CN111569046B

CN111569046B - 多肽在制备治疗胰腺炎药物中的用途及含有其的药物

Info

Publication number: CN111569046B
Application number: CN202010292838.8A
Authority: CN
Inventors: 许元生; 卢肖宇; 李天然; 孟鹤; 王�华
Original assignee: Link Health Group
Current assignee: Link Health Group
Priority date: 2020-04-14
Filing date: 2020-04-14
Publication date: 2023-06-27
Anticipated expiration: 2040-04-14
Also published as: CN111569046A

Abstract

本发明公开了MEPE衍生多肽在制备治疗胰腺炎药物中的用途及含有其的药物，所述MEPE衍生多肽为：a)SEQ ID NO:1所示的多肽；或b)SEQ ID NO:1所示多肽的氨基酸序列中第5‑19位氨基酸组成的多肽；或c)SEQ ID NO:1所示多肽的氨基酸序列中第5‑19位的氨基酸组成的多肽N末端和C末端分别添加一个Cys经环化得到的环肽。本发明提供的多肽分子量小、易于合成、免疫原性低，且对急性胰腺炎具有良好的治疗效果，可作为急性胰腺炎的新型药物，应用前景广泛。

Description

多肽在制备治疗胰腺炎药物中的用途及含有其的药物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及MEPE衍生多肽在制备治疗胰腺炎药物中的用途及含有其的药物。

背景技术

TDL23为衍生自细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)的含23个氨基酸的肽，有报道显示，TDL23可以促进骨、软骨、牙骨的生成，可用于治疗骨与软骨相关疾病(参见专利文献1、2；非专利文献1、2、3)，但尚未见TDL23用于治疗胰腺炎的报道。ERG15为衍生自TDL23的多肽，由TDL23的第5-19位氨基酸组成，而cERG15是在ERG15的N末端和C末端分别添加一个Cys环化而成，同样未见ERG15和cERG15用于治疗胰腺炎的报道。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2008091632A2

专利文献2：CN1458935A

非专利文献

非专利文献1：Hayashibara等人，Asynthetic peptide fragment of human MEPEstimulates new bone formation in vitro and in vivo.J Bone Miner Res.2004 Mar；19(3):455-62.

非专利文献2：Liu H等人，Dentonin,a fragment of MEPE,enhanced dentalpulp stem cell proliferation.J Dent Res.2004Jun；83(6):496-9.

非专利文献3：Sprowson AP等人，ASARM-truncated MEPE and TDL23 enhanceosteogenesis by promoting osteoprogenitoradhesion.J Orthop Res.2008 Sep；26(9):1256-62。

发明内容

基于此，针对上述技术问题，本发明的发明人通过对现有技术存的大量多肽进行筛选，意外地发现了TDL23、ERG15、cERG15多肽可用于急性胰腺炎的治疗，有可能开发为治疗急性胰腺炎的新型药物。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：MEPE衍生多肽在制备治疗胰腺炎药物中的用途，所述MEPE衍生多肽为：

a)SEQ ID NO:1所示的多肽，命名为TDL23；或

b)SEQ ID NO:1所示多肽的氨基酸序列中第5-19位氨基酸组成的多肽，命名为ERG15；或

c)SEQ ID NO:1所示多肽的氨基酸序列中第5-19位的氨基酸组成的多肽的N末端和C末端分别添加一个Cys经环化得到的环肽。

进一步地，所述多肽ERG15具有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

进一步地，所述多肽cERG15具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

进一步地，所述药物为液体剂型或冻干粉剂。

进一步地，所述胰腺炎为急性胰腺炎。

本发明还提供一种治疗胰腺炎的药物，其含有有效量的MEPE衍生多肽及药学上可接受的载体。本领域的技术人员可根据药物的剂型等对药学上可接受的载体进行常规选择。

进一步地，所述药物中MEPE衍生多肽的重量百分比为0.01～99.99％。更进一步地，所述药物中MEPE衍生多肽的重量百分比为5.0～65％。当该药物被制成液体剂型时，优选溶剂为生理盐水。

进一步地，所述MEPE衍生多肽是所述药物中唯一或主要的有效成分。

本发明的发明人通过体外细胞实验证实，TDL23、ERG15、cERG15多肽能够显著降低急性胰腺炎小鼠模型的胰腺系数，且与模型对照组相比存在显著的差异(P＜0.01)；能够显著降低急性胰腺炎小鼠模型血清淀粉酶的含量，且与模型对照组相比存在显著的差异(P＜0.01)。上述表明，TDL23、ERG15、cERG15多肽对大鼠急性胰腺炎具有良好的治疗效果，有望开发为治疗急性胰腺炎的新型药物。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供的TDL23、ERG15、cERG15多肽分子量小、易于合成、免疫原性低，且对急性胰腺炎具有良好的治疗效果，可作为急性胰腺炎的新型药物，应用前景广泛。

附图说明

图1为本发明多肽的HPLC图谱，其中图1A为TDL23，图1B为ERG15，图1C为cERG15；

图2为各组小鼠的体重统计图；

图3为各组小鼠的死亡率统计图；

图4为各组小鼠的胰腺系数统计图；

图5为各组小鼠的血清淀粉酶(AMY)含量结果图；

图6为各组小鼠的胰腺HE染色病理学评分结果图。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方法，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。

实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例一、多肽的合成

本发明多肽TDL23、ERG15和cERG15采用固相合成工艺合成，纯度＞95％，TDL23、ERG15和cERG15的HPLC图谱分别为图1A、图1B和图1C，合成500mg。

实施例二、TDL23多肽对大鼠急性胰腺炎的治疗作用

造模：SPF级雄性SD大鼠96只，230～260g，各组SD大鼠经麻醉，备皮，消毒，上腹正中剑突下1～2cm处切2～3cm横向切口入腹。确定肝脏、胃、脾，顺胃下找到十二指肠，在胃后部十二指肠肠系膜与脾之间找到胰腺，并沿十二指肠内侧找到透明胆胰管开口以及开口处十二指肠大乳头。在近肝门处用动脉夹结扎肝总管，之后从十二指肠旁斜行进针并调整针头方向使其能够进入胆胰管中，逆行缓慢注射2.5％牛磺胆酸钠1mL/kg，注射速度为0.1mL/min，缝合伤口。

分组：挑选造模成功的大鼠，按体重随机分为6组，每组10只，分别为假手术对照组、模型对照组、TDL23低剂量组、TDL23中剂量组、TDL23高剂量组、阳性对照组。假手术组动物造模时仅开腹后取出胰腺轻轻翻动几次而后放回，不注射牛磺胆酸钠。

给药：各组给予相应受试样品(给药方案见表1)，每天给药3次，分别于造模前给药一次，造模4h后给药一次，造模22h后给药一次。

表1 TDL23治疗大鼠急性胰腺炎给药方案

组别	受试物	给药途径	给药剂量	给药体	给药频率
						假手术对照组	生理盐水	静脉注射	/	5mL/kg	3次/日
模型对照组	生理盐水	静脉注射	/	5mL/kg	3次/日
						TDL23低剂量	TDL23	静脉注射	3mg/kg	5mL/kg	3次/日
TDL23中剂量	TDL23	静脉注射	10mg/kg	5mL/kg	3次/日
						TDL23高剂量	TDL23	静脉注射	30mg/kg	5mL/kg	3次/日
乌司他丁组	乌司他丁	静脉注射	50000U/k	5mL/kg	3次/日

一般状态、体重、死亡率观察：

分别于造模前、造模24h后对大鼠一般状态、体重、动物死亡情况进行观察记录。

血清淀粉酶(AMY)测定：

分别于给药后6h、24h后取血，将全血于4℃，3000rpm离心15分钟，取血清检测血清淀粉酶(AMY)。

胰腺系数测定：

处死大鼠后，取出胰腺并称重，计算胰腺系数：胰腺系数＝胰腺重量/体重*100％。

胰腺组织病理形态学观察：

待动物处死后，迅速外科手术开腹，游离出完整的胰腺组织，肉眼进行大体观察后，取同一位置部分胰腺组织进行多聚甲醛固定，HE染色后按病理改变程度评价胰腺损伤。HE染色分别从炎症程度、胰腺腺泡坏死分别考虑病理变化，并按病理改变程度评价胰腺损伤：根据病变由轻到重的程度，依次半定量为极少量或无病变为阴性“-”记0分，轻度或少量“+”记1分，中度或中等量“++”记2分，重度或多量“+++”记3分，极重度或大量“++++”记4分，将每个指标分数统计总分后进行分析。

数据处理：

实验数据由GraphPad Prism 7.0生物统计学软件进行统计学处理：计量数据以Mean±SD表示，采用方差分析结合Dunnett’s多重比较法进行分析。

实验结果：

一般状态、体重变化：造模前动物的精神状态均良好，毛色光洁，活动自如，呼吸均匀，摄食量，粪便未见明显异常。造模并治疗24h后动物精神状态欠佳，毛发竖起，部分大鼠精神萎靡。与模型对照组相比，治疗24h后各治疗组体重均无明显统计学差异(P>0.05，见图2)。

死亡率：造模并治疗24h后，假手术对照组、模型对照组及各治疗组分别有0、3、3、2、0、0只动物死亡，TDL23治疗显示出降低急性胰腺炎动物的死亡率的趋势，且具有明显的量效关系(见图3)。

胰腺指数：与模型对照组相比，各组胰腺系数均有下降的趋势，其中TDL23高剂量组(30mg/kg)胰腺系数降低较多，且有显著的统计学差异(P＜0.01，见图4)。

血清淀粉酶(AMY)测定：与假手术对照组相比，模型对照组6h、24h的血清淀粉酶含量明显升高(P<0.01)，表明造模成功；与模型对照组相比，TDL23各治疗组6h、24h的血清淀粉酶均有下降的趋势，且高剂量组(30mg/kg)降低最多，具有显著的统计学差异(P＜0.01，见图5)。

病理评分：与假手术对照组相比，模型对照组胰腺HE染色病理评分显著升高(P<0.05)，表明造模成功；TDL23各治疗组胰腺HE染色病理评分均有下降的趋势，且中剂量组(10mg/kg)、高剂量组(30mg/kg)具有显著的统计学差异(P＜0.01，见图6)。

综合以上的研究结果，可以得出结论，TDL23对大鼠急性胰腺炎具有明显的治疗作用，可开发为治疗急性胰腺炎的新型药物。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所述技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

序列表

<110> 广州领晟医疗科技有限公司

<120> MEPE衍生多肽在制备治疗胰腺炎药物中的用途及含有其的药物

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Thr Asp Leu Gln Glu Arg Gly Asp Asn Asp Ile Ser Pro Phe Ser Gly

1 5 10 15

Asp Gly Gln Pro Phe Lys Asp

20

<210> 2

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Glu Arg Gly Asp Asn Asp Ile Ser Pro Phe Ser Gly Asp Gly Gln

1 5 10 15

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

Cys Glu Arg Gly Asp Asn Asp Ile Ser Pro Phe Ser Gly Asp Gly Gln

1 5 10 15

Cys

Claims

1.MEPE衍生多肽在制备治疗胰腺炎药物中的用途，其特征在于，所述MEPE衍生多肽为：

a)SEQ ID NO:1所示的多肽；或

b)SEQ ID NO:1所示多肽的氨基酸序列中第5-19位氨基酸组成的多肽；所述多肽具有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；或

c)SEQ ID NO:1所示多肽的氨基酸序列中第5-19位的氨基酸组成的多肽的N末端和C末端分别添加一个Cys经环化得到的环肽；所述环肽具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物为液体剂型或冻干粉剂。

3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述胰腺炎为急性胰腺炎。