JPH0678758A - カルス細胞の誘導およびタキサン類の製造 - Google Patents
カルス細胞の誘導およびタキサン類の製造Info
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- JPH0678758A JPH0678758A JP5080511A JP8051193A JPH0678758A JP H0678758 A JPH0678758 A JP H0678758A JP 5080511 A JP5080511 A JP 5080511A JP 8051193 A JP8051193 A JP 8051193A JP H0678758 A JPH0678758 A JP H0678758A
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- C12N5/04—Plant cells or tissues
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 外植片組織からのタキソールなどのタキサン
類を生産しうるカルス細胞の誘導方法、誘導された該カ
ルス細胞、およびタキサン類の懸濁細胞培養におけるこ
れらの細胞の使用方法を提供すること。 【構成】 (ａ)外植片組織を完全に浸水させずにその少
なくとも一部を液体培地と接触させ、次いで(ｂ)カルス
細胞形成を誘導する工程からなる、外植片組織から少な
くとも一種のタキサンを生産しうるカルス細胞誘導方
法、該方法により誘導されたカルス細胞、および懸濁細
胞培養によるタキサン類の生産におけるこれらの細胞の
使用方法。
類を生産しうるカルス細胞の誘導方法、誘導された該カ
ルス細胞、およびタキサン類の懸濁細胞培養におけるこ
れらの細胞の使用方法を提供すること。 【構成】 (ａ)外植片組織を完全に浸水させずにその少
なくとも一部を液体培地と接触させ、次いで(ｂ)カルス
細胞形成を誘導する工程からなる、外植片組織から少な
くとも一種のタキサンを生産しうるカルス細胞誘導方
法、該方法により誘導されたカルス細胞、および懸濁細
胞培養によるタキサン類の生産におけるこれらの細胞の
使用方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は外植片組織からタキソー
ルなどのタキサン類を生産しうるカルス細胞の誘導方
法、誘導された該カルス細胞、およびタキサン類の懸濁
細胞培養におけるこれらの細胞の使用方法に関する。
ルなどのタキサン類を生産しうるカルス細胞の誘導方
法、誘導された該カルス細胞、およびタキサン類の懸濁
細胞培養におけるこれらの細胞の使用方法に関する。
【０００２】
【従来の技術と発明が解決しょうとする課題】タキサン
類は、医薬分野での有効性が認められているジテルペン
化合物である。たとえば、タキソール(taxol)、すなわ
ち式：
類は、医薬分野での有効性が認められているジテルペン
化合物である。たとえば、タキソール(taxol)、すなわ
ち式：
【化５】 ［式中、Ｐｈはフェニル、ＡｃはアセチルおよびＢｚは
ベンゾイルである］で示されるタキサンは、効果的な抗
癌剤であって、特に卵巣癌の治療に有用であることが知
られている。
ベンゾイルである］で示されるタキサンは、効果的な抗
癌剤であって、特に卵巣癌の治療に有用であることが知
られている。
【０００３】タキソールなどのタキサン類は、植物物質
の中に発見されるものであり、該植物物質から単離され
ている。しかしながら、このようなタキサン類は比較的
少量でしか植物物質中に存在しないため、タキソールの
場合にたとえば、タキソール源となる生育の遅いイチイ
の木が多数必要となる。このため従来より、タキソール
などのタキサン類を得るための別法が探索されてきた。
特に、これらの化合物を懸濁細胞培養により生産するた
めの効果的な方法が求められている。
の中に発見されるものであり、該植物物質から単離され
ている。しかしながら、このようなタキサン類は比較的
少量でしか植物物質中に存在しないため、タキソールの
場合にたとえば、タキソール源となる生育の遅いイチイ
の木が多数必要となる。このため従来より、タキソール
などのタキサン類を得るための別法が探索されてきた。
特に、これらの化合物を懸濁細胞培養により生産するた
めの効果的な方法が求められている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、（ａ)外植片
組織を完全に浸水させずにその少なくとも一部を液体培
地と接触させ、次いで(ｂ)カルス細胞形成を誘導する工
程からなる、外植片組織から少なくとも一種のタキサン
を生産しうるカルス細胞を誘導する方法を提供する。本
発明方法に従って誘導されたカルス細胞は懸濁細胞培養
によるタキサン類の生産用液体培地へ直接移動させるこ
とができ、分離成長または増殖工程を必要とせず、した
がって全成長時間を短縮することができる。本発明は上
記方法により誘導されたカルス細胞、および懸濁細胞培
養によるタキサン類の生産におけるこれらの細胞の使用
方法も提供する。
組織を完全に浸水させずにその少なくとも一部を液体培
地と接触させ、次いで(ｂ)カルス細胞形成を誘導する工
程からなる、外植片組織から少なくとも一種のタキサン
を生産しうるカルス細胞を誘導する方法を提供する。本
発明方法に従って誘導されたカルス細胞は懸濁細胞培養
によるタキサン類の生産用液体培地へ直接移動させるこ
とができ、分離成長または増殖工程を必要とせず、した
がって全成長時間を短縮することができる。本発明は上
記方法により誘導されたカルス細胞、および懸濁細胞培
養によるタキサン類の生産におけるこれらの細胞の使用
方法も提供する。
【０００５】本発明を以下に詳述する。本明細書で用いる語句の定義 「外植片組織(explant tissues)」とは、原植物源から
の組織を意味し、該組織はたとえば、カルス細胞形成用
人工液または固体培地に前もって接触されていない。
「誘導(induction)」とは、前述のカルス細胞形成用外
植片の初期脱分化を意味する。「カルス細胞(callus ce
ll)」とは、該細胞が誘導された外植片組織に比して脱
分化されているすべての細胞を意味する。「固体培地(s
olid medium)」とは、培地を固化するのに十分な量のゲ
ル化剤を含有する培地を意味する。
の組織を意味し、該組織はたとえば、カルス細胞形成用
人工液または固体培地に前もって接触されていない。
「誘導(induction)」とは、前述のカルス細胞形成用外
植片の初期脱分化を意味する。「カルス細胞(callus ce
ll)」とは、該細胞が誘導された外植片組織に比して脱
分化されているすべての細胞を意味する。「固体培地(s
olid medium)」とは、培地を固化するのに十分な量のゲ
ル化剤を含有する培地を意味する。
【０００６】「液体培地(liquid medium)」とは、培地
を固化するのに不十分な量のゲル化剤を含有するかまた
は全く含有しない培地を意味する。「分散細胞(dispers
ed cells)」とは、外植片からの脱分化のときに、残り
の外植片に付着せず、したがって周囲の液体培地中で遊
離細胞または遊離細胞クラスターになるカルス細胞また
はカルス細胞クラスターを意味する。「膜浮遊体(membr
ane raft)」とは、シート様外植片支持構造を意味し、
該構造は栄養素の輸送に十分な程度に多孔性であること
が好ましい。「脱分化(dedifferentiation)」とは、分
化組織における変化を意味し、該変化は分化型から未分
化型への細胞型の逆戻りが細胞に緩やかに誘導されるた
めに生じるものである。
を固化するのに不十分な量のゲル化剤を含有するかまた
は全く含有しない培地を意味する。「分散細胞(dispers
ed cells)」とは、外植片からの脱分化のときに、残り
の外植片に付着せず、したがって周囲の液体培地中で遊
離細胞または遊離細胞クラスターになるカルス細胞また
はカルス細胞クラスターを意味する。「膜浮遊体(membr
ane raft)」とは、シート様外植片支持構造を意味し、
該構造は栄養素の輸送に十分な程度に多孔性であること
が好ましい。「脱分化(dedifferentiation)」とは、分
化組織における変化を意味し、該変化は分化型から未分
化型への細胞型の逆戻りが細胞に緩やかに誘導されるた
めに生じるものである。
【０００７】外植片組織 本発明方法に使用しうる外植片組織は誘導されるカルス
細胞がタキサンを生産しうるどのような植物組織でもよ
い。外植片組織源となる植物の具体例としては、アメン
トタクサス(Amentotaxus、ウラジロイヌガヤ)属、アウ
ストロタクサス(Austrotaxus)属、シュードタクサス(Ps
eudotaxus)属、およびトレヤ(Torreya、カヤ)属および
タクサス(Taxus、イチイ)属の植物が挙げられる。好ま
しい植物物質は、タクサス属の植物、たとえばＴ.ブレ
ビホリア(brevifolia)、Ｔ.バッカタ(baccata)、Ｔ.ｘ
メディア(media）［タクサス・メディア・ヒックシイ
（Taxusmedia hicksii)など］、Ｔ.ワリチアナ(wallich
iana)、Ｔ.カナデンシス(canadensis)および特にＴ.カ
スピダタ(caspidata)、Ｔ.フロリジアナ(floridiana)、
Ｔ.セレビカ(celebica)およびＴ.ｘフンネウェリアナ(h
unnewelliana)である。
細胞がタキサンを生産しうるどのような植物組織でもよ
い。外植片組織源となる植物の具体例としては、アメン
トタクサス(Amentotaxus、ウラジロイヌガヤ)属、アウ
ストロタクサス(Austrotaxus)属、シュードタクサス(Ps
eudotaxus)属、およびトレヤ(Torreya、カヤ)属および
タクサス(Taxus、イチイ)属の植物が挙げられる。好ま
しい植物物質は、タクサス属の植物、たとえばＴ.ブレ
ビホリア(brevifolia)、Ｔ.バッカタ(baccata)、Ｔ.ｘ
メディア(media）［タクサス・メディア・ヒックシイ
（Taxusmedia hicksii)など］、Ｔ.ワリチアナ(wallich
iana)、Ｔ.カナデンシス(canadensis)および特にＴ.カ
スピダタ(caspidata)、Ｔ.フロリジアナ(floridiana)、
Ｔ.セレビカ(celebica)およびＴ.ｘフンネウェリアナ(h
unnewelliana)である。
【０００８】カルス細胞を誘導しうる植物のいずれの部
分も、たとえば樹皮、形成層、根、葉もしくは針葉、
茎、枝、小枝、木質部、胚、種子または実生も外植片源
として使用しうる。好ましくは、根、茎、葉または胚か
ら選ばれる植物器官、特に好ましくは、根端分裂組織
（成長点）または根形成層（根皮）からの根組織、ある
いは樹皮、枝または小枝からの茎組織、種子の未熟胚ま
たは発芽成熟胚からの胚組織を用いる。外植片源として
用いる植物の樹齢および成熟度の範囲は未熟胚、胚、実
生から成年木までの範囲である。茎組織が最も好まし
い。
分も、たとえば樹皮、形成層、根、葉もしくは針葉、
茎、枝、小枝、木質部、胚、種子または実生も外植片源
として使用しうる。好ましくは、根、茎、葉または胚か
ら選ばれる植物器官、特に好ましくは、根端分裂組織
（成長点）または根形成層（根皮）からの根組織、ある
いは樹皮、枝または小枝からの茎組織、種子の未熟胚ま
たは発芽成熟胚からの胚組織を用いる。外植片源として
用いる植物の樹齢および成熟度の範囲は未熟胚、胚、実
生から成年木までの範囲である。茎組織が最も好まし
い。
【０００９】本発明での使用に先立って、外植片組織を
使用に適するサイズに切断するのが好ましく、そのサイ
ズとは長さ約１cm〜５cmの範囲である。外植片組織の表
面を使用前に滅菌することも好ましい。滅菌は塩素系漂
白剤、エタノール／水（例えば７０％エタノール）溶液
などのアルコール溶液またはそれらの混合物の使用など
の適当な方法によって行うことができる。抗微生物剤も
滅菌およびその維持に使用することができる。
使用に適するサイズに切断するのが好ましく、そのサイ
ズとは長さ約１cm〜５cmの範囲である。外植片組織の表
面を使用前に滅菌することも好ましい。滅菌は塩素系漂
白剤、エタノール／水（例えば７０％エタノール）溶液
などのアルコール溶液またはそれらの混合物の使用など
の適当な方法によって行うことができる。抗微生物剤も
滅菌およびその維持に使用することができる。
【００１０】支持体 液体培地へ完全に浸水させることはカルス誘導にとって
望ましくない状態であるため、本発明で用いる外植片組
織は少なくとも一部が液体培地と接触するような位置に
保持する。したがって、外植片組織の一部が周囲雰囲気
（空気が最も好ましい）と接触し、一方残りの部分が液
体培地と接触するような位置に該組織を保持するような
支持体を用いる。本発明の外植片組織をそのような位置
に保持しうるいずれの支持体も使用できる。外植片組織
は、たとえば、膜浮遊体（これが好ましい）またはスポ
ンジの上に置くことができる。膜浮遊体として用いるの
に好ましい物質は微孔性ポリプロピレンまたは酢酸セル
ロースである。浮遊体の平均孔径が形成する個々のカル
ス細胞の平均直径よりも小さい膜物質が好ましい。カル
ス細胞が膜を通過しないような膜物質がより好ましい。
浮遊体が液体培地の水面下に位置するため、浮遊体の上
下面に液体が存在するような、液体培地の水面が浮遊体
面より上である状態が好ましい。これらの事象により、
分散細胞および特に分散細胞のクラスター形成が促進さ
れる。
望ましくない状態であるため、本発明で用いる外植片組
織は少なくとも一部が液体培地と接触するような位置に
保持する。したがって、外植片組織の一部が周囲雰囲気
（空気が最も好ましい）と接触し、一方残りの部分が液
体培地と接触するような位置に該組織を保持するような
支持体を用いる。本発明の外植片組織をそのような位置
に保持しうるいずれの支持体も使用できる。外植片組織
は、たとえば、膜浮遊体（これが好ましい）またはスポ
ンジの上に置くことができる。膜浮遊体として用いるの
に好ましい物質は微孔性ポリプロピレンまたは酢酸セル
ロースである。浮遊体の平均孔径が形成する個々のカル
ス細胞の平均直径よりも小さい膜物質が好ましい。カル
ス細胞が膜を通過しないような膜物質がより好ましい。
浮遊体が液体培地の水面下に位置するため、浮遊体の上
下面に液体が存在するような、液体培地の水面が浮遊体
面より上である状態が好ましい。これらの事象により、
分散細胞および特に分散細胞のクラスター形成が促進さ
れる。
【００１１】液体培地 カルス細胞を誘導しうるいずれの液体培地も使用でき
る。液体培地の具体例としては、ガンボーグの（Ｇambo
rg's）Ｂ５培地（下記表１）、ムラシゲ−スクーグ（Ｍ
urashige and Ｓkoog）培地(下記表２)、アンダーソン
のロドデンドロン（Ａnderson's Ｒhododendron）基本
塩類培地(下記表３)、ホワイトの（Ｗhite's）培地およ
びこれらの培地を応用したものが挙げられる。上記培地
の応用例としては、ショ糖、ブドウ糖または麦芽糖、カ
ザミノ酸（たとえば０.２％）、酵素加水分解カゼイン
（たとえば０.０２％）およびグリシン（たとえば０.０
０２％）、および種々のオーキシンおよびサイトカイニ
ンの添加が挙げられる。水性ガンボーグのＢ５培地の使
用が好ましい。
る。液体培地の具体例としては、ガンボーグの（Ｇambo
rg's）Ｂ５培地（下記表１）、ムラシゲ−スクーグ（Ｍ
urashige and Ｓkoog）培地(下記表２)、アンダーソン
のロドデンドロン（Ａnderson's Ｒhododendron）基本
塩類培地(下記表３)、ホワイトの（Ｗhite's）培地およ
びこれらの培地を応用したものが挙げられる。上記培地
の応用例としては、ショ糖、ブドウ糖または麦芽糖、カ
ザミノ酸（たとえば０.２％）、酵素加水分解カゼイン
（たとえば０.０２％）およびグリシン（たとえば０.０
０２％）、および種々のオーキシンおよびサイトカイニ
ンの添加が挙げられる。水性ガンボーグのＢ５培地の使
用が好ましい。
【００１２】
【表１】 ガンボーグのＢ５培地の組成 基本塩類 mg/Ｌ 硫酸アンモニウム １３４．０００ ホウ酸 ３．０００ 無水塩化カルシウム １１３．２４０ 塩化コバルト・六水和物 ０．０２５ 硫酸銅・五水和物 ０．０２５ ジナトリウムＥＤＴＡ・二水和物 ３７．３００ 硫酸第一鉄・七水和物 ２７．８００ 無水硫酸マグネシウム １２２．０９０ 硫酸マンガン・一水和物 １０．０００ ヨウ化カリウム ０．７５０ 硝酸カリウム ２５００．０００ モリブデン酸ナトリウム・二水和物 ０．２５０ 無水一塩基性リン酸ナトリウム １３０．５００ 硫酸亜鉛・七水和物 ２．０００ ビタミン類 ミオイノシトール １００．０ 塩酸チアミン １０．０ 塩酸ピリドキシン １．０ ニコチン酸 １．０ 糖類 ショ糖 ２００００．０ ホルモン類 ２,４−ジクロロフェノキシ酢酸（２,４−Ｄと略す） １．５
【００１３】
【表２】 ムラシゲ−スクーグ培地の組成 基本塩類 mg/Ｌ ホウ酸 ６．２０ 無水塩化カルシウム ３３２．２０ 塩化コバルト・六水和物 ０．０２５ 硫酸銅・五水和物 ０．０２５ ジナトリウムＥＤＴＡ・二水和物 ３７．２６０ 硫酸第一鉄・七水和物 ２７．８００ 無水硫酸マグネシウム １８０．７０ 硫酸マンガン・一水和物 １６．９０ ヨウ化カリウム ０．８３０ 硝酸カリウム １９００．００ モリブデン酸ナトリウム・二水和物 ０．２５０ 無水一塩基性リン酸カリウム １７０．００ 硫酸亜鉛・七水和物 ８．６０ 硝酸アンモニウム １６５０．００ ビタミン類 ミオイノシトール １００．０ 塩酸チアミン １０．０ 塩酸ピリドキシン １．０ ニコチン酸 １．０ 糖類 ショ糖 ２００００．０ ホルモン類 ２,４−ジクロロフェノキシ酢酸 １．５
【００１４】
【表３】 アンダーソンのロドデンドロン基本塩類培地の組成 基本塩類 mg/Ｌ 硝酸アンモニウム ４００．００ ホウ酸 ６．２００ 無水塩化カルシウム ３３２．２０ 塩化コバルト・六水和物 ０．０２５ 硫酸銅・五水和物 ０．０２５ ジナトリウムＥＤＴＡ・二水和物 ７４．５００ 硫酸第一鉄・七水和物 ５５．７０ 無水硫酸マグネシウム １８０．７０ 硫酸マンガン・一水和物 １６．９０ ヨウ化カリウム ０．３００ 硝酸カリウム ４８０．００ モリブデン酸ナトリウム・二水和物 ０．２５０ 無水一塩基性リン酸ナトリウム ３３０．６０ 硫酸亜鉛・七水和物 ８．６０ ビタミン類 ミオイノシトール １００．０ 塩酸チアミン １０．０ 塩酸ピリドキシン １．０ ニコチン酸 １．０ 糖類 ショ糖 ２００００．０ ホルモン類 ２,４−ジクロロフェノキシ酢酸 １．５
【００１５】
【表４】 ホワイトの基本塩類培地の組成 基本塩類 mg/Ｌ ホウ酸 １．５０ 硝酸カルシウム・六水和物 ２０８．４０ 硫酸銅・五水和物 ０．０１０ 硫酸第一鉄 ２．５０ 無水硫酸マグネシウム ３６６．２０ 硫酸マンガン・一水和物 ３．７８８ ヨウ化カリウム ０．７５０ 硝酸カリウム ８０．００ 硫酸ナトリウム ２００．００ 無水一塩基性リン酸ナトリウム １６．５０ 硫酸亜鉛・七水和物 ３．００ 塩化カリウム ６５．００ ビタミン類 ミオイノシトール １００．０ 塩酸チアミン １０．０ 塩酸ピリドキシン １．０ ニコチン酸 １．０ 糖類 ショ糖 ２００００．０ ホルモン類 ２,４−ジクロロフェノキシ酢酸 １．５
【００１６】カルス誘導 カルス細胞は外植片組織／液体培地系を適当な条件下に
維持することによって誘導される。誘導中の温度は約２
０〜３０℃が好ましく、約２２℃が最も好ましい。液体
培地と接触していない外植片の一部が、たとえば密閉系
によって適切な湿度に制御されている空気と接触するこ
とが好ましい。適切な湿度はたとえば約８０〜１００％
の飽和点付近である。散光、すなわち通常の室内照明が
好ましい。液体培地に接触する外植片組織の部分が組織
切片の全体積の約１０〜２５％であることが好ましい。
誘導は約１０〜３０日間行うことが好ましい。誘導中、
外植片組織に接する液体培地を緩やかに振盪してもよい
が、静止条件が好ましい。
維持することによって誘導される。誘導中の温度は約２
０〜３０℃が好ましく、約２２℃が最も好ましい。液体
培地と接触していない外植片の一部が、たとえば密閉系
によって適切な湿度に制御されている空気と接触するこ
とが好ましい。適切な湿度はたとえば約８０〜１００％
の飽和点付近である。散光、すなわち通常の室内照明が
好ましい。液体培地に接触する外植片組織の部分が組織
切片の全体積の約１０〜２５％であることが好ましい。
誘導は約１０〜３０日間行うことが好ましい。誘導中、
外植片組織に接する液体培地を緩やかに振盪してもよい
が、静止条件が好ましい。
【００１７】カルス細胞は残りの外植片組織に接着し
て、および／または残りの外植片組織から剥がれて周囲
液体培地に分散した遊離カルス細胞または遊離細胞クラ
スター（分散細胞）として形成される。本発明誘導方法
実施中に、形成したカルス細胞に初期増殖が起こるもの
もある。本発明方法に従ってカルス細胞を誘導する場
合、固体培地よりはむしろ液体培地を使用することによ
って大きな利点が提供される。特に、比較的乾燥してい
るカルス細胞形成環境において固体培地を使用すると、
外植片組織に接着したカルス形成が誘導される。カルス
細胞が最終的に成長し、液体懸濁細胞培養法でタキサン
を能率的に生産するためには、このような環境において
形成したカルス細胞は液体環境に順応しなけらばならな
い。酸素利用性、浸透性の相異などのため、液体環境へ
順応する間、固体培地に誘導されたカルス細胞は成長速
度およびタキサン生産が減少し、細胞型異常および細胞
溶解が増加する。その上、特に分離・成長工程または増
殖工程中に順応が達成される場合、外植片組織から液体
懸濁細胞培養への全発育時間が延長されることになる。
て、および／または残りの外植片組織から剥がれて周囲
液体培地に分散した遊離カルス細胞または遊離細胞クラ
スター（分散細胞）として形成される。本発明誘導方法
実施中に、形成したカルス細胞に初期増殖が起こるもの
もある。本発明方法に従ってカルス細胞を誘導する場
合、固体培地よりはむしろ液体培地を使用することによ
って大きな利点が提供される。特に、比較的乾燥してい
るカルス細胞形成環境において固体培地を使用すると、
外植片組織に接着したカルス形成が誘導される。カルス
細胞が最終的に成長し、液体懸濁細胞培養法でタキサン
を能率的に生産するためには、このような環境において
形成したカルス細胞は液体環境に順応しなけらばならな
い。酸素利用性、浸透性の相異などのため、液体環境へ
順応する間、固体培地に誘導されたカルス細胞は成長速
度およびタキサン生産が減少し、細胞型異常および細胞
溶解が増加する。その上、特に分離・成長工程または増
殖工程中に順応が達成される場合、外植片組織から液体
懸濁細胞培養への全発育時間が延長されることになる。
【００１８】本発明方法は上記の難点を克服するもので
ある。液体培地に接触する誘導されたカルス細胞、特に
前述のように誘導された分散カルス細胞は液体懸濁細胞
培養条件によりたやすく順応する。本発明方法によって
誘導されたカルス細胞は分離成長または増殖工程なし
に、液体懸濁細胞培養培地へ直接移動することができ
る。したがって、本発明誘導方法は外植片組織から液体
懸濁細胞培養への全発育時間の短縮および生産性の向上
に有効である。本発明方法にはこのような利点もある。
たとえば、液体培地中でのカルス誘導は固体培地中より
も長時間行いうるため、より多数のカルス細胞を得るこ
とができる。液体培地を用いると、カルス誘導中に生産
されるフェノール樹脂などの不要の化合物が培地中にた
やすく分散され、カルス誘導部位から離れて行く。さら
に、本発明方法によって誘導されたカルスは健康な緑色
をしており、固体培地で誘導されたカルスよりも茶色カ
ルス領域が少ない。
ある。液体培地に接触する誘導されたカルス細胞、特に
前述のように誘導された分散カルス細胞は液体懸濁細胞
培養条件によりたやすく順応する。本発明方法によって
誘導されたカルス細胞は分離成長または増殖工程なし
に、液体懸濁細胞培養培地へ直接移動することができ
る。したがって、本発明誘導方法は外植片組織から液体
懸濁細胞培養への全発育時間の短縮および生産性の向上
に有効である。本発明方法にはこのような利点もある。
たとえば、液体培地中でのカルス誘導は固体培地中より
も長時間行いうるため、より多数のカルス細胞を得るこ
とができる。液体培地を用いると、カルス誘導中に生産
されるフェノール樹脂などの不要の化合物が培地中にた
やすく分散され、カルス誘導部位から離れて行く。さら
に、本発明方法によって誘導されたカルスは健康な緑色
をしており、固体培地で誘導されたカルスよりも茶色カ
ルス領域が少ない。
【００１９】本発明の好ましい具体例にはさらに利点が
ある。たとえば、分散カルス細胞および分散カルス細胞
クラスターの形成が望ましいのは、そのような細胞が最
もたやすく液体懸濁細胞培養条件に順応するからであ
る。したがって、分散細胞および分散クラスターの形成
とその形成の促進のためには、液体培地の水面が外植片
組織支持体（膜浮遊体など）の面よりも上になるように
して液体培地を外植片組織の十分な部分と接触するよう
にすることが有利である。最も有利には分散細胞のクラ
スターの形成である。液体懸濁細胞培養系に移したと
き、分散細胞クラスターは最大細胞成長とタキサン放出
に必要な臨界量に最もすばやく達する。したがって、外
植片組織支持体を通って分散細胞クラスターが移動しな
いような支持体の使用が好ましい。たとえば、平均孔径
が個々の分散細胞の平均直径よりも小さい孔を有する膜
浮遊体を使用することにより、該浮遊体面上に細胞クラ
スターが保持され、膜を通って細胞が移動することから
細胞クラスターが崩壊して個々の細胞になることが防止
される。
ある。たとえば、分散カルス細胞および分散カルス細胞
クラスターの形成が望ましいのは、そのような細胞が最
もたやすく液体懸濁細胞培養条件に順応するからであ
る。したがって、分散細胞および分散クラスターの形成
とその形成の促進のためには、液体培地の水面が外植片
組織支持体（膜浮遊体など）の面よりも上になるように
して液体培地を外植片組織の十分な部分と接触するよう
にすることが有利である。最も有利には分散細胞のクラ
スターの形成である。液体懸濁細胞培養系に移したと
き、分散細胞クラスターは最大細胞成長とタキサン放出
に必要な臨界量に最もすばやく達する。したがって、外
植片組織支持体を通って分散細胞クラスターが移動しな
いような支持体の使用が好ましい。たとえば、平均孔径
が個々の分散細胞の平均直径よりも小さい孔を有する膜
浮遊体を使用することにより、該浮遊体面上に細胞クラ
スターが保持され、膜を通って細胞が移動することから
細胞クラスターが崩壊して個々の細胞になることが防止
される。
【００２０】タキサン生産 さらに本発明は少なくとも１種のタキサンの生産方法を
提供し、該方法は、（Ａ）前述の本発明カルス細胞誘導
方法に従って、少なくとも一種のタキサンを生産しうる
カルス細胞を誘導し、次いで（Ｂ）該細胞を液体懸濁細
胞培養系で培養して該タキサンを生産する工程からな
る。中間の分離成長または増殖工程を行うことなく、工
程（Ａ）から工程（Ｂ）へと進行するのが好ましい。こ
こで「分離成長または増殖工程」とは、工程（Ａ）と工
程（Ｂ）を行った場所から物理的に離れた場所へ細胞を
移動し、カルス細胞の成長または増殖を行うことを意味
する。
提供し、該方法は、（Ａ）前述の本発明カルス細胞誘導
方法に従って、少なくとも一種のタキサンを生産しうる
カルス細胞を誘導し、次いで（Ｂ）該細胞を液体懸濁細
胞培養系で培養して該タキサンを生産する工程からな
る。中間の分離成長または増殖工程を行うことなく、工
程（Ａ）から工程（Ｂ）へと進行するのが好ましい。こ
こで「分離成長または増殖工程」とは、工程（Ａ）と工
程（Ｂ）を行った場所から物理的に離れた場所へ細胞を
移動し、カルス細胞の成長または増殖を行うことを意味
する。
【００２１】このような方法で生産しうるいずれのタキ
サンの懸濁細胞培養も本発明の範囲に包含される。１種
または２種以上のタキサンが本発明方法の実施中に生産
されると考えられる。上記本発明方法の培養工程（Ｂ）
は当業者に公知の懸濁細胞培養法に従って実行する。米
国特許第５０１９５０４号参照。使用する培地の具体例
としては、前記誘導培地に関して論じたものが挙げられ
る。それらの培地にさらに寒天（たとえば０．１％）ま
たはフィタゲル（phytagel）（たとえば０．０２５％）
を加えてもよい。懸濁細胞培養中の温度は約２２〜２５
℃、相対湿度は約４０〜６０％、振盪速度は約３０〜２
００回転／分（ＲＰＭ）が好ましい。カビ誘発剤、バナ
ジル硫酸、３,４−ジクロロフェノキシトリエチル（ア
ミン）などの誘導剤を添加してもよい。アルギン酸カル
シウムビーズに封入した細胞および０．１％寒天を培地
へ添加することによって得られるスラリーに封入した細
胞を用いてタキサンを生産することもできる。
サンの懸濁細胞培養も本発明の範囲に包含される。１種
または２種以上のタキサンが本発明方法の実施中に生産
されると考えられる。上記本発明方法の培養工程（Ｂ）
は当業者に公知の懸濁細胞培養法に従って実行する。米
国特許第５０１９５０４号参照。使用する培地の具体例
としては、前記誘導培地に関して論じたものが挙げられ
る。それらの培地にさらに寒天（たとえば０．１％）ま
たはフィタゲル（phytagel）（たとえば０．０２５％）
を加えてもよい。懸濁細胞培養中の温度は約２２〜２５
℃、相対湿度は約４０〜６０％、振盪速度は約３０〜２
００回転／分（ＲＰＭ）が好ましい。カビ誘発剤、バナ
ジル硫酸、３,４−ジクロロフェノキシトリエチル（ア
ミン）などの誘導剤を添加してもよい。アルギン酸カル
シウムビーズに封入した細胞および０．１％寒天を培地
へ添加することによって得られるスラリーに封入した細
胞を用いてタキサンを生産することもできる。
【００２２】培養により生産されたタキサン類は当業者
に公知の方法で回収することができる。たとえば、吸収
性ビーズを用いるとタキソールなどのタキサンの回収が
促進される。タキソールなどのタキソールの生産中に培
養培地に残存するビーズもまたタキサン生成物に結合す
ることによってその生産を増加させる。さらに、細胞上
澄み液またはビーズからのタキサン生産物の抽出はエー
テルまたは塩化メチレンなどの溶媒でたやすく行なえ
る。
に公知の方法で回収することができる。たとえば、吸収
性ビーズを用いるとタキソールなどのタキサンの回収が
促進される。タキソールなどのタキソールの生産中に培
養培地に残存するビーズもまたタキサン生成物に結合す
ることによってその生産を増加させる。さらに、細胞上
澄み液またはビーズからのタキサン生産物の抽出はエー
テルまたは塩化メチレンなどの溶媒でたやすく行なえ
る。
【００２３】タキサン化合物 タキサン類は，
【化６】 のタキサン炭素骨格を有するジテルペン化合物であり、
該骨格はエチレン不飽和結合をその環系に有している
（たとえば、１１,１２−位がエチレン結合で結合す
る）。医薬的に活性あるいは不活性なすべてのタキサン
類の製造が本発明の範囲に包含される。原外植片組織中
に認められる（すなわち自然発生）かあるいは認められ
ない本発明のカルス細胞によってタキサン類は生産され
る。本発明の細胞培養法によって生産しうるタキサン類
の具体例として、下記一般式（Ｉ）：
該骨格はエチレン不飽和結合をその環系に有している
（たとえば、１１,１２−位がエチレン結合で結合す
る）。医薬的に活性あるいは不活性なすべてのタキサン
類の製造が本発明の範囲に包含される。原外植片組織中
に認められる（すなわち自然発生）かあるいは認められ
ない本発明のカルス細胞によってタキサン類は生産され
る。本発明の細胞培養法によって生産しうるタキサン類
の具体例として、下記一般式（Ｉ）：
【化７】 で示されるタキサンが挙げられる。式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ
3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9，Ｒ10，Ｒ11，
Ｒ12，Ｒ13，Ｒ14，Ｒ15，Ｒ16および「ａ」の定義を次
表５〜９に示す。
3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9，Ｒ10，Ｒ11，
Ｒ12，Ｒ13，Ｒ14，Ｒ15，Ｒ16および「ａ」の定義を次
表５〜９に示す。
【００２４】
【表５】
【００２５】
【表６】
【００２６】
【表７】
【００２７】
【表８】
【００２８】
【表９】
【００２９】脚注 注１/「ceph」とは、
【化８】 を意味する。「tax」とは、
【化９】 を意味する。「taxsub」とは、
【化１０】 を意味する。「taxot」とは、
【化１１】 を意味する。 注２／「キシロシル」とは、
【化１２】 を意味する。 注３/「ａ」とは、１１位と１２位の間に存在する二重
結合を意味する。 注４/「α」とは、
結合を意味する。 注４/「α」とは、
【化１３】 で示される、上記タキサン環構造平面より下になる基の
立体構造を意味する。「β」とは、
立体構造を意味する。「β」とは、
【化１４】 で示される、上記タキサン環構造平面より上になる基の
立体構造を意味する。 注５/「オキセタン」とは、
立体構造を意味する。 注５/「オキセタン」とは、
【化１５】 部分が
【化１６】 であることを意味する。 注６/「シクロ」とは、
【化１７】 で示される基がタキサンのＡ環に
【化１８】 のように結合して形成される環基を意味する。 注７/「エポキシド」とは、
【化１９】 部分が
【化２０】 であることを意味する。
【００３０】本発明の細胞培養法で生産されるタキサン
類は下記式（ＩＩ）：
類は下記式（ＩＩ）：
【化２１】 または式（ＩＩＩ）：
【化２２】 で表わすこともできる。上記式中、Ｒ4はケト（＝Ｏ）
またはアセチルオキシ；Ｒ7は水素、α−ヒドロキシま
たはβ−ヒドロキシ；Ｒ9はアセチルオキシ、シンナモ
イルオキシまたはヒドロキシ；Ｒ10およびＲ11は一緒に
なってメチレンまたはエポキシド基を形成；Ｒ12は水
素、ベンゾイルオキシまたはアセチルオキシ；およびＲ
17は水素またはアセチルオキシである。好ましいタキサ
ンとしては、タキソール、バッカチンＩＩＩ、１０−デ
スアセチルバッカチンＩＩＩ、１０−デスアセチルタキ
ソール、キシロシルタキソール、７−エピバッカチンＩ
ＩＩ、７−エピタキソールおよび／または１０−デスア
セチル−７−エピタキソールが挙げられる。タキソール
の細胞培養生産が本発明の特に好ましい具体例である。
またはアセチルオキシ；Ｒ7は水素、α−ヒドロキシま
たはβ−ヒドロキシ；Ｒ9はアセチルオキシ、シンナモ
イルオキシまたはヒドロキシ；Ｒ10およびＲ11は一緒に
なってメチレンまたはエポキシド基を形成；Ｒ12は水
素、ベンゾイルオキシまたはアセチルオキシ；およびＲ
17は水素またはアセチルオキシである。好ましいタキサ
ンとしては、タキソール、バッカチンＩＩＩ、１０−デ
スアセチルバッカチンＩＩＩ、１０−デスアセチルタキ
ソール、キシロシルタキソール、７−エピバッカチンＩ
ＩＩ、７−エピタキソールおよび／または１０−デスア
セチル−７−エピタキソールが挙げられる。タキソール
の細胞培養生産が本発明の特に好ましい具体例である。
【００３１】タキサン類は癌の治療などの医薬分野での
有用性が認められる化合物である。タキソールは医薬的
活性タキサンの典型例であるが、たとえば、白血病の軽
減用化学療法剤として後に米国特許第４２０６２２１号
で報告されたセファロマンニンも典型例のひとつであ
る。本発明は、このような医薬的に活性なタキサン類の
製造法、ならびに僅かに活性または不活性なタキサン類
あるいは活性の低いタキサン類であって、他の医薬的に
活性なタキサン類の製造中間体として有用な物質の製造
法に関する。したがって、本発明方法において、細胞培
養を通じて、タキサン出発物質を得るための効果的な方
法が提供されることにより、医薬的に活性なタキサン類
の製造が促進される。
有用性が認められる化合物である。タキソールは医薬的
活性タキサンの典型例であるが、たとえば、白血病の軽
減用化学療法剤として後に米国特許第４２０６２２１号
で報告されたセファロマンニンも典型例のひとつであ
る。本発明は、このような医薬的に活性なタキサン類の
製造法、ならびに僅かに活性または不活性なタキサン類
あるいは活性の低いタキサン類であって、他の医薬的に
活性なタキサン類の製造中間体として有用な物質の製造
法に関する。したがって、本発明方法において、細胞培
養を通じて、タキサン出発物質を得るための効果的な方
法が提供されることにより、医薬的に活性なタキサン類
の製造が促進される。
【００３２】
【実施例】次に実施例を挙げて、本発明方法をより具体
的に説明するが、これらの実施例によって本発明の技術
的範囲が制限されることはない。 実施例１カルス細胞の誘導およびタキソールの生産 タクサス・メディア・ヒックシイの植物茎を７０％アル
コールおよび２５％漂白剤で滅菌した後、外植片を切り
出す。長さがおよそ２〜３cmの各外植片をガンボーグの
Ｂ５基本塩類とビタミン類（前記表１参照）、ショ糖
（２％）、２,４−Ｄ（１.５mg/L）およびカザミノ酸
（２g/L）からなる培地に浮遊している微孔性ポリプロ
ピレン膜浮遊体に置く。高湿度を維持するためにポリプ
ロピレンの蓋で堅く閉めることができる４×４インチの
ポリカーボネート容器に、培地と膜を入れる。
的に説明するが、これらの実施例によって本発明の技術
的範囲が制限されることはない。 実施例１カルス細胞の誘導およびタキソールの生産 タクサス・メディア・ヒックシイの植物茎を７０％アル
コールおよび２５％漂白剤で滅菌した後、外植片を切り
出す。長さがおよそ２〜３cmの各外植片をガンボーグの
Ｂ５基本塩類とビタミン類（前記表１参照）、ショ糖
（２％）、２,４−Ｄ（１.５mg/L）およびカザミノ酸
（２g/L）からなる培地に浮遊している微孔性ポリプロ
ピレン膜浮遊体に置く。高湿度を維持するためにポリプ
ロピレンの蓋で堅く閉めることができる４×４インチの
ポリカーボネート容器に、培地と膜を入れる。
【００３３】外植片を浮遊体に置く前に、容器と培地を
標準条件にてオートクレーブで１５分間処理する。外植
片を浮遊体に置いた後、上記培地５〜１０mlを外植片上
に加える。カルスが発生するまで浮遊体を２２℃で３〜
４週間インキュベートする。インキュベーション後、外
植片とカルスを除去し、浮遊体上に残っている遊離細胞
をピペットで取り、１２５mlフラスコ中で寒天０.１g/L
を加えた上記ガンボーグの培地２５mlを加える。もしも
細胞の数が少ないようであれば、数個の浮遊体からの遊
離細胞をひとつのフラスコに合わせ入れてもよい。植え
付けたフラスコを２２℃、湿度４５％、散光下で５０Ｒ
ＰＭにてインキュベートする。
標準条件にてオートクレーブで１５分間処理する。外植
片を浮遊体に置いた後、上記培地５〜１０mlを外植片上
に加える。カルスが発生するまで浮遊体を２２℃で３〜
４週間インキュベートする。インキュベーション後、外
植片とカルスを除去し、浮遊体上に残っている遊離細胞
をピペットで取り、１２５mlフラスコ中で寒天０.１g/L
を加えた上記ガンボーグの培地２５mlを加える。もしも
細胞の数が少ないようであれば、数個の浮遊体からの遊
離細胞をひとつのフラスコに合わせ入れてもよい。植え
付けたフラスコを２２℃、湿度４５％、散光下で５０Ｒ
ＰＭにてインキュベートする。
【００３４】３週間後、フラスコを回収し、タキソール
を分析する。懸濁フラスコは０.０１〜０.０２mg/Lのタ
キソールを含有することが認められ、それは乾燥細胞重
量に基づくと０.０００２〜０.０００４％タキソール／
乾燥細胞重量で表される。セファロマンニンおよびバッ
カチンＩＩＩなどの他のタキサン類の存在も検出され
る。２回の実行の結果を下記表に示す。
を分析する。懸濁フラスコは０.０１〜０.０２mg/Lのタ
キソールを含有することが認められ、それは乾燥細胞重
量に基づくと０.０００２〜０.０００４％タキソール／
乾燥細胞重量で表される。セファロマンニンおよびバッ
カチンＩＩＩなどの他のタキサン類の存在も検出され
る。２回の実行の結果を下記表に示す。
【表１０】 回 タキソール収量（μg/ml） 乾燥細胞重量(mg/ml) １ ０.０２０７ ５.５ ２ ０.０１３１ ５.７
【００３５】培地の応用 タクサス・メディア・ヒックシイの植物茎を７０％アル
コールおよび２５％漂白剤で滅菌した後、外植片を切り
出す。長さがおよそ２〜３cmの各外植片をアンダーソン
のロドデンドロン基本塩類（前記表３参照）とガンボー
グのビタミン類（前記表１参照）、ショ糖（２％）、
２,４−Ｄ（１.５mg/L）およびカザミノ酸（２g/L）か
らなる培地に浮遊している微孔性ポリプロピレン膜浮遊
体に置く。高湿度を維持するためにポリプロピレンの蓋
で堅く閉めることができる４×４インチのポリカーボネ
ート容器に、培地と膜を入れる。
コールおよび２５％漂白剤で滅菌した後、外植片を切り
出す。長さがおよそ２〜３cmの各外植片をアンダーソン
のロドデンドロン基本塩類（前記表３参照）とガンボー
グのビタミン類（前記表１参照）、ショ糖（２％）、
２,４−Ｄ（１.５mg/L）およびカザミノ酸（２g/L）か
らなる培地に浮遊している微孔性ポリプロピレン膜浮遊
体に置く。高湿度を維持するためにポリプロピレンの蓋
で堅く閉めることができる４×４インチのポリカーボネ
ート容器に、培地と膜を入れる。
【００３６】外植片を浮遊体に置く前に、容器と培地を
標準条件にてオートクレーブで１５分間処理する。外植
片を浮遊体に置いた後、上記培地５〜１０mlを外植片上
に加える。カルスが発生するまで浮遊体を２２℃で５〜
１０週間インキュベートする。インキュベーション後、
外植片とカルスを除去し、浮遊体上に残っている遊離細
胞をピペットで取り、１２５mlフラスコ中で寒天０.１g
/Lを加えた上記アンダーソンの培地２５mlを加える。
（上記実施例１の記載のように、数個の浮遊体からの遊
離細胞をひとつのフラスコに合わせ入れてもよい。）植
え付けたフラスコを２２℃、湿度４５％、散光下で５０
ＲＰＭにてインキュベートする。
標準条件にてオートクレーブで１５分間処理する。外植
片を浮遊体に置いた後、上記培地５〜１０mlを外植片上
に加える。カルスが発生するまで浮遊体を２２℃で５〜
１０週間インキュベートする。インキュベーション後、
外植片とカルスを除去し、浮遊体上に残っている遊離細
胞をピペットで取り、１２５mlフラスコ中で寒天０.１g
/Lを加えた上記アンダーソンの培地２５mlを加える。
（上記実施例１の記載のように、数個の浮遊体からの遊
離細胞をひとつのフラスコに合わせ入れてもよい。）植
え付けたフラスコを２２℃、湿度４５％、散光下で５０
ＲＰＭにてインキュベートする。
【００３７】３週間後、フラスコを回収し、タキソール
を分析する。懸濁フラスコは０.０１９４mg/Lのタキソ
ールを含有することが認められ、それは乾燥細胞重量に
基づくと０.００６２％タキソール／乾燥細胞重量で表
される。
を分析する。懸濁フラスコは０.０１９４mg/Lのタキソ
ールを含有することが認められ、それは乾燥細胞重量に
基づくと０.００６２％タキソール／乾燥細胞重量で表
される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 スティーブン・アール・シュワルツ アメリカ合衆国ニュージャージー州ミルタ ウン、リバ・アベニュー23番 (72)発明者 ダナ・エル・カズリノ アメリカ合衆国ニューヨーク州ニューヨー ク、リバーサイド・ドライブ33番 アパー トメント15ディ
Claims (26)
- 【請求項１】 (ａ)外植片組織を完全に浸水させずにそ
の少なくとも一部を液体培地と接触させ、次いで(ｂ)カ
ルス細胞形成を誘導する工程からなる、外植片組織から
少なくとも一種のタキサンを生産しうるカルス細胞を誘
導する方法。 - 【請求項２】 該外植片組織がタクサス科の植物起源で
ある請求項１記載の誘導方法。 - 【請求項３】 植物が、Ｔ.ブレビホリア、Ｔ.バッカ
タ、Ｔ.ｘメディア、Ｔ.ワリチアナ、Ｔ.カナデンシ
ス、Ｔ.カスピダタ、Ｔ.フロリジアナ、Ｔ.セレビカお
よびＴ.ｘフンネウェリアナから選ばれる請求項２記載
の誘導方法。 - 【請求項４】 少なくとも一種のタキサンがタキソー
ル、１０−デスアセチルセファロマンニン、７−エピタ
キソール、１０−デスアセチル−７−エピタキソール、
７−エピセファロマンニン、バッカチンＩＩＩ、タキソ
テル、１０−デスアセチルバッカチンＩＩＩ、セファロ
マンニン、１０−デスアセチルタキソール、キシロシル
タキソール、キシロシルセファロマンニン、７−エピバ
ッカチンＩＩＩ、タキサギフィン、８−ベンゾイルオキ
シタキサギフィン、９−アセチルオキシタクサシン、９
−ヒドロキシタクサシン、タイワンキサム、タキサンＩ
ａ、タキサンＩｂ、タキサンＩｃおよび／またはタキサ
ンＩｄから選ばれる請求項１記載の誘導方法。 - 【請求項５】 少なくとも一種のタキサンがタキソー
ル、バッカチンＩＩＩ、１０−デスアセチルバッカチン
ＩＩＩ、１０−デスアセチルタキソール、キシロシルタ
キソール、７−エピバッカチンＩＩＩ、７−エピタキソ
ールおよび／または１０−デスアセチル−７−エピタキ
ソールから選ばれる請求項４記載の誘導方法。 - 【請求項６】 タキサンがタキソールである請求項５記
載の誘導方法。 - 【請求項７】 少なくとも一種のタキサンが式（Ｉ
Ｉ）： 【化１】 および／または式（ＩＩＩ）： 【化２】 ［式中、Ｒ4は、ケト（＝Ｏ）またはアセチルオキシ；
Ｒ7は水素、α−ヒドロキシまたはβ−ヒドロキシ；Ｒ9
はアセチルオキシ、シンナモイルオキシまたはヒドロキ
シ；Ｒ10およびＲ11は一緒になってメチレンまたはエポ
キシド基を形成；Ｒ12は水素、ベンゾイルオキシまたは
アセチルオキシ；およびＲ17は水素またはアセチルオキ
シである］で示されるタキサンである請求項１記載の誘
導方法。 - 【請求項８】 外植片組織が膜浮遊体またはスポンジで
支持される請求項１記載の誘導方法。 - 【請求項９】 外植片組織が膜浮遊体で支持される請求
項８記載の誘導方法。 - 【請求項１０】 膜浮遊体が微孔性ポリプロピレンまた
は酢酸セルロースである請求項９記載の誘導方法。 - 【請求項１１】 液体培地の水面が浮遊体面より上にあ
る請求項９記載の誘導方法。 - 【請求項１２】 分散カルス細胞または分散細胞クラス
ターが形成され、さらに少なくともいくつかの該分散細
胞または分散細胞クラスターが浮遊体面上に残存する請
求項１１記載の誘導方法。 - 【請求項１３】 膜浮遊体の平均孔径が個々の分散細胞
の平均直径よりも小さい多孔性構造の浮遊体である請求
項１２記載の誘導方法。 - 【請求項１４】 液体培地が水性ガンボーグのＢ５培
地、ムラシゲ−スクーグ培地、アンダーソンのロドデン
ドロン基本塩類培地またはホワイトの培地である請求項
１記載の誘導方法。 - 【請求項１５】 液体培地がガンボーグのＢ５培地であ
る請求項１４記載の誘導方法。 - 【請求項１６】 液体培地と接触する外植片組織の部分
が該組織全体の体積の約１０〜２５％である請求項１記
載の誘導方法。 - 【請求項１７】 請求項１記載の誘導方法に従って誘導
されるカルス細胞。 - 【請求項１８】 請求項１２記載の誘導方法に従って誘
導される分散カルス細胞または分散細胞クラスター。 - 【請求項１９】 （Ａ）請求項１記載の誘導方法に従っ
て、少なくとも一種のタキサンを生産しうるカルス細胞
を誘導し、次いで（Ｂ）該細胞を液体懸濁細胞培養系で
培養して該タキサンを生産する工程からなる少なくとも
一種のタキサンの生産方法。 - 【請求項２０】 工程（Ａ）と工程（Ｂ）の間に、分離
成長または増殖工程を行わない請求項１９記載の生産方
法。 - 【請求項２１】 少なくとも一種のタキサンがタキソー
ル、１０−デスアセチルセファロマンニン、７−エピタ
キソール、１０−デスアセチル−７−エピタキソール、
７−エピセファロマンニン、バッカチンＩＩＩ、タキソ
テル、１０−デスアセチルバッカチンＩＩＩ、セファロ
マンニン、１０−デスアセチルタキソール、キシロシル
タキソール、キシロシルセファロマンニン、７−エピバ
ッカチンＩＩＩ、タキサギフィン、８−ベンゾイルオキ
シタキサギフィン、９−アセチルオキシタクサシン、９
−ヒドロキシタクサシン、タイワンキサム、タキサンＩ
ａ、タキサンＩｂ、タキサンＩｃおよび／またはタキサ
ンＩｄから選ばれる請求項１９記載の生産方法。 - 【請求項２２】 少なくとも一種のタキサンがタキソー
ル、バッカチンＩＩＩ、１０−デスアセチルバッカチン
ＩＩＩ、１０−デスアセチルタキソール、キシロシルタ
キソール、７−エピバッカチンＩＩＩ、７−エピタキソ
ールおよび／または１０−デスアセチル−７−エピタキ
ソールから選ばれる請求項２１記載の生産方法。 - 【請求項２３】 タキソールが生産される請求項２２記
載の生産方法。 - 【請求項２４】 式（ＩＩ）： 【化３】 および／または式（ＩＩＩ）： 【化４】 ［式中、Ｒ4は、ケト（＝Ｏ）またはアセチルオキシ；
Ｒ7は水素、α−ヒドロキシまたはβ−ヒドロキシ；Ｒ9
はアセチルオキシ、シンナモイルオキシまたはヒドロキ
シ；Ｒ10およびＲ11は一緒になってメチレンまたはエポ
キシド基を形成；Ｒ12は水素、ベンゾイルオキシまたは
アセチルオキシ；およびＲ17は水素またはアセチルオキ
シである］で示されるタキサンが生産される請求項１９
記載の生産方法。 - 【請求項２５】 外植片組織がカルス細胞形成用人工液
または固体培地に前もって接触していない請求項１記載
の誘導方法。 - 【請求項２６】 外植片組織がカルス細胞形成用人工液
または固体培地に前もって接触していない請求項１９記
載の生産方法。
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| US4152214A (en) * | 1977-10-07 | 1979-05-01 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Production of homodeoxyharringtonine and other cephalotaxine esters by tissue culture |
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| US4463522A (en) * | 1979-07-26 | 1984-08-07 | Eckhart Lindemann | System and apparatus for plant tissue culture propagation |
| US4501815A (en) * | 1979-10-29 | 1985-02-26 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Article for culturing differentiated cells |
| US4352887A (en) * | 1979-10-29 | 1982-10-05 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Method and article for culturing differentiated cells |
| DE3165272D1 (en) * | 1980-11-06 | 1984-09-06 | Albright & Wilson | Callus culture in nutrient flow |
| IL69333A (en) * | 1983-07-26 | 1986-04-29 | Biolog Ind | Process for plant tissue culture propagation |
| CH665217A5 (de) * | 1985-02-15 | 1988-04-29 | Agrogen Stiftung | Verfahren und vorrichtung zur in vitro kultur von pflanzenzellen, pflanzengeweben, pflanzenorganen, pflanzenteilen sowie zur mikropropagation und regeneration von ganzen pflanzen. |
| JPS61254127A (ja) * | 1985-05-02 | 1986-11-11 | 三浦 喜温 | ニチニチソウ器官培養によるインド−ルアルカロイドの製造方法 |
| US4960703A (en) * | 1986-04-23 | 1990-10-02 | Personnalite Juridique De La Station Des Cultures Fruitieres Et Maraicheres | Composition for in vitro micropropagation of plants |
| CA1289902C (en) * | 1987-05-15 | 1991-10-01 | Jean Archambault | Surface immobilization of plant cells |
| US5019504A (en) | 1989-03-23 | 1991-05-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Production of taxol or taxol-like compounds in cell culture |
| WO1992013961A1 (en) * | 1991-02-12 | 1992-08-20 | Nippon Steel Corporation | Process for producing taxol by cell culture of taxus species |
| US5413928A (en) * | 1991-06-21 | 1995-05-09 | Worcester Polytechnic Institute | Process for extracting enhanced amounts of plant secondary metabolites with limited loss of plant viability |
| CA2092705C (en) * | 1991-07-17 | 1995-11-07 | Koji Saito | Compound having antitumor activity, nsc-lsc1, and process for producing the same |
| US5344775A (en) * | 1991-11-15 | 1994-09-06 | Escagenetics Corporation | Synthesis of taxanes in culture using pseudocalluscells |
| IT1258838B (it) * | 1992-01-31 | 1996-02-29 | Indena Spa | Processo per l'estrazione di tassolo e derivati da cultivar del genere taxus |
| US5407816A (en) * | 1992-02-20 | 1995-04-18 | Phyton Catalytic, Inc. | Enhanced production of taxol and taxanes by cell cultures of taxus species |
| JPH05244971A (ja) * | 1992-03-06 | 1993-09-24 | Nippon Oil Co Ltd | タキサン類化合物の製造方法 |
| EP0633719A4 (en) * | 1992-04-01 | 1995-12-20 | Union Camp Corp | PROCESS FOR INDUCING SOMATIC EMBRYOGENESIS IN THE -i (TAXUS) AND PRODUCTION OF ALKALOIDS CONTAINING A TAXANE CORE ACCORDING TO THIS PROCESS. |
| CA2092849C (en) * | 1992-04-07 | 2003-11-18 | Paul M. Cino | Callus cell induction and the preparation of taxanes |
| US5322779A (en) * | 1992-04-16 | 1994-06-21 | The Research And Development Institute, Inc. At Montana State University | Taxol production by taxomyces andreanae |
| EP0642586A4 (en) * | 1992-05-21 | 1995-11-29 | Penn State Res Found | CULTURAL -i (TAXUS) FABRIC AS A SOURCE OF TAXOL, RELATED TAXANS AND OTHER NEW ANTI-TUMOR / ANTI-VIRAL SUBSTANCES (01/20/94). |
| CA2069122A1 (en) * | 1992-05-21 | 1993-11-22 | Richard N. Arteca | Methods and compositions for the production of taxol, taxol precursors and derivatives of taxol from plant tissue culture |
| JP2967532B2 (ja) * | 1992-06-11 | 1999-10-25 | 日石三菱株式会社 | タキサン類化合物の製造方法 |
-
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-
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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