JPH07501336A - 黒色ホアハウンド抽出物を含む化粧用または医薬用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は黒色ホアハウンド（野生にかはっか：ｈｏｒｅｈｏｕｎｄ）抽出物を含 む本質的に化粧用または医薬用組成物、特に皮膚用組成物に関するものであり、 特に皮膚または毛の色素沈着促進または脂肪細胞中のトリグリセライドの量を減 じることを意図したものであり、且つその製造法に関するものである。

本発明は、更に、化粧用または医薬用組成物の調製のために、特に色素沈着疾患 の治療または脂肪細胞中のトリグリセライドの量の減少を意図して黒色ホアハウ ンド抽出物を使用することに関する。

ベクタ（Ｂａｌｌｏｔａ）Ｘの植物は温暖地方で見付けられるラビエイタエ（Ｌ ａｂｉａｔａｅ）科に属する。挙げることのできる例としてはベクタ・ニグラ（ ｎｉｇｒａ）（ＩｊＮＮ、）またはベクタ・フェチダ０ｏｅｔｉｄａ）であり、 黒色ホアハウンドとしても知られている。これは特に未耕作の場所で、生は垣、 小道または土手のところで見付けられる普通の多年生の植物である。非常にいや な匂いがある。列挙できる他の例としては庭で栽培されるベクタ・ラナタ（ｌａ ｎａｔａ）および月経促進剤および抗ヒステリー剤として推奨されるパロタ・ス アベレンスまたは芳香性のベクタがある。

黒色ホアハウンドは強壮剤、健胃剤、ａ原剤、鎮静剤、浄血剤、利尿剤、駆虫剤 、消散剤および洗浄剤としての性質をもっていることが伝統的に知られている。

本発明は、黒色ホアハウンドの植物全体、および特に気中部分特に茎と葉からの 抽出物が価値のある生化学的特性をもっており、化粧および医薬の分野で使用で きるという発見に基づいている。発明者らは、特にこれらの抽出物が予期しない ことに皮膚または毛嚢にあるメラニン細胞、特に頭皮のメラニン細胞に対しメラ ニン形成刺激活性を有すること、したがって皮膚または毛の色素沈着を促進し、 そして特にメラニンの生合成を促進することにより皮膚および毛の色素沈着異常 を治療することが可能であることを観察した。この分野で、黒色ホアハウンドの 植物全体、および特に気中部分、特に茎と葉の抽出物が非常に良い結果をもたら している。

発明者らはまた、上記の黒色ホアハウンドの抽出物が脂肪細胞中のトリグリセラ イドの量を、特にその細胞内での合成を妨害することによって、減少させるのに 予期しない活性があることを観察した。このようにこれら抽出物は、蜂巣炎のよ うな生物内部に脂肪の蓄積が生じるのを予防することを可能にし、それによりこ の抽出物は化粧用または医薬用スリム化組成物の調製、とくに皮膚用スリム化組 成物の調製にとって特に有用である。

したがって本発明のひとつの目的は、したがって、特に皮膚の色素沈着を促進す ることおよび白髪の発生を予防しまたは遅らせることを意図して、新規な化粧用 または医薬用組成物、特に皮膚用組成物を提供するにあたって存在する新しい技 術的問題を解決することである。

本発明の別の目的は、皮膚または毛嚢中に存在するメラニン細胞、特に頭皮のメ ラニン細胞への優れたメラニン形成刺激活性を有する化粧用または医薬用組成物 の新規な処方を提供するに当たって存在する新しい技術的問題を解決することで ある。

本発明の別の目的は、何らの活性物質の単離（これは一般に長時間を要し費用が かかる）を必要とすることなくそれ自体で皮膚や毛嚢中に存在するメラニン細胞 に優れたメラニン形成刺激活性を有する、特に容易に得られる植物抽出物を提供 するに当たって存する新規な技術的問題への解答を提供することである。　本発 明のもう一つの目的は脂肪細胞中のトリグリセライドの量を減少し、それにより 、蜂巣炎のような生物内部の脂肪の蓄積を予防する活性のある化粧用または医薬 用組成物の新規な処方を提供するに当たって存在する新しい技術的問題を解決す ることである。

本発明のもう一つの目的は、何らの活性物質の単離（これは一般に長時間を要し 費用がかかる）を必要とすることな（それ自体で脂肪細胞中のトリグリセライド の量を減らす活性のある、特に容易に得られる植物抽出物を提供するに当たって 存する新規な技術的問題への解答を提供することである。

これらの新しい技術問題はすべて、産業規模で利用できる満足な方法として本発 明によって初めて解決される。

こうして、第１の特徴として、本発明は化粧用または医薬用組成物、特に皮膚用 組成物に関するもので、特に皮膚の色素沈着の促進、白髪の発生の予防または遅 延、脂肪細胞中のトリグリセライドの量の低減、および蜂巣炎のような生物中の 脂肪の蓄積の予防を意図したものであり、上記組成物は活性原料として化粧また １は医薬としての効果がある量の黒色ホアハウンドの抽出物を、必要なら化粧用 または医薬用として許容される賦形剤の中に含むものである。

本発明の説明および請求の範囲において、「化粧用または医薬用として効果的な 量」というのは、かなりの化粧的または医薬的効が観察されるに必要な最少量に 少なくとも等しい量を意味すると理解されるべきである。

黒色ホアハウンド抽出物はハロタ・ニグラ、ベクタ・ラナタおよびベクタ・スア ベレンスの抽出物から選ぶのが好ましい。

本発明の一つの特別の特徴として、黒色ホア／％’７ンド抽出物は植物全体の抽 出物および気中部分、特に不可欠なものとして茎および葉の抽出物から選ばれる 。

もう一つの特徴として、黒色ホアハウンドの上記抽出物は、例えば水、アルコー ル類好ましくはメタノール、エタノールまたはプロパツールのような炭素原子数 １から４のアルコール類、これらのアルコール類と水との混合物、クロロホルム 、ンクロロメタンのような炭素原子数１または２の塩素化溶媒および酢酸エチル のような、好ましくは炭素原子数３から６の有機エステルからなる群から選ばれ る溶媒による少なくともひとつの抽出段階を含む工程によって好都合に得られる 抽出物である。より一般的には、用いることのできる溶媒は、芳香族炭化水素類 、特にアリルベンゼン、トルエンまたはキシレン、／％ロゲン化された脂肪族ま たは芳香族炭化水素類、ノアルキルエーテル類、ジアルキルケトン類、アルカノ ール類、カルボン酸類およびそのエステル類、またはジメチルホルムアミド、ジ オキサン、エトラヒドロフランおよびジメチルスルフオキシド、または他の超臨 界二酸化炭素ガスのような有機溶媒類である。抽出剤に対する植物物質の割合は 広い範囲で選ぶことができるが、重量比で一般に１：５から１：２０．好ましく は約１，１０である。抽出は室温と抽出に使用する溶媒の沸点との間の温度で行 う。有効な抽出技術はいわゆるソックスレー抽出法である。

しかし、単に普通の大気圧下て２〜４時間還流抽出することも可能であり、その 前に植物物質を冷抽出溶媒中で２〜４時間ふやかしてもよい。

抽出完了後、抽出物を含む相を濾過し、次いで蒸発および／または減圧下で蒸発 乾固するかまたは冷結真空乾燥する。

これにより本発明の抽出物が得られる。

一般的には、化粧用または医薬用組成物の調製のためにこの発明で用いられる抽 出物の濃度は乾燥重量で表して、全組成物重量を基準にして領０００１から５％ の間、好ましくは００１から０．５％の間である。

この発明の化粧用または医薬用組成物、特に皮膚用組成物は種々の投与形態に適 した形態て調製できる。特に、皮膚の色素沈着を促進し、白髪の発生を予防しま たは遅延するために、皮膚または頭皮に局所投与する意図で、クリーム、ゲル、 ミルクまたはローンランのような形態で提供することができるこのようにこの発 明の化粧用または医薬用組成物、特に皮膚用組成物は化粧分野または医薬分野、 特に皮膚分野で、特に正常な色素沈着を回復するためにまたは色素沈着の向上を められる場合に種々の適用が可能である。

例えば、これらの組成物は日焼けを加速しまたは強めるための日光用製品（Ｓｕ ｎ　ｐｒｏｄｕｃ　ｔ）として使用することができ、しばしばめられる美容的利 点に加えて、表皮のメラニン含有量を増加させることにより、紫外線照射に対す る自己防御力を強化することができる。これら組成物はまた例えば皮膚をより日 焼けした外観に見せるクリームの形態で用いることもできるし、または白髪の発 生を予防および遅延するためにローンランの形態で使用してもよい。さらに、皮 膚用途ではこの発明の組成物は、そのものだＩ夛でまたは他の医薬と組み合わせ て、特にメラニン細胞機能障害の治療のために局部投与して、治療剤として用い ることができる。

メラニン細胞に及ぼす作用に関しては、本発明の抽出物が、人のメラニン細胞培 養において、メラニン細胞の分化を促進することができ、すなわちより成熟した またはより分化したメラノソームの生成を促進することができることを示すこと ができるようになってきている。

ひとつの特に有益な応用として、本発明の抽出物を培養中のメラニン細胞、特に 培養中のひとの正常なメラニン細胞を、その結果を利用できるに適した成熟特性 をそれらに付与するように処置する方法がある。

特に、その結果の利用としては、特に尋常性白斑のようなある種の色素沈着異常 を治療するための人へのメラニン細胞接種がある。

更に、本発明の化粧用または医薬用組成物、特に皮膚用組成物は、脂肪細胞中の トリグリセライドの量を減らすために、特に局所投与によって化粧分野まｔこ１ ま医薬分野、特に皮膚分野に種々適用することができる。特に、脂肪細胞１ごよ るトリグリセライドの合成は、蜂巣炎のような生物内の脂肪の蓄積と同歩調で進 むことが知られている。このように本発明の抽出物は、過剰の脂肪、特に蜂巣炎 を予防しまたは治療するために、化粧用または医薬用スリム化組成物、特↓二皮 膚用スリム化組成物としての特に価値ある利用がある。

好ましくは上記のスリム化用組成物には、キサンチン、特にカフェイン、蔦（ヘ デラ・ヘリックス（Ｈｅｄｅｒａ　Ｈｅ１ｌｉｘ））の抽出物まｔこ（まコレウ ス特にコレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓ　ｆｏｒｓｋｏｌ　ｉ　ｉ）の抽 出物のような他の活性物質も含まれる。

好ましくは、局所投与を意図しこ本発明の化粧用または医薬用組成物（オ受透用 ベクターとして作用する特定の賦形剤、即ち問題の皮膚構造中への浸透まｔコ（ ま拡散を促進する薬剤、例えば化粧用および皮膚用分野で普通に用Ｌ）られる薬 剤ｊ、と−緒に処方される。これら薬剤の例としてはエチルアルコールグリセロ ールまたはプロピレングリコール、オレイン酸、ラウロカブラム（Ｉａｕｒｏｃ ａｐｒａｍ）または植物性精油、特にメントールまた１まオイカＩＪブトール（ ｅｕｃａｌｙｐｔｏｌ）である。

ひとつの有益な実施態様として、より詳しくは皮膚まｔこ：は毛の色素沈着を意 図している本発明の化粧用または医薬用組成物には、またキサンチン、特１こ１ −メチルキサンチン、３−メチルキサンチン、３−イソブチルメチルキサンチン たはテオフィリンを、全組成物重量を基準にして好ましくは０　００１から２重 量％の濃度範囲で、特に好ましくは０．０１から０．５重量％の濃度範囲で含ま れる。

皮膚または毛の色素沈着を活性化するために特に応用されるもう一つの実施態様 では、本発明の化粧用または医薬用組成物にはチロシンまたはグルコースチロ／ ネートまたはＮ−マリルチロシンのようなチロシン誘導体が、好ましくは組成物 の全重量を基準にして０．００１％と１０％の間の重量濃度で含まれる。毛の色 素沈着を活性化するために特に応用される更にもうひとつの実施態様には、本発 明の化粧用または医薬用組成物には、また次のものをから選ばれる少なくともひ とつの他の活性物質が効果的な量で含まれる：ビタミン類、特にビタミンＢ類、 キニンまたその誘導体、ニコチン酸メチルのような発赤側類、ヨーロッパ特許第 Ａー２７２９２０号で定義されているにきび線維芽細胞（ｐａｐｉｌｌａ　ｆｉ ｂｒｏｂｌａｓｔ）培養の表面浮遊物、ケラチン加水分解物、亜鉛、セレンおよ び銅のような微量元素、プロゲステロン（ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ）、ンブロ テロンアセテート（ｓｙｐｒｏｔｅｒｏｎｅ　ａｃｅｔａｔｅ）およびミノキン ジル（ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ）のような５−α−レダクターゼ妨害剤、アゼライン 酸およびその誘導体類、１．４−メチル−４−アザステロイド、特に１７−βー Ｎ，Ｎージエチルカルバモイル−４−メチル−４−アザ−５−α−アントロスタ ン−３−オン、またはセレノア・レペンズ（Ｓｅｒｅｎｏａ　ｒｅｐｅｎｓ）の 抽出物。

なおもうひとつの実施態様として、本発明の化粧用または医薬用組成物は水和脂 質ラメラ相またはリポソームをも含んでおり、これは上で定義したベクタ・ニグ ラの抽出物を組み込んでいてもよいし組み込んでいな（でもよい。

第２の特徴として、本発明は更に、特に皮膚の色素沈着の促進、白髪発生の予防 と遅延、皮膚または毛の色素沈着異常の治療、脂肪細胞中のトリグリセライドの 量の低減および蜂巣炎のような脂肪の蓄積の予防を意図した化粧用または医薬用 組成物、特に皮膚用組成物の製造法に関し、この製造法には、上記で定義された ように、化粧的または医薬的に許容される賦形剤、ビヒクルまたはキャリア中へ の黒色ホアハウンドの少なくともひとつの抽出物の組み込みを含んでいる。

第３の特徴として、本発明は、上記て定義した黒色ホアｔｚｆ）ノド抽出物の、 特に皮膚の色素沈着の促進、白髪発生の予防と遅延、皮膚または毛の色素沈着異 常の治療、脂肪細胞中のトリグリセライドの量の低減および蜂巣炎のような脂肪 の蓄積の予防を意図した化粧用または医薬用組成物、特に皮膚用組成物の調製用 としての利用に関する。

更にもうひとつの特徴として、この発明は、色素沈着不足または色素沈着異常を 処置するための化粧的または治療的方法に関し、この方法は上記で定義されたよ うに、化粧的または医薬的に許容された賦形剤、ビヒクルまたはキャリア中への 黒色ホアハウンドの少なくともひとつの抽出物を、好ましくは人の皮膚または頭 皮の該当部分に組み込み、それによって皮膚または頭皮の正常な色素沈着を回復 することおよび／またはこの色素沈着を増加することを含んでいる。

もうひとつ特徴として、本発明は培養中のメラニン細胞、特に培養中の人のメラ ニン細胞の処理方法に関しており、それによりメラニン細胞に利用に適した成熟 性を付与するもので、この方法はメラニン細胞をそれが分化を起こすに充分な時 間、黒色ホアハウンドの抽出物の少なくともひとつを効果的な量含む培養媒体中 で培養することを含む。

もうひとつ特徴として、本発明は哺乳類、好ましくは人にメラニン細胞を接種す ることからなる化粧的または治療的処理方法に関するものであり、この方法は、 上で定義した黒色ホアハウンド抽出物の少な（ともひとつを、分化のために効果 的な量を存在させて、培養により分化を引き起こさせたメラニン細胞、特に人の メラニン細胞の接種を含んでいる。

もうひとつ特徴として、本発明は哺乳類、特に人の脂肪細胞中のトリグリセライ ドの量を低減するための化粧的または治療的処理方法に関するものであり、この 方法には、上で定義した黒色ホアハウンド抽出物の少なくともひとつを、化粧的 にまたは医薬的に許容できる賦形剤、ビヒクルまたはキャリア中に入れてもよ（ 、脂肪細胞中のトリグリセライドの量を低減するため、特に脂肪細胞によるトリ グリセライド合成を妨害するために有効な量を、予防または治療能力を有して、 治療されるべきところへ適用することを含んでいる。

本発明は脂肪過剰、特に蜂巣炎の予防および治療法に及んでおり、この方法は蜂 巣炎のような生物中の脂肪過剰で苦しんでいる哺乳類、特に人のその体の部分に 、上記の黒色ホアハウンド抽出物の少なくともひとつを、必要なら化粧的にまた は医薬的に許容し得る賦形剤、ビヒクルまたはキャリアにいれて、その過剰脂肪 を減するに効果的な量を適用することを含んでいる。

先の特徴のすべてにおいて、上記黒色ホアノ１ウンド抽出物は水和脂質ラメラ相 すなわちリポソームとともに用いることができ、これは上記抽出物を組み込んで いてもいなくてもよい。「組み込む」という表現は、水和脂質ラメラ相すなわち リポソーム中に抽出物が全体として組み込まれているケースおよびこの抽出物の ほんの一部だけが組み込まれているケースとを含んでいることを指摘しておく。

「脂質ラメラ相」という表現に於ける［脂質（Ｉｉｐｉｄｉｃ）Ｊという言葉は 一般に５個以上の炭素原子を含むいわゆる脂肪族炭化水素鎖を含む物質すべてを 意味しており、この物質は通常「脂質（ｌｉｐｉｄ）Ｊと呼ばれる。

この発明では、脂質ラメラ相すなわちリポソームを形成するために用いられる脂 質類は両親和性脂１ｉ［であり、即ちイオン性または非イオン性親水性基のどち らかと脂質親和性基とを有する分子からなり、これらの両親和性脂質類は、水相 ることかできる。

脂質類の中で特に次のものを取り上げることができよう　リン脂質類、リンアミ ノ詣質類、グリコリピド類、ポリオキシエチレン付加脂肪族アルコール類および ポリオキシエチレンを付加していてもよいポリオールエステル類。このような物 質は例えば、卵または大豆レシチン、フオスファテイジルセリン（ｐｈｏｓｐｈ ａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ）、スフィンゴミエリン（ｓｐｈｎｇｏｍｙｅ　］　 ｉｎ）、セレブロシド（ｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄｅ）またはオキシエチレン付加ポ リグリセロールステアレートからなる。

この発明にとっては、両親和性脂質の少な（ともひとつおよびコレステロールま たはβ−ノドステロールのようなステロールの如き疎水性脂質の少なくともひと つからなる脂質類の混合物を使用することが好ましい。疎水性脂質の量は、モル 表現で、一般に両親和性脂質の量を越えてはならず、好ましくはその１／２を越 えてはならない。

この発明に使用される化合物類またはこれらの化合物を含む抽出物類は、例えば ヨーロッパ特許第８１−００８７９９３号（＝米国特許第Ａ　４．５０８．７０ ３号明細書）、そしてもし適当ならばヨーロッパ特許第Ｂ　ｌ−０１０７５５９ 号（＝米国特許第Ａ　４．６２１．０２３号明細書）と組み合わせてそれらに記 載された既知の調製法によって、水和脂質ラメラ相にすなわちリポソームに組み 込むことができる。

この発明の他の目的、特徴および利点は、いくつかの実施例での次の実験記述か らはっきりと明らかになるであろう。実施例では説明のために簡略に記載されて いる。

実際、決して本発明は記載され例示されている実施態様に制限されるものではな い。したがって、例えば、本発明はまた眉毛またはまつげが白髪になるのを予防 または遅らせることを目的とした化粧用又は医薬用組成物にも及んでいる。

百分率は、特に断らない限り、実施例では重量で表しである。

実施例　１ 黒色ホアハウノドのメタノール抽出物の調製不可欠なものとしての茎および葉か らなるベクタ・ニグラの気中部分５００ｇを、約５リツトルのメタノールにより 、還流下で３時間処理する。

メタノール抽出物を濾過し、濾液を減圧下で蒸発して冷結真空乾燥にかけ、ベク タ・ニグラのメタノール抽出物を得る。これを抽出巻重、と呼ぶ。

実施例　２ 黒色ホアハウノドの酢酸エチル抽出物の調製使用した溶媒が酢酸エチルである点 を除いて、実施例１に記載した方法を行った；これによりベクタ・ニグラの酢酸 エチル抽出物である抽出物■２を得る。

実施例　３ 水和脂質ラメラ相すなわちリポソームへの黒色ホアハウノド植物全体抽出物の組 み込み 植物全体を用いる点を除いては実施例１に記載の方法にしたがって得られた黒色 ホアハウノド植物全体抽出物、抽出物Ｉ３を、以下の調製技術によって水和脂質 ラメラ相すなわちリポソームに組み込む。

つぎのちのを計量する・ 一大豆し／チン二１８ｇ −β−７トステロール　０．２ｇ −冷結真空乾燥したベクタ・ニグラ抽出物ｒ、：０．０３ｇこれらの成分を２５ ｍ１のノクロロメタンと１０ｍ１のメタノールからなる混合物中に溶解する。

得られる混合物を減圧下でロータリーエバポレーター上で６０℃で蒸発させる。

戸られる脂質の薄膜を取り出し、蒸留水に入れて全量５０ｇとして室温で２時間 撹拌して分散する。

得られる脂質小胞の懸濁物を、電力１５０Ｗ、４℃で１０分間超音波処理して均 質化する。

このようにして得られるリポソームの平均の大きさは約１４０ｎｍである。

好ましいひとつの応用として、この懸濁物を通常の方法で別に調製した１、２５ ％カーボボール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）９４０　（登録商標）ゲル５０ｇと混合し てゲル化する。これにより、全懸濁物重量の約０．０３０％の濃度になる黒色ホ アハウノド抽出物を少なくとも部分的にカプセルで包んでいるリポソームのゲル 化した懸燭物約１００ｇが得られる。

このゲルは「組成物１ｚｊとし、そのままは本発明の枠内で用いることができる 。

皿当たり１０’個の細胞を植え付けたＳ９１ねずみ科のメラニン細胞を、非不可 欠成分であるアミノ酸類を補充し、また１％の牛の胎児血清とＯ，ＯＳμｇ／ｍ ｌのマイトマイシンＣを含むＥ　Ｍ　Ｅ　Ｍ中で培養する。

接種ｌ＆２４時間して、培養媒体をマイトマイシンＣを含まず、１％の牛の胎児 血清と、そして適当なところで、約４０ｍｇ／ｍＩの濃度でＤＭＳＯに溶解した 試験用生成物とを補充したＥＭＥＭのみを含む新鮮な媒体ととり換える。

接種６日後、細胞を取り出し、遠心分離して単離し、細胞残留物を回収し、最終 溶液と実質的に同じミリリットル当たりの細胞重量の濃度となるに充分な割合で ０．５Ｎ水酸化ナトリウム溶液に溶解する。

得られる溶液の４０５ｎｍの波長の光学密度をスペクトロメーターで読み取り、 濃度既知のメラニン溶液の光学密度と比較して形成されたメラニンの量を評価す ることができる。

また細胞数を計数し、細胞１０６個あたりの形成メラニン量を計算する。

ベクタ・ニグラ抽出物１１とＩ２を種々の濃度（μｇ／ｍｌ）で測定し、下記の 表Ｉおよび■に示した。

本発明のアッセイで用いたメラニン細胞がβ−ＭＳＨ（メラニン細胞刺激ホルモ ン）に対してポンチイブの応答をすることを確認するために、別の実験で、等価 な試験を行った。

この試験用生成物のメラニン形成刺激効率Ｅは次の式により計算されるここで量 ｑは１０６個の細胞当たりに形成されたメラニンの量をあられしｑｌ−試験生成 物を入れた培養 Ｑｏ”生成物を入れない比較用培養 ａ）実施例１の抽出物１１、または ｂ）実施例２の抽出物Ｉ２ に関して、上記の式によって計算した、抽出物の異なる濃度で試験した効率Ｅを 下記の表１および■にそれぞれ示している。

アッセイはひとつの濃度につきおよびひとつの生成物につき３個の皿で行い、表 １および■中の、皿当たりの細胞の数および（１０６個の細胞当たりの）メラニ ンの量（μｇ）は平均値である。

本発明の生成物で処理した培養結果と比較培養の結果とを、スチューデント（Ｓ ｔｕｄｅｎｔ）を試験による統計的評価により比較している。

Ｓ＝５％で有意 Ｎ５＝５％有意差なし 表Ｉ ベクタ・ニグラ（気中部分）の抽出巻重、に関する試験抽出物Ｉ、細胞の数　メ ラニン　効率Ｅ　有意差の濃度　士標準偏差　ｔ ２．５　７０±１１　６２±２　＋１６　３１０　６７±５　７２±３　＋３５ 　Ｓ上の表１および■は、この発明の抽出物は、非細胞毒投与では、相当程度に メラニンの生成を刺激することを示しており、全体として当業者に予期できない 結果を表している。

別の実験では、本発明の黒色ホアハウノドの抽出物は、メラニン細胞内でケラチ ン細胞に転換することのできる非常に多くの成熟メラノソームを形成しており、 メラニン細胞の分化を促進することも実証した。

実施例　５ 培養下にあるメラニン細胞の分化に及ぼす本発明生成物の活性の実例皮膚表皮の 色素沈着の過程には表皮の基底層にあるメラニン細胞の分化を伴うことが知られ ている。この分化はメラノソーム（メラニンを蓄え輸送するための細胞オルガネ ラ）内部での色素、即ちメラニンの蓄積に相当して一般に４つの異なる段階（Ｉ から■）からなっている。段階■（最も強く着色している）は色素をもったメラ ノソームが充満している最終段階であり、したがってこれらメラノソームは６ｇ していると考えられる。またメラノソーム中に含まれるメラニンが、樹状に伸び た状懸を紅白して表皮中のより上にあるケラチン細胞へ移送されるのがこの段階 であることも知られている。

アッセイの記述 ５０才の女性の顔面整形の過程で通常の方法で単離した通常の人のメラニン細胞 を１０％（体積／体積）の牛の胎児血清を含み、通常の成長ファクターを補充し た完全Ｍ１９９培養媒体（ＧＩＢＣＯ）中に、日数Ｄ＝Ｏで入れる。

３日目、Ｄ＝３に、ＤＭＳＯに溶解した実施例２の黒色ホアハウノドの抽出物Ｉ ２（酢酸エチル抽出物）１０μｇ／ｍｌを培養媒体に加える。

６日目、Ｄ＝６に、媒体を、やはり抽出物Ｉ２を１０μｇ／ｍｌ含む同じ組成物 の媒体と取り代える。

９日目、Ｄ＝９に、細胞を、ＬＡＤＤ社（アメリカ、バーモント州）から入手で きるＥＰＯＮ８１２（登録商標）樹脂（グリセロールングリシジルおよびトリグ リンジルエーテル）中に包埋する。それから樹脂の塊をミクロトームにより超薄 切片に裁断する。このようにして細胞の超構造を透過型電子顕微鏡で観察するこ とができる。

平行して、メラニン細胞の比較用培養を同じ原料を用い、同じ条件で行った、但 し、３日目以降は抽出物は培養に加えず、ＤＭＳＯだけを同じ濃度で、即ち０゜ １体積％だけ加えた。

電子顕微鏡観察により、比較用培養では主として段階ＩとＨのメラノソームの存 在だけが見いだされた。更に、メラニン細胞内では、網内系およびゴルジ装置は ほとんど活性を示さない。

これに対して、処理培養の方は細胞の多くで段階ｍおよび■に達するメラノソー ムが観察された。細胞の網内系およびゴルジ装置ｉｔ（チロシナーゼ合成とグリ コ／ル化およびメラニン−分泌小嚢の形成が起こる場所である）は非常に発達し 、したがって非常に活性である。これらの特性は、特にメラニン細胞が段階ｍと ■の多数の成熟メラノソームを有している限り、いずれも分化したメラニン細胞 の存在を示している。

このように、黒色ホアハウノド抽出物の作用機構の証明により、一方で皮膚の色 素沈着を促進するという本発明の組成物の活性を説明することが可能になり、他 方、より成熟度の高いメラノソームをもったより高度に分化したメラニン細胞の 培養を行うことが可能になる、そしてこれらのメラニン細胞を尋常性白斑のよう なある種の色素沈着疾患を治療するために移植して用いることができる。

実施例　６ 脂肪細胞中のトリグリセライドの蓄積に及ぼす本発明生成物の妨害活性の証明生 物の重要なエネルギー源を構成するトリグリセライド類は、腸壁、肝臓および脂 肪組織中でグリセロールと脂肪酸とから作られる。

したがって生物内にある過剰の脂肪は脂肪細胞内のトリグリセライドの蓄積と直 接関連している。

更に、培養中のフィブロブラストのある種のライン、特に３Ｔ３−Ｌｌラインは 培養条件が許容される時には脂肪細胞へ分化することができる（例えば、Ｔｅｒ ｕｏ　Ｋａｗａｄａら著、［コンパラティブ・バイオケミストリー・アンド・フ ィジオロジー（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　 Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ）　Ｊ第９６Ａ巻、第２号、第３２３〜３２６頁（１９９ ０年）に記載された技術にょる）。

したがって脂肪細胞中のトリグリセライドの蓄積に及ぼす本発明の生成物の妨害 活性を示すために、その脂肪細胞への分化が可能な条件下で、１４Ｃラベルした グルコースを存在させ、且つ本発明の生成物のある場合とない場合とで、このラ インの培養を行った。

トリグリセライドを合成するために細胞により使用されるグリセロールは間接的 にグルコースの解糖から生じる。したがって、実施する試験条件下で、脂肪細胞 によるトリグリセライドの蓄積を評価するためには実験の終わりに抽出されたト リグリセライドの放射線活性を測定することで十分であろう。

Ｄ＝０で、牛の胎児血清１０％（体積／体積）を含む完全Ｅ　Ｍ　Ｅ　Ｍからな る培養媒体２ｍｌを含む直径３５ｍｍのベトリ皿に、皿当たり２Ｘ１０５細胞の ３Ｔ３−Ｌ１ラインを接種する（ＡＴＣＣ社から入手可能、参考ＣＣＬ　９２− １）。

Ｄ＝１で、培養媒体を、Ｄ＝０て用いたものに、分化用薬剤、即ち１００μｇ／ ｍｌのイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）および０．１ｇｇ／ｍｌのデキ サメタソーン、即ちマイトマイシンＣおよび０５μＣｉ／ｍｌの濃度で１４　Ｃ −グルコースを加えたものと取り換える。またこの培養媒体は比較培養に相当す る媒体を除いて試験生成物を含んでいる。

Ｄ＝７で、培養物中に存在するトリグリセライドをヘプタンで抽出する。これは 、まずトリプシン溶液によって通常の方法で皿から培養中の細胞を取り出すこと から行う。得られた細胞の懸濁液を充分量のドールの試薬（ドール・ヴイ・ピ（ Ｄｏ　１　ｅ　Ｖ、　Ｐ、）ら著、「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ ストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ａｆ　Ｂｊａｌａｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）　Ｊ第２３５巻、第９号、第２５９５頁（１９６０年））を加えてライス（Ｉ ｙｚｅ）する。次いで、一方は水相で他方はへブタンからなる有機相である２相 を得るために、これに水そしてヘプタンを加える。培養物中に存在するトリグリ セライドを含むヘプタン相を集め、その放射線活性を液体／ンチレーンヨン、例 えばコントロン・ベータ（ＫＯＩＪＴＲＯＮ　ＢＥＴ＾）■（登録商標）タイプ の装置によって測定する。

したがって、比較用媒体の測定と比較して、本発明の生成物を含む培養によって 得られる抽出物の放射線活性を測定することによりトリグリセライドの蓄積の妨 害を評価することが可能になり、放射線活性グルコース（ヘプタンで抽出されな い）からトリグリセライドが形成されていない。

このように本発明の生成物の活性Ａは次式によって計算されるＲ、−Ｒ。

Ａ＝−Ｘ１００ Ｒ。

ここで、 Ｒ７は、ｃｐｍ（カウント・パ町ミニツッ）で表した、比較培養物のトリグリセ ライド抽出物の放射線活性であり、 心は、ｃｐｍで表した、本発明の生成物の存在下での培養物の放射線活性である 。

本アッセイの実験材料を形成する本発明の生成物は実施例１によって得られる黒 色ホアハウノドのメタノール抽出物■１からなる。

次の表■は培養に於けるふたつの異なる濃度での抽出物Ｉ、の妨害活性の結果を 示している。

表■ 有意差はｐ＜０．０５でのスチューデントを試験により計算した。

本発明の抽出物が存在することにより、実質的に且つ強く培養中の脂肪細胞中の トリグリセライドの蓄積を妨害することをこの表ははっきりと示している。

したがって、過剰の脂肪、特に蜂巣炎を予防しまたは治療するために、化粧用ま たは医薬用組成物、特に皮膚用組成物中で、活性成分として本発明の生成物を有 益に用いることができる。

化粧用または医薬用組成物、特に皮膚用組成物の種々の処方例を以下に示す。

−抽出物　ＩＩ（実施例１）　０．１’５ｇ−プロピレングリコール　５ｇ −クレモフォア（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）　ＲＨ４０（登録商標）　Ｉｇ−エタノ ール　３０　ｇ −香料を含めた水性賦形剤　全量　１００　ｇこのローションは、充分な色素沈 着効果を出すために、１日２回１ｍｌの割合で６ケ月間、髪に付ける。

ゲルは次のふたつの相ＡとＢから調製する：１）相Ａ −抽出物　１１（実施例２）　Ｑ、Ｉｇ−マリルチロシン（ｍａｌｙｌｔｙｒｏ ｓｉｎｅ）　２　ｇ−プロピレングリコール　４ｇ −グリセロール　０．５ｇ ＝クレモフォア（Ｃｒｅ＋５ｏｐｈｏｒ）　ＲＨ４０（登録商標）　Ｉｇ−エタ ノール　２５　ｇ −香料を含めた水性賦形剤　全量　５０　ｇ２）相Ｂ −１，２５％カーボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）　９４０　（登録商標）ゲル０ ｇ 相Ａを徐々に相Ｂに加え、分散が完了するまで両者をプロペラ撹拌機で混合する 。

こうして皮膚の日焼は促進用のゲルを得、日に当たる前または日に当たっている 間皮膚に付けることができる。

一本発明の黒色ホアハウノド抽出物（実施例１）　Ｏ，，１ｇ−９６％アルコー ル　３２　ｇ −カーポポール９４１　（登録商標）　２．５　ｇ−防腐剤の入った水性賦形剤 　全量　１００　ｇ黒色ホアハウノド抽出物をまずアルコールに溶解し、その後 全体をカーボボールを含むゲル化した賦形剤に組み込む。

こうしてスリム化用組成物を得、それを治療すべき部位に付けることができる。

フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁−内整理番号Ａ　６１　Ｋ　７／４ ８　９０５１−４Ｃ（７２）発明者　デュマ、マルタ フランス国９２７００コロンブス、リュ・ドウ・ランドウストリ媚 Ｉ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．特に皮膚の色素沈着の促進、白髪の発生の予防と遅延、脂肪細胞中のトリグ リセライドの量の低減および蜂巣炎のような生物中の脂肪の蓄積の防止を目的と し、活性原料として化粧用または医薬用として効果的な量の黒色ホアハウンド抽 出物、および任意に化粧用または医薬用に許容し得る賦形剤を含んでなる化粧用 または医薬用組成物、特に皮膚用組成物。 ２．黒色ホアハウンド抽出物がパロタ・ニグラ、パロタ・ラナタおよびパロタ・ スアベレンスの抽出物から選ばれる請求項１に記載の組成物。 ３．黒色ホアハウンド抽出物が植物全体の抽出物および気中部分、そして不可欠 なものとして特に茎及び葉の抽出物から選ばれる請求項１または２に記載の組成 物。 ４，上記黒色ホアハウンドの抽出物が、例えば、水、好ましくは炭素原子を１か ら４個含むアルコール類、例えばメタノール、エタノールまたはプロパノール、 水とこれらアルコール類との混合物、炭素原子を１または２個含む塩素化溶媒、 例えばクロロホルムまたはジクロロメタン、および好ましくは炭素原子を３から ６個含む有機エステル類、例えば酢酸エチルからなる群から選ばれる溶媒による 少なくともひとつの抽出段階を含む方法によって好都合に得られる抽出物である 請求項１から３のいずれかひとつに記載の組成物。 ５．上記黒色ホアハウンドの抽出物の濃度が、乾燥重量で表して、組成物の全重 量を基準にして０．０００１と５％の間、好ましくは０．０１と０．５％の間で ある請求項１から４のいずれかひとつに記載の組成物。 ６．より詳しくは、皮膚または毛の色素沈着を目的とし、キサンチン、特に１− メチルキサンチン、３−メチルキサンチン、３−イソブチルメチルキサンチンま たはテオフィリンを、好ましくは組成物の全重量を基準にして０．００１から２ ％、特に好ましくは０．０１から０．５％の重量濃度で含む先行請求項のいずれ かひとつに記載の組成物。 ７．特に皮膚または毛の色素沈着を促進するために、チロシンまたはその誘導体 、例えばグルコースチロシネートまたはＮ−マリルチロシンをも、好ましくは組 成物の全重量を基準にして０．００１から１０％の重量濃度で含む先行請求項の いずれかひとつに記載の組成物。 ８．ビタミン類、特にビタミンＢ類、キニンまたはその誘導体類、ニコチン酸メ チルのような発赤剤、にきび腺維芽細胞培養の表面浮遊物、ケラテン加水分解物 、亜鉛、セレンおよび胴のような微量元素、プロゲステロン（ｐｒｏｇｅｓｔｅ ｒｏｎｅ）、シプロテロンアセテート（ｓｙｐｒｏｔｅｒｏｎｅ　ａｃｅｔａｔ ｅ）、ミノキシジル（ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ）のような５−α−レダクターゼ（５ −α−ｒｅｄｕｃｔａｓｅ）、アゼライン酸およびその誘平体、１，４−メチル −４−アザステロイド、とくに１７−β−Ｎ，Ｎ−ジエチルカルパモイル−４− メチル−４−アザ−５−α−アンドロスタン−３−オン、または他のセレノアレ ベンズ（Ｓｅｒｅｎｏａ　ｒｅｐｅｎｓ）から選ばれる少なくともひとつの他の 活性物質もを有効な濃度で含む請求項１から７のいずれかひとつに記載の組成物 。 ９．キサンチン、特にカフェイン、蔦（Ｈｅｄｅｒａ　Ｈｅｌｌｉｘ）抽出物ま たはコレウス（Ｃｏｌｅｕｓ）特にコレウス・フォルスコリ（Ｃｏｌｅｕｓｆｏ ｒｓｋｏｈｌｉｉ）抽出物から選ばれる少なくともひとつの他の活性物質もを有 効な濃度含む請求項１から８のいずれかひとつに記載の組成物。 １０．局所投与を目的とする場合に、浸透ベクターとして作用する特定の賦形剤 、例えば問題となっている皮膚構造中に浸透および拡散を促進する化粧および皮 膚科の分野で使用されている試薬、例えばエチルアルコール、グリコール、特に グリセロールまたはプロピレングリコール、オレイン酸、ラウロカプラム（ｌａ ｕｒｏｃａｐｒａｍ）または植物性精油、特にメントールまたはオイカリプトー ル（ｅｕｃａＩｙｐｔｏｌ）を含む先行請求項のいずれかひとつに記載の組成物 。 １１．皮膚または頭皮への局所投与を目的とした形態、特にクリーム、ゲル、ミ ルクまたはローションの形態である先行請求項のいずれかひとつに記載の組成物 。 １２．水和脂質ラメラ相すなわちリボソームを含み、それらが上記パロタ・ニグ ラの抽出物を組み込んでいてもいなくてもよい先行請求項のいずれかひとつに記 載の組成物。 １３．特に皮膚の色素沈着の促進、白髪の発生の予防と遅延、皮膚または毛の色 素沈着疾患の治療、脂肪細胞中のトリグリセライドの量の低減および蜂巣炎のよ うな生物中の脂肪の蓄積の防止を目的とし、化粧用または医薬用に許容し得る賦 形剤、ビヒクルまたはキャリア中に特に上記請求項２または３で定義した黒色ホ アハウンド抽出物の少なくともひとつを組み込むことを含む化粧用または医薬用 組成物、特に皮膚用組成物の製造法。 １４．特に皮層の色素沈着の促進、白髪の発生の予防と遅延、皮膚または毛の色 素沈着疾患の治療、脂肪細胞中のトリグリセライドの量の低減および蜂巣炎のよ うな生物中の脂肪の蓄積の防止を目的とした化粧用または医薬用組成物、特に皮 膚用組成物の製造用に、特に請求項２から５で定義した黒色ホアハウンド抽出物 の利用。 １５．皮膚または毛の色素沈着を正常に回復しおよび／またはこの色素沈着を増 すために、特に請求項２から５で定義した黒色ホアハウンド抽出物の少なくとも ひとつの効果的な量を、任意に化粧用または医薬用として許容できる賦形剤、ビ ヒクルまたはキャリアの中へ組み込んでもよく、好ましくは人の皮膚または頭皮 の影響を受けている部分に、適用することを含む色素沈着不足または色素沈着疾 患を処理するための化粧または治療方法。 １６．メラニン細胞が利用に適した成熟した特性を備えるように、特に請求項２ から５で定義した黒色ホアハウンド抽出物の少なくともひとつを効果的な量を含 む培養媒体中で、メラニン細胞が分化するに充分な時間メラニン細胞を培養する ことを含む、培養中のメラニン細胞、特に人のメラニン細胞の処理方法。 １７．特に請求項２から５で定義した黒色ホアハウンド抽出物の少なくともひと つを、分化に好適な量を存在させて培養分化を引き起こしたメラニン細胞、特に 人のメラニン細胞を移植することを含む、哺乳類、好ましくは人にメラニン細胞 を移植する化粧的または治療的処置方法。 １８．特にこの細胞によるトリグリセライドの合成を妨害するために、特に請求 項２から５で定義した黒色ホアハウンド抽出物の少なくともひとつの効果的な量 を、任意に化粧用または医薬用許容し得る賦形剤、ビヒクルまたはキャリア中に 組み込んでもよく、予防または治療の能力内で、治療されるべき部位に使用する ことを含む、哺乳類、特に人の脂肪細胞内のトリグリセライドの量を低減するた めの化粧的または治療的処置方法。 １９．特に請求項２から５で定義した黒色ホアハウンド抽出物の少なくともひと つを過剰脂肪を減少するに効果的な量を、任意に化粧用または医薬用許容し得る 賦形剤、ビヒクルまたはキャリア中に組み込んでもよく、蜂巣炎のような、生物 中の過剰脂肪で苦しんでいる哺乳類、特に人の体の部分に適用することを含む、 過剰脂肪特に蜂巣炎の予防および治療方法。