合により他の従来 の添加物の混合物を含有する溶液にしてもよい。

活性成分の用量は限度内で変化してよく、種々の要因、例えば疾患の型側り患者 の年齢および体重により異り、個々の調節できる。

本発明はヒトを含む哺乳類のような動物の治療のための方法も包含し、その方法 は、上記したポリペプチドまたはその官能性誘導体を、上記動物中の細菌を殺滅 するかまたは菌の生育を抑制することのできるような量で、投与する段階を包含 する。

本発明を特定の実施例により更に説明するが、これらは本発明の範、囲を限定す るものではない。

実施例　１ ペプチドａ縮物の調製 熱室、定性腸内ペプチドの濃縮物を、文献記載の方法と本質的に同様にしてブタ の小腸から調製した（Ｍｕｔ（、Ｖ。

＾ｒｋｉｖ　Ｋｃｍｉ　１５．６９−７４（１９５９）＋　Ｍｕｔｔ、　Ｖ、、 ｒ腸ホルモン（Ｇｏｔ　１１．ｎｒｍｏｎ、ｃｓ、）Ｊ　（、ＢＩｏｒ＋ｍ、Ｓ 、Ｒ，版、ｐｐ２１−２７゜（Ｃｈｕｒｃｈ、ｉｌｌ　ｌｊｖｉｎｇｓｔｏｎｅ ４　Ｅｄｉｎｂｕｒｇ、　＋９７８）。

簡単に述べると、腸の最上部１メートルを８±１分間沸騰水に浸漬し、次いで氷 上で冷却し、凍結した。凍結物質を粉砕し、１２時間０．５Ｍ酢酸て０〜１５℃ で抽出し、混合物を吸引濾過した（ｌｌｙｆｌｏ　５ｕｐｅｒ−Ｃｅｌ　３０ｑ ／ｌ懸濁液を使用）。ペプチドを濾液からアルギン酸に吸着させ、ペプチドを世 持するアルギン酸を０．００５Ｍ塩酸、９５％エタノールで洗浄しく脂肪除去の ため）　、Ｏ’、００５Ｍ塩酸で再度洗浄した。ペプチドを０．２Ｍ水冷塩酸で 溶離させ、溶離液のｐｉ＋を酢酸ナトリウムで３５±０．１とした。次に、塩化 ナトリウムで溶離液を飽和させることによりペプチドを沈殿させ、沈殿を吸引濾 過により回収した。沈殿の重量（湿潤重量）はが沸腸組織の約１　／　＋０００ である。

濃縮物を水中１０％ｗ／ｖとなるように室温で溶解した。

２容看の９５％エタノールを溶液に添加し、（見かけの）ｐｌ！（ガラス７１ｉ 極で測定）を水酸化ナトリウム（ＩＭＮａＯｌｌ　：　Ｅｔｏｌｌ　１　：　２ 　）て７５±０１とした。沈殿が形成し、これを濾過して除去した。透明な溶液 に、−２０’Ｃに予め冷却した９５％エタノール１容量を添加し、懸濁液を２４ 時間この温度に保持し、その後濾過した。ペプチドを水溶液のａｍ、から回収し 、塩化ナトリ・ラムで溶液を飽和させることによりｐ１１３．５±０．１で沈殿 させた。吸引濾過により回収した沈殿物の重量は、その調製のために用いた濃縮 物の約１０％であった。これを０．２Ｍ酢酸に溶解し、この溶媒中、セファデッ クスＧ−２５微細粉」二のクロマトグラフィーに１１シた。このクロマトグラフ ィーで得られたペプチド含有溶離液の後産半分の量を塩化ナトリウムで飽和させ 、沈殿を吸引濾過により回収した。その重、１１は、このクロマトグラフィーの ために用いたぺ゛ブチド沈殿物の約４０９６であった。これを水に溶解し、溶液 のｐＨを４±０．１に調節し、そして、ペプチドを塩化ナトリウムで再沈殿させ 、沈殿を吸引により回収した（再沈殿の前後で物質の重量は大きく変化しなかっ た）。再沈殿物質をメタノール（５０ｇ＋／／ｇ）で抽出し、メタノール不溶性 画分を吸引濾過により回収し、フィルター上でエーテルで洗浄した。エーテルを 真空下に蒸発させた、乾燥物質の重量はメタノール抽出に用いたペプチド沈殿物 の約１５％であっｔこ。

実施例　２ 濃縮物の精製 精製のための出発物質として、実施例１で得られた濃縮物を用いた。濃縮物（１ ，５９）をキ酸アンモニウム８０ｍｌ（ｐ１１６．０）に溶解し、旺＾Ｅセファ ロース３０ｍ１！でバッチ処理した。

段階１：ｃｉｌ−セファロースＣＬ−６Ｂ上のクロマトグラフィー　（５６ｊ７ ’カラム、０．１Ｍギ酸アンモニウム（ｐＨ１６，４）で平衡化）。溶離は、先 ず、０．１Ｍギ酸アンモニウム（約２１００Ｒ１）を用いて低吸光度まで行ない 、次に、０．１〜０．８５Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ５，２，３００＋　３００ ｍ１）を用いて勾配溶離を行なったつ活性は０３８Ｍで最大となる非活性３０〜 ４０１ｉｔ位／ＩＩｇの積分ピークとして得られた（１Ｑ′！、位はセクロビン へ　１ｎｑの活性として定義される）。最高の抗菌活性を示す両分を選択して更 に精製した。

段階２　：　ｐｓｃ肛画分のその後の精製ｐｓｃＩｌｃ画分を８Ｗｇ／１１７！ 水となるように溶解した。試料５０ｙｅ　（０，４屓ｑ）を水中０．１％ＴＦＡ 　４５ｈｌと混合し、ＰｅｐＲＰＣ１１Ｒ５１５に結合したＦＰｌ、Ｃ（Ｔ’ｈ ａｒｌａｃｉａ）上に適用した。カラムを流１１０．５ｍ／／　ｓｉｎで１０分 間水中０．１％ＴＦ＾で洗浄した。

次に、アセトニトリル濃度を５分間２７％に上昇させた。

活性物質を３４分間２７〜３２％の勾配のアセトニトリルで溶離した。各両分の うち少量Ｃ３０ｔｔｌまたは１００ｇ／）を５ｐｅｃｄｖａｃ内で乾燥し、水１ ０ｐｅに溶解し、そして、３（ｒｅを用いて抗菌検定を行なった。

結果：活性物質は選択されたグラジェント条件下２８．５％アセトニトリルで溶 離した。添付の図において、溶離時間の関数として抗菌活性（Ｅ、　ｃｏｌｉ） をグラフで示した。

波＠試料として、水中０，１％ＴＦ＾４５ｈｆと混合した水５０ａ！中の精製活 性画分０．４ｆｆｉｇを用いた。試料をＦｒ’ＬＣに結合したＰｅｐＲＰＣｌｌ Ｒ５１５に適用した。溶離プログラムは下記のとおりである。

実施例　３ 抗菌検定 本発明のポリペプチドの抗菌活性をＩ！ｕｌｔｍａｒｋ等の方法に従って抑制領 域検定により測定した（ｌｌｕｌｔ■ａｒｋ、　Ｄ、。

Ｅｎｇｓｔｒ（Ｓｍ、＾１．＾ｎｄｅｒｓｏｎ、に１Ｓｔｅｉｎｅｒ、　Ｉｌ、 　、　Ｂｅｎｎ１ｃｈ。

■、およびＲｏ！ｌ１ａｎ、Ｉｔ、　Ｇ、　（１９８３）、昆虫免疫、＾ｔＬａ ｃｉｎｓ。

１１ｖａｌｏｐｈｏｒａ　ｃｅｃｒｏｐｉａより得られた一群の抗菌蛋白。

ＥＭＢＯＪ、　２．５７＋−３７６）。

指数増殖期の細菌をＫ　Ｌｅ　Ｌ　ｔ−ｓｕ＋ｍ５ｅｒｓｏｎの光電比色計上で ■００単位の密度となるまで生育させた。これらをＬＨ培地で５０倍に希釈し、 菌懸濁液５０ｐｌをＬＢ倍中１．０％アガロース（ｖ／ｖ）６ｍｅｈ混合し、内 径８．６５ｃ冒のペトリ皿（Ｆａｌｃｏｎ　１００１０ｐｔｊｌｕｘ）に注ぎ込 んだ。Ｅ、　ｃｏｌｉではこの方法でプレート当り約２　Ｘ　１０’Ｗ４の菌体 が得られる。

プレートを室温で１時間放置し、直径３Ｉ＋Ｉの穴を固化したアガロース上に形 成した。両分１００１’を５ｐｅｅｄｖａｃ内で乾燥し、水１ｈｌ中に溶解し、 そのうち３ｉ１を穴に適用した。３０分の拡散時間の後、プレートを一夜３０℃ でインキュベートした。抑制領域の直径を測定し、種々の量のセクロピンへＶＳ 活性の標準曲線から相対単位活性を計算した。セクロビンＡｌ−ｇは活性１００ ０　単位に相当する。

ＰＳ　ＣｌＩＣ画分の抗Ｅ、　ｃｏｌｉ活性両分番号　非活性（単位／ｎ） ＰＳ　ＣＭＣＦｒ、Ｉ　Ｏ，５ ＰＳ　ＣＭＣＦｒ、　ＩＩ　Ｏ，７ ＰＳ　ＣｌＩＣＦｒ、　ｍ　１．４ ＰＳ　ＣｌＩＣＦｒ、　ＩＶ　２．０ １’Ｓ　ＣＭＣＦｒ、　Ｖ　１４．Ｏ ＰＳ　ＣｌＩＣＦｒ、　ＶＴ　８４．ＯＰＳ　ＣＭＣＦｒ　■　ｉｏｏ、　。

ＦＰＬＣ結合ＰｅｐＲＩ’ＣｌｌＲ５１５カラム上のＰＳ　ＣＭＣＦｒ、■の逆 相クロマトグラフィーより回収した両分の抗Ｅ、　ｃｏｌｉ活性画分番号　単位 活性／画分 Ｆｒ、１−６　活性検出せず Ｆｒ、９　８４００ Ｆｒ、　１０　２８０００ Ｆｒ、　ＩＩ　２８０００ Ｆｒ、　１２　１３０００ Ｆｒ、　１３　７３００ Ｆｒ、　１４　３５００ Ｆｒ、　１５　１１００ Ｆｒ、１６−３０　活性検出せず この試験ては４００ａｑのＰＳ　ＣＭＣＦｒ、■をカラムに適用した。

実施例　４ 本発明のポリペプチドの杭軸菌活性を測定するためにＢａｃｉｌｌｕｓ　ｍｅｇ ａｔａｒｉｕｍを用いたほがは実施例３と同様にした。Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｅ ｇａｔｅｒｉｕｓｌよＥ、　ｃｏｌｉよりもペプチドに対する感受性が高いこと が解り、ポリペプチドの平均活性はＥ、　ｃｏｌｉに対する場合よりも約３倍高 い。

実施例　５ 種々の細菌に対するＰＲペプチドの抑制領域検定微　生　物　菌　株　最大領域 （請＊）　ＬＣ値（ｐＨ）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　Ｋ１２　Ｄ　２ １　１８．３　０．３Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏＬｉ　Ｂｄ　２２２１／Ｔ ５　１７．６　０．３Ｓａ１ｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｃ＋ｗ＋　Ｌ １２　１５．２　１Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ　Ｐｖ　１１　３．５　 ３００Ｐｓｅｕｄｏｍｎｅｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓｅ　ＯＴ　９７　４．５　２ ００＾ｃｉｎｅＬｏｂａｃｔｅｒ　ｃａｌｃｏａｃｅＬｉｃｕｓ　Ａｃ　ＩＩ　 １２．５　３Ｂａｃｉｌｌｕｓ　＊ｅｇａｔｅｒｉｕｍ　Ｂｅ　１１　１７．４ 　０．３Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉＬｔｓ　Ｂｓ　１１　１０．３　＋５Ｓ ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　Ｃｏｗａｎ　ｌ　３．７　２００ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ　１４．９　２ＰＲペプチド の最高濃度は２．５ｍＭであり、被験細菌を播種した薄層アガロースプレート内 の各ウェルに３ｐｌを適用した。ＩＶ値は１希釈段階より得られ、殺菌可能な最 低濃度とした（Ｈｕｌｔｗ＋ａ、ｒｋ、Ｄ、、ＥｎｇｓｔｒＯｍ、＾１．＾ｎｄ ｅｒｓｏｎ。

Ｋ、　、５ｔｅｉｎｅｒ、１１．　、Ｂｅｎｎ１ｃｈ、Ｉｌ、およびＢｏｍａｎ 、Ｉｌ、Ｇ。

（＋９８３））っ トーー確％アセトニトリル ←−−−−−４（εｇＸＷｔ打）　’；＠ｇ　ｒＴｏ）’Ｈ１７Ｊ補正書の翻訳 文堤出書 （特許法第１８４条の８） 平成５年１２月１３０ 特許子長官　殿 １、国際出願の表示 ＰＣＴ／ＳＥ　９２１００３９４ ２、発明の名称 新規なポリペプチドおよびその使用 ３、特許出願人 住所　スウェーデン国ニス−１１４２４ストツクホルム、ウーデンガタン２３ 氏名　ブウマン、ハンスゲー ４、代理人 住所　東京都千代田区麹町３丁目２番地（相互第一ビル）電話　（３２６１）２ ０２２ ５、補正書の提出年月口　１９９３年７月２８日６、添付書類の目録 補正書の翻訳文　（請求の範囲）　１通請　求　の　範　囲 １、　下記アミノ酸配列： ＾ｒｇ−＾ｒｇ−＾ｒｇ−１’ｒｏ−＾ｒｇ−１’ｒｏ−ｒ’ｒｏ−Ｔｙｒ−Ｌ ｅｕ−ｒ’ｒｏ−＾ｒｇ−Ｐｒｏ−＾ｒｇ−１’ｒｏ−ｒ’ｒｏ−Ｐｒｏ−ｒ’ ｈｃ−Ｆ’ｈｅ−１’ｒｏ−ｒ’ｒｏ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒ ｇ−Ｉ　１ｅ−ｒ’ｒｏ−ｒ’ｒｏ−Ｇｌｙ−１’ｈｅ−ｒ’ｒｏ−１’ｒｏ− ＾ｒｇ−ｒ’ｈｅ−ｒ’ｒｏ−１’ｒｏ−＾ｒｇ−１’ｈｃ−ｒ’ｒ。

を有するポリペプチドおよびその官能性誘導体。

２、　非誘導の形態の請求項１記載のポリペプチド。

３、　治療用途のための請求項１または２に記載のポリペプチド。

４、　抗菌剤として使用するための請求項３記載のポリペプチド。

５、　医薬」二許容できる担体または希釈剤とともに抗菌有効量で請求項１また は２記載のポリペプチドを活性成分として含有する医薬組成物。

６、　担体または希釈剤が経口、筋肉内、静脈内または皮下投与するのに許容さ れつる請求項５記載の医薬組成物。

国際調査報告 ＋１．、−−−−１１７−−　ＰＣＴ／ＳＦ　Ｑり／ｆｌｎ＊ＱＡフロントペー ジの続き （７２）発明者　ミュット、ヴイクトルスウェーデン国ニス−１７１５６ソール ナ。

ユングフルー　ダンセン１８ （７２）発明者　イヨルンヴアツル、ハンススウェーデン国ニス−１７２４６ス ンドピューベルイ、ヴア　ツルステイーゲン１８

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. １．下記アミノ酸配列： 【配列があります】 を有するポリペプチドおよびその官能性誘導体。
2. ２．非誘導の形態の請求項１記載のポリペプチド。
3. ３．治療用途のための請求項１または２に記載のポリペプチド。
4. ４．抗菌剤として使用するための請求項３記載のポリペプチド。
5. ５．医薬上許容できる担体または希釈剤とともに抗菌有効量で請求項１または２ 記載のポリペプチドを活性成分として含有する医薬組成物。
6. ６．担体または希釈剤が経口、筋肉内、静脈内または皮下投与するのに許容され うる請求項５記載の医薬組成物。
7. ７．請求項１または２記載のポリペプチドまたは請求項５または６記載の組成物 を抑制量で投与する工程からなる、ヒトを含む哺乳類のような動物における細菌 生育を抑制するための方法。
8. ８．徐放性投与形態で請求項５または６記載の組成物を経口投与することからな る腸での使用のための請求項７記載の方法。
9. ９．注射可能な投与形態の請求項５または６記載の組成物の注射による投与から なる請求項７記載の方法。