JPH07100667B2 - テクネチウム−９９ｍで標識された器官特異的な物質の製法 - Google Patents
テクネチウム−９９ｍで標識された器官特異的な物質の製法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明はテクネチウム−99mで標識された器官特異的な
物質の製法およびその調製に適するテストキットに関す
る。
物質の製法およびその調製に適するテストキットに関す
る。
抗体を分泌するマウスのＢリンパ球をマウスのミエロー
マ細胞と融合させそしてこの２種の細胞の融合生成物で
あるハイブリツドをさらに生育させて抗体を産生させる
ことからなる、1975年にMilsteinおよびＫhler氏によ
り発表された先駆的方法により、多数の生成したハイブ
リツドから特定の特異性を有する抗体を産生するものを
単離することが可能である。対応する抗原上の１個の特
定のエピトープのみを認識するこれらモノクローナル抗
体は今日では免疫シンチグラフイー用に比較的大量に入
手しうる。腫瘍関連抗原に対するモノクローナル抗体は
腫瘍所在診断ならびに再発および転移の検出に適する。
この目的には、その抗原を担持する腫瘍が体内に存在す
るか否かを適当な核医学診断像形成技術を用いて確認す
るために、抗体を注射に先立ち放射性標識する必要があ
る。今日核医学診断法において最もしばしば用いられる
放射性核種のうちでは、沃素同位元素がタンパク質の標
識用に最も簡単に用いられうる。その場合Ｉ−123が実
際上の要求例えば満足できる検出効率および少ない照射
負荷に最も合致する、何故ならこのものは純粋なγ−線
発生体でありそして159KeVなる好都合なγ−エネルギー
を有するからである。その半減期が13.2時間と比較的短
いことそしてとりわけそれらの製造が粒子加速器に結び
ついていて、それゆえ価格が比較的高くなるため、抗体
の標識にＩ−123を使用することが強く制限される。
マ細胞と融合させそしてこの２種の細胞の融合生成物で
あるハイブリツドをさらに生育させて抗体を産生させる
ことからなる、1975年にMilsteinおよびＫhler氏によ
り発表された先駆的方法により、多数の生成したハイブ
リツドから特定の特異性を有する抗体を産生するものを
単離することが可能である。対応する抗原上の１個の特
定のエピトープのみを認識するこれらモノクローナル抗
体は今日では免疫シンチグラフイー用に比較的大量に入
手しうる。腫瘍関連抗原に対するモノクローナル抗体は
腫瘍所在診断ならびに再発および転移の検出に適する。
この目的には、その抗原を担持する腫瘍が体内に存在す
るか否かを適当な核医学診断像形成技術を用いて確認す
るために、抗体を注射に先立ち放射性標識する必要があ
る。今日核医学診断法において最もしばしば用いられる
放射性核種のうちでは、沃素同位元素がタンパク質の標
識用に最も簡単に用いられうる。その場合Ｉ−123が実
際上の要求例えば満足できる検出効率および少ない照射
負荷に最も合致する、何故ならこのものは純粋なγ−線
発生体でありそして159KeVなる好都合なγ−エネルギー
を有するからである。その半減期が13.2時間と比較的短
いことそしてとりわけそれらの製造が粒子加速器に結び
ついていて、それゆえ価格が比較的高くなるため、抗体
の標識にＩ−123を使用することが強く制限される。
Ｉ−131は、γ−線用カメラにとつてそのγ線照射エネ
ルギーが不都合であることおよびそのβ線照射が照射負
荷の見地から望ましくないゆえに、イン・ビボ診断にと
つて決して理想的でない放射性核種であるが、このＩ−
131を用いて抗体の標識が広く行われる。なぜならＩ−1
31は充分に高い比活性を以つて高い活性濃度で妥当な価
格で得られ、それゆえ比較的簡単で低価格での標識化が
行われうるからである。
ルギーが不都合であることおよびそのβ線照射が照射負
荷の見地から望ましくないゆえに、イン・ビボ診断にと
つて決して理想的でない放射性核種であるが、このＩ−
131を用いて抗体の標識が広く行われる。なぜならＩ−1
31は充分に高い比活性を以つて高い活性濃度で妥当な価
格で得られ、それゆえ比較的簡単で低価格での標識化が
行われうるからである。
ヨードで標識されたすべての抗体の決定的な欠点は、放
射性ヨードが生体内で一部分脱ヨード化過程を受けて再
び抗体から除去され、これが体内で沃化物として存在し
て、このものが一方では甲状腺に蓄積し、もう一方では
バツクグラウンド活性を高めることである。何故なら沃
化物は血液から比較的徐々にしか排除されないからであ
る。ヨードで標識された抗体を投与する場合は、すべて
の場合に検査すべき人物の甲状腺を予め保護する必要が
ある。ヨード標識された抗体の確かな長所は、慣用の検
査時点までにおける肝臓および腎臓中へのその蓄積が、
他の放射性核種を用いて標識された同じ抗体の場合より
明らかに低い点である。
射性ヨードが生体内で一部分脱ヨード化過程を受けて再
び抗体から除去され、これが体内で沃化物として存在し
て、このものが一方では甲状腺に蓄積し、もう一方では
バツクグラウンド活性を高めることである。何故なら沃
化物は血液から比較的徐々にしか排除されないからであ
る。ヨードで標識された抗体を投与する場合は、すべて
の場合に検査すべき人物の甲状腺を予め保護する必要が
ある。ヨード標識された抗体の確かな長所は、慣用の検
査時点までにおける肝臓および腎臓中へのその蓄積が、
他の放射性核種を用いて標識された同じ抗体の場合より
明らかに低い点である。
In−111は最近抗体の標識に広く使用されている。イン
ジウムはヨードと反対に金属元素であるので、直ちには
タンパク質に結合できない。この目的には一方ではタン
パク質と共有結合をすることができ、そしてもう一方で
は強い、複合物形成性の基である、陽イオン形態をした
インジウムを介して抗体に結合できる二官能性キレート
形成剤を必要とする。この目的に最もしばしば用いられ
るコンプレキソンはジエチレントリアミンペンタ酢酸
（DTPA）である。DTPAは二環性無水物として抗体と反応
する。その場合はじめにタンパク質の末端アミノ基と共
有アミド結合をし、一方次に水との反応によりその残る
酸官能基が遊離される。かくして誘導体形成された抗体
はここで、In−111−サイトレートとして添加された放
射性核種に安定して結合できる。インジウムは不安定な
複合体化合物として提供されねばならない。なぜなら、
さもなければ必要とされるpH値で沈殿するであろうから
である。DTPAの二環式無水物はその二官能性の基により
分子間および分子内結合反応をすることができるので決
して理想的な試薬ではない。
ジウムはヨードと反対に金属元素であるので、直ちには
タンパク質に結合できない。この目的には一方ではタン
パク質と共有結合をすることができ、そしてもう一方で
は強い、複合物形成性の基である、陽イオン形態をした
インジウムを介して抗体に結合できる二官能性キレート
形成剤を必要とする。この目的に最もしばしば用いられ
るコンプレキソンはジエチレントリアミンペンタ酢酸
（DTPA）である。DTPAは二環性無水物として抗体と反応
する。その場合はじめにタンパク質の末端アミノ基と共
有アミド結合をし、一方次に水との反応によりその残る
酸官能基が遊離される。かくして誘導体形成された抗体
はここで、In−111−サイトレートとして添加された放
射性核種に安定して結合できる。インジウムは不安定な
複合体化合物として提供されねばならない。なぜなら、
さもなければ必要とされるpH値で沈殿するであろうから
である。DTPAの二環式無水物はその二官能性の基により
分子間および分子内結合反応をすることができるので決
して理想的な試薬ではない。
ガリウムはインジウムに比較して何ら長所を有しない
が、テクネチウム−99mはその物理的性質が好ましいこ
と（粒子線がないこと、γ−エネルギー140KeVそして半
減期６時間であること）およびそれに関連して照射負荷
が小さいゆえに核医学診断法における最も重要な放射性
核種となつているので、有効な診断剤をTc−99mにより
標識することが熱望される。
が、テクネチウム−99mはその物理的性質が好ましいこ
と（粒子線がないこと、γ−エネルギー140KeVそして半
減期６時間であること）およびそれに関連して照射負荷
が小さいゆえに核医学診断法における最も重要な放射性
核種となつているので、有効な診断剤をTc−99mにより
標識することが熱望される。
核種発生器から得られうるテクネチウム−99mははじめ
パーテクネテートとして存在し、このものはその形態で
例えば甲状腺および脳のシンチグラフイーに適する。テ
クネチウム−99mを用いる他の器官のシンチグラフイー
は、一方ではテクネチウムと結合でき、他方では標的器
官に放射性核種を高い選択性を以つて濃縮しうる特定の
「輸送物質」を用いて行うことができる。この目的に
は、テクネチウム−99mで直接標識できかつ高い器官特
異性を有する物質が主に使用されてきた。しかしながら
その他に高い器官特異性を有するがしかし直接には標識
できない多数の物質も存在する。これらはタンパク質
（フイブリノゲン、ヒト血清アルブミン）、酵素（スト
レプトキナーゼ、ラクテートデヒドロゲナーゼ）、糖
（デキストラン、グルコース）または重合体でありう
る。これには脂肪のような低分子物質も包含され、これ
らは心臓のエネルギー要求が高いので心筋組織中に濃縮
される。
パーテクネテートとして存在し、このものはその形態で
例えば甲状腺および脳のシンチグラフイーに適する。テ
クネチウム−99mを用いる他の器官のシンチグラフイー
は、一方ではテクネチウムと結合でき、他方では標的器
官に放射性核種を高い選択性を以つて濃縮しうる特定の
「輸送物質」を用いて行うことができる。この目的に
は、テクネチウム−99mで直接標識できかつ高い器官特
異性を有する物質が主に使用されてきた。しかしながら
その他に高い器官特異性を有するがしかし直接には標識
できない多数の物質も存在する。これらはタンパク質
（フイブリノゲン、ヒト血清アルブミン）、酵素（スト
レプトキナーゼ、ラクテートデヒドロゲナーゼ）、糖
（デキストラン、グルコース）または重合体でありう
る。これには脂肪のような低分子物質も包含され、これ
らは心臓のエネルギー要求が高いので心筋組織中に濃縮
される。
器官特異的な「輸送物質」をテクネチウム−99mで標識
するには、核種発生器から溶離されるパーテクネテート
をはじめにより低次の酸化状態に変換する必要がある。
この還元された形態においてテクネチウムは器官特異的
な物質と多かれ少なかれ安定な化合物を形成する。骨の
シンチグラフイーには、例えばTc−99m/燐含有酸誘導
体、とりわけ有機ホスホン酸が用いられる。従つてヨー
ロツパ特許第2485号に記載される標識単位中の器官特異
的な「輸送物質」は3,3−ジホスホノ−1,2−プロパンジ
カルボン酸のナトリウム塩である。ヨーロツパ特許第10
8,253号にはRES、特に肝臓のシンチグラフイー像形成に
Tc−99m/トリおよびテトラホスホン酸が記載されてい
る。ジエチレントリアミンペンタン酢酸（DTPA）とTc−
99mとの複合物は肝臓疾患および脳の病的過程の診断法
に使用される。
するには、核種発生器から溶離されるパーテクネテート
をはじめにより低次の酸化状態に変換する必要がある。
この還元された形態においてテクネチウムは器官特異的
な物質と多かれ少なかれ安定な化合物を形成する。骨の
シンチグラフイーには、例えばTc−99m/燐含有酸誘導
体、とりわけ有機ホスホン酸が用いられる。従つてヨー
ロツパ特許第2485号に記載される標識単位中の器官特異
的な「輸送物質」は3,3−ジホスホノ−1,2−プロパンジ
カルボン酸のナトリウム塩である。ヨーロツパ特許第10
8,253号にはRES、特に肝臓のシンチグラフイー像形成に
Tc−99m/トリおよびテトラホスホン酸が記載されてい
る。ジエチレントリアミンペンタン酢酸（DTPA）とTc−
99mとの複合物は肝臓疾患および脳の病的過程の診断法
に使用される。
例えば抗体をテクネチウムで直接標識することは不可能
なので、インジウム標識の場合と同様に、二官能性複合
物形成剤を使用して抗体の安定なテクネチウム標識化を
なす試みがなされている。テクネチウムを用いて標識す
る場合の特別の問題点は、通常の方法ではスズ（II）−
イオンが反応溶液中に存在する点にある。スズ（II）は
パーテクネテートが速かでかつ定量的に室温でより低次
のそれゆえ反応性の酸化状態のものに変換しうるこれま
で唯一の還元剤である。還元されたテクネチウムの他に
存在するスズ（II）およびスズ（IV）イオンが抗体に結
合した複合物の結合部位を競合し、従つて複合物形成剤
が過剰に使用されねばならなくてそれにより抗体の特異
的な性質が影響を受けうることになるか、または未結合
のテクネチウムおよびスズが共通のコロイドとして他の
器官における望ましからぬ放射能蓄積を生ずることにな
る。
なので、インジウム標識の場合と同様に、二官能性複合
物形成剤を使用して抗体の安定なテクネチウム標識化を
なす試みがなされている。テクネチウムを用いて標識す
る場合の特別の問題点は、通常の方法ではスズ（II）−
イオンが反応溶液中に存在する点にある。スズ（II）は
パーテクネテートが速かでかつ定量的に室温でより低次
のそれゆえ反応性の酸化状態のものに変換しうるこれま
で唯一の還元剤である。還元されたテクネチウムの他に
存在するスズ（II）およびスズ（IV）イオンが抗体に結
合した複合物の結合部位を競合し、従つて複合物形成剤
が過剰に使用されねばならなくてそれにより抗体の特異
的な性質が影響を受けうることになるか、または未結合
のテクネチウムおよびスズが共通のコロイドとして他の
器官における望ましからぬ放射能蓄積を生ずることにな
る。
米国特許第4,479,930号明細書には、DTPAおよびEDTAの
環状無水物がIn−111およびGa−67用のみならずIc−99m
用のキレート形成剤であると記載されている。ヨーロツ
パ特許第35,765号にはタンパク質へのテクネチウム−99
m用の複合物形成剤としてデフエロキサミン（defero−x
amine）の使用が記載されている。国際特許出願WO85/30
63号においては部分的に還元された抗体のジスルフイツ
ド橋を、パーテクネテートとナトリウムアジドとの反応
により予め調製されねばならないテトラクロロニトリド
テクネテートのナトリウム塩と反応させている。ヨーロ
ツパ特許出願第194853号においては、同様に還元により
抗体フラグメント中に生成される遊離のチオール基をキ
レート形成性複合物、すなわちかなり合成に骨が折れる
〔（７−マレイミドヘプチル）−イミノ−ビス（エチレ
ンニトリロ）〕テトラ酢酸との結合に使用している。抗
体への複合物の結合は複合物化合物のマレイミド部分中
の二重結合とSH基との反応を介して行われるが、一方放
射性金属イオンはニトリロジ酢酸残基を介して複合物形
成される。
環状無水物がIn−111およびGa−67用のみならずIc−99m
用のキレート形成剤であると記載されている。ヨーロツ
パ特許第35,765号にはタンパク質へのテクネチウム−99
m用の複合物形成剤としてデフエロキサミン（defero−x
amine）の使用が記載されている。国際特許出願WO85/30
63号においては部分的に還元された抗体のジスルフイツ
ド橋を、パーテクネテートとナトリウムアジドとの反応
により予め調製されねばならないテトラクロロニトリド
テクネテートのナトリウム塩と反応させている。ヨーロ
ツパ特許出願第194853号においては、同様に還元により
抗体フラグメント中に生成される遊離のチオール基をキ
レート形成性複合物、すなわちかなり合成に骨が折れる
〔（７−マレイミドヘプチル）−イミノ−ビス（エチレ
ンニトリロ）〕テトラ酢酸との結合に使用している。抗
体への複合物の結合は複合物化合物のマレイミド部分中
の二重結合とSH基との反応を介して行われるが、一方放
射性金属イオンはニトリロジ酢酸残基を介して複合物形
成される。
抗体または抗体フラグメントをTc−99mで標識するため
のより簡単な方法はヨーロツパ特許第5638号および米国
特許第4,478,815号に記載されている。そこではジスル
フイツド橋の還元的開裂および添加されたTc−99m−パ
ーテクネテートの還元を同時に行うためにスズ（II）塩
が過剰に使用される。一般的には−Ｓ−Ｓ−結合の開裂
には比較的長いインキユベーシヨン時間（24時間）を必
要とし、その際にＦ（ab′）２フラグメントが部分的に
Ｆ（ab′）フラグメントに開裂される。最近の文献の記
載（例えば「Journal of Nuclear Medicine」27（198
6）、685〜93および1315〜20、および「International
Journal of Nuclear Medicine Biology」12（1985）３
〜８）には、これら２種のフラグメントの比率は「スズ
メツキ反応」の如何によるものであること、および２種
の成分の比率はTc−99m標識後はもはやあまり変化しな
いことが示されており、そこでの主成分はTc−99m標識
されたＦ（ab′）である。すべての場合に、標識された
Ｆ（ab′）フラグメントは後で精製される必要がある、
何故なら少くとも30分間反応させた後にもかかわらずパ
ーテクネテートが定量的に変換されないからである。
のより簡単な方法はヨーロツパ特許第5638号および米国
特許第4,478,815号に記載されている。そこではジスル
フイツド橋の還元的開裂および添加されたTc−99m−パ
ーテクネテートの還元を同時に行うためにスズ（II）塩
が過剰に使用される。一般的には−Ｓ−Ｓ−結合の開裂
には比較的長いインキユベーシヨン時間（24時間）を必
要とし、その際にＦ（ab′）２フラグメントが部分的に
Ｆ（ab′）フラグメントに開裂される。最近の文献の記
載（例えば「Journal of Nuclear Medicine」27（198
6）、685〜93および1315〜20、および「International
Journal of Nuclear Medicine Biology」12（1985）３
〜８）には、これら２種のフラグメントの比率は「スズ
メツキ反応」の如何によるものであること、および２種
の成分の比率はTc−99m標識後はもはやあまり変化しな
いことが示されており、そこでの主成分はTc−99m標識
されたＦ（ab′）である。すべての場合に、標識された
Ｆ（ab′）フラグメントは後で精製される必要がある、
何故なら少くとも30分間反応させた後にもかかわらずパ
ーテクネテートが定量的に変換されないからである。
前記した標識化法により、骨の折れる工程段階なしでル
ーチン的に用いられうる製剤を調製することはこれまで
できなかつた。
ーチン的に用いられうる製剤を調製することはこれまで
できなかつた。
今、器官特異的な物質、または予備処理されるかまたは
テクネチウム−99m用の複合物形成剤に結合された器官
特異的な物質を〔99m〕−パーテクネテートおよび複合
安定化された還元剤と混合することからなる、テクネチ
ウム−99mで標識された器官特異的な物質の製造法が見
出された。
テクネチウム−99m用の複合物形成剤に結合された器官
特異的な物質を〔99m〕−パーテクネテートおよび複合
安定化された還元剤と混合することからなる、テクネチ
ウム−99mで標識された器官特異的な物質の製造法が見
出された。
この方法で、分子中に複合物形成性質を有する少くとも
１個の官能基を有する器官特異的な物質（「抗体物
質」）をテクネチウム−99mで標識することができる。
かかる基は大抵電子対供与機能を有する原子またはイオ
ンの形態をとつている（ルイス塩基）。複合物形成性質
を有するかかる官能基の例をあげれば、−SCN、−NH2、
−NHR、−NR2、−COO−、−OH、＝Ｓ、−SHまたは−NO
基である。官能性を有する複合物形成基を有するかかる
物質の代表的な例をあげれば、タンパク質（−NH−、−
NH2または−COO−基）、酵素（−NH2、−OHおよび−Ｐ
＝０基）、糖（−OH基）または適当な官能基を有する側
鎖を担持する重合体である。
１個の官能基を有する器官特異的な物質（「抗体物
質」）をテクネチウム−99mで標識することができる。
かかる基は大抵電子対供与機能を有する原子またはイオ
ンの形態をとつている（ルイス塩基）。複合物形成性質
を有するかかる官能基の例をあげれば、−SCN、−NH2、
−NHR、−NR2、−COO−、−OH、＝Ｓ、−SHまたは−NO
基である。官能性を有する複合物形成基を有するかかる
物質の代表的な例をあげれば、タンパク質（−NH−、−
NH2または−COO−基）、酵素（−NH2、−OHおよび−Ｐ
＝０基）、糖（−OH基）または適当な官能基を有する側
鎖を担持する重合体である。
標識すべき化合物がかかる官能基を有しない場合は、標
識化に先立ち、物質を「予備処理」するかまたは適当な
複合物形成剤に結合させなければならない。
識化に先立ち、物質を「予備処理」するかまたは適当な
複合物形成剤に結合させなければならない。
本発明で用いられる「予備処理」なる用語は、複合物形
成性質を有する官能基を標識すべき分子中に生成させる
措置を意味する。例えば、抗体はジスルフイツド橋を含
有している。しかしながら２個の相互に共有結合してい
る硫黄原子はこの形態ではテクネチウム−99mと複合体
形成する能力を有しない。しかしながらジスルフイツド
橋を還元した場合には２個のSH基が生成し、このものは
それ自体でテクネチウム−99mにとつてすぐれた複合物
形成性リガンドでありかつその上このものを良好な収率
で結合させる。
成性質を有する官能基を標識すべき分子中に生成させる
措置を意味する。例えば、抗体はジスルフイツド橋を含
有している。しかしながら２個の相互に共有結合してい
る硫黄原子はこの形態ではテクネチウム−99mと複合体
形成する能力を有しない。しかしながらジスルフイツド
橋を還元した場合には２個のSH基が生成し、このものは
それ自体でテクネチウム−99mにとつてすぐれた複合物
形成性リガンドでありかつその上このものを良好な収率
で結合させる。
複合物形成性質を有する官能基を何ら有しない器官特異
的な物質にテクネチウム−99mを結合させるもう一つの
可能な方法は、かかる官能基を分子中に組み込むか、ま
たは複合物形成剤を分子に化学的に結合させることであ
る。
的な物質にテクネチウム−99mを結合させるもう一つの
可能な方法は、かかる官能基を分子中に組み込むか、ま
たは複合物形成剤を分子に化学的に結合させることであ
る。
本発明の重要なポイントは、標識すべき物質が還元剤、
好ましくはスズ（II）塩、と直接接触しないことにあ
る。はじめにスズ（II）塩を適当な反応相手と混合する
と複合安定化された還元剤が形成される。反応相手はホ
スホネートまたはピロホスヘートである。これらはスズ
（II）を生理的pH値（６〜８）で溶液中に保持してそれ
により還元剤が官能性状態を保持する。
好ましくはスズ（II）塩、と直接接触しないことにあ
る。はじめにスズ（II）塩を適当な反応相手と混合する
と複合安定化された還元剤が形成される。反応相手はホ
スホネートまたはピロホスヘートである。これらはスズ
（II）を生理的pH値（６〜８）で溶液中に保持してそれ
により還元剤が官能性状態を保持する。
この方法は抗体のテクネチウム−99mによる標識化に特
に重要であると思われる。抗体またはＦ（ab′）２抗体
フラグメントのＳ−Ｓ−結合の部分的還元は緩和な還元
剤を室温で短時間作用させることにより達成されうる
（器官特異的な物質の予備処理）。特に適当な還元剤は
２−メルカプトエタノールまたは２−メルカプトエチル
アミン（システアミン）のようなモノチオールである。
その場合それらの免疫学的反応性が失われることもなく
またより小さなフラグメントに断片化されることもない
反応性の抗体分子が得られる。原則的には、抗体または
Ｆ（ab′）２抗体フラグメントの部分的還元には比較的
長い時間作用させてもＳ−Ｓ結合の一部のみしか開裂さ
せずそして抗体成分の断片化を何ら生じないすべての還
元剤が適する。抗体成分へのかかる還元剤の作用時間は
１時間を超える必要はない。一般にすでに10〜30分後に
は、多数のSH基が生成しており、従つて充分な量のテク
ネチウム−99m陽イオンが結合される。次に過剰の還元
剤を除去し、そして緩衝溶液（例えばpH7.2の0.02M燐酸
塩溶液）中の部分的に還元された抗体を単離し、直ちに
凍結乾燥する。その間抗体中の遊離のチオール基が空気
中の酸素により再酸化されるのを抑止する必要がある。
緩衝塩の他には何ら他の添加剤を含有せずそして保護気
体としての窒素で被覆されている凍結乾燥された抗体は
冷蔵温度（−５〜＋５℃）で何週間も未変化のままに保
持されうる。このものは等張食塩溶液の添加により再び
充分に溶解する。
に重要であると思われる。抗体またはＦ（ab′）２抗体
フラグメントのＳ−Ｓ−結合の部分的還元は緩和な還元
剤を室温で短時間作用させることにより達成されうる
（器官特異的な物質の予備処理）。特に適当な還元剤は
２−メルカプトエタノールまたは２−メルカプトエチル
アミン（システアミン）のようなモノチオールである。
その場合それらの免疫学的反応性が失われることもなく
またより小さなフラグメントに断片化されることもない
反応性の抗体分子が得られる。原則的には、抗体または
Ｆ（ab′）２抗体フラグメントの部分的還元には比較的
長い時間作用させてもＳ−Ｓ結合の一部のみしか開裂さ
せずそして抗体成分の断片化を何ら生じないすべての還
元剤が適する。抗体成分へのかかる還元剤の作用時間は
１時間を超える必要はない。一般にすでに10〜30分後に
は、多数のSH基が生成しており、従つて充分な量のテク
ネチウム−99m陽イオンが結合される。次に過剰の還元
剤を除去し、そして緩衝溶液（例えばpH7.2の0.02M燐酸
塩溶液）中の部分的に還元された抗体を単離し、直ちに
凍結乾燥する。その間抗体中の遊離のチオール基が空気
中の酸素により再酸化されるのを抑止する必要がある。
緩衝塩の他には何ら他の添加剤を含有せずそして保護気
体としての窒素で被覆されている凍結乾燥された抗体は
冷蔵温度（−５〜＋５℃）で何週間も未変化のままに保
持されうる。このものは等張食塩溶液の添加により再び
充分に溶解する。
かくして調製された、部分的に還元された抗体成分（予
備処理された器官特異的な物質）はそこで、これにパー
テクネテートおよびスズ（II）−ホスホネートまたは−
ピロホスヘートの混合物を添加することによりテクネチ
ウム−99mで円滑に標識されうる。スズ（II）−ホスホ
ネートとしては、ジホスホネート、トリホスホネート、
またはテトラホスホネートを用いるのが特に好都合であ
る。メタンジホスホン酸、アミノメタンジホスホン酸、
3,3−ジホスホノプロピオン酸、3,3−ジホスホノ−1,2
−プロパンジカルボン酸またはプロパン−1,1,3,3−テ
トラホスホン酸のスズ（II）塩が特別に良いことが判つ
た。これらスズ含有ホスホネート複合物はすでにヨーロ
ツパ特許第2485号および同第108253号に記載されており
そして骨格および肝臓シンチグラフイー用のテクネチウ
ム標識化キツトとして広く使用されている。スズ（II）
含有ピロホスヘートも同じく適するが、一方ジエチレン
トリアミンペンタン酢酸のスズ（II）塩に適しない。
備処理された器官特異的な物質）はそこで、これにパー
テクネテートおよびスズ（II）−ホスホネートまたは−
ピロホスヘートの混合物を添加することによりテクネチ
ウム−99mで円滑に標識されうる。スズ（II）−ホスホ
ネートとしては、ジホスホネート、トリホスホネート、
またはテトラホスホネートを用いるのが特に好都合であ
る。メタンジホスホン酸、アミノメタンジホスホン酸、
3,3−ジホスホノプロピオン酸、3,3−ジホスホノ−1,2
−プロパンジカルボン酸またはプロパン−1,1,3,3−テ
トラホスホン酸のスズ（II）塩が特別に良いことが判つ
た。これらスズ含有ホスホネート複合物はすでにヨーロ
ツパ特許第2485号および同第108253号に記載されており
そして骨格および肝臓シンチグラフイー用のテクネチウ
ム標識化キツトとして広く使用されている。スズ（II）
含有ピロホスヘートも同じく適するが、一方ジエチレン
トリアミンペンタン酢酸のスズ（II）塩に適しない。
すぐ使用できる診断助剤を調製するには、初めに凍結乾
燥された抗体成分をテクネチウム−99m−パーテクネテ
ート溶液中に溶解させ、そして次にスズ（II）成分の溶
液を添加することによりテクネチウムの還元および抗体
への結合が行われる。
燥された抗体成分をテクネチウム−99m−パーテクネテ
ート溶液中に溶解させ、そして次にスズ（II）成分の溶
液を添加することによりテクネチウムの還元および抗体
への結合が行われる。
しかしまた診断助剤は抗体成分を初めにスズ（II）を含
有する溶液中に溶解させ、そして次にテクネチウム−99
m−パーテクネテート溶液を添加して抗体をテクネチウ
ムで標識することにより調製することもできる。
有する溶液中に溶解させ、そして次にテクネチウム−99
m−パーテクネテート溶液を添加して抗体をテクネチウ
ムで標識することにより調製することもできる。
テクネチウム−99mで標識された器官特異的な物質を含
有する診断助剤を調製するには、２種の別々の、好まし
くは凍結乾燥された成分を含有するテストキツトを作成
するのが好ましい。該２種の成分のうちの一方は器官特
異的な物質、または予備処理された器官特異的な物質、
またはTc−99m用の複合物形成剤に結合した器官特異的
な物質を、場合により緩衝剤と混合して含有しそしても
う一方は複合安定化された（テクネチウムの還元および
器官特異的な物質への結合に必要な）還元剤好ましくは
複合安定化されたスズ（II）塩を含有する。凍結乾燥さ
れ、場合により予備処理された器官特異的な物質が緩衝
物質としての燐酸水素ジナトリウム（pH7.2）と混合さ
れて存在するテストキツトが特に良いことが判つた。こ
のようにして、短い反応時間、例えば５分後にはすでに
テクネチウム−99mによる物質の標識化が事実上定量的
に進行し、標識された物質は不純物として遊離のパーテ
クネテートを１％未満しか有せずかつTc−99m標識され
たスズ（II）成分を極くわずかな量にしか含有していな
いので続く精製工程はもはや必要ない。
有する診断助剤を調製するには、２種の別々の、好まし
くは凍結乾燥された成分を含有するテストキツトを作成
するのが好ましい。該２種の成分のうちの一方は器官特
異的な物質、または予備処理された器官特異的な物質、
またはTc−99m用の複合物形成剤に結合した器官特異的
な物質を、場合により緩衝剤と混合して含有しそしても
う一方は複合安定化された（テクネチウムの還元および
器官特異的な物質への結合に必要な）還元剤好ましくは
複合安定化されたスズ（II）塩を含有する。凍結乾燥さ
れ、場合により予備処理された器官特異的な物質が緩衝
物質としての燐酸水素ジナトリウム（pH7.2）と混合さ
れて存在するテストキツトが特に良いことが判つた。こ
のようにして、短い反応時間、例えば５分後にはすでに
テクネチウム−99mによる物質の標識化が事実上定量的
に進行し、標識された物質は不純物として遊離のパーテ
クネテートを１％未満しか有せずかつTc−99m標識され
たスズ（II）成分を極くわずかな量にしか含有していな
いので続く精製工程はもはや必要ない。
器官特異的な物質およびスズ（II）成分を別々の容器中
に保持することにより、凍結乾燥された精製物が未変化
のまま貯蔵されうる。それにより器官特異的な物質の速
やかで、問題のない、満足できる標識化が保証される。
パーテクネテートの還元に必要な量のスズ（II）は当然
わずかであり、数μｇの準位である。スズ含有ホスホネ
ートまたはピロホスヘートはテクネチウム−99mで安定
な標識化を行うためには器官特異的成分1mg当りスズ（I
I）に基づきそれぞれ１〜100μｇ好ましくは５〜10μｇ
添加される。
に保持することにより、凍結乾燥された精製物が未変化
のまま貯蔵されうる。それにより器官特異的な物質の速
やかで、問題のない、満足できる標識化が保証される。
パーテクネテートの還元に必要な量のスズ（II）は当然
わずかであり、数μｇの準位である。スズ含有ホスホネ
ートまたはピロホスヘートはテクネチウム−99mで安定
な標識化を行うためには器官特異的成分1mg当りスズ（I
I）に基づきそれぞれ１〜100μｇ好ましくは５〜10μｇ
添加される。
本発明により用いられるスズ（II）−ホスホネートまた
は−ピロホスヘートは還元された抗体または還元された
抗体フラグメントの標識化に特に良好に適する、何故な
らそれらは標識化に必要な中性pH値で安定な複合物を形
成するが、しかしながら還元されたテクネチウム陽イオ
ンをゆるくしか結合しないのでそのものは抗体またはそ
のフラグメント中のチオール基で容易に交換されうるか
らである。
は−ピロホスヘートは還元された抗体または還元された
抗体フラグメントの標識化に特に良好に適する、何故な
らそれらは標識化に必要な中性pH値で安定な複合物を形
成するが、しかしながら還元されたテクネチウム陽イオ
ンをゆるくしか結合しないのでそのものは抗体またはそ
のフラグメント中のチオール基で容易に交換されうるか
らである。
いくつかの標識化キツト中に存在する安定剤により注射
溶液の安定性が比較的長い間保証されうるので、これら
安定剤は抗体の標識化にも好都合である。
溶液の安定性が比較的長い間保証されうるので、これら
安定剤は抗体の標識化にも好都合である。
骨格シンチグラフイーに用いられるジホスホネート中に
安定化成分として使用されうるものである、ヨーロツパ
特許出願第141,100号記載のＮ−（４−アミノベンゾイ
ル）−グルタミン酸によりテクネチウム−99mで標識さ
れた抗体の安定性が著しく高められうる。
安定化成分として使用されうるものである、ヨーロツパ
特許出願第141,100号記載のＮ−（４−アミノベンゾイ
ル）−グルタミン酸によりテクネチウム−99mで標識さ
れた抗体の安定性が著しく高められうる。
テクネチウム−99mで標識された本発明により調製され
た抗体またはそのＦ（ab′）２抗体フラグメントは腫瘍
のイン・ビボ検出に用いられるのが好ましい。腫瘍関連
抗原と反応するモノクローナル抗体またはそのＦ（a
b′）２フラグメントが用いられるのが好ましい。
た抗体またはそのＦ（ab′）２抗体フラグメントは腫瘍
のイン・ビボ検出に用いられるのが好ましい。腫瘍関連
抗原と反応するモノクローナル抗体またはそのＦ（a
b′）２フラグメントが用いられるのが好ましい。
実施例 １ 結腸直腸癌の診断に使用される、癌胚抗原（CEA）に対
するモノクローナル抗体BW 431/31の20mgを室温で透析
することによりスクロースのような添加剤を除去し、そ
して等張食塩溶液中に移した。この抗体は西ドイツ特許
公開第3,416,774号公報に記載されておりそしてBosslet
氏他により「Int.J.of Cancer」36、75〜84（1985）に
記載されている。
するモノクローナル抗体BW 431/31の20mgを室温で透析
することによりスクロースのような添加剤を除去し、そ
して等張食塩溶液中に移した。この抗体は西ドイツ特許
公開第3,416,774号公報に記載されておりそしてBosslet
氏他により「Int.J.of Cancer」36、75〜84（1985）に
記載されている。
次に約5mg/mlの濃度で存在する抗体を室温で合計20mgの
２−メルカプトエタノールと反応（30分間）させ、次に
Bio Rad社のポリアクリルアミドゲルであるBio−Gel P
−２でゲル過することにより過剰の還元剤を除去し
た。0.02M燐酸塩緩衝液（pH7.2）中に溶解した抗体を直
ちに単離して凍結乾燥した。この凍結乾燥された試料は
１容器当り抗体2mgおよび燐酸水素ジナトリウム約1.4mg
を含有する。
２−メルカプトエタノールと反応（30分間）させ、次に
Bio Rad社のポリアクリルアミドゲルであるBio−Gel P
−２でゲル過することにより過剰の還元剤を除去し
た。0.02M燐酸塩緩衝液（pH7.2）中に溶解した抗体を直
ちに単離して凍結乾燥した。この凍結乾燥された試料は
１容器当り抗体2mgおよび燐酸水素ジナトリウム約1.4mg
を含有する。
テクネチウム−99mで標識するには、この試料を合計300
0MBq（約80mCi）までを含有するパーテクネテート溶液
7.5mlとそれぞれ反応させた。スズ（II）成分としては
3,3−ジホスホノプロピオン酸のナトリウム塩5mg、スズ
（II）陽イオン0.1mgおよびＮ−（４−アミノベンゾイ
ル）−Ｌ−グルタミン酸0.5mgからなる凍結乾燥された
標識化用単位が用いられた。この混合物を生理食塩溶液
5ml中に溶解させそして直接（１分後）にこの溶液0.5ml
を抗体溶液に加えると全量が8mlとなつた。10分間反応
させたのち、薄層クロマトグラフイー、Biogel P−10で
のゲル過、およびデユポン社のZorbax GF 250での高
圧液体クロマトグラフイーにより標識化収率を検査し
た。
0MBq（約80mCi）までを含有するパーテクネテート溶液
7.5mlとそれぞれ反応させた。スズ（II）成分としては
3,3−ジホスホノプロピオン酸のナトリウム塩5mg、スズ
（II）陽イオン0.1mgおよびＮ−（４−アミノベンゾイ
ル）−Ｌ−グルタミン酸0.5mgからなる凍結乾燥された
標識化用単位が用いられた。この混合物を生理食塩溶液
5ml中に溶解させそして直接（１分後）にこの溶液0.5ml
を抗体溶液に加えると全量が8mlとなつた。10分間反応
させたのち、薄層クロマトグラフイー、Biogel P−10で
のゲル過、およびデユポン社のZorbax GF 250での高
圧液体クロマトグラフイーにより標識化収率を検査し
た。
テクネチウム−99mの95％以上の活性がタンパク質に結
合されており、約１％がホスホネートに結合されて存在
し、一方１％未満がパーテクネテートであつた。パーテ
クネテートの割合は比較的長時間放置してはじめて再び
上昇する。６時間後で約２％となるが、ホスホネートに
結合した割合は１％のままであつた。
合されており、約１％がホスホネートに結合されて存在
し、一方１％未満がパーテクネテートであつた。パーテ
クネテートの割合は比較的長時間放置してはじめて再び
上昇する。６時間後で約２％となるが、ホスホネートに
結合した割合は１％のままであつた。
テクネチウム−99mで標識された種々の抗体中における
免疫反応性の割合を腫瘍細胞への結合を測定することに
より判定すると、Ｉ−131およびIn−111で標識された相
当するCEA抗体での免疫反応性割合とよく一致した（第
１表）。
免疫反応性の割合を腫瘍細胞への結合を測定することに
より判定すると、Ｉ−131およびIn−111で標識された相
当するCEA抗体での免疫反応性割合とよく一致した（第
１表）。
この表に記載されるモノクローナル抗体BW431/26は西ド
イツ特許公開第3,416,774号公報に記載されており、そ
こではMAb VIIIと呼ばれている。モノクローナル抗体BW
494/32は西ドイツ特許出願P3531301.3号に記載されてい
る。
イツ特許公開第3,416,774号公報に記載されており、そ
こではMAb VIIIと呼ばれている。モノクローナル抗体BW
494/32は西ドイツ特許出願P3531301.3号に記載されてい
る。
実施例２ （比較例） モノクローナル抗体BW431/31を実施例１におけると同様
にして処理するが、２−メルカプトエタノールとは反応
させない。それゆえ何ら遊離のチオール基を含有しない
抗体は、次に同量のスズ−ジホスホネートの存在下に実
施例１におけると同様にしてパーテクネテートと反応さ
せると、テクネチウム−99mの約１％しかタンパク質に
結合してない生成物が得られ、一方大部分（50％より
大）がテクネチウム−99m−ジホスホネートとして存在
し、そして還元された未結合テクネチウム（31％）の他
になおかなりの割合の遊離のパーテクネテート（15％）
が存在していた。
にして処理するが、２−メルカプトエタノールとは反応
させない。それゆえ何ら遊離のチオール基を含有しない
抗体は、次に同量のスズ−ジホスホネートの存在下に実
施例１におけると同様にしてパーテクネテートと反応さ
せると、テクネチウム−99mの約１％しかタンパク質に
結合してない生成物が得られ、一方大部分（50％より
大）がテクネチウム−99m−ジホスホネートとして存在
し、そして還元された未結合テクネチウム（31％）の他
になおかなりの割合の遊離のパーテクネテート（15％）
が存在していた。
実施例 ３ 膵臓癌関連粘液抗原に対するモノクローナル抗体BW494/
32をテクネチウム−99mで標識するには、この物質20mg
を等張食塩溶液2ml中に溶解させて、１％システアミン
塩酸塩水溶液0.5mlを加え、そしてこの混合物を室温で2
0分間インキユベーシヨンした。変性された抗体をカラ
ムクロマトグラフイーにより精製したものを0.02M Na2H
PO4緩衝溶液中に溶解させて各2mgずつで凍結乾燥した。
この抗体をテクネチウムで標識するのに用いられるスズ
（II）成分は１キツト当りNa4P2O77.2mgおよびスズ（I
I）クロライド1.03mgを含有するピロホスヘート標識化
キツトである。容器１個の内容物を生理食塩溶液10ml中
に溶解させそしてその溶液の0.25ml（Sn++約14μｇに相
当）を、予めパーテクネテート溶液約8ml（約2000MBq）
中に溶解させた抗体に加えた。10分間反応させたのち下
記組成、すなわち MAb 25 μｇ Na4P2O7 2.25 μｇ スズ（II） 0.175μｇおよび Na2HPO4緩衝液 約18 μｇ を有する溶液0.1mlを健康なラツトに静脈内投与した。
注射24時間後の器官分布を第２表に示す。この表から、
骨、甲状腺および胃における蓄積が非常にわずかであ
り、そしてそれ以外の器官ではＩ−131で標識された抗
体の場合とほぼ同様であることが明らかである。テクネ
チウム−99mで標識された抗体BW494/32について測定さ
れた免疫反応性（第１表参照）はＩ−131またはIn−111
で標識した場合より高かつた。
32をテクネチウム−99mで標識するには、この物質20mg
を等張食塩溶液2ml中に溶解させて、１％システアミン
塩酸塩水溶液0.5mlを加え、そしてこの混合物を室温で2
0分間インキユベーシヨンした。変性された抗体をカラ
ムクロマトグラフイーにより精製したものを0.02M Na2H
PO4緩衝溶液中に溶解させて各2mgずつで凍結乾燥した。
この抗体をテクネチウムで標識するのに用いられるスズ
（II）成分は１キツト当りNa4P2O77.2mgおよびスズ（I
I）クロライド1.03mgを含有するピロホスヘート標識化
キツトである。容器１個の内容物を生理食塩溶液10ml中
に溶解させそしてその溶液の0.25ml（Sn++約14μｇに相
当）を、予めパーテクネテート溶液約8ml（約2000MBq）
中に溶解させた抗体に加えた。10分間反応させたのち下
記組成、すなわち MAb 25 μｇ Na4P2O7 2.25 μｇ スズ（II） 0.175μｇおよび Na2HPO4緩衝液 約18 μｇ を有する溶液0.1mlを健康なラツトに静脈内投与した。
注射24時間後の器官分布を第２表に示す。この表から、
骨、甲状腺および胃における蓄積が非常にわずかであ
り、そしてそれ以外の器官ではＩ−131で標識された抗
体の場合とほぼ同様であることが明らかである。テクネ
チウム−99mで標識された抗体BW494/32について測定さ
れた免疫反応性（第１表参照）はＩ−131またはIn−111
で標識した場合より高かつた。
実施例 ４ 同様にCEAに対するモノクローナル抗体BW431/26の50mg
を２−メルカプトエタノールで処理することにより部分
的に還元し、生成物を精製しそして燐酸塩緩衝液（pH7.
2）の存在下に2mgずつ凍結乾燥した。
を２−メルカプトエタノールで処理することにより部分
的に還元し、生成物を精製しそして燐酸塩緩衝液（pH7.
2）の存在下に2mgずつ凍結乾燥した。
Tc−99mでの標識化は、1,1,3,3−プロパンテトラホスホ
ン酸テトラナトリウム塩13.5mgおよびスズ（II）−クロ
ライド×2H2O0.6mgからなる、他に肝臓のシンチグラフ
イーにも用いられる標識化単位を用いて行われた。標識
化単位の内容物を等張食塩溶液10ml中に溶解し、Bn++15
μｇに相当するこの溶液0.5mlを凍結乾燥された抗体に
加えた。次にパーテクネテート溶液（3000MBq）を透明
な抗体/Sn（II）塩溶液に加えそしてTc−99m標識された
抗体をヒトの結腸癌が移植されたヌードマウスに静脈投
与した。腫瘍は注射24時間後にすでにシンチグラフイー
により容易に映像として示すことができた。第３表はヌ
ードマウス中におけるこの抗体の腫瘍への蓄積および器
官分布に基づき、Ｉ−131、In−111およびTc−99mで標
識された製剤がほぼ同等であることを示している。
ン酸テトラナトリウム塩13.5mgおよびスズ（II）−クロ
ライド×2H2O0.6mgからなる、他に肝臓のシンチグラフ
イーにも用いられる標識化単位を用いて行われた。標識
化単位の内容物を等張食塩溶液10ml中に溶解し、Bn++15
μｇに相当するこの溶液0.5mlを凍結乾燥された抗体に
加えた。次にパーテクネテート溶液（3000MBq）を透明
な抗体/Sn（II）塩溶液に加えそしてTc−99m標識された
抗体をヒトの結腸癌が移植されたヌードマウスに静脈投
与した。腫瘍は注射24時間後にすでにシンチグラフイー
により容易に映像として示すことができた。第３表はヌ
ードマウス中におけるこの抗体の腫瘍への蓄積および器
官分布に基づき、Ｉ−131、In−111およびTc−99mで標
識された製剤がほぼ同等であることを示している。
実施例 ５ モノクローナル抗体431/31のＦ（ab′）２フラグメント
20mgを１％システアミン塩酸塩溶液1mlと４℃で15分間
インキユベーシヨンした。過剰の還元剤を除去した抗体
フラグメントを燐酸塩緩衝液と一緒に凍結乾燥した。テ
クネチウムで標識するには、3,3−ジホスホノ−1,2−プ
ロパンジカルボン酸テトラナトリウム塩13.0mg、スズ
（II）オキサイド0.23mgおよびＮ−（４−アミノベンゾ
イル）−Ｌ−グルタミン酸モノナトリウム塩1.0mgから
なる標識化単位の1/20を生理食塩溶液0.5ml中にて使用
した。1000MBq/mgの比活性で標識された抗体フラグメン
トは実際上何らパーテクネテートを含有しないが、それ
よりわずかに多い量（約３％）のTc−99mジホスホネー
トを含有していた。免疫反応性は60％であつた。
20mgを１％システアミン塩酸塩溶液1mlと４℃で15分間
インキユベーシヨンした。過剰の還元剤を除去した抗体
フラグメントを燐酸塩緩衝液と一緒に凍結乾燥した。テ
クネチウムで標識するには、3,3−ジホスホノ−1,2−プ
ロパンジカルボン酸テトラナトリウム塩13.0mg、スズ
（II）オキサイド0.23mgおよびＮ−（４−アミノベンゾ
イル）−Ｌ−グルタミン酸モノナトリウム塩1.0mgから
なる標識化単位の1/20を生理食塩溶液0.5ml中にて使用
した。1000MBq/mgの比活性で標識された抗体フラグメン
トは実際上何らパーテクネテートを含有しないが、それ
よりわずかに多い量（約３％）のTc−99mジホスホネー
トを含有していた。免疫反応性は60％であつた。
実施例 ６ タンパク質のTc−99mによる標識化 IgG250mgを等張食塩溶液中に10mg/mlの濃度に溶解させ
た。この溶液に0.5〜1mlの２−メルカプトエタノールを
添加したのち４〜25℃で約30分間インキユベーシヨンし
た。次にこの還元された免疫グロブリンをポリアクリル
アミドゲルカラム（Bio Rad社のBioGel P−２）で溶離
剤として0.02M燐酸水素ジナトリウム溶液（pH7.2）を用
いてゲル過することにより精製した。分離された純粋
なIgGのフラクシヨンを同じ燐酸塩緩衝液で希釈するこ
とによりIgG濃度4mg/ml（Na2HPO4約3mg/ml）に調整しそ
してこの溶液0.5mlずつを容器に入れて凍結乾燥した。
た。この溶液に0.5〜1mlの２−メルカプトエタノールを
添加したのち４〜25℃で約30分間インキユベーシヨンし
た。次にこの還元された免疫グロブリンをポリアクリル
アミドゲルカラム（Bio Rad社のBioGel P−２）で溶離
剤として0.02M燐酸水素ジナトリウム溶液（pH7.2）を用
いてゲル過することにより精製した。分離された純粋
なIgGのフラクシヨンを同じ燐酸塩緩衝液で希釈するこ
とによりIgG濃度4mg/ml（Na2HPO4約3mg/ml）に調整しそ
してこの溶液0.5mlずつを容器に入れて凍結乾燥した。
試料（IgG2mg）をTc−99mで標識するには、凍結乾燥物
を メタンジホスホン酸ナトリウム塩 2.6 mgおよび スズ（II）−クロライド 0.04mg からなる標識化単位を等張食塩溶液5ml中に溶解させる
ことにより得られるスズ（II）−メタンジホスホネート
溶液（pH7）1ml中に溶解させた。次にTc−99mパーテク
ネテート溶液４〜9ml（約1000MBq）をこれに加えた。５
分間反応させたのちテクネチウムの95％より多くがタン
パク質に結合した形態であるTc−99m標識されたIgGが得
られ、一方ホスホネートに結合した割合は１％未満そし
て遊離のパーテクネテートは１％未満であつた。標識さ
れたIgGは調製３時間後まで安定であつた。長時間放置
してはじめて溶液中に再び遊離のパーテクネテートが検
出できた。
を メタンジホスホン酸ナトリウム塩 2.6 mgおよび スズ（II）−クロライド 0.04mg からなる標識化単位を等張食塩溶液5ml中に溶解させる
ことにより得られるスズ（II）−メタンジホスホネート
溶液（pH7）1ml中に溶解させた。次にTc−99mパーテク
ネテート溶液４〜9ml（約1000MBq）をこれに加えた。５
分間反応させたのちテクネチウムの95％より多くがタン
パク質に結合した形態であるTc−99m標識されたIgGが得
られ、一方ホスホネートに結合した割合は１％未満そし
て遊離のパーテクネテートは１％未満であつた。標識さ
れたIgGは調製３時間後まで安定であつた。長時間放置
してはじめて溶液中に再び遊離のパーテクネテートが検
出できた。
実施例 ７ 1,4,8,11−テトラアザシクロテトラデカン（サイクラム
（cyclam））のTc−99mによる標識化 サイクラム8mgを等張食塩溶液0.5ml中に溶解させそして
0.1n水酸化ナトリウム溶液を用いてpH11に調整した。こ
の溶液に、 1,1,3,3−プロパンテトラホスホン酸ナトリウム塩2.9 m
gおよび Sn（II）−クロライド・二水和物 0.12mg からなる標識化単位を等張食塩溶液5ml中に溶解させる
ことにより得られるスズ（II）−1,1,3,3−プロパンテ
トラホスホネート溶液（pH6）1mlを加えた。これに590M
Bq（約0.3ml）のTc−99m−パーテクネテート溶液を加
え、そしてこの混合物を室温で５分間放置した。標識化
サイクラムの収率は98％より高く、一方遊離のパーテク
ネテートまたはホスホネートに結合したテクネチウムは
１％未満であつた。この標識された溶液は数時間安定で
あつた。
（cyclam））のTc−99mによる標識化 サイクラム8mgを等張食塩溶液0.5ml中に溶解させそして
0.1n水酸化ナトリウム溶液を用いてpH11に調整した。こ
の溶液に、 1,1,3,3−プロパンテトラホスホン酸ナトリウム塩2.9 m
gおよび Sn（II）−クロライド・二水和物 0.12mg からなる標識化単位を等張食塩溶液5ml中に溶解させる
ことにより得られるスズ（II）−1,1,3,3−プロパンテ
トラホスホネート溶液（pH6）1mlを加えた。これに590M
Bq（約0.3ml）のTc−99m−パーテクネテート溶液を加
え、そしてこの混合物を室温で５分間放置した。標識化
サイクラムの収率は98％より高く、一方遊離のパーテク
ネテートまたはホスホネートに結合したテクネチウムは
１％未満であつた。この標識された溶液は数時間安定で
あつた。
実施例 ８ ピロホスヘートのTc−99mによる標識化 ピロホスヘート10mgを0.9％食塩溶液1ml中に溶解させそ
してこれにスズ（II）−1,1,3,3−プロパンテトラホス
ホネート溶液（実施例７参照）1mlを加えた。この溶液
にパーテクネテート溶液1ml（〜300MBq）を加え、この
混合物を室温で５分間放置した。ピロホスヘートの50％
がTc−99mで標識された。標識されたホスホネートの割
合は10％未満であつた。
してこれにスズ（II）−1,1,3,3−プロパンテトラホス
ホネート溶液（実施例７参照）1mlを加えた。この溶液
にパーテクネテート溶液1ml（〜300MBq）を加え、この
混合物を室温で５分間放置した。ピロホスヘートの50％
がTc−99mで標識された。標識されたホスホネートの割
合は10％未満であつた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 アレクサンダー・シユヴアルツ ドイツ連邦共和国デー‐6093フレールスハ イム・アム・マイン．ヴイーゼンリング61 (72)発明者 アクセル・シユタインシユトレーサー ドイツ連邦共和国デー‐6237リーデルバ ハ．ツム・モルゲングラーベン26
Claims (9)
- 【請求項１】器官特異的な物質、または予備処理される
かまたはテクネチウム−99m用の複合物形成剤に結合さ
れた器官特異的な物質と、〔99m〕−パーテクネテート
とスズ〔II〕−ホスホネートまたはスズ（II）−ピロホ
スヘートからなる複合安定化還元剤とを混合することか
らなる、テクネチウム−99mで標識された器官特異的な
物質の製造法。 - 【請求項２】用いられる器官特異的な物質が抗体、Ｆ
（ab′）２−抗体フラグメント、タンパク質、酵素、糖
または診断目的に適する重合体である特許請求の範囲第
１項記載の方法。 - 【請求項３】スズ（II）−ホスホネートとしてジホスホ
ネート、トリホスホネート、またはテトラホスホネート
が用いられる特許請求の範囲第１項記載の方法。 - 【請求項４】メタンジホスホン酸、アミノメタンジホス
ホン酸、3,3−ジホスホノプロピオン酸、3,3−ジホスホ
ノ−1,2−プロパンジカルボン酸またはプロパン−1,1,
3,3−テトラホスホン酸のスズ（II）塩が用いられる特
許請求の範囲第３項記載の方法。 - 【請求項５】モノクローナル抗体またはそのＦ（ab′）
２フラグメントが用いられる特許請求の範囲第２項記載
の方法。 - 【請求項６】腫瘍関連抗原に対する抗体またはそのＦ
（ab′）２フラグメントが用いられる特許請求の範囲第
５項記載の方法。 - 【請求項７】一方が器官特異的な物質を含有し、そして
もう一方がテクネチウムの還元および器官特異的な物質
への結合にとって必要なスズ（II）−ホスホネートまた
はスズ（II）−ピロホスヘートからなる還元剤を含有す
る、２種の別々の凍結乾燥された成分から成るテストキ
ット。 - 【請求項８】器官特異的な物質が部分的に還元された抗
体またはそのＦ（ab′）２フラグメントである特許請求
の範囲第７項記載のテストキット。 - 【請求項９】凍結乾燥された抗体成分が緩衝物質として
の燐酸水素ジナトリウムと混合された状態で存在する特
許請求の範囲第８項記載のテストキット。
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| DE3642173 | 1986-12-10 | ||
| DE3642173.1 | 1987-08-27 | ||
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| DE19873728599 DE3728599A1 (de) | 1986-12-10 | 1987-08-27 | Verfahren zur herstellung einer mit technetium-99m-markierten organspezifischen substanz |
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| US5128119A (en) * | 1989-06-12 | 1992-07-07 | Immunomedics, Inc. | Methods for technetium/rhenium labeling of f(ab1)2 fragments |
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| US5206370A (en) | 1989-02-24 | 1993-04-27 | Johnson Matthey, Inc. | Certain pyridyl hydrazines and hydrazides useful for protein labeling |
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| US5078985A (en) * | 1989-08-09 | 1992-01-07 | Rhomed, Incorporated | Radiolabeling antibodies and other proteins with technetium or rhenium by regulated reduction |
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