JP3002213B2 - ペプチドおよびこのペプチドを含有する薬剤 - Google Patents
ペプチドおよびこのペプチドを含有する薬剤Info
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、ペプチドおよびこのペプチドを含有する薬
剤に関する。
剤に関する。
［従来の技術］ インターロイキン−１（以下、IL−１という）は、単
球、マクロファージ、Ｂ細胞、血管内皮細胞等を刺激す
ることにより、これらの細胞で生産される分子量が1400
0〜18000の糖蛋白である。このIL−１は、10-10mol以下
という極微量で、コンカナバリンＡ（以下、Con Aとい
う）共存下における胸腺細胞に対する増殖作用、胸腺細
胞のＴ細胞への分化、Ｔ細胞の分裂の増幅、Ｂ細胞にお
ける抗体産生の増強、多核白血球の増加、腺維芽細胞の
分裂の促進、肝細胞におけるアルブミン産生の抑制、特
定の癌細胞の増殖抑制、放射線防護効果、感染抵抗性の
回復等の多様な生理活性作用を示し、生体の恒常性維持
機構に深く関与している。
球、マクロファージ、Ｂ細胞、血管内皮細胞等を刺激す
ることにより、これらの細胞で生産される分子量が1400
0〜18000の糖蛋白である。このIL−１は、10-10mol以下
という極微量で、コンカナバリンＡ（以下、Con Aとい
う）共存下における胸腺細胞に対する増殖作用、胸腺細
胞のＴ細胞への分化、Ｔ細胞の分裂の増幅、Ｂ細胞にお
ける抗体産生の増強、多核白血球の増加、腺維芽細胞の
分裂の促進、肝細胞におけるアルブミン産生の抑制、特
定の癌細胞の増殖抑制、放射線防護効果、感染抵抗性の
回復等の多様な生理活性作用を示し、生体の恒常性維持
機構に深く関与している。
このため、IL−１を医薬品等として有効利用するため
の研究開発が種々進められており、量産技術について
は、遺伝子組み替え技術により大量生産の方法が確立さ
れている。
の研究開発が種々進められており、量産技術について
は、遺伝子組み替え技術により大量生産の方法が確立さ
れている。
しかしながら、IL−１は上述のように多様な生理活性
作用を有しており、かつ10-10mol以下という極微量でそ
の生理活性作用が発現するため、特定の疾患の治療剤と
して多量に用いた場合、その疾患の治療に必要な生理活
性作用以外でIL−１が有する生理活性作用が、IL−１の
多量投与により増大して、生体の恒常性の維持が図れな
くなるという危険性がある。
作用を有しており、かつ10-10mol以下という極微量でそ
の生理活性作用が発現するため、特定の疾患の治療剤と
して多量に用いた場合、その疾患の治療に必要な生理活
性作用以外でIL−１が有する生理活性作用が、IL−１の
多量投与により増大して、生体の恒常性の維持が図れな
くなるという危険性がある。
このため、上述の危険性を回避するための一法とし
て、IL−１が有する生理活性作用のうちの一部の活性を
有するIL−１様活性化物質を種々得、疾患の種類に応じ
てこのIL−１様活性物質を薬剤として使い分ける研究開
発が進められている。
て、IL−１が有する生理活性作用のうちの一部の活性を
有するIL−１様活性化物質を種々得、疾患の種類に応じ
てこのIL−１様活性物質を薬剤として使い分ける研究開
発が進められている。
このようなIL−１様活性化物質としては、例えば、唾
液腺ホルモンに含まれる58個のアミノ酸からなる分子量
9100の糖ペプチドが知られている［日本免疫学会総会、
学術集会記録18巻、568頁（1988年）、特公昭60−4200
号公報］。このIL−１様活性化物質は、ヒト以外の哺乳
動物（主として牛）の耳下腺由来の唾液腺ホルモンを原
料とした抽出物であり、白血球増加作用、血清カルシウ
ム低下作用といった生理活性作用を有する。
液腺ホルモンに含まれる58個のアミノ酸からなる分子量
9100の糖ペプチドが知られている［日本免疫学会総会、
学術集会記録18巻、568頁（1988年）、特公昭60−4200
号公報］。このIL−１様活性化物質は、ヒト以外の哺乳
動物（主として牛）の耳下腺由来の唾液腺ホルモンを原
料とした抽出物であり、白血球増加作用、血清カルシウ
ム低下作用といった生理活性作用を有する。
［発明が解決しようとする課題］ しかしながら、現在までに知られているIL−１様活性
物質の種類は少なく、適用可能な疾患の種類が限られる
ため、さらに多種のIL−１様活性物質およびこの活性物
質を用いた薬剤を開発することが望まれている。
物質の種類は少なく、適用可能な疾患の種類が限られる
ため、さらに多種のIL−１様活性物質およびこの活性物
質を用いた薬剤を開発することが望まれている。
また、ヒト以外の動物に由来するポリペプチドを原料
とするIL−１様活性化物質は、ヒトに対しても有用では
あるが、発熱、抗原性等の副作用をまねく場合もあると
いう問題点があり、このような副作用の発現を抑制する
ための一法として、できるだけアミノ酸配列が短いIL−
１様活性化物質およびこの活性物質を用いた薬剤を得る
ことが望まれている。
とするIL−１様活性化物質は、ヒトに対しても有用では
あるが、発熱、抗原性等の副作用をまねく場合もあると
いう問題点があり、このような副作用の発現を抑制する
ための一法として、できるだけアミノ酸配列が短いIL−
１様活性化物質およびこの活性物質を用いた薬剤を得る
ことが望まれている。
したがって本発明の目的は、アミノ酸配列が短く、か
つIL−１の有する生理活性作用の一部、すなち特異的抗
体産生増強作用およびCon A共存下における胸腺細胞に
対する増殖作用と同様の生理活性作用を有し、IL−１様
活性物質として利用可能なペプチドおよび、このペプチ
ドを含有するIL−１様活性を有する薬剤を提供すること
にある。
つIL−１の有する生理活性作用の一部、すなち特異的抗
体産生増強作用およびCon A共存下における胸腺細胞に
対する増殖作用と同様の生理活性作用を有し、IL−１様
活性物質として利用可能なペプチドおよび、このペプチ
ドを含有するIL−１様活性を有する薬剤を提供すること
にある。
［課題を解決するための手段］ 本発明は、上記目的を達成するためになされたもので
あり、本発明のペプチドは、下記式 で表されるアミノ酸配列からなることを特徴とするもの
である。
あり、本発明のペプチドは、下記式 で表されるアミノ酸配列からなることを特徴とするもの
である。
また本発明の薬剤は、上記式で表されるアミノ酸配列
からなるペプチドを含有し、特異的抗体産生増強作用お
よびCon A共存下における胸腺細胞に対する増殖作用を
有するものである。
からなるペプチドを含有し、特異的抗体産生増強作用お
よびCon A共存下における胸腺細胞に対する増殖作用を
有するものである。
なお、上記式においてThrはトレオニン、Aspはアスパ
ラギン酸、Alaはアラニン、Ileはイソロイシン、Valは
バリン、Leuはロイシン、Lysはリシンを表す。またこれ
らのアミノ酸は、全てＬ型である。
ラギン酸、Alaはアラニン、Ileはイソロイシン、Valは
バリン、Leuはロイシン、Lysはリシンを表す。またこれ
らのアミノ酸は、全てＬ型である。
以下、本発明を詳細に説明する。
まず、上記式で表されるアミノ酸配列を有する本発明
のペプチドについて説明すると、このペプチドは以下に
示す物理化学的性質を有する。
のペプチドについて説明すると、このペプチドは以下に
示す物理化学的性質を有する。
性 状：白色粉末 分子量:1088 溶解性：水（生理食塩水）に可溶、アルコールに不溶 pI :7.8 本発明のペプチドの製造方法は、特に限定されるもの
ではなく、Ｌ型アミノ酸を上記のように配列させる点に
留意する以外は、固相法や液相法等の化学合成法、合成
DNAを大腸菌等の微生物に組み込みこの微生物に生産さ
せる等の生化学的製法、人間を含む温血動物の耳下腺由
来の唾液腺ホルモンまたはそのサブユニットからの抽出
等の方法により得ることができる。
ではなく、Ｌ型アミノ酸を上記のように配列させる点に
留意する以外は、固相法や液相法等の化学合成法、合成
DNAを大腸菌等の微生物に組み込みこの微生物に生産さ
せる等の生化学的製法、人間を含む温血動物の耳下腺由
来の唾液腺ホルモンまたはそのサブユニットからの抽出
等の方法により得ることができる。
このようにして得られる本発明のペプチドは、IL−１
の有する生理活性作用の一部、すなわち特異的抗体産生
増強作用およびCon A共存下における胸腺細胞に対する
増殖作用と同様の生理活性作用を有している。またその
アミノ酸配列は、計10個のアミノ酸からなる短いもので
ある。
の有する生理活性作用の一部、すなわち特異的抗体産生
増強作用およびCon A共存下における胸腺細胞に対する
増殖作用と同様の生理活性作用を有している。またその
アミノ酸配列は、計10個のアミノ酸からなる短いもので
ある。
次に、本発明の薬剤について説明すると、この薬剤
は、上述の本発明のペプチドを含有するものである。
は、上述の本発明のペプチドを含有するものである。
本発明の薬剤は、人間その他の温血動物に対する治
療、措置のために、各種剤型に調製することができ、例
えば、経口剤（錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等）、
注射剤（溶剤、凍結乾燥剤等）、経皮剤（貼付剤、軟
膏）、経粘膜剤、埋込剤、点眼剤等とすることができ
る。製剤化にあたっては、塩化ナトリウム、グリシン、
乳糖、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、でんぷ
ん、デキストラン、ゼラチン等を補助剤として使用する
ことができる。また、治療学的に有用な他の薬剤を含有
させることもできる。
療、措置のために、各種剤型に調製することができ、例
えば、経口剤（錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等）、
注射剤（溶剤、凍結乾燥剤等）、経皮剤（貼付剤、軟
膏）、経粘膜剤、埋込剤、点眼剤等とすることができ
る。製剤化にあたっては、塩化ナトリウム、グリシン、
乳糖、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、でんぷ
ん、デキストラン、ゼラチン等を補助剤として使用する
ことができる。また、治療学的に有用な他の薬剤を含有
させることもできる。
本発明の薬剤における本発明のペプチドの含有量は、
その剤型により異なるが、一般に個体および半固体状態
の場合には５〜100重量％、また液体形態の場合には0.1
〜10重量％とすることが望ましい。
その剤型により異なるが、一般に個体および半固体状態
の場合には５〜100重量％、また液体形態の場合には0.1
〜10重量％とすることが望ましい。
本発明の薬剤の投与量は、対象とする人間をはじめと
する温血動物の種類、疾患の種類、症状の重軽、剤型、
医者の診断等により広範に変えることができるが、本発
明のペプチドの量で、一般に１日当り５μｇ〜10mg/k
g、好適には10μｇ〜4mg/kgとすることができる。しか
しながら、上記のように患者の症状の重軽、医者の診断
等に応じて、上記範囲の下限よりも少ない量または上限
よりも多い量を投与することももちろん可能である。ま
た本発明のIL−１様活性を有する薬剤は、上記投与量と
なるように、１日１回または数回に分けて投与すること
ができる。
する温血動物の種類、疾患の種類、症状の重軽、剤型、
医者の診断等により広範に変えることができるが、本発
明のペプチドの量で、一般に１日当り５μｇ〜10mg/k
g、好適には10μｇ〜4mg/kgとすることができる。しか
しながら、上記のように患者の症状の重軽、医者の診断
等に応じて、上記範囲の下限よりも少ない量または上限
よりも多い量を投与することももちろん可能である。ま
た本発明のIL−１様活性を有する薬剤は、上記投与量と
なるように、１日１回または数回に分けて投与すること
ができる。
［実施例］ 以下、本発明の実施例について説明する。
本発明のペプチドの製造実施例 クロルメチル化した２％ジビニルベンゼン架橋スチレ
ンポリマー樹脂（Cl含量1.16mmol eq/g）1gをベッセル
に入れ、Boc−Lys（ｚ）−OH（Bocは保護基であるｔ−
ブチルオキシカルボニル基を、またｚは保護基であるカ
ルボベンゾキシ基を示す）およびトリエチルアミンを上
記樹脂中のCl量に対して３当量加え、10mlのジメチルホ
ルムアミド（DMF）中35℃で30時間振盪して、樹脂にBoc
−Lys（ｚ）−Ｏ−を結合させた。この後、Boc−Lys−
Ｏ−が結合した樹脂を、DMF次いでエタノールで充分に
洗浄した後、減圧下に乾燥した。
ンポリマー樹脂（Cl含量1.16mmol eq/g）1gをベッセル
に入れ、Boc−Lys（ｚ）−OH（Bocは保護基であるｔ−
ブチルオキシカルボニル基を、またｚは保護基であるカ
ルボベンゾキシ基を示す）およびトリエチルアミンを上
記樹脂中のCl量に対して３当量加え、10mlのジメチルホ
ルムアミド（DMF）中35℃で30時間振盪して、樹脂にBoc
−Lys（ｚ）−Ｏ−を結合させた。この後、Boc−Lys−
Ｏ−が結合した樹脂を、DMF次いでエタノールで充分に
洗浄した後、減圧下に乾燥した。
なお、樹脂に結合したBoc−Lys（ｚ）−Ｏ−の定量を
行うため、Boc−Lys（ｚ）−Ｏ−が結合した乾燥後の樹
脂の一部（10mg）を取り、6N塩酸／ジオキサン溶液（12
N塩酸をジオキサンで２倍に希釈したもの）を用いて110
℃で24時間加水分解し、樹脂を取り除いた溶液をアミノ
酸分析に付したところ、加水分解前の樹脂には、Boc−L
ys（ｚ）−Ｏ−が0.23mmol eq/gの割合で結合していた
ことが確認された。
行うため、Boc−Lys（ｚ）−Ｏ−が結合した乾燥後の樹
脂の一部（10mg）を取り、6N塩酸／ジオキサン溶液（12
N塩酸をジオキサンで２倍に希釈したもの）を用いて110
℃で24時間加水分解し、樹脂を取り除いた溶液をアミノ
酸分析に付したところ、加水分解前の樹脂には、Boc−L
ys（ｚ）−Ｏ−が0.23mmol eq/gの割合で結合していた
ことが確認された。
この後、Boc−Lys（ｚ）−Ｏ−が結合した上述の樹脂
を用い、以下に示す手順により、順次、ペプチド結合に
より保護基を有するアミノ酸を結合させた。
を用い、以下に示す手順により、順次、ペプチド結合に
より保護基を有するアミノ酸を結合させた。
１）Boc−Lys（ｚ）−Ｏ−が結合した上述の樹脂を、10
mlのジクロメタンで10分間振盪して洗浄する。この操作
をさらに２回繰り返す。
mlのジクロメタンで10分間振盪して洗浄する。この操作
をさらに２回繰り返す。
２）上記１）で得た樹脂を、10mlの50％トリフルオロ酢
酸（TFA）／ジクロルメタン溶液を用いて１分間反応さ
せ、次いで同一の溶液を用いて５分間反応させて、保護
基であるBocを離脱させる。
酸（TFA）／ジクロルメタン溶液を用いて１分間反応さ
せ、次いで同一の溶液を用いて５分間反応させて、保護
基であるBocを離脱させる。
３）上記１）と同じ洗浄操作を行う。
４）10mlのDMFを用い、10分間振盪して洗浄する。この
操作をさらに２回繰り返す。
操作をさらに２回繰り返す。
５）10mlの10％トリエチルアミン/DMF溶液を用いて１分
間振盪し、次いで同一の溶液を用いて５分間振盪して、
中和する。
間振盪し、次いで同一の溶液を用いて５分間振盪して、
中和する。
６）上記５）で得た樹脂を、10mlのDMFで10分間振盪し
て洗浄する。この操作をさらに２回繰り返す。
て洗浄する。この操作をさらに２回繰り返す。
７）上記６）で得た樹脂を、10mlのジクロルメタンで10
分間振盪して洗浄する。この操作をさらに２回繰り返
す。
分間振盪して洗浄する。この操作をさらに２回繰り返
す。
８）10mlのジクロルメタンにBoc−Lys（ｚ）−に対して
３当量のBoc−Leu−OHと、Boc−Lys（ｚ）−に対して３
当量のジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）とを加
え、室温で３時間反応させる。
３当量のBoc−Leu−OHと、Boc−Lys（ｚ）−に対して３
当量のジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）とを加
え、室温で３時間反応させる。
９）上記１）〜８）に示した操作のうち、８）のBoc−L
eu−OHに代えて、順次、Boc−Leu−OH、Boc−Val−OH、
Boc−Ile−OH、Boc−Ala−OH、Boc−Thr（Bzl）−OH（B
zlは保護基であるベンジル基を示す）、Boc−Asp（OBz
l）−OH、Boc−Asp（OBzl）−OH、およびBoc−Thr（Bz
l）−OHを用いる以外は上記１）〜８）に示した操作を
繰り返す。ただし、Boc−Ile−OHとVal−Leu−Leu−Lys
（ｚ）−樹脂との反応は、一度反応液を洗い流した後、
再度反応を繰り返す。すなわち、上記８）の操作の後、
上記７）および８）の操作を再度行う。
eu−OHに代えて、順次、Boc−Leu−OH、Boc−Val−OH、
Boc−Ile−OH、Boc−Ala−OH、Boc−Thr（Bzl）−OH（B
zlは保護基であるベンジル基を示す）、Boc−Asp（OBz
l）−OH、Boc−Asp（OBzl）−OH、およびBoc−Thr（Bz
l）−OHを用いる以外は上記１）〜８）に示した操作を
繰り返す。ただし、Boc−Ile−OHとVal−Leu−Leu−Lys
（ｚ）−樹脂との反応は、一度反応液を洗い流した後、
再度反応を繰り返す。すなわち、上記８）の操作の後、
上記７）および８）の操作を再度行う。
10）この後、ペプチドが結合した樹脂をエタノールで洗
浄し、減圧下で乾燥する。
浄し、減圧下で乾燥する。
以上の手順により、Lys（ｚ）、Leu、Leu、Val、Il
e、Ala、Thr（Bzl）、Asp（OBzl）、Asp（OBzl）、Boc
−Thr（Bzl）が順次結合した樹脂を得た。このときの収
量は1.34gであった。
e、Ala、Thr（Bzl）、Asp（OBzl）、Asp（OBzl）、Boc
−Thr（Bzl）が順次結合した樹脂を得た。このときの収
量は1.34gであった。
このようにして得られた上記樹脂1gを、アニソール存
在下でフッ化水素により０℃で１時間処理して、全ての
保護基を切断するとともに樹脂からペプチドを離脱させ
た後、フッ化水素を減圧により留去した。樹脂をエーテ
ルで洗浄した後、1M酢酸を加えて目的物質を抽出し、抽
出液をセファデックスＧ−25（ファルマシア社製）を用
いたカラムクロマトグラフィー（2.5cmφ×100cm）に付
して1M酢酸で目的物質を溶離し、目的物質を含むフラク
ションを凍結乾燥した。このときの収量は130mgであっ
た。
在下でフッ化水素により０℃で１時間処理して、全ての
保護基を切断するとともに樹脂からペプチドを離脱させ
た後、フッ化水素を減圧により留去した。樹脂をエーテ
ルで洗浄した後、1M酢酸を加えて目的物質を抽出し、抽
出液をセファデックスＧ−25（ファルマシア社製）を用
いたカラムクロマトグラフィー（2.5cmφ×100cm）に付
して1M酢酸で目的物質を溶離し、目的物質を含むフラク
ションを凍結乾燥した。このときの収量は130mgであっ
た。
この後、分取様HPLC（高性能液体クロマトグラフィ
ー）カラム（商品名:YMC−DODS−５、（株）ワイエムシ
イ製）を用いて精製し、目的とするペプチド42mgを得
た。
ー）カラム（商品名:YMC−DODS−５、（株）ワイエムシ
イ製）を用いて精製し、目的とするペプチド42mgを得
た。
得られたペプチドの分析結果は、以下のとおりであ
る。
る。
・アミノ酸分析値 （6N塩酸により110℃で24時間加水分解。数値はAlaの
値を基準値とした相対値を表し、カッコ内の数値は理論
値を表す。） Lys:0.94（１）、Asp:2.06（２） Thr:1.88（２）、Ala:1 Val:0.53（１）、Ile:0.53（１） Leu:2.07（２） ・比旋光度 ▲［α］20 D▼ −14.3゜ （ｃ＝0.13、溶媒として0.1Mアンモニア水を使用） ・赤外吸収スペクトル（IR） 製剤例 本発明のペプチド500μｇと乳糖10mgとを含有する注
射剤（凍結乾燥剤）を、以下の要領で調製した。
値を基準値とした相対値を表し、カッコ内の数値は理論
値を表す。） Lys:0.94（１）、Asp:2.06（２） Thr:1.88（２）、Ala:1 Val:0.53（１）、Ile:0.53（１） Leu:2.07（２） ・比旋光度 ▲［α］20 D▼ −14.3゜ （ｃ＝0.13、溶媒として0.1Mアンモニア水を使用） ・赤外吸収スペクトル（IR） 製剤例 本発明のペプチド500μｇと乳糖10mgとを含有する注
射剤（凍結乾燥剤）を、以下の要領で調製した。
まず、注射用蒸溜水１に、本発明のペプチド500mg
および乳糖10gを加え、pHを9.0に調製しながら溶解させ
た。次いで、得られた溶液をミリポアフィルター（GS）
（ミリポア社製）で無菌濾過し、濾液をアンプルに1ml
ずつ分取した。この後、分取した濾液を凍結乾燥させる
ことにより、本発明のペプチド500μｇと乳糖10mgとを
含有する注射剤（凍結乾燥剤）を得た。
および乳糖10gを加え、pHを9.0に調製しながら溶解させ
た。次いで、得られた溶液をミリポアフィルター（GS）
（ミリポア社製）で無菌濾過し、濾液をアンプルに1ml
ずつ分取した。この後、分取した濾液を凍結乾燥させる
ことにより、本発明のペプチド500μｇと乳糖10mgとを
含有する注射剤（凍結乾燥剤）を得た。
この注射剤（凍結乾燥剤）は、使用時に注射用蒸溜水
を加えて全体を1mlとする。
を加えて全体を1mlとする。
Con A共存下における胸腺細胞に対する増殖作用評価試
験 C3H/HeJマウス胸腺細胞を、５％牛胎児血清を含有す
るRPMI1640培養液（商品名、日水製薬（株）製）で培養
し、培養液中の細胞数が５×105個/mlとなるように調整
した後、96穴のマイクロプレートを用い、４穴を１群と
し、その４群については以下の要領でCon A共存下にお
ける本発明のペプチドの胸腺細胞に対する増殖作用の評
価を行った。
験 C3H/HeJマウス胸腺細胞を、５％牛胎児血清を含有す
るRPMI1640培養液（商品名、日水製薬（株）製）で培養
し、培養液中の細胞数が５×105個/mlとなるように調整
した後、96穴のマイクロプレートを用い、４穴を１群と
し、その４群については以下の要領でCon A共存下にお
ける本発明のペプチドの胸腺細胞に対する増殖作用の評
価を行った。
ａ 上述のマウス胸腺細胞を入れたマイクロプレートの
１穴に、本発明のペプチドを10μg/mlの割合で、またCo
n Aを0.5μg/mlで添加し、５％CO2存在下、37℃で48時
間培養した後、3H−チミジン（0.8μCi/穴）を加えてさ
らに12時間培養した。この後、細胞をセルハーベスター
により回収し、複製により新たにDNA中に取り込まれた3
H−チミジンからの放射線を液体シンチレーションカウ
ンターにより計測することにより、胸腺細胞の増殖の度
合いを評価した。
１穴に、本発明のペプチドを10μg/mlの割合で、またCo
n Aを0.5μg/mlで添加し、５％CO2存在下、37℃で48時
間培養した後、3H−チミジン（0.8μCi/穴）を加えてさ
らに12時間培養した。この後、細胞をセルハーベスター
により回収し、複製により新たにDNA中に取り込まれた3
H−チミジンからの放射線を液体シンチレーションカウ
ンターにより計測することにより、胸腺細胞の増殖の度
合いを評価した。
ｂ 本発明のペプチドの添加割合を100μg/mlとした以
外は、上記ａと同様にした。
外は、上記ａと同様にした。
ｃ 本発明のペプチドの添加割合を250μg/mlとした以
外は、上記ａと同様にした。
外は、上記ａと同様にした。
ｄ 本発明のペプチドの添加割合を500μg/mlとした以
外は、上記ａと同様にした。
外は、上記ａと同様にした。
また、上記ａ〜ｄの評価の比較として、他の４群を用
いて、以下の要領で胸腺細胞の増殖の度合いを評価し
た。
いて、以下の要領で胸腺細胞の増殖の度合いを評価し
た。
ｅ Con Aを添加せずに本発明のペプチドのみを250μg/
mlの割合で添加した以外は、上述のａと同様にした。
mlの割合で添加した以外は、上述のａと同様にした。
ｆ Con Aを添加せずに本発明のペプチドのみを500μg/
mlの割合で添加した以外は、上述のａと同様にした。
mlの割合で添加した以外は、上述のａと同様にした。
ｇ 本発明のペプチドを添加せずにCon Aのみを0.5μg/
mlの割合で添加した以外は、上述のａと同様にした。
mlの割合で添加した以外は、上述のａと同様にした。
ｈ 本発明のペプチドおよびCon Aを添加しなかった以
外は、上述のａと同様にした。
外は、上述のａと同様にした。
以上ａ〜ｈにおける放射線の計測結果（シンチレーシ
ョンの計数結果）を、表−１に示す。
ョンの計数結果）を、表−１に示す。
表−１から明らかなように、本発明のペプチドとCon
Aとを共存させた場合には、本発明のペプチドおよびCon
Aを添加しない場合の概ね18〜46倍、Con Aのみを添加
した場合の概ね13〜15倍計測値が増大している。また、
本発明のペプチドのみを添加した場合には、計測値の増
大は認められなかった。
Aとを共存させた場合には、本発明のペプチドおよびCon
Aを添加しない場合の概ね18〜46倍、Con Aのみを添加
した場合の概ね13〜15倍計測値が増大している。また、
本発明のペプチドのみを添加した場合には、計測値の増
大は認められなかった。
計測値の増大は、複製により新たにDNA中に取り込ま
れた3H−チミジンの量が多いこと、すなわち胸腺細胞の
増殖数が多いことを意味していることから、本発明のペ
プチドはCon Aとの共存下において胸腺細胞に対する強
い増殖作用を示すというIL−１様活性を有していること
が確認された。
れた3H−チミジンの量が多いこと、すなわち胸腺細胞の
増殖数が多いことを意味していることから、本発明のペ
プチドはCon Aとの共存下において胸腺細胞に対する強
い増殖作用を示すというIL−１様活性を有していること
が確認された。
特異的抗体産生の増強作用 ６週齢の雌近交系C57BL/6マウスを一群８個体として
３群用意し、各個体に106個の羊赤血球を尾静脈より投
与した。
３群用意し、各個体に106個の羊赤血球を尾静脈より投
与した。
３群のうち１つの群は比較例群とし、羊赤血球の投与
から５日目に各個体の脾臓を摘出し、脾臓中の坑羊赤血
球抗体産生細胞の数をPFC法（プラークテスト）により
計数し、群としての平均値を求めた。
から５日目に各個体の脾臓を摘出し、脾臓中の坑羊赤血
球抗体産生細胞の数をPFC法（プラークテスト）により
計数し、群としての平均値を求めた。
また、残りの２つの群は試験群とし、以下の要領で坑
羊赤血球抗体産生細胞の数を計数し、群としての平均値
を求めた。
羊赤血球抗体産生細胞の数を計数し、群としての平均値
を求めた。
イ ２群のうちの１つの群の各個体には、羊赤血球の投
与と同時に本発明のペプチドを100μｇ投与し、他は比
較例群と同様にして、群としての平均値を求めた。
与と同時に本発明のペプチドを100μｇ投与し、他は比
較例群と同様にして、群としての平均値を求めた。
ロ 他の１群の各個体には、羊赤血球の投与と同時に本
発明のペプチドを500μｇ投与し、他は比較例群と同様
にして、群としての平均値を求めた。
発明のペプチドを500μｇ投与し、他は比較例群と同様
にして、群としての平均値を求めた。
これらの結果を、表−２に示す。
表−２から明らかなように、本発明のペプチドを500
μｇ投与した試験群では、坑羊赤血球抗体産生細胞の数
が比較例群の約12倍増加しており、本発明のペプチドは
強いアジュバント作用（免疫補助作用）を有しているこ
とが確認された。すなわち本発明のペプチドは、特異的
抗体産生増強作用というIL−１様活性を有していること
が確認された。
μｇ投与した試験群では、坑羊赤血球抗体産生細胞の数
が比較例群の約12倍増加しており、本発明のペプチドは
強いアジュバント作用（免疫補助作用）を有しているこ
とが確認された。すなわち本発明のペプチドは、特異的
抗体産生増強作用というIL−１様活性を有していること
が確認された。
［発明の効果］ 以上説明したように、本発明のペプチドはアミノ酸配
列が短く、かつIL−１の有する生理活性作用の一部、す
なわち特異的抗体産生増強作用およびCon A共存下にお
ける胸腺細胞に対する増殖作用と同様の生理活性作用を
有している。したがって本発明のペプチドは、副作用の
危険性が低いIL−１様活性物質として利用可能である。
列が短く、かつIL−１の有する生理活性作用の一部、す
なわち特異的抗体産生増強作用およびCon A共存下にお
ける胸腺細胞に対する増殖作用と同様の生理活性作用を
有している。したがって本発明のペプチドは、副作用の
危険性が低いIL−１様活性物質として利用可能である。
また、本発明のペプチドを含有する薬剤は、投与時、
副作用の危険性が低いので、ワクチン効果の増強、宿主
防衛能の増大、癌患者の化学療法時や放射線治療時の免
疫低下状態の改善等を図ることが可能となる。
副作用の危険性が低いので、ワクチン効果の増強、宿主
防衛能の増大、癌患者の化学療法時や放射線治療時の免
疫低下状態の改善等を図ることが可能となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭55−115856（ＪＰ，Ａ) Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏ ｌ．，Ｖｏｌ．72，Ｎｏ．３（1988) ｐ．383−９ 日本唾液腺学会誌，Ｖｏｌ．29 （1988）ｐ．35−36 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 7/06 A61K 38/08 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (2)
- 【請求項１】下記式 で表されるアミノ酸配列からなるペプチド。
- 【請求項２】請求項（１）記載のペプチドを含有するこ
とを特徴とする、ワクチン効果の増強剤、宿主防衛能の
増大剤又は癌患者の化学療法時や放射線療法時の免疫低
下状態の改善剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1309900A JP3002213B2 (ja) | 1989-11-29 | 1989-11-29 | ペプチドおよびこのペプチドを含有する薬剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1309900A JP3002213B2 (ja) | 1989-11-29 | 1989-11-29 | ペプチドおよびこのペプチドを含有する薬剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03170498A JPH03170498A (ja) | 1991-07-24 |
| JP3002213B2 true JP3002213B2 (ja) | 2000-01-24 |
Family
ID=17998680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1309900A Expired - Fee Related JP3002213B2 (ja) | 1989-11-29 | 1989-11-29 | ペプチドおよびこのペプチドを含有する薬剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3002213B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001521908A (ja) * | 1997-10-31 | 2001-11-13 | シストロン バイオテクノロジー インク． | ワクチンアジュバントとして有用な封入された免疫調節物質 |
| US6906170B1 (en) | 1998-08-21 | 2005-06-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Anti-inflammatory peptides derived from IL-2 and analogues thereof |
-
1989
- 1989-11-29 JP JP1309900A patent/JP3002213B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．７２，Ｎｏ．３（１９８８）ｐ．３８３−９ |
| 日本唾液腺学会誌，Ｖｏｌ．２９（１９８８）ｐ．３５−３６ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03170498A (ja) | 1991-07-24 |
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