CN102292100A - 用于治疗肺疾病的脂联素 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种含有脂联素的用于抑制肺泡腔扩大的药剂或含有脂联素的用于抑制肺泡壁破坏的药剂。本发明的肺疾病治疗剂为一种安全性高的药物，具有降低气流受限等肺功能恶化的优异效果，并对在肺功能方面伴有不可逆恶化的肺疾病发挥极高的治疗效果，且恶心、呕吐和胃酸分泌等副作用少。

Description

用于治疗肺疾病的脂联素

技术领域

本发明涉及一种用于治疗肺疾病的药剂，所述药剂抑制与由慢性损伤引起的肺泡壁(alveolar walls)的破坏性变化有关的异常肺泡腔(alveolar airspace)扩大，及/或抑制肺泡壁的破坏性变化。 

背景技术

各种已知的肺疾病(PD)包括：由病毒或细菌引起的急性炎症所导致的急性支气管炎；主要由嗜酸粒细胞引起呼吸道炎症反应所导致的支气管哮喘；由肺泡上皮炎症引起的间质性肺炎；由癌细胞引起的肺癌；及慢性阻塞性肺疾病(COPD)，所述慢性阻塞性肺疾病是一种以肺部慢性炎症为特征的疾病，该肺部慢性炎症是由各种原因特别是由吸烟所引起的，可以导致肺泡壁破坏和支气管粘液腺肥大以致造成呼吸短促、咳嗽和痰加重等。特别是，以前被称作肺气肿的疾病通常会加重成不同程度的以前被称作慢性支气管炎的疾病。目前，将与上述两种疾病有关的阻塞性肺疾病称为COPD。 

所谓的COPD是以进行性的气流受限(气道阻塞)为特征的疾病(非专利文献1)。 

与呼吸道分泌过多和传染与气流受限无关的慢性支气管炎不同，一般认为不可逆的气流受限起因于周边气道病变。所述肺疾病，除包括上述肺气肿和慢性支气管炎的慢性阻塞性肺疾病之外，还包括囊性纤维化、支气管扩张、肺结核、肺尘症等。 

迄今为止，关于包括伴有不可逆气流受限的COPD在内的肺疾病的药物治疗，例如可以将β2-兴奋剂、抗胆碱药等具有支气管扩张作用的药物用于暂时性地预防或抑制症状。然而，上述具有支气管扩张作用的药物不能长期减少作为临床上最重要指标的肺功能的 恶化。 

针对将具有很强的抑制细胞因子的产生作用的类固醇用作吸入剂时的治疗效果，已经通过大量的大规模临床试验进行了研究，但是，有报道指出类固醇不能长期减少肺功能的恶化(参见非专利文献2～4)。 

关于具有活性氧产生抑制作用的药物对PD治疗的效果，尚未进行可靠的临床试验。 

一般认为N-乙酰半胱氨酸为具有与活性氧产生抑制剂同样作用机制的抗氧化剂，该临床研究报道了所述N-乙酰半胱氨酸能够减少COPD急性恶化的频率(参见非专利文献5)。但是，尚无文献报道N-乙酰半胱氨酸具有长期减少肺功能恶化的作用。 

另外，已经研究了具有磷酸二酯酶IV抑制活性的药物对治疗PD的应用。但是，有报道指出上述药物具有恶心、呕吐和胃酸分泌等不良副作用(非专利文献6)。 

如上所述，尚未开发出能减少肺功能不可逆的恶化也就是抑制与由慢性损伤引起的肺泡壁破坏性变化的异常有关的肺泡腔扩大及/或抑制肺泡壁破坏性变化的、作为慢性肺疾病治疗药能获得令人满意效果的药物。 

专利文献1：WO 1996/39429 

专利文献2：WO 1999/21577 

专利文献3：日本专利第3018186号 

专利文献4：日本专利第4147220号 

专利文献5：日本特开2004-16074 

非专利文献1：Pauwell，R.A.et.al，Am.J.Respir.Crit.CareMed.，2001(163)，1256-1276 

非专利文献2：PauwelsRA，LodahlCG，LaitinenLA，SchoutenJP，PostmaDS，PrideNB，et al.N.Engl.J.Med.，1999(340)，1948-1953 

非专利文献3：VestboJ，SorensenT，LangeP，BrixA，TorreP，ViskumK，Lancet，1999(353)1819-1823 

非专利文献4：BurgePS，CalverleyPM，JonesPW，SpencerS，AndersonJA，MaslenTK，BMJ，2000(320)，1297-1303 

非专利文献5：C.Stey，J.Steurer，S.Bachmann，T.C.Medici，M.R.Tramer，Eur.Respir.J.，2000(16)，253-262 

非专利文献6：PeterJ.Barnes，N.Engl.J.Med.，2000(343)No.4，269-280 

非专利文献7：Maeda，K.et al.，Biocjem.Biophys.Res.Commun.，1996(221)，286-289 

发明内容

本发明的目的在于提供一种对治疗患有肺功能不可逆恶化的肺疾病患者有用的、安全性高的药物。 

本发明制备了一种动物模型，所述动物模型显示出与伴有肺功能不可逆恶化的COPD临床上非常相似的致病性特征，并使用该动物模型进行了深入研究。结果发现，已知的作为由脂肪细胞特异性分泌的胶原样分泌蛋白的脂联素，能够抑制由弹性蛋白酶处理引起的肺气肿及肺功能损伤，从而得到一种安全性高的新的治疗剂，所述治疗剂显示出对伴有肺功能不可逆恶化的肺疾病的极高的治疗效果，且恶心、呕吐及胃酸分泌等副作用少。本发明是基于以上发现而完成的。 

本发明提供了一种含有脂联素的用于抑制肺泡腔扩大的药剂及一种含有脂联素的用于抑制肺泡壁破坏的药剂。 

项1.一种用于抑制肺泡腔扩大的药剂，所述药剂含有脂联素。 

项2.如项1所述的药剂，其中，上述药剂含有对抑制与肺泡壁破坏性变化有关的肺泡腔扩大为有效量的脂联素。 

项3.如项1或2所述的药剂，其中，上述药剂含有0.01～70重量％的脂联素。 

项4.如项1～3中任一项所述的药剂，其中，上述药剂用于治疗肺气肿、慢性支气管炎、囊性纤维化、支气管扩张、肺结核、肺 尘病或慢性阻塞性肺疾病。 

项5.一种用于抑制肺泡壁破坏的药剂，上述药剂含有脂联素。 

项6.如项5所述的药剂，其中，上述药剂含有对抑制肺泡壁破坏性变化为有效量的脂联素。 

项7.如项5或6所述的药剂，其中，上述药剂含有0.01～70重量％的脂联素。 

项8.如项5～7中任一项所述的药剂，其中，上述药剂用于治疗肺气肿、慢性支气管炎、囊性纤维化、支气管扩张、肺结核、肺尘病或慢性阻塞性肺疾病。 

本发明用于抑制肺泡腔扩大的药剂含有对抑制与肺泡壁破坏性变化有关的肺泡腔扩大为有效量的脂联素，本发明中用于抑制肺泡壁破坏的药剂含有对抑制肺泡壁破坏为有效量的脂联素。 

作为本发明的药剂活性成分的脂联素(adiponectin)，是由脂肪细胞分泌的胶原样蛋白，所述药剂用于抑制肺泡腔扩大或用于抑制肺泡壁破坏。 

作为本发明的药剂活性成分的脂联素是容易获得且公知的物质，所述药剂用于抑制肺泡腔扩大或用于抑制肺泡壁破坏(以下简称为“肺疾病治疗剂”)。本发明中，可以广泛地使用市售的脂联素或用下述参考例中所示的方法制备的脂联素。 

在专利文献1中公开了将人和小鼠的脂联素基因作为人Acrp30及小鼠Acrp30，在非专利文献7和专利文献2中公开了将人脂联素作为apM1。在专利文献2中公开了在本发明的肺疾病治疗剂中作为活性成分使用的脂联素多肽的估计的氨基酸序列，但是，专利文献2仅涉及多肽对平滑肌细胞生长的抑制作用，以及作为预防或改善动脉硬化、预防或治疗血管成形术后再狭窄的药剂及抗炎剂的应用。 

另外，专利文献3公开了脂联素的有用性，作为抗炎剂及单核细胞样细胞的增殖抑制剂，抑制在分化阶段的相对成熟的骨髓单核祖细胞的克隆生长，不包括巨噬细胞或淋巴细胞。此外，专利文献4表明脂联素的C末端球形结构域(对应于人脂联素的氨基酸序列号： 114～239，及小鼠脂联素的氨基酸序列号：111～242)具有降低清道夫受体A表达的作用，可以用作动脉硬化的预防剂及治疗剂。同样地，专利文献5公开了脂联素的C末端球形结构域作为AMP-活化的蛋白激酶活化剂的利用。 

以下脂联素购自Bio Vendor(捷克斯洛伐克；http://www.biovendor.com/products/proteins)：球状重组脂联素(脂联素球状人(大肠杆菌))；由大肠杆菌产生的重组脂联素(脂联素人大肠杆菌His)；由人胚肾细胞产生的重组脂联素(脂联素人HEK293标志)；由人胚肾细胞产生的三聚体重组脂联素(脂联素人三聚体形式(HEK))；由人胚肾细胞产生的低分子量和高分子量脂联素(富含脂联素LMW和MMW低聚物的人(HEK))；由人胚肾细胞产生的中分子量和高分子量脂联素(富含脂联素MMW和HMW低聚物的人(HEK))等。 

作为本发明的肺疾病治疗剂中作为活性成分使用的多肽的具体例是被称为“脂联素”的多肽，该多肽被PCR产物编码，以下会举例介绍。人脂联素的全长DNA序列长度为4,517bp，编码可读框(ORF)的DNA序列的长度为732bp，如序列号2所示。被ORF编码的氨基酸序列由244个氨基酸序列组成，如序列号1所示，且基因序列已经被注册为GenBank登录号NM 004797。另外，小鼠脂联素的全长DNA序列的长度为1,276bp，如序列号5所示，且编码ORF的DNA序列的长度为741bp，如序列号4所示。被ORF编码的氨基酸序列由247个氨基酸序列组成，如序列号3所示，且基因序列已经被注册为GenBank登录号AF304466。进而，已经确认了针对脂肪组织的人和小鼠脂联素的基因表达。 

人脂联素和小鼠脂联素间的氨基酸序列同源性为83.61％，ORF的DNA序列同源性为79.78％。这样一个非常高水平的同源性暗示两者有同样的活性。 

本发明人等发现脂联素抑制与由慢性损伤导致的肺泡壁破坏性变化有关的肺泡腔异常扩大，或显示出通过抑制肺泡壁的破坏性变 化所获得的肺功能改善，由此推断，脂联素可以优选作为药物使用。 

如上所述，由于脂联素能够抑制与由慢性损伤导致的肺泡壁破坏性变化有关的肺泡腔异常扩大，所以可以用于治疗肺气肿、慢性支气管炎、囊性纤维化、支气管扩张、肺结核、肺尘症及COPD等肺疾病。 

专利文献1：WO 1996/39429 

专利文献2：WO 1999/21577 

非专利文献7：Maeda，K.et al.，B.B.R.C.，(1996)Vol.221 No.2，pp286-289 

现在介绍用作本发明的肺疾病治疗剂的活性成分的脂联素的制备，及使用脂联素作为活性成分的肺疾病治疗剂的制备等。 

本说明书中氨基酸、肽类、核苷酸序列、核酸等名称的缩写符合由IUPAC-IUB推荐的命名规则(IUPAC-IUB Communication on Biologicai Nomenclatrue，Eur，J.Biochem.，138，9(1984))、“包括核苷酸序列或氨基酸序列信息的说明书等的撰写指南”(日本专利厅编，1998年7月)及相关技术领域的公约。 

可以采用已建立的基因工程技术，以重组蛋白质的形式提供脂联素[例如Science，224，1431(1984)：Biochem.Biophys.Res.Comm.，130，692(1985)；Proc.Natl.Acad.Sci.，USA.，80，5990(1983)]。在上述情况下，作为脂联素(apMl)基因，可以使用由本发明人等之前构筑的基因[Biochem.Biophys.Res.Commun.，221，286-289(1996)]。 

或者，脂联素可以通过通常的化学合成法，根据被所述基因编码的氨基酸序列信息进行制备。 

利用基因工程技术制备脂联素可以根据以下参考例1所述的方法进行。更具体而言，制备中包括如下步骤：构建重组DNA，该重组DNA用于使编码目标蛋白质的基因在宿主细胞内表达；将DNA引入宿主细胞以获得转化体；以及培养该转化体。 

在本说明书中，多核苷酸(DNA分子)不仅包括双链DNA，也 包括单链DNA，及构成它们的有义链和反义链，且不限定它们的长度。因此，除非另作说明，编码脂联素的多核苷酸包括包含基因组DNA的双链DNA、包含cDNA的单链DNA(有义链)、具有与有义链为互补序列的单链DNA(反义链)及合成的其DNA片段。 

此处多核苷酸(DNA分子)不限定于一个功能区，可以包含表达抑制区、编码区、前导序列、外显子和内含子中的至少一个。 

多核苷酸也包括RNA和DNA。组成某些氨基酸序列的多肽和组成某些DNA序列的多核苷酸包括其片段、同系物、衍生物及突变体。 

多核苷酸的突变体(突变DNA)包括自然产生的等位基因突变体、非自然产生的突变体及具有缺失、取代、添加及插入的突变体。但是，这些突变体编码的多肽实质上具有与突变前由多核苷酸编码的多肽的功能相同的功能。 

多肽的突变(氨基酸序列的修饰)并不必须自然发生，例如可以是突变或是翻译后修饰，但也可以为那些通过利用自然产生的蛋白质(例如人脂联素)人工制备的多肽的突变。上述多肽的突变体包括具有与突变前的多肽至少80％、优选95％、更优选99％同源性的等位变异体、同源物及自然突变体。 

可以通过使用FASTA程序的测定分析多肽或多核苷酸的同源性(Clustal，V.，Methods MoI.Biol.，25，307-318(1994))。作为同源性分析的最优选且简单的方法，可以举出下述方法：将序列储存在可以被电脑读取的媒介物上(例如软盘、CD-ROM、硬盘驱动器、外部光盘驱动器、DVD等)，然后，使用被存储的序列根据公知的搜索过程搜索已知的序列数据库。已知的序列数据库的具体例子包括：日本DNA数据库(DNA Database of Japan(DDBJ))(http://www.ddbj.nig.ac.jp/)；基因库(Genebank)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/web/Genebank/Index.htlm)；及欧洲分子生物学实验室核酸序列数据库(European Molecular Biology Laboratory Nucleic Acid Sequence Database(EMBL))(http:// www.ebi.ac.uk/ebi docs/embl db.html)。 

对于本领域的技术人员来说，可利用许多用于同源性分析的搜索算法。其中一个例子包括称作BLAST程序的程序。在该程序中有5个BLAST步骤。其中三个步骤(BLASTN、BLASTX及TBLASTX)被设计用来检查核苷酸序列。其余的两个步骤被设计用于检查蛋白质序列(Coulson，Trends in Biotechnology，12：76-80(1994)；Birren，et al.，Genome Analysis，1：543-559(1997))。 

另外，在分析可识别序列的技术中，可以利用其他程序，例如序列比对程序和用于识别距离更远的序列的程序。 

突变DNA对由其编码的氨基酸是沉默的(在被突变核苷酸序列编码的氨基酸残基上没有变化)或保守的。以下给出保守氨基酸取代的例子。 

原氨基酸残基           保守取代的氨基酸残基 

Ala                    Ser 

Arg                    Lys 

Asn                    Gln或His 

Asp                    Glu 

Cys                    Ser 

Gln                    Asn 

Glu                    Asp 

Gly                    Pro 

His                    Asn或Gin 

Ile                    Leu或Val 

Leu                    Ile或Val 

Lys                    Arg、Asn或Glu 

Met                    Leu或Ile 

Phe                    Met、Leu或Tyr 

Ser                    Thr 

Thr                    Ser 

Trp         Tyr 

Tyr         Trp或Phe 

Val         Ile或Leu 

通常，一个或多个编码Cys残基的密码子影响特定多肽的二硫键。 

通常认为氨基酸残基的取代影响以下蛋白质的特性： 

a)用亲水残基取代疏水残基，例如用Ser或Thr取代Leu、Ile、Phe、Val或Ala； 

b)用Cys或Pro取代除Cys和Pro之外的氨基酸残基； 

c)用负电残基例如Glu或Asp取代具有正电侧链的残基例如Lys、Arg或His；及 

d)用没有侧链的氨基酸残基例如Gly取代具有极大侧链的氨基酸残基例如Phe。 

脂联素包括序列号1或3的氨基酸序列或在序列号1或3的氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸缺失、插入、取代或添加的氨基酸序列，并且具有肺泡腔扩大抑制活性及/或肺功能改善效果。 

如下述例子所述，脂联素可以为通过基因重组技术在使用大肠杆菌的蛋白质表达系统中或使用杆状病毒(AcNPV)的蛋白质表达系统中表达的多肽，或通过化学合成所得的多肽。 

作为脂联素的氨基酸序列的具体例之一，可以举出序列号1或3中的一个。脂联素的氨基酸序列不限定于序列号1或3中的一个，可以为具有某种同源性的序列(同源序列)。同源序列可以包括含有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列在序列号1或3中具有一个或多个氨基酸缺失、插入、取代或添加，且同源序列具有肺泡腔扩大抑制活性及/或肺泡壁破坏抑制活性及肺功能改善效果(抑制与由慢性损伤导致的肺泡壁破坏性变化有关的肺泡腔异常扩大的活性，及/或抑制肺泡壁破坏性变化的活性)。 

具体而言，脂联素的肺功能改善效果包括改善或降低哺乳动物 例如人的肺呼吸能力下降或在呼吸道(特别是支气肺泡通路)的呼吸阻力增加的效果。 

作为宿主细胞，可以使用来自真核生物和原核生物的细胞。真核细胞包括脊椎动物的细胞和真核微生物的细胞。作为脊椎动物的细胞，通常使用猴细胞系COS(Cell，23，175(1981))、中国仓鼠卵巢细胞系及相应的二氢叶酸还原酶缺乏的细胞系(Proc.Natl.Acad.Sci.，USA.，77，4216(1980))等，但不限定于此。 

作为脊椎动物来源的表达载体，通常可以使用具有位于被表达基因上游的启动子序列、RNA(前体)剪接位点、多腺苷酸化位点及转录终止序列的载体。根据需要，载体还可以进一步具有复制起点。作为所述表达载体的例子，可以举出包埋有SV40早期启动子的pSV2dhfr(Mol.Cell.Biol.，1，854(1981))。 

作为真核微生物，通常使用酵母菌。其中，可以有效地利用酵母属的酵母菌。作为来源于酵母菌等真核微生物的表达载体，可以利用具有针对酸性磷酸酶基因(Proc.Natl.Acad.Sci.，USA.，80，1(1983))的启动子的pAM82。 

作为原核宿主，通常使用大肠杆菌和枯草杆菌。当使用它们作为宿主时，使用能够在宿主微生物中复制的质粒载体，可以适当地使用表达质粒，所述表达质粒通过参入启动子、SD(Shain和Dalgarano)序列及在基因上游蛋白质合成的起始所需的起始密码子(例如ATG)而获得，以使所述基因可以在该载体上表达。如上所述，将大肠杆菌作为宿主时，通常使用大肠杆菌K12，作为载体通常使用pBR322或其修饰物。然而，并不限定于上述列举的，同样地可以利用各种公知的菌株和载体，可以使用的启动子的例子包括色氨酸(trp)启动子、1pp启动子、1ac启动子及PL/PR启动子。 

作为昆虫细胞的载体，可以举出其中参入了脂联素cDNA的杆状病毒载体(Takara)。具体而言，本发明的表达产物可以如下获得：使用蚕的核型多角体病毒(BmNPV)，将参入了脂联素cDNA的杆状病毒表达载体导入到经培养的细胞BmN4或蚕幼虫(家蚕(Bombys  mori))中进行表达，并通过色谱法从培养基或蚕体液中分离。 

本发明的表达产物也可以如下获得：将脂联素的cDNA参入到苜蓿银纹夜蛾的核型多角体病毒(AcNPV)，在草地夜蛾的Sf9细胞或粉纹夜蛾的Tn5细胞中表达，且同样地通过色谱法从培养上清中纯化。 

可以根据公知的方法将所得重组DNA导入宿主细胞进行转化。 

所得转化体可以根据标准方法培养，由此，在细胞内、细胞外或细胞膜上表达及产生(积聚或分泌)目标重组蛋白质。作为用于培养的培养基，可以根据使用的宿主细胞适当地选择使用通常使用的各种培养基。也可以在适合宿主细胞生长的条件下进行培养。 

根据需要，用上述方法得到的脂联素可以通过利用物理、化学和其他特性的各种分离步骤进行分离和纯化(Biochemical Data Book II，1175-1259，第一版，第一次印刷，1980年6月23日，由Tokyo Kagaku Dojin出版，K.K.；Biochemistry，25(25)，8274(1986)；Eur.J.Biochem.，163，313(1987)等)。更具体而言，所述的分离和纯化可以通过传统的重组处理实现，如采用蛋白质沉淀(盐析)剂的处理、离心、渗透压冲击法(Oosmotic pressure shock method)、超声处理、超滤法、分子筛色谱法(凝胶过滤法)、吸附色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、高效液相色谱法(HPLC)等各种类型的液相色谱法及透析，上述方法可以单独使用或组合使用。 

或者，上述脂联素也可以基于氨基酸序列信息通过常用的化学合成法生产。该方法包括用于肽合成的传统的液相和固相方法。更详细而言，这些方法包括所谓逐步延伸技术及片段缩合技术，所述逐步延伸技术包括为了链延伸根据氨基酸序列信息将成分氨基酸一个接一个地凝聚，所述片段缩合技术包括合成由几个氨基酸残基组成的肽片段，且根据上述信息一个接一个地连接在一起。 

用于肽合成的缩合法也可以根据标准方法进行。标准方法的例子包括叠氮化物法、混合酸酐法、DCC法、活化酯法、氧化和还原法、DPPA(叠氮化磷酸二苯酯)法、DDC+加成物(1-羟基苯并三 唑、N-羟基琥珀酰胺、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺)法及伍德沃德法(Woodward method)。 

在上述方法中可以使用的溶剂，可以适当地从用于肽形成缩合反应的公知的溶剂中选择。其例子包括N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、六磷胺(hexaphosphoramide)、二氧杂环己烷、四氢呋喃(THF)、乙酸乙酯等及它们的混合物。 

在上述肽合成反应中，没有参与反应的氨基酸或肽的羧基通常可以通过酯化以低级烷基酯例如甲酯、乙酯及叔丁酯的形式进行保护，及以芳烷基酯例如苄酯、对甲氧基苄酯及对硝基苄酯的形式进行保护。 

氨基酸中的羟基，例如在侧链中具有官能团的酪氨酸残基可以用乙酰基、苄基、苄氧基羰基、叔丁基等保护，虽然这种保护不一定是必须的。 

此外，精氨酸残基的胍基可以用硝基、甲苯磺酰基、对甲氧基苯磺酰基、亚甲基-2-磺酰基、苄氧基羰基、异冰片基氧基羰基或金刚烷基氧基羰基等适当的保护基团进行保护。 

从被保护的氨基酸或肽或从最终蛋白质上脱去所述保护基团的反应，可以根据通常使用的方法进行，例如催化还原法或使用液氨/金属钠、氟化氢、溴化氢、氯化氢、三氟乙酸、乙酸、甲酸或甲磺酸等。 

如上所述得到的脂联素可以通过各种方法纯化，例如通常在肽化学领域中使用的离子交换树脂、分配色谱法、凝胶色谱法及逆流分步法。 

本发明的肺疾病治疗剂含有脂联素或其药理学上可接受的盐作为活性成分。上述盐包括与碱金属、碱土金属及铵形成的盐，例如钠盐、钾盐、锂盐、钙盐、镁盐、钡盐及铵盐。上述盐可以通过本领域公知的方法制备。上述盐还包括酸加成盐，上述酸加成盐可以通过采用已知的方法使脂联素与适当的有机酸或无机酸反应来制备。酸加成盐的例子包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、 乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、对甲苯磺酸盐(甲基苯磺酸盐)、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、磺酸盐、羟乙酸盐、抗坏血酸盐、苯磺酸盐、萘磺酸盐等。 

本发明的肺疾病治疗剂通常以含有药理学上有效量的活性成分与适宜的药物载体的药物制剂的形式进行提供和使用。 

在所述药物制剂中可以利用的载体包括各种稀释剂及/或赋形剂，例如填充剂、增量剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂等。根据所得制剂的单位剂型(unit dosage form)选择性使用上述载体。 

药物制剂的单位剂型可以根据治疗目的从各种形态中选择。其代表例包括片剂、丸剂、散剂、细粉剂、颗粒剂及胶囊剂等固体形态；溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂及酏剂(elixir)等液体形态。所述制剂按给药途径分为口服制剂、肠外制剂、经鼻给药制剂、阴道给药制剂、直肠栓剂、舌下片剂、软膏剂等，且每种制剂均可通过建立的制药步骤进行制备、成形或加工。进而，上述药物制剂可以含有可在通常的药物制剂中添加的各种添加剂，例如稳定剂、抗菌剂、缓冲剂、等渗剂、螯合剂、pH调节剂及表面活性剂。 

稳定剂包括人血清白蛋白、L-氨基酸、糖类及纤维素衍生物。它们可以单独使用或与表面活性剂等组合使用。特别是，上述组合可能有助于提高活性成分的稳定性。 

L-氨基酸没有特别限定，包括甘氨酸、半胱氨酸、谷氨酸等。 

糖类没有特别限定，包括葡萄糖、甘露糖、半乳糖及果糖等单糖类；甘露醇、肌醇及木糖醇等糖醇；蔗糖、麦芽糖及乳糖等二糖类；葡聚糖、羟丙基淀粉、硫酸软骨素及透明质酸等多糖类；及它们的衍生物。 

表面活性剂没有特别限定，可以使用离子型和非离子型表面活性剂。表面活性剂的例子包括聚乙二醇失水山梨糖醇烷基酯、聚氧乙烯烷基醚、失水山梨糖醇单酰基酯及脂肪酸甘油酯。 

纤维素衍生物没有特别的限定，包括甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等。 

相对于每1μg活性成分，可以使用至少约为0.0001mg、优选在约为0.01～10mg的范围内的糖类。相对于每1μg活性成分，可以使用至少约为0.00001mg、优选在约为0.0001～0.01mg的范围内的表面活性剂。相对于每1μg活性成分，可以使用至少约为0.0001mg、优选在约为0.001～0.1mg的范围内的人血清白蛋白。相对于每1μg活性成分，可以使用在约为0.001～10mg的范围内的氨基酸。相对于每1μg活性成分，可以使用至少约为0.00001mg、优选在约为0.001～0.1mg的范围内的纤维素衍生物。 

本发明的药物制剂中所含的活性成分的量可以适当从广泛的范围中选择。活性成分的量通常约为0.00001～70重量％，优选约为0.0001～5重量％。 

可以选择性参入药物制剂中的缓冲剂包括硼酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、ε-氨基己酸、谷氨酸及相应的盐(例如钠盐、钾盐、钙盐及镁盐等与碱金属或碱土金属形成的盐)。等渗剂包括氯化钠、氯化钾、糖及甘油。螯合剂包括依地酸钠和柠檬酸。 

本发明的药物制剂可以制成液体制剂，另外可以通过使制剂成分冻干将其制成冻干剂，所述制剂成分通过溶解在含有生理盐水的缓冲液中制成适当的浓度进行使用。 

将本发明的药物成分制成片剂时，作为载体，可以使用乳糖、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、微晶纤维素、硅酸及磷酸钾等各种赋形剂；水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明胶溶液、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素及聚乙烯吡咯烷酮等粘合剂；羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、低取代羟丙基纤维素、干淀粉、藻酸钠、琼脂粉末、昆布多糖粉末、碳酸氢钠及碳酸钙等崩解剂；聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠及硬脂酰单甘油酯等表面活性剂；蔗糖、硬脂、可可脂及氢化油等崩解抑制剂；季铵碱及十二烷基硫酸钠等 吸收促进剂；甘油及淀粉等湿润剂；淀粉、乳糖、高岭土、膨润土及胶状硅酸等吸附剂；精制滑石、硬脂酸盐、硼酸粉末及聚乙二醇等润滑剂。 

进而，可以根据需要，用传统的包衣材料将得到的片剂进行包衣制成糖包衣片、明胶衣片、肠溶衣片、薄膜衣片或双层或多层片。 

制备丸剂时，作为载体，可以使用葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、高岭土及滑石等赋形剂；阿拉伯胶粉末、黄蓍胶粉末、明胶及乙醇等粘合剂；昆布多糖及琼脂等崩解剂。 

一般来说，胶囊可以根据通常的方法，通过将活性成分与如上所述的载体混合，将上述物质封装在硬胶囊、软胶囊等中制备。 

用于口服的液体制剂包括溶液剂、乳剂、混悬剂、糖浆剂及酏剂。所述制剂均可采用常规的惰性稀释剂制备，例如包括水在内的药理学上可接受的载体。液体制剂也可以进一步添加润湿剂、乳化剂及/或混悬剂等各种辅助剂，且可以通过已知步骤制备。 

用于肠胃外给药的液体制剂，例如无菌水或非水溶液、乳剂或混悬液，可以通过使用水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、乙氧基化异硬脂醇、聚氧基化异硬脂醇、聚乙氧基化失水山梨糖醇脂肪酸酯等稀释剂及橄榄油等植物油来制备。液体制剂可以添加能够被注射或注入的有机酯，例如油酸乙酯。所述制剂可以进一步添加增溶剂、缓冲剂、湿润剂、乳化剂、混悬剂、防腐剂、分散剂及其他添加剂。 

上述药物制剂可以通过经过细菌过滤器的过滤、参入杀菌剂、辐射处理、热处理等进行灭菌。此外，所述药物制剂可以分别以无菌固体成分的形式提供，所述无菌固体成分可以溶解在灭菌水或用于临时灭菌的合适的可灭菌的介质中。 

直肠栓剂和阴道制剂可以通过使用例如聚乙二醇、可可脂、高级醇、高级醇酯、明胶及半合成甘油酯等载体进行制备。 

软膏剂，例如糊剂、乳膏剂及凝胶剂，可以通过使用白凡士林、石蜡、甘油、纤维素衍生物、丙二醇、聚乙二醇、有机硅、膨润土等稀释剂及橄榄油等植物油进行制备。 

用于经鼻或舌下给药的药物制剂，可以使用公知的标准赋形剂或辅料以常规方法进行制备。 

另外，根据需要，本发明的药物制剂可以添加着色剂、防腐剂、香料、调味剂、甜味剂或其他药物组分。 

药物制剂的给药方式没有特别限定，但根据剂型、患者年龄、性别和其他条件、及疾病的状况进行选择。例如口服给与片剂、丸剂、溶液剂、混悬液、乳剂、颗粒剂及胶囊剂。单独或与葡萄糖和氨基酸等通常的输液剂混合经静脉内给与注射剂，根据需要，肌肉内、皮内、皮下或腹腔内单独给与注射剂。直肠内给与栓剂。经阴道给与阴道制剂，经鼻给与经鼻制剂，口腔给与舌下制剂，经皮肤局部给与软膏剂。 

为了将本发明的活性成分制成粉末状，可以按照常规方法粉碎成分。例如，可以使用乳糖、淀粉等粉碎活性成分，然后搅拌得到均匀混合物。 

在给药方法中，肺部给药(吸入剂)比口服给药更优选，这是因为肺泡是治疗的靶器官，且可以直接暴露于受损的肺泡组织部位，防止通常的副作用。 

本发明治疗剂中含有的脂联素的量没有限制，可以适当从广泛的范围中选择。在药物成分中通常含有的脂联素的量约为0.01～70重量％，优选约为0.1～50重量％，更优选约为0.3～30重量％。 

在药物制剂中所含的活性成分的量和剂量没有特别限定，但可以根据所期望的治疗效果、给药方法、治疗期及患者的年龄、性别和其他条件，从广泛的范围中选择。通常选择剂量使活性成分的血药浓度优选约为0.1～500μg/ml，更优选约为1～50μg/ml。该制剂可以一日一次或分成几次给与。 

本发明的治疗剂的剂量根据使用的方法、患者的年龄、性别和其他条件、及疾病的严重程度适当地选择。脂联素的量通常约为0.1μg～20mg。 

本发明的用于抑制肺泡腔扩大的含有脂联素的制剂或用于抑制 肺泡壁破坏的含有脂联素的制剂，具有降低气道阻塞等肺功能恶化的优异的效果，且对在肺功能中伴有不可逆恶化的肺疾病的治疗非常有效。 

本发明的用于抑制肺泡腔扩大的含有脂联素的制剂或用于抑制肺泡壁破坏的含有脂联素的制剂是安全性高的药物，且恶心、呕吐、胃酸分泌等副作用较少。 

附图说明

[图1]为表示脂联素对由肺泡壁进行性破坏性变化引起的肺泡腔扩大具有剂量依赖抑制活性的图。 

[图2]表示呈现出肺泡壁进行性破坏性变化及脂联素对进行性肺泡壁破坏的抑制活性的组织切片。 

具体实施方式

制备例1

可注射剂型中的本发明的药物成分如下制备：向0.01M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH6.0)中加入并混合100μg/mL人脂联素(具有序列号1的氨基酸序列)、0.01mg/mL Tween 80(聚氧乙烯(20)失水山梨糖醇单油酸酯、聚山梨酸酯80)、15mg/mL葡聚糖40、0.1mg/mL半胱氨酸及1.0mg/mL HSA(人血清白蛋白)，过滤混合物(使用0.22μm的膜滤器)，然后将滤液无菌地分装在小瓶中，每1瓶1mL，并将其冻干。上述制剂可以通过将其溶解在1mL生理盐水中使用。 

制备例2

可注射剂型中的本发明的药物成分如下制备：向每瓶注射用蒸馏水中加入10μg/0.1mL人脂联素(具有序列号1的氨基酸序列)、5mg磺基丙氨酸及1mg人血清白蛋白(HAS)，将所得溶液装入一个瓶中，每1瓶1mL，并将其冻干。 

制备例3

可注射制剂中的本发明的药物成分如下制备：向10ml注射用蒸馏水中加入0.5mg脂联素、80mg氯化钠、20mg甘露醇、34.5mg磷酸钠及45mg PEG，接着进行无菌过滤，将滤液分配到无菌小瓶中，每1瓶1mL，并将其冻干。 

参考例1

重组人脂联素的制备 

(1)人脂联素在大肠杆菌中的表达 

1)人脂联素PCR 

人脂联素基因和编码的氨基酸序列已经以登录号为NM 004797和D45371分别保藏于GenBank。编码区(CDS)如第27个～第761个核苷酸序列所示。推断的氨基酸序列如序列号1所示。在上述序列中，第1个～第14个残基组成信号肽，第15个～第244个残基代表成熟人脂联素。 

利用PCR、使用由大阪大学医学院内科学二部的Funahashi博士捐赠的质粒扩增人脂联素基因作为模板。 

设计从人脂联素的第69个到第761个的693bp序列的核苷酸序列，使其在5’-端扩增NdeI位点，在3′-端扩增BamHI位点，使用自动DNA合成器制备PCR引物。PCR引物序列如序列号6(正向)和序列号7(反向)所示。 

2)人脂联素(apM1)基因的亚克隆 

将上述步骤1)中得到的PCR产物亚克隆到pT7蓝色T-载体(Novagen)上，并确认其核苷酸序列(pT7-apM 1)没有突变。 

3)表达载体的构建 

将表达载体pET3c(Novagen)用NdeI和BamHI水解，回收大约4600bp的片段。另一方面，将上述步骤1)中得到的pT7-apM1用NdeI和BamHI水解，回收大约700bp的片段。将上述片段连接，将如上所述得到的表达载体命名为pET3c-apM1。 

4)大肠杆菌中的表达 

使用上述步骤3)中构建并在2xT.Y.Amp.(16g胰蛋白胨、10g 酵母提取物及5g NaCl)中培养的pET3c-apM1，对宿主大肠杆菌链BL21(DE3)pLysS进行转化。当有机体进入对数生长期时，加入IPTG(异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷)用于诱导重组人脂联素(apM1)的产生。将IPTG诱导前后的大肠杆菌细胞及在所述IPTG诱导之后的包含体(大肠杆菌的不溶部分)作为样品，并通过SDS-PAGE和免疫印迹法来确认人脂联素的表达。 

5)结果和讨论 

采用上述方法得到的大肠杆菌中的表达产物是230个残基的蛋白质，所述230个残基的蛋白质与人脂联素的氨基酸序列中除了信号序列之外的¹⁵Gly～²⁴⁴Asn对应，并包括来自N端的起始密码子的Met。 

采用SDS-PAGE分析通过上述工序得到的大肠杆菌。结果，确认到在IPTG诱导后的大肠杆菌细胞和包含体中存在大约30kD的条带。 

然后，使用两种抗体(多克隆抗体(合成肽))施行免疫印迹法。两种抗体与大约30kD的条带反应，但是宿主大肠杆菌中完全没有检测到反应。 

切除上述大约30kD的条带来考察位于N端的其10个氨基酸残基的序列。该序列与预期的序列相同，但在少数中发现N端Met的缺失。 

由上述结果表明重组人脂联素以大约30kD的蛋白质的形式被表达。大部分被表达的重组人脂联素以包含体的形式在细胞内积累。 

(2)来自大肠杆菌的重组人脂联素(apM1)的纯化 

来自大肠杆菌的重组人脂联素的纯化通过以下5个步骤进行。 

1)大肠杆菌的培养 

将用表达载体pET3c-apM1转化的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS(Novagen)在2xT.Y.Amp.Cm.(16g胰蛋白胨、10g酵母提取物、25μg/ml氯霉素及5g NaCl)中进行预培养(37℃，震荡培养)。在第二天，用100体积的2xT.Y.Amp.稀释培养物，并进一步培养。 培养2至3小时后，当培养液的OD550变成0.3～0.5时，加入IPTG使最终浓度为0.4mM，将其用于诱导重组人脂联素(apM1)的产生。在加入IPTG3～5小时后，将培养液离心(5000rpm，20分钟，4℃)，将如上所述的得到的大肠杆菌颗粒冷冻保存。 

2)来自大肠杆菌的包含体的制备 

将大肠杆菌颗粒悬浮在50mM Tris-HCl(pH8.0)中，并在37℃下用溶菌酶处理1小时。然后，加入Triton X-100(片山化学)使最终浓度为0.2％。将上述溶液进行超声波处理(Branson Sonifier，输出控制5，30秒)并离心(12000rpm，30分钟，4℃)，回收颗粒。将颗粒悬浮在25ml添加有0.2％Triton X-100的50mM Tris-HCl(pH8.0)中，接着对悬浮液进行超声波处理(在与上述相同的条件下)。 

用与上述相同的步骤离心所得溶液和清洗颗粒。由此得到的颗粒为包含体。 

3)包含体的重折叠 

用少量的7M盐酸胍、100mM Tris-HCl(pH8.0)及1％2ME使包含体溶解。将上述溶液滴入200倍体积的2M尿素、20mM Tris-HCl(pH8.0)中，稀释，并在4℃下静置3晚。 

4)重折叠后的溶液的浓缩 

将上述重折叠后的溶液离心(9000rpm，30分钟，4℃)，使用Amicon YM-10膜利用超滤法将上清浓缩至约1/100。浓缩是对20mM Tris-HCl(pH8.0)进行透析，并通过0.45μm过滤器过滤透析液。 

5)DEAE-5PW阴离子交换HPLC 

利用阴离子交换高效液相色谱法(HPLC)、使用DEAE-5PW(Tosoh公司)，对上述步骤4)中得到的样品进行分离和纯化。作为起始缓冲液，使用20mM Tris-HCl(pH7.2)，采用NaCl梯度(0→1M NaCl/60ml)在280nm处的吸光度监控下进行洗脱。以每1ml馏分收集洗脱物，采用SDS-PAGE分析各馏分。 

6)结果和讨论 

由于重组人脂联素(apM 1)以大肠杆菌中的包含体的形式被表达，所以通过包含体的溶解和重折叠对其进行纯化。结果，重组人脂联素在阴离子交换柱上被溶解和分离。使用SDS-PAGE对峰馏分(馏分编号30-37)进行分析。结果，观察到大约30kD的条带。在该分析中，在背景中检测出不清晰的条带，但由于大部分的蛋白质被认为是重组人脂联素(apM1)，所以将所述大约30kD的条带(重组人脂联素)作为兔子和小鼠接下来的免疫的抗原及本发明的肺疾病治疗剂的活性成分使用。 

(3)抗人脂联素多克隆和单克隆抗体的制备 

1)多克隆抗体的制备 

将重组人脂联素与完全佐剂以1∶1的比例混合，接着，用混合物对5只兔子进行免疫，使得1只为100μg，在2周内免疫8次，得到抗人脂联素多克隆抗体(标识码：OCT9101-OCT9105)。 

2)单克隆抗体的制备 

将重组人脂联素与完全佐剂以1∶1的比例混合，用混合物对小鼠进行免疫，使得1只为20μg，在2周内免疫3次。然后，在细胞融合前3天进行没有佐剂的最终免疫。使用PEG法进行小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞之间的细胞融合，在HAT介质中选择杂交瘤。 

人脂联素抗体-产生细胞系的筛选通过使用涂布有抗原(重组人脂联素)的免疫平板的ELISA进行，通过有限稀释法克隆杂交瘤。 

在上述方法中，得到了11个被称为KOCO9101-KOCO9111的抗人脂联素抗体产生杂交瘤系。其中一个杂交瘤自1998年6月8日(原始保藏日期)被保藏在通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所(NIBH，日本茨城县筑波市东1-1-3)(由保藏人指定的标识码：KOCO9108)，在1998年10月7日提出要求转为符合布达佩斯条约的保藏。最终保藏的登录号为FERM BP-6542。 

将作为单克隆的杂交瘤分别腹腔内给与事先用姥鲛烷处理的小鼠，收集腹水(标识码：ANOC9101-9111)。 

3)抗体的纯化 

使用蛋白A柱分别纯化兔子抗血清(多克隆抗体)和小鼠腹水(单克隆抗体)。 

4)人脂联素在动物细胞中的表达 

采用EcoRI切除脂联素的cDNA，然后插入表达载体pCIneo(Promega公司)的EcoRI位点。使用L1ipofectAMINE(GIBCO BRL)，用上述pCIneo-人脂联素转染COS-1细胞(ATCC CRL1650)，72小时后收集培养上清和细胞。 

5)人脂联素的免疫印迹法 

首先，经过2ME(+)SDS-PAGE使脂肪组织提取物、COS-1细胞、COS-1细胞培养上清、健康人血浆及重组人脂联素转移到硝酸纤维素膜上。 

使上述膜与抗人脂联素单克隆抗体(ANOC9104)反应，然后，与HRP-标记抗体反应，使用ECL(免疫印迹检测试剂，Amersham)进行检测。 

结果，对于脂肪组织提取物、pCIneo-人脂联素/COS-1细胞及健康人血浆检测出约35kD的条带，但对于pCIneo/COS-1细胞或pCIneo/COS-1细胞培养上清则没有观察到该条带。 

使用pCIneo-人脂联素/COS-1细胞的培养上清，可以确认到35kD的条带，但它的强度太弱以至于难以辨别。 

参考例2

大规模培养表达N末端His-标记融合小鼠脂联素(克隆号5)的CHO细胞，收集所得上清。使用Ni-NTA树脂纯化His-标记的脂联素。 

参考例3

将小鼠脂联素的序列号5表示的全长DNA整合到表达载体中并在大肠杆菌中表达，提供被大量表达的小鼠脂联素。将破坏的大肠杆菌的上清通过DEAE-琼脂糖开柱，使用从0M到1M NaCl的梯度进行洗脱。然后，收集被洗脱的馏分并用饱和的硫酸铵进行分馏。 上清通过Butyl-Toyopearl开柱，并使用从30％～0％的饱和硫酸铵的梯度进行洗脱。最后，进行凝胶过滤来纯化小鼠脂联素。 

实施例1

使用由弹性蛋白酶处理导致进展性肺疾病的模型小鼠(C57BL/6J)，考察脂联素对于以不可逆气流受限为特征的慢性阻塞性肺疾病的治疗效果。 

一旦模型小鼠的肺泡壁由于弹性蛋白酶的一次性气管内给与而被破坏，肺泡壁破坏之后长期持续，扩大为肺气肿病变(图2中的对照)。所述变化由平均线性截距，即通常使用的评价指标(Dunnill.M.S.Thorax(1962)17，p320-328)表示。通过测量单个肺泡的大小来评价肺泡壁破坏的程度。 

因此，在模型小鼠中，弹性蛋白酶处理引起肺泡壁破坏，从而导致肺泡直径扩大，这相当于肺气肿病变和肺功能受损。 

对小鼠一次性气管内给与弹性蛋白酶导致肺泡壁的破坏和相应的血管破裂，引起肺泡中的短暂出血和中性粒细胞浸润；然而，这种炎症在3天后消失。因此，在实验中，可以证实脂联素的效果不是来自弹性蛋白酶的抑制作用。 

如表1所示，基于体重使用分层随机化法(SAS Institute Japan，R8.1)将雌性6或7周龄的小鼠(C57BL/6L，日本Charles River公司)分成4组(A～D，每组6只小鼠)。对每只小鼠实施戊巴比妥麻醉。 

表1 

接着，使用喷雾器(Penn Century公司的产品)，以50μl/小鼠的量，通过喉以气管内给与的方式对A组的小鼠给与普通生理盐水溶液(大塚普通生理盐水，大塚制药工厂制)、对B～D组的小鼠给与人中性粒细胞弹性蛋白酶(Elastin Products公司制)。弹性蛋白酶的剂量为20U/小鼠。气管内给与弹性蛋白酶3天后，分别以0.001mg/小鼠和0.01mg/小鼠的剂量对C组和D组的小鼠气管内给与脂联素，1日1次、共18天。通过将上述参考例2中得到的来自CHO细胞的小鼠脂联素溶解在溶剂(50mM Tris-HCl(pH8.0)0.5M NaCl)中，得到在给药中使用的脂联素。用适当量的普通生理盐水溶液将脂联素稀释为0.2mg/ml或0.02mg/ml的浓度进行使用。每个浓度的溶液被分成每日剂量单位，并在-20℃下冷冻保存直到给药日。在使用时，将冷冻溶液溶解。在弹性蛋白酶对照组(B组)中，同时给与生理盐水溶液代替普通脂联素。在异氟烷吸入麻醉下，使用喷雾器，从喉以50μl/小鼠的容量对小鼠气管内给与脂联素或生理盐水溶液。在连续气管内给与18天后，通过在异氟烷吸入麻醉下从腹主动脉放血，使各小鼠安乐死。摘除肺，用10％中性福尔马林缓冲液进行灌流固定。然后，将经固定的肺组织在生物病理研究所进行石蜡包埋、薄切片、马森三色染剂染色(Masson Trichrome staining)、HE染色，通过测量肺泡损伤的客观指标即平均线性截距评价病理组织。 

平均线性截距(Lm)使用公式：Lm＝N×L/m进行计算，其中，N为截线的数量，L为截线的长度，m为与截线相交的肺泡壁数量。 

统计学分析 

为了研究药物的活性，通过将弹性蛋白酶对照组(B组)与C组及D组比较进行Dunnett检验。每个检验都根据双侧检验进行，且显著性水平定设定为5％。利用SAS软件(SAS Institute Japan，R8.1)进行检验。结果示于图1。 

B组中测量的线性截距为152.5±14.7μm，C组中测量的线性截 距为115.2±17.3μm，D组中测量的线性截距为81.7±20.4μm。随着脂联素的剂量显示出显著的抑制活性(Mean±S.D.，P＜0.05)。在A组中，线性截距为73.0±6.6μm。 

结果表明脂联素的连续肺给与具有剂量-依赖活性，即减少由弹性蛋白酶处理引起的平均线性截距的增加。 

具体而言，确认了脂联素的连续给与抑制了由肺泡壁进行性破坏性变化引起的肺泡腔扩大。 

图2表示显示肺泡壁的进行性破坏性变化的组织切片。这表明在接受连续给与脂联素的组(C和D组)中的进行性肺泡壁破坏与对照组(B组)相比，明显被抑制，且该抑制活性在D组中更强。 

具体而言，确认了脂联素的连续给与抑制了肺泡壁的破坏性变化的进展。 

Claims (4)

1.一种用于抑制肺泡腔扩大的药剂，所述药剂含有脂联素。

2.如权利要求1所述的药剂，其中，所述药剂含有0.01～70重量％的脂联素。

3.一种用于抑制肺泡壁破坏的药剂，所述药剂含有脂联素。

4.如权利要求3所述的药剂，其中，所述药剂含有0.01～70重量％的脂联素。

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