FI92075C - Menetelmä teknetium-99m:llä leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä teknetium-99m:llä leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI92075C FI92075C FI875396A FI875396A FI92075C FI 92075 C FI92075 C FI 92075C FI 875396 A FI875396 A FI 875396A FI 875396 A FI875396 A FI 875396A FI 92075 C FI92075 C FI 92075C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- antibody
- technetium
- tin
- phosphonate
- labeled
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/12—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by a special physical form, e.g. emulsion, microcapsules, liposomes, characterized by a special physical form, e.g. emulsions, dispersions, microcapsules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1048—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell determinant being a carcino embryonic antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1057—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from liver or pancreas
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/866—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody fragment, e.g. fab', fab, fv, fc, heavy chain or light chain
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
92075
Menetelma teknetium-99m:llå leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi
Tama keksinto koskee menetelmåå teknetium-99m:llå 5 leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi, sen val- mistamiseen soveltuvaa testivålineistoå ja leimattua elin-spesifista ainetta sisåltavåå diagnostista valmistetta.
Milsteinin ja Kdhlerin, jotka julkaisivat vuonna 1975 menetelmån, jossa yhdistetSån vasta-aineita eritta-10 via hiiren B-lymfosyyttejå hiiren myeloomasoluihin ja saa-tetaan naiden kahden solun fuusiotuote, hybrid!, kasvamaan edelleen ja tuottamaan vasta-ainetta, uraa uurtavien toi-den mukaisesti on mahdollista eristaå lukuisten muodostu-vien hybridien joukosta se, joka tuottaa spesifisyydel-15 taan tietynlaista vasta-ainetta. NSitå monoklonaalisia vasta-aineita, jotka tunnistavat vain tietyn vastaavalla antigeenilla olevan epitoopin, kaytetaan nykyisin melko paljon immuuniskintigrafiassa. Kasvaimiin liittyvien anti-geenien vastaiset monoklonaaliset vasta-aineet soveltuvat 20 kasvainten sijainnin diagnosoimiseen samoin kuin uusiutu-misten ja etapesakkeiden osoittamiseen. Vasta-aineet tay-tyy tåtS vårten leimata radioaktiivisesti, jotta voitai-siin soveltuvia radiologisia kuvantamismenetelmiå kåytta-mållM todeta, esiintyyko elimistbsså antigeenia sisåltavå 25 kasvain. Radiologisessa diagnosoinnissa nykyisin yleisim- min kåytetyistå radionuklideista ovat jodi-isotoopit yk-sinkertaisimmin kåytettåvissS proteiinien leimaamiseen. NSistå tayttaa jodi-123 parhaiten kaytånnbn vaatimukset, kuten hyvån toteamisherkkyyden ja pienen sMteilykuormituk-30 sen, silla se låhettåH pelkkaa γ-sSteilya ja silla on edul-linen γ-energia 159 keV. Sen suhteellisen lyhyt puoliintu-misaika, 13,2 tuntia, ja ennen kaikkea sen hiukkaskiihdy-tinta vaativa valmistus, joka johtaa myos suhteellisen korkeaan hintaan, rajoittavat voimakkaasti jodin-123:n 35 kayttoa vasta-aineiden leimaamiseen.
92075 2
Jodi-123:11a, joka energialtaan gammakameroille epåsuotuisan γ-såteilyn ja såteilykuormituksen kannalta epatoivottavan såteilyn vuoksi ei ole ideaalinen radionuk-lidi in vivo -diagnostiikkaan, tehdaan paljon vasta-aine-5 leimauksia, koska jodi-131:a voidaan valmistaa edullises-ti aktiivisuuspitoisuudeltaan suurena ja ominaisaktiivi-suudeltaan riittåvånå ja sita kautta' on saatavissa aikaan suhteellisen yksinkertainen ja edullinen leimaaminen.
Kaikkien jodilla leimattujen vasta-aineiden ratkai-10 sevana epåkohtana on se, etta radioaktiivinen jodi lohkeaa osittain in vivo vasta-aineista dejodausprossien kautta ja esiintyy sitten elimistosså jodidina, joka toisaalta va-rastoituu kilpirauhaseen ja toisaalta kohottaa tausta-aktiivisuutta, sillå jodidi poistuu suhteellisen hitaasti 15 veresta. Annettaessa jodileimattuja vasta-aineita taytyy tutkittavan henkilon kilpirauhanen joka tapauksessa suo-jata ennalta. Jodilla leimattujen vasta-aineiden tiettyna etuna on se, etta niiden varastoituminen maksaan ja munu-aisiin on tavanomaisena tutkimusajankohtana selvasti va-20 håisempåå kuin samanlaisten, mutta muilla radionuklideilla leimattujen vasta-aineiden.
^^In:ia on viime aikoina alettu kSyttaa paljon vasta-aineleimauksiin. Metallisena alkuaineena ei indium, toisin kuin jodi, ole ilman muuta sidottavissa proteiinei- ^ hin. Siihen tarvitaan bifunktionaalisia kelaatinmuodosta- jia, jotka toisaalta muodostavat kovalenttisen sidoksen proteiinin kanssa ja toisaalta pystyvSt sitomaan kationi- na esiintyvan indiumin voimakkaan kompleksin muodostavan ryhman kautta vasta-aineeseen. Tahan tarkoitukseen useim- . min kåytettava kompleksinmuodostaja on dietyleenitriamii- • « nipentaetikkahappo (DTPA). DTPA saatetaan reagoimaan bi-syklisenå anhydridina vasta-aineen kanssa. Talloin tapah-tuu ensin kovalenttisen amidisidoksen muodostuminen proteiinin paateasemassa olevien aminoryhmin kanssa, minka jalkeen reaktio veden kanssa vapauttaa DTPAtn jaljella 35 3 92075 olevan funktionaalisen happoryhmån. Vasta-aineeseen, josta on siten muodostettu johdannainen, voidaan sitten sitoa lujasti radionuklidi, joka lisStaan joukkoon ^^In-sitraat-tina. Indium tulee lisåtå labiilina kompleksiyhdisteena, 5 sillå muuten se saostuisi tarvittavien pH-arvojen vallites-sa. DTPA:n bisyklinen anhydridi ei ole paras mahdollinen reagenssi, silla siile voi bifunktionaalisuutensa takia tapahtua inter- ja intramolekulaarisia kytkeytymisreakti-oita.
Galliumilla ei indiumiin verrattuna ole etuja, mutta sen sijaan pyrkimyksena on potentiaalisten diagnos-tisten valmisteiden leimaaminen teknetium-99m:11a, silla ^mTc:stå on tullut suotuisien fysikaalisten ominaisuuk-siensa (hiukkassåteilyn puuttuminen, γ-sSteilyenergia 15 140 keV ja puoliintumisaika 6 tuntia) ja niihin liittyvån pienen sateilykuormituksen ansiosta tårkein radionuklidi radiologisessa diagnostiikassa.
Teknetium-99m, jota on saatavissa nuklidigeneraat-toreista, esiintyy ensin perteknetaattina, joka sopii sel-20 laisenaan esimerkiksi kilpirauhas- ja aivoskintigrafiaan. Muiden elinten skintigrafia teknetium-99m:aa kayttåen onnistuu tiettyjen "kuljettaja-aineiden" avulla, joilla on toisaalta kyky sitoa teknetiumia ja jotka toisaalta saavat aikaan radionuklidin hyvin selektiivisen rikastumi-25 Sen kohde-elimeen. Tahan tarkoitukseen on tahSn asti kay-tetty etupååsså aineita, jotka voidaan suoraan leimata teknetium-99m:11a ja ovat voimakkaasti elinspesifisia.
Niiden lisåksi on olemassa kuitenkin joukko aineita, jotka tosin ovat hyvin elinspesifisia, mutta eivat ole suoraan 30 leimattavissa. Nama aineet voivat o11a proteiineja (fibri-'.V. nogeeni, ihmisen seerumialbumiini) , entsyymeja (strepto- kinaasi, laktaattidehydrogenaasi), sokereita (dekstraani, glukoosi) tai myos polymeereja. Niihin kuuluu myos pieni-molekyylisiS aineita, kuten rasvahappoja, jotka sydamen 35 suuren energiantarpeen takia rikastuvat sydånlihaskudok-seen.
» 4 92075
Elinspesifisen "kuljettaja-aineen" leimaamiseksi teknetiuxn-99m: 11a tåytyy nuklidigeneraattorista eluoitunut perteknetaatti saattaa ensin alemmalle hapetusasteelle.
Tåssa pelkistetyssa muodossaan muodostaa teknetium enemmån 5 tai våhemmån stabiileja yhdisteitS elinspesifisen aineen kanssa. Skintigrafisiin luukuvauksiin kaytetaan esimerkiksi S 9m
Tc-fosforihappojohdannaisia, ennen kaikkea orgaanisia fosfonihappoja. Niinpa EP-julkaisussa 0 002 485 kuvatussa leimausyksikossa esiintyy elinspesifisenå "kuljettaja-10 aineena” 3,3-difosfono-1,2-propaanidikarboksyylihapon nat-riumsuola. EP-julkaisussa 0 108 253 kuvataan ^mTc-tri-ja -tetrafosfonihappojen kayttoa erityisesti maksan skin- 9 Qin tigrafisiin RES-kuvauksiin. Tc:n kompleksia dietyleeni-triamiinipentaetikkahapon (DTPA) kanssa kaytetaan munuais-15 sairauksien ja aivojen patalogisten prosessien diagnosoin-tiin.
Koska esimerkiksi vasta-aineiden suora leimaaminen teknetiumilla ei ole mahdollista, on yritetty saada aikaan, samoin kuin indi\amilla leimaamisen ollessa kyseesså, vasta-20 aineiden stabiili leimaaminen teknetiumilla kayttamålla apuna bifunktionaalisia kompleksinmuodostajia. Teknetium-leimaamisen erityisongelmana on se, etta reaktioliuokses-sa on normaalisti lasna tina(II)ioneja. Tina(II) on tahån asti ollut ainoa pelkistin, joka on mahdollistanut pertek-25 netaatin nopean ja kvantitatiivisen muuttumisen huoneen lampotilassa alemmalle ja siten reaktiiviselle hapetusasteelle. Pelkistetyn teknetiumin rinnalla lasnS olevat tina(II)- ja tina(IV)ionit kilpailevat vasta-aineeseen kytketyn kompleksin sitoutumiskohdista, niin etta komplek-30 sinmuodostajaa taytyy joko kåyttaa ylimaårin, mika voi . · · vaikuttaa vasta-aineen spesifisiin ominaisuuksiin, tai sitoutumattoman teknetiumin ja tinan muodostama kolloidi johtaa epatoivottavaan radioaktiivisuuden varastoitumi-seen muihin elimiin.
35 US-patenttijulkaisussa 4 479 930 kuvataan syklis- ten DTPA- ja EDTA-anhydridien kåyttdå kelatointiaineina » 4 5 92075 ^^In:n ja *^Ga:n lisåksi myos 99mTc:lle. EP-julkaisussa 0 035 765 kuvataan deferoksamiinin kayttoa korapleksointi-aineen teknetium-99m:n sitoraiseksi proteiineihin. Kansain-vålisesså patenttihakemuksessa WO 85/3063 kuvataan vasta-5 aineessa olevien osittain pelkistettyjen disulfidisiltojen saattamista reagoimaan tetrakloorinitridoteknetaatin natri umsuolan kanssa, joka tåytyy valmistaa ennalta pertekne-taatin ja natriumatsidin vålisellå reaktiolla. EP-hake-musjulkaisun 0 194 8653 mukaan kåytetåan samoin vasta-10 ainefragmentteihin pelkistyksellå muodostettuja vapaita tioliryhmia kelaattikompleksin, joka on verrattain vaikeas-ti syntetisoitavissa oleva ^(7-maleimidoheptyyli)imino-bis(etyleeninitrilojytetraetikkahappo, sitomiseen. Komp-leksin kytkeminen vasta-aineeseen tapahtuu SH-ryhmien 15 reaktiolla kompleksiyhdisteen maleimidiosassa olevan kak- soissidoksen kanssa, kun taas radioaktiivinen metalli-ioni kompleksoidaan nitriloetikkahapporyhman kautta.
Yksinkertaisempia menetelmia vasta-aineiden tai Q Om vasta-ainefragmenttien leimaamiseksi Tc:lla kuvataan 20 EP-julkaisussa 0 005 638 ja US-patenttijulkaisussa 4 478 815. Niissa kåytetaan tina(II)suoloja ylimaårin di-sulfidisiltojen pelkistavån katkaisun ja lisatyn ^Tc-perteknetaatin pelkistyksen tekemiseksi samanaikaisesti. Yleensa -S-S-sidoksen katkaisuun tarvitaan pitkahkdja 25 inkubointiaikoja (24 tuntia), jolloin F(ab')2~fragmentit pilkkoutuvat osittain F (ab* )-fragmenteiksi. Uuderomassa kirjallisuudessa /esimerkiksi Journal of Nuclear Medicine 27 (1986) 685 - 693 ja 1315 - 1320 seka International Journal of Nuclear Medicine Biology 12 (1985) 3-87 osoi-30 tetaan, ettå naiden kahden fragmentin suhde riippuu « « ·· "tinausreaktiosta" ja ettå naiden kahden komponentin suh- Q Qm de ei ^Tc-leimauksen jålkeen enåå muutu mainittavasti, Q Otti jolloin pååkomponenttina on Tc-leimattu F(ab')· Kaikis-sa tapauksissa on leimattu F(ab')-fragmentti tåytynyt jål-kipuhdistaa, sillå huolimatta 30 minsn reaktioajasta ei . ole saavutettu perteknetaatin kvantitatiivista reagointia.
6 92075 Tåhån asti ei ole ollut mahdollista valmistaa edella kuvatuilla leimausmenetelmillå valmisteita, joita voitaisiin kåyttåå rutiininomaisesti ilman tyolåitå menet-telyvaiheita.
5 Nyt on keksitty menetelmå teknetium-99m:11a leima- tun elinspesifisen aineen valmistamiseksi, jossa menetel-måsså elinspesifiseen aineeseen tax esikåsiteltyyn tai teknetium-99m-kompleksinmuodostajaan kytkettyyn elinspesifiseen aineeseen sekoitetaan perteknetaatti-99m:åå ja 10 kompleksia stabiloivaa pelkistintå.
Tallå tavalla voidaan leimata teknetium-99m:llå sellaisia elinspesifisiå aineita ("kantaja-aineita’’) , joiden molekyylisså esiintyy våhintåån yksi funktionaali-nen ryhmå, jolla on kompleksoitumisominaisuuksia. Useimmi-15 ten tållaisten ryhmien yhteydesså on kyse atomeista tai ioneista, jotka toimivat elektroniparin luovuttajina (Lewis-emåkset). Tållainen kompleksin muodostumisen ai-kaansaava ryhmå on esimerkiksi ryhmå -SCN, -NH2, -NHR, -nr2, -COO-, -OH, =S, -SH, tai -NO.
20 Tållaisten, funktionaalisia kompleksinmuodostus- ryhmiå sisåltåvien aineiden edustajista mainittakoon esimerkiksi: proteiinit (ryhmiå -NH-, -NH2 tai -COO-), ent-syymit (ryhmiå ~NH2, -OH tax -P=0), sokerit (-OH-ryhmiå) tai polymeerit, joissa on vastaavia funktionaalisia ryhmiå 25 sisåltåviå sivuketjuja.
Ellei leimattavassa yhdisteesså ole tållaista funk-tionaalista ryhmåå, tåytyy aine - ennen leimaamista -"esikåsitellå" tai kytkeå sopivaan kompleksinmuodostajaan.
"Esikåsittelyksi" ymmårretåån keksinnon yhteydesså 30 sellaiset toimenpiteet, jotka johtavat funktionaalisen « ryhmån, jolla on kompleksinmuodostusominaisuuksia, esiin-tymiseen leimattavassa molekyylisså. Vasta-aineet sisål-tåvåt esimerkiksi disulfidisiltoja. Nåmå kaksi kovalent-tisesti toisiinsa sitoutunutta rikkiatomia eivåt kuiten-35 kaan tåsså muodossa pysty kompleksoimaan teknetium-99m:åå.
7 92075
Jos disulfidisilta kuitenkin pelkistetåån, syntyy kaksi SH-ryhmåå, jotka puolestaan ovat erinomaisia kompleksi-ligandeja ja teknetium-99m:lie ja sitoutuvat tShån hyvål-lå saannolla.
5 Toisena mahdoliisuutena sitoa teknetium-99m elin- spesifisiin aineisiin, joissa ei ole kompleksin muodos-tavia funktionaalisia ryhmia, on tållaisen funktionaali-sen ryhman lisååminen molekyyliin tai kompleksointiaineen kemiallinen sitominen molekyyliin.
10 Keksinnon eraanå ydinkohtana on se, etta leimattava aine ei suoraan joudu kosketukseen pelkistimen - edulli-sesti tina(II)suolan - kanssa. Tina(II)suola sekoitetaan ensin erikseen sopivan reaktiokumppanin kanssa, jolloin muodostuu kompleksia stabiloiva pelkistin. Reaktiokumppani 15 voi olla fosforiyhdiste, kuten esimerkiksi fosfonaatti tai pyrofosfaatti, yleisesti hyva kompleksinmuodostaja, kuten esimerkiksi etyleenidiamiinitetraetikkahappo, tai jokin muu reagenssi, joka reagoi tina(II):n kanssa sillå taval-la, etta se pitåå tina(II):n fysiologisella pH-alueella 20 (6-8) liuoksessa ja pelkistimen siten toimintakykyisessa tilassa (kompleksia stabiloiva pelkistin).
Tama menetelma osoittautuu erityisen kiintoisaksi vasta-aineiden teknetium-99m-leimaamisen kannalta. Vasta-aineen tai F(ab')2"vasta_alnefra9mentln S-S-sidosten osit-“ 25 tainen pelkistys voidaan tehda huoneen lampStilassa anta- malla heikkojen pelkistimien vaikuttaa siihen våhån aikaa (elinspesifisen aineen esikasittely). Erityisen hyvin so-veltuvia pelkistimia ovat monotiolit, kuten 2-merkapto-etanoli ja 2-merkaptoetyyliamiini (kysteamiini). Taten 30 saadaan reaktiokykyisia vasta-ainemolekyyleja, jotka ei-vat ole menettåneet immunologista reaktiivisuuttaan ei-vatkå fragmentoituneet pienemmiksi fragmenteiksi. Peri-aatteessa vasta-aineen tai F(ab')2_vasta-ainefra9Iftentin osittaiseen pelkistykseen soveltuvat kaikki pelkistimet, 35 jotka pitkåhkonkin vaikutusajan kuluessa katkaisevat vain • · 8 92075 osan S-S-sidoksista eivåtkå johda vasta-ainekomponentin fragmentoitumiseen. Tållaisen pelkistimen vaikutusajan vasta-ainekomponenttiin ei tarvitse olla tuntia pidempi. Yleenså jo 10 - 30 min:n kuluttua on rauodostunut niin 5 paljon SH-ryhmiå, etta teknetium-99m-kationeja sitoutuu riittåva måara. Sitten ylimååråinen pelkistin erotetaan pois, ja osittain pelkistetty vasta-aine yhdistetåån pus-kuroituun liuokseen (esimerkiksi 0,02 M fosfaattiliuos, pH 7,2), jaetaan annoksiksi, ja kylmåkuivataan heti. Tål-10 loin tåytyy eståå vapaiden tioliryhmien hapettuminen ta-kaisin ilman hapen vaikutuksesta. Kylmåkuivattu vasta-aine, joka puskurisuoloja lukuun ottamatta ei sisållå li-såaineita ja joka såilytetåån kåyttåmållå typpeå suoja-kaasuna, såilyy muuttumattomana jååkaapin låmpotilassa 15 (-5 - +5°C) viikkoja; se liukenee moitteettomasti uudel- leen lisåttåesså isotoonista natriumkloridiliuosta.
Siten valmistettu, osittain pelkistetty vasta-ainekomponentti (esikåsitelty elinspesifinen aine) on sitten helppo leimata teknetium-99m:llå lisååmållå siihen 20 perteknetaatin ja tina(II)fosfonaatin tai -pyrofosfaatin seosta. Erityisen edullista on kåyttåå tina(II)fosfonaat-tina difosfonaattia, trifosfonaattia tai tetrafosfonaat-tia. Erityisen hyviksi ovat osoittautuneet metaanidifos-fonihapon, aminometaanidifosfonihapon, 3,3-difosfonopro-: 25 pionihapon, 3,3-difosfoni-l,2-propaanidikarboksyylihapon ja propaani-l,l,3,3-tetrafosfonihapon tina(II)suolat. Nåi-tå tinapitoisia fosfonaattikomplekseja kuvataan EP-julkai-suissa 0 002 485 ja 0 108 253, ja niitå kåytetåån laajas-ti teknetiumleimausvålineinå luusto- ja maksaskintigra-30 fiassa. Tina(Il)pitoinen pyrofosfaatti on samoin soveltu- •« • va, kun taas dietyleenitriamiinipentaetikkahapon tina- (Il)suola on soveltumaton.
Kåyttovalmiin diagnostisen valmisteen aikaansaa-miseksi voidaan ensin liuottaa kylmåkuivattu vasta-aine-35 komponentti teknetium-99m-perteknetaattiliuokseen ja saada 9 92075 sitten aikaan teknetiumin pelkistyminen ja sitoutuminen vasta-aineeseen lisMéimallå tina(II)komponentin liuosta.
Diagnostinen valmiste voidaan kuitenkin valmistaa myos silla tavalla, ettå vasta-ainekomponentti liuotetaan 5 ensin tina(Il)pitoiseen liuokseen ja leimataan sen jalkeen vasta-aine teknetiumilla lisaamallå teknetium-99m-tertek-netaattiliuosta.
Diagnostisen valmisteen, joka sisaltaa teknetium-99m:llå leimattua elinspesifista ainetta, valmistamiseksi 10 on tarkoituksenmukaista koota testivålineisto, joka sisaltaa kaksi erillistå, edullisesti kylmåkuivattua komponent- tia, joista toinen sisaltaa elinspesifista ainetta tai 9 9iti esikasiteltyå elinspesifista ainetta tai Tc-kompleksin- muodostajaan kytkettyå elinspesifista ainetta mahdollises- 15 ti seoksena puskurin kanssa ja toinen kompleksia stabiloi- vaa pelkistintå, edullisesti kompleksia stabiloivaa tina- (Il)suolaa, joka tarvitaan teknetiumin pelkistykseen ja sitomiseen elinspesifiseen aineeseen. Erityisen hyvaksi on osoittautunut testivålineisto, jossa kylmåkuivattu, 20 mahdollisesti esikasitelty elinspesifinen aine on seoksena puskuriaineena toimivan dinatriumvetyfosfaatin (pH 7,2) kanssa. Siten saadaan lyhyen reaktioajan, esimerkiksi jo 5 min:n, kuluttua låhes kvantitatiivisesti teknetium- 99m:lla leimattu aine, joka sisaltaa alle 1 % vapaata per- 9 9ni : * 25 teknetaattia ja vain sangen pienia maaria Tc:113 lei mattua tina(II)komponenttia epapuhtauksina, niin etteivat jatkopuhdistvismenettelyt ole enåå tarpeellisia.
Elinspesifisen aineen ja tina(II)komponentin pak-kaaminen erikseen mahdollistaa kylmakuivatun valmisteen 30 såilymisen muuttumattomana. Siten saadaan elinspesifisen ” aineen nopea, ongelmaton ja moitteeton leimaus. Pertekne- taatin pelkistykseen tarvittava tina(Il)maara on luonnolli-sesti pieni, muutamien mikrogrammojen luokkaa. Tinapitois-ta fosfonaattia tai pyrofosfaattia lisataån tina(II):n 35 mukaan laskettuna kulloinkin 1 - 100 ^ug, edullisesti 5-10 yug, yhtå ^ug:aa kohden elinspesifista komponenttia stabiilin teknetium-99m-leimauksen aikaansaamiseksi.
10 92075
Keksinnon mukaisesti kaytettavåt tina(II)fosfonaa-tit tai -pyrofosfaatit soveltuvat erityisen hyvin pelkis-tettyjen vasta-aineiden tai pelkistettyjen vasta-ainefrag-menttien leimaamiseen, koska ne muodostavat leimauksen 5 vaatiman neutraalin pH-arvon vallitessa stabiilin komp- leksin, joka sitoo pelkistetyn teknetiumkationin kuitenkin loyhåsti, niin etta se voidaan helposti vaihtaa vasta-aineessa tai sen fragmentissa olevan tioliryhmån kanssa.
Monissa leimausvålineistoissa låsnå olevasta sta-10 bilointiaineesta on etua myos vasta-aineiden leimauksen yhteydesså, sillå se takaa injektoitavan liuoksen pitkåh-kdn såilymisajan. EP-hakemusjulkaisussa 0 141 100 kuvatun N-(4-aminobentsoyyli)glutamiinihapon, jotka voidaan kåyt-tåå luustoskintigrafiassa kåytettåviå difosfonaatteja 15 stabiloivana komponenttina, avulla voidaan saavuttaa tek-netium-99m:llå leimattujen vasta-aineiden erinomainen såilyvyys.
Keksinnon mukaisesti valmistettua teknetium-99m:llå leimattua vasta-ainetta tai sen F(ab')2~vasta-ainefrag-20 menttia kåytetåån edullisesti kasvainten osoittamiseen in vivo. On edullista kåyttåå monoklonaalista vasta-ainetta tai sen F(ab1)2-fragmenttia, jotka reagoivat kas-vaimeen liittyvien antigeenien kanssa.
Esimerkki 1 i 25 20 mg karsinoembryonaalisen antigeenin (CEA) vas- taista monoklonaalista vasta-ainetta BW 431/31, jota kåytetåån paksusuoli-peråsuolisyopien diagnosointiin, puhdis-tettiin lisåaineista, kuten sakkaroosista, dialysoimalla huoneen låmpotilassa ja siirrettiin isotooniseen natrium-30 kloridiliuokseen. Tåtå vasta-ainetta kuvataan DE-hakemus-’· julkaisussa 3 416 774 ja julkaisussa Bosslet et al., Int.
J. of Cancer 36 (1985) 75 - 84.
Sen jålkeen pitoisuutena noin 5 mg/ml esiintyvå vasta-aine saatettiin reagoimaan kaikkiaan 20 mg;n kanssa 35 2-merkaptoetanolia huoneen låmpotilassa (30 min), ja ero-tettiin sen jålkeen ylimååråisestå pelkistimestå tekemållå 11 92075 geelisuodatus Bio-Gel P-2:lla, joka on Bio Rad -yhtion valmistama polyakryyliamidigeeli. 0,02 M fosfaattipusku-riin (pH 7,2) liuotettu vasta-aine jaettiin heti annoksik-si ja kylmåkuivattiin. Kylmåkuivatut naytteet sisålsivåt 5 tåyttoyksikkoå kohden 2 mg vasta-ainetta ja noin 1,4 mg dinatriumvetyfosfaattia.
Teknetium-99m-leimauksen tekemiseksi saatettiin kukin nåyte reagoimaan 7,5 ml:n kanssa perteknetaattilius-ta (kaikkiaan korkeintaan 3 000 MBq, noin 80 mCi). Tina-(ii) komponenttina kåytettiin kylmåkuivattua leimausyksik-koå, joka koostui 5 mg:sta 3,3-difosfonopropionihapon nat-riumsuolaa, 0,1 mg:sta tina(II)kationeja ja 0,5 mg:sta N-(4-aminobentsoyyli)-L-glutamiinihappoa. Tamå seos liuo-tettiin 5 ml:aan fysiologista natriumkloridiliuosta, ja 15 lisattiin heti sen jålkeen (minuutin kuluttua) 0,5 ml tStå liuosta vasta-aineliuokseen, niin ettå kokonaistila-vuudeksi tuli 8 ml. 10 min:n reaktioajan kuluttua mitat-tiin leimaussaanto ohutkerroskromatografisesti, Biogel P-10 -geelisuodatuksella ja korkeapainenestekromatogra-20 fialla (Zorbax GF 250, DuPont).
Yli 95 % teknetium-99m-aktiivisuudesta oli sitou-tunut proteiiniin, noin 1 % oli fosfonaattiin sitoutuneena ja alle 1 % perteknetaattina. Perteknetaatin osuus kasvoi vasta pitkahkon seisotusajan jålkeen uudelleen; noin 6 • ^5 tunnin kuluttua se oli noin 2 %, kun taas fosfonaattiin sitoutunut osuus pysyi muuttumattomana, 1 %:na.
Erilaisissa teknetium-99m:11a leimatuissa vasta-aineissa olevan immuunireaktiivisen osuuden maårittåminen mittaamalla sitoutuminen kasvainsoluihin antoi hyvin yh-30 teensopivia arvoja vastaavien jodi-131:llå ja indium- • « 111:11a leimattujen CEA-vasta-aineiden immuunireaktiivi-suuden kanssa (taulukko 1).
12 92075
Taulukko 1
Radionuklideilla ^^1, ^^in ja 99mTc leimattujen monoklonaalisten vasta-aineiden immuunireaktiivisuuden (%) vertaaminen 5 Monoklonaalinen vasta-aine_^^1__99lnTc BW 431/31 85 75 90 BW 431/26 85 70 95 BW 494/32 65 45 70 18 Taulukossa mainittua monoklonaalista vasta-ainetta BW 431/26 kuvataan DE-hakemusjulkaisussa 3 416 774, jossa siitå kåytetåån merkintaå MAK VIII. Monoklonaalista vasta-ainetta BW 494/32 kuvataan DE-patenttihakemuksessa P 3 531 301.3.
18 Esimerkki 2 (vertailuesimerkki)
Monoklonaalinen vasta-aine BW 431/31 kasiteltiin muuten samalla tavalla kuin esimerkissa 1, mutta sitå ei saatettu reagoimaan 2-merkaptoetanolin kanssa. Vapaita tioliryhmiå tasta syysta sisaltamåttomåsta vasta-aineesta 20 saatiin reaktiossa perteknetaatin kanssa, joka tehtiin yhta suuren tinadifosfonaattimåårån lasna ollessa ja esi-merkin 1 mukaisesti, tuote, jossa vain noin 1 % teknetium-99ifi:sta oli sitoutunut proteiiniin ja suurehko osa (yli 50 %) esiintyi teknetium-99m-difosfonaattina ja jossa pel-• 25 kistetyn, sitoutumattoman teknetiumin (31 %) lisaksi huomattava osa teknetiumista oli vapaassa perteknetaatissa (15 %).
Esimerkki 3
HaimasyopåMn liittyvan limakalvoantigeenin vastai-30 sen monoklonaalisen vasta-aineen BW 494/32 leimaamiseksi teknetium-99m:11a inkuboitiin 20 mg tåtå ainetta, joka oli liuotettu 2 ml:aan isotoonista natriumkloridiliuosta, 0,5 ml:n kanssa l-%:ista kysteamiinihydrokloridin vesiliu-osta 20 min huoneen lampotilassa. KromatografiapylvSållS 35 puhdistettu, muunnettu vasta-aine, joka oli liuotettu 13 92075
Na2HP04-puskuriliuokseen, kylmåkuivattiin 2 mg:n annoksi- na. Vasta-aineen teknetiumleimaukseen tarvittavana tina- (Il)komponenttina kåytettiin pyrofosfaattileimausvålineis- t5å, joka sisalsi 7,7 mg Na4P207:a ja 1,03 mg tina(II)- 5 kloridia pakkausta kohden. Yhden pakkauksen sisålto liuo- tettiin 10 ml:aan fysiologista natriumkloridiliuosta, ja lisattiin 0,25 ml tåtå liuosta, joka måårå vastaa noin 2+ 14 yug:a sn :a, vasta-aineeseen, joka oli ennalta liuo-tettu noin 8 ml:aan perteknetaattiliuosta (noin 2 000 MBq). 10 Noin 10 min:n reaktioajan jålkeen annettiin terveille rotille kullekin laskimonsisåisesti 0,1 ml liuosta, jonka koostumus oli seuraava: 25 ^,ug mab:ta 2,25 ^ug Na4P20^:a 15 0,175 ^ug tina(II):a ja noin 18 ^ug Na2HP04~puskuria.
Jakautuminen elimiin 24 tunnin kuluttua injektoin-nista (p.i.) esitetåån taulukossa 2. Siitå kåy ilmi, ettå varastoituminen luihin, kilpirauhaseen ja mahalaukkuun 20 on sangen våhåistå ja arastoituminen muihin elimiin on vertailukelpoinen jodi-131:llå leimatun vasta-aineen kans-sa. Teknetium-99m:llå leimatulle vasta-aineelle BW 494/32 mitattiin suurempi immuunireaktiivisuusarvo (vertaa tau-lukko 1) kuin jodi-131:llå tai indium-111:llå leimatuille • > • 25 vasta-aineille. 1 < 14 92075
Taulukko 2 99rnTc- ja ^^I-mab 494/32:n jakautuminen elimiin normaaleissa Wistar-rotissa 24 tuntia p.i. (% annetusta annoksesta elintå, tai g:aa kudosta kohden) 5
Elin 99mTc
Maksa %/g 0,49 0,23
Keuhkot 0,82 0,48
Perna 0,65 0,30 10 Munuaiset 4,25 0,70
Luut 0,57 0,20
Veri 1,97 0,92
Lihas 0,12 0,08 15 Maha %/koko elin 0,38 2,50
Kilpirauhanen 0,05 4,85
Suolisto 3,83 4,62
Virtsa 24,5 49,3
Esimerkki 4 20 50 mg samoin CEA:n vastaista monoklonaalista vasta- ainetta BW 431/26 pelkistettiin osittain kåsittelemållå 2-merkaptoetanolilla, puhdistettiin ja kylmåkuivattiin 2 mg:n annoksina fosfaattipuskurin (pH 7,2) låsnå ollessa.
Teknetium-99m-leimaus tehtiin muuten maksaskintig- : 25 rafiaan kåytettåvållå leimausyksikdllå, joka koostuu 13,5 mg:sta 1,1,3,3-propaanitetrafosfonihappotetranatrium- suolaa ja 0,6 mg:sta tina(II)klorididihydraattia. Yksi leimausyksikko liuotettiin 10 ml:aan isotoonista NaCl- liuosta, ja lisåttiin 0,5 ml tåtå liuosta, joka måårå vas-2+ 30 taa 15 ^ug:a Sn :a, kylmåkuivattuun vasta-aineeseen. Sen . jålkeen lisåttiin perteknetaattiliuosta (3000 MBq) kirk- kaaseen vasta-aine-tina(II)suolaliuokseen, ja annettiin Q Qm
Tc:lla leimattu vasta-aine laskimonsisåisesti karvatto-mille hiirille, joilla oli istutettu ihmisen paksusuoli-35 syopå. Kasvain oli jo 24 tunnin kuluttua injektoinnista hyvin havaittavissa skintigrafisesti. Taulukko 3 osoittaa 15 92075 tSmån vasta-aineen varastoitumisen kasvaimeen ja jakautu- 131 misen elimiin karvattomassa hiiressa ja sen, etta 1:11a, ^^Intllå ja 99mTc:lla leimatut valmisteet ovat keskenåan vertailukelpoisia.
5 Taulukko 3 "^^1-, ^^In- ja 99mTc-mab 431/26 :n rikastuminen kasvaimeen ja jakautuminen elimiin karvattomissa hiirissa (n = 2), joilla oli ihmisen paksusuolisyopå, ajan funktiona.
10 Aika injektoinnista 131i lllIn 99raTc (tuntia)_17 48 17_48 17_30
Kasvain %/g 14,9 8,8 9,8 13,0 11,0 14,9
Maksa %/g 4,6 3,0 8,5 8,4 7,2 5,4
Munuaiset %/g 3/4 1,9 12,2 16,4 10,6 7,7 15 Lihas %/g 1/3 0,84 1,4 1.2 0,9 1,0
Veri %/ml 14,6 13,0 20,5 9,2 17,0 15,0
Luut: kokonais-% 1/8 1/7 4,7 4,3 2,4 2,1
Esimerkki 5 20 mg monoklonaalisen vasta-aineen 431/31 Ftab'^” 20 fragmenttia inkuboitiin 15 min låmpotilassa 4°C 1 ml:n kanssa l-%:ista kysteamiinihydrokloridiliuosta. Vasta-aine-fragmentti, josta oli poistettu ylimaarainen pelkistin, kylmåkuivattiin yhdessS fosfaattipuskurin kanssa. Tekne-tiumleimaukseen kaytettiin leimausyksikkbå, joka koostui • nc • 13,0 mgssta 3,3-difosfono-l,2-propaanidikarboksyylihapon tetranatriumsuolaa, 0,23 mg:sta tina(Il)oksidia ja 1,0 mg:sta (N-(4-aminobentsoyyli)-L-glutamiinihapon mononat ri umsuolaa , josta kaytettiin 1/20 liuotettuna 0,5 ml:aan fysiologista keittosuolaliuosta. Leimattu vas-^ ta-ainefragmentti (ominaisaktiivisuus 1 000 MBq/mg) ei sisåltanyt kaytannbllisesti katsoen ollenkaan pertekne- 9 9ltl taattia, mutta sisalsi hieman enemman (noin 3 %) Tc-difosfonaattia. Immuunireaktiivisuus oli 60 %.
16 92075
Esimerkki 6
Proteiinin leimaaminen 99mTc:llå 250 mg IgG:ta liuotettiin pitoisuudeksi 10 mg/ml isotooniseen natriumkloridiliuokseen. Tata liuosta inku-5 boitiin noin 30 min låmpotilassa 4 - 25°C 2-merkaptoeta- nolin (0,5 - 1 ml) lisaamisen jalkeen. Sen jalkeen pelkis-tetty immunoglobuliini puhdistettiin tekemållå geelisuo-datus polyakryyliamidigeelipylvaalla (Bio-Gel P-2, Bio Rad) kåyttamalla eluenttina 0,02 M dinatriumvetyfosfonaat-10 tiliuosta (pH 7,2). Erotetun puhtaan IgG-fraktion pitoi-suus såådettiin samalla fosfaattipuskurilla laimentamalla arvoo- 4 mg IgG:ta/ml (noin 3 mg Na2HP04:a/ml), ja kylmå-kuivattiin tåmå liuos 0,5 ml:n annoksina.
Naytteen (2 mg IgG:tå) leimaamiseksi Tc:lla 15 liuotettiin kylmakuivaustuote 1 ml:aan tina(Il)metaanidi-fosfonaattiliuosta (pH 7), joka saatiin liuottamalla lei-mausyksikko, joka koostui 2,6 mg:sta metaanidifosfonihapon natriumsuolaa ja 0,04 mg:sta tina(II)kloridia, 5 ml:aan isotoonista natriumkloridiliuosta. Sen jalkeen joukkoon Q Qm 20 lisåttiin 4 - 9 ml Tc-perteknetaattiliuosta (noin 1 000 MBq). Noin 5 min:n reaktioajan kuluttua saatiin 9 9rn
Tc-leimattu IgG, jossa yli 95 % teknetiumista oli si-tout uneena proteiinin, alle 1 % fosfonaattiin ja alle 1 % vapaana perteknetaattina. Leimattu IgG oli stabiili 3 tun-• 25 tia valmistuksen jalkeen. Vasta pitkShkojen seisotusaiko- jen kuluttua oli liuoksessa jalleen havaittavissa vapaata perteknetaattia.
Esimerkki 7 1,4,8,11-tetra-atsasyklotetradekaanin (syklaamin) 30 leimaaminen ^9mTc:lla [ 8 mg syklaamia liuotettiin 0,5 ml:aan isotoonista keittosuolaliuosta, ja såådettiin liuoksen pH arvoon 11 kåyttåmållå 0,1 N NaOH-liuosta. Tåhån liuokseen lisåttiin 1 ml tina(II)-1,1,3,3-propaanitetrafosfonaattiliuosta 35 (pH = 6), joka saatiin liuottamalla leimausyksikko, joka 17 92075 koostui 2,9 mg:sta 1,1,3,3-propaanitetrafosfonihapon nat-riumsuolaa ja 0,12 mg:sta tina(II)klorididihydraattia, 5 ml:aan isotoonista natriumklorid!liuosta. Sen jalkeen • · ♦ Q Qtn joukkoon lisåttiin noin 590 MBq Tc-perteknetaattiliuos-5 ta (noin 0,3 ml), ja annettiin seoksen seistå 5 min huo- neen låmpotilassa. Leimatun syklaamin saanto oli yli 98 %, jolloin alle 1 % teknetiumista oli vapaana perteknetaat-tina tai fosfonaattiin sitoutuneena. Leimattu liuos sailyi useita tunteja.
10 Esimerkki 8
Pyrofosfaatin leimaaminen ^mTc:lla 10 mg pyrofosfaattia liuotettiin 1 ml:aan 0,9-%:ista keittosuolaliuosta, ja lisåttiin liuokseen 1 ml tina(II)- 1,1,3,3-propaanitetrafosfonaattiliuosta (katso esimerkki 7).
15 Tahån liuokseen lisåttiin 1 ml perteknetaattiliuosta (noin 300 MBq), ja annettiin seoksen seistå 5 min huoneen lampotilassa. Pyrofosfaatti leimautui 50-%:isesti 99m
Tc:llå. Leimatun fosfonaatin osuus oli alle 10 %. 1 ·
Claims (10)
1. Menetelmå teknetium-99m:11a leimatun vasta-ai-neen tai F(ab')2-vasta-ainefragmentin valmistamiseksi, 5 tunnettu siitå, ettå esikasitelty vasta-aine tai F(ab') 2-vasta-ainefragmentti saatetaan reagoimaan pertek-netaatti-99m:n ja pelkistavåna aineena toimivan tina(II)-fosfonaatin tai -pyrofosfaatin kanssa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelma, 10 tunnettu siitå, ettå tina(II)fosfonaattina kåyte-tåån difosfonaattia, trifosfonaattia tai tetrafosfonaat-tia.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelma, tunnettu siitå, ettå kåytetåån metaanidifosfoniha- 15 pon, aminometaanidifosfonihapon, 3,3-difosfono-l,2-propaa-nidikarboksyylihapon tai propaani-1,1,3,3-tetrafosfoniha-pon tina(II)suolaa.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, tunnettu siitå, ettå kåytetåån monoklonaalista 20 vasta-ainetta tai sen F(ab')2-fragmenttia.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, tunnettu siitå, ettå kåytetåån kasvaimeen liitty-vien antigeenien vastaista vasta-ainetta tai sen F(ab')2- . fragmenttia.
6. Testivålineisto, jota kåytetåån patenttivaati muksen 1 mukaisessa menetelmåsså, tunnettu siitå, ettå se koostuu kahdesta erillisestå, kylmåkuivatusta komponent ista, joista toinen sisåltåå vasta-ainetta tai F(ab')2-vasta-ainefragmenttia ja toinen pelkiståvånå ainee-.30 na toimivaa tina(II)fosfonaattia tai -pyrofosfaattia, joka ‘ tarvitaan teknetiumin pelkiståmiseen ja sitomiseen esikå- siteltyyn vasta-aineeseen tai F (ab') 2-vasta-ainefragment-tiin. 92075
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen testivalineisto, tunnettu siita, ettå kylmakuivattu vasta-ainekom-ponentti on seoksena puskuriaineena kåytettavån dinatrium-vetyfosfaatin kanssa.
8. Menetelma diagnostisen valmisteen valmistamisek- si, tunnettu siitM, ettå liuotetaan ensin vasta-ainetta tai F(ab')2-vasta-ainefragmenttia sisaltava kompo-nentti teknetium-99m-perteknetaattiliuokseen ja suorite-taan sitten teknetiumin pelkistys ja sitominen vasta-ai-10 neeseen tai Fiab')2-vasta-ainefragmenttiin lisaamalla pel-kistavanå aineena toiroivaa tina(II)fosfonaattia tai -pyro-fosfaattia.
9. Menetelma diagnostisen valmisteen valmistamisek-si, tunnettu siita, etta liuotetaan ensin vasta-15 ainetta tai F (ab') 2-vasta-ainefragmenttia sisMltava kompo-nentti pelkiståvana aineena toimivan tina(II)fosfonaatti-tai -pyrofosfaattiliuokseen ja leimataan sitten vasta-aine tai F (ab') 2-vasta-ainefragmentti teknetiumilla lisaamalla teknet ium-9 9m-perteknetaatt i1iuost a.
10. Patenttivaatimuksen 8 tai 9 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta tina(II)fosfonaattia tai -pyrofosfaattia kåytetaån, tina(II):n mukaan laskettuna, kulloinkin 1 - 100 μql edullisesti 5-10 μg, 1 mg:aa . kohti vasta-ainetta tai F(ab' )2-vasta-ainefragmenttia ta- 25 mån leimaamiseksi pysyvåsti teknetium-99m:11a. 92075
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3642173 | 1986-12-10 | ||
| DE3642173 | 1986-12-10 | ||
| DE19873728599 DE3728599A1 (de) | 1986-12-10 | 1987-08-27 | Verfahren zur herstellung einer mit technetium-99m-markierten organspezifischen substanz |
| DE3728599 | 1987-08-27 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI875396A0 FI875396A0 (fi) | 1987-12-08 |
| FI875396A FI875396A (fi) | 1988-06-11 |
| FI92075B FI92075B (fi) | 1994-06-15 |
| FI92075C true FI92075C (fi) | 1994-09-26 |
Family
ID=25850190
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI875396A FI92075C (fi) | 1986-12-10 | 1987-12-08 | Menetelmä teknetium-99m:llä leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5116596A (fi) |
| EP (1) | EP0271806B2 (fi) |
| JP (2) | JPH07100667B2 (fi) |
| KR (1) | KR880007456A (fi) |
| AU (1) | AU611112B2 (fi) |
| CA (1) | CA1310265C (fi) |
| DE (2) | DE3728599A1 (fi) |
| DK (1) | DK167851B1 (fi) |
| ES (1) | ES2053515T5 (fi) |
| FI (1) | FI92075C (fi) |
| GR (2) | GR3007608T3 (fi) |
| HU (1) | HUT46025A (fi) |
| IE (1) | IE60604B1 (fi) |
| IL (1) | IL84751A (fi) |
| NO (1) | NO177625C (fi) |
| PL (1) | PL269331A1 (fi) |
| PT (1) | PT86322B (fi) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5612016A (en) * | 1988-04-01 | 1997-03-18 | Immunomedics, Inc. | Conjugates of antibodies and bifunctional ligands |
| US5128119A (en) * | 1989-06-12 | 1992-07-07 | Immunomedics, Inc. | Methods for technetium/rhenium labeling of f(ab1)2 fragments |
| IL93432A (en) * | 1989-02-24 | 1994-02-27 | Johnson Mathey Inc | Hydrazines and hydrazides, their conjugates with macromolecules, and such conjugates labeled with metallic ions |
| US5206370A (en) | 1989-02-24 | 1993-04-27 | Johnson Matthey, Inc. | Certain pyridyl hydrazines and hydrazides useful for protein labeling |
| US5346687A (en) * | 1989-08-09 | 1994-09-13 | Rhomed Incorporated | Direct radiolabeling of antibody against stage specific embryonic antigen for diagnostic imaging |
| US5460785A (en) * | 1989-08-09 | 1995-10-24 | Rhomed Incorporated | Direct labeling of antibodies and other protein with metal ions |
| DK0486622T3 (da) * | 1989-08-09 | 1999-07-19 | Rhomed Inc | Direkte radiomærkning af antistoffer og andre proteiner med technetium eller rhenium |
| US5443816A (en) * | 1990-08-08 | 1995-08-22 | Rhomed Incorporated | Peptide-metal ion pharmaceutical preparation and method |
| US5078985A (en) * | 1989-08-09 | 1992-01-07 | Rhomed, Incorporated | Radiolabeling antibodies and other proteins with technetium or rhenium by regulated reduction |
| US6001979A (en) | 1989-08-29 | 1999-12-14 | Nycomed Amersham Plc | Cores for technetium radiopharmaceuticals |
| US5183653A (en) * | 1990-04-13 | 1993-02-02 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Boronic acid adducts of metal dioxime complexes useful in labelling proteins and other amine-containing compounds |
| EP0498333B1 (de) * | 1991-02-05 | 1997-01-15 | Cis Bio International | Verfahren zur Herstellung einer mit Technetium-99m markierten organspezifischen Substanz |
| US5849261A (en) * | 1991-02-08 | 1998-12-15 | Diatide, Inc. | Radiolabeled vasoactive intestinal peptides for diagnosis and therapy |
| US5443815A (en) * | 1991-11-27 | 1995-08-22 | Diatech, Inc. | Technetium-99m labeled peptides for imaging |
| US7238340B1 (en) | 1991-11-27 | 2007-07-03 | Cis Bio International | Monoamine, diamide, thiol-containing metal chelating agents |
| KR100238558B1 (ko) * | 1991-02-27 | 2000-02-01 | 에프.쥐.엠.헤르만스 | 단백질의 테크네튬-99m 표지화 |
| US5225180A (en) * | 1991-09-10 | 1993-07-06 | Diatech, Inc. | Technetium-99m labeled somatostatin-derived peptides for imaging |
| US5808091A (en) * | 1991-10-29 | 1998-09-15 | Bracco International B.V. | Rhenium and technetium complexes containing a hypoxia localizing moiety |
| US5783170A (en) * | 1991-11-27 | 1998-07-21 | Diatide, Inc. | Peptide-metal chelate conjugates |
| CA2127284C (en) * | 1992-01-03 | 2002-02-05 | Buck A. Rhodes | Protein- and peptide-metal ion pharmaceutical applications |
| US5643549A (en) * | 1992-02-20 | 1997-07-01 | Rhomed Incorporated | Leukostimulatory agent for in vivo leukocyte tagging |
| US5326856A (en) * | 1992-04-09 | 1994-07-05 | Cytogen Corporation | Bifunctional isothiocyanate derived thiocarbonyls as ligands for metal binding |
| US6313274B1 (en) | 1992-07-06 | 2001-11-06 | Thomas R. Sykes | Photoactivation of proteins for conjugation purposes |
| US5608110A (en) * | 1993-06-15 | 1997-03-04 | Bracco International B.V. | Heteroatom-bearing ligands and metal complexes thereof |
| US6080384A (en) * | 1997-03-25 | 2000-06-27 | American Biogenetic Sciences, Inc. | Methods for radionuclide-labeling of biomolecules and kits utilizing the same |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3903262A (en) * | 1972-03-13 | 1975-09-02 | Cutter Lab | Pharmaceutical compositions comprising intravenously injectable modified serum globulin, its production and use |
| US3863004A (en) * | 1972-03-20 | 1975-01-28 | Mallinckrodt Chemical Works | Denatured macroprotein with divalent tin for tagging with technetium-99m and method of preparation |
| US3928552A (en) * | 1973-10-18 | 1975-12-23 | Medi Physics Inc | Hepato-biliary radiopharmaceutical comprising 2-mercaptoisobutyric acid chelating reduced technetium-99m |
| FR2281134A1 (fr) * | 1974-08-06 | 1976-03-05 | Commissariat Energie Atomique | Procede de marquage au 99m technetium |
| US4062933A (en) * | 1975-05-27 | 1977-12-13 | Mallinckrodt, Inc. | Colloidal compositions with protective agents suitable for radioactive labeling |
| US4323546A (en) * | 1978-05-22 | 1982-04-06 | Nuc Med Inc. | Method and composition for cancer detection in humans |
| US4187294A (en) * | 1978-07-06 | 1980-02-05 | Nihon Nousan Kougyou Co., Ltd. | Method for producing eggs containing a high amount of iodinated amino acids |
| US4424200A (en) * | 1979-05-14 | 1984-01-03 | Nuc Med Inc. | Method for radiolabeling proteins with technetium-99m |
| US4311688A (en) * | 1979-10-29 | 1982-01-19 | Serono Laboratories Inc. | Composition and method for cancer detection in humans |
| JPS56125317A (en) * | 1980-03-08 | 1981-10-01 | Nippon Mejifuijitsukusu Kk | Stable radioactive diagnosticum with radioactive metallic mark |
| CH652599A5 (de) * | 1981-08-28 | 1985-11-29 | Solco Basel Ag | Verfahren zur herstellung physiologisch abbaubarer kolloidaler, human-serumalbumin enthaltender produkte und ihre verwendung. |
| US4440738A (en) * | 1982-06-10 | 1984-04-03 | Mallinckrodt, Inc. | Stable radiographic imaging agents |
| US4479930A (en) * | 1982-07-26 | 1984-10-30 | Trustees Of The University Of Massachusetts | Amines coupled wth dicyclic dianhydrides capable of being radiolabeled product |
| DE3237573A1 (de) * | 1982-10-09 | 1984-04-12 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Technetium-99m-tri- und tetraphosphonate zur szintigraphischen dastellung res-haltiger organe und der lymphgefaesse und verfahren zu deren herstellung |
| EP0111414A3 (en) * | 1982-12-08 | 1985-05-02 | Mallinckrodt, Inc. (a Delaware corporation) | Radiographic imaging agents |
| US4510125A (en) * | 1982-12-08 | 1985-04-09 | Mallinckrodt, Inc. | Process for making lyophilized radiographic imaging kit |
| DE3484511D1 (de) * | 1983-12-29 | 1991-05-29 | Commw Of Australia | Herstellung von mit 99m tc markierten radioarzneimitteln. |
| US4837003A (en) * | 1984-09-13 | 1989-06-06 | Mallinckrodt, Inc. | Radiolabeled antibody fragments |
| JPS61103841A (ja) * | 1984-10-26 | 1986-05-22 | Nippon Mejifuijitsukusu Kk | 放射性テクネチウム標識に供する安定な塩化第一スズ組成物 |
| ZA863205B (en) * | 1985-05-01 | 1987-08-26 | Univ New York State Res Found | Diagnostic radiopharmaceutical compounds |
-
1987
- 1987-08-27 DE DE19873728599 patent/DE3728599A1/de not_active Withdrawn
- 1987-12-08 ES ES87118142T patent/ES2053515T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-12-08 IL IL84751A patent/IL84751A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-12-08 DE DE8787118142T patent/DE3783745D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-12-08 EP EP87118142A patent/EP0271806B2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-12-08 FI FI875396A patent/FI92075C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-12-09 KR KR870013998A patent/KR880007456A/ko not_active Application Discontinuation
- 1987-12-09 DK DK646587A patent/DK167851B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-12-09 AU AU82263/87A patent/AU611112B2/en not_active Ceased
- 1987-12-09 IE IE334587A patent/IE60604B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-12-09 JP JP62309769A patent/JPH07100667B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1987-12-09 CA CA000553909A patent/CA1310265C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-12-09 PT PT86322A patent/PT86322B/pt unknown
- 1987-12-09 PL PL26933187A patent/PL269331A1/xx unknown
- 1987-12-09 NO NO875138A patent/NO177625C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-12-10 HU HU875566A patent/HUT46025A/hu unknown
-
1989
- 1989-10-27 US US07/427,990 patent/US5116596A/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-04-09 GR GR930400361T patent/GR3007608T3/el unknown
-
1995
- 1995-04-24 JP JP7098170A patent/JP2550481B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-03-29 GR GR960400850T patent/GR3019471T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI92075C (fi) | Menetelmä teknetium-99m:llä leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi | |
| JP3070763B2 (ja) | テクネチウムまたはレニウムでの抗体または他のタンパク質の直接放射能標識 | |
| KR860001151B1 (ko) | 메탈로티오나인 및 표적탐색용 생물학적 활성 분자의 추적-표지된 접합체의 제조방법 | |
| US4421735A (en) | Radiolabeled diagnostic compositions and method for making the same | |
| CA1260827A (en) | Antibody-metal ion complexes | |
| KR0151105B1 (ko) | 단백질의 직접적 방사선 라벨링 방법 | |
| US5277892A (en) | In vivo lymphocyte tagging | |
| JPH10501531A (ja) | モノアミン、ジアミド、チオール含有金属キレート剤 | |
| JPH0582368B2 (fi) | ||
| US5130118A (en) | Methods and materials for the preparation of metal labelled antibody solutions | |
| US5217704A (en) | Methods and materials for the preparation of metal labelled antibody solutions | |
| US5746996A (en) | Thiolation of peptides for radionuclide-based radiodetection and radiotherapy | |
| US5164175A (en) | Diagnostic aid containing an organ-specific substance labeled with technetium-99m | |
| CA2222966C (en) | Thiolation of peptides for radionuclide-based radiodetection and radiotherapy | |
| JPH0582370B2 (fi) | ||
| US5863517A (en) | Process for the preparation of an organ-specific substance labeled with technetium-99m | |
| Bubenshchikov et al. | Chelating Agents for Zirconium-89 in the Synthesis of Radiopharmaceuticals: Current State and Prospects of Development | |
| WC et al. | Three Approaches to Radiolabeling Antibodies with 99m Tc |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: CIS BIO INTERNATIONAL |
|
| FG | Patent granted |
Owner name: CIS BIO INTERNATIONAL |
|
| MA | Patent expired |