JP2550481B2 - 診断助剤 - Google Patents
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- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はテクネチウム−９９ｍで
標識された器官特異的な物質を含有する診断助剤に関す
る。
標識された器官特異的な物質を含有する診断助剤に関す
る。
【０００２】
【従来技術およびその問題点】抗体を分泌するマウスの
Ｂリンパ球をマウスのミエローマ細胞と融合させそして
この２種の細胞の融合生成物であるハイブリッドをさら
に生育させて抗体を産生させることからなる、１９７５
年にMilsteinおよびKoehler氏により発表された先駆的
方法により、多数の生成したハイブリッドから特定の特
異性を有する抗体を産生するものを単離することが可能
である。対応する抗原上の１個の特定のエピトープのみ
を認識するこれらモノクローナル抗体は今日では免疫シ
ンチグラフィー用に比較的大量に入手しうる。腫瘍関連
抗原に対するモノクローナル抗体は腫瘍所在診断ならび
に再発および転移の検出に適する。この目的には、その
抗原を担持する腫瘍が体内に存在するか否かを適当な核
医学診断像形成技術を用いて確認するために、抗体を注
射に先立ち放射性標識する必要がある。今日核医学診断
法において最もしばしば用いられる放射性核種のうちで
は、沃素同位元素がタンパク質の標識用に最も簡単に用
いられうる。その場合Ｉ−１２３が実際上の要求例えば
満足できる検出効率および少ない照射負荷に最も合致す
る、何故ならこのものは純粋なγ−線発生体でありそし
て１５９KeVなる好都合なγ−エネルギーを有するから
である。その半減期が１３.２時間と比較的短いことそ
してとりわけそれらの製造が粒子加速器に結びついてい
て、それゆえ価格が比較的高くなるため、抗体の標識に
Ｉ−１２３を使用することが強く制限される。
Ｂリンパ球をマウスのミエローマ細胞と融合させそして
この２種の細胞の融合生成物であるハイブリッドをさら
に生育させて抗体を産生させることからなる、１９７５
年にMilsteinおよびKoehler氏により発表された先駆的
方法により、多数の生成したハイブリッドから特定の特
異性を有する抗体を産生するものを単離することが可能
である。対応する抗原上の１個の特定のエピトープのみ
を認識するこれらモノクローナル抗体は今日では免疫シ
ンチグラフィー用に比較的大量に入手しうる。腫瘍関連
抗原に対するモノクローナル抗体は腫瘍所在診断ならび
に再発および転移の検出に適する。この目的には、その
抗原を担持する腫瘍が体内に存在するか否かを適当な核
医学診断像形成技術を用いて確認するために、抗体を注
射に先立ち放射性標識する必要がある。今日核医学診断
法において最もしばしば用いられる放射性核種のうちで
は、沃素同位元素がタンパク質の標識用に最も簡単に用
いられうる。その場合Ｉ−１２３が実際上の要求例えば
満足できる検出効率および少ない照射負荷に最も合致す
る、何故ならこのものは純粋なγ−線発生体でありそし
て１５９KeVなる好都合なγ−エネルギーを有するから
である。その半減期が１３.２時間と比較的短いことそ
してとりわけそれらの製造が粒子加速器に結びついてい
て、それゆえ価格が比較的高くなるため、抗体の標識に
Ｉ−１２３を使用することが強く制限される。
【０００３】Ｉ−１３１は、γ−線用カメラにとってそ
のγ−線照射エネルギーが不都合であることおよびその
β線照射が照射負荷の見地から望ましくないゆえに、イ
ン・ビボ診断にとって決して理想的でない放射性核種で
あるが、このＩ−１３１を用いて抗体の標識が広く行わ
れる。なぜなら、Ｉ−１３１は充分に高い比活性をもっ
て高い活性濃度で妥当な価格で得られ、それゆえ比較的
簡単で低価格での標識化が行われうるからである。
のγ−線照射エネルギーが不都合であることおよびその
β線照射が照射負荷の見地から望ましくないゆえに、イ
ン・ビボ診断にとって決して理想的でない放射性核種で
あるが、このＩ−１３１を用いて抗体の標識が広く行わ
れる。なぜなら、Ｉ−１３１は充分に高い比活性をもっ
て高い活性濃度で妥当な価格で得られ、それゆえ比較的
簡単で低価格での標識化が行われうるからである。
【０００４】ヨードで標識されたすべての抗体の決定的
な欠点は、放射性ヨードが生体内で一部分脱ヨード化過
程を受けて再び抗体から除去され、これが体内で沃化物
として存在して、このものが一方では甲状腺に蓄積し、
もう一方ではバックグラウンド活性を高めることであ
る。何故なら沃化物は血液から比較的徐々にしか排除さ
れないからである。ヨードで標識された抗体を投与する
場合は、すべての場合に検査すべき人物の甲状腺を予め
保護する必要がある。ヨード標識された抗体の確かな長
所は、慣用の検査時点までにおける肝臓および腎臓中へ
のその蓄積が、他の放射性核種を用いて標識された同じ
抗体の場合より明らかに低い点である。
な欠点は、放射性ヨードが生体内で一部分脱ヨード化過
程を受けて再び抗体から除去され、これが体内で沃化物
として存在して、このものが一方では甲状腺に蓄積し、
もう一方ではバックグラウンド活性を高めることであ
る。何故なら沃化物は血液から比較的徐々にしか排除さ
れないからである。ヨードで標識された抗体を投与する
場合は、すべての場合に検査すべき人物の甲状腺を予め
保護する必要がある。ヨード標識された抗体の確かな長
所は、慣用の検査時点までにおける肝臓および腎臓中へ
のその蓄積が、他の放射性核種を用いて標識された同じ
抗体の場合より明らかに低い点である。
【０００５】Ｉｎ−１１１は最近抗体の標識に広く使用
されている。インジウムはヨードと反対に金属元素であ
るので、直ちにはタンパク質に結合できない。この目的
には一方ではタンパク質と共有結合をすることができ、
そしてもう一方では強い、複合物形成性の基である、陽
イオン形態をしたインジウムを介して抗体に結合できる
二官能性キレート形成剤を必要とする。この目的に最も
しばしば用いられるコンプレキソンはジエチレントリア
ミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）である。ＤＴＰＡは二環性
無水物として抗体と反応する。その場合はじめにタンパ
ク質の末端アミノ基と共有アミド結合をし、一方次に水
との反応によりその残る酸官能基が遊離される。かくし
て誘導体形成された抗体はここで、Ｉｎ−１１１−サイ
トレートとして添加された放射性核種に安定して結合で
きる。インジウムは不安定な複合体化合物として提供さ
れねばならない。何故なら、さもなければ必要とされる
pH値で沈殿するであろうからである。ＤＴＰＡの二環式
無水物はその二官能性の基により分子間および分子内結
合反応をすることができるので決して理想的な試薬では
ない。
されている。インジウムはヨードと反対に金属元素であ
るので、直ちにはタンパク質に結合できない。この目的
には一方ではタンパク質と共有結合をすることができ、
そしてもう一方では強い、複合物形成性の基である、陽
イオン形態をしたインジウムを介して抗体に結合できる
二官能性キレート形成剤を必要とする。この目的に最も
しばしば用いられるコンプレキソンはジエチレントリア
ミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）である。ＤＴＰＡは二環性
無水物として抗体と反応する。その場合はじめにタンパ
ク質の末端アミノ基と共有アミド結合をし、一方次に水
との反応によりその残る酸官能基が遊離される。かくし
て誘導体形成された抗体はここで、Ｉｎ−１１１−サイ
トレートとして添加された放射性核種に安定して結合で
きる。インジウムは不安定な複合体化合物として提供さ
れねばならない。何故なら、さもなければ必要とされる
pH値で沈殿するであろうからである。ＤＴＰＡの二環式
無水物はその二官能性の基により分子間および分子内結
合反応をすることができるので決して理想的な試薬では
ない。
【０００６】ガリウムはインジウムに比較して何ら長所
を有しないが、テクネチウム−９９ｍはその物理的性質
が好ましいこと（粒子線がないこと、γ−エネルギー１
４０KeVそして半減期６時間であること）およびそれに
関連して照射負荷が小さいゆえに核医学診断法における
最も重要な放射性核種となっているので、有効な診断剤
をＴｃ−９９ｍにより標識することが熱望される。
を有しないが、テクネチウム−９９ｍはその物理的性質
が好ましいこと（粒子線がないこと、γ−エネルギー１
４０KeVそして半減期６時間であること）およびそれに
関連して照射負荷が小さいゆえに核医学診断法における
最も重要な放射性核種となっているので、有効な診断剤
をＴｃ−９９ｍにより標識することが熱望される。
【０００７】核種発生器から得られうるテクネチウム−
９９ｍははじめパーテクネテートとして存在し、このも
のはその形態で例えば甲状腺および脳のシンチグラフィ
ーに適する。テクネチウム−９９ｍを用いる他の器官の
シンチグラフィーは、一方ではテクネチウムと結合で
き、他方では標的器官に放射性核種を高い選択性をもっ
て濃縮しうる特定の「輸送物質」を用いて行うことがで
きる。この目的には、テクネチウム−９９ｍで直接標識
できかつ高い器官特異性を有する物質が主に使用されて
きた。しかしながらその他に高い器官特異性を有するが
しかし直接には標識できない多数の物質も存在する。こ
れらはタンパク質（フィブリノゲン、ヒト血清アルブミ
ン）、酵素（ストレプトキナーゼ、ラクテートデヒドロ
ゲナーゼ）、糖（デキストラン、グルコース）または重
合体でありうる。これには脂肪のような低分子物質も包
含され、これらは心臓のエネルギー要求が高いので心筋
組織中に濃縮される。
９９ｍははじめパーテクネテートとして存在し、このも
のはその形態で例えば甲状腺および脳のシンチグラフィ
ーに適する。テクネチウム−９９ｍを用いる他の器官の
シンチグラフィーは、一方ではテクネチウムと結合で
き、他方では標的器官に放射性核種を高い選択性をもっ
て濃縮しうる特定の「輸送物質」を用いて行うことがで
きる。この目的には、テクネチウム−９９ｍで直接標識
できかつ高い器官特異性を有する物質が主に使用されて
きた。しかしながらその他に高い器官特異性を有するが
しかし直接には標識できない多数の物質も存在する。こ
れらはタンパク質（フィブリノゲン、ヒト血清アルブミ
ン）、酵素（ストレプトキナーゼ、ラクテートデヒドロ
ゲナーゼ）、糖（デキストラン、グルコース）または重
合体でありうる。これには脂肪のような低分子物質も包
含され、これらは心臓のエネルギー要求が高いので心筋
組織中に濃縮される。
【０００８】器官特異的な「輸送物質」をテクネチウム
−９９ｍで標識するには、核種発生器から溶離されるパ
ーテクネテートをはじめにより低次の酸化状態に変換す
る必要がある。この還元された形態においてテクネチウ
ムは器官特異的な物質と多かれ少なかれ安定な化合物を
形成する。骨のシンチグラフィーには、例えばＴｃ−９
９ｍ／燐含有酸誘導体、とりわけ有機ホスホン酸が用い
られる。従ってヨーロッパ特許第２４８５号に記載され
る標識単位中の器官特異的な「輸送物質」は３,３−ジ
ホスホノ−１,２−プロパンジカルボン酸のナトリウム
塩である。ヨーロッパ特許第１０８,２５３号にはＲＥ
Ｓ、特に肝臓のシンチグラフィー像形成にＴｃ−９９ｍ
／トリおよびテトラホスホン酸が記載されている。ジエ
チレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）とＴｃ−９９
ｍとの複合物は腎臓疾患および脳の病的過程の診断法に
使用される。
−９９ｍで標識するには、核種発生器から溶離されるパ
ーテクネテートをはじめにより低次の酸化状態に変換す
る必要がある。この還元された形態においてテクネチウ
ムは器官特異的な物質と多かれ少なかれ安定な化合物を
形成する。骨のシンチグラフィーには、例えばＴｃ−９
９ｍ／燐含有酸誘導体、とりわけ有機ホスホン酸が用い
られる。従ってヨーロッパ特許第２４８５号に記載され
る標識単位中の器官特異的な「輸送物質」は３,３−ジ
ホスホノ−１,２−プロパンジカルボン酸のナトリウム
塩である。ヨーロッパ特許第１０８,２５３号にはＲＥ
Ｓ、特に肝臓のシンチグラフィー像形成にＴｃ−９９ｍ
／トリおよびテトラホスホン酸が記載されている。ジエ
チレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）とＴｃ−９９
ｍとの複合物は腎臓疾患および脳の病的過程の診断法に
使用される。
【０００９】例えば抗体をテクネチウムで直接標識する
ことは不可能なので、インジウム標識の場合と同様に、
二官能性複合物形成剤を使用して抗体の安定なテクネチ
ウム標識化をなす試みがなされている。テクネチウムを
用いて標識する場合の特別の問題点は、通常の方法では
スズ（II）−イオンが反応溶液中に存在する点にある。
スズ（II）はパーテクネテートを速やかでかつ定量的に
室温でより低次のそれゆえ反応性の酸化状態のものに変
換しうるこれまで唯一の還元剤である。還元されたテク
ネチウムの他に存在するスズ（II）およびスズ（IV）イ
オンが抗体に結合した複合物の結合部位を競合し、従っ
て複合物形成剤が過剰に使用されねばならなくてそれに
より抗体の特異的な性質が影響を受けることになるか、
または未結合のテクネチウムおよびスズが共通のコロイ
ドとして他の器官における望ましからぬ放射能蓄積を生
ずることになる。
ことは不可能なので、インジウム標識の場合と同様に、
二官能性複合物形成剤を使用して抗体の安定なテクネチ
ウム標識化をなす試みがなされている。テクネチウムを
用いて標識する場合の特別の問題点は、通常の方法では
スズ（II）−イオンが反応溶液中に存在する点にある。
スズ（II）はパーテクネテートを速やかでかつ定量的に
室温でより低次のそれゆえ反応性の酸化状態のものに変
換しうるこれまで唯一の還元剤である。還元されたテク
ネチウムの他に存在するスズ（II）およびスズ（IV）イ
オンが抗体に結合した複合物の結合部位を競合し、従っ
て複合物形成剤が過剰に使用されねばならなくてそれに
より抗体の特異的な性質が影響を受けることになるか、
または未結合のテクネチウムおよびスズが共通のコロイ
ドとして他の器官における望ましからぬ放射能蓄積を生
ずることになる。
【００１０】米国特許第４,４７９,９３０号明細書に
は、ＤＴＰＡおよびＥＤＴＡの環状無水物がＩｎ−１１
１およびＧａ−６７用のみならずＴｃ−９９ｍ用のキレ
ート形成剤であると記載されている。ヨーロッパ特許第
３５,７６５号にはタンパク質へのテクネチウム−９９
ｍ用の複合物形成剤としてデフェロキサミン(deferoxam
ine）の使用が記載されている。国際特許出願ＷＯ ８５
／３０６３号においては部分的には還元された抗体のジ
スルフィッド橋を、パーテクネテートとナトリウムアジ
ドとの反応により予め調製されねばならないテトラクロ
ロニトリドテクネテートのナトリウム塩と反応させてい
る。ヨーロッパ特許出願第１９４８５３号においては、
同様に還元により抗体フラグメント中に生成される遊離
のチオール基をキレート形成性複合物、すなわちかなり
合成に骨が折れる〔（７−マレイミドヘプチル）−イミ
ノ−ビス（エチレンニトリロ）〕テトラ酢酸との結合に
使用している。抗体への複合物の結合は複合物化合物の
マレイミド部分中の二重結合とＳＨ基との反応を介して
行われるが、一方放射性金属イオンはニトリロジ酢酸残
基を介して複合物形成される。
は、ＤＴＰＡおよびＥＤＴＡの環状無水物がＩｎ−１１
１およびＧａ−６７用のみならずＴｃ−９９ｍ用のキレ
ート形成剤であると記載されている。ヨーロッパ特許第
３５,７６５号にはタンパク質へのテクネチウム−９９
ｍ用の複合物形成剤としてデフェロキサミン(deferoxam
ine）の使用が記載されている。国際特許出願ＷＯ ８５
／３０６３号においては部分的には還元された抗体のジ
スルフィッド橋を、パーテクネテートとナトリウムアジ
ドとの反応により予め調製されねばならないテトラクロ
ロニトリドテクネテートのナトリウム塩と反応させてい
る。ヨーロッパ特許出願第１９４８５３号においては、
同様に還元により抗体フラグメント中に生成される遊離
のチオール基をキレート形成性複合物、すなわちかなり
合成に骨が折れる〔（７−マレイミドヘプチル）−イミ
ノ−ビス（エチレンニトリロ）〕テトラ酢酸との結合に
使用している。抗体への複合物の結合は複合物化合物の
マレイミド部分中の二重結合とＳＨ基との反応を介して
行われるが、一方放射性金属イオンはニトリロジ酢酸残
基を介して複合物形成される。
【００１１】抗体または抗体フラグメントをＴｃ−９９
ｍで標識するためのより簡単な方法はヨーロッパ特許第
５６３８号および米国特許第４,４７８,８１５号に記載
されている。そこではジスルフィッド橋の還元的開裂お
よび添加されたＴｃ−９９ｍ−パーテクネテートの還元
を同時に行うためにスズ（II）塩が過剰に使用される。
一般的には−Ｓ−Ｓ−結合の開裂には比較的長いインキ
ュベーション時間（２４時間）を必要とし、その際にＦ
（ａｂ′)2フラグメントが部分的にＦ（ａｂ′)フラグ
メントに開裂される。最近の文献の記載（例えば「Journ
al of Nuclear Medicine」27(1986)、685〜93および131
5〜20、および「International Journal of Nuclear Med
icine Biology」12(1985)３〜８)には、これら２種のフ
ラグメントの比率は「スズメッキ反応」の如何によるも
のであること、および２種の成分の比率はＴｃ−９９ｍ
標識後はもはやあまり変化しないことが示されており、
そこでの主成分はＴｃ−９９ｍ標識されたＦ（ａｂ′)
である。すべての場合に、標識されたＦ（ａｂ′）フラ
グメントは後で精製される必要がある、何故なら少なく
とも３０分間反応させた後にもかかわらずパーテクネテ
ートが定量的に変換されないからである。
ｍで標識するためのより簡単な方法はヨーロッパ特許第
５６３８号および米国特許第４,４７８,８１５号に記載
されている。そこではジスルフィッド橋の還元的開裂お
よび添加されたＴｃ−９９ｍ−パーテクネテートの還元
を同時に行うためにスズ（II）塩が過剰に使用される。
一般的には−Ｓ−Ｓ−結合の開裂には比較的長いインキ
ュベーション時間（２４時間）を必要とし、その際にＦ
（ａｂ′)2フラグメントが部分的にＦ（ａｂ′)フラグ
メントに開裂される。最近の文献の記載（例えば「Journ
al of Nuclear Medicine」27(1986)、685〜93および131
5〜20、および「International Journal of Nuclear Med
icine Biology」12(1985)３〜８)には、これら２種のフ
ラグメントの比率は「スズメッキ反応」の如何によるも
のであること、および２種の成分の比率はＴｃ−９９ｍ
標識後はもはやあまり変化しないことが示されており、
そこでの主成分はＴｃ−９９ｍ標識されたＦ（ａｂ′)
である。すべての場合に、標識されたＦ（ａｂ′）フラ
グメントは後で精製される必要がある、何故なら少なく
とも３０分間反応させた後にもかかわらずパーテクネテ
ートが定量的に変換されないからである。
【００１２】前記した標識化法により、骨の折れる工程
段階なしでルーチン的に用いられうる製剤を調製するこ
とはこれまでできなかった。
段階なしでルーチン的に用いられうる製剤を調製するこ
とはこれまでできなかった。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、初めに
器官特異的な物質を含有する成分をテクネチウム−９９
ｍ−パーテクネテート溶液中に溶解させ、そして次にス
ズ（II）−ホスホネートまたはスズ（II）−ピロホスヘ
ートからなる複合安定化還元剤を添加することによりテ
クネチウムを還元させそして器官特異的な物質に結合さ
せるか、あるいは、初めに器官特異的な物質を含有する
成分をスズ（II）−ホスホネートまたはスズ（II）−ピ
ロホスヘートからなる複合安定化還元剤の溶液中に溶解
させそして次にテクネチウム−９９ｍ−パーテクネテー
ト溶液を添加することにより器官特異的な物質をテクネ
チウムで標識することにより調製される診断助剤が提供
される。
器官特異的な物質を含有する成分をテクネチウム−９９
ｍ−パーテクネテート溶液中に溶解させ、そして次にス
ズ（II）−ホスホネートまたはスズ（II）−ピロホスヘ
ートからなる複合安定化還元剤を添加することによりテ
クネチウムを還元させそして器官特異的な物質に結合さ
せるか、あるいは、初めに器官特異的な物質を含有する
成分をスズ（II）−ホスホネートまたはスズ（II）−ピ
ロホスヘートからなる複合安定化還元剤の溶液中に溶解
させそして次にテクネチウム−９９ｍ−パーテクネテー
ト溶液を添加することにより器官特異的な物質をテクネ
チウムで標識することにより調製される診断助剤が提供
される。
【００１４】複合安定化還元剤は器官特異的な物質をテ
クネチウム−９９ｍで安定に標識するために器官特異的
物質１mg当りスズ（II）に基づき計算してそれぞれ１〜
１００μｇ好ましくは５〜１０μｇが用いられるのが好
ましい。
クネチウム−９９ｍで安定に標識するために器官特異的
物質１mg当りスズ（II）に基づき計算してそれぞれ１〜
１００μｇ好ましくは５〜１０μｇが用いられるのが好
ましい。
【００１５】今、器官特異的な物質、または予備処理さ
れるかまたはテクネチウム−９９ｍ用の複合物形成剤に
結合された器官特異的な物質を〔９９ｍ〕−パーテクネ
テートおよび複合安定化還元剤と混合することからな
る、テクネチウム−９９ｍで標識された器官特異的な物
質の製造法が見出された。
れるかまたはテクネチウム−９９ｍ用の複合物形成剤に
結合された器官特異的な物質を〔９９ｍ〕−パーテクネ
テートおよび複合安定化還元剤と混合することからな
る、テクネチウム−９９ｍで標識された器官特異的な物
質の製造法が見出された。
【００１６】この方法で、分子中に複合物形成性質を有
する少なくとも１個の官能基を有する器官特異的な物質
（「担体物質」）をテクネチウム−９９ｍで標識するこ
とができる。かかる基は大抵電子対供与機能を有する原
子またはイオンの形態をとっている（ルイス塩基）。複
合物形成性質を有するかかる官能基の例をあげれば、−
ＳＣＮ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−ＮＲ2、−ＣＯＯ−、−
ＯＨ、＝Ｓ、−ＳＨまたは−ＮＯ基である。官能性を有
する複合物形成基を有するかかる物質の代表的な例をあ
げれば、タンパク質（−ＮＨ−、−ＮＨ2または−ＣＯ
Ｏ−基）、酵素（−ＮＨ2、−ＯＨおよび−Ｐ＝Ｏ
基）、糖（−ＯＨ基）または適当な官能基を有する側鎖
を担持する重合体である。
する少なくとも１個の官能基を有する器官特異的な物質
（「担体物質」）をテクネチウム−９９ｍで標識するこ
とができる。かかる基は大抵電子対供与機能を有する原
子またはイオンの形態をとっている（ルイス塩基）。複
合物形成性質を有するかかる官能基の例をあげれば、−
ＳＣＮ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−ＮＲ2、−ＣＯＯ−、−
ＯＨ、＝Ｓ、−ＳＨまたは−ＮＯ基である。官能性を有
する複合物形成基を有するかかる物質の代表的な例をあ
げれば、タンパク質（−ＮＨ−、−ＮＨ2または−ＣＯ
Ｏ−基）、酵素（−ＮＨ2、−ＯＨおよび−Ｐ＝Ｏ
基）、糖（−ＯＨ基）または適当な官能基を有する側鎖
を担持する重合体である。
【００１７】標識すべき化合物がかかる官能基を有しな
い場合は、標識化に先立ち、物質を「予備処理」するか
または適当な複合物形成剤に結合させなければならな
い。
い場合は、標識化に先立ち、物質を「予備処理」するか
または適当な複合物形成剤に結合させなければならな
い。
【００１８】本発明で用いられる「予備処理」なる用語
は、複合物形成性質を有する官能基を標識すべき分子中
に生成させる措置を意味する。例えば、抗体はジスルフ
ィッド橋を含有している。しかしながら２個の相互に共
有結合している硫黄原子はこの形態ではテクネチウム−
９９ｍと複合体形成する能力を有しない。しかしなが
ら、ジスルフィッド橋を還元した場合には２個のＳＨ基
が生成し、このものはそれ自体でテクネチウム−９９ｍ
にとってすぐれた複合物形成性リガンドでありかつその
上このものを良好な収率で結合させる。
は、複合物形成性質を有する官能基を標識すべき分子中
に生成させる措置を意味する。例えば、抗体はジスルフ
ィッド橋を含有している。しかしながら２個の相互に共
有結合している硫黄原子はこの形態ではテクネチウム−
９９ｍと複合体形成する能力を有しない。しかしなが
ら、ジスルフィッド橋を還元した場合には２個のＳＨ基
が生成し、このものはそれ自体でテクネチウム−９９ｍ
にとってすぐれた複合物形成性リガンドでありかつその
上このものを良好な収率で結合させる。
【００１９】複合物形成性質を有する官能基を何ら有し
ない器官特異的な物質にテクネチウム−９９ｍを結合さ
せるもう一つの可能な方法は、かかる官能基を分子中に
組み込むか、または複合物形成剤を分子に化学的に結合
させることである。本発明の重要なポイントは、標識す
べき物質が還元剤、好ましくはスズ（II）塩と直接接触
しないことにある。はじめにスズ（II）塩を適当な反応
相手と混合すると複合安定化還元剤が形成される。反応
相手はホスホネートまたはピロホスヘートである。これ
らはスズ（II）を生理的pH値（６〜８）で溶液中に保持
してそれにより還元剤が官能性状態を保持する。
ない器官特異的な物質にテクネチウム−９９ｍを結合さ
せるもう一つの可能な方法は、かかる官能基を分子中に
組み込むか、または複合物形成剤を分子に化学的に結合
させることである。本発明の重要なポイントは、標識す
べき物質が還元剤、好ましくはスズ（II）塩と直接接触
しないことにある。はじめにスズ（II）塩を適当な反応
相手と混合すると複合安定化還元剤が形成される。反応
相手はホスホネートまたはピロホスヘートである。これ
らはスズ（II）を生理的pH値（６〜８）で溶液中に保持
してそれにより還元剤が官能性状態を保持する。
【００２０】この方法は抗体のテクネチウム−９９ｍに
よる標識化に特に重要であると思われる。抗体またはＦ
（ａｂ′)2抗体フラグメントのＳ−Ｓ−結合の部分的還
元は緩和な還元剤を室温で短時間作用させることにより
達成されうる（器官特異的な物質の予備処理）。特に適
当な還元剤は２−メルカプトエタノールまたは２−メル
カプトエチルアミン（システアミン）のようなモノチオ
ールである。その場合それらの免疫学的反応性が失われ
ることもなくまたより小さなフラグメントに断片化され
ることもない反応性の抗体分子が得られる。原則的に
は、抗体またはＦ（ａｂ′)2抗体フラグメントの部分的
還元には比較的長い時間作用させてもＳ−Ｓ結合の一部
のみしか開裂させずそして抗体成分の断片化を何ら生じ
ないすべての還元剤が適する。抗体成分へのかかる還元
剤の作用時間は１時間を超える必要はない。一般にすで
に１０〜３０分後には、多数のＳＨ基が生成しており、
従って充分な量のテクネチウム−９９ｍ陽イオンが結合
される。次に過剰の還元剤を除去し、そして緩衝溶液
（例えばpH７.２の０.０２Ｍ燐酸塩溶液）中の部分的に
還元された抗体を単離し、直ちに凍結乾燥する。その間
抗体中の遊離のチオール基が空気中の酸素により再酸化
されるのを抑止する必要がある。緩衝塩の他には何ら他
の添加剤を含有せずそして保護気体としての窒素で被覆
されている凍結乾燥された抗体は冷蔵温度（−５〜＋５
℃）で何週間も未変化のままに保持されうる。このもの
は等張食塩溶液の添加により再び充分に溶解する。
よる標識化に特に重要であると思われる。抗体またはＦ
（ａｂ′)2抗体フラグメントのＳ−Ｓ−結合の部分的還
元は緩和な還元剤を室温で短時間作用させることにより
達成されうる（器官特異的な物質の予備処理）。特に適
当な還元剤は２−メルカプトエタノールまたは２−メル
カプトエチルアミン（システアミン）のようなモノチオ
ールである。その場合それらの免疫学的反応性が失われ
ることもなくまたより小さなフラグメントに断片化され
ることもない反応性の抗体分子が得られる。原則的に
は、抗体またはＦ（ａｂ′)2抗体フラグメントの部分的
還元には比較的長い時間作用させてもＳ−Ｓ結合の一部
のみしか開裂させずそして抗体成分の断片化を何ら生じ
ないすべての還元剤が適する。抗体成分へのかかる還元
剤の作用時間は１時間を超える必要はない。一般にすで
に１０〜３０分後には、多数のＳＨ基が生成しており、
従って充分な量のテクネチウム−９９ｍ陽イオンが結合
される。次に過剰の還元剤を除去し、そして緩衝溶液
（例えばpH７.２の０.０２Ｍ燐酸塩溶液）中の部分的に
還元された抗体を単離し、直ちに凍結乾燥する。その間
抗体中の遊離のチオール基が空気中の酸素により再酸化
されるのを抑止する必要がある。緩衝塩の他には何ら他
の添加剤を含有せずそして保護気体としての窒素で被覆
されている凍結乾燥された抗体は冷蔵温度（−５〜＋５
℃）で何週間も未変化のままに保持されうる。このもの
は等張食塩溶液の添加により再び充分に溶解する。
【００２１】かくして調製された、部分的に還元された
抗体成分（予備処理された器官特異的な物質）はそこ
で、これにパーテクネテートおよびスズ（II）−ホスホ
ネートまたは−ピロホスヘートの混合物を添加すること
によりテクネチウム−９９ｍで円滑に標識されうる。ス
ズ（II）−ホスホネートとしては、ジホスホネート、ト
リホスホネート、またはテトラホスホネートを用いるの
が特に好都合である。メタンジホスホン酸、アミノメタ
ンジホスホン酸、３,３−ジホスホノプロピオン酸、３,
３−ジホスホノ−１,２−プロパンジカルボン酸または
プロパン−１,１,３,３−テトラホスホン酸のスズ（I
I）塩が特別に良いことが判った。これらスズ含有ホス
ホネート複合物はすでにヨーロッパ特許第２４８５号お
よび同第１０８２５３号に記載されておりそして骨格お
よび肝臓シンチグラフィー用のテクネチウム標識化キッ
トとして広く使用されている。スズ（II）含有ピロホス
ヘートも同じく適するが、一方ジエチレントリアミンペ
ンタ酢酸のスズ（II）塩に適しない。
抗体成分（予備処理された器官特異的な物質）はそこ
で、これにパーテクネテートおよびスズ（II）−ホスホ
ネートまたは−ピロホスヘートの混合物を添加すること
によりテクネチウム−９９ｍで円滑に標識されうる。ス
ズ（II）−ホスホネートとしては、ジホスホネート、ト
リホスホネート、またはテトラホスホネートを用いるの
が特に好都合である。メタンジホスホン酸、アミノメタ
ンジホスホン酸、３,３−ジホスホノプロピオン酸、３,
３−ジホスホノ−１,２−プロパンジカルボン酸または
プロパン−１,１,３,３−テトラホスホン酸のスズ（I
I）塩が特別に良いことが判った。これらスズ含有ホス
ホネート複合物はすでにヨーロッパ特許第２４８５号お
よび同第１０８２５３号に記載されておりそして骨格お
よび肝臓シンチグラフィー用のテクネチウム標識化キッ
トとして広く使用されている。スズ（II）含有ピロホス
ヘートも同じく適するが、一方ジエチレントリアミンペ
ンタ酢酸のスズ（II）塩に適しない。
【００２２】すぐ使用できる診断助剤を調製するには、
初めに凍結乾燥された抗体成分をテクネチウム−９９ｍ
−パーテクネテート溶液中に溶解させ、そして次にスズ
（II）成分の溶液を添加することによりテクネチウムの
還元および抗体への結合が行われる。
初めに凍結乾燥された抗体成分をテクネチウム−９９ｍ
−パーテクネテート溶液中に溶解させ、そして次にスズ
（II）成分の溶液を添加することによりテクネチウムの
還元および抗体への結合が行われる。
【００２３】しかしまた診断助剤は抗体成分を初めにス
ズ（II）を含有する溶液中に溶解させ、そして次にテク
ネチウム−９９ｍ−パーテクネテート溶液を添加して抗
体をテクネチウムで標識することにより調製することも
できる。
ズ（II）を含有する溶液中に溶解させ、そして次にテク
ネチウム−９９ｍ−パーテクネテート溶液を添加して抗
体をテクネチウムで標識することにより調製することも
できる。
【００２４】テクネチウム−９９ｍで標識された器官特
異的な物質を含有する診断助剤を調製するには、２種の
別々の、好ましくは凍結乾燥された成分を含有するテス
トキットを作成するのが好ましい。該２種の成分のうち
の一方は器官特異的な物質、または予備処理された器官
特異的な物質、またはＴｃ−９９ｍ用の複合物形成剤に
結合した器官特異的な物質を、場合により緩衝剤と混合
して含有しそしてもう一方は複合安定化された（テクネ
チウムの還元および器官特異的な物質への結合に必要
な）還元剤好ましくは複合安定化スズ（II）塩を含有す
る。凍結乾燥され、場合により予備処理された器官特異
的な物質が緩衝物質としての燐酸水素ジナトリウム（pH
７.２）と混合されて存在するテストキットが特に良い
ことが判った。このようにして、短い反応時間、例えば
５分後にはすでにテクネチウム−９９ｍによる物質の標
識化が事実上定量的に進行し、標識された物質は不純物
として遊離のパーテクネテートを１％未満しか有せずか
つＴｃ−９９ｍ標識されたスズ（II）成分を極くわずか
な量にしか含有していないので続く精製工程はもはや必
要ない。
異的な物質を含有する診断助剤を調製するには、２種の
別々の、好ましくは凍結乾燥された成分を含有するテス
トキットを作成するのが好ましい。該２種の成分のうち
の一方は器官特異的な物質、または予備処理された器官
特異的な物質、またはＴｃ−９９ｍ用の複合物形成剤に
結合した器官特異的な物質を、場合により緩衝剤と混合
して含有しそしてもう一方は複合安定化された（テクネ
チウムの還元および器官特異的な物質への結合に必要
な）還元剤好ましくは複合安定化スズ（II）塩を含有す
る。凍結乾燥され、場合により予備処理された器官特異
的な物質が緩衝物質としての燐酸水素ジナトリウム（pH
７.２）と混合されて存在するテストキットが特に良い
ことが判った。このようにして、短い反応時間、例えば
５分後にはすでにテクネチウム−９９ｍによる物質の標
識化が事実上定量的に進行し、標識された物質は不純物
として遊離のパーテクネテートを１％未満しか有せずか
つＴｃ−９９ｍ標識されたスズ（II）成分を極くわずか
な量にしか含有していないので続く精製工程はもはや必
要ない。
【００２５】器官特異的な物質およびスズ（II）成分を
別々の容器中に保持することにより、凍結乾燥された調
製物が未変化のまま貯蔵されうる。それにより器官特異
的な物質の速やかで、問題のない、満足できる標識化が
保証される。パーテクネテートの還元に必要な量のスズ
（II）は当然わずかであり、数μｇの準位である。スズ
含有ホスホネートまたはピロホスヘートはテクネチウム
−９９ｍで安定な標識化を行うためには器官特異的成分
１mg当りスズ（II）に基づきそれぞれ１〜１００μｇ好
ましくは５〜１０μｇ添加される。
別々の容器中に保持することにより、凍結乾燥された調
製物が未変化のまま貯蔵されうる。それにより器官特異
的な物質の速やかで、問題のない、満足できる標識化が
保証される。パーテクネテートの還元に必要な量のスズ
（II）は当然わずかであり、数μｇの準位である。スズ
含有ホスホネートまたはピロホスヘートはテクネチウム
−９９ｍで安定な標識化を行うためには器官特異的成分
１mg当りスズ（II）に基づきそれぞれ１〜１００μｇ好
ましくは５〜１０μｇ添加される。
【００２６】本発明により用いられるスズ（II）−ホス
ホネートまたは−ピロホスヘートは還元された抗体また
は還元された抗体フラグメントの標識化に特に良好に適
する、何故ならそれらは標識化に必要な中性pH値で安定
な複合物を形成するが、しかしながら還元されたテクネ
チウム陽イオンをゆるくしか結合しないのでそのものは
抗体またはそのフラグメント中のチオール基で容易に交
換されうるからである。
ホネートまたは−ピロホスヘートは還元された抗体また
は還元された抗体フラグメントの標識化に特に良好に適
する、何故ならそれらは標識化に必要な中性pH値で安定
な複合物を形成するが、しかしながら還元されたテクネ
チウム陽イオンをゆるくしか結合しないのでそのものは
抗体またはそのフラグメント中のチオール基で容易に交
換されうるからである。
【００２７】いくつかの標識化キット中に存在する安定
剤により注射溶液の安定性が比較的長い間保証されうる
ので、これら安定剤は抗体の標識化にも好都合である。
骨格シンチグラフィーに用いられるジホスホネート中に
安定化成分として使用されうるものである、ヨーロッパ
特許出願第１４１,１００号記載のＮ−（４−アミノベ
ンゾイル）−グルタミン酸によりテクネチウム−９９ｍ
で標識された抗体の安定性が著しく高められうる。
剤により注射溶液の安定性が比較的長い間保証されうる
ので、これら安定剤は抗体の標識化にも好都合である。
骨格シンチグラフィーに用いられるジホスホネート中に
安定化成分として使用されうるものである、ヨーロッパ
特許出願第１４１,１００号記載のＮ−（４−アミノベ
ンゾイル）−グルタミン酸によりテクネチウム−９９ｍ
で標識された抗体の安定性が著しく高められうる。
【００２８】テクネチウム−９９ｍで標識された本発明
により調製された抗体またはそのＦ（ａｂ′)2抗体フラ
グメントは腫瘍のイン・ビボ検出に用いられるのが好ま
しい。腫瘍関連抗原と反応するモノクローナル抗体また
はそのＦ（ａｂ′)2フラグメントが用いられるのが好ま
しい。
により調製された抗体またはそのＦ（ａｂ′)2抗体フラ
グメントは腫瘍のイン・ビボ検出に用いられるのが好ま
しい。腫瘍関連抗原と反応するモノクローナル抗体また
はそのＦ（ａｂ′)2フラグメントが用いられるのが好ま
しい。
【００２９】
実施例１ 結腸直腸癌の診断に使用される、癌胚抗原（ＣＥＡ）に
対するモノクローナル抗体ＢＷ ４３１／３１の２０mg
を室温で透析することによりスクロースのような添加剤
を除去し、そして等張食塩溶液中に移した。この抗体は
西ドイツ特許公開第３,４１６,７７４号公報に記載され
ておりそしてBosslet氏他により「Int.J. of Cancer」 3
6、 75〜84(1985)に記載されている。次に約５mg／mlの
濃度で存在する抗体を室温で合計２０mgの２−メルカプ
トエタノールと反応（３０分間）させ、次にBio Rad社
のポリアクリルアミドゲルであるBio-Gel Ｐ−２でゲル
濾過することにより過剰の還元剤を除去した。０.０２
Ｍ燐酸塩緩衝液（pH７.２）中に溶解した抗体を直ちに
単離して凍結乾燥した。この凍結乾燥された試料は１容
器当り抗体２mgおよび燐酸水素ジナトリウム約１.４mg
を含有する。
対するモノクローナル抗体ＢＷ ４３１／３１の２０mg
を室温で透析することによりスクロースのような添加剤
を除去し、そして等張食塩溶液中に移した。この抗体は
西ドイツ特許公開第３,４１６,７７４号公報に記載され
ておりそしてBosslet氏他により「Int.J. of Cancer」 3
6、 75〜84(1985)に記載されている。次に約５mg／mlの
濃度で存在する抗体を室温で合計２０mgの２−メルカプ
トエタノールと反応（３０分間）させ、次にBio Rad社
のポリアクリルアミドゲルであるBio-Gel Ｐ−２でゲル
濾過することにより過剰の還元剤を除去した。０.０２
Ｍ燐酸塩緩衝液（pH７.２）中に溶解した抗体を直ちに
単離して凍結乾燥した。この凍結乾燥された試料は１容
器当り抗体２mgおよび燐酸水素ジナトリウム約１.４mg
を含有する。
【００３０】テクネチウム−９９ｍで標識するには、こ
の試料を合計３０００MBq(約８０mCi)までを含有するパ
ーテクネテート溶液７.５mlとそれぞれ反応させた。ス
ズ（II）成分としては３,３−ジホスホノプロピオン酸
のナトリウム塩５mg、スズ（II）陽イオン０.１mgおよ
びＮ−（４−アミノベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
０.５mgからなる凍結乾燥された標識化用単位が用いら
れた。この混合物を生理食塩溶液５ml中に溶解させそし
て直後（１分後）にこの溶液０.５mlを抗体溶液に加え
ると全量が８mlとなった。１０分間反応させたのち、薄
層クロマトグラフィー、Biogel Ｐ−１０でのゲル濾
過、およびデュポン社のZorbax ＧＦ ２５０での高圧液
体クロマトグラフィーにより標識化収率を検査した。
の試料を合計３０００MBq(約８０mCi)までを含有するパ
ーテクネテート溶液７.５mlとそれぞれ反応させた。ス
ズ（II）成分としては３,３−ジホスホノプロピオン酸
のナトリウム塩５mg、スズ（II）陽イオン０.１mgおよ
びＮ−（４−アミノベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸
０.５mgからなる凍結乾燥された標識化用単位が用いら
れた。この混合物を生理食塩溶液５ml中に溶解させそし
て直後（１分後）にこの溶液０.５mlを抗体溶液に加え
ると全量が８mlとなった。１０分間反応させたのち、薄
層クロマトグラフィー、Biogel Ｐ−１０でのゲル濾
過、およびデュポン社のZorbax ＧＦ ２５０での高圧液
体クロマトグラフィーにより標識化収率を検査した。
【００３１】テクネチウム−９９ｍの９５％以上の活性
がタンパク質に結合されており、約１％がホスホネート
に結合されて存在し、一方１％未満がパーテクネテート
であった。パーテクネテートの割合は比較的長時間放置
してはじめて再び上昇する。６時間後で約２％となる
が、ホスホネートに結合した割合は１％のままであっ
た。
がタンパク質に結合されており、約１％がホスホネート
に結合されて存在し、一方１％未満がパーテクネテート
であった。パーテクネテートの割合は比較的長時間放置
してはじめて再び上昇する。６時間後で約２％となる
が、ホスホネートに結合した割合は１％のままであっ
た。
【００３２】テクネチウム−９９ｍで標識された種々の
抗体中における免疫反応性の割合を腫瘍細胞への結合を
測定することにより判定すると、Ｉ−１３１およびＩｎ
−１１１で標識された相当するＣＥＡ抗体での免疫反応
性割合とよく一致した（表１）。
抗体中における免疫反応性の割合を腫瘍細胞への結合を
測定することにより判定すると、Ｉ−１３１およびＩｎ
−１１１で標識された相当するＣＥＡ抗体での免疫反応
性割合とよく一致した（表１）。
【表１】 この表に記載されるモノクローナル抗体ＢＷ ４３１／
２６は西ドイツ特許公開第３,４１６,７７４号公報に記
載されており、そこではＭＡｂ VIIIと呼ばれている。
モノクローナル抗体ＢＷ ４９４／３２は西ドイツ特許
出願Ｐ ３５３１３０１.３号に記載されている。
２６は西ドイツ特許公開第３,４１６,７７４号公報に記
載されており、そこではＭＡｂ VIIIと呼ばれている。
モノクローナル抗体ＢＷ ４９４／３２は西ドイツ特許
出願Ｐ ３５３１３０１.３号に記載されている。
【００３３】実施例２（比較例） モノクローナル抗体ＢＷ ４３１／３１を実施例１にお
けると同様にして処理するが、２−メルカプトエタノー
ルとは反応させない。それゆえ何ら遊離のチオール基を
含有しない抗体は、次に同量のスズ−ジホスホネートの
存在下に実施例１におけると同様にしてパーテクネテー
トと反応させると、テクネチウム−９９ｍの約１％しか
タンパク質に結合してない生成物が得られ、一方大部分
（５０％より大）がテクネチウム−９９ｍ−ジホスホネ
ートとして存在し、そして還元された未結合テクネチウ
ム（３１％）の他になおかなりの割合の遊離のパーテク
ネテート（１５％）が存在していた。
けると同様にして処理するが、２−メルカプトエタノー
ルとは反応させない。それゆえ何ら遊離のチオール基を
含有しない抗体は、次に同量のスズ−ジホスホネートの
存在下に実施例１におけると同様にしてパーテクネテー
トと反応させると、テクネチウム−９９ｍの約１％しか
タンパク質に結合してない生成物が得られ、一方大部分
（５０％より大）がテクネチウム−９９ｍ−ジホスホネ
ートとして存在し、そして還元された未結合テクネチウ
ム（３１％）の他になおかなりの割合の遊離のパーテク
ネテート（１５％）が存在していた。
【００３４】実施例３ 膵臓癌関連粘液抗原に対するモノクローナル抗体ＢＷ
４９４／３２をテクネチウム−９９ｍで標識するには、
この物質２０mgを等張食塩溶液２ml中に溶解させて、１
％システアミン塩酸塩水溶液０.５mlを加え、そしてこ
の混合物を室温で２０分間インキュベーションした。変
性された抗体をカラムクロマトグラフィーにより精製し
たものを０.０２Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4緩衝溶液中に溶解させ
て各２mgずつで凍結乾燥した。この抗体をテクネチウム
で標識するのに用いられるスズ（II）成分は１キット当
りＮａ4Ｐ2Ｏ7 ７.２mgおよびスズ（II）クロライド１.
０３mgを含有するピロホスヘート標識化キットである。
容器１個の内容物を生理食塩溶液１０ml中に溶解させそ
してその溶液の０.２５ml（Ｓｎ++約１４μｇに相当）
を、予めパーテクネテート溶液約８ml（約２０００MBq)
中に溶解させた抗体に加えた。１０分間反応させたのち
次の組成、すなわちＭＡｂ ２５μｇ、Ｎａ4Ｐ2Ｏ7 ２.
２５μｇ、スズ（II) ０.１７５μｇおよびＮａ2ＨＰＯ
4緩衝液約１８μｇを有する溶液０.１mlを健康なラット
に静脈内投与した。注射２４時間後の器官分布を表２に
示す。この表から、骨、甲状腺および胃における蓄積が
非常にわずかであり、そしてそれ以外の器官ではＩ−１
３１で標識された抗体の場合とほぼ同様であることが明
らかである。テクネチウム−９９ｍで標識された抗体Ｂ
Ｗ ４９４／３２について測定された免疫反応性（表１
参照）はＩ−１３１またはＩｎ−１１１で標識した場合
より高かった。
４９４／３２をテクネチウム−９９ｍで標識するには、
この物質２０mgを等張食塩溶液２ml中に溶解させて、１
％システアミン塩酸塩水溶液０.５mlを加え、そしてこ
の混合物を室温で２０分間インキュベーションした。変
性された抗体をカラムクロマトグラフィーにより精製し
たものを０.０２Ｍ Ｎａ2ＨＰＯ4緩衝溶液中に溶解させ
て各２mgずつで凍結乾燥した。この抗体をテクネチウム
で標識するのに用いられるスズ（II）成分は１キット当
りＮａ4Ｐ2Ｏ7 ７.２mgおよびスズ（II）クロライド１.
０３mgを含有するピロホスヘート標識化キットである。
容器１個の内容物を生理食塩溶液１０ml中に溶解させそ
してその溶液の０.２５ml（Ｓｎ++約１４μｇに相当）
を、予めパーテクネテート溶液約８ml（約２０００MBq)
中に溶解させた抗体に加えた。１０分間反応させたのち
次の組成、すなわちＭＡｂ ２５μｇ、Ｎａ4Ｐ2Ｏ7 ２.
２５μｇ、スズ（II) ０.１７５μｇおよびＮａ2ＨＰＯ
4緩衝液約１８μｇを有する溶液０.１mlを健康なラット
に静脈内投与した。注射２４時間後の器官分布を表２に
示す。この表から、骨、甲状腺および胃における蓄積が
非常にわずかであり、そしてそれ以外の器官ではＩ−１
３１で標識された抗体の場合とほぼ同様であることが明
らかである。テクネチウム−９９ｍで標識された抗体Ｂ
Ｗ ４９４／３２について測定された免疫反応性（表１
参照）はＩ−１３１またはＩｎ−１１１で標識した場合
より高かった。
【００３５】
【表２】
【００３６】実施例４ 同様にＣＥＡに対するモノクローナル抗体ＢＷ ４３１
／２６の５０mgを２−メルカプトエタノールで処理する
ことにより部分的に還元し、生成物を精製しそして燐酸
塩緩衝液（pH７.２）の存在下に２mgずつ凍結乾燥し
た。Ｔｃ−９９ｍでの標識化は、１,１,３,３−プロパ
ンテトラホスホン酸テトラナトリウム塩１３.５mgおよ
びスズ（II）−クロライド×２Ｈ2Ｏ ０.６mgからな
る、他に肝臓のシンチグラフィーにも用いられる標識化
単位を用いて行われた。標識化単位の内容物を等張食塩
溶液１０ml中に溶解し、Ｂｎ++１５μｇに相当するこの
溶液０.５mlを凍結乾燥された抗体に加えた。次にパー
テクネテート溶液（３０００MBq）を透明な抗体／Ｓｎ
（II）塩溶液に加えそしてＴｃ−９９ｍ標識された抗体
をヒトの結腸癌が移植されたヌードマウスに静脈投与し
た。腫瘍は注射２４時間後にすでにシンチグラフィーに
より容易に映像として示すことができた。表３はヌード
マウス中におけるこの抗体の腫瘍への蓄積および器官分
布に基づき、Ｉ−１３１、Ｉｎ−１１１およびＴｃ−９
９ｍで標識された製剤がほぼ同等であることを示してい
る。
／２６の５０mgを２−メルカプトエタノールで処理する
ことにより部分的に還元し、生成物を精製しそして燐酸
塩緩衝液（pH７.２）の存在下に２mgずつ凍結乾燥し
た。Ｔｃ−９９ｍでの標識化は、１,１,３,３−プロパ
ンテトラホスホン酸テトラナトリウム塩１３.５mgおよ
びスズ（II）−クロライド×２Ｈ2Ｏ ０.６mgからな
る、他に肝臓のシンチグラフィーにも用いられる標識化
単位を用いて行われた。標識化単位の内容物を等張食塩
溶液１０ml中に溶解し、Ｂｎ++１５μｇに相当するこの
溶液０.５mlを凍結乾燥された抗体に加えた。次にパー
テクネテート溶液（３０００MBq）を透明な抗体／Ｓｎ
（II）塩溶液に加えそしてＴｃ−９９ｍ標識された抗体
をヒトの結腸癌が移植されたヌードマウスに静脈投与し
た。腫瘍は注射２４時間後にすでにシンチグラフィーに
より容易に映像として示すことができた。表３はヌード
マウス中におけるこの抗体の腫瘍への蓄積および器官分
布に基づき、Ｉ−１３１、Ｉｎ−１１１およびＴｃ−９
９ｍで標識された製剤がほぼ同等であることを示してい
る。
【００３７】
【表３】
【００３８】実施例５ モノクローナル抗体４３１／３１のＦ（ａｂ′)2フラグ
メント２０mgを１％システアミン塩酸塩溶液１mlと４℃
で１５分間インキュベーションした。過剰の還元剤を除
去した抗体フラグメントを燐酸塩緩衝液と一緒に凍結乾
燥した。テクネチウムで標識するには、３,３−ジホス
ホノ−１,２−プロパンジカルボン酸テトラナトリウム
塩１３.０mg、スズ（II）オキサイド０.２３mgおよびＮ
−（４−アミノベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸モノナ
トリウム塩１.０mgからなる標識化単位の1/20を生理食
塩溶液０.５ml中にて使用した。１０００MBq／mgの比活
性で標識された抗体フラグメントは実際上何らパーテク
ネテートを含有しないが、それよりわずかに多い量（約
３％）のＴｃ−９９ｍジホスホネートを含有していた。
免疫反応性は６０％であった。
メント２０mgを１％システアミン塩酸塩溶液１mlと４℃
で１５分間インキュベーションした。過剰の還元剤を除
去した抗体フラグメントを燐酸塩緩衝液と一緒に凍結乾
燥した。テクネチウムで標識するには、３,３−ジホス
ホノ−１,２−プロパンジカルボン酸テトラナトリウム
塩１３.０mg、スズ（II）オキサイド０.２３mgおよびＮ
−（４−アミノベンゾイル）−Ｌ−グルタミン酸モノナ
トリウム塩１.０mgからなる標識化単位の1/20を生理食
塩溶液０.５ml中にて使用した。１０００MBq／mgの比活
性で標識された抗体フラグメントは実際上何らパーテク
ネテートを含有しないが、それよりわずかに多い量（約
３％）のＴｃ−９９ｍジホスホネートを含有していた。
免疫反応性は６０％であった。
【００３９】実施例６ タンパク質のＴｃ−９９ｍによる標識化 ＩｇＧ ２５０mgを等張食塩溶液中に１０mg／mlの濃度
に溶解させた。この溶液に０.５〜１mlの２−メルカプ
トエタノールを添加したのち４〜２５℃で約３０分間イ
ンキュベーションした。次にこの還元された免疫グロブ
リンをポリアクリルアミドゲルカラム(Bio Rad社のBioG
el Ｐ−２）で溶離剤として０.０２Ｍ燐酸水素ジナトリ
ウム溶液（pH７.２）を用いてゲル濾過することにより
精製した。分離された純粋なＩｇＧのフラクションを同
じ燐酸塩緩衝液で希釈することによりＩｇＧ濃度４mg／
ml（Ｎａ2ＨＰＯ4 約３mg／ml）に調整しそしてこの溶
液０.５mlずつを容器に入れて凍結乾燥した。
に溶解させた。この溶液に０.５〜１mlの２−メルカプ
トエタノールを添加したのち４〜２５℃で約３０分間イ
ンキュベーションした。次にこの還元された免疫グロブ
リンをポリアクリルアミドゲルカラム(Bio Rad社のBioG
el Ｐ−２）で溶離剤として０.０２Ｍ燐酸水素ジナトリ
ウム溶液（pH７.２）を用いてゲル濾過することにより
精製した。分離された純粋なＩｇＧのフラクションを同
じ燐酸塩緩衝液で希釈することによりＩｇＧ濃度４mg／
ml（Ｎａ2ＨＰＯ4 約３mg／ml）に調整しそしてこの溶
液０.５mlずつを容器に入れて凍結乾燥した。
【００４０】試料（ＩｇＧ ２mg）をＴｃ−９９ｍで標
識するには、凍結乾燥物をメタンジホスホン酸ナトリウ
ム塩２.６mgおよびスズ（II）−クロライド０.０４mgか
らなる標識化単位を等張食塩溶液５ml中に溶解させるこ
とにより得られるスズ（II）−メタンジホスホネート溶
液（pH７）１ml中に溶解させた。次にＴｃ−９９ｍパー
テクネテート溶液４〜９ml（約１０００MBq）をこれに
加えた。５分間反応させたのちテクネチウムの９５％よ
り多くがタンパク質に結合した形態であるＴｃ−９９ｍ
標識されたＩｇＧが得られ、一方ホスホネートに結合し
た割合は１％未満そして遊離のパーテクネテートは１％
未満であった。標識されたＩｇＧは調製３時間後まで安
定であった。長時間放置してはじめて溶液中に再び遊離
のパーテクネテートが検出できた。
識するには、凍結乾燥物をメタンジホスホン酸ナトリウ
ム塩２.６mgおよびスズ（II）−クロライド０.０４mgか
らなる標識化単位を等張食塩溶液５ml中に溶解させるこ
とにより得られるスズ（II）−メタンジホスホネート溶
液（pH７）１ml中に溶解させた。次にＴｃ−９９ｍパー
テクネテート溶液４〜９ml（約１０００MBq）をこれに
加えた。５分間反応させたのちテクネチウムの９５％よ
り多くがタンパク質に結合した形態であるＴｃ−９９ｍ
標識されたＩｇＧが得られ、一方ホスホネートに結合し
た割合は１％未満そして遊離のパーテクネテートは１％
未満であった。標識されたＩｇＧは調製３時間後まで安
定であった。長時間放置してはじめて溶液中に再び遊離
のパーテクネテートが検出できた。
【００４１】実施例７ １,４,８,１１−テトラアザシクロテトラデカン（サイ
クラム(cyclam))のＴｃ−９９ｍによる標識化 サイクラム８mgを等張食塩溶液０.５ml中に溶解させそ
して０.１ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてpH１１に調
整した。この溶液に、１,１,３,３−プロパンテトラホ
スホン酸ナトリウム塩２.９mgおよびＳｎ（II）−クロ
ライド・二水和物０.１２mgからなる標識化単位を等張
食塩溶液５ml中に溶解させることにより得られるスズ
（II）−１,１,３,３−プロパンテトラホスホネート溶
液（pH６）１mlを加えた。これに５９０MBq（約０.３m
l）のＴｃ−９９ｍ−パーテクネテート溶液を加え、そ
してこの混合物を室温で５分間放置した。標識化サイク
ラムの収率は９８％より高く、一方遊離のパーテクネテ
ートまたはホスホネートに結合したテクネチウムは１％
未満であった。この標識された溶液は数時間安定であっ
た。
クラム(cyclam))のＴｃ−９９ｍによる標識化 サイクラム８mgを等張食塩溶液０.５ml中に溶解させそ
して０.１ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてpH１１に調
整した。この溶液に、１,１,３,３−プロパンテトラホ
スホン酸ナトリウム塩２.９mgおよびＳｎ（II）−クロ
ライド・二水和物０.１２mgからなる標識化単位を等張
食塩溶液５ml中に溶解させることにより得られるスズ
（II）−１,１,３,３−プロパンテトラホスホネート溶
液（pH６）１mlを加えた。これに５９０MBq（約０.３m
l）のＴｃ−９９ｍ−パーテクネテート溶液を加え、そ
してこの混合物を室温で５分間放置した。標識化サイク
ラムの収率は９８％より高く、一方遊離のパーテクネテ
ートまたはホスホネートに結合したテクネチウムは１％
未満であった。この標識された溶液は数時間安定であっ
た。
【００４２】実施例８ ピロホスヘートのＴｃ−９９ｍによる標識化 ピロホスヘート１０mgを０.９％食塩溶液１ml中に溶解
させそしてこれにスズ（II）−１,１,３,３−プロパン
テトラホスホネート溶液（実施例７参照）１mlを加え
た。この溶液にパーテクネテート溶液１ml（〜３００MB
q）を加え、この混合物を室温で５分間放置した。ピロ
ホスヘートの５０％がＴｃ−９９ｍで標識された。標識
されたホスホネートの割合は１０％未満であった。
させそしてこれにスズ（II）−１,１,３,３−プロパン
テトラホスホネート溶液（実施例７参照）１mlを加え
た。この溶液にパーテクネテート溶液１ml（〜３００MB
q）を加え、この混合物を室温で５分間放置した。ピロ
ホスヘートの５０％がＴｃ−９９ｍで標識された。標識
されたホスホネートの割合は１０％未満であった。
フロントページの続き (72)発明者 アレクサンダー・シユヴアルツ ドイツ連邦共和国デー−6093フレールス ハイム・アム・マイン．ヴイーゼンリン グ61 (72)発明者 アクセル・シユタインシユトレーサー ドイツ連邦共和国デー−6237リーデルバ ハ．ツム・モルゲングラーベン26
Claims (3)
- 【請求項１】 初めに器官特異的な物質を含有する成分
をテクネチウム−９９ｍ−パーテクネテート溶液中に溶
解させ、そして次にスズ（II）−ホスホネートまたはス
ズ（II）−ピロホスヘートからなる複合安定化還元剤を
添加することによりテクネチウムを還元させそして器官
特異的な物質に結合させることにより調製される診断助
剤。 - 【請求項２】 初めに器官特異的な物質を含有する成分
をスズ（II）−ホスホネートまたはスズ（II）−ピロホ
スヘートからなる複合安定化還元剤の溶液中に溶解させ
そして次にテクネチウム−９９ｍ−パーテクネテート溶
液を添加することにより器官特異的な物質をテクネチウ
ムで標識することにより調製される診断助剤。 - 【請求項３】 複合安定化還元剤は器官特異的な物質を
テクネチウム−９９ｍで安定に標識するために器官特異
的物質１mg当りスズ（II）に基づき計算してそれぞれ１
〜１００μｇ好ましくは５〜１０μｇが用いられるもの
である請求項１または請求項２に記載の診断助剤。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3642173 | 1986-12-10 | ||
| DE3642173:1 | 1987-08-27 | ||
| DE3728599:8 | 1987-08-27 | ||
| DE19873728599 DE3728599A1 (de) | 1986-12-10 | 1987-08-27 | Verfahren zur herstellung einer mit technetium-99m-markierten organspezifischen substanz |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| JP62309769A Division JPH07100667B2 (ja) | 1986-12-10 | 1987-12-09 | テクネチウム−９９ｍで標識された器官特異的な物質の製法 |
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|---|---|
| JPH0881395A JPH0881395A (ja) | 1996-03-26 |
| JP2550481B2 true JP2550481B2 (ja) | 1996-11-06 |
Family
ID=25850190
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|---|---|---|---|
| JP62309769A Expired - Fee Related JPH07100667B2 (ja) | 1986-12-10 | 1987-12-09 | テクネチウム−９９ｍで標識された器官特異的な物質の製法 |
| JP7098170A Expired - Lifetime JP2550481B2 (ja) | 1986-12-10 | 1995-04-24 | 診断助剤 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62309769A Expired - Fee Related JPH07100667B2 (ja) | 1986-12-10 | 1987-12-09 | テクネチウム−９９ｍで標識された器官特異的な物質の製法 |
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| JP (2) | JPH07100667B2 (ja) |
| KR (1) | KR880007456A (ja) |
| AU (1) | AU611112B2 (ja) |
| CA (1) | CA1310265C (ja) |
| DE (2) | DE3728599A1 (ja) |
| DK (1) | DK167851B1 (ja) |
| ES (1) | ES2053515T5 (ja) |
| FI (1) | FI92075C (ja) |
| GR (2) | GR3007608T3 (ja) |
| HU (1) | HUT46025A (ja) |
| IE (1) | IE60604B1 (ja) |
| IL (1) | IL84751A (ja) |
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| PL (1) | PL269331A1 (ja) |
| PT (1) | PT86322B (ja) |
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| US5128119A (en) * | 1989-06-12 | 1992-07-07 | Immunomedics, Inc. | Methods for technetium/rhenium labeling of f(ab1)2 fragments |
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| US5206370A (en) | 1989-02-24 | 1993-04-27 | Johnson Matthey, Inc. | Certain pyridyl hydrazines and hydrazides useful for protein labeling |
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| US5460785A (en) * | 1989-08-09 | 1995-10-24 | Rhomed Incorporated | Direct labeling of antibodies and other protein with metal ions |
| DK0486622T3 (da) * | 1989-08-09 | 1999-07-19 | Rhomed Inc | Direkte radiomærkning af antistoffer og andre proteiner med technetium eller rhenium |
| US5443816A (en) * | 1990-08-08 | 1995-08-22 | Rhomed Incorporated | Peptide-metal ion pharmaceutical preparation and method |
| US5078985A (en) * | 1989-08-09 | 1992-01-07 | Rhomed, Incorporated | Radiolabeling antibodies and other proteins with technetium or rhenium by regulated reduction |
| US6001979A (en) | 1989-08-29 | 1999-12-14 | Nycomed Amersham Plc | Cores for technetium radiopharmaceuticals |
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1987
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