JPH07236492A - 油脂の製造方法及びそのために使用する微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 炭水化物から油脂を菌体外に高収率で発酵生
産させる方法及びそのための微生物の提供。 【構成】 トリコスポロン属に属し、炭水化物の存在下
に培養することにより油脂を菌体外に生産する能力を有
する微生物を炭水化物を含有する培地に培養して、培養
液中菌体外に油脂を生成蓄積せしめ、該培養液から生成
蓄積した油脂を採取することを特徴とする油脂の製造方
法、及びそのために使用するトリコスポロン・スピーシ
ーズＳＨ４５Ｙ−Ｌ１２。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は発酵法により培養液中菌
体外に油脂を高収率で生成蓄積せしめる油脂の製造方法
に関する。また本発明は該方法のために使用し得る高い
油脂生産能力を有する微生物に関する。

【０００２】

【従来の技術】発酵法による油脂の菌体内製造法として
はオイディウム（Oidium) 属、エンドミセス (Endomyce
s)属、カンディダ (Candida)属、ロドトルラ(Rhodotoru
la) 属、クリプトコッカス (Cryptococcus) 属またはロ
ドスポリディウム (Rhodosporidium) 属に属する微生物
によるカカオバター代用脂の製造法（特開昭51-12386
8); エンドミセス属、ロドトルラ属またはリポミセス
（Lipomyces)属に属する微生物によるカカオバター代用
脂の製造法（特開昭52- 122672) ; サッカロミセス（Sa
ccharomyces)属に属する微生物によるパルミトレイン酸
含有量の高い脂質成分（トリグリセリドを含む) の製造
法（特開昭63- 287491) ; モルティエレラ (Mortierell
a)属に属する微生物によるγ−リノレン酸含有量の高い
脂質（油脂を含む）の製造法（特開昭59-130191) ; 及
びクレッケラ (Kloeckera)属に属する微生物によるパル
ミトレイン酸含有量の高い脂質（中性脂質を含む）の製
造法( 特開平 1-108991)が知られている。油脂の菌体内
製造法としてはさらにトリコスポロン(Trychosporon)属
に属する微生物による方法、すなわちホエイからの製法
〔N.J.Moon et al., J.Am. Oil Chem.Soc , 55, 683-68
8 (1978)〕、グルコースからの製法〔H. Kaneko et a
l.,Lipids,11 (No.12), 837-844 (1976)〕及びキシラン
からの製法〔R. Fall et al., Appl. Environ. Microbi
ol.,47(5), 1130-1134(1984)〕が知られている。また、
サッカロミセス属微生物によるパルミトレイン酸の菌内
体製造が知られている（特開昭62-289191)。

【０００３】発酵法による脂質の菌体外製造法としては
カビ類または藻類を界面活性剤の存在下に培養する方法
が知られている（特開昭62-3791)。また脂肪酸の菌体外
生産能を有するカンディダ・リポリティカ(lypolytica)
〔サッカロマイコプシス・リポリティカ（Saccharomyco
psis lipolytica)と同義語〕に属する変異株による脂肪
酸の菌体外生産についての報告がある〔T.Miyakawaet a
l., Agric. Biol. Chem.,48, 499 (1984)〕。さらにト
リコスポロン属、サッカロマイコプシス属、カンディダ
属またはクリプトコッカス属に属する微生物を用いて脂
肪酸または脂肪酸アルキルエステルから油脂を菌体外に
生産する方法が本出願人によって出願されている（特開
平５−９１８８９）。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】油脂の菌体内生産の場
合には、油脂の抽出工程が煩雑である。すなわち、まず
菌体を遠心分離または濾過により回収し、ついで湿菌体
を破砕し（コロイドミル、ボールミル、ホモジナイザー
等による機械的破砕、超音波による破砕等）、n-ヘキサ
ン等で油脂を抽出するか、湿菌体を乾燥し（凍結乾燥、
噴霧乾燥等）、クロロホルム：メタノール混合溶媒やn-
ヘキサン：イソプロパノール混合溶媒等で油脂を抽出す
る工程を要する。またカビ類による油脂の生産では、一
般に、培養菌体が塊りとなり易く、そのため菌体が攪拌
羽根に絡み付いたり、それによって破壊されたり、再現
性が十分でないといった問題点が生じやすい。また藻類
による油脂の生産では、一般に、培養時間が１週間〜１
ヵ月と長く、また付帯設備として光照射設備を要する。
また界面活性剤の存在下での油脂の菌体外生産において
は培養終了後、一般に、生成油脂を有機溶媒で抽出する
が、この際界面活性剤の存在のため水相と有機溶媒相と
の分離が十分に行われないという問題が生じやすい。以
上の問題点を解決するため、油脂の脂肪酸あるいは脂肪
酸アルキルエステルからの菌体外生産が開発され効率化
が図られてきた。ただ、原料も油溶性物質であるため、
生産後の生成油脂と原料との分離を含む精製工程に大き
な負荷がかかる。

【０００５】本発明の目的は油脂を、高収率で、菌体外
に発酵生産する方法を提供することにある。本発明の別
の目的は炭水化物を原料とし酵母を用いて、菌体外に、
油脂を発酵生産せしめることにより抽出工程及び精製工
程を容易にしコスト低減を図る方法を提供することにあ
る。本発明の別の目的はカビや藻類による油脂生産の問
題点を回避できる油脂の菌体外発酵生産法を提供するこ
とにある。本発明の別の目的は発酵生産後の油脂の有機
溶媒による抽出が、水相と有機溶媒相との分離が容易に
行えるという点で、有利に行える油脂の菌体外発酵生産
法を提供することにある。本発明の別の目的は非油溶性
原料を用いることで、生産物である油脂との分離を容易
にし、精製工程の簡略化を図り、もって油脂をより有利
に菌体外発酵生産する方法を提供することにある。本発
明のさらなる目的は高い油脂生産能力を有する微生物を
提供することにある。本発明の別の目的は炭水化物から
油脂を生産する能力を有する微生物を提供することにあ
る。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明の上記目的はトリ
コスポロン属に属し、炭水化物の存在下に培養すること
により油脂を菌体外に生産する能力を有する微生物を炭
水化物を含有する培地に培養して、培養液中菌体外に油
脂を生成蓄積せしめ、該培養液から生成蓄積した油脂を
採取することを特徴とする油脂の製造法、及び当該微生
物の一例であるトリコスポロン・スピーシーズＳＨ４５
Ｙ−Ｌ１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１４１３５）によって達
成された。本発明において使用する微生物はトリコスポ
ロン属に属し、炭水化物の存在下に培養することにより
油脂を菌体外に生産する能力を有する微生物であればい
ずれの微生物であってもよく、具体的にはトリコスポロ
ン・スピーシーズＳＨ４５Ｙ−Ｌ１２株（ＦＥＲＭ Ｐ
−１４１３５）が挙げられる。本発明で使用する菌につ
いて油脂を菌体外に生産する能力を有するとは炭水化物
としてグルコースを用いて後記実施例１に示す条件下で
培養を行った場合に菌体外に生産される油脂の量がグル
コース100gに対し1g以上、好ましくは3g以上、より好ま
しくは5g以上であることをいうものとする。

【０００７】トリコスポロン・スピーシーズＳＨ４５Ｙ
−Ｌ１２株は前記特開平５−９１８８９の発明で使用さ
れたトリコスポロン・スピーシーズＳＨ４５Ｙ（ＦＥＲ
ＭＰ−１２３６２）をＵＶ処理または化学処理して得ら
れた変異株のうち、グルコース培地中に油脂を生産する
株として選択した。ＳＨ４５Ｙ−Ｌ１２株はＳＨ４５Ｙ
株と同じ菌学的性質を有するが、前述のごとく、炭水化
物を原料として油脂を菌体外に生産する能力を有する点
において異なる。トリコスポロン・スピーシーズＳＨ４
５Ｙ−Ｌ１２株は工業技術院生命工学工業技術研究所
に、前述のごとく、ＦＥＲＭ Ｐ−１４１３５として寄
託されている。ＳＨ４５Ｙ株の菌学的性質は特開平５−
９１８８９に記載されているが、念のため以下に掲げて
おく。

【０００８】ａ．子のう胞子の形成 ゴロドコワ培地、アダムス培地、麦芽培地、Ｖ−８培
地、ポテト培地及びＹＭ培地での子のう胞子の形成を認
めない。 ｂ．各培地における生育状態（２５℃、４日培養） ＹＭ液体培地 − 球〜楕円形 2.5 ×2.5 、2.5 ×2.5 〜3.5(μ) ＹＭ寒天培地 − 球〜楕円形 3.5 ×3.5 、3.5 ×６〜９（μ) 偽菌糸形成（＋） 皮膜形成（−） ポテト抽出液寒天培地 − 分裂子形成（＋）

【０００９】 ｃ．各生理的性質 ビタミン要求性 （−） （２５℃、 ４日培養） ビオチン リボフラビン ピリドキシン塩酸塩 イノシトール 葉酸 パントテン酸カルシウム ニコチン酸 チアミン塩酸塩 ｐ−アミノ安息香酸 硝酸塩資化性 （−） 色素の生成 （−） 生育温度 （ＹＭ培地、７日培養） １３℃ １８℃ ２３℃ ２８℃ ３３℃ ３７℃ − ＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ − 生育ｐＨ （２５℃、ＹＭ培地、１０日培養） 3.5 4.0 4.5 6.5 7.5 8.2 9.0 9.5 ± ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋ ＋ ±

【００１０】ｄ．炭素源の同化性と発酵性 試験方法 ＰＳＡ寒天培地で２５℃、４日培養した生育菌体を滅菌
水で１回遠沈洗浄した後、10⁵cells/ml になるよう希釈
した。これをイースト・ナイトロジェン・ベース（ディ
フコ社）に各種炭素源（糖類）を加えた各試験培地５ml
（φ18mm試験管）に0.1ml ずつ植菌し、静置培養した。
攪拌は１日１回行った。 炭素源の同化性（２５℃、１０〜２８日培養） Ｄ−グルコース （＋） エタノール （＋） Ｄ−ガラクトース （＋） マニトール （＋） マルトース （＋） イノシトール （＋） スクロース （＋） Ｄ−ソルビトール （＋） ラクトース （＋） グリセロール （＋） Ｄ−ラフィノース （−） Ｄ−マンノース （＋） Ｄ−キシロース （＋） Ｄ−フラクトース （＋） Ｄ−アラビノース （＋） 可溶性澱粉 （＋） Ｌ−アラビノース （＋） 乳酸ナトリウム （＋） Ｌ−ラムノース （＋） クエン酸ナトリウム （−） 糖類の発酵性（２５℃、７日培養） Ｄ−グルコース （−） ラクトース （−） Ｄ−ガラクトース （−） マルトース （−） スクロース （−） Ｄ−ラフィノース （−）

【００１１】本発明で使用する炭水化物としては糖類、
糖アルコール、酸性糖等が挙げられる。以下これらにつ
いてさらに説明する。本発明で使用する糖類としては単
糖類及びオリゴ糖類が挙げられ、さらに多糖類もこれら
を分解する酵素と共に用いることにより利用できる。本
発明においてオリゴ糖類は二〜十糖類を指称するものと
し、これらはホモオリゴ糖類であってもヘテロオリゴ糖
類であってもよく、また多糖類はオリゴ糖類よりも単糖
単位数の大きな糖類を指称するものとし、これらはホモ
多糖類であってもヘテロ多糖類であってもよい。具体的
に好適には、単糖類としてはＬ−アラビノース、Ｄ−キ
シロース、Ｄ−リボース等のペントース、Ｄ−グルコー
ス、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−マンノ
ース等ののヘキソース、Ｌ−ラムノース等の６−デオキ
シヘキソース等が挙げられ、オリゴ糖類としてはスクロ
ース、マルトース、ラクトース、セロビオース、トレハ
ロース、メリビオース等の二糖類、ラフィノース等の三
糖類等が挙げられ、多糖類としては澱粉、セルロース、
グリコーゲン、デキストラン、マンナン、キシラン等が
挙げられる。これらのうち、特に好適には単糖類として
はＤ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−フラクトー
ス、Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラムノー
ス及びＤ−マンノースが挙げられ、オリゴ糖類としては
マルトース及びスクロースが挙げられ、多糖類としては
澱粉及びセルロースが挙げられる。上記糖類は単独で用
いても適宜組み合わせて用いてもよい。上記組合わせ中
には澱粉加水分解物等も含まれる。また糖類としては糖
類を主成分として含有する原料、例えば廃糖蜜、おから
等も用いることができる。

【００１２】本発明で使用する糖アルコールとしてはＤ
−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、ガラクチトール、
マルチトール等が挙げられる。本発明で使用する酸性糖
としてはグルクロン酸、ガラクチュロン酸等が挙げられ
る。糖類として多糖類を用いる場合に使用する酵素は多
糖類を加水分解し得る酵素であり、例えば澱粉について
はアミラーゼ（α−アミラーゼをはじめとするエンド型
アミラーゼ及びβ−アミラーゼをはじめとするエキソ型
アミラーゼ）、セルロースについてはセルラーゼ、ヘミ
セルロースについてはヘミセルラーゼが挙げられる。こ
れらの酵素は単糖単位数の比較的大きな（例えば（５以
上））オリゴ糖類の場合に使用してもよく、その方が培
養期間を短縮し得る場合がある。

【００１３】本発明で使用する酵母を培養するに際し、
培地中に含有せしめる炭水化物の量は通常 0.1〜50g/d
l、好ましくは１〜10g/dlである。炭水化物は培養当初
から加えてもよいし、菌がかなり生育した培養中途に加
えてもよいし、またその複合した添加型式であってもよ
い。すなわち培養の全期間に亘って上記濃度が維持され
る必要はなく、通常炭水化物添加の開始以後に維持され
ていればよい。また濃度の具体的コントロールは油脂の
菌体外蓄積及びその量との関連で適宜決定すればよい。
また多糖類を用いる場合前記酵素は通常多糖類の最初の
添加の時に同時に添加すればよいが、多糖類を培養途中
で追加する場合には同時に追加してもよい。またその添
加量は存在する量の多糖類を培養期間中に加水分解し得
る量であればよく特に限定されないが、通常0.1 〜50u/
dlが好ましい（糖類としてオリゴ糖類を使用し、酵素も
使用する場合も同様）。ここで１u は酵素の最適温度及
びpH条件下で１分間に１μmol の加水分解生産物を生成
する酵素の量である。かくして上記濃度範囲での培養に
より油脂が菌体外に生成蓄積する。

【００１４】本発明方法で使用される培地については、
油脂の発酵生産に通常使われる培地が使用される。すな
わち、実施例に示すごとく、主炭素源のほか窒素源、無
機物その他の栄養素を程よく含有する培地ならば、合成
培地および天然培地のいずれでも使用可能である。炭素
源としては前記炭水化物が炭素源を兼ねるので他の炭素
源は通常必要ないが、本発明はエタノール、メタノー
ル、グリセロール、ポリアルコール等のアルコール、グ
ルタミン酸、アスパラギン酸等のアミノ酸、ｎ−パラフ
ィン等の炭化水素等を菌の資化性に応じて併用する場合
を排除するものではない。

【００１５】窒素源としては、アンモニア、塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸ア
ンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素等の無機有機窒素化
合物が使用できる。さらに窒素源としてはペプトン、肉
エキス、酵母エキス、コーン・スティープ・リカー、カ
ゼイン加水分解物、フィッシュミールもしくはその消化
物、脱脂大豆粕もしくはその消化物などの窒素含有天然
物も使用できる。無機物としては、リン酸一カリウム、
リン酸二カリウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウ
ム、硫酸第一鉄、塩化第一鉄、硫酸マンガン、塩化カル
シウム、炭酸カルシウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、ホウ酸・
モリブデン酸アンモニウム、ヨウ化カリウム等が使用で
きる。使用する微生物が生育のために特定の栄養素（例
えばビオチン、チアミンなどのビタミン等）を必要とす
る場合は、当然その栄養素を適当量培地に加えなければ
ならない。これらの栄養素が窒素源として用いられる窒
素含有天然物に含まれて添加される場合はもちろん別に
栄養素を添加する必要はない。

【００１６】培養は振盪培養あるいは深部攪拌培養など
好気的条件下で行う。培養温度は一般には２０〜３５℃
が好ましいが、菌が生育する温度であれば他の温度条件
でもよい。培養中の培地のｐＨは、 4.0〜 7.2に維持す
ることが高収率を得るために望ましい。培養開始後通常
２〜７日間で菌体外に著量の油脂が生成蓄積する。

【００１７】培養終了後、培養液に抽出溶媒を添加して
油脂を抽出溶媒中に抽出する。油脂の一部は菌体表面に
付着しているので抽出溶媒の添加は、通常、菌体を含む
培養終了液そのものまたはその部分濃縮物に対して行
う。また上記抽出に加え、菌体内に残存した油脂の回収
を常法により行ってもよい。抽出溶媒としては油脂を溶
解し、水との混和性がないか乏しい常温で液状の有機溶
媒、例えばハロゲン化低級アルカン、例えばクロロホル
ム、塩化メチレン、四塩化炭素、1,2-ジクロロエタン ;
ｎ−ヘキサン、エチルエーテル；酢酸エチル；芳香族炭
化水素例えばベンゼン、トルエン、キシレン等が好適に
用いられる。抽出溶媒の添加量は培養液中に生成蓄積し
た油脂を十分に回収できる量であればよく特に限定され
ないが、一般には培養終了液１Ｌに対し 50 ml以上、好
ましくは 100 ml 〜３Ｌ、特に好ましくは 100 ml 〜１
Ｌである。

【００１８】なお、抽出溶媒によって抽出される油脂が
菌体外に存在する油脂であることは、菌体内油脂が抽
出される場合に一緒に抽出される、細胞膜を構成してい
るリン脂質が抽出液中に実質上存在しないこと（対照的
に例えば前記特開昭63-287491 の実施例１では菌体を破
壊することなく乾燥菌体からクロロホルム−メタノール
混合物で脂質を抽出しているが、油脂等の単純脂質だけ
でなくリン脂質等の複合脂質も一緒に抽出されてい
る）、抽出操作後に完全な（intact) 菌体が観察され
ること、菌体内生産の場合には通常本法に示すような
単純な操作で油脂が抽出されないこと（例えば従来の技
術の項で示した油脂生産に関する先行技術文献参照）等
から明らかである。

【００１９】抽出溶媒中に抽出された油脂は目的に応
じ、抽出溶媒を蒸発除去してそのまま製品とすることも
できるし、さらに必要に応じ脱酸、脱色、脱臭等の処理
に付すこともできる。これらの個々の処理操作は油脂の
生産に際しての常法（例えば、大豆、とうもろこし、菜
種等の植物からの抽出精製に関しての宮川高明著、「食
用油製造の実際」、幸書房（1988）、発酵生産油脂の精
製に関しての前出の特開昭63-28491、特開昭52-122672
等）及び一般的な発酵生産物の精製方法に準じて行うこ
とができる。

【００２０】本発明によって得られる油脂は主構成成分
としてオレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ステア
リン酸等を含むトリグリセリドであり我々が常食する植
物油と類似した油脂である。また本発明によって得られ
る油脂の組成は培地に添加される炭水化物の種類によっ
てあまり影響を受けない。

【００２１】

【実施例】次に本発明方法を実施例により具体的に説明
する。 実施例１ 下記培地100ml ずつ〔下記に示すごとく2.0gの糖類また
は糖アルコールを含有する。おからの場合には多糖類分
解酵素ビスコザイム１２０Ｌ（ノボ社製）１μｌを添加
した。〕にトリコスポロン・スピーシーズＳＨ４５Ｙ−
Ｌ１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１４１３５）を10⁷ 個接種
し、28℃で４日間振盪培養した。培養終了後培養液に15
mlのクロロホルムを加え、３回抽出を行った。クロロホ
ルム抽出液は合わせて50mlに定容した。クロロホルム抽
出液２mlに内標準物質としてトリヘプタデカノインを1.
0mg 加え、濃縮後、ＴＬＣに塗布した。ｎ−ヘキサン：
ジエチルエーテル：酢酸（80：20：１）で展開しトリグ
リセリド画分を回収した。トリグリセリド画分に10％Ｋ
ＯＨメタノール溶液0.6ml を加え、80℃で20分間加熱し
た。冷却後三フッ化ホウ素−メタノール錯体メタノール
溶液を0.7ml 加え、2.5 分間加熱し、冷却後ｎ−ヘキサ
ン1.0ml を加え、さらに1.5 分間加熱した。再び冷却後
塩化ナトリウム飽和水溶液を多量に加え、上層のヘキサ
ン層を回収した。ヘキサン層は無水硫酸ナトリウムで脱
水後、ガスクロで脂肪酸を定量した。総脂肪酸量に1.05
を乗じ、トリグリセリド量とした。結果を表１に示す。

【００２２】培地 NaNO₃ 2.0g、 (NH₄)SO₄ 2.0g、 K₂HPO₄ 1.0g、 KH₂PO₄
7.0g、 MgSO₄・7H₂O0.3g、 CaCl₂・2H₂O 0.1g、 NaCl
0.5g、糖類もしくは糖アルコール 20.0g、ビタミン混合
水溶液^*1１ml、ミネラル混合水溶液^*2 1ml、１％クロラ
ムフェニコール／エタノール１ml 、蒸留水で1000mlに
する。^{*1. 2} 下記に示す ビタミン混合水溶液 ビオチン 2mg、 パントテン酸カルシウム 400mg、 葉
酸 2mg、 イノシトール 2000mg 、 ニコチン酸 400m
g、ｎ−アミノ安息香酸 200mg、 ピリドキシン塩酸塩
400mg、 リボフラビン 200mg、 チアミン塩酸塩 400m
g、 蒸留水で1000mlにする。 ミネラル混合水溶液 M_n SO₄ ・ 4〜5H₂O 60mg 、 Z_n SO₄ ・7H₂O、 C_u SO₄
・5H₂O 40mg 、 FeCl₂・6H₂O 250mg、 H₃BO₃ 60mg 、
(NH₄)₆Mo₇O₂₄ ・4H₂0 25mg 、 KI 100mg 、蒸留水で100
0mlにする。

【００２３】

【表１】 ──────────────────────────────────── 炭 素 源 トリグリ トリグリセリドの脂肪酸組成（wt％） セリド(mg) C₁₆ C_16:1 C₁₈ C_18:1 C_18:2 C_18:3 ──────────────────────────────────── グルコース 183 22.9 0.7 9.2 57.5 9.4 0.3 スクロース 165 18.5 0.5 12.3 60.4 8.3 − 廃糖蜜 120 20.3 1.4 10.6 57.7 10.0 − おから 82 20.4 0.5 11.1 58.8 9.1 0.1 ソルビトール 131 19.3 0.8 10.7 61.2 8.0 − ──────────────────────────────────── C₁₆ パルミチン酸、 C_16:1 パルミトレイン酸、 C₁₈
ステアリン酸、 C_{18:1オレイン酸、 C 18:2} リノール酸
C_18:3 α−リノレン酸

【００２４】比較例 菌体内に油脂を生成蓄積することが知られている微生物
を用い、グルコースを炭素源として実施例１と同様に操
作した。結果を表２に示す。

【００２５】

【表２】 ──────────────────────────────────── 微生物 トリグリセリド（mg) ──────────────────────────────────── トリコスポロン・スピーシーズ SH45Y 6 サッカロマイコプシス・リポリティカ IF0 1659 10 エンドミセス・マグヌシ IFO 0110 7 クリプトコッカス・アルビダス IFO 1530 3 ロドトルラ・グルチニス HUT 7530 4 ロドスポリディウム・トルロイデス IFO 8766 2 リポミセス・スタキー IFO 1289 9 サッカロミセス・セレビシエ IFO 0847 0 ハンセヌラ・ポリモルファ IFO 1475 2 ─────────────────────────────────── 上記微生物に対する英語は以下の通りである。Trichosp
oron sp., Saccharomycopsis lipolytica, Endomyces m
agnusii, Cryptococcus albidus, Rhodotorula glutini
s, Rhodosporidium toruloides, Lipomyces starkeyi,
Saccharomyces cerevisiae, Hansenula polymorpha

【００２６】表２に示すように菌体外のトリグリセリド
生産量は実施例１の１８３mgと比較して著しく少なく、
本発明の顕著な効果は明らかである。

【００２７】実施例２ 5Lのジャーファーメンタ（ミツワ理化製) に実施例１と
同じ培地3L（グルコース 60gを含む) を入れ滅菌した。
実施例１と同じ培地200ml(グルコース4.0gを含有する)
にトリコスポロン・スピーシーズＳＨ４５Ｙ−Ｌ１２株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１４１３５）を植菌し、28℃で２日間
培養した培養液全量を上記ジャーファーメンタ中の培地
に植菌し、28℃、250rpm、通気量0.5L/minの条件で３日
間培養した。これにグルコース60ｇを加え、さらに２日
間上記と同条件下で培養した。培養終了後、培養液にｎ
−ヘキサン（食添用グレード）500ml を加え抽出した。
抽出操作は計３回繰り返し、得た抽出液を合せて溶剤を
留去して油脂18.0g を得た。結果を表３に示す。

【００２８】

【表３】 ──────────────────────────────────── トリグリセリド生産量 トリグリセリドの脂肪酸組成 （wt％） （ｇ） C₁₆ C_16:1 C₁₈ C_18:1 C_18:2 C_18:3 ──────────────────────────────────── 18.0 20.6 0.8 7.4 59.5 10.8 0.9 ────────────────────────────────────

【００２９】

【発明の効果】本発明方法によれば炭水化物から油脂を
菌体外に高収率で発酵生産させることができる。また本
発明によって、高い油脂生産能を有する微生物が提供さ
れる。油脂の菌体内生産の場合は、油脂を抽出するため
に強固な細胞壁を破壊する操作が必要で非常に効率が悪
いが、本発明方法によれば培養液と抽出溶剤を混合する
だけで回収が可能となる。油脂の菌体外生産において脂
溶性基質を用いた場合は、生産される油脂と残存基質が
同時に抽出されるため精製に負荷がかかる。例えば通常
植物油の精製に用いられる工程（脱酸、脱色、脱臭等）
を適用しようとするにはかなり条件を厳しくする必要が
あり、例えば脱酸工程においてはアルカリの量を増や
し、脱臭工程においては時間の延長を必要とするといっ
た具合である。さらに、これで不十分な場合はカラム分
離、分子蒸留等を組み合わせる必要が生じ得る。これに
対し本発明方法によれば基質が非脂溶性のため生産され
た油脂は比較的純度の高い状態で回収でき、後の精製に
特別な工夫は必要とされない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:645）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 トリコスポロン属に属し、炭水化物の存
   在下に培養することにより油脂を菌体外に生産する能力
   を有する微生物を炭水化物を含有する培地に培養して、
   培養液中菌体外に油脂を生成蓄積せしめ、該培養液から
   生成蓄積した油脂を採取することを特徴とする油脂の製
   造方法。
2. 【請求項２】 炭水化物が糖類または糖アルコールであ
   る請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 微生物がトリコスポロン・スピーシーズ
   ＳＨ４５Ｙ−Ｌ１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１４１３５）で
   ある請求項１または２記載の方法。
4. 【請求項４】 炭水化物の存在下に培養することにより
   油脂を菌体外に生産する能力を有するトリコスポロン・
   スピーシーズＳＨ４５Ｙ−Ｌ１２株（ＦＥＲＭ Ｐ−１
   ４１３５）。