JPH069673A - ヌクレオシドの製造法 - Google Patents
ヌクレオシドの製造法Info
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- JPH069673A JPH069673A JP5064211A JP6421193A JPH069673A JP H069673 A JPH069673 A JP H069673A JP 5064211 A JP5064211 A JP 5064211A JP 6421193 A JP6421193 A JP 6421193A JP H069673 A JPH069673 A JP H069673A
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- nucleoside
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 少なくとも二種のヌクレオシド及び／又はヌ
クレオシド類似体からの、天然若しくは合成のヌクレオ
シド、ヌクレオシド類似体又はオリゴヌクレオチド（そ
の塩基性分子に対しては、さらに式（Ｉ）〜（Ｉｂ）：
で示される基などが結合している）をヌクレオチド単量
体はオリゴヌクレオチドから製造する方法であって、無
機又は有機窒素塩基の少なくとも触媒量の存在下に１な
いし３０個の炭素原子を有する脂肪族、脂環式、芳香−
脂肪族又は芳香族アルコール、２ないし５０個の炭素原
子を有するポリオール又は重合体ポリオールの過剰量と
を反応させて、式（Ｉ）〜（Ｉｂ）の基を−ＯＨ基に変
換することを特徴とする方法。 【化６】 【効果】 上記方法は、ヒドロゲンホスホナート又はヒ
ドロゲンホスフィナート基が他のアシル保護基に比較し
て高い選択性でアルコールに変換されるので、所定の反
応条件下で数日間経過した後でも、ヌクレオシド塩基の
保護基は除去されない利点を有する。
クレオシド類似体からの、天然若しくは合成のヌクレオ
シド、ヌクレオシド類似体又はオリゴヌクレオチド（そ
の塩基性分子に対しては、さらに式（Ｉ）〜（Ｉｂ）：
で示される基などが結合している）をヌクレオチド単量
体はオリゴヌクレオチドから製造する方法であって、無
機又は有機窒素塩基の少なくとも触媒量の存在下に１な
いし３０個の炭素原子を有する脂肪族、脂環式、芳香−
脂肪族又は芳香族アルコール、２ないし５０個の炭素原
子を有するポリオール又は重合体ポリオールの過剰量と
を反応させて、式（Ｉ）〜（Ｉｂ）の基を−ＯＨ基に変
換することを特徴とする方法。 【化６】 【効果】 上記方法は、ヒドロゲンホスホナート又はヒ
ドロゲンホスフィナート基が他のアシル保護基に比較し
て高い選択性でアルコールに変換されるので、所定の反
応条件下で数日間経過した後でも、ヌクレオシド塩基の
保護基は除去されない利点を有する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、少なくとも二つの同一
若しくは異なるヌクレオシド単量体を含む、天然若しく
は合成ヌクレトシド、ヌクレオシド類似体又はオリゴヌ
クレオチドの製造法に関する。
若しくは異なるヌクレオシド単量体を含む、天然若しく
は合成ヌクレトシド、ヌクレオシド類似体又はオリゴヌ
クレオチドの製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】一定の配列順序を有する多くのヌクレオ
チド類は、現在、亜リン酸トリエステル法で合成されて
いる。この方法において、オリゴヌクレオチドは３´−
末端から段階的に５´の方向に合成される。合成は５´
−水酸基及び、必要に応じて、そのヌクレオシド塩基に
保護基を有する３´−末端ヌクレオチドの結合で化学的
に不活性な固相への結合により開始する。次いで、５´
−水酸基の保護基が除去される。適当に保護されたヌク
レオシドの３´−ホスホルアミダイトとの反応は、ヌク
レオチド間の結合を形成する。得られた亜リン酸トリエ
ステルは、さらに所望のヌクレオチド間の結合に酸化さ
れる。次の合成サイクルは、固相に固定されたジヌクレ
オチドの５´−末端保護基の除去で始められる。この合
成サイクルは、固相に結合したオリゴヌクレオチドが得
られるまで繰り返される。合成は、ヌクレオシド塩基、
水酸基及びヌクレオチド間の結合での保護基の除去で終
わる（Caruthers, M. H., Science 230:281-285, 1985
）。ホスホルアミダイトの構造により、用いるヌクレ
オシド又はオリゴヌクレオチドは、代表的には式：
チド類は、現在、亜リン酸トリエステル法で合成されて
いる。この方法において、オリゴヌクレオチドは３´−
末端から段階的に５´の方向に合成される。合成は５´
−水酸基及び、必要に応じて、そのヌクレオシド塩基に
保護基を有する３´−末端ヌクレオチドの結合で化学的
に不活性な固相への結合により開始する。次いで、５´
−水酸基の保護基が除去される。適当に保護されたヌク
レオシドの３´−ホスホルアミダイトとの反応は、ヌク
レオチド間の結合を形成する。得られた亜リン酸トリエ
ステルは、さらに所望のヌクレオチド間の結合に酸化さ
れる。次の合成サイクルは、固相に固定されたジヌクレ
オチドの５´−末端保護基の除去で始められる。この合
成サイクルは、固相に結合したオリゴヌクレオチドが得
られるまで繰り返される。合成は、ヌクレオシド塩基、
水酸基及びヌクレオチド間の結合での保護基の除去で終
わる（Caruthers, M. H., Science 230:281-285, 1985
）。ホスホルアミダイトの構造により、用いるヌクレ
オシド又はオリゴヌクレオチドは、代表的には式：
【０００３】
【化２】 で示される基を含んでいる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】この合成法の問題点
は、ホスホルアミダイトと固相に固定されたヌクレオシ
ド又はオリゴヌクレオチドの遊離の水酸基との間におけ
る縮合反応である。この反応工程において、水の除去が
厳密に保証されなければならない。無水溶媒の使用で
も、水の除去は完全に保証されない。このために、固相
オリゴヌクレオチド合成のカップリング工程において、
ヌクレオシドホスホルアミダイトのかなりの量は、ヌク
レオシドホスホルアミダイトの加水分解物、例えばヌク
レオシドシアノエチルヒドロゲンホスホナートに変換さ
れる。この最後に述べた化合物は、カップリング反応に
関与しない。それでもやはり、高いカップリング収率を
得るためには大過剰のホスホルアミダイトを用いること
が必要である。最新式のＤＮＡ合成装置においては、固
相に固定された水酸基組成物の量に比較して２ないし２
０倍過剰のヌクレオシドホスホルアミダイトが用いられ
る。ヌクレオチド結合の最高収率は、用いたホスホルア
ミダイトに対して２０％である。用いたヌクレオシドの
少なくとも８０％はヌクレオシドホスホルアミダイトの
加水分解物として棄てられる。この問題は使用する装置
の改良、例えば特殊な計量装置によっても完全に克服す
ることができない［参照：Chemische Rundschau Nr. 3
7, Seite 11(1992)］。
は、ホスホルアミダイトと固相に固定されたヌクレオシ
ド又はオリゴヌクレオチドの遊離の水酸基との間におけ
る縮合反応である。この反応工程において、水の除去が
厳密に保証されなければならない。無水溶媒の使用で
も、水の除去は完全に保証されない。このために、固相
オリゴヌクレオチド合成のカップリング工程において、
ヌクレオシドホスホルアミダイトのかなりの量は、ヌク
レオシドホスホルアミダイトの加水分解物、例えばヌク
レオシドシアノエチルヒドロゲンホスホナートに変換さ
れる。この最後に述べた化合物は、カップリング反応に
関与しない。それでもやはり、高いカップリング収率を
得るためには大過剰のホスホルアミダイトを用いること
が必要である。最新式のＤＮＡ合成装置においては、固
相に固定された水酸基組成物の量に比較して２ないし２
０倍過剰のヌクレオシドホスホルアミダイトが用いられ
る。ヌクレオチド結合の最高収率は、用いたホスホルア
ミダイトに対して２０％である。用いたヌクレオシドの
少なくとも８０％はヌクレオシドホスホルアミダイトの
加水分解物として棄てられる。この問題は使用する装置
の改良、例えば特殊な計量装置によっても完全に克服す
ることができない［参照：Chemische Rundschau Nr. 3
7, Seite 11(1992)］。
【０００５】ベーリンガー（Boehringer, M. P., Eidge
noessische Technische Hochschuleの学位論文, ETH N
o. 9377, 1991）は、ヌクレオシド類似体のメチルホス
ホルアミダイトを水酸化ナトリウム溶液と反応させ、遊
離の水酸基を有するヌクレオシド類似体を得た。しかし
ながら、彼が用いた条件下では、ヌクレオシド塩基の保
護基は除去される。
noessische Technische Hochschuleの学位論文, ETH N
o. 9377, 1991）は、ヌクレオシド類似体のメチルホス
ホルアミダイトを水酸化ナトリウム溶液と反応させ、遊
離の水酸基を有するヌクレオシド類似体を得た。しかし
ながら、彼が用いた条件下では、ヌクレオシド塩基の保
護基は除去される。
【０００６】プレドボジテレフら（Predvoditelev, D.
A., Tyuganova, M. A., Nifant'ev,E. E., Rogovin, Z.
A., Zh. Prikl. Khim. 40:171-177, 1967 ）、ニフン
トエフら（Nifnt'ev, E. E., Predvoditelev, D. A., F
ursenko, I. V., Zh. Obsh. Khim. 51:2435-2441, 198
1）、トロエフ及びシメオノフ（Troev, K., Simeonov,
M., Phosphorus and Sulfur 19:363-367, 1984 ）並び
にウェストハイマーら（Westheimer, F. H., Huang,
S., Covitz, F., J. Am. Chem. Soc. 110:181-185, 198
8 ）が記載している非ヌクレオチドジアルキルホスファ
イト類のエステル交換反応法は、すべて、保護されたヌ
クレオシドに応用した場合、核酸塩基の保護基が容易に
除去される欠点を有している。これらの方法で必要とす
る高温は、熱分解反応、例えば保護基の熱脱離、特に脱
トリチル化が起こるので広範な用途には障害になる。
A., Tyuganova, M. A., Nifant'ev,E. E., Rogovin, Z.
A., Zh. Prikl. Khim. 40:171-177, 1967 ）、ニフン
トエフら（Nifnt'ev, E. E., Predvoditelev, D. A., F
ursenko, I. V., Zh. Obsh. Khim. 51:2435-2441, 198
1）、トロエフ及びシメオノフ（Troev, K., Simeonov,
M., Phosphorus and Sulfur 19:363-367, 1984 ）並び
にウェストハイマーら（Westheimer, F. H., Huang,
S., Covitz, F., J. Am. Chem. Soc. 110:181-185, 198
8 ）が記載している非ヌクレオチドジアルキルホスファ
イト類のエステル交換反応法は、すべて、保護されたヌ
クレオシドに応用した場合、核酸塩基の保護基が容易に
除去される欠点を有している。これらの方法で必要とす
る高温は、熱分解反応、例えば保護基の熱脱離、特に脱
トリチル化が起こるので広範な用途には障害になる。
【０００７】別な方法は、テトラキスベンジルオキシチ
タンでのルイス酸触媒エステル交換反応であり、適度の
収率で、４０℃で７２時間にわたって行なわれるが、チ
タン酸エステルが加水分解に敏感なのが特に不利である
（Froneman, M., Modro, T.A., Synthesis 201-204, 19
91 ）。
タンでのルイス酸触媒エステル交換反応であり、適度の
収率で、４０℃で７２時間にわたって行なわれるが、チ
タン酸エステルが加水分解に敏感なのが特に不利である
（Froneman, M., Modro, T.A., Synthesis 201-204, 19
91 ）。
【０００８】
【課題を解決しようとする手段】予期しないことである
が、本発明はヌクレオシドヒドロゲンホスホナート類又
はヒドロゲンホスフィナート類を、ヒドロゲンホスホナ
ート又はヒドロゲンホスフィナートの官能基が存在して
いた位置に遊離の水酸基を有するヌクレオシドに変換す
る方法を提供するものである。本発明の方法では、ヒド
ロゲンホスホナート又はヒドロゲンホスフィナート基
は、他のアシル保護基に比較して高い選択性でアルコー
ルに変換される。除去の選択性は非常に高いので、所定
の反応条件下で数日間経過した後でも、ヌクレオシド塩
基の保護基は除去されない。さらに、この方法で高収率
が得られる。新規な方法は、手動又は自動のオリゴヌク
レオチド合成の型通りの連続操作の際に、標準の亜リン
酸トリエステル法によるヌクレオチドカップリングで起
こるヌクレオシドの過剰量を回収することを初めて可能
とするものである。
が、本発明はヌクレオシドヒドロゲンホスホナート類又
はヒドロゲンホスフィナート類を、ヒドロゲンホスホナ
ート又はヒドロゲンホスフィナートの官能基が存在して
いた位置に遊離の水酸基を有するヌクレオシドに変換す
る方法を提供するものである。本発明の方法では、ヒド
ロゲンホスホナート又はヒドロゲンホスフィナート基
は、他のアシル保護基に比較して高い選択性でアルコー
ルに変換される。除去の選択性は非常に高いので、所定
の反応条件下で数日間経過した後でも、ヌクレオシド塩
基の保護基は除去されない。さらに、この方法で高収率
が得られる。新規な方法は、手動又は自動のオリゴヌク
レオチド合成の型通りの連続操作の際に、標準の亜リン
酸トリエステル法によるヌクレオチドカップリングで起
こるヌクレオシドの過剰量を回収することを初めて可能
とするものである。
【０００９】本発明は、天然若しくは合成のヌクレオシ
ド、ヌクレオシド類似体又は少なくとも二種のそのよう
なヌクレオシド及び／又はヌクレオシド類似体からのオ
リゴヌクレオチド〔その塩基性分子は核酸塩基Ｂの非置
換若しくは置換した基及び式Ｒ1 −Ｏ−（式中、Ｒ1 は
保護基である）の保護された水酸基を含むか、又は水酸
基の酸素原子に直接結合するか若しくは固体担体に結合
基を介して結合しており、その塩基性分子には、上記の
基以外に、式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）：
ド、ヌクレオシド類似体又は少なくとも二種のそのよう
なヌクレオシド及び／又はヌクレオシド類似体からのオ
リゴヌクレオチド〔その塩基性分子は核酸塩基Ｂの非置
換若しくは置換した基及び式Ｒ1 −Ｏ−（式中、Ｒ1 は
保護基である）の保護された水酸基を含むか、又は水酸
基の酸素原子に直接結合するか若しくは固体担体に結合
基を介して結合しており、その塩基性分子には、上記の
基以外に、式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）：
【００１０】
【化３】
【００１１】で示される基が結合している〕をヌクレオ
シド単量体又はオリゴヌクレオチドから製造する方法で
あって、不活性有機溶媒の存在又は非存在下かつ４ない
し１０のｐＫ値を有する無機塩基又は有機窒素塩基の少
なくとも触媒量の存在下に、該ヌクレオシド又は該オリ
ゴヌクレオチドと、１ないし３０個の炭素原子を有する
脂肪族、脂環式、芳香−脂肪族又は芳香族アルコール、
２ないし５０個の炭素原子を有するポリオール又は重合
体ポリオールの過剰量とを反応させて、式（Ｉ）、（Ｉ
ａ）又は（Ｉｂ）の基を−ＯＨ基に変換することを特徴
とする方法を提供するものである。
シド単量体又はオリゴヌクレオチドから製造する方法で
あって、不活性有機溶媒の存在又は非存在下かつ４ない
し１０のｐＫ値を有する無機塩基又は有機窒素塩基の少
なくとも触媒量の存在下に、該ヌクレオシド又は該オリ
ゴヌクレオチドと、１ないし３０個の炭素原子を有する
脂肪族、脂環式、芳香−脂肪族又は芳香族アルコール、
２ないし５０個の炭素原子を有するポリオール又は重合
体ポリオールの過剰量とを反応させて、式（Ｉ）、（Ｉ
ａ）又は（Ｉｂ）の基を−ＯＨ基に変換することを特徴
とする方法を提供するものである。
【００１２】式（Ｉ）、（Ｉａ）及び（Ｉｂ）の基は、
ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３´若しくは５
´−位に結合することができるが、一方Ｒ1 Ｏ−基又は
固体担体は５´若しくは３´−位に結合する。式（Ｉ）
の基は５´−位に、式（Ｉｂ）の基は３´−位に、そし
て式（Ｉａ）の基は３´若しくは５´−位に結合するの
が好ましい。
ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドの３´若しくは５
´−位に結合することができるが、一方Ｒ1 Ｏ−基又は
固体担体は５´若しくは３´−位に結合する。式（Ｉ）
の基は５´−位に、式（Ｉｂ）の基は３´−位に、そし
て式（Ｉａ）の基は３´若しくは５´−位に結合するの
が好ましい。
【００１３】好適にヌクレオチド結合が連結する第二級
水酸基を有し、本発明の方法に用いるのに適した、多く
のヌクレオシド、ヌクレオシド類似体又はオリゴヌクレ
オチドは、公知であり、例えばタウンゼント（Townsen
t, L. B., Hrsg., Chemistryof Nucleosides and Nucle
otides 1, Pleum Press, New York, 1988 ）に記載され
ており、又は公知の方法で製造することができる。全く
一般的に、これらの化合物は、核酸塩基を含み、−Ｏ−
又は−Ｓ−で中断された開鎖状のＣ−構造あるいは炭素
環式又はＯ−若しくはＳ−複素環構造であってよい。
水酸基を有し、本発明の方法に用いるのに適した、多く
のヌクレオシド、ヌクレオシド類似体又はオリゴヌクレ
オチドは、公知であり、例えばタウンゼント（Townsen
t, L. B., Hrsg., Chemistryof Nucleosides and Nucle
otides 1, Pleum Press, New York, 1988 ）に記載され
ており、又は公知の方法で製造することができる。全く
一般的に、これらの化合物は、核酸塩基を含み、−Ｏ−
又は−Ｓ−で中断された開鎖状のＣ−構造あるいは炭素
環式又はＯ−若しくはＳ−複素環構造であってよい。
【００１４】開状鎖の炭素構造は、代表的には３ないし
１２個、好適には３ないし６個の炭素原子を有してい
る。炭素環及び複素環構造は、３ないし１２個、好適に
は３ないし８個、最も好適には４又は５個の環員炭素原
子を有する単環系である。これらは５ないし１６個、好
適には８ないし１６個の炭素原子を有する双環又は三環
系であってもよい。この構造は、さらに置換基、代表的
には保護されたＯＨ基を含んでいてもよい。
１２個、好適には３ないし６個の炭素原子を有してい
る。炭素環及び複素環構造は、３ないし１２個、好適に
は３ないし８個、最も好適には４又は５個の環員炭素原
子を有する単環系である。これらは５ないし１６個、好
適には８ないし１６個の炭素原子を有する双環又は三環
系であってもよい。この構造は、さらに置換基、代表的
には保護されたＯＨ基を含んでいてもよい。
【００１５】核酸塩基Ｂがプリン基又はその類似体であ
る場合には、それは式（II）、（IIa)、(IIｂ）、（II
ｃ）、（IIｄ）又は（IIｅ）：
る場合には、それは式（II）、（IIa)、(IIｂ）、（II
ｃ）、（IIｄ）又は（IIｅ）：
【００１６】
【化４】
【００１７】（式中、Ｒ7 はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ2 又
はＯＨであり；Ｒ8 、Ｒ9 及びＲ10は、それぞれ互いに
独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ2 、ＮＨＮＨ2 、ＮＨ
ＯＨ、ＮＨ０（１ないし１２個の炭素原子を有する）ア
ルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、アルキル、ヒドロキシアルキ
ル、アミノアルキル（そのヒドロキシル及びアミノ基は
非置換又は保護基で置換されてもよい）、アルコキシ若
しくは１ないし１２個の炭素原子を有するアルキルチオ
又はフェニル、ベンジル、１ないし２０個の炭素原子を
有する第一級アミノ若しくは２ないし３０個の炭素原子
を有する第二級アミノであり；そして、Ｒ11はＨ、Ｃ1
−Ｃ4 アルキルである）で示される基である。
はＯＨであり；Ｒ8 、Ｒ9 及びＲ10は、それぞれ互いに
独立して、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ2 、ＮＨＮＨ2 、ＮＨ
ＯＨ、ＮＨ０（１ないし１２個の炭素原子を有する）ア
ルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、アルキル、ヒドロキシアルキ
ル、アミノアルキル（そのヒドロキシル及びアミノ基は
非置換又は保護基で置換されてもよい）、アルコキシ若
しくは１ないし１２個の炭素原子を有するアルキルチオ
又はフェニル、ベンジル、１ないし２０個の炭素原子を
有する第一級アミノ若しくは２ないし３０個の炭素原子
を有する第二級アミノであり；そして、Ｒ11はＨ、Ｃ1
−Ｃ4 アルキルである）で示される基である。
【００１８】第一級アミノは、好適には１ないし１２
個、最も好適には１ないし６個の炭素原子を含み、第二
級アミノは、好適には２ないし１２個、最も好適には２
ないし６個の炭素原子を含む。
個、最も好適には１ないし６個の炭素原子を含み、第二
級アミノは、好適には２ないし１２個、最も好適には２
ないし６個の炭素原子を含む。
【００１９】好適に１ないし６個の炭素原子を含む、ア
ルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ヒドロキシアルキ
ル及びアミノアルキルの代表例は、メチル、エチル、プ
ロピルの異性体、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチ
ル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル及びドデシ
ル、並びに相当するアルコキシ、アルキルチオ、ヒドロ
キシアルキル及びアミノアルキル基である。アルキル、
アルコキシ、アルキルチオ、ヒドロキシアルキル及びア
ミノアルキルは、最も好適には１ないし４個の炭素原子
を含む。好ましいアルキル、アルコキシ、アルキルチ
オ、ヒドロキシアルキル及びアミノアルキル基は、メチ
ル、エチル、ｎ−及びイソプロピル、ｎ−、ｉｓｏ−及
びｔｅｒｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、メチルチオ
及びエチルチオ、アミノメチル、アミノエチル並びにヒ
ドロキシメチル及びヒドロキシエチルである。
ルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ヒドロキシアルキ
ル及びアミノアルキルの代表例は、メチル、エチル、プ
ロピルの異性体、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチ
ル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル及びドデシ
ル、並びに相当するアルコキシ、アルキルチオ、ヒドロ
キシアルキル及びアミノアルキル基である。アルキル、
アルコキシ、アルキルチオ、ヒドロキシアルキル及びア
ミノアルキルは、最も好適には１ないし４個の炭素原子
を含む。好ましいアルキル、アルコキシ、アルキルチ
オ、ヒドロキシアルキル及びアミノアルキル基は、メチ
ル、エチル、ｎ−及びイソプロピル、ｎ−、ｉｓｏ−及
びｔｅｒｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、メチルチオ
及びエチルチオ、アミノメチル、アミノエチル並びにヒ
ドロキシメチル及びヒドロキシエチルである。
【００２０】第一級アミノ及び第二級アミノは、代表的
には式Ｒ14Ｒ15Ｎ［式中、Ｒ14はＨ、又は独立してＲ15
の意義を有し；そしてＲ15は１ないし２０個、好適には
１ないし１２個、最も好適には１ないし６個の炭素原子
を有する、アルキル、アミノアルキル又はヒドロキシア
ルキル；カルボキシアルキル又はカルボアルコキシアル
キル（そのカルボアルコキシ基は、２ないし８個の炭素
原子を有し、そのアルキル分は１ないし６個、好適には
１ないし４個の炭素原子を有する）；２ないし２０個、
好適には２ないし１２個、最も好適には２ないし６個の
炭素原子を有するアルケニル；フェニル、モノ−若しく
はジ（Ｃ1 −Ｃ4 アルキルフェニル若しくはＣ1 −Ｃ4
アルコキシ）フェニル、ベンジル、モノ−若しくはジ
（Ｃ1 −Ｃ4 アルキルベンジル若しくはＣ1 −Ｃ4 アル
コキシ）ベンジル；又は１，２−、１，３−若しくは
１，４−イミダゾリル−Ｃ1 −Ｃ6 アルキルであるか；
又はＲ14とＲ15は、一緒になって、テトラ−若しくはペ
ンタメチレン、３−オキサ−１，５−ペンチレン、−Ｃ
Ｈ2 −ＮＲ16−ＣＨ2 ＣＨ2 −又は−ＣＨ2 ＣＨ2 −Ｎ
Ｒ16−ＣＨ2 ＣＨ2 −（式中、Ｒ16はＨ又はアルキルで
ある）である］の基である。アミノアルキルのアミノ基
は、一つ又は二つのＣ1 −Ｃ4 アルキル又はＣ1-C4 ヒ
ドロキシアルキル基で置換されていてもよい。ヒドロキ
シアルキルの水酸基は、Ｃ1 −Ｃ4 アルキルでエーテル
化されていてもよい。
には式Ｒ14Ｒ15Ｎ［式中、Ｒ14はＨ、又は独立してＲ15
の意義を有し；そしてＲ15は１ないし２０個、好適には
１ないし１２個、最も好適には１ないし６個の炭素原子
を有する、アルキル、アミノアルキル又はヒドロキシア
ルキル；カルボキシアルキル又はカルボアルコキシアル
キル（そのカルボアルコキシ基は、２ないし８個の炭素
原子を有し、そのアルキル分は１ないし６個、好適には
１ないし４個の炭素原子を有する）；２ないし２０個、
好適には２ないし１２個、最も好適には２ないし６個の
炭素原子を有するアルケニル；フェニル、モノ−若しく
はジ（Ｃ1 −Ｃ4 アルキルフェニル若しくはＣ1 −Ｃ4
アルコキシ）フェニル、ベンジル、モノ−若しくはジ
（Ｃ1 −Ｃ4 アルキルベンジル若しくはＣ1 −Ｃ4 アル
コキシ）ベンジル；又は１，２−、１，３−若しくは
１，４−イミダゾリル−Ｃ1 −Ｃ6 アルキルであるか；
又はＲ14とＲ15は、一緒になって、テトラ−若しくはペ
ンタメチレン、３−オキサ−１，５−ペンチレン、−Ｃ
Ｈ2 −ＮＲ16−ＣＨ2 ＣＨ2 −又は−ＣＨ2 ＣＨ2 −Ｎ
Ｒ16−ＣＨ2 ＣＨ2 −（式中、Ｒ16はＨ又はアルキルで
ある）である］の基である。アミノアルキルのアミノ基
は、一つ又は二つのＣ1 −Ｃ4 アルキル又はＣ1-C4 ヒ
ドロキシアルキル基で置換されていてもよい。ヒドロキ
シアルキルの水酸基は、Ｃ1 −Ｃ4 アルキルでエーテル
化されていてもよい。
【００２１】アルキルの例は上記のものである。アミノ
アルキルの代表例は、アミノメチル、アミノエチル、１
−アミノプロプ−２−イル又は−３−イル、１−アミノ
−ブタ−２−イル又は−３−イル又は−４−イル、Ｎ−
メチル−又はＮ，Ｎ−ジメチル又はＮ−エチル−又は
Ｎ，Ｎ−ジエチル又はＮ−２−ヒドロキシエチル−又は
Ｎ，Ｎ−ジ−２−ヒドロキシエチルアミノメチル又は−
アミノエチル又は−アミノプロピル又は−アミノブチル
である。ヒドロキシアルキル基の例は、ヒドロキシメチ
ル、１−ヒドロキシエタ−２−イル、１−ヒドロキシプ
ロプ−２−又は−３−イル、１−ヒドロキシ−ブタ−２
−イル、−３−イル又は−４−イルである。カルボキシ
アルキル基の例は、カルボキシメチル、カルボキシエチ
ル、カルボキシプロピル及びカルボキシブチルであり；
そして、カルボアルコキシアルキル基の例は、メチル又
はエチルでエステル化された該カルボキシアルキル基で
ある。アルケニルは、代表的にはアリル、ブタ−１−エ
ン−３−イル又は−４−イル、ペンタ−３−又は−４−
エン−１−イル又は−２−イル、ヘキサ−３−又は−４
−又は−５−エン−１−イル又は−２−イルである。ア
ルキルフェニル、アルコキシフェニル及びアルキルベン
ジルの代表例は、メチルフェニル、ジメチルフェニル、
エチルフェニル、ジエチルフェニル、メチルベンジル、
ジメチルベンジル、エチルベンジル、ジエチルベンジ
ル、メトキシフェニル、ジメトキシフェニル、エトキシ
フェニル、ジエトキシフェニル、メトキシベンジル、ジ
メトキシベンジル、エトキシベンジル、ジエトキシベン
ジルである。アルキル分が好適には２ないし４個の炭素
原子を有するイミダゾリルアルキルは、代表的には１，
２−、１，３−若しくは１，４−イミダゾリルエチル又
は−ｎ−プロピル又は−ｎ−ブチルである。Ｒ16は、好
適にはＨ、メチル又はエチルである。
アルキルの代表例は、アミノメチル、アミノエチル、１
−アミノプロプ−２−イル又は−３−イル、１−アミノ
−ブタ−２−イル又は−３−イル又は−４−イル、Ｎ−
メチル−又はＮ，Ｎ−ジメチル又はＮ−エチル−又は
Ｎ，Ｎ−ジエチル又はＮ−２−ヒドロキシエチル−又は
Ｎ，Ｎ−ジ−２−ヒドロキシエチルアミノメチル又は−
アミノエチル又は−アミノプロピル又は−アミノブチル
である。ヒドロキシアルキル基の例は、ヒドロキシメチ
ル、１−ヒドロキシエタ−２−イル、１−ヒドロキシプ
ロプ−２−又は−３−イル、１−ヒドロキシ−ブタ−２
−イル、−３−イル又は−４−イルである。カルボキシ
アルキル基の例は、カルボキシメチル、カルボキシエチ
ル、カルボキシプロピル及びカルボキシブチルであり；
そして、カルボアルコキシアルキル基の例は、メチル又
はエチルでエステル化された該カルボキシアルキル基で
ある。アルケニルは、代表的にはアリル、ブタ−１−エ
ン−３−イル又は−４−イル、ペンタ−３−又は−４−
エン−１−イル又は−２−イル、ヘキサ−３−又は−４
−又は−５−エン−１−イル又は−２−イルである。ア
ルキルフェニル、アルコキシフェニル及びアルキルベン
ジルの代表例は、メチルフェニル、ジメチルフェニル、
エチルフェニル、ジエチルフェニル、メチルベンジル、
ジメチルベンジル、エチルベンジル、ジエチルベンジ
ル、メトキシフェニル、ジメトキシフェニル、エトキシ
フェニル、ジエトキシフェニル、メトキシベンジル、ジ
メトキシベンジル、エトキシベンジル、ジエトキシベン
ジルである。アルキル分が好適には２ないし４個の炭素
原子を有するイミダゾリルアルキルは、代表的には１，
２−、１，３−若しくは１，４−イミダゾリルエチル又
は−ｎ−プロピル又は−ｎ−ブチルである。Ｒ16は、好
適にはＨ、メチル又はエチルである。
【００２２】第一級アミノ及び第二級アミノの好適な例
は、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジ
エチルアミノ、アリルアミノ、モノ−又はジ（１−ヒド
ロキシエタ−２−イル）アミノ、フェニルアミノ及びベ
ンジルアミノ、アセチルアミノ及びベンゾイルアミノで
ある。
は、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジ
エチルアミノ、アリルアミノ、モノ−又はジ（１−ヒド
ロキシエタ−２−イル）アミノ、フェニルアミノ及びベ
ンジルアミノ、アセチルアミノ及びベンゾイルアミノで
ある。
【００２３】本発明の好適な実施態様において、Ｒ7 は
水素である。本発明の別の好適な実施態様において、Ｒ
10は水素である。本発明のさらに別の好適な実施態様に
おいて、Ｒ8 及びＲ9 は、それぞれ互いに独立して、
Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ2 、ＮＨＯＨ、
ＮＨＮＨ2 、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ベンゾイ
ルアミノ、メトキシ、エトキシ及びメチルチオである。
水素である。本発明の別の好適な実施態様において、Ｒ
10は水素である。本発明のさらに別の好適な実施態様に
おいて、Ｒ8 及びＲ9 は、それぞれ互いに独立して、
Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ2 、ＮＨＯＨ、
ＮＨＮＨ2 、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ベンゾイ
ルアミノ、メトキシ、エトキシ及びメチルチオである。
【００２４】プリン系類似体の代表例は、プリンに加え
て、アデニン、Ｎ−メチルアデニン、Ｎ−ベンジルアデ
ニン、２−メチルアデニン、２−メチルチオアデニン、
２−アミノアデニン、３−カルバアデニン、７−カルバ
アデニン、１−カルバアデニン、６−ヒドロキシプリ
ン、２−アミノ−６−クロロプリン、２−アミノ−６−
メチルチオプリン、２−アミノ−６−ヒドロキシプリ
ン、３−カルバ−６−クロロプリン、グアニン、２−メ
チルグアニンである。アデニン、２−アミノアデニン及
びグアニンは、特に好ましい。
て、アデニン、Ｎ−メチルアデニン、Ｎ−ベンジルアデ
ニン、２−メチルアデニン、２−メチルチオアデニン、
２−アミノアデニン、３−カルバアデニン、７−カルバ
アデニン、１−カルバアデニン、６−ヒドロキシプリ
ン、２−アミノ−６−クロロプリン、２−アミノ−６−
メチルチオプリン、２−アミノ−６−ヒドロキシプリ
ン、３−カルバ−６−クロロプリン、グアニン、２−メ
チルグアニンである。アデニン、２−アミノアデニン及
びグアニンは、特に好ましい。
【００２５】核酸塩基が類似のピリミジン基である場
合、該基は好適には式（III ）、（III ａ）及び（III
ｂ）：
合、該基は好適には式（III ）、（III ａ）及び（III
ｂ）：
【００２６】
【化５】
【００２７】（式中、Ｒ11はＨ又はＣ1 −Ｃ4 アルキル
であり、Ｒ12、Ｒ13及びＲ30は、それぞれ互いに独立し
て、好適な意義を含めてＲ8 に関して述べた意義を有
し；そして式（III ｂ）のＮＨ2 の水素原子は、Ｃ1 −
Ｃ6 アルキル又はベンゾイルで置換されていてもよい）
で示されるウラシル、チミン及びシトシンの基並びに式
（III ）、（III ａ）及び（III ｂ）の基のジヒドロ誘
導体である。好適には、Ｒ12はＨ、Ｃ1 −Ｃ6 アルキル
又はヒドロキシアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ2、ベ
ンゾイルアミノ、モノ−又はジＣ1 −Ｃ6 アルキルアミ
ノであり、そしてＲ13は好適にはＨ、Ｃ1 −Ｃ6 アルキ
ル、Ｃ1 −Ｃ6 アルコキシ、Ｃ1 −Ｃ6 ヒドロキシアル
キル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ2 、ベンゾイルアミノ又は
モノ−若しくはジＣ1 −Ｃ6 アルキルアミノである。
であり、Ｒ12、Ｒ13及びＲ30は、それぞれ互いに独立し
て、好適な意義を含めてＲ8 に関して述べた意義を有
し；そして式（III ｂ）のＮＨ2 の水素原子は、Ｃ1 −
Ｃ6 アルキル又はベンゾイルで置換されていてもよい）
で示されるウラシル、チミン及びシトシンの基並びに式
（III ）、（III ａ）及び（III ｂ）の基のジヒドロ誘
導体である。好適には、Ｒ12はＨ、Ｃ1 −Ｃ6 アルキル
又はヒドロキシアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ2、ベ
ンゾイルアミノ、モノ−又はジＣ1 −Ｃ6 アルキルアミ
ノであり、そしてＲ13は好適にはＨ、Ｃ1 −Ｃ6 アルキ
ル、Ｃ1 −Ｃ6 アルコキシ、Ｃ1 −Ｃ6 ヒドロキシアル
キル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ2 、ベンゾイルアミノ又は
モノ−若しくはジＣ1 −Ｃ6 アルキルアミノである。
【００２８】Ｒ11は好適にはＨ又はメチルである。Ｒ12
は好適にはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ2 、ＮＨＣＨ3 、
Ｎ（ＣＨ3 ）2 又はＣ1 −Ｃ4 アルキルである。Ｒ13は
好適にはＨ、Ｃ1 −Ｃ4 アルキル、さらに特にメチル又
はＮＨ2 、ＮＨＣＨ3 若しくは（ＣＨ3 ）2 Ｎである
は好適にはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＨ2 、ＮＨＣＨ3 、
Ｎ（ＣＨ3 ）2 又はＣ1 −Ｃ4 アルキルである。Ｒ13は
好適にはＨ、Ｃ1 −Ｃ4 アルキル、さらに特にメチル又
はＮＨ2 、ＮＨＣＨ3 若しくは（ＣＨ3 ）2 Ｎである
【００２９】ピリミジン類似体の代表例は、ウラシル、
チミン、シトシン、５−フルオロウラシル、５−クロロ
ウラシル、５−ブロモウラシル、ジヒドロウラシル、プ
ソイドウラシル、１−メチルプソイドウラシル、５−メ
チルウラシル、３−メチルシトシン及び５−メチルシト
シンである。
チミン、シトシン、５−フルオロウラシル、５−クロロ
ウラシル、５−ブロモウラシル、ジヒドロウラシル、プ
ソイドウラシル、１−メチルプソイドウラシル、５−メ
チルウラシル、３−メチルシトシン及び５−メチルシト
シンである。
【００３０】本発明の範囲内で、保護基は化学において
通常の公知の保護基を意味するものと解されるべきであ
る。そのような保護基の例は、Ｃ1 −Ｃ8 アルキル；単
環又は双環のＣ7 −Ｃ12アラルキル；単環又は双環のＣ
7 −Ｃ12アラルコキシ；単環又は双環のＣ7 −Ｃ12ハロ
アラルキル；ジフェニルメチル；１ないし４個のメチル
又はメトキシ基で置換されたジフェニルメチル；トリフ
ェニルメチル；１ないし６個のメチル又はメトキシ基又
は１ないし３個のｔｅｒｔ−ブチル基で置換されたトリ
フェニルメチル；フェニル又はナフチルで置換されたキ
サンテニル；−Ｓｉ（Ｒ4 ）（Ｒ5 ）（Ｒ6 ）［式中、
（Ｒ4 ）、（Ｒ5 ）及び（Ｒ6 ）は、それぞれ互いに独
立して、Ｃ1 −Ｃ20アルキル、ベンジル又はフェニルで
ある］；Ｒ−Ｃ（Ｏ）−（式中、ＲはＣ1 −Ｃ6 アルキ
ル；ベンジル；メチル、メトキシ又はハロゲンで置換さ
れたベンジル；Ｃ1 −Ｃ12アルコキシ；フルオレンで置
換されたＣ1 −Ｃ12アルコキシ；フェノキシ；メチル、
メトキシ又はハロゲンで置換されたフェノキシ；ベンジ
ルオキシ；メチル、メトキシ又はハロゲンで置換された
ベンジルオキシ；Ｒ17−ＳＯ2 −（式中、Ｒ17はＣ1 −
Ｃ12アルキル、Ｃ5−Ｃ6 シクロアルキル、フェニル、
Ｃ1 −Ｃ12アルキル又はハロゲンで置換されたフェニ
ル、ベンジル又はＣ1 −Ｃ12アルキル若しくはハロゲン
で置換されたベンジル）；非置換又は直鎖若しくは分岐
状の、Ｃ1 −Ｃ6 アルキル若しくはＣ1−Ｃ6 ハロアル
キル、ハロゲン、Ｃ1 −Ｃ6 アルコキシ、Ｃ1 −Ｃ6 ア
ルキルチオ、ニトロ及びシアノよりなる群から選ばれた
一つ又は一つ以上の基で置換された，Ｃ1 −Ｃ12アルコ
キシアセチル又はフェノキシアセチルである。
通常の公知の保護基を意味するものと解されるべきであ
る。そのような保護基の例は、Ｃ1 −Ｃ8 アルキル；単
環又は双環のＣ7 −Ｃ12アラルキル；単環又は双環のＣ
7 −Ｃ12アラルコキシ；単環又は双環のＣ7 −Ｃ12ハロ
アラルキル；ジフェニルメチル；１ないし４個のメチル
又はメトキシ基で置換されたジフェニルメチル；トリフ
ェニルメチル；１ないし６個のメチル又はメトキシ基又
は１ないし３個のｔｅｒｔ−ブチル基で置換されたトリ
フェニルメチル；フェニル又はナフチルで置換されたキ
サンテニル；−Ｓｉ（Ｒ4 ）（Ｒ5 ）（Ｒ6 ）［式中、
（Ｒ4 ）、（Ｒ5 ）及び（Ｒ6 ）は、それぞれ互いに独
立して、Ｃ1 −Ｃ20アルキル、ベンジル又はフェニルで
ある］；Ｒ−Ｃ（Ｏ）−（式中、ＲはＣ1 −Ｃ6 アルキ
ル；ベンジル；メチル、メトキシ又はハロゲンで置換さ
れたベンジル；Ｃ1 −Ｃ12アルコキシ；フルオレンで置
換されたＣ1 −Ｃ12アルコキシ；フェノキシ；メチル、
メトキシ又はハロゲンで置換されたフェノキシ；ベンジ
ルオキシ；メチル、メトキシ又はハロゲンで置換された
ベンジルオキシ；Ｒ17−ＳＯ2 −（式中、Ｒ17はＣ1 −
Ｃ12アルキル、Ｃ5−Ｃ6 シクロアルキル、フェニル、
Ｃ1 −Ｃ12アルキル又はハロゲンで置換されたフェニ
ル、ベンジル又はＣ1 −Ｃ12アルキル若しくはハロゲン
で置換されたベンジル）；非置換又は直鎖若しくは分岐
状の、Ｃ1 −Ｃ6 アルキル若しくはＣ1−Ｃ6 ハロアル
キル、ハロゲン、Ｃ1 −Ｃ6 アルコキシ、Ｃ1 −Ｃ6 ア
ルキルチオ、ニトロ及びシアノよりなる群から選ばれた
一つ又は一つ以上の基で置換された，Ｃ1 −Ｃ12アルコ
キシアセチル又はフェノキシアセチルである。
【００３１】Ｃ1 −Ｃ8 アルキルの代表例は、メチル、
エチル、ｎ−及びイソプロピル、ｎ−、ｉｓｏ−及びｔ
ｅｒｔ−ブチルであり；単環のＣ7 −Ｃ12アラルキルの
代表例は、ベンジル、メチルベンジル及びジメチルベン
ジルであり；単環又は双環のＣ7 −Ｃ12アラルコキシの
代表例は、メトキシベンジル及びジメトキシベンジルで
あり；単環又は双環のＣ7 −Ｃ12ハロアルキルの例はブ
ロモベンジルであり；置換したジフェニルメチルの代表
例は、ジ（メチルフェニル）メチル、ジ（ジメチルフェ
ニル）メチル、ジ（メトキシフェニル）メチル及びジ
（ジメトキシフェニル）メチルであり；置換したトリフ
ェニルメチルの代表例は、トリ（メチルフェニル）メチ
ル、トリ（ジメチルフェニル）メチル、トリ（メトキシ
フェニル）メチル、トリ（ジメトキシフェニル）メチ
ル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル及びト
リス−ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルメチルであり；シ
リル基の代表例は、トリフェニルシリル、トリメチルシ
リル、トリエチルシリル、トリ−ｎ−プロピルシリル、
イソプロピルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチ
ルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ｎ−オ
クチルジメチルシリル、（１，１，２，２−テトラメチ
ルエチル）ジメチルシリルであり；Ｒ−Ｃ（Ｏ）−基の
例は、アセチル、トリフルオロアセチル、プロパノイ
ル、ブタノイル、ペンタノイル、ヘキサノイル、ベンゾ
イル、メチルベンゾイル、メトキシベンゾイル、クロロ
ベンゾイル、ブロモベンゾイル、メトキシ−又はエトキ
シカルボニル、ｎ−又はイソプロポキシカルボニル又は
ｎ−、ｉｓｏ−又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル又は
フェノキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、メ
チル−又はメトキシ−又はクロロフェノキシカルボニル
又はクロロベンジルオキシカルボニル又は９−フルオレ
ニルメトキシカルボニルであり；Ｒ17−ＳＯ2 −基の例
は、メチルフェニルスルホニル、エチルフェニルスルホ
ニル、プロピルフェニルスルホニル、ブチルフェニルス
ルホニル、フェニルフェニルスルホニル、ベンジルフェ
ニルスルホニル、ｐ−ブロモフェニルスルホニル、ｐ−
メトキシフェニルスルホニル及びｐ−メチルフェニルス
ルホニルであり；そしてアルコキシアセチル及びフェノ
キシアセチルの代表例は、メトキシアセチル、エトキシ
アセチル、フェノキシアセチル、（ｐ−メチルフェノキ
シ）アセチル、（ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ア
セチルである。アミジンの保護基は、また、核酸塩基に
頻用されるものである。
エチル、ｎ−及びイソプロピル、ｎ−、ｉｓｏ−及びｔ
ｅｒｔ−ブチルであり；単環のＣ7 −Ｃ12アラルキルの
代表例は、ベンジル、メチルベンジル及びジメチルベン
ジルであり；単環又は双環のＣ7 −Ｃ12アラルコキシの
代表例は、メトキシベンジル及びジメトキシベンジルで
あり；単環又は双環のＣ7 −Ｃ12ハロアルキルの例はブ
ロモベンジルであり；置換したジフェニルメチルの代表
例は、ジ（メチルフェニル）メチル、ジ（ジメチルフェ
ニル）メチル、ジ（メトキシフェニル）メチル及びジ
（ジメトキシフェニル）メチルであり；置換したトリフ
ェニルメチルの代表例は、トリ（メチルフェニル）メチ
ル、トリ（ジメチルフェニル）メチル、トリ（メトキシ
フェニル）メチル、トリ（ジメトキシフェニル）メチ
ル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル及びト
リス−ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルメチルであり；シ
リル基の代表例は、トリフェニルシリル、トリメチルシ
リル、トリエチルシリル、トリ−ｎ−プロピルシリル、
イソプロピルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチ
ルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ｎ−オ
クチルジメチルシリル、（１，１，２，２−テトラメチ
ルエチル）ジメチルシリルであり；Ｒ−Ｃ（Ｏ）−基の
例は、アセチル、トリフルオロアセチル、プロパノイ
ル、ブタノイル、ペンタノイル、ヘキサノイル、ベンゾ
イル、メチルベンゾイル、メトキシベンゾイル、クロロ
ベンゾイル、ブロモベンゾイル、メトキシ−又はエトキ
シカルボニル、ｎ−又はイソプロポキシカルボニル又は
ｎ−、ｉｓｏ−又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル又は
フェノキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、メ
チル−又はメトキシ−又はクロロフェノキシカルボニル
又はクロロベンジルオキシカルボニル又は９−フルオレ
ニルメトキシカルボニルであり；Ｒ17−ＳＯ2 −基の例
は、メチルフェニルスルホニル、エチルフェニルスルホ
ニル、プロピルフェニルスルホニル、ブチルフェニルス
ルホニル、フェニルフェニルスルホニル、ベンジルフェ
ニルスルホニル、ｐ−ブロモフェニルスルホニル、ｐ−
メトキシフェニルスルホニル及びｐ−メチルフェニルス
ルホニルであり；そしてアルコキシアセチル及びフェノ
キシアセチルの代表例は、メトキシアセチル、エトキシ
アセチル、フェノキシアセチル、（ｐ−メチルフェノキ
シ）アセチル、（ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシ）ア
セチルである。アミジンの保護基は、また、核酸塩基に
頻用されるものである。
【００３２】ヌクレオシド及びオリゴヌクレオシドは、
結合基により固体担体に共有結合的に結合され得る。適
切な担体は、代表的にはシリカゲル、調整多孔質ガラ
ス、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリウレタン
類、ポリオレフィン類、メラミン、ポリアミド類、ポリ
エステル類、ポリエーテル類、ポリアルコール類、シク
ロデキストリン、セルロース及びエーテル化又はアシル
化されたセルロース誘導体類、グリコーゲン、澱粉、キ
チン及びキトサンである。担体を選択することにより、
結合基はジカルボン酸類、ジウレタン類又はアルコキシ
シリルウレタン類から誘導することができる。
結合基により固体担体に共有結合的に結合され得る。適
切な担体は、代表的にはシリカゲル、調整多孔質ガラ
ス、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリウレタン
類、ポリオレフィン類、メラミン、ポリアミド類、ポリ
エステル類、ポリエーテル類、ポリアルコール類、シク
ロデキストリン、セルロース及びエーテル化又はアシル
化されたセルロース誘導体類、グリコーゲン、澱粉、キ
チン及びキトサンである。担体を選択することにより、
結合基はジカルボン酸類、ジウレタン類又はアルコキシ
シリルウレタン類から誘導することができる。
【００３３】本発明の方法は、追加の溶媒の存在で行な
うことができる。追加の溶媒がない場合、新規な方法に
用いられるアルコール、ポリオール又は重合体ポリオー
ルは、液体である限り、溶媒である。適切な追加の溶媒
は、反応バッチにおいて、アルコール、ポリオール又は
重合体ポリオールと競合しない溶媒である。これらの溶
媒は、単独又は少なくとも二つの溶媒の混合物として用
いることができる。ポリオール類の場合、ポリオールの
膨潤によってアルコール基をこの方法に利用できるよう
にする溶媒又は可溶化剤を用いることも可能である。こ
のような溶媒の代表例は、エーテル類、ハロゲン化炭化
水素類、カルボキサミド類、ラクタム類、スルホキシド
類、スルホン類、芳香族炭化水素類、ニトリル類、脂肪
族及び脂環式炭化水素類、好適にはエーテル類、ハロゲ
ン化炭化水素類、ニトリル類、カルボキサミド類及びラ
クタム類よりなる群から選ばれる溶媒である。本発明の
範囲内での可溶化剤は、好都合には、塩類、例えば酢酸
アンモニウム及び炭酸水素アンモニウムである。
うことができる。追加の溶媒がない場合、新規な方法に
用いられるアルコール、ポリオール又は重合体ポリオー
ルは、液体である限り、溶媒である。適切な追加の溶媒
は、反応バッチにおいて、アルコール、ポリオール又は
重合体ポリオールと競合しない溶媒である。これらの溶
媒は、単独又は少なくとも二つの溶媒の混合物として用
いることができる。ポリオール類の場合、ポリオールの
膨潤によってアルコール基をこの方法に利用できるよう
にする溶媒又は可溶化剤を用いることも可能である。こ
のような溶媒の代表例は、エーテル類、ハロゲン化炭化
水素類、カルボキサミド類、ラクタム類、スルホキシド
類、スルホン類、芳香族炭化水素類、ニトリル類、脂肪
族及び脂環式炭化水素類、好適にはエーテル類、ハロゲ
ン化炭化水素類、ニトリル類、カルボキサミド類及びラ
クタム類よりなる群から選ばれる溶媒である。本発明の
範囲内での可溶化剤は、好都合には、塩類、例えば酢酸
アンモニウム及び炭酸水素アンモニウムである。
【００３４】特に適切なエーテル類は、ジブチルエーテ
ル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコ
ールジエチル及びジメチルエーテル、ジエチレングリコ
ールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジエチル
エーテル又はトリエチレングリコールジメチルエーテ
ル、好適にはテトラヒドロフラン、メチル−ｔｅｒｔ−
ブチルエーテル、ジブチルエーテル、ジイソプロピルエ
ーテル又はジオキサンである。特に適切なハロゲン化炭
化水素類は、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２−
ジクロロエタン、１，１，１−トリクロロエタン及び
１，１，２，２−テトラクロロエタンである
ル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコ
ールジエチル及びジメチルエーテル、ジエチレングリコ
ールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジエチル
エーテル又はトリエチレングリコールジメチルエーテ
ル、好適にはテトラヒドロフラン、メチル−ｔｅｒｔ−
ブチルエーテル、ジブチルエーテル、ジイソプロピルエ
ーテル又はジオキサンである。特に適切なハロゲン化炭
化水素類は、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２−
ジクロロエタン、１，１，１−トリクロロエタン及び
１，１，２，２−テトラクロロエタンである
【００３５】有用なアミド類はＮ−アルキル化又はＮ−
ジアルキル化アミド類である。代表例は、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルホルムアミド、
Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、テトラメチル尿素及び
ヘキサメチルホスホルトリアミドである。
ジアルキル化アミド類である。代表例は、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルホルムアミド、
Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、テトラメチル尿素及び
ヘキサメチルホスホルトリアミドである。
【００３６】好適なラクタム類は、γ−ブチロラクタ
ム、ε−カプロラクタム、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−
アセチルピロリドン及びＮ−メチルカプロラクタムより
なる群から選ばれるラクタムである。
ム、ε−カプロラクタム、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−
アセチルピロリドン及びＮ−メチルカプロラクタムより
なる群から選ばれるラクタムである。
【００３７】本発明の範囲内でさらに適切な溶媒は、ジ
メチルスルホキシド、ジメチルスルホン、ジエチルスル
ホン、トリメチレンスルホン、テトラメチレンスルホ
ン、ベンゼン、置換したベンゼン、好適にはクロロベン
ゼン、ｏ−ジクロロベンゼン、１，２，４−トリクロロ
ベンゼン、ニトロベンゼン、トルエン及びキシレン、ア
セトニトリル、プロピオニトリル、ベンゾニトリル、フ
ェニルアセトニトリル、ペンタン、石油エーテル、ヘキ
サン、シクロヘキサン及びメチルシクロヘキサンであ
る。
メチルスルホキシド、ジメチルスルホン、ジエチルスル
ホン、トリメチレンスルホン、テトラメチレンスルホ
ン、ベンゼン、置換したベンゼン、好適にはクロロベン
ゼン、ｏ−ジクロロベンゼン、１，２，４−トリクロロ
ベンゼン、ニトロベンゼン、トルエン及びキシレン、ア
セトニトリル、プロピオニトリル、ベンゾニトリル、フ
ェニルアセトニトリル、ペンタン、石油エーテル、ヘキ
サン、シクロヘキサン及びメチルシクロヘキサンであ
る。
【００３８】本発明の方法で用いられる脂肪族、脂環
式、芳香−脂肪族又は芳香族アルコール、ポリオール又
は重合体ポリオールは、以下においてアクセプターに属
するものとする。
式、芳香−脂肪族又は芳香族アルコール、ポリオール又
は重合体ポリオールは、以下においてアクセプターに属
するものとする。
【００３９】１ないし２０個、好適には１ないし１２
個、最も好適には１ないし６個の炭素原子を有するアル
カノール、代表的にはメタノール、エタノール、ｎ−及
びイソプロパノール、ｎ−、ｉｓｏ−及びｔｅｒｔ−ブ
タノール、ペンタノール、ヘキサノール、エチレングリ
コール、ジエチレングリコールモノメチル及びモノエチ
ルエーテルよりなる群からの例を用いるのが好都合であ
る。本発明の方法に用いられるアルコール類の好ましい
下位の群は、Ｃ1 −Ｃ4 アルカノール類を含む。メタノ
ールを用いるのが特に好ましい。
個、最も好適には１ないし６個の炭素原子を有するアル
カノール、代表的にはメタノール、エタノール、ｎ−及
びイソプロパノール、ｎ−、ｉｓｏ−及びｔｅｒｔ−ブ
タノール、ペンタノール、ヘキサノール、エチレングリ
コール、ジエチレングリコールモノメチル及びモノエチ
ルエーテルよりなる群からの例を用いるのが好都合であ
る。本発明の方法に用いられるアルコール類の好ましい
下位の群は、Ｃ1 −Ｃ4 アルカノール類を含む。メタノ
ールを用いるのが特に好ましい。
【００４０】５ないし１２個、好適には５ないし８個の
環員炭素原子を有する、アルキル置換のシクロアルカノ
ール、代表的にはシクロペンタノール、シクロヘキサノ
ール、メチルシクロヘキサノール、シクロヘプタノール
及びシクロオクタノールよりなる群から選ばれたものも
また適している。
環員炭素原子を有する、アルキル置換のシクロアルカノ
ール、代表的にはシクロペンタノール、シクロヘキサノ
ール、メチルシクロヘキサノール、シクロヘプタノール
及びシクロオクタノールよりなる群から選ばれたものも
また適している。
【００４１】さらに適切なアクセプターの例は、７ない
し３０個、好適には７ないし２０個の炭素原子を有する
芳香−脂肪族アルコール類、好適には非置換又はアルキ
ル−若しくはアルコキシ置換のベンジルアルコール及び
β−フェニルエタノールよりなる群から好適に選ばれた
もの；６ないし３０個、好適には６ないし１２個の炭素
原子を有する芳香族アルコール、好適にはフェノール及
び非置換又はアルキル−若しくはアルコキシ置換のナフ
トールよりなる群から好適に選ばれたもの；２ないし２
０個の炭素原子を有するポリオール類、好適にはエチレ
ングリコール、プロピレングリコール、ブタンジオー
ル、ペンタンジオール、ヘキサンジオール、シクロヘキ
サンジオール、ジヒドロキシメチルシクロヘキサン、ジ
エチレングリコール、トリエチレングリコール、ポリエ
チレングリコール、トリメチロールプロパン、ペンタエ
リトリトール、ジペンタエリトリトール、グリセロール
及び糖類よりなる群から好適に選ばれたもの；重合体ポ
リオール、好適にはポリビニルアルコール、多糖類並び
にポリアクリラート類及びポリメタクリラート類よりな
る群から選ばれたものである。アルキル及びアルコキシ
置換基は、好適に１ないし４個の炭素原子を有する。
し３０個、好適には７ないし２０個の炭素原子を有する
芳香−脂肪族アルコール類、好適には非置換又はアルキ
ル−若しくはアルコキシ置換のベンジルアルコール及び
β−フェニルエタノールよりなる群から好適に選ばれた
もの；６ないし３０個、好適には６ないし１２個の炭素
原子を有する芳香族アルコール、好適にはフェノール及
び非置換又はアルキル−若しくはアルコキシ置換のナフ
トールよりなる群から好適に選ばれたもの；２ないし２
０個の炭素原子を有するポリオール類、好適にはエチレ
ングリコール、プロピレングリコール、ブタンジオー
ル、ペンタンジオール、ヘキサンジオール、シクロヘキ
サンジオール、ジヒドロキシメチルシクロヘキサン、ジ
エチレングリコール、トリエチレングリコール、ポリエ
チレングリコール、トリメチロールプロパン、ペンタエ
リトリトール、ジペンタエリトリトール、グリセロール
及び糖類よりなる群から好適に選ばれたもの；重合体ポ
リオール、好適にはポリビニルアルコール、多糖類並び
にポリアクリラート類及びポリメタクリラート類よりな
る群から選ばれたものである。アルキル及びアルコキシ
置換基は、好適に１ないし４個の炭素原子を有する。
【００４２】本発明の範囲内で、糖類のアクセプター
は、代表的には単、二、三、四及び五糖類のような単糖
及びオリゴ糖を意味するものと解されるべきである。本
発明の好適な実施態様において、単糖及びオリゴ糖はア
ルドース類又はケトース類である。本発明の特に好適な
実施態様において、単糖類はアルドペントース類、アル
ドヘキソース類、ケトペントース類又はケトヘキソース
類である。
は、代表的には単、二、三、四及び五糖類のような単糖
及びオリゴ糖を意味するものと解されるべきである。本
発明の好適な実施態様において、単糖及びオリゴ糖はア
ルドース類又はケトース類である。本発明の特に好適な
実施態様において、単糖類はアルドペントース類、アル
ドヘキソース類、ケトペントース類又はケトヘキソース
類である。
【００４３】アルドペントースは、代表的にはＤ−リボ
ース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−キシロース又はＤ−リキ
ソースであり；アルドヘキソースは、代表的にはＤ−ア
ロース、Ｄ−アルトロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−マン
ノース、Ｄ−グロース、Ｄ−イドース、Ｄ−ガラクトー
ス又はＤ−タロースであり；ケトペントースは、代表的
にはＤ−リブロース又はＤ−キシルロースであり；ケト
ヘキソースは、代表的にはＤ−プシコース、Ｄ−フルク
トース、Ｄ−ソルボース又はＤ−タガトースである。
ース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−キシロース又はＤ−リキ
ソースであり；アルドヘキソースは、代表的にはＤ−ア
ロース、Ｄ−アルトロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−マン
ノース、Ｄ−グロース、Ｄ−イドース、Ｄ−ガラクトー
ス又はＤ−タロースであり；ケトペントースは、代表的
にはＤ−リブロース又はＤ−キシルロースであり；ケト
ヘキソースは、代表的にはＤ−プシコース、Ｄ−フルク
トース、Ｄ−ソルボース又はＤ−タガトースである。
【００４４】二糖類は、代表的にはトレハロース、マル
トース、イソマルトース、セロビオース、ゲンチビオー
ス、サッカロース又はラクトースである。
トース、イソマルトース、セロビオース、ゲンチビオー
ス、サッカロース又はラクトースである。
【００４５】三糖類は、代表的にはラフィノースであ
る。
る。
【００４６】多糖類は、代表的にはセルロース、澱粉、
デキストラン、グリコーゲン、フラクタン類、イヌリ
ン、マンナン類、キシラン類及びアラビナン類である。
デキストラン、グリコーゲン、フラクタン類、イヌリ
ン、マンナン類、キシラン類及びアラビナン類である。
【００４７】本発明の実施において用いられる無機塩基
は、好適には塩基性の金属酸化物、重金属酸化物及び水
酸化物よりなる群から選択される塩基であり、好適には
ＳｉＯ2 又は塩基性アルミナである。
は、好適には塩基性の金属酸化物、重金属酸化物及び水
酸化物よりなる群から選択される塩基であり、好適には
ＳｉＯ2 又は塩基性アルミナである。
【００４８】さらに適切な無機塩基は、エステル交換反
応が求核性触媒の条件下で行なわれ、緩衝系の組成物で
あってよい塩基である。好適には、無機塩基は、アルコ
ール類又は反応混合物に可溶な、金属若しくはアンモニ
ウムのフッ化物又は金属若しくはアンモニウムのアルド
キシマート、ケトキシマート、ヒドロキソマート、スル
ファート、ホスファート、ホスホナート、ピロホスファ
ート、スルファマート、ニトライト、ニトラート及びス
ルホナートであり、金属は好適にはアルカリ金属イオ
ン、例えばＮａ+ 、Ｌｉ+ 、Ｋ+ 、Ｒｂ+ 及びＣｓ+ で
ある。金属の、アルドキシマート、ケトキシマート、ヒ
ドロキソマート、スルファマート、スルホナート及びホ
スホナートは、水素原子、Ｃ1 −Ｃ6 アルキル基あるい
は非置換又はハロゲン、Ｃ1 −Ｃ4 アルキル、Ｃ1 −Ｃ
4 アルコキシ、シアノ若しくはニトロで置換されたフェ
ニル基を有していてもよい。フッ化アンモニウムは、好
適にはフッ化テトラ（Ｃ1 −Ｃ6 アルキル）アンモニウ
ム、代表的にはフッ化テトラ（ｎ−ブチル）アンモニウ
ム・ＨＦである。別な例は、ＣｓＦ、ＫＦ、ＣＨ3 −Ｃ
（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ- 及びＭｇ（ＣＦ3 ＣＯ）2 である。
特にこれらの求核性塩基を、有機窒素塩基と一緒に、好
都合には触媒量で用いることが有利であることが分っ
た。
応が求核性触媒の条件下で行なわれ、緩衝系の組成物で
あってよい塩基である。好適には、無機塩基は、アルコ
ール類又は反応混合物に可溶な、金属若しくはアンモニ
ウムのフッ化物又は金属若しくはアンモニウムのアルド
キシマート、ケトキシマート、ヒドロキソマート、スル
ファート、ホスファート、ホスホナート、ピロホスファ
ート、スルファマート、ニトライト、ニトラート及びス
ルホナートであり、金属は好適にはアルカリ金属イオ
ン、例えばＮａ+ 、Ｌｉ+ 、Ｋ+ 、Ｒｂ+ 及びＣｓ+ で
ある。金属の、アルドキシマート、ケトキシマート、ヒ
ドロキソマート、スルファマート、スルホナート及びホ
スホナートは、水素原子、Ｃ1 −Ｃ6 アルキル基あるい
は非置換又はハロゲン、Ｃ1 −Ｃ4 アルキル、Ｃ1 −Ｃ
4 アルコキシ、シアノ若しくはニトロで置換されたフェ
ニル基を有していてもよい。フッ化アンモニウムは、好
適にはフッ化テトラ（Ｃ1 −Ｃ6 アルキル）アンモニウ
ム、代表的にはフッ化テトラ（ｎ−ブチル）アンモニウ
ム・ＨＦである。別な例は、ＣｓＦ、ＫＦ、ＣＨ3 −Ｃ
（Ｏ）−ＮＨ−Ｏ- 及びＭｇ（ＣＦ3 ＣＯ）2 である。
特にこれらの求核性塩基を、有機窒素塩基と一緒に、好
都合には触媒量で用いることが有利であることが分っ
た。
【００４９】特に有用な有機の窒素塩基は、芳香族アミ
ン、芳香族のＮ−複素環及びＮ−Ｃ1 −Ｃ4 アルキルモ
ルホリンよりなる群から選ばれる塩基である。代表的な
例は、イミダゾール、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリ
ン、アニリン及びｏ−ジアミノベンゼン並びにポリビニ
ルピリジンである。
ン、芳香族のＮ−複素環及びＮ−Ｃ1 −Ｃ4 アルキルモ
ルホリンよりなる群から選ばれる塩基である。代表的な
例は、イミダゾール、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリ
ン、アニリン及びｏ−ジアミノベンゼン並びにポリビニ
ルピリジンである。
【００５０】本発明の方法に用いられる塩基の量は、触
媒量ないし大量、代表的には当量又は過剰量までの範囲
である。本発明の範囲内での触媒量は、ヌクレオシド又
はヌクレオチド１モルに基づいて、０．０１ないし２０
モル％、好都合には０．１ないし１０モル％、好適には
０．１ないし５モル％の範囲である。
媒量ないし大量、代表的には当量又は過剰量までの範囲
である。本発明の範囲内での触媒量は、ヌクレオシド又
はヌクレオチド１モルに基づいて、０．０１ないし２０
モル％、好都合には０．１ないし１０モル％、好適には
０．１ないし５モル％の範囲である。
【００５１】本発明の方法で、式（Ｉ）の基のモル当量
当りアクセプターの水酸基の１００モル当量以上１００
０モル当量又はそれ以上の過剰量までを用いるのが好ま
しい。
当りアクセプターの水酸基の１００モル当量以上１００
０モル当量又はそれ以上の過剰量までを用いるのが好ま
しい。
【００５２】新規な方法は、ヌクレオシド又はヌクレオ
チドの１モルに基づいて、０．０１ないし２０モル％、
好都合には０．１ないし１０モル％、好適には０．１な
いし５モル％のルイス酸をさらに使用することによって
実質的に促進させることができる。得られる高い反応速
度は、相当な利点である。適切に用いられてよいルイス
酸は、金属塩（ＬｉＣｌ）、ホウ酸塩又は有機金属錯体
である。この新規な方法において、有機窒素塩基、求核
性無機塩基及びルイス酸の併用は、高い選択性が得られ
るので特に有利である。
チドの１モルに基づいて、０．０１ないし２０モル％、
好都合には０．１ないし１０モル％、好適には０．１な
いし５モル％のルイス酸をさらに使用することによって
実質的に促進させることができる。得られる高い反応速
度は、相当な利点である。適切に用いられてよいルイス
酸は、金属塩（ＬｉＣｌ）、ホウ酸塩又は有機金属錯体
である。この新規な方法において、有機窒素塩基、求核
性無機塩基及びルイス酸の併用は、高い選択性が得られ
るので特に有利である。
【００５３】反応は、好都合には、−２０℃ないし＋５
５℃、好適には１５℃ないし３５℃の温度範囲、最も好
適には室温で行なわれる。
５℃、好適には１５℃ないし３５℃の温度範囲、最も好
適には室温で行なわれる。
【００５４】反応は、好都合には、アルコールと塩基の
溶液又は混合物に、式（Ｉ）、（Ｉａ）及び（Ｉｂ）の
基を有するヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドを加
え、そして反応を終結させることによって行なわれる。
所望の化合物を単離するには、不溶の組成物があれば濾
過して除き、次いで溶媒を除去する。残渣は結晶化又は
クロマトグラフィーのような常法により精製することが
できる。新規な方法の特に有利な実施態様において、オ
リゴヌクレオチド合成からの排溶液は、大過剰に用いら
れたヌクレオチド組成物を回収するためにアルコールと
塩基の溶液又は混合物に直接加えられる。この方法で、
式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）の基を有する化合物を
含む排溶液は、反応溶液又は反応混合物に戻されるの
で、反応の開始時には非常に大過剰の塩基が存在し、上
記の排溶液の酸組成物を中和することができる。反応の
過程で塩基の濃度は減少する、そして必要な場合には補
充することができる。これらの酸組成物は、好適には亜
リン酸トリエステル法によるヌクレオチド縮合に有効な
テトラゾール又はその他の酸類であってよい。
溶液又は混合物に、式（Ｉ）、（Ｉａ）及び（Ｉｂ）の
基を有するヌクレオシド又はオリゴヌクレオチドを加
え、そして反応を終結させることによって行なわれる。
所望の化合物を単離するには、不溶の組成物があれば濾
過して除き、次いで溶媒を除去する。残渣は結晶化又は
クロマトグラフィーのような常法により精製することが
できる。新規な方法の特に有利な実施態様において、オ
リゴヌクレオチド合成からの排溶液は、大過剰に用いら
れたヌクレオチド組成物を回収するためにアルコールと
塩基の溶液又は混合物に直接加えられる。この方法で、
式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）の基を有する化合物を
含む排溶液は、反応溶液又は反応混合物に戻されるの
で、反応の開始時には非常に大過剰の塩基が存在し、上
記の排溶液の酸組成物を中和することができる。反応の
過程で塩基の濃度は減少する、そして必要な場合には補
充することができる。これらの酸組成物は、好適には亜
リン酸トリエステル法によるヌクレオチド縮合に有効な
テトラゾール又はその他の酸類であってよい。
【００５５】反応混合物の後処理のため、生成した亜リ
ン酸エステル類は、通常の酸化剤、例えばＩ2 ／Ｈ2 Ｏ
／ピリジン又はＳ8 ／ピリジンで処理することができ、
相当するリン酸エステル又はチオリン酸エステルを生成
する。反応溶液を蒸留すると、逆反応はもはや起こるこ
となく、所望の生成物の単離には、クロマトグラフ法を
行なわず抽出法が有効なことが多い。
ン酸エステル類は、通常の酸化剤、例えばＩ2 ／Ｈ2 Ｏ
／ピリジン又はＳ8 ／ピリジンで処理することができ、
相当するリン酸エステル又はチオリン酸エステルを生成
する。反応溶液を蒸留すると、逆反応はもはや起こるこ
となく、所望の生成物の単離には、クロマトグラフ法を
行なわず抽出法が有効なことが多い。
【００５６】クエン酸緩衝溶液（ｐＨ約３〜４）で抽出
して有機窒素塩基、例えばイミダゾールを除去するのが
有利であることが分った。水性媒体で後処理する場合、
ほとんど完全な分離及び良好な相分離が行なわれる。
して有機窒素塩基、例えばイミダゾールを除去するのが
有利であることが分った。水性媒体で後処理する場合、
ほとんど完全な分離及び良好な相分離が行なわれる。
【００５７】新規な方法の特定の実施態様において、ヌ
クレオシド又はオリゴヌクレオチドが固体担体に結合
し、Ｈ−ホスホナート又はＨ−ホスフィナート基を含
み、有機窒素塩基の存在下に反応する場合、シアノエタ
ノールがアクセプターとして用いられる。この反応の実
施態様において、弱塩基性のイオン交換ポリマーと不可
逆的に反応するビスシアノエチルホスファイト又はシア
ノエチルメチルホスフィナートが生成する。得られたリ
ン化合物は塩を形成してイオン交換体に結合し、同時
に、生成したアクリロニトリルはイオン交換体に保持さ
れる。この方法の実施態様において、エステル交換反応
に際しての逆反応は避けられ、特に大過剰のアクセプタ
ーの使用を避けることができる。
クレオシド又はオリゴヌクレオチドが固体担体に結合
し、Ｈ−ホスホナート又はＨ−ホスフィナート基を含
み、有機窒素塩基の存在下に反応する場合、シアノエタ
ノールがアクセプターとして用いられる。この反応の実
施態様において、弱塩基性のイオン交換ポリマーと不可
逆的に反応するビスシアノエチルホスファイト又はシア
ノエチルメチルホスフィナートが生成する。得られたリ
ン化合物は塩を形成してイオン交換体に結合し、同時
に、生成したアクリロニトリルはイオン交換体に保持さ
れる。この方法の実施態様において、エステル交換反応
に際しての逆反応は避けられ、特に大過剰のアクセプタ
ーの使用を避けることができる。
【００５８】
【実施例】以下の実施例により、本発明をさらに詳細に
説明する。実施例２、５及び７で用いた溶離溶液は次の
ようにして得た：固相のオリゴヌクレオチド合成反応器
からの排溶液は、ガオらの方法（Gao, H.,Gaffney, B.
L., Jones, R. A., Tetrahedron Lett., 1991）に準じ
て集めた。反応器から出た後、ヌクレオシドによって分
離された排溶液を、メタノール／アセトニトリル（２：
１）溶液５０mlに直接加えた。
説明する。実施例２、５及び７で用いた溶離溶液は次の
ようにして得た：固相のオリゴヌクレオチド合成反応器
からの排溶液は、ガオらの方法（Gao, H.,Gaffney, B.
L., Jones, R. A., Tetrahedron Lett., 1991）に準じ
て集めた。反応器から出た後、ヌクレオシドによって分
離された排溶液を、メタノール／アセトニトリル（２：
１）溶液５０mlに直接加えた。
【００５９】実施例１： ジメトキシトリチルチミジン−３´−イル−β−シアノ
エチルホスホロジイソプロピルアミダイトから５´−ジ
メトキシトリチルチミジンの製造 アセトニトリル４mlに溶解したジメトキシトリチルチミ
ジン−３´−イル−β−シアノエチルホスホロジイソプ
ロピルアミダイト３６０mg（０．４８mmol）の溶液に、
テトラゾール２７０mg（３．８６mmol）と水９μl
（０．５mmol）を加えた。５分後、ホスホロアミダイト
の加水分解は終了し、５´−ジメトキシトリチルチミジ
ン−３´−シアノエチルヒドロゲンホスホナートを得
た。この溶液にメタノール４mlとイミダゾール３５０mg
を加え、２４時間後、反応溶液を減圧下に蒸留して濃縮
し、得られた白黄色の固体をジクロロメタン５０ｍｌに
とった。水５０ｍｌ及び炭酸水素ナトリウム水溶液５０
mlで抽出した後、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥した。
塩及び残存しているイミダゾールを濾別した。濾液を蒸
留して濃縮し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ
ー（Still, W. C., Kahn,M., Mitra, A., J. Org. Che
m. 43:2923, 1978）により分離した。生成物の画分を併
せ、濃縮し、ジクロロメタン５０mlにとり、１M 炭酸水
素トリエチルアンモニウム溶液５０mlで抽出した。有機
相を硫酸ナトリウムで乾燥した。塩を濾別し、濾液を減
圧下に１mlの容量まで濃縮した。濃縮した生成物の溶液
を、室温でｎ−ペンタン５０mlに加えて沈殿させた。ｎ
−ペンタン２００mlを加え、−２０℃に冷却して沈殿を
完結させた。沈殿物を濾過により捕集し、ｎ−ペンタン
５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で真空乾燥した。
５´−ジメトキシトリチルチミジン４３１mg（８２．５
％）を固体として得た。。
エチルホスホロジイソプロピルアミダイトから５´−ジ
メトキシトリチルチミジンの製造 アセトニトリル４mlに溶解したジメトキシトリチルチミ
ジン−３´−イル−β−シアノエチルホスホロジイソプ
ロピルアミダイト３６０mg（０．４８mmol）の溶液に、
テトラゾール２７０mg（３．８６mmol）と水９μl
（０．５mmol）を加えた。５分後、ホスホロアミダイト
の加水分解は終了し、５´−ジメトキシトリチルチミジ
ン−３´−シアノエチルヒドロゲンホスホナートを得
た。この溶液にメタノール４mlとイミダゾール３５０mg
を加え、２４時間後、反応溶液を減圧下に蒸留して濃縮
し、得られた白黄色の固体をジクロロメタン５０ｍｌに
とった。水５０ｍｌ及び炭酸水素ナトリウム水溶液５０
mlで抽出した後、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥した。
塩及び残存しているイミダゾールを濾別した。濾液を蒸
留して濃縮し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ
ー（Still, W. C., Kahn,M., Mitra, A., J. Org. Che
m. 43:2923, 1978）により分離した。生成物の画分を併
せ、濃縮し、ジクロロメタン５０mlにとり、１M 炭酸水
素トリエチルアンモニウム溶液５０mlで抽出した。有機
相を硫酸ナトリウムで乾燥した。塩を濾別し、濾液を減
圧下に１mlの容量まで濃縮した。濃縮した生成物の溶液
を、室温でｎ−ペンタン５０mlに加えて沈殿させた。ｎ
−ペンタン２００mlを加え、−２０℃に冷却して沈殿を
完結させた。沈殿物を濾過により捕集し、ｎ−ペンタン
５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で真空乾燥した。
５´−ジメトキシトリチルチミジン４３１mg（８２．５
％）を固体として得た。。
【００６０】実施例２： オリゴヌクレオチド合成反応器の排溶液から５´−ジメ
トキシトリチルチミジンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に生成した５´−ジメトキ
トリチルチミジン−３´−イル−β−シアノエチルホス
ホナート０．２４mmolを含む排溶液１００mlを、イミダ
ゾール１ｇを含むメタノール溶液５０ml中に加えた。反
応終了後、反応溶液を減圧下に濃縮乾燥し、得られた白
黄色固体をジクロロメタン１００mlにとった。ＮａＨ2
ＰＯ4 ／ＮａＨＰＯ4 の１M 溶液（ｐＨ５．５）１００
mlで三回抽出した後、水層を併せ、ジクロロメタン５０
mlで抽出した。有機相を併せ、次いで炭酸水素ナトリウ
ム飽和水溶液１００mlで二回抽出した。炭酸水素ナトリ
ウム相をジクロロメタン５０mlで抽出し、すべての有機
相を併せ、硫酸ナトリウムで乾燥した。つづく再結晶は
ベンゼン５mlを用い−２０℃に冷却して行った。次い
で、ｎ−ヘキサン５０mlを加え、−２０℃で２０時間結
晶化を続けた。沈澱物を濾取し、ｎ−ヘキサン５０mlで
洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で真空乾燥した。５´−ジ
メトキシトリチルチミジン１３１mg（合成器中のヌクレ
オチド間カップリング１００％の乾燥固体の９９％）を
得た。
トキシトリチルチミジンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に生成した５´−ジメトキ
トリチルチミジン−３´−イル−β−シアノエチルホス
ホナート０．２４mmolを含む排溶液１００mlを、イミダ
ゾール１ｇを含むメタノール溶液５０ml中に加えた。反
応終了後、反応溶液を減圧下に濃縮乾燥し、得られた白
黄色固体をジクロロメタン１００mlにとった。ＮａＨ2
ＰＯ4 ／ＮａＨＰＯ4 の１M 溶液（ｐＨ５．５）１００
mlで三回抽出した後、水層を併せ、ジクロロメタン５０
mlで抽出した。有機相を併せ、次いで炭酸水素ナトリウ
ム飽和水溶液１００mlで二回抽出した。炭酸水素ナトリ
ウム相をジクロロメタン５０mlで抽出し、すべての有機
相を併せ、硫酸ナトリウムで乾燥した。つづく再結晶は
ベンゼン５mlを用い−２０℃に冷却して行った。次い
で、ｎ−ヘキサン５０mlを加え、−２０℃で２０時間結
晶化を続けた。沈澱物を濾取し、ｎ−ヘキサン５０mlで
洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で真空乾燥した。５´−ジ
メトキシトリチルチミジン１３１mg（合成器中のヌクレ
オチド間カップリング１００％の乾燥固体の９９％）を
得た。
【００６１】実施例３： Ｎ2 −イソブチリル−５´−ジメトキシトリチル−２´
−デオキシグアノシン−３´−イル−β−シアノエチル
ホスホロジイソプロピルアミダイトからＮ2 −イソブチ
リル−５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシグア
ノシンの製造 アセトニトリル８mlに溶解したＮ2 −イソブチリル−５
´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシグアノシン−
３´−イル−β−シアノエチルホスホロジイソプロピル
アミダイト８３９mg（１mmol）の溶液に、テトラゾール
３５０mg（５mmol）と水１８μ l（１mmol）を加えた。
５分後、ホスホロアミダイトの加水分解は終了し、５´
−ジメトキシトリチルグアノシン−３´−イル−シアノ
エチルヒドロゲンホスホナートを得た。この溶液にメタ
ノール４mlとイミダゾール３５０mgを加えた。２４時間
後、反応溶液を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた白黄
色の固体をジクロロメタン５０mlにとった。水５０ml及
び炭酸水素ナトリウム水溶液５０mlで抽出した後、有機
相を硫酸ナトリウムで乾燥した。塩及び残存しているイ
ミダゾールを濾別し、濾液を蒸留して濃縮し、粗生成物
をフラッシュクロマトグラフィーに付して分離した。生
成物の画分を併せ、濃縮した。濃縮物をジクロロメタン
５０mlにとり、炭酸水素トリエチルアンモニウムの１M
溶液５０mlで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥
した。塩を濾別し、濾液を減圧下に１mlの容量まで濃縮
した。濃縮した生成物の溶液を、室温でｎ−ペンタン５
０mlに加えて沈殿させた。さらにｎ−ペンタン４５０ml
を加え、−２０℃に冷却して沈殿を完結させた。沈殿物
を濾取し、ｎ−ペンタン１００mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／
ＫＯＨ上で真空乾燥した。Ｎ2 −イソブチリル−５´−
ジメトキシトリチル−２´−デオキシグアノシン５７７
mg（乾燥固体の９０．３％）を得た。
−デオキシグアノシン−３´−イル−β−シアノエチル
ホスホロジイソプロピルアミダイトからＮ2 −イソブチ
リル−５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシグア
ノシンの製造 アセトニトリル８mlに溶解したＮ2 −イソブチリル−５
´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシグアノシン−
３´−イル−β−シアノエチルホスホロジイソプロピル
アミダイト８３９mg（１mmol）の溶液に、テトラゾール
３５０mg（５mmol）と水１８μ l（１mmol）を加えた。
５分後、ホスホロアミダイトの加水分解は終了し、５´
−ジメトキシトリチルグアノシン−３´−イル−シアノ
エチルヒドロゲンホスホナートを得た。この溶液にメタ
ノール４mlとイミダゾール３５０mgを加えた。２４時間
後、反応溶液を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた白黄
色の固体をジクロロメタン５０mlにとった。水５０ml及
び炭酸水素ナトリウム水溶液５０mlで抽出した後、有機
相を硫酸ナトリウムで乾燥した。塩及び残存しているイ
ミダゾールを濾別し、濾液を蒸留して濃縮し、粗生成物
をフラッシュクロマトグラフィーに付して分離した。生
成物の画分を併せ、濃縮した。濃縮物をジクロロメタン
５０mlにとり、炭酸水素トリエチルアンモニウムの１M
溶液５０mlで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥
した。塩を濾別し、濾液を減圧下に１mlの容量まで濃縮
した。濃縮した生成物の溶液を、室温でｎ−ペンタン５
０mlに加えて沈殿させた。さらにｎ−ペンタン４５０ml
を加え、−２０℃に冷却して沈殿を完結させた。沈殿物
を濾取し、ｎ−ペンタン１００mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／
ＫＯＨ上で真空乾燥した。Ｎ2 −イソブチリル−５´−
ジメトキシトリチル−２´−デオキシグアノシン５７７
mg（乾燥固体の９０．３％）を得た。
【００６２】実施例４： Ｎ6 −ベンゾイル−５´−ジメトキシトリチル−２´−
デオキシアデノシン−３´−イル−β−シアノエチルホ
スホロジイソプロピルアミダイトからＮ6 −ベンゾイル
−５´−デオキシアデノシンの製造 アセトニトリル８mlに溶解したＮ6 −ベンゾイル−５´
−ジメトキシトリチル−２´−デオキシアデノシン−３
´−イル−β−シアノエチルホスホロジイソプロピルア
ミダイト８５７mg（１mmol）の溶液に、テトラゾール３
５０mg（５mmol）と水１８μ l（１mmol）を加えた。５
分後、ホスホロアミダイトの加水分解は終了し、５´−
ジメトキシトリチルアデノシン−３´−シアノエチルヒ
ドロゲンホスホナートを得た。この溶液にメタノール４
mlとイミダゾール３５０mgを加え、２４時間後、反応溶
液を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた白黄色の固体を
ジクロロメタン５０mlにとった。水５０ml及び炭酸水素
ナトリウム水溶液５０mlで抽出した後、有機相を硫酸ナ
トリウムで乾燥した。塩及び残存しているイミダゾール
を濾別し、濾液を蒸留して濃縮し粗生成物をフラッシュ
クロマトグラフィーに付して分離した。生成物の画分を
併せ、濃縮した。濃縮物をジクロロメタン５０mlにと
り、炭酸水素トリエチルアンモニウムの１M 溶液５０ml
で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥した。塩を
濾別し、濾液を減圧下に１mlの量まで濃縮した。濃縮し
た生成物の溶液を、室温でｎ−ペンタン５０mlに加えて
沈殿させた。さらにｎ−ペンタン４５０mlを加え、次い
で−２０℃に冷却して沈殿を完結させた。沈殿物を濾取
し、ｎ−ペンタン１００mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ
上で真空乾燥した。Ｎ6 −ベンゾイル−５´−ジメトキ
シトリチル−２´−デオキシアデノシン５６２mg（乾燥
固体の８５．５％）を得た。
デオキシアデノシン−３´−イル−β−シアノエチルホ
スホロジイソプロピルアミダイトからＮ6 −ベンゾイル
−５´−デオキシアデノシンの製造 アセトニトリル８mlに溶解したＮ6 −ベンゾイル−５´
−ジメトキシトリチル−２´−デオキシアデノシン−３
´−イル−β−シアノエチルホスホロジイソプロピルア
ミダイト８５７mg（１mmol）の溶液に、テトラゾール３
５０mg（５mmol）と水１８μ l（１mmol）を加えた。５
分後、ホスホロアミダイトの加水分解は終了し、５´−
ジメトキシトリチルアデノシン−３´−シアノエチルヒ
ドロゲンホスホナートを得た。この溶液にメタノール４
mlとイミダゾール３５０mgを加え、２４時間後、反応溶
液を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた白黄色の固体を
ジクロロメタン５０mlにとった。水５０ml及び炭酸水素
ナトリウム水溶液５０mlで抽出した後、有機相を硫酸ナ
トリウムで乾燥した。塩及び残存しているイミダゾール
を濾別し、濾液を蒸留して濃縮し粗生成物をフラッシュ
クロマトグラフィーに付して分離した。生成物の画分を
併せ、濃縮した。濃縮物をジクロロメタン５０mlにと
り、炭酸水素トリエチルアンモニウムの１M 溶液５０ml
で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥した。塩を
濾別し、濾液を減圧下に１mlの量まで濃縮した。濃縮し
た生成物の溶液を、室温でｎ−ペンタン５０mlに加えて
沈殿させた。さらにｎ−ペンタン４５０mlを加え、次い
で−２０℃に冷却して沈殿を完結させた。沈殿物を濾取
し、ｎ−ペンタン１００mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ
上で真空乾燥した。Ｎ6 −ベンゾイル−５´−ジメトキ
シトリチル−２´−デオキシアデノシン５６２mg（乾燥
固体の８５．５％）を得た。
【００６３】実施例５： オリゴヌクレオチド合成反応器の排溶液のＮ6 −ベンゾ
イル−５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシアデ
ノシンからＮ6 −ベンゾイル−５´−ジメトキシトリチ
ル−２´−デオキシアデノシンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に生成したＮ6 −ベンゾイ
ル−５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシアデノ
シン−３´−イル−β−シアノエチルホスホナート０．
８２mmolを含む排溶液３００mlを、イミダゾール１ｇを
含むメタノール溶液５０mlに加えた。反応終了後、反応
溶液を減圧下に濃縮乾燥し、得られた白黄色の固体をジ
クロロメタン１００mlにとった。ＮａＨ2 ＰＯ4 ／Ｎａ
ＨＰＯ4の１M 溶液（ｐＨ５．５）１００mlで三回抽出
後、水相を併せ、ジクロロメタン５０mlで抽出した。有
機相を併せ、次いで炭酸水素ナトリウム飽和水溶液１０
０mlで二回抽出した。炭酸水素ナトリウム層をジクロロ
メタン５０mlで抽出し、すべての有機相を併せた。併せ
た有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾液を蒸留して濃
縮し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーに付し
て分離した。生成物の画分を併せ、濃縮した。濃縮物を
ジクロロメタン５０mlにとり、炭酸水素トリメチルアン
モニウムの１M 溶液５０mlで抽出した。有機相を硫酸ナ
トリウムで乾燥した。塩を濾別し、減圧下に１mlの容量
まで濃縮した。濃縮した生成物溶液を、室温でｎ−ペン
タン５０mlに加えて沈澱させた。ｎ−ペンタン２００ml
を加えて、次いで−２０℃に冷却して沈澱を完結させ
た。沈澱物を濾取し、ｎ−ペンタン５０mlで洗浄し、Ｐ
4 Ｏ10／ＫＯＨ上で真空乾燥した。Ｎ6 −ベンゾイル−
５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシアデノシン
３８０mg（合成器内のヌクレオチドカップリング化合物
の乾燥固体の７５．５％）を得た。
イル−５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシアデ
ノシンからＮ6 −ベンゾイル−５´−ジメトキシトリチ
ル−２´−デオキシアデノシンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に生成したＮ6 −ベンゾイ
ル−５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシアデノ
シン−３´−イル−β−シアノエチルホスホナート０．
８２mmolを含む排溶液３００mlを、イミダゾール１ｇを
含むメタノール溶液５０mlに加えた。反応終了後、反応
溶液を減圧下に濃縮乾燥し、得られた白黄色の固体をジ
クロロメタン１００mlにとった。ＮａＨ2 ＰＯ4 ／Ｎａ
ＨＰＯ4の１M 溶液（ｐＨ５．５）１００mlで三回抽出
後、水相を併せ、ジクロロメタン５０mlで抽出した。有
機相を併せ、次いで炭酸水素ナトリウム飽和水溶液１０
０mlで二回抽出した。炭酸水素ナトリウム層をジクロロ
メタン５０mlで抽出し、すべての有機相を併せた。併せ
た有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾液を蒸留して濃
縮し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーに付し
て分離した。生成物の画分を併せ、濃縮した。濃縮物を
ジクロロメタン５０mlにとり、炭酸水素トリメチルアン
モニウムの１M 溶液５０mlで抽出した。有機相を硫酸ナ
トリウムで乾燥した。塩を濾別し、減圧下に１mlの容量
まで濃縮した。濃縮した生成物溶液を、室温でｎ−ペン
タン５０mlに加えて沈澱させた。ｎ−ペンタン２００ml
を加えて、次いで−２０℃に冷却して沈澱を完結させ
た。沈澱物を濾取し、ｎ−ペンタン５０mlで洗浄し、Ｐ
4 Ｏ10／ＫＯＨ上で真空乾燥した。Ｎ6 −ベンゾイル−
５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシアデノシン
３８０mg（合成器内のヌクレオチドカップリング化合物
の乾燥固体の７５．５％）を得た。
【００６４】実施例６： Ｎ4 −ベンゾイル−５´−ジメトキシトリチル−２´−
デオキシシチジン−３´−イル−β−シアノエチルホス
ホロジイソプロピルアミダイトからＮ4 −ベンゾイル−
５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシシチジンの
製造 アセトニトリル８mlにとったＮ4 −ベンゾイル−５´−
ジメトキシトリチル−２´−デオキシシチジン−３´−
イル−β−シアノエチルホスホロジイソプロピルアミダ
イト８３３mg（１mmol）の溶液に、テトラゾール３５０
mg（５mmol）と水１８μl （１mmol）を加えた。５分
後、ホスホロアミダイトの加水分解は終了し 、５´−
ジメトキシトリチルシチジン−３´−イル−シアノエチ
ルヒドロゲンホスホナートを得た。この溶液にメタノー
ル４mlとイミダゾール３５０mgを加えた。２４時間後、
反応溶液を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた白黄色の
固体をジクロロメタン５０mlにとった。水５０ml及び炭
酸水素ナトリウム水溶液５０mlで抽出した後、有機相を
硫酸ナトリウムで乾燥した。塩及び残存しているイミダ
ゾールを濾別した。濾液を蒸留して濃縮し、粗生成物を
フラッシュクロマトグラフィーに付して分離した。生成
物の画分を併せ、濃縮した。濃縮物をジクロロメタン５
０mlにとり、炭酸水素トリエチルアンモニウムの１M 溶
液５０mlで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し
た。塩を濾別し、濾液を１mlの容量まで減圧下に濃縮し
た。濃縮した生成物の溶液を、室温でｎ−ペンタン５０
mlに加えて沈殿させた。さらにｎ−ペンタン４５０mlを
加え、−２０℃に冷却して沈殿を完結させた。沈殿物を
濾取し、ｎ−ペンタン１００mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／Ｋ
ＯＨ上で真空乾燥した。Ｎ4 −ベンゾイル−５´−ジメ
トキシトリチル−２´−デオキシシチジン５２７mg（乾
燥固体の８３．２％）を得た。
デオキシシチジン−３´−イル−β−シアノエチルホス
ホロジイソプロピルアミダイトからＮ4 −ベンゾイル−
５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシシチジンの
製造 アセトニトリル８mlにとったＮ4 −ベンゾイル−５´−
ジメトキシトリチル−２´−デオキシシチジン−３´−
イル−β−シアノエチルホスホロジイソプロピルアミダ
イト８３３mg（１mmol）の溶液に、テトラゾール３５０
mg（５mmol）と水１８μl （１mmol）を加えた。５分
後、ホスホロアミダイトの加水分解は終了し 、５´−
ジメトキシトリチルシチジン−３´−イル−シアノエチ
ルヒドロゲンホスホナートを得た。この溶液にメタノー
ル４mlとイミダゾール３５０mgを加えた。２４時間後、
反応溶液を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた白黄色の
固体をジクロロメタン５０mlにとった。水５０ml及び炭
酸水素ナトリウム水溶液５０mlで抽出した後、有機相を
硫酸ナトリウムで乾燥した。塩及び残存しているイミダ
ゾールを濾別した。濾液を蒸留して濃縮し、粗生成物を
フラッシュクロマトグラフィーに付して分離した。生成
物の画分を併せ、濃縮した。濃縮物をジクロロメタン５
０mlにとり、炭酸水素トリエチルアンモニウムの１M 溶
液５０mlで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し
た。塩を濾別し、濾液を１mlの容量まで減圧下に濃縮し
た。濃縮した生成物の溶液を、室温でｎ−ペンタン５０
mlに加えて沈殿させた。さらにｎ−ペンタン４５０mlを
加え、−２０℃に冷却して沈殿を完結させた。沈殿物を
濾取し、ｎ−ペンタン１００mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／Ｋ
ＯＨ上で真空乾燥した。Ｎ4 −ベンゾイル−５´−ジメ
トキシトリチル−２´−デオキシシチジン５２７mg（乾
燥固体の８３．２％）を得た。
【００６５】実施例７： オリゴヌクレオチド合成反応器の排溶液からＮ4 −ベン
ゾイル−５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシシ
チジンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に生成したＮ4 −ベンゾイ
ル−５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシシチジ
ン−３´−イル−β−シアノエチルホスホナート０．２
７mmolを含む排溶液１００mlをイミダゾール１ｇを含む
メタノール溶液５０ml中に加えた。反応終了後、反応溶
液を減圧下に濃縮乾燥し、得られた白黄色の固体をジク
ロロメタン１００mlに加えた。ＮａＨ2 ＰＯ4 ／ＮａＨ
ＰＯ4 の１M 溶液（ｐＨ５．５）１００mlで三回抽出
後、水相を併せ、ジクロロメタン５０mlで抽出した。有
機相を併せ、次いで炭酸水素ナトリウム飽和水溶液１０
０mlで二回抽出した。炭酸水素ナトリウム相をジクロロ
メタン５０mlで抽出し、すべての有機相を併せた。併せ
た有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸留して濃縮し、
粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーに付して分離
した。生成物の画分を併せ、濃縮した。濃縮物をジクロ
ロメタン５０mlにとり、炭酸水素トリメチルアンモニウ
ムの１M 溶液５０mlで抽出した。有機相を硫酸ナトリウ
ムで乾燥した。塩を濾別し、濾液を１mlの容量まで減圧
下に濃縮した。濃縮した生成物溶液を、室温でｎ−ペン
タン５０mlに加えて沈澱させた。ｎ−ペンタン２００ml
を加え、次いで−２０℃に冷却して沈澱を完結させた。
沈澱物を濾取し、ｎ−ペンタン５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ
10／ＫＯＨ上で真空乾燥した。Ｎ4 −ベンゾイル−５´
−ジメトキシトリチル−２´−デオキシシチジン１６３
mg（合成器内のヌクレオチドカップリング化合物の乾燥
固体の９１．５％）を得た。
ゾイル−５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシシ
チジンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に生成したＮ4 −ベンゾイ
ル−５´−ジメトキシトリチル−２´−デオキシシチジ
ン−３´−イル−β−シアノエチルホスホナート０．２
７mmolを含む排溶液１００mlをイミダゾール１ｇを含む
メタノール溶液５０ml中に加えた。反応終了後、反応溶
液を減圧下に濃縮乾燥し、得られた白黄色の固体をジク
ロロメタン１００mlに加えた。ＮａＨ2 ＰＯ4 ／ＮａＨ
ＰＯ4 の１M 溶液（ｐＨ５．５）１００mlで三回抽出
後、水相を併せ、ジクロロメタン５０mlで抽出した。有
機相を併せ、次いで炭酸水素ナトリウム飽和水溶液１０
０mlで二回抽出した。炭酸水素ナトリウム相をジクロロ
メタン５０mlで抽出し、すべての有機相を併せた。併せ
た有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸留して濃縮し、
粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーに付して分離
した。生成物の画分を併せ、濃縮した。濃縮物をジクロ
ロメタン５０mlにとり、炭酸水素トリメチルアンモニウ
ムの１M 溶液５０mlで抽出した。有機相を硫酸ナトリウ
ムで乾燥した。塩を濾別し、濾液を１mlの容量まで減圧
下に濃縮した。濃縮した生成物溶液を、室温でｎ−ペン
タン５０mlに加えて沈澱させた。ｎ−ペンタン２００ml
を加え、次いで−２０℃に冷却して沈澱を完結させた。
沈澱物を濾取し、ｎ−ペンタン５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ
10／ＫＯＨ上で真空乾燥した。Ｎ4 −ベンゾイル−５´
−ジメトキシトリチル−２´−デオキシシチジン１６３
mg（合成器内のヌクレオチドカップリング化合物の乾燥
固体の９１．５％）を得た。
【００６６】実施例８： オリゴヌクレオチド合成反応器の排溶液からＮ−メチル
−Ｎ−（５´−ジメトキシトリチル−３´−デオキシチ
ミジン−３´−イル）−（５´−デオキシチミジン−５
´−イル）アセトアミドの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に形成されたＮ−メチル−
Ｎ−（５´−ジメトキシトリチル−３´−デオキシチミ
ジン−３´−イル）−（３´−シアノエチル−Ｈ−ホス
ホニル−５´−デオキシチミジン−５´−イル）アセト
アミド１６０mgを含む排溶液５mlを、イミダゾール１ｇ
のメタノール溶液５０mlに加えた。反応を２０〜２５℃
で３日間行った。反応混合物を水５mlで希釈した。次い
で、この反応混合物にヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリジ
ン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０mlの溶液を、
褐色のヨウ素の色が少なくとも５分間残っているような
量まで加えた。次いで、反応混合物を減圧下に蒸留して
濃縮し、得られた黄色固体を４０％ＮａＨＣＯ3 水溶液
１００ml及び酢酸エチル５０mlよりなる乳濁液にとっ
た。水相を分離し、有機相を炭酸水素ナトリウム水溶液
５０mlで二回抽出した。水相を併せ、もう一度酢酸エチ
ル１０mlで抽出した。有機相を併せ、ＭｇＳＯ4 の１M
水溶液５０mlで二回抽出し、無水硫酸ナトリウム２ｇで
乾燥した。塩を濾別し、濾液を減圧下で濃縮乾固した。
固体をＣＨＣｌ3 ／メタノール（９：１）５mlにとり、
この溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し
た。生成物の画分を併せ、高真空で乾燥した。Ｎ−メチ
ル−Ｎ−（５´−ジメトキシトリチル−３´−デオキシ
チミジン−３´−イル）−（５´−デオキシチミジン−
５´−イル）アセトアミドを、無色の泡状物として４０
mg（理論量の３１％）の収量で得た。
−Ｎ−（５´−ジメトキシトリチル−３´−デオキシチ
ミジン−３´−イル）−（５´−デオキシチミジン−５
´−イル）アセトアミドの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に形成されたＮ−メチル−
Ｎ−（５´−ジメトキシトリチル−３´−デオキシチミ
ジン−３´−イル）−（３´−シアノエチル−Ｈ−ホス
ホニル−５´−デオキシチミジン−５´−イル）アセト
アミド１６０mgを含む排溶液５mlを、イミダゾール１ｇ
のメタノール溶液５０mlに加えた。反応を２０〜２５℃
で３日間行った。反応混合物を水５mlで希釈した。次い
で、この反応混合物にヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリジ
ン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０mlの溶液を、
褐色のヨウ素の色が少なくとも５分間残っているような
量まで加えた。次いで、反応混合物を減圧下に蒸留して
濃縮し、得られた黄色固体を４０％ＮａＨＣＯ3 水溶液
１００ml及び酢酸エチル５０mlよりなる乳濁液にとっ
た。水相を分離し、有機相を炭酸水素ナトリウム水溶液
５０mlで二回抽出した。水相を併せ、もう一度酢酸エチ
ル１０mlで抽出した。有機相を併せ、ＭｇＳＯ4 の１M
水溶液５０mlで二回抽出し、無水硫酸ナトリウム２ｇで
乾燥した。塩を濾別し、濾液を減圧下で濃縮乾固した。
固体をＣＨＣｌ3 ／メタノール（９：１）５mlにとり、
この溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し
た。生成物の画分を併せ、高真空で乾燥した。Ｎ−メチ
ル−Ｎ−（５´−ジメトキシトリチル−３´−デオキシ
チミジン−３´−イル）−（５´−デオキシチミジン−
５´−イル）アセトアミドを、無色の泡状物として４０
mg（理論量の３１％）の収量で得た。
【００６７】1H-NMR(CDCl3, 基準=TMS, d[ppm]): 8.8(2
s, NH); 7.7(s, 1H, H6); 7.45-7.2(DMTr); 7.09(s, 1
H, H6); 6.82(2m, 4H, DMTr): 6.33(t, 1H, 1'); 6.15
(t, 1H, 1'); 5.26, 4.95(m, 1H, NRCH3の 3',２個の回
転異性体 3:1); 4.25-4(m, 2H); 3.75(s, 6H, DMTr);
3.63, 3.4, 3.25(3m, 4H); 2.9, 2.85(2s, 3H, NRCH3
のCH3,２個の回転異性体 3:1); 2.65-2(m); 1.88(2H);
1.8(1H, 2s, CH3 5, ２個の回転異性体 3:1); 1.5(1H);
1.45(2H, 2s, CH3 5,２個の回転異性体 1:3).
s, NH); 7.7(s, 1H, H6); 7.45-7.2(DMTr); 7.09(s, 1
H, H6); 6.82(2m, 4H, DMTr): 6.33(t, 1H, 1'); 6.15
(t, 1H, 1'); 5.26, 4.95(m, 1H, NRCH3の 3',２個の回
転異性体 3:1); 4.25-4(m, 2H); 3.75(s, 6H, DMTr);
3.63, 3.4, 3.25(3m, 4H); 2.9, 2.85(2s, 3H, NRCH3
のCH3,２個の回転異性体 3:1); 2.65-2(m); 1.88(2H);
1.8(1H, 2s, CH3 5, ２個の回転異性体 3:1); 1.5(1H);
1.45(2H, 2s, CH3 5,２個の回転異性体 1:3).
【００６８】実施例９： オリゴヌクレオチド合成反応器の排溶液から５´−ジメ
トキシトリチル−Ｎ6 −ピバロイル−２´−［１−（２
−フルオロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−
イル］アデノシンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に形成された（５´−ジメ
トキシトリチル−Ｎ6−ピバロイル−２´−［１−（２
−フルオロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−
イル］アデノシン−３´−イル）−３´−シアノエチル
−Ｈ−ホスホナート１６０mgを含む排溶液５mlを、イミ
ダゾール１ｇのメタノール溶液５０mlに加えた。反応を
２０〜２５℃で３日間行った。反応混合物を水５mlで希
釈した。次いで、この反応混合物にヨウ素３０ｇ、水２
０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０
mlの溶液を、褐色のヨウ素の色が少なくとも５分間残っ
ているような量まで加えた。次いで、反応混合物を減圧
下に蒸留して濃縮し、得られた黄色固体を４０％ＮａＨ
ＣＯ3 水溶液１００ml及び酢酸エチル５０mlよりなる乳
濁液にとった。水相を分離し、有機相を炭酸水素ナトリ
ウム水溶液５０mlで二回抽出した。水相を併せ、もう一
度酢酸エチル１０mlで抽出した。有機相を併せ、ＭｇＳ
Ｏ4 の１M 水溶液５０mlで二回抽出し、無水硫酸ナトリ
ウム２ｇで乾燥した。塩を濾別し、濾液を減圧下で濃縮
乾固し、粗生成物３２０mgを得た。固体をＣＨＣｌ3 ／
メタノール（９：１）５mlにとり、この溶液をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーに付した。生成物の画分を
併せ、高真空で乾燥した。生成物の５´−ジメトキシト
リチル−Ｎ6 −ピバロイル−２´−［１−（２−フルオ
ロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−イル］ア
デノシンは黄色の油状物として沈澱し、２２３mg（理論
量の５８％）の収量であった。
トキシトリチル−Ｎ6 −ピバロイル−２´−［１−（２
−フルオロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−
イル］アデノシンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に形成された（５´−ジメ
トキシトリチル−Ｎ6−ピバロイル−２´−［１−（２
−フルオロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−
イル］アデノシン−３´−イル）−３´−シアノエチル
−Ｈ−ホスホナート１６０mgを含む排溶液５mlを、イミ
ダゾール１ｇのメタノール溶液５０mlに加えた。反応を
２０〜２５℃で３日間行った。反応混合物を水５mlで希
釈した。次いで、この反応混合物にヨウ素３０ｇ、水２
０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０
mlの溶液を、褐色のヨウ素の色が少なくとも５分間残っ
ているような量まで加えた。次いで、反応混合物を減圧
下に蒸留して濃縮し、得られた黄色固体を４０％ＮａＨ
ＣＯ3 水溶液１００ml及び酢酸エチル５０mlよりなる乳
濁液にとった。水相を分離し、有機相を炭酸水素ナトリ
ウム水溶液５０mlで二回抽出した。水相を併せ、もう一
度酢酸エチル１０mlで抽出した。有機相を併せ、ＭｇＳ
Ｏ4 の１M 水溶液５０mlで二回抽出し、無水硫酸ナトリ
ウム２ｇで乾燥した。塩を濾別し、濾液を減圧下で濃縮
乾固し、粗生成物３２０mgを得た。固体をＣＨＣｌ3 ／
メタノール（９：１）５mlにとり、この溶液をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーに付した。生成物の画分を
併せ、高真空で乾燥した。生成物の５´−ジメトキシト
リチル−Ｎ6 −ピバロイル−２´−［１−（２−フルオ
ロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−イル］ア
デノシンは黄色の油状物として沈澱し、２２３mg（理論
量の５８％）の収量であった。
【００６９】1H-NMR(CDCl3, 基準=TMS, d[ppm]): 8.69
(s, 1H, adenine); 8.48(s, 1H,アデニン); 8.2(s, 1H,
アデニン); 7.5-7.2(m, 9H, DMTr); 7.12-6.88(m, 4H,
2-フルオロフェニル); 6.83(2m, 2H, DMTr); 6.25(d, 1
H, 1'); 5.35(m); 4.43(m, 1H); 4.3(m, 1H); 3.76(s,
6H); 3.5, 3.38(2m, 2H, 5'); 3.15(m, 1H, Fpmp); 2.
96(m, 2H, Fpmp); 2.78(s, 3H,Fpmpの CH3, m, 1H, Fpm
p); 2.15-1.75(m,4H, Fpmp); 1.4(9H).
(s, 1H, adenine); 8.48(s, 1H,アデニン); 8.2(s, 1H,
アデニン); 7.5-7.2(m, 9H, DMTr); 7.12-6.88(m, 4H,
2-フルオロフェニル); 6.83(2m, 2H, DMTr); 6.25(d, 1
H, 1'); 5.35(m); 4.43(m, 1H); 4.3(m, 1H); 3.76(s,
6H); 3.5, 3.38(2m, 2H, 5'); 3.15(m, 1H, Fpmp); 2.
96(m, 2H, Fpmp); 2.78(s, 3H,Fpmpの CH3, m, 1H, Fpm
p); 2.15-1.75(m,4H, Fpmp); 1.4(9H).
【００７０】実施例１０： ５´−ジメトキシトリチル−２´−［１−（２−フルオ
ロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−イル］ウ
リジン−３´−イル−シアノエチルホスホロジイソプロ
ピルアミダイトの加水分解液から５´−ジメトキシトリ
チル−２´−［１−（２−フルオロフェニル）−４−メ
トキシピペリジン−４−イル］ウリジンの製造；メタノ
ール及びＫＦとのエステル交換反応、Ｉ2 アクセプター
ではなく抑止溶液としてＩ2 ／Ｈ2 Ｏを後処理において
使用 アセトニトリルに溶解した５´−ジメトキシトリチル−
２´−［１−（２−フルオロフェニル）−４−メトキシ
ピペリジン−４−イル］ウリジン−３´−イル−シアノ
エチル−Ｈ−ホスホナート０．１３８mmol及びテトラゾ
ール０．６９４mmolの溶液１０mlを、ＫＦの０．１M メ
タノール溶液５０mlに加えた。反応は、２０〜２５℃で
２日間で終了した。反応混合物を水５mlで希釈した。次
いで、この反応混合物にヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリ
ジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０mlの溶液
を、褐色のヨウ素の色が少なくとも５分間残っているよ
うな量まで加えた。次いで、反応混合物を減圧下に蒸留
して濃縮し、得られた黄色固体を水５０mlと酢酸エチル
５０mlよりなる乳濁液にとった。有機相を併せ、水５０
mlで四回抽出した。水相を併せ、酢酸エチル１０mlでも
う一度抽出した。有機相を併せ、ＮａＣｌ飽和溶液５０
mlで抽出し、無水硫酸ナトリウム２ｇで乾燥した。塩を
濾別して濾液を濃縮した。得られた固体物を酢酸エチル
５−１０mlにとり、この溶液をｎ−ペンタン２００mlに
ゆっくりと加えた。生成物は白色の無定形沈澱として析
出した。沈澱物を濾過により捕集し、ｎ−ペンタン５０
mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で２４時間真空乾燥
し、５´−ジメトキシトリチル−２´−［１−（２−フ
ルオロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−イ
ル］ウリジンの６７．７mg（理論量の７５％）を得た。
ロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−イル］ウ
リジン−３´−イル−シアノエチルホスホロジイソプロ
ピルアミダイトの加水分解液から５´−ジメトキシトリ
チル−２´−［１−（２−フルオロフェニル）−４−メ
トキシピペリジン−４−イル］ウリジンの製造；メタノ
ール及びＫＦとのエステル交換反応、Ｉ2 アクセプター
ではなく抑止溶液としてＩ2 ／Ｈ2 Ｏを後処理において
使用 アセトニトリルに溶解した５´−ジメトキシトリチル−
２´−［１−（２−フルオロフェニル）−４−メトキシ
ピペリジン−４−イル］ウリジン−３´−イル−シアノ
エチル−Ｈ−ホスホナート０．１３８mmol及びテトラゾ
ール０．６９４mmolの溶液１０mlを、ＫＦの０．１M メ
タノール溶液５０mlに加えた。反応は、２０〜２５℃で
２日間で終了した。反応混合物を水５mlで希釈した。次
いで、この反応混合物にヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリ
ジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０mlの溶液
を、褐色のヨウ素の色が少なくとも５分間残っているよ
うな量まで加えた。次いで、反応混合物を減圧下に蒸留
して濃縮し、得られた黄色固体を水５０mlと酢酸エチル
５０mlよりなる乳濁液にとった。有機相を併せ、水５０
mlで四回抽出した。水相を併せ、酢酸エチル１０mlでも
う一度抽出した。有機相を併せ、ＮａＣｌ飽和溶液５０
mlで抽出し、無水硫酸ナトリウム２ｇで乾燥した。塩を
濾別して濾液を濃縮した。得られた固体物を酢酸エチル
５−１０mlにとり、この溶液をｎ−ペンタン２００mlに
ゆっくりと加えた。生成物は白色の無定形沈澱として析
出した。沈澱物を濾過により捕集し、ｎ−ペンタン５０
mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で２４時間真空乾燥
し、５´−ジメトキシトリチル−２´−［１−（２−フ
ルオロフェニル）−４−メトキシピペリジン−４−イ
ル］ウリジンの６７．７mg（理論量の７５％）を得た。
【００７１】1H-NMR(CDCl3, 基準=TMS, d[ppm]): 7.75
(d, 1H, H6); 7.45-7.15(m, 9H,DMTr); 7.1-6.75(m, 4
H, Fpmp, 2m, 4H, DMTr); 6.15(d, 1H, 1'); 5.2(d, 1
H, H5);4.74(m, 1H, 2'); 4.33(m, 1H, 3'); 4.15(m, 1
H, 4'); 3.76(s, 6H,DMTr); 3.38(m, 2H, 5'); 3.12(s,
3H, Fpmpの CH3); 3.2-2.8(m, 4H, Fpmp); 2.15-1.8
(m, 4H).
(d, 1H, H6); 7.45-7.15(m, 9H,DMTr); 7.1-6.75(m, 4
H, Fpmp, 2m, 4H, DMTr); 6.15(d, 1H, 1'); 5.2(d, 1
H, H5);4.74(m, 1H, 2'); 4.33(m, 1H, 3'); 4.15(m, 1
H, 4'); 3.76(s, 6H,DMTr); 3.38(m, 2H, 5'); 3.12(s,
3H, Fpmpの CH3); 3.2-2.8(m, 4H, Fpmp); 2.15-1.8
(m, 4H).
【００７２】実施例１１： ５´−ジメトキシトリチル−Ｎ4 −ベンゾイル−２´−
［１−（２−フルオロフェニル）−４−メトキシピペリ
ジン−４−イル］シチジン−３´−イル−シアノエチル
ホスホロジイソプロピルアミダイトの加水分解物から５
´−ジメトキシトリチル−Ｎ4 −ベンゾイル−２´−
［１−（２−フルオロフェニル）−４−メトキシピペリ
ジン−４−イル］シチジンの製造 アセトニトリルに溶解した５´−ジメトキシトリチル−
Ｎ4 −ベンゾイル−２´−［１−（２−フルオロフェニ
ル）−４−メトキシピペリジン−４−イル］シチジン−
３´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナート０．１２
９mmol及びテトラゾール０．６４５mmolの溶液１０mlを
ＫＦの０．１M メタノール溶液５０mlに加えた。反応は
２０〜２５℃で２日間で終了した。反応混合物を水５ml
で希釈し、ヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリジン２００ml
とテトラヒドロフラン７５０mlの溶液を、褐色のヨウ素
に色が少なくとも５分間残っているような量まで加え
た。反応混合物を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた黄
色固体を水５０mlと酢酸エチル５０mlよりなる乳濁液に
とった。有機相を併せ、水５０mlで四回抽出した。水相
を併せ、もう一度酢酸エチル１０mlで抽出した。有機相
を併せ、ＮａＣｌ飽和水溶液１０mlで抽出し、無水硫酸
ナトリウム２ｇで乾燥した。塩を濾別して濾液を濃縮し
た。得られた固体を酢酸エチル５〜１０mlにとり、この
溶液をｎ−ペンタン２００mlにゆっくりと加えた。生成
物は白色無晶形沈澱として析出した。この沈澱物を濾取
し、ｎ−ペンタン５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上
で２４時間真空乾燥して、５´−ジメトキシトリチル−
Ｎ4 −ベンゾイル−２´−［１−（２−フルオロフェニ
ル）−４−メトキシピペリジン−４−イル］シチジン８
３mg（理論量の８０％）を得た。
［１−（２−フルオロフェニル）−４−メトキシピペリ
ジン−４−イル］シチジン−３´−イル−シアノエチル
ホスホロジイソプロピルアミダイトの加水分解物から５
´−ジメトキシトリチル−Ｎ4 −ベンゾイル−２´−
［１−（２−フルオロフェニル）−４−メトキシピペリ
ジン−４−イル］シチジンの製造 アセトニトリルに溶解した５´−ジメトキシトリチル−
Ｎ4 −ベンゾイル−２´−［１−（２−フルオロフェニ
ル）−４−メトキシピペリジン−４−イル］シチジン−
３´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナート０．１２
９mmol及びテトラゾール０．６４５mmolの溶液１０mlを
ＫＦの０．１M メタノール溶液５０mlに加えた。反応は
２０〜２５℃で２日間で終了した。反応混合物を水５ml
で希釈し、ヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリジン２００ml
とテトラヒドロフラン７５０mlの溶液を、褐色のヨウ素
に色が少なくとも５分間残っているような量まで加え
た。反応混合物を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた黄
色固体を水５０mlと酢酸エチル５０mlよりなる乳濁液に
とった。有機相を併せ、水５０mlで四回抽出した。水相
を併せ、もう一度酢酸エチル１０mlで抽出した。有機相
を併せ、ＮａＣｌ飽和水溶液１０mlで抽出し、無水硫酸
ナトリウム２ｇで乾燥した。塩を濾別して濾液を濃縮し
た。得られた固体を酢酸エチル５〜１０mlにとり、この
溶液をｎ−ペンタン２００mlにゆっくりと加えた。生成
物は白色無晶形沈澱として析出した。この沈澱物を濾取
し、ｎ−ペンタン５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上
で２４時間真空乾燥して、５´−ジメトキシトリチル−
Ｎ4 −ベンゾイル−２´−［１−（２−フルオロフェニ
ル）−４−メトキシピペリジン−４−イル］シチジン８
３mg（理論量の８０％）を得た。
【００７３】1H-NMR(CDCl3,基準=TMS, d[ppm]): 8.28
(d, 1H); 7.82(d, 2H, Bz); 7.6-7.23(m, 14H, Bz, DMT
r, C); 7.03-6.77(d, 4H, DMTr, 2d, 4H, Fpmp); 4.66
(t, 1H, 1'); 4.38(t, 1H, 2'); 4.17(m, 1H, 3'); 3.7
4(s, 6H, DMTr); 3.48(m, 2H, 5'); 3.25-2.85(s, 3H,
Fpmp, m, 4H, Fpmp); 2.18-1.95(m, 4H,Fpmp). 19F-N
MR(CDCl3, 基準=TFA, d[ppm]): -123.5.
(d, 1H); 7.82(d, 2H, Bz); 7.6-7.23(m, 14H, Bz, DMT
r, C); 7.03-6.77(d, 4H, DMTr, 2d, 4H, Fpmp); 4.66
(t, 1H, 1'); 4.38(t, 1H, 2'); 4.17(m, 1H, 3'); 3.7
4(s, 6H, DMTr); 3.48(m, 2H, 5'); 3.25-2.85(s, 3H,
Fpmp, m, 4H, Fpmp); 2.18-1.95(m, 4H,Fpmp). 19F-N
MR(CDCl3, 基準=TFA, d[ppm]): -123.5.
【００７４】実施例１２： ５´−ジメトキシトリチル−Ｎ4 −（４−ｔｅｒｔ−ブ
チルフェノキシアセチル）−２´−デオキシシチジン−
３´−イル−シアノエチルホスホロジイソプロピルアミ
ダイトの加水分解物から５´−ジメトキシトリチル−Ｎ
4 −（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシアセチル）−２
´−デオキシシチジンの製造 ５´−ジメトキシトリチル−Ｎ4 −（４−ｔｅｒｔ−ブ
チルフェノキシアセチル）−２´−デオキシシチジン−
３´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナートの加水分
解物からの５´−ジメトキシトリチル−Ｎ4 −（４−ｔ
ｅｒｔ−ブチルフェノキシアセチル）−２´−デオキシ
シチジン２００mgを含むアセトニトリル溶液４mlを、Ｋ
Ｆの０．２Ｍメタノール溶液４０mlに加えた。脱ホスフ
ィチル化(dephosphitylation) を２０〜２５℃で４時間
行なった。この反応混合物にピリジン１ml、次いで硫黄
５０mg加えた。反応混合物を２０〜２５℃で６０分撹拌
し、濾過し、氷水１００mlに加えた。得られた乳濁液を
酢酸エチル３０mlで三回抽出した。有機相を併せ、Ｎａ
Ｃｌ飽和水溶液５０mlで抽出し、無水硫酸ナトリウム２
ｇで乾燥した。塩を濾別して濾液を減圧下に濃縮乾固し
た。この固形物を酢酸エチル１０mlにとり、この溶液を
ｎ−ヘキサン３００mlにゆっくりと加えた。生成物は白
色の無定形沈澱として析出した。この沈殿物を濾過によ
り捕集し、ｎ−ペンタン５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／Ｋ
ＯＨ上で２４時間真空乾燥して、５´−ジメトキシトリ
チル−Ｎ4 −（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシアセチ
ル）−２´−デオキシシチジン１１２．８mg（理論量の
７２．１％）を得た。
チルフェノキシアセチル）−２´−デオキシシチジン−
３´−イル−シアノエチルホスホロジイソプロピルアミ
ダイトの加水分解物から５´−ジメトキシトリチル−Ｎ
4 −（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシアセチル）−２
´−デオキシシチジンの製造 ５´−ジメトキシトリチル−Ｎ4 −（４−ｔｅｒｔ−ブ
チルフェノキシアセチル）−２´−デオキシシチジン−
３´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナートの加水分
解物からの５´−ジメトキシトリチル−Ｎ4 −（４−ｔ
ｅｒｔ−ブチルフェノキシアセチル）−２´−デオキシ
シチジン２００mgを含むアセトニトリル溶液４mlを、Ｋ
Ｆの０．２Ｍメタノール溶液４０mlに加えた。脱ホスフ
ィチル化(dephosphitylation) を２０〜２５℃で４時間
行なった。この反応混合物にピリジン１ml、次いで硫黄
５０mg加えた。反応混合物を２０〜２５℃で６０分撹拌
し、濾過し、氷水１００mlに加えた。得られた乳濁液を
酢酸エチル３０mlで三回抽出した。有機相を併せ、Ｎａ
Ｃｌ飽和水溶液５０mlで抽出し、無水硫酸ナトリウム２
ｇで乾燥した。塩を濾別して濾液を減圧下に濃縮乾固し
た。この固形物を酢酸エチル１０mlにとり、この溶液を
ｎ−ヘキサン３００mlにゆっくりと加えた。生成物は白
色の無定形沈澱として析出した。この沈殿物を濾過によ
り捕集し、ｎ−ペンタン５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／Ｋ
ＯＨ上で２４時間真空乾燥して、５´−ジメトキシトリ
チル−Ｎ4 −（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェノキシアセチ
ル）−２´−デオキシシチジン１１２．８mg（理論量の
７２．１％）を得た。
【００７５】実施例１３： イミダゾールによるエステル交換、抑止剤はＩ2 ／水、
クエン酸緩衝液による後処理：オリゴヌクレオチド合成
反応器の排溶液から５´−ジメトキシトリチル−３´−
（３−Ｎ−トリフルオロアセチルアミノプロピル）−２
´−デオキシウリジンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応容器中に形成された５´−ジメ
トキシトリチル−３´（３−Ｎ−トリフルオロアセチル
アミノプロピル）−２´−デオキシウリジン−３´−イ
ル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナート１２０mgを含む排
溶液５mlを、メタノール５０ml当りイミダゾール１ｇを
含む溶液８０mlに加えた。反応を２０〜２５℃で３日間
行い、水８mlで希釈した。次いで、この反応溶液に、ヨ
ウ素３０ｇ、水２０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒ
ドロフラン７５０mlよりなる溶液を、褐色のヨウ素の色
が少なくとも５分間残っているような量まで加えた。反
応混合物を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた黄色の固
体をｐＨ３〜４の緩衝液５０mlと酢酸エチル４０mlより
なる乳濁液にとった。緩衝液は、水１リットル当りＮａ
ＯＨ２４ｇ、クエン酸１１７ｇ及び塩化ナトリウム３５
ｇからなる。イミダゾールを含む水相を分離し、有機相
を緩衝溶液５０mlで二回抽出した。次いで、有機相を炭
酸水素ナトリウム飽和水溶液、塩化ナトリウム飽和水溶
液で順次抽出した。有機相を脱水硫酸ナトリウム２ｇで
乾燥した。塩を濾別し、濾液を濃縮した。得られた固体
を酢酸エチル５〜１０mlにとり、この溶液をｎ−ペンタ
ン２５０mlにゆっくりと加えた。生成物は白色の無定形
沈澱として析出した。この沈殿物を濾過により捕集し、
ｎ−ペンタン５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で２
４時間真空乾燥して５´−ジメトキシトリチル−３´−
（３−Ｎ−トリフルオロアセチルアミノプロピル）−２
´−デオキシウリジン８０mg（理論量の８６％）を得
た。
クエン酸緩衝液による後処理：オリゴヌクレオチド合成
反応器の排溶液から５´−ジメトキシトリチル−３´−
（３−Ｎ−トリフルオロアセチルアミノプロピル）−２
´−デオキシウリジンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応容器中に形成された５´−ジメ
トキシトリチル−３´（３−Ｎ−トリフルオロアセチル
アミノプロピル）−２´−デオキシウリジン−３´−イ
ル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナート１２０mgを含む排
溶液５mlを、メタノール５０ml当りイミダゾール１ｇを
含む溶液８０mlに加えた。反応を２０〜２５℃で３日間
行い、水８mlで希釈した。次いで、この反応溶液に、ヨ
ウ素３０ｇ、水２０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒ
ドロフラン７５０mlよりなる溶液を、褐色のヨウ素の色
が少なくとも５分間残っているような量まで加えた。反
応混合物を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた黄色の固
体をｐＨ３〜４の緩衝液５０mlと酢酸エチル４０mlより
なる乳濁液にとった。緩衝液は、水１リットル当りＮａ
ＯＨ２４ｇ、クエン酸１１７ｇ及び塩化ナトリウム３５
ｇからなる。イミダゾールを含む水相を分離し、有機相
を緩衝溶液５０mlで二回抽出した。次いで、有機相を炭
酸水素ナトリウム飽和水溶液、塩化ナトリウム飽和水溶
液で順次抽出した。有機相を脱水硫酸ナトリウム２ｇで
乾燥した。塩を濾別し、濾液を濃縮した。得られた固体
を酢酸エチル５〜１０mlにとり、この溶液をｎ−ペンタ
ン２５０mlにゆっくりと加えた。生成物は白色の無定形
沈澱として析出した。この沈殿物を濾過により捕集し、
ｎ−ペンタン５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で２
４時間真空乾燥して５´−ジメトキシトリチル−３´−
（３−Ｎ−トリフルオロアセチルアミノプロピル）−２
´−デオキシウリジン８０mg（理論量の８６％）を得
た。
【００７６】1H-NMR(CDCl3,基準=TMS, d[ppm]): 7.45-
6.9(m, 9H, DMTr); 6.73(2m, 4H, DMTr); 6.48(t, 1H,
1'); 4.56(m, 1H, 3'); 4.04(m, 1H, 4'); 3.7(s, 6H,
DMTr);3.5-3.4(2m); 3.35-3.25(2m, 2H, 5'); 2.97(s,
2H, NH2); 2.47-2.37(m, 1H,2'); 2.35-2.2(m, 1H,
2'); 1.82(m, 1H); 1.6(m, 1H); 1.45-1.15(m, 4H, ア
ミノプロピル).
6.9(m, 9H, DMTr); 6.73(2m, 4H, DMTr); 6.48(t, 1H,
1'); 4.56(m, 1H, 3'); 4.04(m, 1H, 4'); 3.7(s, 6H,
DMTr);3.5-3.4(2m); 3.35-3.25(2m, 2H, 5'); 2.97(s,
2H, NH2); 2.47-2.37(m, 1H,2'); 2.35-2.2(m, 1H,
2'); 1.82(m, 1H); 1.6(m, 1H); 1.45-1.15(m, 4H, ア
ミノプロピル).
【００７７】実施例１４： オリゴヌクレオチド合成反応器の排溶液から５´−ジメ
トキシトリチル−３´−（プロピン−１−イル）−２´
−デオキシウリジンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に形成された５´−ジメト
キシトリチル−３´−（プロピン−１−イル）−２´−
デオキシウリジン−３´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホ
スホナート２５０mgを含む排溶液５mlを、メタノール５
０ml当りイミダゾール１ｇを含む溶液６７mlに加えた。
反応を２０〜２５℃で３日間行い、反応混合物を水８ml
で希釈した。次いで、この反応混合物に、ヨウ素３０
ｇ、水２０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒドロフラ
ン７５０mlよりなる溶液を、褐色のヨウ素の色が少なく
とも５分間残っているような量まで加えた。反応混合物
を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた黄色の固体をｐＨ
３〜４の緩衝液５０mlと酢酸エチル４０mlよりなる乳濁
液にとった。緩衝液は、水１リットル当りＮａＯＨ２４
ｇ、クエン酸１１７ｇ及び塩化ナトリウム３５ｇからな
る。イミダゾールを含む水相を分離し、有機相を緩衝溶
液５０mlで二回抽出した。次いで、有機相を炭酸水素ナ
トリウム飽和水溶液、塩化ナトリウム飽和水溶液で順次
抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウム２ｇで乾燥し
た。塩を濾別し、濾液を濃縮した。得られた固体を酢酸
エチル５〜１０mlにとり、この溶液をｎ−ペンタン２５
０mlにゆっくりと加えた。生成物は白色の無定形沈澱と
して析出した。この沈殿物を濾過により捕集し、ｎ−ペ
ンタン５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で２４時間
真空乾燥して５´−ジメトキシトリチル−３´−（プロ
ピン−１−イル）−２´−デオキシウリジン１２５mg
（理論量の６８％）を得た。
トキシトリチル−３´−（プロピン−１−イル）−２´
−デオキシウリジンの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に形成された５´−ジメト
キシトリチル−３´−（プロピン−１−イル）−２´−
デオキシウリジン−３´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホ
スホナート２５０mgを含む排溶液５mlを、メタノール５
０ml当りイミダゾール１ｇを含む溶液６７mlに加えた。
反応を２０〜２５℃で３日間行い、反応混合物を水８ml
で希釈した。次いで、この反応混合物に、ヨウ素３０
ｇ、水２０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒドロフラ
ン７５０mlよりなる溶液を、褐色のヨウ素の色が少なく
とも５分間残っているような量まで加えた。反応混合物
を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた黄色の固体をｐＨ
３〜４の緩衝液５０mlと酢酸エチル４０mlよりなる乳濁
液にとった。緩衝液は、水１リットル当りＮａＯＨ２４
ｇ、クエン酸１１７ｇ及び塩化ナトリウム３５ｇからな
る。イミダゾールを含む水相を分離し、有機相を緩衝溶
液５０mlで二回抽出した。次いで、有機相を炭酸水素ナ
トリウム飽和水溶液、塩化ナトリウム飽和水溶液で順次
抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウム２ｇで乾燥し
た。塩を濾別し、濾液を濃縮した。得られた固体を酢酸
エチル５〜１０mlにとり、この溶液をｎ−ペンタン２５
０mlにゆっくりと加えた。生成物は白色の無定形沈澱と
して析出した。この沈殿物を濾過により捕集し、ｎ−ペ
ンタン５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で２４時間
真空乾燥して５´−ジメトキシトリチル−３´−（プロ
ピン−１−イル）−２´−デオキシウリジン１２５mg
（理論量の６８％）を得た。
【００７８】1H-NMR(CDCl3, 基準=TMS, d[ppm]): 7.95
(s, 1H, NH); 7.4-7.15(10H, DMTr);6.78(2s, 4H, DMT
r); 6.24(t, 1H, 1'); 4.5(m, 3'); 4.06(m, 4'); 3.73
(s, 6H, DMTr); 3.28(m, 2H, 5'); 2.43(m, 1H, 2');
2.22(m, 1H, 2'); 1.61(s, 3H,プロピルのCH3 ).
(s, 1H, NH); 7.4-7.15(10H, DMTr);6.78(2s, 4H, DMT
r); 6.24(t, 1H, 1'); 4.5(m, 3'); 4.06(m, 4'); 3.73
(s, 6H, DMTr); 3.28(m, 2H, 5'); 2.43(m, 1H, 2');
2.22(m, 1H, 2'); 1.61(s, 3H,プロピルのCH3 ).
【００７９】実施例１５： オリゴヌクレオチド合成反応器の排溶液から５´−ジメ
トキシトリチル−３´−（３−トリフルオロアセチルア
ミノプロピン−１−イル）−２´−デオキシウリジンの
製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に形成された５´−ジメト
キシトリチル−３´−（３−トリフルオロアセチルアミ
ノプロピン−１−イル）−２´−デオキシウリジン−３
´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナート２５０mgを
含む排溶液５mlを、メタノール５０ml当りイミダゾール
１ｇを含む溶液７８mlに加えた。反応を２０〜２５℃で
３日間行い、反応混合物を水７．８mlで希釈した。次い
で、この反応混合物に、ヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリ
ジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０mlよりなる
溶液を、褐色のヨウ素の色が少なくとも５分間残ってい
るような量まで加えた。反応混合物を減圧下に蒸留して
濃縮し、得られた黄色の固体をｐＨ３〜４の緩衝液５０
mlと酢酸エチル４０mlよりなる乳濁液にとった。緩衝液
は、水１リットル当りＮａＯＨ２４ｇ、クエン酸１１７
ｇ及び塩化ナトリウム３５ｇからなる。イミダゾールを
含む水相を分離し、有機相を緩衝溶液５０mlで二回抽出
した。次いで、有機相を炭酸水素ナトリウム飽和水溶
液、塩化ナトリウム飽和水溶液５０mlで順次抽出した。
有機相を無水硫酸ナトリウム２ｇで乾燥した。塩を濾別
し、濾液を濃縮した。得られた固体を酢酸エチル５〜１
０mlにとり、この溶液をｎ−ペンタン２５０mlにゆっく
りと加えた。生成物は白色の無定形沈澱として析出し
た。この沈殿物を濾過により捕集し、ｎ−ペンタン５０
mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で２４時間真空乾燥し
て５´−ジメトキシトリチル−３´−（３−トリフルオ
ロアセチルアミノプロピン−１−イル）−２´−デオキ
シウリジン１１３mg（理論量の７３％）を得た。
トキシトリチル−３´−（３−トリフルオロアセチルア
ミノプロピン−１−イル）−２´−デオキシウリジンの
製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に形成された５´−ジメト
キシトリチル−３´−（３−トリフルオロアセチルアミ
ノプロピン−１−イル）−２´−デオキシウリジン−３
´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナート２５０mgを
含む排溶液５mlを、メタノール５０ml当りイミダゾール
１ｇを含む溶液７８mlに加えた。反応を２０〜２５℃で
３日間行い、反応混合物を水７．８mlで希釈した。次い
で、この反応混合物に、ヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリ
ジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０mlよりなる
溶液を、褐色のヨウ素の色が少なくとも５分間残ってい
るような量まで加えた。反応混合物を減圧下に蒸留して
濃縮し、得られた黄色の固体をｐＨ３〜４の緩衝液５０
mlと酢酸エチル４０mlよりなる乳濁液にとった。緩衝液
は、水１リットル当りＮａＯＨ２４ｇ、クエン酸１１７
ｇ及び塩化ナトリウム３５ｇからなる。イミダゾールを
含む水相を分離し、有機相を緩衝溶液５０mlで二回抽出
した。次いで、有機相を炭酸水素ナトリウム飽和水溶
液、塩化ナトリウム飽和水溶液５０mlで順次抽出した。
有機相を無水硫酸ナトリウム２ｇで乾燥した。塩を濾別
し、濾液を濃縮した。得られた固体を酢酸エチル５〜１
０mlにとり、この溶液をｎ−ペンタン２５０mlにゆっく
りと加えた。生成物は白色の無定形沈澱として析出し
た。この沈殿物を濾過により捕集し、ｎ−ペンタン５０
mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で２４時間真空乾燥し
て５´−ジメトキシトリチル−３´−（３−トリフルオ
ロアセチルアミノプロピン−１−イル）−２´−デオキ
シウリジン１１３mg（理論量の７３％）を得た。
【００８０】1H-NMR(CDCl3, 基準=TMS, d[ppm]): 8.15
(s, 1H, NH); 7.4-7.15(10H, DMTr,H6); 6.26(t, 1H,
1'); 4.53(m, 1H, 3'); 3.97(m, 2H, 5'); 3.73(s, 6H,
DMTr); 3.3(m, 2H, プロピルのCH2 ); 2.48(m, 1H,
2'); 2.25(m, 1H, 2').
(s, 1H, NH); 7.4-7.15(10H, DMTr,H6); 6.26(t, 1H,
1'); 4.53(m, 1H, 3'); 3.97(m, 2H, 5'); 3.73(s, 6H,
DMTr); 3.3(m, 2H, プロピルのCH2 ); 2.48(m, 1H,
2'); 2.25(m, 1H, 2').
【００８１】実施例１６： オリゴヌクレオチド合成反応器の排溶液からＮ−（５´
−ジメトキシトリチル−３´デオキシチミジン−３´−
イル）−Ｎ−プロピル−（３´−デオキシチミジン−５
´−イル）アセトアミドの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に形成されたＮ−（５´−
ジメトキシトリチル−３´−デオキシチミジン−３´−
イル）−Ｎ−プロピル−（３´−デオキシチミジン−３
´−シアノエチル−Ｈ−ホスホニル−５´−イル）アセ
トアミド２００mgを含む排溶液５mlを、メタノール５０
ml当りイミダゾール１ｇを含む溶液７８mlに加えた。反
応を２０〜２５℃で７日間行い、反応混合物を水２０ml
で希釈した。次いで、この反応混合物に、ヨウ素３０
ｇ、水２０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒドロフラ
ン７５０mlよりなる溶液を、褐色のヨウ素の色が少なく
とも５分間残っているような量まで加えた。反応混合物
を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた黄色の固体をｐＨ
３〜４の緩衝液５０mlと酢酸エチル４０mlよりなる乳濁
液にとった。緩衝液は、水１リットル当りＮａＯＨ２４
ｇ、クエン酸１１７ｇ及び塩化ナトリウム３５ｇよりな
る。イミダゾールを含む水相を分離し、有機相を緩衝溶
液５０mlで二回抽出した。次いで、有機相を炭酸水素ナ
トリウム飽和水溶液、塩化ナトリウム飽和水溶液５０ml
で順次抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウム２ｇで乾
燥した。塩を濾別し、濾液を濃縮した。得られた固体を
酢酸エチル５〜１０mlにとり、この溶液をｎ−ペンタン
６００mlにゆっくりと加えた。生成物は白色の無定形沈
澱として析出した。この沈殿物を濾取し、ｎ−ペンタン
５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で２４時間真空乾
燥してＮ−（５´−ジメトキシトリチル−３´−デオキ
シチミジン−３´−イル）−Ｎ−プロピル−（３´−デ
オキシチミジン−５´−イル）アセトアミド１０７mg
（理論量の６６％）を得た。
−ジメトキシトリチル−３´デオキシチミジン−３´−
イル）−Ｎ−プロピル−（３´−デオキシチミジン−５
´−イル）アセトアミドの製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器中に形成されたＮ−（５´−
ジメトキシトリチル−３´−デオキシチミジン−３´−
イル）−Ｎ−プロピル−（３´−デオキシチミジン−３
´−シアノエチル−Ｈ−ホスホニル−５´−イル）アセ
トアミド２００mgを含む排溶液５mlを、メタノール５０
ml当りイミダゾール１ｇを含む溶液７８mlに加えた。反
応を２０〜２５℃で７日間行い、反応混合物を水２０ml
で希釈した。次いで、この反応混合物に、ヨウ素３０
ｇ、水２０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒドロフラ
ン７５０mlよりなる溶液を、褐色のヨウ素の色が少なく
とも５分間残っているような量まで加えた。反応混合物
を減圧下に蒸留して濃縮し、得られた黄色の固体をｐＨ
３〜４の緩衝液５０mlと酢酸エチル４０mlよりなる乳濁
液にとった。緩衝液は、水１リットル当りＮａＯＨ２４
ｇ、クエン酸１１７ｇ及び塩化ナトリウム３５ｇよりな
る。イミダゾールを含む水相を分離し、有機相を緩衝溶
液５０mlで二回抽出した。次いで、有機相を炭酸水素ナ
トリウム飽和水溶液、塩化ナトリウム飽和水溶液５０ml
で順次抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウム２ｇで乾
燥した。塩を濾別し、濾液を濃縮した。得られた固体を
酢酸エチル５〜１０mlにとり、この溶液をｎ−ペンタン
６００mlにゆっくりと加えた。生成物は白色の無定形沈
澱として析出した。この沈殿物を濾取し、ｎ−ペンタン
５０mlで洗浄し、Ｐ4 Ｏ10／ＫＯＨ上で２４時間真空乾
燥してＮ−（５´−ジメトキシトリチル−３´−デオキ
シチミジン−３´−イル）−Ｎ−プロピル−（３´−デ
オキシチミジン−５´−イル）アセトアミド１０７mg
（理論量の６６％）を得た。
【００８２】1H-NMR(CDCl3, 基準=TMS, d[ppm]): 7.65
(s, 1H, H6); 7.4-7.15(m, 9H, DMTr); 7.1(s, 1H, H
6); 6.77(2s, 4H, DMTr); 6.53(t, 1H, 1'); 6.13(t, 1
H, 1');4.28(m, 1H, 3'); 4.1(m, 2H, 3', 4'); 3.72
(s, 6H, DMTr, m, 1H); 3.52(m,1H, 4'); 3.5(d, 1H);
3.15-2.85(m, 3H, 5', アセトアミドのCH2 ); 2.56(m,1
H, 2'); 2.45-2.25(m, 3H, 2', プロピルのCH2 ); 2.2-
2.1(2H, 2'); 1.83(s, 3H, CH3 5); 1.45(s, 3H, CH3 5);
1.22(m, 2H, プロピルのCH2); 0.73(t, 3H, プロピル
のCH2).
(s, 1H, H6); 7.4-7.15(m, 9H, DMTr); 7.1(s, 1H, H
6); 6.77(2s, 4H, DMTr); 6.53(t, 1H, 1'); 6.13(t, 1
H, 1');4.28(m, 1H, 3'); 4.1(m, 2H, 3', 4'); 3.72
(s, 6H, DMTr, m, 1H); 3.52(m,1H, 4'); 3.5(d, 1H);
3.15-2.85(m, 3H, 5', アセトアミドのCH2 ); 2.56(m,1
H, 2'); 2.45-2.25(m, 3H, 2', プロピルのCH2 ); 2.2-
2.1(2H, 2'); 1.83(s, 3H, CH3 5); 1.45(s, 3H, CH3 5);
1.22(m, 2H, プロピルのCH2); 0.73(t, 3H, プロピル
のCH2).
【００８３】実施例１７： オリゴヌクレオチド合成反応器の排溶液から５´−ジメ
トキシトリチル−２´−プロピル−５−メチルウリジン
の製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器に形成された５´−ジメトキ
シトリチル−２´−プロピル−５−メチルウリジン−３
´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナート４００mgを
含む排溶液５mlを、メタノール５０ml当りイミダゾール
１ｇを含む溶液１００mlに加えた。反応を２０〜２５℃
で７日間行い、反応混合物を水２０mlで希釈した。次い
で、この反応混合物に、ヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリ
ジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０mlよりなる
溶液を、褐色のヨウ素の色が少なくとも５分間残ってい
るような量まで加えた。反応混合物を減圧下に蒸留して
濃縮し、得られた黄色の固体をｐＨ３〜４の緩衝液５０
mlと酢酸エチル４０mlよりなる乳濁液にとった。緩衝液
は、水１リットル当りＮａＯＨ２４ｇ、クエン酸１１７
ｇ及び塩化ナトリウム３５ｇよりなる。イミダゾールを
含む水相を分離し、有機相を緩衝溶液５０mlで二回抽出
した。次いで、有機相を炭酸水素ナトリウム飽和水溶
液、塩化ナトリウム飽和水溶液５０mlで順次抽出した。
有機相を無水硫酸ナトリウム２ｇで乾燥した。塩を濾別
し、濾液を濃縮乾固した。得られた固体をＰ4 Ｏ10／Ｋ
ＯＨ上で２４時間真空乾燥して、５´−ジメトキシトリ
チル−２´−プロピル−５−メチルウリジン２５８mg
（理論量の８６％）を黄色油状物として得た。
トキシトリチル−２´−プロピル−５−メチルウリジン
の製造 ＤＮＡ合成の過程で反応器に形成された５´−ジメトキ
シトリチル−２´−プロピル−５−メチルウリジン−３
´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナート４００mgを
含む排溶液５mlを、メタノール５０ml当りイミダゾール
１ｇを含む溶液１００mlに加えた。反応を２０〜２５℃
で７日間行い、反応混合物を水２０mlで希釈した。次い
で、この反応混合物に、ヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリ
ジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０mlよりなる
溶液を、褐色のヨウ素の色が少なくとも５分間残ってい
るような量まで加えた。反応混合物を減圧下に蒸留して
濃縮し、得られた黄色の固体をｐＨ３〜４の緩衝液５０
mlと酢酸エチル４０mlよりなる乳濁液にとった。緩衝液
は、水１リットル当りＮａＯＨ２４ｇ、クエン酸１１７
ｇ及び塩化ナトリウム３５ｇよりなる。イミダゾールを
含む水相を分離し、有機相を緩衝溶液５０mlで二回抽出
した。次いで、有機相を炭酸水素ナトリウム飽和水溶
液、塩化ナトリウム飽和水溶液５０mlで順次抽出した。
有機相を無水硫酸ナトリウム２ｇで乾燥した。塩を濾別
し、濾液を濃縮乾固した。得られた固体をＰ4 Ｏ10／Ｋ
ＯＨ上で２４時間真空乾燥して、５´−ジメトキシトリ
チル−２´−プロピル−５−メチルウリジン２５８mg
（理論量の８６％）を黄色油状物として得た。
【００８３】1H-NMR(CDCl3, 基準=TMS, d[PPM]): 8.45
(s, 1H, NH); 7.57(s, 1H, H6); 7.45-7.15(m, 9H, DMT
r); 6.75(2s, 4H, DMTr); 5.9(d, 1H, 1'); 4.38(m, 1
H, 3'); 4.0(m, 1H, 4'); 3.95(m, 1H, 2'); 3.72(s, 6
H, DMTr); 3.8-3.4(m, 2H,プロピル); 3.6-3.3(4m, 2H,
5'); 1.56(m, 2H, プロピル); 1.88(t, 3H,プロピル).
(s, 1H, NH); 7.57(s, 1H, H6); 7.45-7.15(m, 9H, DMT
r); 6.75(2s, 4H, DMTr); 5.9(d, 1H, 1'); 4.38(m, 1
H, 3'); 4.0(m, 1H, 4'); 3.95(m, 1H, 2'); 3.72(s, 6
H, DMTr); 3.8-3.4(m, 2H,プロピル); 3.6-3.3(4m, 2H,
5'); 1.56(m, 2H, プロピル); 1.88(t, 3H,プロピル).
【００８４】実施例１８： アクセプターアルコールとしてメタノールを用いたポリ
マー上での亜リン酸のエステル交換反応 チミジン−５´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナー
トで誘導体化し、３６mmol／ｇの密度にヌクレオシドを
結合させた調整多孔質ガラス（ＣＰＧ）６８５mgを、Ｎ
−メチルモルホリンの２％メタノール溶液１０mlと反応
させた。ヌクレオシドは、スクシニル基によりＣＰＧと
３´−ＯＨ基に共有結合的に結合した。１時間後、固相
１３７mgのサンプルを反応混合物から除去した。担体を
アセトニトリル２mlで四回洗浄し、ヨウ素３０ｇ、水２
０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０
mlと１時間反応させた。次いで、固相をアセトニトリル
２mlで十回、次にジエチルエーテル２mlで十回洗浄し
た。担体を乾燥し、５５〜６０℃でアンモニアの濃水溶
液で処理した。もはやヌクレオシドの存在しない固体担
体を濾過して除去した。濾液を最初に凍結乾燥してから
酢酸トリメチルアンモニウムの０．１M 溶液（ｐＨ７）
にとり、ＨＰＬＣで分析した。５´−チミジンモノホス
ファート、チミジン及びチミジン−５´−メチルホスフ
ァートの混合物が検出された。チミジン−５´−ホスフ
ァートは、抽出物からヨウ素酸化及びアンモニア分解に
よって生成した。チミジン−５´−メチルホスファート
は、チミジン−５´−イル−メチル−Ｈ−ホスホナート
の脱ホスフィチル化の中間体から、酸化及び加水分解処
理の過程で生成した。チミジンは、サクシニル基−結合
基の鹸化後、ポリマーと結合したチミジンの脱ホスフィ
チル化の生成物から生成した。残りの担体に上記の酸化
及び加アンモニア分解処理を３６時間行った。チミジン
のみを担体の濾液から得た。
マー上での亜リン酸のエステル交換反応 チミジン−５´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナー
トで誘導体化し、３６mmol／ｇの密度にヌクレオシドを
結合させた調整多孔質ガラス（ＣＰＧ）６８５mgを、Ｎ
−メチルモルホリンの２％メタノール溶液１０mlと反応
させた。ヌクレオシドは、スクシニル基によりＣＰＧと
３´−ＯＨ基に共有結合的に結合した。１時間後、固相
１３７mgのサンプルを反応混合物から除去した。担体を
アセトニトリル２mlで四回洗浄し、ヨウ素３０ｇ、水２
０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０
mlと１時間反応させた。次いで、固相をアセトニトリル
２mlで十回、次にジエチルエーテル２mlで十回洗浄し
た。担体を乾燥し、５５〜６０℃でアンモニアの濃水溶
液で処理した。もはやヌクレオシドの存在しない固体担
体を濾過して除去した。濾液を最初に凍結乾燥してから
酢酸トリメチルアンモニウムの０．１M 溶液（ｐＨ７）
にとり、ＨＰＬＣで分析した。５´−チミジンモノホス
ファート、チミジン及びチミジン−５´−メチルホスフ
ァートの混合物が検出された。チミジン−５´−ホスフ
ァートは、抽出物からヨウ素酸化及びアンモニア分解に
よって生成した。チミジン−５´−メチルホスファート
は、チミジン−５´−イル−メチル−Ｈ−ホスホナート
の脱ホスフィチル化の中間体から、酸化及び加水分解処
理の過程で生成した。チミジンは、サクシニル基−結合
基の鹸化後、ポリマーと結合したチミジンの脱ホスフィ
チル化の生成物から生成した。残りの担体に上記の酸化
及び加アンモニア分解処理を３６時間行った。チミジン
のみを担体の濾液から得た。
【００８５】実施例１９： アクセプターアルコールとしてシアノエタノールを用い
るポリマー上での亜リン酸のエステル交換反応 チミジン−５´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナー
トで誘導体化され、３６mmol／ｇの密度にヌクレオシド
を結合させた調整多孔質ガラス（ＣＰＧ）１３９mgを、
Ｎ−メチルモルホリンの１０％シアノエタノール溶液１
０mlと反応させた。ヌクレオシドは、スクシニル基によ
りＣＰＧと３´−ＯＨ基に共有結合的に結合した。１０
０分後、担体をアセトニトリル２mlで四回洗浄し、ヨウ
素３０ｇ、水２０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒド
ロフラン７５０mlと１時間反応させた。次いで、固相を
アセトニトリル２mlで十回、次にジエチルエーテル２ml
で十回洗浄した。担体を乾燥し、５５〜６０℃で濃アン
モニア水溶液で処理した。もはやヌクレオシドの存在し
ない担体を濾別した。濾液を最初に凍結乾燥してから酢
酸トリメチルアンモニウムの０．１M 溶液（ｐＨ７）に
とり、ＨＰＬＣで分析した。５´−チミジンモノホスフ
ァートとチミヂジンの比が３：９７の混合物が検出され
た。チミジン−５´−ホスファートは、抽出物からヨウ
素酸化及び加アンモニア分解によって生成した。チミジ
ンは、サクシニル基−結合基の鹸化後、ポリマーと結合
したチミジンの脱ホスフィチル化の生成物から生成し
た。
るポリマー上での亜リン酸のエステル交換反応 チミジン−５´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナー
トで誘導体化され、３６mmol／ｇの密度にヌクレオシド
を結合させた調整多孔質ガラス（ＣＰＧ）１３９mgを、
Ｎ−メチルモルホリンの１０％シアノエタノール溶液１
０mlと反応させた。ヌクレオシドは、スクシニル基によ
りＣＰＧと３´−ＯＨ基に共有結合的に結合した。１０
０分後、担体をアセトニトリル２mlで四回洗浄し、ヨウ
素３０ｇ、水２０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒド
ロフラン７５０mlと１時間反応させた。次いで、固相を
アセトニトリル２mlで十回、次にジエチルエーテル２ml
で十回洗浄した。担体を乾燥し、５５〜６０℃で濃アン
モニア水溶液で処理した。もはやヌクレオシドの存在し
ない担体を濾別した。濾液を最初に凍結乾燥してから酢
酸トリメチルアンモニウムの０．１M 溶液（ｐＨ７）に
とり、ＨＰＬＣで分析した。５´−チミジンモノホスフ
ァートとチミヂジンの比が３：９７の混合物が検出され
た。チミジン−５´−ホスファートは、抽出物からヨウ
素酸化及び加アンモニア分解によって生成した。チミジ
ンは、サクシニル基−結合基の鹸化後、ポリマーと結合
したチミジンの脱ホスフィチル化の生成物から生成し
た。
【００８６】実施例２０： アクセプターアルコールとしてメタノールを用い、ジト
リフルオロ酢酸マグネシウム（Ｍｇ（ＯＴｆ）2 ）の存
在下、ポリマー上でのエステル交換反応 チミジン−５´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナー
トで誘導体化され、３６mmol／ｇの密度にヌクレオシド
を結合させた調整多孔質ガラス（ＣＰＧ）１３９mgを、
Ｎ−メチルイミダゾール：メタノール（１：９）にとっ
たＭｇ（ＯＴｆ）２の０．１M 溶液１０mlと反応させ
た。ヌクレオシドは、スクシニル基によりＣＰＧと３´
−ＯＨ基に共有結合的に結合された。３０分後、担体を
アセトニトリル２mlで四回洗浄し、ヨウ素３０ｇ、水２
０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０
mlと１時間反応させた。次いで、固相をアセトニトリル
２mlで十回、次にジエチルエーテル２mlで十回洗浄し
た。担体を乾燥し、５５〜６０℃で濃アンモニア水溶液
で処理した。もはやヌクレオシドの存在しない担体を濾
別した。濾液を最初に凍結乾燥してから酢酸トリメチル
アンモニウムの０．１M溶液（ｐＨ７）にとり、ＨＰＬ
Ｃで分析した。チミジン及びチミジン−５´−イル−メ
チルホスファートの混合物が検出された。チミジン−５
´−メチルホスファートは、ヨウ素酸化及び加水分解の
過程で、チミジン−５´−イル−メチル−Ｈ−ホスホナ
ートの脱ホスフィチル化の中間体から生成した。チミジ
ンは、スクシニル基−結合基の鹸化後、ポリマーと結合
したチミジンの脱ホスフィチル化の生成物から生成し
た。チミジンのチミジン−５´−イル−メチルホスファ
ートに対する比は９７：３であった。
リフルオロ酢酸マグネシウム（Ｍｇ（ＯＴｆ）2 ）の存
在下、ポリマー上でのエステル交換反応 チミジン−５´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナー
トで誘導体化され、３６mmol／ｇの密度にヌクレオシド
を結合させた調整多孔質ガラス（ＣＰＧ）１３９mgを、
Ｎ−メチルイミダゾール：メタノール（１：９）にとっ
たＭｇ（ＯＴｆ）２の０．１M 溶液１０mlと反応させ
た。ヌクレオシドは、スクシニル基によりＣＰＧと３´
−ＯＨ基に共有結合的に結合された。３０分後、担体を
アセトニトリル２mlで四回洗浄し、ヨウ素３０ｇ、水２
０ml、ピリジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０
mlと１時間反応させた。次いで、固相をアセトニトリル
２mlで十回、次にジエチルエーテル２mlで十回洗浄し
た。担体を乾燥し、５５〜６０℃で濃アンモニア水溶液
で処理した。もはやヌクレオシドの存在しない担体を濾
別した。濾液を最初に凍結乾燥してから酢酸トリメチル
アンモニウムの０．１M溶液（ｐＨ７）にとり、ＨＰＬ
Ｃで分析した。チミジン及びチミジン−５´−イル−メ
チルホスファートの混合物が検出された。チミジン−５
´−メチルホスファートは、ヨウ素酸化及び加水分解の
過程で、チミジン−５´−イル−メチル−Ｈ−ホスホナ
ートの脱ホスフィチル化の中間体から生成した。チミジ
ンは、スクシニル基−結合基の鹸化後、ポリマーと結合
したチミジンの脱ホスフィチル化の生成物から生成し
た。チミジンのチミジン−５´−イル−メチルホスファ
ートに対する比は９７：３であった。
【００８７】実施例２１： アクセプターアルコールとしてシアノエタノールを用
い、ＬｉＣｌの存在下、ポリマー上での亜リン酸のエス
テル交換反応 チミジン−５´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナー
トで誘導体化し、３６mmol／ｇの密度にヌクレオシドを
結合させた調整多孔質ガラス（ＣＰＧ）１３９mgを、Ｎ
−メチルモルホリン：シアノエタノール（１：９）にと
ったＬｉＣｌの０．１Ｍ溶液１０mlと反応させた。ヌク
レオシドは、スクシニル基によりＣＰＧと３´−ＯＨ基
に共有結合的に結合した。３０分後、担体をアセトニト
リル２mlで四回洗浄し、ヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリ
ジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０mlと１時間
反応させた。次いで、固相をアセトニトリル２mlで十
回、次にジエチルエーテル２mlで十回洗浄した。担体を
乾燥し、５５〜６０℃で濃アンモニア水溶液で処理し
た。もはやヌクレオシドの存在しない担体を濾別した。
濾液を最初に凍結乾燥してから酢酸トリメチルアンモニ
ウムの０．１M 溶液（ｐＨ７）にとり、ＨＰＬＣで分析
した。チミヂジン及びチミジン−５´−ホスファートの
混合物が検出された。チミジン−５´−ホスファート
は、ヨウ素酸化及び加アンモニア分解によって抽出物か
ら生成した。チミジンは、スクシニル基−結合基の鹸化
後、ポリマーと結合したチミジンの脱ホスフィチル化の
生成物から生成した。チミジンのチミジン−５´−ホス
ファートに対する比は９８：２であった。
い、ＬｉＣｌの存在下、ポリマー上での亜リン酸のエス
テル交換反応 チミジン−５´−イル−シアノエチル−Ｈ−ホスホナー
トで誘導体化し、３６mmol／ｇの密度にヌクレオシドを
結合させた調整多孔質ガラス（ＣＰＧ）１３９mgを、Ｎ
−メチルモルホリン：シアノエタノール（１：９）にと
ったＬｉＣｌの０．１Ｍ溶液１０mlと反応させた。ヌク
レオシドは、スクシニル基によりＣＰＧと３´−ＯＨ基
に共有結合的に結合した。３０分後、担体をアセトニト
リル２mlで四回洗浄し、ヨウ素３０ｇ、水２０ml、ピリ
ジン２００ml及びテトラヒドロフラン７５０mlと１時間
反応させた。次いで、固相をアセトニトリル２mlで十
回、次にジエチルエーテル２mlで十回洗浄した。担体を
乾燥し、５５〜６０℃で濃アンモニア水溶液で処理し
た。もはやヌクレオシドの存在しない担体を濾別した。
濾液を最初に凍結乾燥してから酢酸トリメチルアンモニ
ウムの０．１M 溶液（ｐＨ７）にとり、ＨＰＬＣで分析
した。チミヂジン及びチミジン−５´−ホスファートの
混合物が検出された。チミジン−５´−ホスファート
は、ヨウ素酸化及び加アンモニア分解によって抽出物か
ら生成した。チミジンは、スクシニル基−結合基の鹸化
後、ポリマーと結合したチミジンの脱ホスフィチル化の
生成物から生成した。チミジンのチミジン−５´−ホス
ファートに対する比は９８：２であった。
Claims (36)
- 【請求項１】 天然若しくは合成のヌクレオシド、ヌク
レオシド類似体又は少なくとも二種のそのようなヌクレ
オシド及び／又はヌクレオシド類似体からのオリゴヌク
レオチド〔その塩基性分子は核酸塩基Ｂの非置換若しく
は置換した基及び式Ｒ1 −Ｏ−（式中、Ｒ1 は保護基で
ある）の保護された水酸基を含むか、又は水酸基の酸素
原子に直接結合するか若しくは固体担体に結合基を介し
て結合しており、その塩基性分子には、上記の基以外
に、式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）： 【化１】 で示される基が結合している〕をヌクレオシド単量体又
はオリゴヌクレオチドから製造する方法であって、不活
性有機溶媒の存在又は非存在下かつ４ないし１０のｐＫ
値を有する無機塩基又は有機窒素塩基の少なくとも触媒
量の存在下に、該ヌクレオシド又は該オリゴヌクレオチ
ドと、１ないし３０個の炭素原子を有する脂肪族、脂環
式、芳香−脂肪族又は芳香族アルコール、２ないし５０
個の炭素原子を有するポリオール又は重合体ポリオール
の過剰量とを反応させて、式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉ
ｂ）の基を−ＯＨ基に変換することを特徴とする方法。 - 【請求項２】 溶媒がエーテル類、ハロゲン化炭化水素
類、カルボキサミド類、ラクタム類、スルホキシド類、
スルホン類、芳香族炭化水素類、ニトリル類、脂肪族及
び脂環式炭化水素類よりなる群から選ばれる請求項１記
載の方法。 - 【請求項３】 溶媒がエーテル類、ハロゲン化炭化水素
類、ニトリル類、カルボキサミド類及びラクタム類より
なる群から選ばれる請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 溶媒がテトラヒドロフラン又はジオキサ
ンである請求項３記載の方法。 - 【請求項５】 溶媒がアセトニトリル、プロピオニトリ
ル、ベンゾニトリル及びフェニルアセトニトリルよりな
る群より選ばれる請求項２記載の方法。 - 【請求項６】 脂肪族、脂環式、芳香−脂肪族又は芳香
族アルコール、ポリオール又は重合体ポリオールが、式
（Ｉ）の基のモル当量当り少なくとも１００モル当量な
いし１０００モル当量までの過剰量で存在する請求項１
記載の方法。 - 【請求項７】 反応が温度範囲−２０℃ないし＋５５℃
で行なわれる請求項１記載の方法。 - 【請求項８】 反応が温度範囲−１５℃ないし３５℃で
行なわれる請求項７記載の方法。 - 【請求項９】 反応が室温で行なわれる請求項８記載の
方法。 - 【請求項１０】 アルコールが１ないし２０個の炭素原
子を有するアルカノールである請求項１記載の方法。 - 【請求項１１】 アルコールが１ないし１２個の炭素原
子を有するアルカノールである請求項１０記載の方法。 - 【請求項１２】 アルコールが１ないし６個の炭素原子
を有するアルカノールである請求項１１記載の方法。 - 【請求項１３】 アルコールがメタノール、エタノー
ル、ｎ−及びイソプロパノール、ｎ−、ｉｓｏ−及びｔ
ｅｒｔ−ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、エ
チレングリコール、ジエチレングリコールモノメチル及
びモノエチルエーテルよりなる群から選ばれる請求項１
０記載の方法。 - 【請求項１４】 アルコールが１ないし４個の炭素原子
を有するアルカノールである請求項１０記載の方法。 - 【請求項１５】 アルコールがメタノールである請求項
１４記載の方法。 - 【請求項１６】 アルコールが５ないし１２個の炭素原
子を有するシクロアルカノールである請求項１記載の方
法。 - 【請求項１７】 アルコールが５ないし８個の炭素原子
を有するシクロアルカノールである請求項１６記載の方
法。 - 【請求項１８】 アルコールがシクロペンタノール、シ
クロヘキサノール、メチルシクロヘキサノール、シクロ
ヘプタノール及びシクロオクタノールよりなる群から選
ばれる請求項１６記載の方法。 - 【請求項１９】 アルコールが７ないし３０個の炭素原
子を有する芳香−脂肪族アルコールである請求項１記載
の方法。 - 【請求項２０】 アルコールが７ないし２０個の炭素原
子を有する芳香−脂肪族アルコールである請求項１９記
載の方法。 - 【請求項２１】 アルコールが非置換又はアルキル若し
くはアルコキシ置換の、ベンジルアルコール及びβ−フ
ェニルエタノールよりなる群から選ばれる請求項１９記
載の方法。 - 【請求項２２】 アルコールが６ないし３０個の炭素原
子を有する芳香族アルコールである請求項１記載の方
法。 - 【請求項２３】 アルコールが６ないし１２個の炭素原
子を有する芳香族アルコールである請求項１９記載の方
法。 - 【請求項２４】 アルコールがフェノール、ナフトール
あるいは非置換及びアルキル−若しくはアルコキシ置換
の、フェノール又はナフトールよりなる群から選ばれる
請求項２２記載の方法。 - 【請求項２５】 ポリオールが２ないし２０個の炭素原
子を有する請求項１記載の方法。 - 【請求項２６】 ポリオールがエチレングリコール、プ
ロピレングリコール、ブタンジオール、ペンタンジオー
ル、ヘキサンジオール、シクロヘキサンジオール、ジヒ
ドロメチルシクロヘキサン、ジエチレングリコール、ト
リエチレングリコール、ポリエチレングリコール、トリ
メチロールプロパン、ペンタエリトリトール、ジペンタ
エリトリトール、グリセロール及び糖類よりなる群から
選ばれる請求項２５記載の方法。 - 【請求項２７】 重合体ポリオールがポリビニルアルコ
ール、多糖類並びにヒドロキシアルキルポリアクリラー
ト類及びヒドロキシアルキルポリメタクリラート類より
なる群から選ばれる請求項１記載の方法。 - 【請求項２８】 無機塩基が塩基性の、金属酸化物、重
金属酸化物及び水酸化物よりなる群から選ばれる請求項
１記載の方法。 - 【請求項２９】 無機塩基が塩基性アルミナである請求
項２８記載の方法。 - 【請求項３０】 無機塩基が塩基性二酸化ケイ素である
請求項２８記載の方法。 - 【請求項３１】 塩基の触媒量が０．０１ないし２０％
モルの範囲である請求項１記載の方法。 - 【請求項３２】 有機窒素塩基が芳香族アミン、芳香族
Ｎ−複素環及びＮ−アルキルモルホリンよりなる群から
選ばれる請求項１記載の方法。 - 【請求項３３】 塩基がイミダゾール、ピリジン、ポリ
ビニルピリジン、Ｎ−メチルモルホリン、アニリン及び
ｏ−ジアミノベンゼンよりなる群から選ばれる請求項３
２記載の方法。 - 【請求項３４】 ヌクレオシド又はオリゴヌクレオチド
が固体担体に結合されている請求項１記載の方法。 - 【請求項３５】 反応を求核的に触媒する無機塩基の触
媒量が、更に用いられる請求項１記載の方法。 - 【請求項３６】 ルイス酸の触媒量が更に用いられる請
求項１記載の方法。
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|---|---|---|---|
| CH906/92-3 | 1992-03-23 | ||
| CH90692 | 1992-03-23 |
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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