JPS61293925A - 骨及び腱修復促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、ウロガストロンを使用してヒト及び他の温血
動物の骨及び／又は庸の修復全促進する方法及び骨及び
／又は胸修復促進用薬剤製造のためのウロガストロンの
利用に関する。

従来の技術 ウロガストロンは、次の構造： を有する約６０００ダルトンの５３残基単鎖ポリペブチ
ｒである。

ウロガストロンは、初めヒトの尿から単離され、かつ英
国特許第１，３９４，８４６号明細書に記載されている
。ウロガストロンの構造は初め１９７５年にＨ，グレゴ
リ−（Ｇｒｅｇｏｒｙ　）　　等に工って解明された〔
ネイチャー（ＮａｔＬｌｒｅ　）、２５７．３２５頁（
１９７５））。

ウロガストロンを非経口的に投与すると冑の酸分泌を抑
制することは公印である。本発明は、ウロガストロンが
骨及び／又は廊修復全促進するという発見を基礎にして
いる。この発見は、骨及び胸の治癒が遅く、それらの血
管化が質弱なので極めて重要である。ウロガストロンの
構造がずっと以前の１９７５年に発表された事実にも拘
らず、骨及び廊創傷の治３１　ｋ促進するウロガストロ
ンの有用性の研究は文献上に記載されておらず、後述の
生体内試験にＬジ薦修復におけるウロガストロンの有用
性が初めて立証された。さらに、ウロガストロン自体は
ヒトの自然生放物なので、ヒトに対する異物の固有な免
疫原註の可能な難点が最少になる。

発明を達成するための手段 従って本発明の一つの特徴によれば、温血動物にヒトウ
ロガストロン又はヒトウロガストロン断片（次下に定義
する）の有効１ｉヲ局所的又は非経口的に投与すること
から成る前記動物の骨及び／又は廊修復を促進する方法
が提供される。

本発明の他の特徴によれば、骨及び／又は肺修復促進の
ための局所的又は非経口的投与に適合した薬剤の製造に
対するヒトウロガストロン又はヒトウロガストロン断片
の利用が提供される。

また本発明の他の特徴によれば、骨及び／又は薦修復促
進のためのヒトウロガストロン又はヒトウロガストロン
断片の利用が提供される。

さらに本発明の他の特徴によれば、主成分としてヒトウ
ロガストロン又はヒトウロガストロン断片を含有する骨
及び／又はＵ修復促進剤が提供される。

本発明は、疾病又は身体的機能不全よりもむしろ事故又
は作為によって惹起された骨及び／又は麿の損傷治癒全
促進する上で極めて重要であり、例えば鍵随接全包含す
る。

本明細書で使用される゛ヒトウロガストロン又はヒトウ
ロガストロン断片”なる用語は、特にＨ，グレゴリ−に
よって記載されたポリペブチ２ホルモン〔ネイチャー、
２５７．３２５〜３２７頁（１９７５））’に指す。し
かし所望の場合には、前記創傷治癒全促進することので
きるウロガストロン断片も使用してよい。このような断
片は、例えばアミノ酸１〜４６，１〜４７．１〜４８，
１〜４９．１〜５０　、　ｉ〜５１又は１〜５２のみた
ら成るポリペブチｒであってもニー。ウロガストロン又
はウロガストロン断片に対するこの表示によって、Ｎ−
末端にメチオニン又はホルミルメチオニンを有する工う
なポリペブチＰならびにＮ−末端に最高１２個までのア
ミノ酸残基のポリペブチ２鎖（この鎖は、へ末端に先行
するアミノ酸残基の総数が１２１ｆｌ？越えないならば
、メチオニン又はホルミルメチオニンによって先行され
ていてもよい）を有するようなポリペブチＰが包含され
ることは明らかである。

本発明は、ヒト以外の温血動物、例えばネコ及びイヌの
ような家畜、ウシ及びウマの工うな農場ｗＪ＠ならびに
ヒトに適用することができる。

前記のようなヒトウロガストロン又はウロガストロン断
片は好ましくは、全身的に又は創傷部位に又はその極め
て近くに非経口的に投与する。また所望の場合には該ヒ
トウロガストロン又ハウロガストロン断片は、スロー・
レリース−インブラントｃ　ｓｌｏｗ　ｒｅｌｅａｓｅ
　１ｒｒｐｌａｎｔ　）　　に裏って投与してもよい。

ヒトウロガストロン又はヒトウロガストロン断片を局所
的に適用する場合には、一般に外科手術の間開傷部位に
適用する。

本発明は、ヒト及び他の温血動物、例えばネコ及びイヌ
のような家庭ペント及びウマのＷ１１修復を促進する点
で極めて重要であり、ウマの場合にはウロガストロンは
例えば腓断裂から生じる庸炎ｔ　ｅｑｕｉｎｅ　ｔｅｎ
ｄｏｎｉｔｉｓ　）からの回復を促進する。朧修復にお
けるウロガストロンの使用は、特に治癒促進の方式の観
点から有利である。

ウロガストロンの使用は分化全増大し、脚のすべり機能
を助けかつ麿の原構造及び周囲組織の再生を促進する。

薦修復促進におけるウロガストロンの有用性は、アキレ
ス壓の治癒速度がウロガストロンの使用によって促進さ
れる下記のテストに工って説明される。このようなテス
トにおいてウロガストロンの効果は、手術後当初の５日
間が最も顕著であって、ウロガストロン処置損傷部位の
コラーゲン量の増加は塩水処置対照と比べて極めて著し
かつ九〇前記対照及びウロガストロン処置損傷部位のＤ
ＮＡ量はともに手術後９日で最大になったが、このパラ
メータに対するウロガストロンの増加効果は１５日まで
には事実上消失した。またウロガストロン処ｒｊｔを３
０日間続けた動物は損傷部位のコラーゲン量の増大金示
したが、乾燥重量及びＤＮＡ量は処置１９日後には減少
し几。

前記テストに工って、ウロガストロン処ｔ’を持続して
も修復損傷部位の細胞内容物に対する成長因子の刺戟的
効果は一時的であるが、コラーゲン量の増加は持続した
ことが判る。ウロガストロン処置全中止すると、損傷部
位のパラメータが対照値の方へ戻る結果となった。すな
わち増殖する搬痕組織の乾燥重言及び細胞曲（ＤＮＡｔ
に工っで測定）は、ウロガストロン処置組織及び対照に
おいて９日でピークに達し九が、コラーゲン合成は処置
及び対照鍵にお−てともに１５日間増加し続け、かくし
て搬痕が自然に完成するのが判った。

本発明に二る方法は、好ましくはヒトウロガストロン又
はヒトウロガストロン断片、又は活１ｉｆｆ分としての
ヒトウロガストロン又はヒトウロガストロン断片と生理
学的適合性キャリア又は賦形剤とから成る製剤的又は獣
医学的組成物の非経口的又は局所的投与によって行われ
る。

ウロガストロンは、任意の有利な方法で処方して製剤的
又は獣医学的組成物にすることができる。ウロガストロ
ンは好ましくは組成物中に存在する唯一の成長因子でお
る。組成物は、非経口的投与に適する形、例えばアンプ
ル又は小瓶で提供することができる。つまり非経口投与
の場合には、本発明によるヒトウロガストロン又はヒト
ウロガストロン断片は、好ましくは、例えばデキストロ
ース又は生理学的塩水中の等張溶液として処方される。

ヒトウロガストロン又はヒトウロガストロン断片が手術
中創傷部位に局所的に適用される場合には、使用される
組成物は生理学的塩水のような任意の適当なキャリア中
で処方されてもよい。本発明で使用される組成物は、所
望の場合には例えば防腐剤又は殺菌剤のような補助薬を
含有していてもよい。

該組成物が非経口投与に適当な形で提供される場合には
、間組成物は用を単位の形で提供され、各用量単位が好
ましくはヒトウロガストロン又はヒトウロガストロン断
片１μ？〜１０〜、特に２５μ９〜１〜を含有していて
もＬい。

上述の工うに好ましめ投与方法は、創傷又は損傷部位か
又は前記部位の極めて近くに向けられている。非経口投
与に関しては、創傷に十分に近い部位に非経口製剤を施
してヒトウロガストロン断片を創湯部位中に移し、ヒト
ウロガストロン又はその断片を創傷部位自体に直接施さ
なりのが有利である。該ウロガストロンは、その成長が
促進される細胞によって使用されるので、周期的又は連
続的投与が有利であることが判る。この工うな投与が局
所的に行われる場合には、ヒトであろうと又は他の温血
動物でろろうと各対象は通常０．１〜１００μｖ／ｋｑ
のウロガストロン用量を受容する。有利な用を範囲は１
〜１００μ？／ｃｒｉである。この工うな投与が非経口
的に行われる場合には、ヒトであろうと又は他の温血動
物であろうと各対象は通常０．１〜１００μｖ／Ｉｏｙ
／日のウロガストロン用ｔ’を受容する。有利な用！範
囲は１〜１００μ？／ｋｆ７日である。組成物は例えば
１日１〜４回、灯篭しくは１日１回又は２回投与するこ
とができる。

活性成分としてウロガストロン全含有する製剤的又は獣
医学的組成物は、有利には骨及び／又は薦修復促進用組
成物又は薬剤使用に関する曹い友又は印刷した指示を伴
っている。このような指示は例えば、用量、最も有利な
投与法及び組成物の使用が禁忌されうる任意の条件を述
べているであろう。

次に本発明を、ラットアキレス朧の単純な横切断後にラ
ットに組換え体ウロガストロンを投与することによって
生じた治癒促進によって具体的に説明する。

次下の表１に記載したデータ及び第１図は、外科的損傷
部位近くで投与したウロガストロンが外科手術後の初め
の５日間に、塩水を注射し友対照と比べて、搬痕組織の
乾燥重量及び同組織のＤＮＡ及びコラーゲン量を著しく
増加することを示す。コラーゲンは６１％増力口しＤＮ
Ａは２０％増加し、乾燥Ｘ量は３８釜増加したが、これ
らすべての増加は統計的に極めて有意である。外科手術
後１５日にはウロガストロンの蓄積効果はあまり顕著で
はなくなジ、塩水注射対照に対する乾燥重量及びコラー
ゲンの増加はそれぞれ２４Ｌ６及び２８優に低下した。

ウロガストロン処置損傷部位の１５日口のＤＮＡ１ｉの
明らかな増大（８％）は対照値とは極めて異っていた。

反対脚の未手術廊の近くにウロガストロンを毎日２回注
射した場合には、効果は、処置９日ＤＮＡ１ｉＯ増７１
Ｄヲ除いては処理期間中殆どないか又は全くなかつ友。

第２実験では、毎日２回のウロガストロン処置の期間全
手術後３０日まで延長した。もう１つの動物群は手術後
１５日間のみ処置し、次にそれ以上のウロガストロン処
置を施さずに１５日後に犠註になるまで放置した。表２
及び第２図の結果は、３０日間ウロガストロンを与えた
動物において修復損傷部位の乾燥′Ｎ量及びコラーゲン
量が、塩水処置対照損傷部位の相当値エフもそれぞれ１
９壬及び２７憾高たつ友ことを示す。ウロガストロン及
び塩水処置損傷部位のＤＮＡ量は殆ど同じであった。ウ
ロガストロンによる１５日間処理の後観察される損傷部
位のそれぞれのイ直の増ＺＪＯは第１実麟の場合の増加
と同様であつ九。１５日後にウロガストロンの投与を停
止し、該動物をさらに１５日間処置しなかった場合には
、搬痕の乾燥重量及びコラーゲン量は、実験過程の間装
置しなかった動物の乾燥ｉｔ及びコラーゲン量ともはや
区別できないことが判った。

次に図面につめて説明する： 第１図は胸損Ｓ部位の治癒て対する絹換え体ウロガスト
ロンの効果を示すグラフであり、従ってデータは表１に
記載してあり、同効果は手術後の日数（Ｘ軸）に関して
塩水処置対照に対する増加百分ｇ（Ｙ軸）として表わし
である。

つまり第１図は、表１で手術後５日、９日及び１５日に
ついて記載した各測定パラメータに関するＣに対するＤ
の増加百分率を示すグラフである。

第２図は腓損湯部位の治癒に及ぼすＭ４換え体ウロガス
トロンの長期間効果を示すグラフである。従ってデータ
は表２に記載してあり、同効果を手術後日数（Ｘ帖）［
関して塩水処置対照に対する増加百分率として表わしで
ある。つまり第２図は、表２で手術後１５日について記
載した各測定パラメータに関するＢに対するＣの増加百
分も及び手術後３０日について記載した各測定パラメー
タに関するＢに対するＤの増加百分率を示すグラフであ
る。

第３図は、手術後１５日間注射し九ゾーンで形成される
搬機組織の乾燥重量によって測定されるような、ラット
の切断アキレス胸の治癒に及ぼす絹換え体ウロガストロ
ンの段階用量の効果を示すグラフである。段階用量は、
切断藁の隣接近傍に毎日２回注射した。第３図はまた、
ウロガストロンを投与しなかった無傷脚及び手術脚の相
当乾燥重量（八及びウロガストロン全注射した未手術ラ
ット（無湯腓の対応部位で毎日２回注射したウロガスト
ロン用言１００μす／吻を受容した）の無傷脚に関する
相当乾燥重量を示している。

第４図は第３図に相当するが、手術後１５日間注射した
ゾーンで形成された搬機組織の乾燥重量ではなく、手術
後１５日間注射したゾーンにおける修復損傷部位のコラ
ーゲン量を示すグラフである。

実施例 例　　ｌ ライスｊｘ−（Ｗｉｓｔａｒ　）産ラットの堆（２４０
？）に、全身麻酔下に左アキレス肩の部分的薦切開を施
し、小さい皮膚創傷を縫合し、同動物を回復させた。１
４個のアミノ酸のＮ末端配列及びさらにＣ末端のＡｒｇ
−オリゴペブチ）′を有する組換え体ヒトウロガストロ
ンヲＥ、コリーｃ　ｃｏｌｉ　）から単離し、ヨーロッ
パ特許出願公開第８１３０３５１７．７　（米国イリノ
イス州在Ｇ、Ｄ、　ジアール（５ｅａｒｌｅ　）＆　Ｃ
ｏ、　、Ｘ　＝ｒ　−＊　−＜　Ｓｋｏにｉｅ　）　）
で記載しかつ提案されている工うにして製造し九。この
ものを、管理したトリプシン加水分解（３７°で１５分
、酵素／基質比＝１〜１０００）に工って標準の５３個
のアミノ酸配列に変え、０Ｍセルロース及びビオゲル（
Ｂｉｏｇｅｌ）Ｐ−６クロマトグラフィーによって精製
した。精製した成長因子（ウロガストロン純度〉９８％
）を、標準塩水中に溶解し、手術後指示した日数の間魔
損傷部位で毎日２回（２０μ？／　ｋｇ体重、５．０μ
ｍ）注射した。実験ｌ（表１）ではまた、同−用量及び
度数でウロガストロンを未手術１１１（ＣＢ）群）の相
当部位に注射して、同一投与計画が正常劇に効果を及ぼ
すかどうかを検べた。標準塩水を対照群の手術動物（〔
０３群）に注射した。

実験２（表２）の場合には、（Ｄ）群は３０日間ウつガ
ストンを毎日２回（２０μｒ／ｋｙ）受容し、他方〔Ｃ
）群は１５日間ウロガストロンを受容したが、次の１５
日間はウロガストロン処置を施さなかった。

実験終了後、搬機組織は踵骨への着点から筋塊への廊の
合体点に＃動じた。搬機組織の１量を、グリーン７　ル
）′（Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ　）、Ｓ、Ｅ及びベリー（Ｂ
ｅｒｒｙ　）、Ｃ，Ｌ　：　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ、　
Ｒｅｓ。

１２．３６４〜３７２頁（１９７８）に記載されている
工うにして乾燥及び脱脂後に測定した。

コラーゲン量は、蛋白質分解消化〔スミス（加１ｔｈ）
、Ｒ，Ｌ、、ギルバー７　：ｙ　ｃａｉ　１ｂｅｒｓｏ
ｎ）、Ｅｏ、コリア　ツ（Ｋｏｌ　１ａｔｓｕ　）、Ｉ
Ｎｏ、マーチヤント（Ｍｅｒｃｈａｎｔ　）、■、及び
ジャーマン（ｓｃｈｕｒｍａｎ　１．１）−Ｊ、　：　
Ａｎａｌｙｓｔ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

１０３．１９１〜２００頁（１９８０）参照〕及びアル
カリ性消化〔フーザー（Ｈｕｚａｒ　）、Ｇｏ、マイオ
ニｘ　（ＭａｉＯＣＣＯ）、Ｊ、及びナフトリ　　：ｙ
　　　（Ｎａｆｔｏｌｉｎ　　　）　　、　　　Ｆ、　
　：　　　Ａｎａｌｙｔ−Ｂｉｏｃｈｅｍ。

１０５．４２４〜４３９頁（１９８０）参照〕後の該組
織に対するヒ？ロキシプロリンの１ｌｔｌＪ　定（グラ
ンド（Ｇｒａｎｔ）、ＲｏＡ　：　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、Ｐ
ａｔｈ。

１７．６８５〜６８６頁（１９６４）に記載〕から得ら
れた。

該消化物のＤＮＡ量は、高ｇ＃の螢光測定法（ヒ：ｙ　
カー　）’　カー（Ｈｉｎｅｇａｒｄｎｅｒ　）、ｌ’
（、Ｔ、　：Ａｎａｌｙｔ−Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　３９
．１９７〜２０１頁に記載〕を用いて測定した。結果は
±ＳＥＭであり、学生ｔテストによって分析した。括弧
内の数字は各群で使用した動物数を示す。

例　　２ 本例は廊の治癒に対するウロガストロンの段階用量の効
果を説明する。使用したラットはウィスター産ラットの
！（２４０？）であジ、アキレス腿は例１で記載し７を
工うにして切断した。

精製ウロガストロンは例１で記載した工うにして得られ
、乾燥重量及びコラーゲン量は例１で記載したようにし
て測定し友。

ウロガストロンの段階用量ヲ、毎日２回ラットの切断ア
キレス廊の隣接近傍に注射することによって投与した。

ウロガストロン１００μ９／輪用倉を、毎日２回、未手
術ラットの無傷脚の相当位置に注射した。第３図及び第
４図は手術後１５日の注射ゾーンの乾燥重量及びコラー
ゲン量をそれぞれ示す。２０μ、／ｋｑ用量は修復損傷
部位の乾燥重量については統計的に有意な増加を示した
が、コラーゲン量に関してはそうではなかった。５０及
び１００μｖ／ｋｇ用量の場合には乾燥重電及びコラー
ゲン量が共に有意に増加した。また最高用量も乾燥重電
及びコラーゲン量を増加させた。

処方例 例　　Ａ 例１で記載したようにして製造し几精製ヒトウロガスト
ロンを、発熱物質を含まない５％Ｗ／Ｖ　　デキストロ
ース溶液に溶かして最終張度４０μｆ／ａｔにする。こ
の溶液ヲ２．５−のアリコートでそれぞれ滅菌膜濾過装
置、例えば（１，２２ｍμフィルターを通して小瓶に分
配する。次に各瓶の内容物を保給乾燥し、無菌条件下で
瓶にキャンプヲ施してシールする。ウロガストロン及び
デキストロースの無菌混合物を含有する瓶を４℃で貯蔵
する。

例　　日 例Ａで記載しｔようにして製造した小瓶に使用直前に無
菌水２．．５−を加えて、５優Ｗ／Ｖ　デキストロース
溶液中のウロガストロン４０μ９／−の無菌注射溶液に
する。

例　　Ｃ 例１で記載したエラにして製造した精製ヒトウロガスト
ロンを、発熱物質を含まない水（５０ｍ）中に溶かし、
この溶液全、滅菌膜濾過装置、例えば０．２２　ｍμフ
ィルターを通して濾過して、アンプルにそれぞれ（１，
５−容るように注入した。次に各アンプルの内容物を凍
結乾燥し、アンプルを無菌条件下でシールする。それぞ
れウロガストロンＺｏｏ！、に含有するアンプルを一２
０℃で保存した。

例　　Ｄ 例Ｃで記載した工うにして製造したアンプルの内容物を
、５％　Ｗ／Ｖデキストロース溶液に溶かしてウロガス
トロン５〜５０μ？／ｒｄｆ含Ｎする溶液とする。

また５％　Ｗ／Ｖデキストロース溶液は、等張塩水と代
えてもよい。

【図面の簡単な説明】

第１図はラットのＦＭ損傷部位の治癒に及ぼす本発明に
よるウロガストロンの効果金示すグラフ、第２図は同様
な長期間効果を示すグラフ、第３図及び第４図はランド
の切断アキレス廊の治癒に及ぼす本発明によるウロガス
トロンの段階用當の効果を示すグラフである。 図面の浄Ｂ（内容に変更なし） う ゲ ン 鼠 手祝；Ｉ後日数 手術後日数

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、活性成分としてヒトウロガストロン又はヒトウロガ
   ストロン断片を含有する骨及び腱修復促進剤。 ２、外科手術中の創傷部位に対する局所的投与又は非経
   口投与用に適合された特許請求の範囲第１項記載の剤。 ３、各用量単位がヒトウロガストロン又はヒトウロガス
   トロン断片１μｇ〜１０ｍｇを含有する用量単位の形の
   特許請求の範囲第２項記載の剤。 ４、各用量単位がヒトウロガストロン又はヒトウロガス
   トロン断片２５μｇ〜１ｍｇを含有する特許請求の範囲
   第３項記載の剤。