CN110144013A - 一种抗类风湿性关节炎多肽及其应用 - Google Patents

一种抗类风湿性关节炎多肽及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗类风湿性关节炎多肽及其应用，多肽包括两段功能序列，其中一段用于靶向阻断血管新生，另一段用于抑制血管新生部位的炎症反应，在抑制血管新生的同时抑制炎症，从而抑制类风湿性关节炎的发生和发展。通过聚乙二醇的修饰可以增加体内半衰期，降低免疫原性，同时还可以增加多肽药物的水溶性，进一步提高药效。通过增加各种药物制剂辅料将多肽类药物制备成多种给药途径的抗类风湿性关节炎药物，便于疾病的治疗方案的指定，减少毒副作用，有利于药物的临床应用。

Description

一种抗类风湿性关节炎多肽及其应用
技术领域
本发明涉及多肽药物技术领域，特别涉及一种抗类风湿性关节炎多肽及其应用。
背景技术
多肽是由一种或多种氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，通常由10～100个氨基酸分子脱水缩合而成，它们的分子量<10000Da。多肽是蛋白质发挥作用的活性基团，是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质，参与调控各种生理功能，因而在临床应用上具有非常重要的开发价值。
活性多肽的来源分为天然活性多肽、基于天然产物的人工修饰多肽以及人工合成的活性多肽。天然多肽的来源十分广泛，可分为动物生物活性多肽和植物多肽。随着科技的发展，天然多肽已经不是唯一的多肽来源，取而代之的是基因重组多肽和化学合成的多肽。
类风湿关节炎(RA)是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病。其特征是手、足小关节的多关节、对称性、侵袭性关节炎症，经常伴有关节外器官受累及血清类风湿因子阳性，可以导致关节畸形及功能丧失。
生物制剂目前在类风湿关节炎的治疗上，已经有几种生物制剂被批准上市，并且取得了一定的疗效，尤其在难治性类风湿关节炎的治疗中发挥了重要作用。几种生物制剂在类风湿关节炎中的应用：①TNF-α嵌合性单克隆抗体，临床试验已证明对甲氨蝶呤(MTX)等治疗无效的类风湿关节炎患者用Infliximab可取得满意疗效。近年来强调早期应用的效果更好。用法静点，3mg/kg，分别于0,2,6周注射一次，以后每8周静注一次，通常使用3～6次为1个疗程。需与MTX联合应用，抑制抗抗体的产生。②人重组TNF受体p75和IgGFc段的融合蛋白，Etanercept及人重组TNF受体p75和IgGFc段的融合蛋白治疗类风湿关节炎和AS疗效肯定，耐受性好。③阿达木单抗是针对TNF-α的全人源化的单克隆抗体，推荐的治疗剂量为40mg，每2周1次，皮下注射。④IL-6受体拮抗剂，主要用于中重度RA，对TNF-α拮抗剂反应欠佳的患者可能有效。推荐的用法是4～10mg/kg，静脉输注，每4周给药1次。⑤抗CD20单抗治疗类风湿关节炎取得了较满意的疗效，也可与环磷酰胺或甲氨蝶呤联合用药。
单抗类抗靶向疗法虽然解决了靶向性的问题，但其蛋白分子量大，免疫原性高，易产生过敏及免疫交叉反应，且由于研发成本高，研发难度大，产能有限等原因导致其售价高昂，普通癌症患者很难普及使用，同时单抗类药物存在剂型比较单一，给药方式多为静脉注射或滴注，无法口服等问题，使得药物应用十分不便。
受技术条件的制约，多数抗类风湿性关节炎肽类药物的半衰期较短，但抗类风湿性关节炎多肽具有其独特的优势:与小分子化学药物相比，对类风湿性关节炎具有更高的亲和力和更强的特异性，并且不良反应低，还可以增加类风湿性关节炎对其他治疗方法的敏感度；与抗体相比，由于它们体积微小，因此更容易渗透到组织中；可以化学合成，并且可以运用多种手段进行化学修饰，有助于设计和研究新型活性多肽。
新型抗类风湿性关节炎活性多肽具有高亲和力、强特异性、低不良反应的特点，此外大多数还具选择性靶向炎症患处的性质，因而在临床应用上具有非常重要的开发价值，作为抗类风湿性关节炎化合物具有较好的前景。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：针对目前单抗类药物和化疗类药物在治疗肿瘤中存在的诸多缺点，本发明提供一种抗类风湿性关节炎多肽及在制备抗类风湿性关节炎药物中的应用。
为解决上述技术问题，本发明提供以下的技术方案：
一种抗类风湿性关节炎多肽，所述多肽包括SYCHMRIKPHQ和KKKMEKEINNKLE两段氨基酸序列，多肽的氨基酸序列为SYCHMRIKPHQ-Linker-KKKMEKEINNKLE；或KKKMEKEINNKLE-Linker-SYCHMRIKPHQ；或KKKMEKEINNKLESYCHMRIKPHQ。
优选地，所述Linker的氨基酸序列为GSGGSG或GGGGS。
优选地，所述多肽的N端或C端进行聚乙二醇修饰。
优选地，所述聚乙二醇分子量为4000～10000。
一种上述抗类风湿性关节炎多肽应用于制备抗类风湿性关节炎药物。
优选地，所述多肽作为原料药在抗类风湿性关节炎药物中的含量为0.5～15wt％，所述多肽的纯度为95～99％。
优选地，所述抗类风湿性关节炎药物包含有效剂量的抗类风湿性关节炎多肽及其他药学上可接受的辅料或载体，所述药物载体包括有机和无机载体，口服和肠道给药途径适合加入有机载体，有机载体包括淀粉、乳糖、氧化钙硬脂酸盐、植物油、有机增溶剂中的一种或多种，所述有机增溶剂包括聚乙二醇、甘油、水溶性的有机和无机碱中的一种或多种，抗类风湿性关节炎药物被制成固体形式或液体形式，这些各种形式的抗类风湿性关节炎药物制备完成后被灭菌。
优选地，所述抗类风湿性关节炎药物的剂型为片剂、注射剂、喷雾剂、胶囊或包衣药丸。
优选地，所述片剂的厚度为2毫米，片重400mg，硬度为9SCE，所述注射剂或喷雾剂须在4℃无菌条件下采用0.22μm滤膜过滤除菌。
本发明获得的有益效果：
(1)本发明的多肽可以靶向至类风湿性关节炎血管新生部位，抑制新生血管形成，同时抑制此处的炎症反应，达到治疗类风湿性关节炎的功效；
(2)本发明的药物采用多种制剂方式制备，给药方式多样，适合不同情况下的治疗方案，给药方便，减少副作用；
(3)本发明的多肽分子量较小，可穿多种生理屏障，有利于全身给药时药物在目标位置的扩散和靶向。
(4)本发明采用聚乙二醇修饰，可有效提高药效，增强药物稳定性，延长半衰期。
(5)本发明的多肽具有多种抗类风湿性关节炎功效，可有效降低关节部位肿胀，减少炎症和血管新生。
具体实施方式
本发明中的SYCHMRIKPHQ序列来源于人VEGF165蛋白，SYCH为50～53位氨基酸残基，MRIKPHQ为107～113位氨基酸残基，二者皆为VEGF165与其受体的表面结合位点，将两个肽段的氨基酸序列整合后人工合成新的氨基酸序列可有效结合VEGF受体，但无受体激活结构域，因而无受体激活的能力，竞争性的抑制VEGF信号通路，从而抑制类风湿性关节部位强烈的血管新生。
KKKMEKEINNKLE序列来源于人IL-1β蛋白，KKKMEK为91～96位氨基酸残基，EINNKLE为104～110位氨基酸残基，二者皆为经典炎症通路中IL-1β与其受体(如Toll样受体4)的结合位点，人工合成的KKKMEKEINNKLE序列可特异性的结合于IL-1β受体上，竞争性的抑制IL-1β与受体的结合，且KKKMEKEINNKLE上无受体激活结构域，因而无受体激活的能力，可有效阻断IL-1β炎症信号通路，达到抑制类风湿性关节部位炎症反应的目的。
由于类风湿性关节炎部位伴随着强烈的血管新生作用和炎症反应，导致患病部位肿胀疼痛，血管通透性增加，组织液渗出，新生血管导致组织增生，进一步增加了上述症状，本发明将来源于VEGF165和IL-1β的多肽序列结合后可在患病部位同时抑制血管新生和炎症反应，消除肿胀疼痛，抑制组织增生，降低炎症因子的生成和释放，防止骨损伤。
下面通过对实施例的描述，对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，以帮助本领域的技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。
实施例1：本发明中抗类风湿性关节炎多肽采用FMOC固相合成法制备,具体方法如下：
(1)称取5g Fmoc-Ala(otBu)-Wang resin加入多肽固相合成管并加入50mL DCM，溶胀树脂30min；
(2)溶胀后抽干，加入50mL DMF洗涤三次并再次抽干，加入脱帽液50mL；
(3)密封后放入摇床中震荡反应20min，抽干后每次加入50mL DMF洗涤5次并抽干；
(4)取30g处理好的树脂加入验色剂，在100℃水浴锅中加热1.5min，观察颜色，若树脂棕黄色，溶液蓝紫色，说明Fmoc已被脱除，若树脂无色，溶液颜色很淡则需要重复上述脱帽步骤至验色通过；
(5)验色通过后按照多肽的氨基酸序列进行第二个氨基酸的缩合，投料量与树脂的摩尔比为3:1，35℃反应60min后抽干，50mL DMF洗涤5次并抽干；
(6)取缩合后的树脂30g加入验色剂(茚三酮、苯酚、吡啶各100μL)，100℃加热90s，树脂无色透明，溶液淡黄色即验色通过；
(7)重复步骤(4)～(6)，按照表1中的氨基酸序列逐个缩合氨基酸原料，直至将最后一个氨基酸缩合完成。脱去保护基团Fmoc，50mL DMF洗涤9次后再用50mL DCM及50mL无水甲醇各洗涤三次，抽干，真空干燥即得干燥肽树脂；
(8)取1g干燥肽树脂加入10mL切割液，在室温密闭反应2h，砂芯漏斗抽滤，收集滤液；
(9)将滤液加入无水乙醚中，滤液与无水乙醚的体积比为1:10，多肽析出后抽滤，收集滤饼，35℃真空干燥4h，得到多肽粗品；
(10)采用反相液相色谱对多肽粗品进行纯化，色谱柱采用C18反相硅胶柱(具体纯化方法和条件参见Zhu X,Robertson J T,Sacks H S,Dohan F C,Tseng JL，Desiderio DM.Peptides.，1995,16(6):1097一1107)。
表1多肽氨基酸序列及产物纯度
其中，GSGGSG、GGGGS均为柔性连接肽。
纯化后多肽的纯度为95～99％，用于后续的动物体内抗类风湿性关节炎药效实验。
多肽的聚乙二醇修饰及纯化
采用mPEG-ButyrALD 4000作为修饰剂，采用实施例1中的氨基酸序列1～2多肽作为修饰靶标，修饰剂与多肽比例为2:1，还原剂(氰基硼氢化钠)与修饰剂比例为10:1。修饰缓冲液pH分别为5.5的100mM乙酸-乙酸钠缓冲液，反应在25℃下进行，反应初始蛋白浓度为2mg/mL。在反应60min时加过量乙醇胺终止反应，并稀释两倍后由Agilent SB-C 18柱进行分析。此修饰为氨基端修饰，即N端修饰。
用mPEG-SPA 10000作为修饰剂，采用实施例1中的氨基酸序列3～4多肽作为修饰靶标，修饰剂与多肽比例为3:1，修饰缓冲液pH分别为7.5，150mM磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。反应在10℃下进行，反应初始蛋白浓度为1.5mg/mL。在反应10min时取样，加过量乙醇胺终止反应，并稀释两倍后由AgilentSB-C 18柱进行分析。此修饰为氨基端修饰，即N端修饰。
用mPEG-酰肼作为修饰剂，PEG聚合度为8000，采用实施例1中的氨基酸序列5多肽作为修饰靶标，修饰剂与多肤比例为4:1，修饰缓冲液pH为8.0，200mM磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲液和末端的梭基，在1-乙基-3-二甲氨基丙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和二环己基碳二亚胺(DCCI)存在的条件下，反应在10℃下进行，反应初始蛋白浓度为1.5mg/mL。在反应20min时取样，加过量乙醇胺终止反应，并稀释两倍后由AgilentSB-C 18柱进行分析。此修饰为羧基端修饰，即C端修饰。
将上述PEG修饰的多肽溶液上柱分离前用截流分子量为2000的超滤膜超滤除盐，层析条件如下:
1)层析柱:自装SP Sepharose Fast Flow离子交换层析柱，规格:1cm x 16cm(柱体积CV＝10ml)
2)缓冲液:
A:pH4.0，0.02M的醋酸盐缓冲液
B:pH4.0，含0.5M NaCl的0.02M的醋酸盐缓冲液
C:pH4.0，含1M NaCl的0.02M的醋酸盐缓冲液
3)柱平衡:缓冲液A平衡2CV
4)流速:1ml/min
5)检测波长:280nm
6)梯度(共两种)
(1)C 0％一100％，20CV
(2)B 0％一100％，20CV
7)收集:收集洗脱峰，MALDI-TOF-MS测分子量区分出单修饰产物后超滤除盐后冻干浓缩。
8)再生:用缓冲液C洗脱5CV
9)清洗:用0.5M NaOH溶液洗脱5CV
将超滤除盐后收集液转入到50mL离心管中，-70℃冰箱冷冻过夜，然后再-40℃抽真空干燥48小时。收集修饰后的多肽干粉用于后续药物制备。
实施例2：抗类风湿性关节炎药物的制备
按如下配方制备组合物片剂：
表2抗类风湿性关节炎药物组分表
组分 含量
氨基酸序列1多肽 60mg
玉米淀粉 278mg
乳糖 70mg
氧化钙硬脂酸盐 2mg
共计 400mg
采用实施例1中制备的多肽(氨基酸序列1)和乳糖通过玉米淀粉糊粘结形成颗粒，干燥后，加入玉米淀粉和氧化钙硬脂酸盐，混合物被制片机压制成2毫米厚，400mg重，9SCE硬度的片剂。
实施例3：抗类风湿性关节炎药物的制备
按如下配方制备组合物栓剂：
表3抗类风湿性关节炎药物组分表
组分 含量
氨基酸序列2聚乙二醇N端修饰多肽 40mg
滑石粉 260mg
植物油 25mg
碳酸氢钠 25mg
平均分子量为4000的聚乙二醇 50mg
共计 400mg
按照常规药物制剂方法(参考《现代药剂学》)制备以实施例1中制备的多肽(氨基酸序列2)为主要活性成分的栓剂。
实施例4：抗类风湿性关节炎药物的制备
按如下配方制备组合物胶囊：
表4抗类风湿性关节炎药物组分表
组分 含量
氨基酸序列3多肽 50mg
滑石粉 270mg
氢氧化四甲基铵 15mg
氧化钙硬脂酸盐 65mg
共计 400mg
以食用明胶作为胶囊壳，按照常规药物制剂方法(参考《现代药剂学》)制备以实施例1中制备的多肽(氨基酸序列3)为主要活性成分的胶囊。
实施例5：抗类风湿性关节炎药物喷雾剂的制备
注射液母液配方如下：
表5抗类风湿性关节炎药物组分表
组分 含量
氨基酸序列4聚乙二醇N端修饰多肽 10mg
甘油 0.01mL
二乙醇胺 0.005mL
生理盐水 0.985mL
各组分充分混合溶解后0.22μm滤膜过滤除菌，无菌分装入填充有氮气的喷雾瓶中。
实施例6：抗类风湿性关节炎药物注射液的制备
注射液母液配方如下：
表6抗类风湿性关节炎药物组分表
各组分充分混合制备完成后0.22μm滤膜过滤除菌，无菌分装入填充有氮气的安瓿瓶中，使用时采用生理盐水将母液稀释1000倍作为工作液。
实施例7：抗类风湿性关节炎药物乳剂的制备
组合物配方如下：
表7抗类风湿性关节炎药物组分表
组分 含量
氨基酸序列5多肽 10mg
甘油 0.2mL
生理盐水 0.8mL
力保肪宁 9mL
精确称量氨基酸序列6的多肽，溶于生理盐水中，再加入甘油和力保肪宁充分搅拌后分装，辐照灭菌。
实施例8：抗类风湿性关节炎药物注射剂的制备
组合物配方如下：
表8抗类风湿性关节炎药物组分表
组分 含量
氨基酸序列4多肽 30mg
甘露醇 0.2mL
生理盐水 1.8mL
制备及使用方法同实施例6。
实施例9：采用实施例2-8中制备的抗类风湿性关节炎药物进行抗类风湿性关节炎体内药效实验。
实验材料：18～22g雄性裸大鼠50只；将实施例2中制备的抗类风湿性关节炎药物溶于无菌生理盐水中，使终浓度为0.2mg/mL，0.22微米滤膜过滤后无菌分装，4℃保存备用。Avastin和多西他赛注射液，均购自江苏先声再康医药有限公司。
实验方法：
(1)抗类风湿性关节炎(RA)造模，牛II型胶原蛋白按2g/L用浓度0.1M'醋酸溶解后，与等量的弗氏不完全佐剂混合，再放置在冰浴中充分乳化。大鼠用体积分数10％水合氯醛麻醉，注射部位常规消毒后，按每只0.4mL在大鼠尾根部、背部、右后肢足踢多点皮内注射乳化后大鼠造模剂，以局部圆形皮丘隆起为注射成功。在首次注射后的第21天时按上述方法每只再注射0.2mL。首次注射后，注意观察大鼠一般状态，并每隔3d检测大鼠的足踢胀度和关节炎指数。
(2)分组及给药筛选模型制备成功大鼠随机分为10组:设置空白对照组、模型组、实施例2～8给药组和阳性对照组，每组8只大鼠，阳性药采用阿达木单抗和甲氨蝶呤注射液，阿达木单抗的给药剂量为15mg/kg，每三天给药一次，甲氨蝶呤注射液的给药剂量为5mg/kg每7天给药一次，阳性药的给药方式均为静脉注射。空白对照组不做任何处理，模型组在造模后给予生理盐水灌胃，给药体积0.1mL/10g，实施例2、3、4给药组给予抗类风湿性关节炎药物溶液灌胃，实施例6、8给予静脉注射，实施例7给予皮下注射，给药体积均为0.1mL/10g，每日给药一次。实施例5喷雾外用，用量以患处均匀喷洒为限。
(3)正常组和模型组均给予等容积的生理盐水。各组大鼠连续给药28d。
(4)观察指标
大鼠足踢肿胀度在造模前1d、造模后第21天和治疗后第28天3个时间点检测各组大鼠左、右后足踢的容积，并计算其平均足踢容积。通过以下公式进行分析足肿胀度。
平均足容积＝(左后足踢容积+右后足踢容积)/2
造模后足肿胀度＝(造模后平均足容积一造模前平均足容积)/造模前平均足容积
治疗后足肿胀度＝(治疗后平均足容积一造模前平均足容积)/造模前平均足容积
(5)大鼠关节炎指数分别在造模后和治疗后根据大鼠关节红肿程度、范围和关节肿大变形情况，采用关节炎指数积分法进行测定。
0分:无关节炎；
1分:有红色斑点和轻度肿胀；
2分:关节部位中度肿胀；
3分:关节严重肿胀；
4分:关节严重肿胀且不能负重。
表9各组药物抗类风湿性关节炎药效
组别 N(只) 造模21d评分 给药28d评分
空白对照 8 0.41±0.16 0.29±0.19
模型组 8 17.35±2.35 19.42±1.36
阿达木单抗组 8 18.64±1.11 9.42±2.13
甲氨蝶呤组 8 16.32±2.35 10.35±1.65
实施例2 8 17.39±5.42 8.84±2.84
实施例3 8 15.39±4.21 9.64±3.43
实施例4 8 17.65±2.36 10.64±2.65
实施例5 8 16.35±2.98 13.38±3.65
实施例6 8 17.35±3.54 7.64±2.25
实施例7 8 16.84±2.87 8.95±1.14
实施例8 8 18.97±5.10 9.77±2.26
上述结果表明，本发明的优选实施例在多种给药途径下均可有效抑制类风湿性关节，减少关节肿胀，且效果接近或略好于阳性药物。
将大鼠处死后取关节腔滑膜组织，0.01M PBS匀浆后取上清，ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-1β浓度，每组做3个复孔，上清炎症因子浓度测定后换算为组织中炎症因子含量，结果见表10：
表10膝关节腔滑膜组织内炎症因子浓度
表10结果表明，抗类风湿性关节炎多肽给药后可以显著抑制膝关节滑膜组织中炎症因子的产生和释放，有效抑制患处的炎症反应，效果与以TNF为靶点的阿达木单抗几乎相同。
鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抑制实验
取11日龄鸡胚，于检卵灯下标记气室及胎位，并在胎位附近无大血管处画一记号用碘酒，乙醇消毒气室顶部和记号处，然后在气室顶部钻一小孔，同时用磨卵器在记号处将卵壳磨一个和纵轴平行的裂痕，勿伤及壳膜。将卵平放，轻轻将裂痕处卵壳去掉，勿伤及壳膜，于壳膜上刺破一小缝但不伤及下面的绒毛尿囊膜，滴加无菌生理盐水一滴于壳膜上。用橡皮乳头从气室端小孔处缓缓将气室内空气吸去，造成气室负压，此时可见生理盐水下沉，绒毛尿囊膜下陷，壳膜与尿囊膜之间形成人工气室。
揭开人工气室上的壳膜，暴露该处的绒毛尿囊(CAM)膜，滴加0.2-0.5mL药物悬液于绒毛尿囊膜上，加入样品后，用无菌透明胶带封闭窗口，孵育3天，每12小时观察一次，用无菌胶布封口。将鸡胚横卧，于37度孵育，避免翻动，以免人工气室移位。5天后取出收获。用碘酒，乙醇消毒接种部位及四周，撕去封闭处卵壳，用无菌镊子扩大开口处，轻轻夹起绒毛尿囊膜用无菌剪刀剪下接种面及周围的膜，甲醛固定。
取固定后的CAM膜，乙醇脱水，石蜡包埋，沿平行与CAM方向，连续切片，厚度8μm。0.5％甲苯胺蓝染色。取标本于250倍视野下计数微血管的横截面，分别随机6个不重复的高倍视野，取其平均值作为该标本的单位面积下的MVD(微血管密度)结果如下：
血管生成抑制率＝(空白组MVD值-实验组MVD值)/空白组MVD值*100％
表11血管新生抑制药效测定
组别 MVD(条/cm<sup>2</sup>) 血管生成抑制率(％)
空白对照 123 ----
阿达木单抗组 115 6.50
甲氨蝶呤组 132 -7.32
实施例2 38 69.11
实施例3 55 55.28
实施例4 62 49.59
实施例5 68 44.72
实施例6 28 77.24
实施例7 37 69.92
实施例8 54 56.10
表11结果表明本发明不仅可以降低炎症因子水平，还可显著抑制血管新生，而化药组和单抗组则没有抑制血管新生的作用。
综上所述，本发明的多肽可以靶向至类风湿性关节炎血管新生部位，抑制新生血管形成，同时抑制此处的炎症反应，达到治疗类风湿性关节炎的功效；本发明的药物采用多种制剂方式制备，给药方式多样，适合不同情况下的治疗方案，给药方便，减少副作用；本发明的多肽分子量较小，可穿多种生理屏障，有利于全身给药时药物在目标位置的扩散和靶向。本发明采用聚乙二醇修饰，可有效提高药效，增强药物稳定性，延长半衰期。本发明的多肽具有多种抗类风湿性关节炎功效，可有效降低关节部位肿胀，减少炎症和血管新生。
以上实施例仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明保护范围之内；本发明未涉及的技术均可通过现有技术加以实现。
SEQUENCE LISTING
<110> 张慧君
<120> 一种抗类风湿性关节炎多肽及其应用
<130> 115
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Ser Tyr Cys His Met Arg Ile Lys Pro His Gln Gly Ser Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Lys Lys Lys Met Glu Lys Glu Ile Asn Asn Lys Leu Glu
20 25 30
<210> 2
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Ser Tyr Cys His Met Arg Ile Lys Pro His Gln Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Lys Lys Lys Met Glu Lys Glu Ile Asn Asn Lys Leu Glu
20 25
<210> 3
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Lys Lys Lys Met Glu Lys Glu Ile Asn Asn Lys Leu Glu Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Ser Gly Ser Tyr Cys His Met Arg Ile Lys Pro His Gln
20 25 30
<210> 4
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Lys Lys Lys Met Glu Lys Glu Ile Asn Asn Lys Leu Glu Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Ser Tyr Cys His Met Arg Ile Lys Pro His Gln
20 25
<210> 5
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Lys Lys Lys Met Glu Lys Glu Ile Asn Asn Lys Leu Glu Ser Tyr Cys
1 5 10 15
His Met Arg Ile Lys Pro His Gln
20

Claims (9)

1.一种抗类风湿性关节炎多肽，其特征在于：多肽包括SYCHMRIKPHQ和KKKMEKEINNKLE两段氨基酸序列，多肽的氨基酸序列为SYCHMRIKPHQ-Linker-KKKMEKEINNKLE；或KKKMEKEINNKLE-Linker-SYCHMRIKPHQ；或KKKMEKEINNKLESYCHMRIKPHQ。
2.根据权利要求1中所述的一种抗类风湿性关节炎多肽，其特征在于：所述Linker的氨基酸序列为GSGGSG或GGGGS。
3.根据权利要求2中所述的一种抗类风湿性关节炎多肽，其特征在于：所述多肽的N端或C端进行聚乙二醇修饰。
4.根据权利要求2中所述的一种抗类风湿性关节炎多肽，其特征在于：所述聚乙二醇分子量为4000～10000。
5.一种根据权利要求1～4中任一项所述的抗类风湿性关节炎多肽的应用，其特征在于，应用于制备抗类风湿性关节炎药物。
6.根据权利要求5中所述的抗类风湿性关节炎多肽的应用，其特征在于：所述多肽作为原料药在抗类风湿性关节炎药物中的含量为0.5～15wt％，所述多肽的纯度为95～99％。
7.根据权利要求5中所述的抗类风湿性关节炎多肽的应用，其特征在于：所述抗类风湿性关节炎药物包含有效剂量的抗类风湿性关节炎多肽及其他药学上可接受的辅料或载体，所述药物载体包括有机和无机载体，口服和肠道给药途径适合加入有机载体，有机载体包括淀粉、乳糖、氧化钙硬脂酸盐、植物油、有机增溶剂中的一种或多种，所述有机增溶剂包括聚乙二醇、甘油、水溶性的有机和无机碱中的一种或多种，抗类风湿性关节炎药物被制成固体形式或液体形式，这些各种形式的抗类风湿性关节炎药物制备完成后被灭菌。
8.根据权利要求5中所述的抗类风湿性关节炎多肽的应用，其特征在于：所述抗类风湿性关节炎药物的剂型为片剂、注射剂、喷雾剂、胶囊或包衣药丸。
9.根据权利要求8中所述的抗类风湿性关节炎多肽的应用，其特征在于：所述片剂的厚度为2毫米，片重400mg，硬度为9SCE，所述注射剂或喷雾剂须在4℃无菌条件下采用0.22μm滤膜过滤除菌。
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