CN101735314A - 骨桥蛋白及其护肝用途 - Google Patents

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CN101735314A CN201010300867A CN201010300867A CN101735314A CN 101735314 A CN101735314 A CN 101735314A CN 201010300867 A CN201010300867 A CN 201010300867A CN 201010300867 A CN201010300867 A CN 201010300867A CN 101735314 A CN101735314 A CN 101735314A
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俞雁
袁运生
韩伟
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Shanghai Jiaotong University
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Abstract

一种生物医药技术领域的骨桥蛋白及其护肝用途，所述的蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示；所述的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。所述的蛋白在制备用于治疗病毒性的、代谢性的或毒性病原学的急性、亚急性、爆发性或慢性肝病的药物中的用途。本发明所述蛋白可有效地排除或降低肝损伤的发展和肝细胞的死亡，将可能为今后临床肝损伤的治疗提供新的选择。

Description

骨桥蛋白及其护肝用途
技术领域
本发明涉及一种生物医药技术领域的蛋白及其用途，具体是一种骨桥蛋白及其护肝用途。
背景技术
人与动物的肝脏均具有调控其生长和重量的独特能力。如果某种有害试剂损害了部分肝实质，则存活的肝细胞能够进行复制，从而替代损伤的实质。如果病毒性、毒性、免疫原性或代谢来源的肝切除术或肝细胞损伤影响了实质的绝大部分，以至于超过残留肝组织的再生能力，则将发展为致命性的肝功能不全。
目前，没有任何具有肝保护和刺激再生作用的药物可用于治疗急性或慢性肝功能不全。因此迫切需要并且这点很重要，即肝脏学所用的陈列的药物应包括这些指示性的治疗产物。肝保护试剂是一种能够保护肝细胞抵抗各种可对肝细胞造成毒性和/或损害并最终导致坏死或编程性细胞死亡的刺激的产物或活性成分。因此，无论何时诱导肝损害，给药合适剂量的肝保护试剂将提高肝细胞存活，其利于肝再生、有助于肝功能正常化，而且在极端情况下可挽救患者的生命。肝损伤由毒性试剂(包括醇)、病毒、自免疫疾病、局部缺血、局部缺血/再灌注(如肝移植中移植肝中诱导的损伤)及一般由任何炎症所诱导。一种好的肝保护试剂将排除或降低那些情况中肝损伤的发展和肝细胞的死亡。
骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是一种分泌性磷酸化糖蛋白，又称为分泌性磷蛋白1(secreted pHospHoprotein 1，SPP1)、骨涎蛋白、尿石蛋白或早期T淋巴细胞活化抗原1(eat-1)。广泛分布于各种组织中，结构上与多种细胞外基质蛋白相似，功能上具有细胞因子的特点，在多种疾病的发生、发展中起着重要作用。
OPN最初是1979年由Senger发现的、与恶性转化有关的一种包含RGD(精-甘-门冬氨酸)整合素结合区的磷酸化糖蛋白，1983年被Herring从骨基质中分离出来而得名。人的OPN基因定位在染色体4q13。小鼠位于5号染色体上。
OPN基因结构的变异性较大。OPN本身是多等位基因，在小鼠有3个等位基因，人类至少有2个等位基因。通过比较分析，发现尽管不同种属甚至同一种属不同组织的OPN基因具有一定的多态性，其总体核苷酸序列还是呈中度保守性，其中编码N末端和c末端以及含RGD序列的50个氨基酸区具有高度序列保守性。在OPN基因启动子区域中，包含一个TATA盒、一个反向的CCAAT盒、一个GC盒及多种转录因子的结合位点。天然的人骨桥蛋白具有三个异构体，分别是OPNa(全长骨桥蛋白)，OPNb，OPNc。
经对现有技术文献的检索发现：
WO2004/001014公开了骨桥蛋白可以促进神经胶质细胞的增殖和分化，促进神经的髓鞘化和再生。还发现骨桥蛋白对于多发性硬化症和周围神经病的动物模型中具有积极的治疗效果。
WO2002/092122公开了骨桥蛋白或骨桥蛋白活性激动剂在治疗或预防神经疾病中的应用。
WO2005/053628公开了骨桥蛋白用于减少牙釉质上菌斑细菌生长的用途和含有骨桥蛋白的牙用制剂。
CN101293916公开了应用骨桥蛋白的功能表位QLYXXYP或WLXPDP(其中X可以为任何氨基酸)以及与这些表位特异性结合的单克隆抗体在自身免疫性疾病的治疗或预防的应用。
WO2007/068252公开了牛骨桥蛋白对于促进伤口的愈合具有积极的效果。
WO2007/071367公开了骨桥蛋白作为早期诊断直肠癌的一个指标，检测骨桥蛋白对于直肠癌诊断和评价的重要意义。
在现有技术的文献检索中尚未见到与本发明的主题有关的报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种骨桥蛋白的用途。本发明涉及了骨桥蛋白的保护肝脏的新用途，提供了一种肝保护试剂，进而可排除或降低肝损伤的发展和肝细胞的死亡。
本发明是通过以下的技术方案实现的：
本发明涉及一种骨桥蛋白。
所述的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
本发明还涉及一种如上所述的骨桥蛋白的护肝用途。
本发明所述的蛋白在制备用于治疗病毒性的、代谢性的或毒性病原学的急性、亚急性、爆发性或慢性肝病的药物中的用途：
所述肝病为肝损伤。
所述肝病为化学性肝损伤。
所述化学性肝损伤为药物性肝损伤。
所述药物的制剂为肠外给药制剂。
所述肠外给药制剂为注射剂或注射用无菌粉末中的一种。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：本发明在病毒性的、代谢性的或毒性病原学的病因情况下，提供了一种肝保护试剂可排除或降低肝损伤的发展和肝细胞的死亡。在给与肝损伤模型小鼠注射重组的小鼠OPN后小鼠体外周血中的谷丙转氨酶(ALT)(78.6±59vs 186.6±109.0，p＝0.018)水平显著低于对照组，相反如果给模型小鼠注射抗小鼠OPN抗血清后小鼠外周血中ALT水平要显著高于对照组，因为ALT是肝损伤的一个重要特征性指标之一，说明OPN能够减轻肝脏损伤，保护肝脏。同时，在组织学水平上也体现这一疗效。注射重组小鼠OPN的小鼠肝脏组织切片分析显示肝脏的坏死面积要显著小于对照组(11.7±3.4％vs 21.0±4.4％，p＝0.0006)。以上实验数据充分说明了OPN对肝脏的保护作用。
附图说明
图1为注射rmSPP1后小鼠体内转氨酶水平变化示意图；
图2为注射抗SPP1抗体后小鼠体内转氨酶水平变化示意图；
图3为注射rmSPP1后小鼠肝再生期间肝损伤的变化示意图；
图4为注射rmSPP1后CCl4诱导肝脏再生模型小鼠不同时间点的肝组织切片图；
图5为注射Anti-SPP1后小鼠肝再生期间肝损伤的变化示意图；
图6为注射Anti-SPP1后CCl4诱导肝脏再生小鼠不同时间点的肝组织切片图。
具体实施方式
以下实例将结合附图对本发明作进一步说明。本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。比例和百分比基于重量，除非特别说明。
术语“化学性肝损伤”，是指由各种毒性化学物质如细菌产生的内、外毒素，食物中存在黄曲霉素、亚硝胺、酒精以及多种药物等对肝脏造成的损伤。
以下实施例的所述蛋白质是有着SEQ ID NO：1的氨基酸序列的物质，“骨桥蛋白”指全长骨桥蛋白。人的骨桥蛋白序列如序列表中的SEQ ID NO：1所示，重组人全长骨桥蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。
以下实施例中术语“骨桥蛋白”还包括任何动物来源的骨桥蛋白，如小鼠、大鼠、牛的骨桥蛋白等，只要其序列能够维持骨桥蛋白的生物活性，在人体内无抗原活性。优选该物质是rhSPP1蛋白质及其突变体；其功能性活性片段或其类似物；具有高度同源性的同系物以及编码包含SEQ ID NO：1描述的氨基酸序列的蛋白质的载体例如DNA载体(质粒或病毒)。功能性活性片段或类似物可通过添加、插入、修饰、取代或缺失以上所列的氨基酸序列中的一或多个氨基酸残基而形成。术语“类似物”也包括嵌合蛋白质、融合蛋白、抗独特型抗体、上述化合物的前体和其它功能等效物或模拟物。
以下实施例的骨桥蛋白还指蛋白突变体和蛋白片段，如骨桥蛋白天然亚型。本实施例的骨桥蛋白还表示骨桥蛋白表达之后的不同修饰，包括磷酸化、糖基化等形成不同的蛋白形式。现已经知道人骨桥蛋白具有三个亚型，分别是OPNa(SEQ ID NO：1)、OPNb(SEQ IDNO：2)、OPNc(SEQ ID NO：3)。
以下实施例术语“突变体”是指氨基酸序列如SEQ ID NO：1所述rhOPN的突变体。相比于天然的OPN蛋白，该突变体与它们野生型相比，具有增强的活性和/或改变了的立体专一性。天然蛋白的氨基酸序列突变体可通过向以下实施例的核苷酸中引入适当的核苷酸变化、或通过体外合成所需多肽来制备。这些突变体包括，例如缺失、插入或替换该氨基酸序列中的残基。可以通过缺失、插入和替换的组合以得到最终的构建体，提供最终的蛋白产品。
蛋白的同源性百分比由GAP(Needleman和Wunsh，1970)分析(GCG程序)确定，其中参数gap creation penalty＝5，gap extension penalty＝0.3。被分析的序列长度至少为15个氨基酸时，GAP分析就在参与测试的两个序列的至少为15个氨基酸的区域进行测试。更优选地，被分析的序列长度至少为50个氨基酸时，GAP分析就在参与测试的两个序列的至少为50个氨基酸的区域进行测试。更优选地，被分析的序列长度至少为100个氨基酸时，GAP分析就在参与测试的两个序列的至少为100个氨基酸的区域进行测试。更优选地，被分析的序列长度至少为250个氨基酸时，GAP分析就在参与测试的两个序列的至少为250个氨基酸的区域进行测试。甚至更优选地，被分析的序列长度至少为500个氨基酸时，GAP分析就在参与测试的两个序列的至少为500个氨基酸的区域进行测试。
以下实施例涉及的方面还包括OPN蛋白类似物，在它们合成期间或合成后进行了不同的修饰，例如，通过生物素化、苄基化、糖基化、乙酰化、磷酸化、由已知保护/封闭基团的衍生作用、蛋白水解的切割作用、连接到抗体分子或其它细胞配体上等。这些修饰可以用来增加以下实施例OPN蛋白的稳定性和/或生物活性。
组合物
用于以下实施例或者含有以下实施例所述蛋白的组合物。通常，当以下实施例组合物用于上述用途时，所述蛋白可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合制成不同给药途径的药物剂型，如片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、口服液、醑剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、注射剂、注射用无菌粉末、栓剂等。
“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。“药学上可接受的载体”是用于将以下实施例的融合体蛋白传送给动物或人的药学上或食品上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。
以下实施例的蛋白可经过口服、静脉内、肌内或皮下途径给药。
上述剂型中可经口服给药的剂型为：片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、醑剂。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖、白陶土、微粉硅胶、滑石粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮。而液态载体包括：无菌水、乙醇、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制备药物组合物的过程中通常使用的佐剂包括：调味剂、着色剂、防腐剂(如羟苯烷基丁酯、苯甲酸钠、山梨酸)和抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠和二丁基羟基甲苯)。
上述剂型中可用于注射途径给药的剂型包括：注射剂、注射用无菌粉末，它们是将药物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合制成以供注射给药的形式。溶剂包括：无菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，还需加入抑菌剂(如苯甲醇、羟苯丁酯、硫柳汞)、等渗调节剂(如氯化钠、葡萄糖)、助悬剂(如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素)、增溶剂(吐温-80、卵磷酯)、抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠)和填充剂(如乳糖、甘露醇)。
从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是冻干粉针剂。
以下实施例的药用组合物可根据熟知的及公认的制药生产要求的方法制备。药用组合物适宜包含本实施例的蛋白质以及药学上可接受的载体，并适宜为单位剂量形式。本实施例的药用组合物可包含前药形式的以下实施例的蛋白质，该前药可在接受者宿主体内代谢转化成以下实施例物的活性形式。
用途
以下实施例还公开了所述蛋白作为活性成分可以排除或降低肝损伤的发展和肝细胞的死亡的疾病或临床症状的方法，该方法包括给予有效剂量的以下实施例所述蛋白。
“有效剂量”或“治疗量”均是指足以产生疗效的量。有效量可分一或多次给药。通常，有效量足以缓和、改善、稳定、减慢或延迟疾病的进一步发展。
所用的活性成分的有效剂量可随给药模式和待治疗疾病的严重程度而变化。对大部分大型哺乳动物而言，每天施以有效成分的总剂量约为0.01～1000mg。通常，成人临床给药量的范围为0.01～200mg/日，优选为0.05～100mg/日。
实施例1
小鼠重组骨桥蛋白对肝损伤模型小鼠转氨酶水平的影响
材料与方法
80只8周龄的雄性C57BL/6小鼠，随机分成两组：
组1：实验开始时，每只小鼠腹腔注射CCl4，剂量为1ml/kg体重(CCl4用花生油稀释成25％后使用)，1h后皮下注射rmSpp1，剂量为1mg/kg体重，连续注射7天；
组2：处理方法同组1，注射等体积的生理盐水作为组1的对照；
组3：每只小鼠腹腔注射CCl4，1ml/kg体重(CCl4用花生油稀释成25％后使用)，1h后每只小鼠皮下注射20μl Spp1抗血清；
组4：处理方法同组3，注射等体积的正常家兔血清，作为组3的对照。
试验开始后，1、3、5、7天时间点采集样品，每组每次5只，眼底采血后分离血清置20℃保存待测，然后小鼠被断颈处死，取出肝脏相同位置的一小块肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，制作HE染色组织切片。
结果：转氨酶作为肝损伤检测的重要生化指标，其可以直接反应了小鼠肝细胞的损伤程度，尤其是血清中的ALT活性。在CCl4诱导的小鼠肝再生过程中，小鼠体内的ALT水平在注射CCl4后6小时就开始上升直到3天后才开始下降。在实验过程中，注射rmSPP1的小鼠体内ALT转氨酶水平要低于对照组，尤其是第3天，实验组的血清中的ALT活性要显著低于对照的PBS组(78.6±59 vs 186.6±109.0，p＝0.018)，虽然AST的水平也比对照组要低，但差异不显著(图1)。与此相反，在注射抗小鼠SPP1抗血清的小鼠体内的第3天的ALT水平却显著高于其正常血清的对照组(426.9±166.5 vs 90.8±61.9，p＝0.008)，与ALT水平变化相似，注射抗SPP1抗体的实验组小鼠AST水平也要低于对照正常血清组，但是差异不显著(图2)。
实施例2
小鼠重组骨桥蛋白对肝损伤模型小鼠的保护作用
材料与方法
80只8周龄的雄性C57BL/6小鼠，随机分成两组：
组1：实验开始时，每只小鼠腹腔注射CCl4，剂量为1ml/kg体重(CCl4用花生油稀释成25％后使用)，1h后皮下注射rmSpp1，剂量为1mg/kg体重，连续注射7天；
组2：处理方法同组1，注射等体积的生理盐水作为组1的对照；
组3：每只小鼠腹腔注射CCl4，1ml/kg体重(CCl4用花生油稀释成25％后使用)，1h后每只小鼠皮下注射20μl Spp1抗血清；
组4：处理方法同组3，注射等体积的正常家兔血清，作为组3的对照。
试验开始后，1、3、5、7天时间点采集样品，每组每次5只，小鼠被断颈处死，取出肝脏相同位置的一小块肝脏放入4％的甲醛溶液中固定，制作HE染色组织切片。
结果：CCl4在肝脏内代谢产生的自由基造成肝细胞膜脂质的超氧化，细胞开始变性坏死。从肝小叶结构来看，肝细胞获得营养的先后顺序为从汇管区到中央静脉，CCl4诱导的坏死主要出现在中央静脉周围。从肝脏组织的石蜡HE染色切片可以看出正常肝细胞与变性坏死细胞染色不同，随着时间的推移，变性的细胞会出现不同程度的崩解，细胞结构消失。在CCl4诱导损伤过程中，注射CCl4后24小时就开始出现大片的细胞变性，染色是着色异常，在第3天是出现明显的细胞死亡后留下的塌陷，以后随着细胞的迁移组织修复不断进行，7天时组织基本完成了修复过程，HE染色切片没有明显的坏死区域。实验中，第3天时，注射rmSpp1小鼠的肝脏坏死区面积与对照组相比，显著小于对照组小鼠是11.7±3.4％ vs 21.0±4.4％，p＝0.0006(图3，图4，其中图4中A-D：分别为对照组的1、3、5、7天肝脏组织的石蜡切片，HE染色；E-H：分别为注射rmSPP1组小鼠1、3、5、7天肝脏组织的石蜡切片，HE染色；箭头指示区域为损伤区域，图片中的黑线长度为500μm)。相反，在第3天和第5天，注射抗小鼠SPP1抗体小鼠肝脏的坏死面积却显著大于注射正常血清的对照组小鼠，分别是24.1±4.4％ vs 8.6±1.4％，p＝0.014与3.4±0.29％ vs 1.7±0.45％，p＝0.007(图5，图6，其中图6A-D：分别为对照组的1、3、5、7天肝脏组织的石蜡切片，HE染色；E-H：分别为注射Anti-Spp1组小鼠1、3、5、7天肝脏组织的石蜡切片，HE染色；箭头指示区域为损伤区域，图片中的黑线长度为500μm)。通过这两个试验可以看出，Spp1在肝损伤与再生过程中，保护肝细胞免受损伤。当体内的Spp1水平被抗体抑制，小鼠的损伤程度会增加，同时修复的速度也会减慢。
实施例3
小鼠重组骨桥蛋白对肝损伤小鼠体重恢复的影响
80只8周龄的雄性C57BL/6小鼠，随机分成两组：
组1：实验开始时，每只小鼠腹腔注射CCl4，剂量为1ml/kg体重(CCl4用花生油稀释成25％后使用)，1h后皮下注射rmSpp1，剂量为1mg/kg体重，连续注射7天；
组2：处理方法同组1，注射等体积的生理盐水作为组1的对照；
组3：每只小鼠腹腔注射CCl4，1ml/kg体重(CCl4用花生油稀释成25％后使用)，1h后每只小鼠皮下注射20μl Spp1抗血清；
组4：处理方法同组3，注射等体积的正常家兔血清，作为组3的对照。
试验开始后，1、3、5、7天时间点采集样品，每组每次5只，小鼠称量体重，然后小鼠被断颈处死，取出肝脏并称量肝脏重量。
结果：CCl4诱导肝再生小鼠模型过程中，小鼠的体重会在注射CCl4后减轻，我们观察肝损伤与再生模型小鼠在给予抗Spp1抗体后，分别与对照组相比的体重变化情况。由于肝脏是重要的消化器官，其功能的降低也在一定程度可以机体营养与代谢水平上得到反映，因此我们对小鼠的体重进行了检测，结果发现给予抗血清小鼠的体重降低的率要高于对照组小鼠，尤其在第3天，注射Anti-Spp1小鼠的体重降低率显著高于对照组(14.7±2.0％ vs 6.4±3.5％，p＝0.017)。
序列表
<110>上海交通大学
<120>骨桥蛋白及其护肝用途
<130>01003
<160>5
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>314
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>1
Met Arg Ile Ala Val Ile Cys PHe Cys Leu Leu Gly Ile Thr Cys Ala
1               5                   10                  15
Ile Pro Val Lys Gln Ala Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Lys Gln Leu
            20                  25                  30
Tyr Asn Lys Tyr Pro Asp Ala Val Ala Thr Trp Leu Asn Pro Asp Pro
        35                  40                  45
Ser Gln Lys Gln Asn Leu Leu Ala Pro Gln Asn Ala Val Ser Ser Glu
    50                  55                  60
Glu Thr Asn Asp PHe Lys Gln Glu Thr Leu Pro Ser Lys Ser Asn Glu
65                  70                  75                  80
Ser His Asp His Met Asp Asp Met Asp Asp Glu Asp Asp Asp Asp His
                85                  90                  95
Val Asp Ser Gln Asp Ser Ile Asp Ser Asn Asp Ser Asp Asp Val Asp
            100                 105                 110
Asp Thr Asp Asp Ser His Gln Ser Asp Glu Ser His His Ser Asp Glu
        115                 120                 125
Ser Asp Glu Leu Val Thr Asp PHe Pro Thr Asp Leu Pro Ala Thr Glu
    130                 135                 140
Val PHe Thr Pro Val Val Pro Thr Val Asp Thr Tyr Asp Gly Arg Gly
145                 150                 155                 160
Asp Ser Val Val Tyr Gly Leu Arg Ser Lys Ser Lys Lys PHe Arg Arg
                165                 170                 175
Pro Asp Ile Gln Tyr Pro Asp Ala Thr Asp Glu Asp Ile Thr Ser His
            180                 185                 190
Met Glu Ser Glu Glu Leu Asn Gly Ala Tyr Lys Ala Ile Pro Val Ala
        195                 200                 205
Gln Asp Leu Asn Ala Pro Ser Asp Trp Asp Ser Arg Gly Lys Asp Ser
    210                 215                 220
Tyr Glu Thr Ser Gln Leu Asp Asp Gln Ser Ala Glu Thr His Ser His
225                 230                 235                 240
Lys Gln Ser Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Ala Asn Asp Glu Ser Asn Glu
                245                 250                 255
His Ser Asp Val Ile Asp Ser Gln Glu Leu Ser Lys Val Ser Arg Glu
            260                 265                 270
PHe His Ser His Glu PHe His Ser His Glu Asp Met Leu Val Val Asp
        275                 280                 285
Pro Lys Ser Lys Glu Glu Asp Lys His Leu Lys PHe Arg Ile Ser His
    290                 295                 300
Glu Leu Asp Ser Ala Ser Ser Glu Val Asn
305                 310
<210>2
<211>300
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>2
Met Arg Ile Ala Val Ile Cys Phe Cys Leu Leu Gly Ile Thr Cys Ala
1               5                   10                  15
Ile Pro Val Lys Gln Ala Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Lys Gln Leu
            20                  25                  30
Tyr Asn Lys Tyr Pro Asp Ala Val Ala Thr Trp Leu Asn Pro Asp Pro
        35                  40                  45
Ser Gln Lys Gln Asn Leu Leu Ala Pro Gln Thr Leu Pro Ser Lys Ser
    50                  55                  60
Asn Glu Ser His Asp His Met Asp Asp Met Asp Asp Glu Asp Asp Asp
65                  70                  75                  80
Asp His Val Asp Ser Gln Asp Ser Ile Asp Ser Asn Asp Ser Asp Asp
                85                  90                  95
Val Asp Asp Thr Asp Asp Ser His Gln Ser Asp Glu Ser His His Ser
            100                 105                 110
Asp Glu Ser Asp Glu Leu Val Thr Asp Phe Pro Thr Asp Leu Pro Ala
        115                 120                 125
Thr Glu Val Phe Thr Pro Val Val Pro Thr Val Asp Thr Tyr Asp Gly
    130                 135                 140
Arg Gly Asp Ser Val Val Tyr Gly Leu Arg Ser Lys Ser Lys Lys Phe
145                 150                 155                 160
Arg Arg Pro Asp Ile Gln Tyr Pro Asp Ala Thr Asp Glu Asp Ile Thr
                165                 170                 175
Ser His Met Glu Ser Glu Glu Leu Asn Gly Ala Tyr Lys Ala Ile Pro
            180                 185                 190
Val Ala Gln Asp Leu Asn Ala Pro Ser Asp Trp Asp Ser Arg Gly Lys
        195                 200                 205
Asp Ser Tyr Glu Thr Ser Gln Leu Asp Asp Gln Ser Ala Glu Thr His
    210                 215                 220
Ser His Lys Gln Ser Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Ala Asn Asp Glu Ser
225                 230                 235                 240
Asn Glu His Ser Asp Val Ile Asp Ser Gln Glu Leu Ser Lys Val Ser
                245                 250                 255
Arg Glu Phe His Ser His Glu Phe His Ser His Glu Asp Met Leu Val
            260                 265                 270
Val Asp Pro Lys Ser Lys Glu Glu Asp Lys His Leu Lys Phe Arg Ile
        275                 280                 285
Ser His Glu Leu Asp Ser Ala Ser Ser Glu Val Asn
    290                 295                 300
<210>3
<211>287
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>3
Met Arg Ile Ala Val Ile Cys Phe Cys Leu Leu Gly Ile Thr Cys Ala
1               5                   10                  15
Ile Pro Val Lys Gln Ala Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Lys Gln Asn
            20                  25                  30
Ala Val Ser Ser Glu Glu Thr Asn Asp Phe Lys Gln Glu Thr Leu Pro
        35                  40                  45
Ser Lys Ser Asn Glu Ser His Asp His Met Asp Asp Met Asp Asp Glu
    50                  55                  60
Asp Asp Asp Asp His Val Asp Ser Gln Asp Ser Ile Asp Ser Asn Asp
65                  70                  75                  80
Ser Asp Asp Val Asp Asp Thr Asp Asp Ser His Gln Ser Asp Glu Ser
                85                  90                  95
His His Ser Asp Glu Ser Asp Glu Leu Val Thr Asp Phe Pro Thr Asp
            100                 105                 110
Leu Pro Ala Thr Glu Val Phe Thr Pro Val Val Pro Thr Val Asp Thr
        115                 120                 125
Tyr Asp Gly Arg Gly Asp Ser Val Val Tyr Gly Leu Arg Ser Lys Ser
    130                 135                 140
Lys Lys Phe Arg Arg Pro Asp Ile Gln Tyr Pro Asp Ala Thr Asp Glu
145                 150                 155                 160
Asp Ile Thr Ser His Met Glu Ser Glu Glu Leu Asn Gly Ala Tyr Lys
                165                 170                 175
Ala Ile Pro Val Ala Gln Asp Leu Asn Ala Pro Ser Asp Trp Asp Ser
            180                 185                 190
Arg Gly Lys Asp Ser Tyr Glu Thr Ser Gln Leu Asp Asp Gln Ser Ala
        195                 200                 205
Glu Thr His Ser His Lys Gln Ser Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Ala Asn
    210                 215                 220
Asp Glu Ser Asn Glu His Ser Asp Val Ile Asp Ser Gln Glu Leu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Val Ser Arg Glu Phe His Ser His Glu Phe His Ser His Glu Asp
                245                 250                 255
Met Leu Val Val Asp Pro Lys Ser Lys Glu Glu Asp Lys His Leu Lys
            260                 265                 270
Phe Arg Ile Ser His Glu Leu Asp Ser Ala Ser Ser Glu Val Asn
        275                 280                 285
<210>4
<211>279
<212>PRT
<213>Murinae gen.sp.
<400>4
Met Leu Pro Val Lys Val Thr Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Lys Leu
1               5                   10                  15
Tyr Ser Leu His Pro Asp Pro Ile Ala Thr Trp Pro Val Pro Asp Pro
            20                  25                  30
Ser Gln Lys Gln Asn Leu Leu Ala Pro Gln Asn Ala Val Ser Ser Glu
        35                  40                  45
Glu Lys Asp Asp Phe Lys Gln Glu Thr Leu Pro Ser Asn Ser Asn Glu
    50                  55                  60
Ser His Asp His Met Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Gly
65                  70                  75                  80
Asp His Ala Glu Ser Glu Asp Ser Val Asp Ser Asp Glu Ser Asp Glu
                85                  90                  95
Ser His His Ser Asp Glu Ser Asp Glu Thr Val Thr Ala Ser Thr Gln
            100                 105                 110
Ala Asp Thr Phe Thr Pro Ile Val Pro Thr Val Asp Val Pro Asn Gly
        115                 120                 125
Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Leu Arg Ser Lys Ser Arg Ser Phe
    130                 135                 140
Gln Val Ser Asp Glu Gln Tyr Pro Asp Ala Thr Asp Glu Asp Leu Thr
145                 150                 155                 160
Ser His Met Lys Ser Gly Glu Ser Lys Glu Ser Leu Asp Val Ile Pro
                165                 170                 175
Val Ala Gln Leu Leu Ser Met Pro Ser Asp Gln Asp Asn Asn Gly Lys
            180                 185                 190
Gly Ser His Glu Ser Ser Gln Leu Asp Glu Pro Ser Leu Glu Thr His
        195                 200                 205
Arg Leu Glu His Ser Lys Glu Ser Gln Glu Ser Ala Asp Gln Ser Asp
    210                 215                 220
Val Ile Asp Ser Gln Ala Ser Ser Lys Ala Ser Leu Glu His Gln Ser
225                 230                 235                 240
His Lys Phe His Ser His Lys Asp Lys Leu Val Leu Asp Pro Lys Ser
                245                 250                 255
Lys Glu Asp Asp Arg Tyr Leu Lys Phe Arg Ile Ser His Glu Leu Glu
            260                 265                 270
Ser Ser Ser Ser Glu Val Asn
        275
<210>5
<211>300
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>5
Met Ala Ile Pro Val Lys Gln Ala Asp Ser Gly Ser Ser Glu Glu Lys
1               5                   10                  15
Gln Leu Tyr Asn Lys Tyr Pro Asp Ala Val Ala Thr Trp Leu Asn Pro
            20                  25                  30
Asp Pro Ser Gln Lys Gln Asn Leu Leu Ala Pro Gln Asn Ala Val Ser
        35                  40                  45
Ser Glu Glu Thr Asn Asp Phe Lys Gln Glu Thr Leu Pro Ser Lys Ser
    50                  55                  60
Asn Glu Ser His Asp His Met Asp Asp Met Asp Asp Glu Asp Asp Asp
65                  70                  75                  80
Asp His Val Asp Ser Gln Asp Ser Ile Asp Ser Asn Asp Ser Asp Asp
                85                  90                  95
Val Asp Asp Thr Asp Asp Ser His Gln Ser Asp Glu Ser His His Ser
            100                 105                 110
Asp Glu Ser Asp Glu Leu Val Thr Asp Phe Pro Thr Asp Leu Pro Ala
        115                 120                 125
Thr Glu Val Phe Thr Pro Val Val Pro Thr Val Asp Thr Tyr Asp Gly
    130                 135                 140
Arg Gly Asp Ser Val Val Tyr Gly Leu Arg Ser Lys Ser Lys Lys Phe
145                 150                 155                 160
Arg Arg Pro Asp Ile Gln Tyr Pro Asp Ala Thr Asp Glu Asp Ile Thr
                165                 170                 175
Ser His Met Glu Ser Glu Glu Leu Asn Gly Ala Tyr Lys Ala Ile Pro
            180                 185                 190
Val Ala Gln Asp Leu Asn Ala Pro Ser Asp Trp Asp Ser Arg Gly Lys
        195                 200                 205
Asp Ser Tyr Glu Thr Ser Gln Leu Asp Asp Gln Ser Ala Glu Thr His
    210                 215                 220
Ser His Lys Gln Ser Arg Leu Tyr Lys Arg Lys Ala Asn Asp Glu Ser
225                 230                 235                 240
Asn Glu His Ser Asp Val Ile Asp Ser Gln Glu Leu Ser Lys Val Ser
                245                 250                 255
Arg Glu Phe His Ser His Glu Phe His Ser His Glu Asp Met Leu Val
            260                 265                 270
Val Asp Pro Lys Ser Lys Glu Glu Asp Lys His Leu Lys Phe Arg Ile
        275                 280                 285
Ser His Glu Leu Asp Ser Ala Ser Ser Glu Val Asn
    290                 295                 300

Claims (5)

1.一种骨桥蛋白，其特征在于，所述的蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。
2.一种骨桥蛋白，其特征在于，所述的蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO：2所示。
3.一种根据权利要求1或者2所述的骨桥蛋白的护肝用途，其特征在于，所述的蛋白在制备用于治疗病毒性的、代谢性的或毒性病原学的急性、亚急性、爆发性或慢性肝病的药物中的用途。
4.根据权利要求3所述的骨桥蛋白的护肝用途，其特征是，所述药物的制剂为肠外给药制剂。
5.根据权利要求4所述的骨桥蛋白的护肝用途，其特征是，所述肠外给药制剂为注射剂或注射用无菌粉末中的一种。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102719470A (zh) * 2012-07-10 2012-10-10 南京新港医药有限公司 一种opn基因的克隆、表达与蛋白纯化方法
CN105255944A (zh) * 2015-11-13 2016-01-20 河南师范大学 基于转opn基因诱导的肝细胞体外增殖方法
CN114606148A (zh) * 2022-03-29 2022-06-10 江南大学 一株表达骨桥蛋白的毕赤酵母菌株
CN116536235A (zh) * 2023-05-24 2023-08-04 江南大学 一种高效分泌表达骨桥蛋白的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用
CN117720620A (zh) * 2023-12-13 2024-03-19 无锡市儿童医院 小分子多肽和其药物组合物、其制药用途

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