FI92075B - Menetelmä teknetium-99m:llä leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä teknetium-99m:llä leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI92075B FI92075B FI875396A FI875396A FI92075B FI 92075 B FI92075 B FI 92075B FI 875396 A FI875396 A FI 875396A FI 875396 A FI875396 A FI 875396A FI 92075 B FI92075 B FI 92075B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- antibody
- technetium
- tin
- phosphonate
- fragment
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/12—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by a special physical form, e.g. emulsion, microcapsules, liposomes, characterized by a special physical form, e.g. emulsions, dispersions, microcapsules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1048—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell determinant being a carcino embryonic antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1057—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from liver or pancreas
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/866—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving immunoglobulin or antibody fragment, e.g. fab', fab, fv, fc, heavy chain or light chain
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
92075
Menetelmä teknetium-99m:llä leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää teknetium-99m:llä 5 leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi, sen valmistamiseen soveltuvaa testivälineistöä ja leimattua elin-spesifistä ainetta sisältävää diagnostista valmistetta.
Milsteinin ja Köhlerin, jotka julkaisivat vuonna 1975 menetelmän, jossa yhdistetään vasta-aineita erittä-10 viä hiiren B-lymfosyyttejä hiiren myeloomasoluihin ja saatetaan näiden kahden solun fuusiotuote, hybridi, kasvamaan edelleen ja tuottamaan vasta-ainetta, uraa uurtavien töiden mukaisesti on mahdollista eristää lukuisten muodostuvien hybridien joukosta se, joka tuottaa spesifisyydel-15 tään tietynlaista vasta-ainetta. Näitä monoklonaalisia vasta-aineita, jotka tunnistavat vain tietyn vastaavalla antigeenillä olevan epitoopin, käytetään nykyisin melko paljon immuuniskintigrafiässä. Kasvaimiin liittyvien antigeenien vastaiset monoklonaaliset vasta-aineet soveltuvat 20 kasvainten sijainnin diagnosoimiseen samoin kuin uusiutumisten ja etäpesäkkeiden osoittamiseen. Vasta-aineet täytyy tätä varten leimata radioaktiivisesti, jotta voitaisiin soveltuvia radiologisia kuvantamismenetelmiä käyttämällä todeta, esiintyykö elimistössä antigeeniä sisältävä 25 kasvain. Radiologisessa diagnosoinnissa nykyisin yleisim min käytetyistä radionuklideista ovat jodi-isotoopit yksinkertaisimmin käytettävissä proteiinien leimaamiseen. Näistä täyttää jodi-123 parhaiten käytännön vaatimukset, kuten hyvän toteamisherkkyyden ja pienen säteilykuormituk-30 sen, sillä se lähettää pelkkää γ-säteilyä ja sillä on edul-linen γ-energia 159 keV. Sen suhteellisen lyhyt puoliintumisaika, 13,2 tuntia, ja ennen kaikkea sen hiukkaskiihdy-tintä vaativa valmistus, joka johtaa myös suhteellisen korkeaan hintaan, rajoittavat voimakkaasti jodin-123:n 35 käyttöä vasta-aineiden leimaamiseen.
92075 2
Jodi-123:11a, joka energialtaan gammakameroille epäsuotuisan γ-säteilyn ja säteilykuormituksen kannalta epätoivottavan säteilyn vuoksi ei ole ideaalinen radionuk-lidi in vivo -diagnostiikkaan, tehdään paljon vasta-aine-5 leimauksia, koska jodi-131:a voidaan valmistaa edullisesti aktiivisuuspitoisuudeltaan suurena ja ominaisaktiivi-suudeltaan riittävänä ja sitä kautta' on saatavissa aikaan suhteellisen yksinkertainen ja edullinen leimaaminen.
Kaikkien jodilla leimattujen vasta-aineiden ratkai-10 sevana epäkohtana on se, että radioaktiivinen jodi lohkeaa osittain in vivo vasta-aineista dejodausprossien kautta ja esiintyy sitten elimistössä jodidina, joka toisaalta varastoituu kilpirauhaseen ja toisaalta kohottaa tausta-aktiivisuutta, sillä jodidi poistuu suhteellisen hitaasti 15 verestä. Annettaessa jodileimattuja vasta-aineita täytyy tutkittavan henkilön kilpirauhanen joka tapauksessa suojata ennalta. Jodilla leimattujen vasta-aineiden tiettynä etuna on se, että niiden varastoituminen maksaan ja munuaisiin on tavanomaisena tutkimusajankohtana selvästi vä-20 häisempää kuin samanlaisten, mutta muilla radionuklideilla leimattujen vasta-aineiden.
^^In:ia on viime aikoina alettu käyttää paljon vasta-aineleimauksiin. Metallisena alkuaineena ei indium, toisin kuin jodi, ole ilman muuta sidottavissa proteiinei-^ hin. Siihen tarvitaan bifunktionaalisia kelaatinmuodosta-jia, jotka toisaalta muodostavat kovalenttisen sidoksen proteiinin kanssa ja toisaalta pystyvät sitomaan kationina esiintyvän indiumin voimakkaan kompleksin muodostavan ryhmän kautta vasta-aineeseen. Tähän tarkoitukseen useim- . min käytettävä kompleksinmuodostaja on dietyleenitriamii- • « nipentaetikkahappo (DTPA). DTPA saatetaan reagoimaan bi-syklisenä anhydridinä vasta-aineen kanssa. Tällöin tapahtuu ensin kovalenttisen amidisidoksen muodostuminen proteiinin pääteasemassa olevien aminoryhmin kanssa, minkä jälkeen reaktio veden kanssa vapauttaa DTPA:n jäljellä 35 3 92075 olevan funktionaalisen happoryhmän. Vasta-aineeseen, josta on siten muodostettu johdannainen, voidaan sitten sitoa lujasti radionuklidi, joka lisätään joukkoon ^^In-sitraat-tina. Indium tulee lisätä labiilina kompleksiyhdisteenä, 5 sillä muuten se saostuisi tarvittavien pH-arvojen vallitessa. DTPA:n bisyklinen anhydridi ei ole paras mahdollinen reagenssi, sillä sille voi bifunktionaalisuutensa takia tapahtua inter- ja intramolekulaarisia kytkeytymisreakti-oita.
Galliumilla ei indiumiin verrattuna ole etuja, mutta sen sijaan pyrkimyksenä on potentiaalisten diagnostisten valmisteiden leimaaminen teknetium-99m:llä, sillä ^mTc:stä on tullut suotuisien fysikaalisten ominaisuuk-siensa (hiukkassäteilyn puuttuminen, γ-säteilyenergia 15 140 keV ja puoliintumisaika 6 tuntia) ja niihin liittyvän pienen säteilykuormituksen ansiosta tärkein radionuklidi radiologisessa diagnostiikassa.
Teknetium-99m, jota on saatavissa nuklidigeneraat-toreista, esiintyy ensin perteknetaattina, joka sopii sel-20 laisenaan esimerkiksi kilpirauhas- ja aivoskintigrafiaan. Muiden elinten skintigrafia teknetium-99m:ää käyttäen onnistuu tiettyjen "kuljettaja-aineiden" avulla, joilla on toisaalta kyky sitoa teknetiumia ja jotka toisaalta saavat aikaan radionuklidin hyvin selektiivisen rikastumi-25 Sen kohde-elimeen. Tähän tarkoitukseen on tähän asti käytetty etupäässä aineita, jotka voidaan suoraan leimata teknetium-99m:llä ja ovat voimakkaasti elinspesifisiä.
Niiden lisäksi on olemassa kuitenkin joukko aineita, jotka tosin ovat hyvin elinspesifisiä, mutta eivät ole suoraan 30 leimattavissa. Nämä aineet voivat olla proteiineja (fibri-'.V. nogeeni, ihmisen seerumialbumiini) , entsyymejä (strepto- kinaasi, laktaattidehydrogenaasi), sokereita (dekstraani, glukoosi) tai myös polymeerejä. Niihin kuuluu myös pienimolekyylisiä aineita, kuten rasvahappoja, jotka sydämen 35 suuren energiantarpeen takia rikastuvat sydänlihaskudok-seen.
» 4 92075
Elinspesifisen "kuljettäja-aineen" leimaamiseksi teknetium-99m:llä täytyy nuklidigeneraattorista eluoitunut perteknetaatti saattaa ensin alemmalle hapetusasteelle.
Tässä pelkistetyssä muodossaan muodostaa teknetium enemmän 5 tai vähemmän stabiileja yhdisteitä elinspesifisen aineen kanssa. Skintigrafisiin luukuvauksiin käytetään esimerkiksi S 9m
Te-fosforihappojohdannaisia, ennen kaikkea orgaanisia fosfonihappoja. Niinpä EP-julkaisussa 0 002 485 kuvatussa leimausyksikössä esiintyy elinspesifisenä "kuljettaja-10 aineena" 3,3-difosfono-l,2-propaanidikarboksyylihapon nat-riumsuola. EP-julkaisussa 0 108 253 kuvataan ^mTc-tri-ja -tetrafosfonihappojen käyttöä erityisesti maksan skin- 9 Qin tigrafisiin RES-kuvauksiin. Te:n kompleksia dietyleeni- triamiinipentaetikkahapon (DTPA) kanssa käytetään munuais-15 sairauksien ja aivojen patalogisten prosessien diagnosointiin.
Koska esimerkiksi vasta-aineiden suora leimaaminen teknetiumilla ei ole mahdollista, on yritetty saada aikaan, samoin kuin indiumilla leimaamisen ollessa kyseessä, vasta-20 aineiden stabiili leimaaminen teknetiumilla käyttämällä apuna bifunktionaalisia kompleksinmuodostajia. Teknetium-leimaamisen erityisongelmana on se, että reaktioliuokses-sa on normaalisti läsnä tina(II)ioneja. Tina(II) on tähän asti ollut ainoa pelkistin, joka on mahdollistanut pertek-25 netaatin nopean ja kvantitatiivisen muuttumisen huoneen lämpötilassa alemmalle ja siten reaktiiviselle hapetus-asteelle. Pelkistetyn teknetiumin rinnalla läsnä olevat tina(II)- ja tina(IV)ionit kilpailevat vasta-aineeseen kytketyn kompleksin sitoutumiskohdista, niin että komplek-30 sinmuodostajaa täytyy joko käyttää ylimäärin, mikä voi . · · vaikuttaa vasta-aineen spesifisiin ominaisuuksiin, tai sitoutumattoman teknetiumin ja tinan muodostama kolloidi johtaa epätoivottavaan radioaktiivisuuden varastoitumi-seen muihin elimiin.
35 US-patenttijulkaisussa 4 479 930 kuvataan syklis ten DTPA- ja EDTA-anhydridien käyttöä kelatointiaineina 4 » 5 92075 ^^Inin ja ^Gam lisäksi myös 99mTcille. EP-julkaisussa O 035 765 kuvataan deferoksamiinin käyttöä korapleksointi-aineen teknetium-99m:n sitomiseksi proteiineihin. Kansainvälisessä patenttihakemuksessa WO 85/3063 kuvataan vasta-5 aineessa olevien osittain pelkistettyjen disulfidisiltojen saattamista reagoimaan tetrakloorinitridoteknetaatin nat-riumsuolan kanssa, joka täytyy valmistaa ennalta pertekne-taatin ja natriumatsidin välisellä reaktiolla. EP-hake-musjulkaisun 0 194 8653 mukaan käytetään samoin vasta-10 ainefragmentteihin pelkistyksellä muodostettuja vapaita tioliryhmiä kelaattikompleksin, joka on verrattain vaikeasti syntetisoitavissa oleva ^(7-maleimidoheptyyli)imino-bis(etyleeninitrilojytetraetikkahappo, sitomiseen. Kompleksin kytkeminen vasta-aineeseen tapahtuu SH-ryhmien 15 reaktiolla kompleksiyhdisteen maleimidiosassa olevan kak- soissidoksen kanssa, kun taas radioaktiivinen metalli-ioni kompleksoidaan nitriloetikkahapporyhmän kautta.
Yksinkertaisempia menetelmiä vasta-aineiden tai Q Qm vasta-ainefragmenttien leimaamiseksi Teillä kuvataan 20 EP-julkaisussa 0 005 638 ja US-patenttijulkaisussa 4 478 815. Niissä käytetään tina(II)suoloja ylimäärin di-sulfidisiltojen pelkistävän katkaisun ja lisätyn ^Tc-perteknetaatin pelkistyksen tekemiseksi samanaikaisesti. Yleensä -S-S-sidoksen katkaisuun tarvitaan pitkähköjä 25 inkubointiaikoja (24 tuntia), jolloin F(ab')fragmentit pilkkoutuvat osittain F(ab1)-fragmenteiksi. Uudemmassa kirjallisuudessa /esimerkiksi Journal of Nuclear Medicine 27 (1986) 685 - 693 ja 1315 - 1320 sekä International Journal of Nuclear Medicine Biology 12 (1985) 3-87 osoi-30 tetaan, että näiden kahden fragmentin suhde riippuu « « ·· "tinausreaktiosta" ja että näiden kahden komponentin suh- Q Qm de ei ^Tc-leimauksen jälkeen enää muutu mainittavasti, Q Otti jolloin pääkomponenttina on Te-leimattu F(ab')· Kaikissa tapauksissa on leimattu F(ab')-fragmentti täytynyt jäl-kipuhdistaa, sillä huolimatta 30 minin reaktioajasta ei . ole saavutettu perteknetaatin kvantitatiivista reagointia.
6 92075 Tähän asti ei ole ollut mahdollista valmistaa edellä kuvatuilla leimausmenetelmillä valmisteita, joita voitaisiin käyttää rutiininomaisesti ilman työläitä menet-telyvaiheita.
5 Nyt on keksitty menetelmä teknetium-99m:llä leima tun elinspesifisen aineen valmistamiseksi, jossa menetelmässä elinspesifiseen aineeseen tai esikäsiteltyyn tai teknetium-99m-kompleksinmuodostajaan kytkettyyn elinspesifiseen aineeseen sekoitetaan perteknetaatti-99m:ää ja 10 kompleksia stabiloivaa pelkistintä.
Tällä tavalla voidaan leimata teknetium-99m:llä sellaisia elinspesifisiä aineita ("kantaja-aineita"), joiden molekyylissä esiintyy vähintään yksi funktionaalinen ryhmä, jolla on kompleksoitumisominaisuuksia. Useimmi-15 ten tällaisten ryhmien yhteydessä on kyse atomeista tai ioneista, jotka toimivat elektroniparin luovuttajina (Lewis-emäkset). Tällainen kompleksin muodostumisen aikaansaava ryhmä on esimerkiksi ryhmä -SCN, -NH2, -NHR, -nr2, -COO-, -OH, =S, -SH, tai -NO.
20 Tällaisten, funktionaalisia kompleksinmuodostus- ryhmiä sisältävien aineiden edustajista mainittakoon esimerkiksi: proteiinit (ryhmiä -NH-, -NH2 tai -COO-), entsyymit (ryhmiä -NH2, -OH tai -P=0), sokerit (-OH-ryhmiä) tai polymeerit, joissa on vastaavia funktionaalisia ryhmiä 25 sisältäviä sivuketjuja.
Ellei leimattavassa yhdisteessä ole tällaista funktionaalista ryhmää, täytyy aine - ennen leimaamista -"esikäsitellä" tai kytkeä sopivaan kompleksinmuodostajaan.
"Esikäsittelyksi" ymmärretään keksinnön yhteydessä 30 sellaiset toimenpiteet, jotka johtavat funktionaalisen « ryhmän, jolla on kompleksinmuodostusominaisuuksia, esiintymiseen leimattavassa molekyylissä. Vasta-aineet sisältävät esimerkiksi disulfidisiltoja. Nämä kaksi kovalent-tisesti toisiinsa sitoutunutta rikkiatomia eivät kuiten-35 kaan tässä muodossa pysty kompleksoimaan teknetium-99m:ää.
7 92075
Jos disulfidisilta kuitenkin pelkistetään, syntyy kaksi SH-ryhmää, jotka puolestaan ovat erinomaisia kompleksi-ligandeja ja teknetium-99m:lie ja sitoutuvat tähän hyvällä saannolla.
5 Toisena mahdollisuutena sitoa teknetium-99m elin- spesifisiin aineisiin, joissa ei ole kompleksin muodostavia funktionaalisia ryhmiä, on tällaisen funktionaalisen ryhmän lisääminen molekyyliin tai kompleksointiaineen kemiallinen sitominen molekyyliin.
10 Keksinnön eräänä ydinkohtana on se, että leimattava aine ei suoraan joudu kosketukseen pelkistimen - edullisesti tina(II)suolan - kanssa. Tina(II)suola sekoitetaan ensin erikseen sopivan reaktiokumppanin kanssa, jolloin muodostuu kompleksia stabiloiva pelkistin. Reaktiokumppani 15 voi olla fosforiyhdiste, kuten esimerkiksi fosfonaatti tai pyrofosfaatti, yleisesti hyvä kompleksinmuodostaja, kuten esimerkiksi etyleenidiamiinitetraetikkahappo, tai jokin muu reagenssi, joka reagoi tina(II):n kanssa sillä tavalla, että se pitää tina(II):n fysiologisella pH-alueella 20 (6-8) liuoksessa ja pelkistimen siten toimintakykyisessä tilassa (kompleksia stabiloiva pelkistin).
Tämä menetelmä osoittautuu erityisen kiintoisaksi vasta-aineiden teknetium-99m-leimaamisen kannalta. Vasta-aineen tai F(ab')2"vasta_alnefra9mentln S-S-sidosten osit-“ 25 täinen pelkistys voidaan tehdä huoneen lämpötilassa anta malla heikkojen pelkistimien vaikuttaa siihen vähän aikaa (elinspesifisen aineen esikäsittely). Erityisen hyvin soveltuvia pelkistimiä ovat monotiolit, kuten 2-merkapto-etanoli ja 2-merkaptoetyyliamiini (kysteamiini). Täten 30 saadaan reaktiokykyisiä vasta-ainemolekyylejä, jotka ei-vät ole menettäneet immunologista reaktiivisuuttaan eivätkä fragmentoituneet pienemmiksi fragmenteiksi. Periaatteessa vasta-aineen tai F(ab')2_vasta-ainefra9Iftentin osittaiseen pelkistykseen soveltuvat kaikki pelkistimet, 35 jotka pitkähkönkin vaikutusajan kuluessa katkaisevat vain • · 8 92075 osan S-S-sidoksista eivätkä johda vasta-ainekomponentin fragmentoitumiseen. Tällaisen pelkistimen vaikutusajan vasta-ainekomponenttiin ei tarvitse olla tuntia pidempi. Yleensä jo 10 - 30 min:n kuluttua on muodostunut niin 5 paljon SH-ryhmiä, että teknetium-99m-kationeja sitoutuu riittävä määrä. Sitten ylimääräinen pelkistin erotetaan pois, ja osittain pelkistetty vasta-aine yhdistetään puskuroituun liuokseen (esimerkiksi 0,02 M fosfaattiliuos, pH 7,2), jaetaan annoksiksi, ja kylmäkuivataan heti. Täl-10 löin täytyy estää vapaiden tioliryhmien hapettuminen takaisin ilman hapen vaikutuksesta. Kylmäkuivattu vasta-aine, joka puskurisuoloja lukuun ottamatta ei sisällä lisäaineita ja joka säilytetään käyttämällä typpeä suoja-kaasuna, säilyy muuttumattomana jääkaapin lämpötilassa 15 (-5 - +5°C) viikkoja; se liukenee moitteettomasti uudel leen lisättäessä isotoonista natriumkloridiliuosta.
Siten valmistettu, osittain pelkistetty vasta-ainekomponentti (esikäsitelty elinspesifinen aine) on sitten helppo leimata teknetium-99m:llä lisäämällä siihen 20 perteknetaatin ja tina(II)fosfonaatin tai -pyrofosfaatin seosta. Erityisen edullista on käyttää tina(II)fosfonaat-tina difosfonaattia, trifosfonaattia tai tetrafosfonaat-tia. Erityisen hyviksi ovat osoittautuneet metaanidifos-fonihapon, aminometaanidifosfonihapon, 3,3-difosfonopro-; 25 pionihapon, 3,3-difosfoni-l,2-propaanidikarboksyylihapon ja propaani-l,l,3,3-tetrafosfonihapon tina(II)suolat. Näitä tinapitoisia fosfonaattikomplekseja kuvataan EP-julkaisuissa 0 002 485 ja 0 108 253, ja niitä käytetään laajasti teknetiumleimausvälineinä luusto- ja maksaskintigra-30 fiassa. Tina(Il)pitoinen pyrofosfaatti on samoin soveltu- •« • va, kun taas dietyleenitriamiinipentaetikkahapon tina- (II)suola on soveltumaton.
Käyttövalmiin diagnostisen valmisteen aikaansaamiseksi voidaan ensin liuottaa kylmäkuivattu vasta-aine-35 komponentti teknetium-99m-perteknetaattiliuokseen ja saada 9 92075 sitten aikaan teknetiumin pelkistyminen ja sitoutuminen vasta-aineeseen lisäämällä tina(II)komponentin liuosta.
Diagnostinen valmiste voidaan kuitenkin valmistaa myös sillä tavalla, että vasta-ainekomponentti liuotetaan 5 ensin tina(Il)pitoiseen liuokseen ja leimataan sen jälkeen vasta-aine teknetiumilla lisäämällä teknetium-99m-tertek-netaattiliuosta.
Diagnostisen valmisteen, joka sisältää teknetium-99m:llä leimattua elinspesifistä ainetta, valmistamiseksi 10 on tarkoituksenmukaista koota testivälineistö, joka sisältää kaksi erillistä, edullisesti kylmäkuivattua komponenttia, joista toinen sisältää elinspesifistä ainetta tai 9 9iti esikäsiteltyä elinspesifistä ainetta tai Tc-kompleksin-muodostajaan kytkettyä elinspesifistä ainetta mahdollises-15 ti seoksena puskurin kanssa ja toinen kompleksia stabiloivaa pelkistintä, edullisesti kompleksia stabiloivaa tina-(Il)suolaa, joka tarvitaan teknetiumin pelkistykseen ja sitomiseen elinspesifiseen aineeseen. Erityisen hyväksi on osoittautunut testivälineistö, jossa kylmäkuivattu, 20 mahdollisesti esikäsitelty elinspesifinen aine on seoksena puskuriaineena toimivan dinatriumvetyfosfaatin (pH 7,2) kanssa. Siten saadaan lyhyen reaktioajan, esimerkiksi jo 5 min:n, kuluttua lähes kvantitatiivisesti teknetium- 99m:llä leimattu aine, joka sisältää alle 1 % vapaata per- 9 9ni : * 25 teknetaattia ja vain sangen pieniä määriä Tc:llä lei mattua tina(II)komponenttia epäpuhtauksina, niin etteivät jatkopuhdistusmenettelyt ole enää tarpeellisia.
Elinspesifisen aineen ja tina(II)komponentin pakkaaminen erikseen mahdollistaa kylmäkuivatun valmisteen 30 säilymisen muuttumattomana. Siten saadaan elinspesifisen ” aineen nopea, ongelmaton ja moitteeton leimaus. Pertekne- taatin pelkistykseen tarvittava tina(Il)määrä on luonnollisesti pieni, muutamien mikrogrammojen luokkaa. Tinapitoista fosfonaattia tai pyrofosfaattia lisätään tina(II):n 35 mukaan laskettuna kulloinkin 1 - 100 ^ug, edullisesti 5-10 yug, yhtä ^ug:aa kohden elinspesifistä komponenttia stabiilin teknetium-99m-leimauksen aikaansaamiseksi.
10 92075
Keksinnön mukaisesti käytettävät tina(II)fosfonaa-tit tai -pyrofosfaatit soveltuvat erityisen hyvin pelkistettyjen vasta-aineiden tai pelkistettyjen vasta-ainefrag-menttien leimaamiseen, koska ne muodostavat leimauksen 5 vaatiman neutraalin pH-arvon vallitessa stabiilin kompleksin, joka sitoo pelkistetyn teknetiumkationin kuitenkin löyhästi, niin että se voidaan helposti vaihtaa vasta-aineessa tai sen fragmentissa olevan tioliryhmän kanssa.
Monissa leimausvälineistöissä läsnä olevasta sta-10 bilointiaineesta on etua myös vasta-aineiden leimauksen yhteydessä, sillä se takaa injektoitavan liuoksen pitkähkön säilymisajan. EP-hakemusjulkaisussa 0 141 100 kuvatun N-(4-aminobentsoyyli)glutamiinihapon, jotka voidaan käyttää luustoskintigrafiassa käytettäviä difosfonaatteja 15 stabiloivana komponenttina, avulla voidaan saavuttaa tek-netium-99m:llä leimattujen vasta-aineiden erinomainen säilyvyys.
Keksinnön mukaisesti valmistettua teknetium-99m:llä leimattua vasta-ainetta tai sen F(ab')2~vasta-ainefrag-20 menttia käytetään edullisesti kasvainten osoittamiseen in vivo. On edullista käyttää monoklonaalista vasta-ainetta tai sen F(ab1)2“fragmenttia, jotka reagoivat kasvaimeen liittyvien antigeenien kanssa.
Esimerkki 1 : 25 20 mg karsinoembryonaalisen antigeenin (CEA) vas taista monoklonaalista vasta-ainetta BW 431/31, jota käytetään paksusuoli-peräsuolisyöpien diagnosointiin, puhdistettiin lisäaineista, kuten sakkaroosista, dialysoimalla huoneen lämpötilassa ja siirrettiin isotooniseen natrium-30 kloridiliuokseen. Tätä vasta-ainetta kuvataan DE-hakemus-’· julkaisussa 3 416 774 ja julkaisussa Bosslet et ai., Int.
J. of Cancer 36 (1985) 75 - 84.
Sen jälkeen pitoisuutena noin 5 mg/ml esiintyvä vasta-aine saatettiin reagoimaan kaikkiaan 20 mg;n kanssa 35 2-merkaptoetanolia huoneen lämpötilassa (30 min), ja erotettiin sen jälkeen ylimääräisestä pelkistimestä tekemällä 11 92075 geelisuodatus Bio-Gel P-2:11a, joka on Bio Rad -yhtiön valmistama polyakryyliamidigeeli. 0,02 M fosfaattipuskuriin (pH 7,2) liuotettu vasta-aine jaettiin heti annoksiksi ja kylmäkuivattiin. Kylmäkuivatut näytteet sisälsivät 5 täyttöyksikköä kohden 2 mg vasta-ainetta ja noin 1,4 mg dinatriumvetyfosfaattia.
Teknetium-99m-leimauksen tekemiseksi saatettiin kukin näyte reagoimaan 7,5 ml:n kanssa perteknetaattilius-ta (kaikkiaan korkeintaan 3 000 MBq, noin 80 mCi). Tina- (ii) komponenttina käytettiin kylmäkuivattua leimausyksik-köä, joka koostui 5 mg:sta 3,3-difosfonopropionihapon nat-riumsuolaa, 0,1 mg:sta tina(II)kationeja ja 0,5 mg:sta N-(4-aminobentsoyyli)-L-glutamiinihappoa. Tämä seos liuotettiin 5 ml:aan fysiologista natriumkloridiliuosta, ja 15 lisättiin heti sen jälkeen (minuutin kuluttua) 0,5 ml tätä liuosta vasta-aineliuokseen, niin että kokonaistilavuudeksi tuli 8 ml. 10 min:n reaktioajan kuluttua mitattiin leimaussaanto ohutkerroskromatografisesti, Biogel P-10 -geelisuodatuksella ja korkeapainenestekromatogra-20 fialla (Zorbax GF 250, DuPont).
Yli 95 % teknetium-99m-aktiivisuudesta oli sitoutunut proteiiniin, noin 1 % oli fosfonaattiin sitoutuneena ja alle 1 % perteknetaattina. Perteknetaatin osuus kasvoi vasta pitkähkön seisotusajan jälkeen uudelleen; noin 6 • ^5 tunnin kuluttua se oli noin 2 %, kun taas fosfonaattiin sitoutunut osuus pysyi muuttumattomana, 1 %:na.
Erilaisissa teknetium-99m:llä leimatuissa vasta-aineissa olevan immuunireaktiivisen osuuden määrittäminen mittaamalla sitoutuminen kasvainsoluihin antoi hyvin yh-30 teensopivia arvoja vastaavien jodi-131:llä ja indium- • « 111:llä leimattujen CEA-vasta-aineiden immuunireaktiivi-suuden kanssa (taulukko 1).
12 92075
Taulukko 1
Radionuklideilla ^^1, ja 99mTc leimattujen monoklonaalisten vasta-aineiden immuunireaktiivisuuden (%) vertaaminen 5 Monoklonaalinen vasta-aine_^^1_^^In_99lnTc BW 431/31 85 75 90 BW 431/26 85 70 95 BW 494/32 65 45 70 !8 Taulukossa mainittua monoklonaalista vasta-ainetta BW 431/26 kuvataan DE-hakemusjulkaisussa 3 416 774, jossa siitä käytetään merkintää MAK VIII. Monoklonaalista vasta-ainetta BW 494/32 kuvataan DE-patenttihakemuksessa P 3 531 301.3.
18 Esimerkki 2 (vertailuesimerkki)
Monoklonaalinen vasta-aine BW 431/31 käsiteltiin muuten samalla tavalla kuin esimerkissä 1, mutta sitä ei saatettu reagoimaan 2-merkaptoetanolin kanssa. Vapaita tioliryhmiä tästä syystä sisältämättömästä vasta-aineesta 20 saatiin reaktiossa perteknetaatin kanssa, joka tehtiin yhtä suuren tinadifosfonaattimäärän läsnä ollessa ja esimerkin 1 mukaisesti, tuote, jossa vain noin 1 % teknetium-99m:stä oli sitoutunut proteiiniin ja suurehko osa (yli 50 %) esiintyi teknetium-99m-difosfonaattina ja jossa pel-• 25 kistetyn, sitoutumattoman teknetiumin (31 %) lisäksi huomattava osa teknetiumista oli vapaassa perteknetaatissa (15 %).
Esimerkki 3
Haimasyöpään liittyvän limakalvoantigeenin vastai-30 sen monoklonaalisen vasta-aineen BW 494/32 leimaamiseksi teknetium-99m:llä inkuboitiin 20 mg tätä ainetta, joka oli liuotettu 2 ml:aan isotoonista natriumkloridiliuosta, 0,5 ml:n kanssa l-%:ista kysteamiinihydrokloridin vesiliuosta 20 min huoneen lämpötilassa. Kromatografiapylväällä 35 puhdistettu, muunnettu vasta-aine, joka oli liuotettu 13 92075
Na2HP04-puskuriliuokseen, kylmäkuivattiin 2 mg:n annoksina. Vasta-aineen teknetiumleimaukseen tarvittavana tina-(II)komponenttina käytettiin pyrofosfaattileimausvälineis-töä, joka sisälsi 7,7 mg Na4P207:a ja 1,03 mg tina(II)-5 kloridia pakkausta kohden. Yhden pakkauksen sisältö liuotettiin 10 ml:aan fysiologista natriumkloridiliuosta, ja lisättiin 0,25 ml tätä liuosta, joka määrä vastaa noin 2+ 14 yug:a sn :a, vasta-aineeseen, joka oli ennalta liuotettu noin 8 mitään perteknetaattiliuosta (noin 2 000 MBq). 10 Noin 10 min:n reaktioajan jälkeen annettiin terveille rotille kullekin laskimonsisäisesti 0,1 ml liuosta, jonka koostumus oli seuraava: 25 ^,ug mab:ta 2,25 ^ug Na4P20^:a 15 0,175 ^ug tina(II):a ja noin 18 ^ug Na2HP04-puskuria.
Jakautuminen elimiin 24 tunnin kuluttua injektoin-nista (p.i.) esitetään taulukossa 2. Siitä käy ilmi, että varastoituminen luihin, kilpirauhaseen ja mahalaukkuun 20 on sangen vähäistä ja arastoituminen muihin elimiin on vertailukelpoinen jodi-131:llä leimatun vasta-aineen kanssa. Teknetium-99m:llä leimatulle vasta-aineelle BW 494/32 mitattiin suurempi immuunireaktiivisuusarvo (vertaa taulukko 1) kuin jodi-131:llä tai indium-111:llä leimatuille • < • 25 vasta-aineille.
• < 14 92075
Taulukko 2 99rnTc- ja ^^I-mab 494/32:n jakautuminen elimiin normaaleissa Wistar-rotissa 24 tuntia p.i. (% annetusta annoksesta elintä, tai g:aa kudosta kohden) 5
Elin 99mTc
Maksa %/g 0,49 0,23
Keuhkot 0,82 0,48
Perna 0,65 0,30 10 Munuaiset 4,25 0,70
Luut 0,57 0,20
Veri 1,97 0,92
Lihas 0,12 0,08 15 Maha %/koko elin 0,38 2,50
Kilpirauhanen 0,05 4,85
Suolisto 3,83 4,62
Virtsa 24,5 49,3
Esimerkki 4 20 50 mg samoin CEA:n vastaista monoklonaalista vasta- ainetta BW 431/26 pelkistettiin osittain käsittelemällä 2-merkaptoetanolilla, puhdistettiin ja kylmäkuivattiin 2 mg:n annoksina fosfaattipuskurin (pH 7,2) läsnä ollessa.
Teknetium-99m-leimaus tehtiin muuten maksaskintig- : 25 rafiaan käytettävällä leimausyksiköllä, joka koostuu 13,5 mg:sta 1,1,3,3-propaanitetrafosfonihappotetranatrium- suolaa ja 0,6 mg:sta tina(II)klorididihydraattia. Yksi leimausyksikkö liuotettiin 10 ml:aan isotoonista NaCl- liuosta, ja lisättiin 0,5 ml tätä liuosta, joka määrä vas-2+ 30 taa 15 ^ug:a Sn :a, kylmäkuivattuun vasta-aineeseen. Sen . jälkeen lisättiin perteknetaattiliuosta (3000 MBq) kirk kaaseen vasta-aine-tina(II)suolaliuokseen, ja annettiin Q Qm
Te:11a leimattu vasta-aine laskimonsisäisesti karvattomille hiirille, joilla oli istutettu ihmisen paksusuoli-35 syöpä. Kasvain oli jo 24 tunnin kuluttua injektoinnista hyvin havaittavissa skintigrafisesti. Taulukko 3 osoittaa 15 92075 tämän vasta-aineen varastoitumisen kasvaimeen ja jakautu- 131 misen elimiin karvattomassa hiiressä ja sen, että I:llä, ^^In:llä ja 99mTc:llä leimatut valmisteet ovat keskenään vertailukelpoisia.
5 Taulukko 3 "^^1-, ^^In- ja 99mTc-mab 431/26 :n rikastuminen kasvaimeen ja jakautuminen elimiin karvattomissa hiirissä (n = 2), joilla oli ihmisen paksusuolisyöpä, ajan funktiona.
10 Aika injektoinnista 131i Ulin 99raTc (tuntia)_17 48 17_48 17_30
Kasvain %/g 14,9 8,8 9,8 13,0 11,0 14,9
Maksa %/g 4,6 3,0 8,5 8,4 7,2 5,4
Munuaiset %/g 3/4 1,9 12,2 16,4 10,6 7,7 15 Lihas %/g 1/3 0,84 1,4 1.2 0,9 1,0
Veri %/ml 14,6 13,0 20,5 9,2 17,0 15,0
Luut: kokonais-% 1/8 1/7 4,7 4,3 2,4 2,1
Esimerkki 5 20 mg monoklonaalisen vasta-aineen 431/31 Ftab'^” 20 fragmenttia inkuboitiin 15 min lämpötilassa 4°C 1 ml:n kanssa l-%:ista kysteamiinihydrokloridiliuosta. Vasta-aine-fragmentti, josta oli poistettu ylimääräinen pelkistin, kylmäkuivattiin yhdessä fosfaattipuskurin kanssa. Tekne-tiumleimaukseen käytettiin leimausyksikköä, joka koostui • ne • 13,0 mgssta 3,3-difosfono-l,2-propaanidikarboksyylihapon tetranatriumsuolaa, 0,23 mg:sta tina(Il)oksidia ja 1,0 mg:sta (N-(4-aminobentsoyyli)-L-glutamiinihapon mono- natriumsuolaa, josta käytettiin 1/20 liuotettuna 0,5 ml:aan fysiologista keittosuolaliuosta. Leimattu vas- ^ ta-ainefragmentti (ominaisaktiivisuus 1 000 MBq/mg) ei sisältänyt käytännöllisesti katsoen ollenkaan pertekne- 9 9ltl taattia, mutta sisälsi hieman enemmän (noin 3 %) Tc-difosfonaattia. Immuunireaktiivisuus oli 60 %.
16 92075
Esimerkki 6
Proteiinin leimaaminen 99mTc:llä 250 mg IgG:tä liuotettiin pitoisuudeksi 10 mg/ml isotooniseen natriumkloridiliuokseen. Tätä liuosta inku-5 boitiin noin 30 min lämpötilassa 4 - 25°C 2-merkaptoeta- nolin (0,5 - 1 ml) lisäämisen jälkeen. Sen jälkeen pelkistetty immunoglobuliini puhdistettiin tekemällä geelisuo-datus polyakryyliamidigeelipylväällä (Bio-Gel P-2, Bio Rad) käyttämällä eluenttina 0,02 M dinatriumvetyfosfonaat-10 tiliuosta (pH 7,2). Erotetun puhtaan IgG-fraktion pitoisuus säädettiin samalla fosfaattipuskurilla laimentamalla arvoo- 4 mg IgG:tä/ml (noin 3 mg Na2HP04:a/ml), ja kylmä-kuivattiin tämä liuos 0,5 ml:n annoksina.
Näytteen (2 mg IgG:tä) leimaamiseksi Tc:llä 15 liuotettiin kylmäkuivaustuote 1 ml:aan tina(Il)metaanidi-fosfonaattiliuosta (pH 7), joka saatiin liuottamalla lei-mausyksikkö, joka koostui 2,6 mg:sta metaanidifosfonihapon natriumsuolaa ja 0,04 mg:sta tina(II)kloridia, 5 ml:aan isotoonista natriumkloridiliuosta. Sen jälkeen joukkoon Q Qjy| 20 lisättiin 4 - 9 ml Te-perteknetaattiliuosta (noin 1 000 MBq). Noin 5 min:n reaktioajan kuluttua saatiin 9 9 m
Te-leimattu IgG, jossa yli 95 % teknetiumista oli sitoutuneena proteiinin, alle 1 % fosfonaattiin ja alle 1 % vapaana perteknetaattina. Leimattu IgG oli stabiili 3 tun-• 25 tia valmistuksen jälkeen. Vasta pitkähköjen seisotusaiko- jen kuluttua oli liuoksessa jälleen havaittavissa vapaata perteknetaattia.
Esimerkki 7 1,4,8,11-tetra-atsasyklotetradekaanin (syklaamin) 30 leimaaminen 99mTc:llä [ 8 mg syklaamia liuotettiin 0,5 ml:aan isotoonista keittosuolaliuosta, ja säädettiin liuoksen pH arvoon 11 käyttämällä 0,1 N NaOH-liuosta. Tähän liuokseen lisättiin 1 ml tina(II)-1,1,3,3-propaanitetrafosfonaattiliuosta 35 (pH = 6), joka saatiin liuottamalla leimausyksikkö, joka 17 92075 koostui 2,9 mg:sta 1,1,3,3-propaanitetrafosfonihapon nat-riumsuolaa ja 0,12 mg:sta tina(II)klorididihydraattia, 5 ml:aan isotoonista natriumkloridiliuosta. Sen jälkeen • · ♦ Q Qtn joukkoon lisättiin noin 590 MBq Tc-perteknetaattiliuos-5 ta (noin 0,3 ml), ja annettiin seoksen seistä 5 min huoneen lämpötilassa. Leimatun syklaamin saanto oli yli 98 %, jolloin alle 1 % teknetiumista oli vapaana perteknetaat-tina tai fosfonaattiin sitoutuneena. Leimattu liuos säilyi useita tunteja.
10 Esimerkki 8
Pyrofosfaatin leimaaminen ^mTc:llä 10 mg pyrofosfaattia liuotettiin 1 ml:aan 0,9-%:ista keittosuolaliuosta, ja lisättiin liuokseen 1 ml tina(II)- 1,1,3,3-propaanitetrafosfonaattiliuosta (katso esimerkki 7).
15 Tähän liuokseen lisättiin 1 ml perteknetaattiliuosta (noin 300 MBq), ja annettiin seoksen seistä 5 min huoneen lämpötilassa. Pyrofosfaatti leimautui 50-%:isesti 99m
Tc:llä. Leimatun fosfonaatin osuus oli alle 10 %.
• ·
Claims (10)
1. Menetelmä teknetium-99m:llä leimatun vasta-aineen tai F (ab') 2-vasta-ainef ragmentin valmistamiseksi, 5 tunnettu siitä, että esikäsitelty vasta-aine tai F (ab') 2-vasta-ainefragmentti saatetaan reagoimaan pertek-netaatti-99m:n ja pelkistävänä aineena toimivan tina(II)-fosfonaatin tai -pyrofosfaatin kanssa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että tina(II)fosfonaattina käytetään difosfonaattia, trifosfonaattia tai tetrafosfonaat-tia.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään metaanidifosfoniha- 15 pon, aminometaanidifosfonihapon, 3,3-difosfono-l,2-propaa-nidikarboksyylihapon tai propaani-1,1,3,3-tetrafosfoniha-pon tina(II)suolaa.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään monoklonaalista 20 vasta-ainetta tai sen F(ab')2-fragmenttia.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään kasvaimeen liittyvien antigeenien vastaista vasta-ainetta tai sen F(ab')2- . fragmenttia.
6. Testivälineistö, jota käytetään patenttivaati muksen 1 mukaisessa menetelmässä, tunnettu siitä, että se koostuu kahdesta erillisestä, kylmäkuivatusta komponentista, joista toinen sisältää vasta-ainetta tai F (ab') 2-vasta-ainefragmenttia ja toinen pelkistävänä ainee-.30 na toimivaa tina(II)fosfonaattia tai -pyrofosfaattia, joka ‘ tarvitaan teknetiumin pelkistämiseen ja sitomiseen esikä- siteltyyn vasta-aineeseen tai F (ab') 2-vasta-ainefragment-tiin. 92075
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen testivälineistö, tunnettu siitä, että kylmäkuivattu vasta-ainekom-ponentti on seoksena puskuriaineena käytettävän dinatrium-vetyfosfaatin kanssa.
8. Menetelmä diagnostisen valmisteen valmistamisek si, tunnettu siitä, että liuotetaan ensin vasta-ainetta tai F (ab' )2-vasta-ainefragmenttia sisältävä komponentti teknetium-99m-perteknetaattiliuokseen ja suoritetaan sitten teknetiumin pelkistys ja sitominen vasta-ai-10 neeseen tai F(ab')2-vasta-ainefragmenttiin lisäämällä pelkistävänä aineena toimivaa tina(II) fosfonaattia tai -pyro-fosfaattia.
9. Menetelmä diagnostisen valmisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että liuotetaan ensin vasta-15 ainetta tai F (ab') 2-vasta-ainefragmenttia sisältävä komponentti pelkistävänä aineena toimivan tina(II)fosfonaatti-tai -pyrofosfaattiliuokseen ja leimataan sitten vasta-aine tai F (ab') 2-vasta-ainefragmentti teknetiumilla lisäämällä teknet ium-9 9m-perteknetaatt i1iuosta.
10. Patenttivaatimuksen 8 tai 9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että tina(II)fosfonaattia tai -pyrofosfaattia käytetään, tina(II):n mukaan laskettuna, kulloinkin 1 - 100 μql edullisesti 5-10 μg, 1 mg:aa . kohti vasta-ainetta tai F (ab' )2-vasta-ainefragmenttia tä- 25 män leimaamiseksi pysyvästi teknetium-99m:llä. 92075
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3642173 | 1986-12-10 | ||
| DE3642173 | 1986-12-10 | ||
| DE19873728599 DE3728599A1 (de) | 1986-12-10 | 1987-08-27 | Verfahren zur herstellung einer mit technetium-99m-markierten organspezifischen substanz |
| DE3728599 | 1987-08-27 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI875396A0 FI875396A0 (fi) | 1987-12-08 |
| FI875396A FI875396A (fi) | 1988-06-11 |
| FI92075B true FI92075B (fi) | 1994-06-15 |
| FI92075C FI92075C (fi) | 1994-09-26 |
Family
ID=25850190
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI875396A FI92075C (fi) | 1986-12-10 | 1987-12-08 | Menetelmä teknetium-99m:llä leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5116596A (fi) |
| EP (1) | EP0271806B2 (fi) |
| JP (2) | JPH07100667B2 (fi) |
| KR (1) | KR880007456A (fi) |
| AU (1) | AU611112B2 (fi) |
| CA (1) | CA1310265C (fi) |
| DE (2) | DE3728599A1 (fi) |
| DK (1) | DK167851B1 (fi) |
| ES (1) | ES2053515T5 (fi) |
| FI (1) | FI92075C (fi) |
| GR (2) | GR3007608T3 (fi) |
| HU (1) | HUT46025A (fi) |
| IE (1) | IE60604B1 (fi) |
| IL (1) | IL84751A (fi) |
| NO (1) | NO177625C (fi) |
| PL (1) | PL269331A1 (fi) |
| PT (1) | PT86322B (fi) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5612016A (en) * | 1988-04-01 | 1997-03-18 | Immunomedics, Inc. | Conjugates of antibodies and bifunctional ligands |
| US5128119A (en) * | 1989-06-12 | 1992-07-07 | Immunomedics, Inc. | Methods for technetium/rhenium labeling of f(ab1)2 fragments |
| IL93432A (en) * | 1989-02-24 | 1994-02-27 | Johnson Mathey Inc | Hydrazines and hydrazides, their conjugates with macromolecules, and such conjugates labeled with metallic ions |
| US5206370A (en) | 1989-02-24 | 1993-04-27 | Johnson Matthey, Inc. | Certain pyridyl hydrazines and hydrazides useful for protein labeling |
| US5346687A (en) * | 1989-08-09 | 1994-09-13 | Rhomed Incorporated | Direct radiolabeling of antibody against stage specific embryonic antigen for diagnostic imaging |
| US5460785A (en) * | 1989-08-09 | 1995-10-24 | Rhomed Incorporated | Direct labeling of antibodies and other protein with metal ions |
| DK0486622T3 (da) * | 1989-08-09 | 1999-07-19 | Rhomed Inc | Direkte radiomærkning af antistoffer og andre proteiner med technetium eller rhenium |
| US5443816A (en) * | 1990-08-08 | 1995-08-22 | Rhomed Incorporated | Peptide-metal ion pharmaceutical preparation and method |
| US5078985A (en) * | 1989-08-09 | 1992-01-07 | Rhomed, Incorporated | Radiolabeling antibodies and other proteins with technetium or rhenium by regulated reduction |
| US6001979A (en) | 1989-08-29 | 1999-12-14 | Nycomed Amersham Plc | Cores for technetium radiopharmaceuticals |
| US5183653A (en) * | 1990-04-13 | 1993-02-02 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Boronic acid adducts of metal dioxime complexes useful in labelling proteins and other amine-containing compounds |
| EP0498333B1 (de) * | 1991-02-05 | 1997-01-15 | Cis Bio International | Verfahren zur Herstellung einer mit Technetium-99m markierten organspezifischen Substanz |
| US5849261A (en) * | 1991-02-08 | 1998-12-15 | Diatide, Inc. | Radiolabeled vasoactive intestinal peptides for diagnosis and therapy |
| US5443815A (en) * | 1991-11-27 | 1995-08-22 | Diatech, Inc. | Technetium-99m labeled peptides for imaging |
| US7238340B1 (en) | 1991-11-27 | 2007-07-03 | Cis Bio International | Monoamine, diamide, thiol-containing metal chelating agents |
| KR100238558B1 (ko) * | 1991-02-27 | 2000-02-01 | 에프.쥐.엠.헤르만스 | 단백질의 테크네튬-99m 표지화 |
| US5225180A (en) * | 1991-09-10 | 1993-07-06 | Diatech, Inc. | Technetium-99m labeled somatostatin-derived peptides for imaging |
| US5808091A (en) * | 1991-10-29 | 1998-09-15 | Bracco International B.V. | Rhenium and technetium complexes containing a hypoxia localizing moiety |
| US5783170A (en) * | 1991-11-27 | 1998-07-21 | Diatide, Inc. | Peptide-metal chelate conjugates |
| CA2127284C (en) * | 1992-01-03 | 2002-02-05 | Buck A. Rhodes | Protein- and peptide-metal ion pharmaceutical applications |
| US5643549A (en) * | 1992-02-20 | 1997-07-01 | Rhomed Incorporated | Leukostimulatory agent for in vivo leukocyte tagging |
| US5326856A (en) * | 1992-04-09 | 1994-07-05 | Cytogen Corporation | Bifunctional isothiocyanate derived thiocarbonyls as ligands for metal binding |
| US6313274B1 (en) | 1992-07-06 | 2001-11-06 | Thomas R. Sykes | Photoactivation of proteins for conjugation purposes |
| US5608110A (en) * | 1993-06-15 | 1997-03-04 | Bracco International B.V. | Heteroatom-bearing ligands and metal complexes thereof |
| US6080384A (en) * | 1997-03-25 | 2000-06-27 | American Biogenetic Sciences, Inc. | Methods for radionuclide-labeling of biomolecules and kits utilizing the same |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3903262A (en) * | 1972-03-13 | 1975-09-02 | Cutter Lab | Pharmaceutical compositions comprising intravenously injectable modified serum globulin, its production and use |
| US3863004A (en) * | 1972-03-20 | 1975-01-28 | Mallinckrodt Chemical Works | Denatured macroprotein with divalent tin for tagging with technetium-99m and method of preparation |
| US3928552A (en) * | 1973-10-18 | 1975-12-23 | Medi Physics Inc | Hepato-biliary radiopharmaceutical comprising 2-mercaptoisobutyric acid chelating reduced technetium-99m |
| FR2281134A1 (fr) * | 1974-08-06 | 1976-03-05 | Commissariat Energie Atomique | Procede de marquage au 99m technetium |
| US4062933A (en) * | 1975-05-27 | 1977-12-13 | Mallinckrodt, Inc. | Colloidal compositions with protective agents suitable for radioactive labeling |
| US4323546A (en) * | 1978-05-22 | 1982-04-06 | Nuc Med Inc. | Method and composition for cancer detection in humans |
| US4187294A (en) * | 1978-07-06 | 1980-02-05 | Nihon Nousan Kougyou Co., Ltd. | Method for producing eggs containing a high amount of iodinated amino acids |
| US4424200A (en) * | 1979-05-14 | 1984-01-03 | Nuc Med Inc. | Method for radiolabeling proteins with technetium-99m |
| US4311688A (en) * | 1979-10-29 | 1982-01-19 | Serono Laboratories Inc. | Composition and method for cancer detection in humans |
| JPS56125317A (en) * | 1980-03-08 | 1981-10-01 | Nippon Mejifuijitsukusu Kk | Stable radioactive diagnosticum with radioactive metallic mark |
| CH652599A5 (de) * | 1981-08-28 | 1985-11-29 | Solco Basel Ag | Verfahren zur herstellung physiologisch abbaubarer kolloidaler, human-serumalbumin enthaltender produkte und ihre verwendung. |
| US4440738A (en) * | 1982-06-10 | 1984-04-03 | Mallinckrodt, Inc. | Stable radiographic imaging agents |
| US4479930A (en) * | 1982-07-26 | 1984-10-30 | Trustees Of The University Of Massachusetts | Amines coupled wth dicyclic dianhydrides capable of being radiolabeled product |
| DE3237573A1 (de) * | 1982-10-09 | 1984-04-12 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Technetium-99m-tri- und tetraphosphonate zur szintigraphischen dastellung res-haltiger organe und der lymphgefaesse und verfahren zu deren herstellung |
| EP0111414A3 (en) * | 1982-12-08 | 1985-05-02 | Mallinckrodt, Inc. (a Delaware corporation) | Radiographic imaging agents |
| US4510125A (en) * | 1982-12-08 | 1985-04-09 | Mallinckrodt, Inc. | Process for making lyophilized radiographic imaging kit |
| DE3484511D1 (de) * | 1983-12-29 | 1991-05-29 | Commw Of Australia | Herstellung von mit 99m tc markierten radioarzneimitteln. |
| US4837003A (en) * | 1984-09-13 | 1989-06-06 | Mallinckrodt, Inc. | Radiolabeled antibody fragments |
| JPS61103841A (ja) * | 1984-10-26 | 1986-05-22 | Nippon Mejifuijitsukusu Kk | 放射性テクネチウム標識に供する安定な塩化第一スズ組成物 |
| ZA863205B (en) * | 1985-05-01 | 1987-08-26 | Univ New York State Res Found | Diagnostic radiopharmaceutical compounds |
-
1987
- 1987-08-27 DE DE19873728599 patent/DE3728599A1/de not_active Withdrawn
- 1987-12-08 ES ES87118142T patent/ES2053515T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-12-08 IL IL84751A patent/IL84751A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-12-08 DE DE8787118142T patent/DE3783745D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-12-08 EP EP87118142A patent/EP0271806B2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-12-08 FI FI875396A patent/FI92075C/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-12-09 KR KR870013998A patent/KR880007456A/ko not_active Application Discontinuation
- 1987-12-09 DK DK646587A patent/DK167851B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-12-09 AU AU82263/87A patent/AU611112B2/en not_active Ceased
- 1987-12-09 IE IE334587A patent/IE60604B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-12-09 JP JP62309769A patent/JPH07100667B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1987-12-09 CA CA000553909A patent/CA1310265C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-12-09 PT PT86322A patent/PT86322B/pt unknown
- 1987-12-09 PL PL26933187A patent/PL269331A1/xx unknown
- 1987-12-09 NO NO875138A patent/NO177625C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-12-10 HU HU875566A patent/HUT46025A/hu unknown
-
1989
- 1989-10-27 US US07/427,990 patent/US5116596A/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-04-09 GR GR930400361T patent/GR3007608T3/el unknown
-
1995
- 1995-04-24 JP JP7098170A patent/JP2550481B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-03-29 GR GR960400850T patent/GR3019471T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI92075B (fi) | Menetelmä teknetium-99m:llä leimatun elinspesifisen aineen valmistamiseksi | |
| JP3070763B2 (ja) | テクネチウムまたはレニウムでの抗体または他のタンパク質の直接放射能標識 | |
| US4421735A (en) | Radiolabeled diagnostic compositions and method for making the same | |
| KR860001151B1 (ko) | 메탈로티오나인 및 표적탐색용 생물학적 활성 분자의 추적-표지된 접합체의 제조방법 | |
| CA1260827A (en) | Antibody-metal ion complexes | |
| KR0151105B1 (ko) | 단백질의 직접적 방사선 라벨링 방법 | |
| EP0627939B1 (en) | Conjugates of biotin and deferoxamine for radioimmunoimaging and radioimmunotherapy | |
| JPH0582368B2 (fi) | ||
| JPH10501531A (ja) | モノアミン、ジアミド、チオール含有金属キレート剤 | |
| US5164175A (en) | Diagnostic aid containing an organ-specific substance labeled with technetium-99m | |
| US5746996A (en) | Thiolation of peptides for radionuclide-based radiodetection and radiotherapy | |
| JPH0582370B2 (fi) | ||
| WO1996040289A1 (en) | Thiolation of peptides for radionuclide-based radiodetection and radiotherapy | |
| US5863517A (en) | Process for the preparation of an organ-specific substance labeled with technetium-99m | |
| Bubenshchikov et al. | Chelating Agents for Zirconium-89 in the Synthesis of Radiopharmaceuticals: Current State and Prospects of Development | |
| WC et al. | Three Approaches to Radiolabeling Antibodies with 99m Tc |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: CIS BIO INTERNATIONAL |
|
| FG | Patent granted |
Owner name: CIS BIO INTERNATIONAL |
|
| MA | Patent expired |