JPH07108240B2 - γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法 - Google Patents
γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法Info
- Publication number
- JPH07108240B2 JPH07108240B2 JP61275219A JP27521986A JPH07108240B2 JP H07108240 B2 JPH07108240 B2 JP H07108240B2 JP 61275219 A JP61275219 A JP 61275219A JP 27521986 A JP27521986 A JP 27521986A JP H07108240 B2 JPH07108240 B2 JP H07108240B2
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、γ−グルタミルトランスペプチダーゼの活性
測定方法に関する。
測定方法に関する。
［従来の技術］ γ−グルタミルトランスペプチダーゼ（以下、γ−GTP
と略記する）は生体内でグルタチオンや他のγ−グルタ
ミルペプチドからγ−グルタミル基をアミノ酸、ペプチ
ドなどの受容体に転移する酵素で肝、腎、膵などの各臓
器に多く存在する。臨床的には閉塞性黄疸、慢性活動性
肝炎、肝癌、アルコール性肝炎などの肝臓疾患にγ−GT
P活性の上昇がみられる。従って、その活性測定は肝臓
疾患の診断として今日広く実施されるようになってい
る。
と略記する）は生体内でグルタチオンや他のγ−グルタ
ミルペプチドからγ−グルタミル基をアミノ酸、ペプチ
ドなどの受容体に転移する酵素で肝、腎、膵などの各臓
器に多く存在する。臨床的には閉塞性黄疸、慢性活動性
肝炎、肝癌、アルコール性肝炎などの肝臓疾患にγ−GT
P活性の上昇がみられる。従って、その活性測定は肝臓
疾患の診断として今日広く実施されるようになってい
る。
γ−GTPの活性測定法には、種々の基質を用いた方法が
発表されているが、従来のＬ−γ−グルタミル−ｐ−ニ
トロアニリド（以下、本基質と略記する）を用いる方法
が依然として広く行なわれている。しかしながら、本基
質は溶解性と安定性に重大な問題を有していることは周
知の通りである。即ち、本基質は酵素反応の至適pHであ
る中性付近において極めて溶解性が悪く、そのため溶解
度が比較的高い酸性側pHにて基質を予め充分溶解してお
き、使用時、中性付近の緩衝液と混合して使用する酸溶
解法をとっている。
発表されているが、従来のＬ−γ−グルタミル−ｐ−ニ
トロアニリド（以下、本基質と略記する）を用いる方法
が依然として広く行なわれている。しかしながら、本基
質は溶解性と安定性に重大な問題を有していることは周
知の通りである。即ち、本基質は酵素反応の至適pHであ
る中性付近において極めて溶解性が悪く、そのため溶解
度が比較的高い酸性側pHにて基質を予め充分溶解してお
き、使用時、中性付近の緩衝液と混合して使用する酸溶
解法をとっている。
この方法では、本基質は溶液中に強酸により加水分解を
うけ、遊離したｐ−ニトロアニリドが増大し、ブランク
上昇が起こり、試薬調製後の安定性が１日以内である。
このため、本基質の溶解性に対する改善が種々試みられ
ている次第である。
うけ、遊離したｐ−ニトロアニリドが増大し、ブランク
上昇が起こり、試薬調製後の安定性が１日以内である。
このため、本基質の溶解性に対する改善が種々試みられ
ている次第である。
例えば、シクロデキストリン（以下、CDと略記する）の
包接力を利用して本基質の水に対する溶解性を高めるこ
とが行なわれている。ところが、この方法はα−CD、β
−CD又はγ−CDを単独に用いた場合、或いはそれらを混
合物として用いた場合、低温域での溶解性は決して満足
できるものではない。こうした問題に対して、メチル基
で修飾されたβ−CDを用いることにより、低温における
溶解性を改善させることが行われている（特開昭61−13
99号公報）。
包接力を利用して本基質の水に対する溶解性を高めるこ
とが行なわれている。ところが、この方法はα−CD、β
−CD又はγ−CDを単独に用いた場合、或いはそれらを混
合物として用いた場合、低温域での溶解性は決して満足
できるものではない。こうした問題に対して、メチル基
で修飾されたβ−CDを用いることにより、低温における
溶解性を改善させることが行われている（特開昭61−13
99号公報）。
しかしながら、その方法における本基質の可溶化の改善
では充分ではない。水に対する溶解性という点では、メ
チル化CDは一応の改善がなされているが、温度が高くな
るにつれ、その溶解性が低下するという欠点を有してい
るからである。
では充分ではない。水に対する溶解性という点では、メ
チル化CDは一応の改善がなされているが、温度が高くな
るにつれ、その溶解性が低下するという欠点を有してい
るからである。
［発明が解決しようとする問題点］ 本発明者らは前記の欠点を解消するγ−GTP活性の測定
法を提供することを目的として、研究を重ねた結果、既
存のCDにグルコース残基数が２〜３のマルトオリゴ糖を
結合させたマルトシルCDを使用すれば、CDの特徴である
包接能を維持したまま、水への溶解性が飛躍的に向上す
ることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成する
に至った。
法を提供することを目的として、研究を重ねた結果、既
存のCDにグルコース残基数が２〜３のマルトオリゴ糖を
結合させたマルトシルCDを使用すれば、CDの特徴である
包接能を維持したまま、水への溶解性が飛躍的に向上す
ることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成する
に至った。
［問題点を解決するための手段］ 本発明は、Ｌ−γ−グルタミル−ｐ−ニトロアニリドを
基質に用いるγ−GTP活性測定法において、マルトオリ
ゴ糖結合CDを基質の可溶化剤として使用することを特徴
とするγ−GTPの活性測定方法である。
基質に用いるγ−GTP活性測定法において、マルトオリ
ゴ糖結合CDを基質の可溶化剤として使用することを特徴
とするγ−GTPの活性測定方法である。
本発明は、マルトオリゴ糖結合CDを本基質のＬ−γ−グ
ルタミル−ｐ−ニトロアニリドと共にγ−GTPの酵素反
応系に存在させればよく、γ−GTP活性の測定操作は受
容体のグリシルグリシン及びトリス−塩酸緩衝液等を用
いた公知の試薬中で行なう。
ルタミル−ｐ−ニトロアニリドと共にγ−GTPの酵素反
応系に存在させればよく、γ−GTP活性の測定操作は受
容体のグリシルグリシン及びトリス−塩酸緩衝液等を用
いた公知の試薬中で行なう。
本発明で使用するマルトオリゴ糖結合CDとは、一般式α
−Ｍ（マルトオリゴ糖）−CD、β−Ｎ（マルトオリゴ
糖）−CD又はγ−Ｏ（マルトオリゴ糖）−CDで表わさ
れ、この場合、マルトオリゴ糖はCDの水酸基に結合した
マルトオリゴ糖であってマルトース又はマルトトリオー
スであり、Ｍ、Ｎ、ＯはCDへのマルトオリゴ糖の結合数
であってそれぞれ１又は２である。
−Ｍ（マルトオリゴ糖）−CD、β−Ｎ（マルトオリゴ
糖）−CD又はγ−Ｏ（マルトオリゴ糖）−CDで表わさ
れ、この場合、マルトオリゴ糖はCDの水酸基に結合した
マルトオリゴ糖であってマルトース又はマルトトリオー
スであり、Ｍ、Ｎ、ＯはCDへのマルトオリゴ糖の結合数
であってそれぞれ１又は２である。
又、α型、β型又はγ型のマルトオリゴ糖結合CDはいず
れも単独で使用することができ、かつそれらの混合物と
しても使用することが可能である。
れも単独で使用することができ、かつそれらの混合物と
しても使用することが可能である。
そして、それらのマルトオリゴ糖結合CDは、CDとマルト
ースを原料とし、酵素プルラナーゼを利用して結合させ
る方法により製造することができる（特開昭61−197602
号公報）。
ースを原料とし、酵素プルラナーゼを利用して結合させ
る方法により製造することができる（特開昭61−197602
号公報）。
［作用効果］ 本発明のマルトオリゴ糖結合CDの包接作用を利用するこ
とにより、本基質の基質溶解性が改善された。特にメチ
ル化CDにみられた高温における溶解性の低下を防止する
ことが可能になり、基質溶解後の基質液の安定性も改善
させた。（表１及び２参照） 以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこれ
らによって限定されるものではない。
とにより、本基質の基質溶解性が改善された。特にメチ
ル化CDにみられた高温における溶解性の低下を防止する
ことが可能になり、基質溶解後の基質液の安定性も改善
させた。（表１及び２参照） 以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこれ
らによって限定されるものではない。
実施例１ （１）試薬の調製 緩衝液 トリスヒドロキシメチルアミノメタン19.8gとグリシル
グリシン16.1gを約900mlの精製水に溶解し、塩酸を用い
てpH8.2（20℃）とした後、精製水を加えて全量1000ml
とする。
グリシン16.1gを約900mlの精製水に溶解し、塩酸を用い
てpH8.2（20℃）とした後、精製水を加えて全量1000ml
とする。
基質液 クエン酸2.1gを約900mlの精製水で溶解した後、水酸化
ナトリウムを用いてpH5.0とし、マルトシル−α−CD50g
とＬ−γ−グルタミル−ｐ−ニトロアニリド3.46gを加
えた後、精製水で全量1000mlとする。
ナトリウムを用いてpH5.0とし、マルトシル−α−CD50g
とＬ−γ−グルタミル−ｐ−ニトロアニリド3.46gを加
えた後、精製水で全量1000mlとする。
（２）測定操作 上記の緩衝液2.1mlに試料（γ−GTP酵素溶液）90μ
を加え、約２〜３分予備加温し（37℃）、これに上記
の基質液1.2mlを加えよく混和した後、分光光度計にて4
15nmにおける１分間あたりの吸光度の増加を測定する。
を加え、約２〜３分予備加温し（37℃）、これに上記
の基質液1.2mlを加えよく混和した後、分光光度計にて4
15nmにおける１分間あたりの吸光度の増加を測定する。
（３）単位（活性）の計算 １分間当たりの吸光度の増加量をＸとすると （４）結果 第２表に従来の酸溶解法を比較対照として本発明法の結
果を示した。（なお、溶解後の安定性は結晶が析出しな
いか、又は測定に影響を与える程のブランクの上昇を示
さない期間を表した。） 実施例２ 実施例１のマルトシル−α−CDをマルトシル−β−CDに
代え、他は実施例１と同様に行なう。この結果を表２に
示す。
果を示した。（なお、溶解後の安定性は結晶が析出しな
いか、又は測定に影響を与える程のブランクの上昇を示
さない期間を表した。） 実施例２ 実施例１のマルトシル−α−CDをマルトシル−β−CDに
代え、他は実施例１と同様に行なう。この結果を表２に
示す。
実施例３ 実施例１のマルトシル−α−CDをジマルトシル−β−CD
に代え、他は実施例１と同様に行なう。この結果を表２
に示す。
に代え、他は実施例１と同様に行なう。この結果を表２
に示す。
実施例４ 実施例１のマルトシル−α−CDをマルトトリオシル−α
−CDに代え、他は実施例１と同様に行なう。この結果を
表２に示す。
−CDに代え、他は実施例１と同様に行なう。この結果を
表２に示す。
Claims (1)
- 【請求項１】Ｌ−γ−グルタミル−ｐ−ニトロアニリド
を基質に用いるγ−グルタミルトランスペプチダーゼ活
性測定法において、マルトオリゴ糖結合シクロデキスト
リンを基質の可溶化剤として使用することを特徴とする
γ−グルタミルトランスペプチダーゼの活性測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61275219A JPH07108240B2 (ja) | 1986-11-20 | 1986-11-20 | γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61275219A JPH07108240B2 (ja) | 1986-11-20 | 1986-11-20 | γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63129999A JPS63129999A (ja) | 1988-06-02 |
| JPH07108240B2 true JPH07108240B2 (ja) | 1995-11-22 |
Family
ID=17552360
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61275219A Expired - Lifetime JPH07108240B2 (ja) | 1986-11-20 | 1986-11-20 | γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07108240B2 (ja) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS611399A (ja) * | 1984-05-21 | 1986-01-07 | Wako Pure Chem Ind Ltd | ｒ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定法 |
| JPS61197602A (ja) * | 1985-02-28 | 1986-09-01 | Nikken Kagaku Kk | 新規分岐サイクロデキストリンおよびその製造方法 |
-
1986
- 1986-11-20 JP JP61275219A patent/JPH07108240B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| でん粉科学，３３（２），Ｐ．１２７−１３２，１９８６ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63129999A (ja) | 1988-06-02 |
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