JPH06296493A - タキソールの生産方法 - Google Patents
タキソールの生産方法Info
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- JPH06296493A JPH06296493A JP5087561A JP8756193A JPH06296493A JP H06296493 A JPH06296493 A JP H06296493A JP 5087561 A JP5087561 A JP 5087561A JP 8756193 A JP8756193 A JP 8756193A JP H06296493 A JPH06296493 A JP H06296493A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 イチイ属植物の組織培養による効率のよいタ
キソールの生産方法を提供する。 【構成】 イチイ属植物の組織培養に通常用いられる培
地にジベレリン類を添加した液体培地で前記培養を行う
ことを特徴とするタキソールの生産方法を提供する。培
養細胞中のタキソール含有量を低減することなく、該細
胞の効率の良い増殖が可能である。
キソールの生産方法を提供する。 【構成】 イチイ属植物の組織培養に通常用いられる培
地にジベレリン類を添加した液体培地で前記培養を行う
ことを特徴とするタキソールの生産方法を提供する。培
養細胞中のタキソール含有量を低減することなく、該細
胞の効率の良い増殖が可能である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、イチイ属（Ｔaxus）に
属する植物から組織培養によって誘導された培養細胞の
液体培養による増殖法に関する。かかる増殖された植物
細胞は抗腫瘍剤であるタキソールの生産に利用できる。
属する植物から組織培養によって誘導された培養細胞の
液体培養による増殖法に関する。かかる増殖された植物
細胞は抗腫瘍剤であるタキソールの生産に利用できる。
【０００２】
【従来の技術】タキソールは有望な抗腫瘍剤であり、ア
メリカ合衆国およびカナダにおいては卵巣ガンの治療薬
として認可を受けている。タキソールはタイヘイヨウイ
チイの樹皮抽出物から精製、供給されているが、タイヘ
イヨウイチイの生育は極めて遅く、かつ利用できる資源
は枯渇しつつある。このためイチイの組織培養が検討さ
れているが、組織培養による増殖は遅く、タキソールの
生産効率は低い。例えば、Ｂiotechnology,Vol. １０，
ｐ１５７２−１５７５，１９９２年によれば液体培養中
では２５日間で２．８倍にしか増殖しない。また、培養
中の褐変死や成長阻害もしばしば観測されている。
メリカ合衆国およびカナダにおいては卵巣ガンの治療薬
として認可を受けている。タキソールはタイヘイヨウイ
チイの樹皮抽出物から精製、供給されているが、タイヘ
イヨウイチイの生育は極めて遅く、かつ利用できる資源
は枯渇しつつある。このためイチイの組織培養が検討さ
れているが、組織培養による増殖は遅く、タキソールの
生産効率は低い。例えば、Ｂiotechnology,Vol. １０，
ｐ１５７２−１５７５，１９９２年によれば液体培養中
では２５日間で２．８倍にしか増殖しない。また、培養
中の褐変死や成長阻害もしばしば観測されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、イチイ属植
物の組織培養によるタキソールの生産方法に関し、液体
培養での増殖速度を高め、より効率よく生産するもので
あり、もって、タキソールを安定的に供給することを目
的とする。
物の組織培養によるタキソールの生産方法に関し、液体
培養での増殖速度を高め、より効率よく生産するもので
あり、もって、タキソールを安定的に供給することを目
的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段および作用】本発明者ら
は、前記課題を解決すべくイチイ属（Ｔaxus）に属する
植物の組織培養における増殖率の向上について鋭意検討
したところ、特にジベレリン類を含む液体培地を用いる
ことによって、イチイ属植物の組織培養細胞単位重量あ
たりのタキソール量が低下することなく増殖が促進され
る効率の良いタキソールの生産に成功して本発明を完成
した。すなわち、本発明は、イチイ属（Ｔaxus）に属す
る植物の培養細胞の増殖を高める方法を提供することに
よって上記課題を解決する。
は、前記課題を解決すべくイチイ属（Ｔaxus）に属する
植物の組織培養における増殖率の向上について鋭意検討
したところ、特にジベレリン類を含む液体培地を用いる
ことによって、イチイ属植物の組織培養細胞単位重量あ
たりのタキソール量が低下することなく増殖が促進され
る効率の良いタキソールの生産に成功して本発明を完成
した。すなわち、本発明は、イチイ属（Ｔaxus）に属す
る植物の培養細胞の増殖を高める方法を提供することに
よって上記課題を解決する。
【０００５】植物組織培養においてジベレリン（以下
「ＧＡ」と略す）は原基が形成された後成長調節剤とし
て利用されるのが一般的である（Ｄ．Ｃ．Ｗ．Ｂrown,
Ｔ．Ａ．Ｔhorpe.「Ｃell Ｃulture and Ｓomatic Ｃ
ell Ｇenetics of Ｐlants 」，Ｅd.Ｉ．Ｋ．Ｖasil,
Ｖol.l, Ｐ１８−２６，Ａcademic Ｐress, Ｉnc.,１９
８４）。ワタの未熱胚珠の培養でＧＡにより繊維形成が
起こることは良く知られた例である（Ｃ．Ａ．Ｂeasle
y, 「Ｃell Ｃulture and Ｓomatic Ｃell Ｇenetics
of Ｐlants 」，Ｅd.Ｉ．Ｋ．Ｖasil, Ｖol.l, Ｐ２
３２−４０，Ａcademic Ｐress, Ｉnc.,１９８４）。ま
た、胚珠培養以外にも成長点培養や茎頂培養にも用いら
れる例は多い。しかしながら、本発明のごとく液体培養
での成長促進に利用された例は、従来技術文献に未載で
ある。
「ＧＡ」と略す）は原基が形成された後成長調節剤とし
て利用されるのが一般的である（Ｄ．Ｃ．Ｗ．Ｂrown,
Ｔ．Ａ．Ｔhorpe.「Ｃell Ｃulture and Ｓomatic Ｃ
ell Ｇenetics of Ｐlants 」，Ｅd.Ｉ．Ｋ．Ｖasil,
Ｖol.l, Ｐ１８−２６，Ａcademic Ｐress, Ｉnc.,１９
８４）。ワタの未熱胚珠の培養でＧＡにより繊維形成が
起こることは良く知られた例である（Ｃ．Ａ．Ｂeasle
y, 「Ｃell Ｃulture and Ｓomatic Ｃell Ｇenetics
of Ｐlants 」，Ｅd.Ｉ．Ｋ．Ｖasil, Ｖol.l, Ｐ２
３２−４０，Ａcademic Ｐress, Ｉnc.,１９８４）。ま
た、胚珠培養以外にも成長点培養や茎頂培養にも用いら
れる例は多い。しかしながら、本発明のごとく液体培養
での成長促進に利用された例は、従来技術文献に未載で
ある。
【０００６】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
液体培養の基本培地にはＳhenk &Ｈildebrandt培地（以
下、「ＳＨ」培地と略す）、Ｍurashige & Ｓkoog培
地、ＧamborgのＢ５培地、Ｗhite培地、Ｎitsch & Ｎit
sch 培地、Ｎagata & Ｔakebe 培地およびＷood Ｐlant
培地などを用いることができるが、本発明ではこの中で
もＳＨ培地を用いて調製される培地が好ましい。
液体培養の基本培地にはＳhenk &Ｈildebrandt培地（以
下、「ＳＨ」培地と略す）、Ｍurashige & Ｓkoog培
地、ＧamborgのＢ５培地、Ｗhite培地、Ｎitsch & Ｎit
sch 培地、Ｎagata & Ｔakebe 培地およびＷood Ｐlant
培地などを用いることができるが、本発明ではこの中で
もＳＨ培地を用いて調製される培地が好ましい。
【０００７】これらの基本培地にさらに植物ホルモンと
してジベレリン（以下「ＧＡ」と略す）、例えば、２，
４ａ，７−トリヒドロキシ−１−メチル−８−メチレン
ジブ−３−エン−１，１０−カルボン酸１−４ラクトン
（ＧＡ3 ）および２，４ａ−ジヒドロキシ−１−メチル
−８−メチレンジブ−３−エン−１，１０−カルボン酸
１−４ラクトン（ＧＡ4 ）などを用いる。本発明で使用
される培地におけるＧＡの添加濃度は０．１mg／ｌから
５mg／ｌであるが、中でも特に１mg／ｌが望ましい。そ
の他の植物ホルモンとして、オーキシン類、たとえば１
−ナフタレン酢酸、インドール−３−酢酸、インドール
−３−酪酸、および２，４−ジクロロフェノキシ酢酸な
ど；サイトカイニン類、例えばベンジルアデニン（以下
「ＢＡ」と略す）、ゼアチンおよび６−フルフリルアミ
ノプリンなどを用いることができる。
してジベレリン（以下「ＧＡ」と略す）、例えば、２，
４ａ，７−トリヒドロキシ−１−メチル−８−メチレン
ジブ−３−エン−１，１０−カルボン酸１−４ラクトン
（ＧＡ3 ）および２，４ａ−ジヒドロキシ−１−メチル
−８−メチレンジブ−３−エン−１，１０−カルボン酸
１−４ラクトン（ＧＡ4 ）などを用いる。本発明で使用
される培地におけるＧＡの添加濃度は０．１mg／ｌから
５mg／ｌであるが、中でも特に１mg／ｌが望ましい。そ
の他の植物ホルモンとして、オーキシン類、たとえば１
−ナフタレン酢酸、インドール−３−酢酸、インドール
−３−酪酸、および２，４−ジクロロフェノキシ酢酸な
ど；サイトカイニン類、例えばベンジルアデニン（以下
「ＢＡ」と略す）、ゼアチンおよび６−フルフリルアミ
ノプリンなどを用いることができる。
【０００８】本発明では、カルスおよび培養細胞を既に
公知である方法（国際公開ＷＯ９２／１３９６１号明細
書参照）に従ってタキサス・ブレビフォーリア（Ｔaxus
brevifolia ）、タキサス・バッカータ（Ｔaxus bacca
ta）、タキサス・カスピダータ（Ｔaxus cuspidata）の
胚乳を用いて固形培地上でカルスを誘導し、増殖したも
のを用いる。増殖したカルスを本発明の培地、例えば基
本培地としてＳＨ培地を用いＧＡおよび上記の植物ホル
モンを加えた培地に移して増殖させる。液体培地中の初
期カルス濃度は液体培地１ｌに対し約５ｇから約１５ｇ
（新鮮重）程度が望ましい。
公知である方法（国際公開ＷＯ９２／１３９６１号明細
書参照）に従ってタキサス・ブレビフォーリア（Ｔaxus
brevifolia ）、タキサス・バッカータ（Ｔaxus bacca
ta）、タキサス・カスピダータ（Ｔaxus cuspidata）の
胚乳を用いて固形培地上でカルスを誘導し、増殖したも
のを用いる。増殖したカルスを本発明の培地、例えば基
本培地としてＳＨ培地を用いＧＡおよび上記の植物ホル
モンを加えた培地に移して増殖させる。液体培地中の初
期カルス濃度は液体培地１ｌに対し約５ｇから約１５ｇ
（新鮮重）程度が望ましい。
【０００９】本発明の組織培養における培養温度として
は、通常は約１０℃から約３０℃、この中でも特に２０
℃から２５℃が好適であり、培養温度を１０℃未満にす
ると増殖速度は低下し、培養温度を３５℃以上にすると
増殖速度の低下および細胞の褐変死が生じる。培養液は
振とうする方が良く、静止したままでは成育は阻害され
る。振とうは激しすぎても成長は阻害され、ストローク
半径１０ないし１５cmでは１００ないし２００rpm の速
度で振とうするのが好ましい。ｐＨは４ないし７の範囲
が好ましく７以上では著しい成育の阻害が起こる。
は、通常は約１０℃から約３０℃、この中でも特に２０
℃から２５℃が好適であり、培養温度を１０℃未満にす
ると増殖速度は低下し、培養温度を３５℃以上にすると
増殖速度の低下および細胞の褐変死が生じる。培養液は
振とうする方が良く、静止したままでは成育は阻害され
る。振とうは激しすぎても成長は阻害され、ストローク
半径１０ないし１５cmでは１００ないし２００rpm の速
度で振とうするのが好ましい。ｐＨは４ないし７の範囲
が好ましく７以上では著しい成育の阻害が起こる。
【００１０】本発明の方法においては、培養終了後培養
液をナイロンメッシュなどのフィルターを用い、ろ過に
より培養細胞を分離し、次に分離した培養細胞より目的
とするタキソールを有機溶媒による抽出等の方法により
分離することができる。
液をナイロンメッシュなどのフィルターを用い、ろ過に
より培養細胞を分離し、次に分離した培養細胞より目的
とするタキソールを有機溶媒による抽出等の方法により
分離することができる。
【００１１】
【実施例】以下、本発明の方法を実施例により更に具体
的に説明する。実施例１ タイヘイヨウイチイ（Ｔaxus brevifolia NUTT. 、以下
「ＰＹ」と略す）の仮種皮を取り除いた冷蔵種子を７０
％Ｗ／Ｗエタノール水溶液に１分間浸漬後、有効塩素濃
度１％次亜塩素酸ナトリウム水溶液に２０分間浸漬し、
滅菌水で３回洗浄して表面を滅菌した。滅菌後、無菌下
で外種皮を除き胚乳を得た。１０mg／ｌのＢＡ、１mg／
ｌのＧＡ3 を含み、ｐＨを５．８に調整したＳＨ培地
（０．２５％ゲルライト（商標）により固化）に植え付
け、２０℃で培養し約２カ月後にカルスを得た。このカ
ルスを均等に二分し、一方を５mg／ｌＮＡＡと１mg／ｌ
ＧＡ 3 を含むｐＨを５．８に調整したＳＨ培地（液体培
地１００ml）に継代し、他方は５mg／ｌＮＡＡのみを含
み、ｐＨを５．８に調整したＳＨ培地（液体培地１００
ml）に継代した（対照実験１）。両者を１００rpm の速
度で振盪培養し、２０℃で３７日間培養後、培養細胞を
培地から分離し回収量を求めた。また、両者の細胞から
塩化メチレン−メタノール１：１の混合溶媒を用いてタ
キソールを抽出し、ＨＰＬＣにてタキソールの含有量を
測定した。結果を表１に示す。
的に説明する。実施例１ タイヘイヨウイチイ（Ｔaxus brevifolia NUTT. 、以下
「ＰＹ」と略す）の仮種皮を取り除いた冷蔵種子を７０
％Ｗ／Ｗエタノール水溶液に１分間浸漬後、有効塩素濃
度１％次亜塩素酸ナトリウム水溶液に２０分間浸漬し、
滅菌水で３回洗浄して表面を滅菌した。滅菌後、無菌下
で外種皮を除き胚乳を得た。１０mg／ｌのＢＡ、１mg／
ｌのＧＡ3 を含み、ｐＨを５．８に調整したＳＨ培地
（０．２５％ゲルライト（商標）により固化）に植え付
け、２０℃で培養し約２カ月後にカルスを得た。このカ
ルスを均等に二分し、一方を５mg／ｌＮＡＡと１mg／ｌ
ＧＡ 3 を含むｐＨを５．８に調整したＳＨ培地（液体培
地１００ml）に継代し、他方は５mg／ｌＮＡＡのみを含
み、ｐＨを５．８に調整したＳＨ培地（液体培地１００
ml）に継代した（対照実験１）。両者を１００rpm の速
度で振盪培養し、２０℃で３７日間培養後、培養細胞を
培地から分離し回収量を求めた。また、両者の細胞から
塩化メチレン−メタノール１：１の混合溶媒を用いてタ
キソールを抽出し、ＨＰＬＣにてタキソールの含有量を
測定した。結果を表１に示す。
【００１２】実施例２ 実施例１においてヨーロッパイチイ（Ｔaxus baccata L
INN 、以下「ＥＹ」と略す）をタイヘイヨウイチイの代
わりに使用し、４２日間培養した以外は対照実験（対照
実験２）も含めて同様に行った。結果を表１に示す。
INN 、以下「ＥＹ」と略す）をタイヘイヨウイチイの代
わりに使用し、４２日間培養した以外は対照実験（対照
実験２）も含めて同様に行った。結果を表１に示す。
【００１３】実施例３ 実施例１においてイチイ（Ｔaxus cuspidata SIEB. et
ZUCC. 、以下「ＪＹ」と略す）をタイヘイヨウイチイの
代わりに使用し、４８日間培養した以外は対照実験（対
照実験３）も含め同様に行った。結果を表１に示す。
ZUCC. 、以下「ＪＹ」と略す）をタイヘイヨウイチイの
代わりに使用し、４８日間培養した以外は対照実験（対
照実験３）も含め同様に行った。結果を表１に示す。
【００１４】実施例４ 実施例１においてＧＡ3 の代わりにＧＡ4 を使用した以
外は対照実験（対照実験４）も含め同様に行った。結果
を表１に示す。
外は対照実験（対照実験４）も含め同様に行った。結果
を表１に示す。
【００１５】
【表１】
【００１６】
【発明の効果】本発明によれば、イチイ属植物の組織培
養によるタキソールの生産方法であって、培養細胞の効
率のよい増殖方法を含んでなる方法が提供される。この
結果は、イチイ属植物の組織培養用培地としてジベレリ
ン類を含む液体培地を使用することにより達成される。
養によるタキソールの生産方法であって、培養細胞の効
率のよい増殖方法を含んでなる方法が提供される。この
結果は、イチイ属植物の組織培養用培地としてジベレリ
ン類を含む液体培地を使用することにより達成される。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 高見 正道 神奈川県川崎市中原区井田1618番地 新日 本製鐵株式会社先端技術研究所内 (72)発明者 田原 誠 神奈川県川崎市中原区井田1618番地 新日 本製鐵株式会社先端技術研究所内 (72)発明者 坂本 哲雄 神奈川県川崎市中原区井田1618番地 新日 本製鐵株式会社先端技術研究所内
Claims (3)
- 【請求項１】 イチイ属（Ｔaxus）植物の組織培養をジ
ベレリン類含有栄養液体培地で行い、得られた培養細胞
からタキソールを採取することを特徴とするタキソール
の生産方法。 - 【請求項２】 ジベレリン類が、ＧＡ3 （２，４ａ，７
−トリヒドロキシ−１−メチル−８−メチレンジブ−３
−エン−１，１０−カルボン酸１→４ラクトン）である
請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 ジベレリン類が、ＧＡ4 （２，４ａ−ジ
ヒドロキシ−１−メチル−８−メチレンジブ−３−エン
−１，１０−カルボン酸１→４ラクトン）である請求項
１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5087561A JPH06296493A (ja) | 1993-04-14 | 1993-04-14 | タキソールの生産方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5087561A JPH06296493A (ja) | 1993-04-14 | 1993-04-14 | タキソールの生産方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06296493A true JPH06296493A (ja) | 1994-10-25 |
Family
ID=13918409
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5087561A Withdrawn JPH06296493A (ja) | 1993-04-14 | 1993-04-14 | タキソールの生産方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06296493A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7264951B1 (en) | 1992-02-20 | 2007-09-04 | Phyton, Inc. | Enhanced production of taxol and taxanes by cell cultures of Taxus species |
| CN102640710A (zh) * | 2012-05-21 | 2012-08-22 | 上海应用技术学院 | 一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法及其所用的培养基 |
| CN102657091A (zh) * | 2012-05-21 | 2012-09-12 | 上海应用技术学院 | 一种南方红豆杉胚离体成苗技术及其所用的培养基 |
| CN102687667A (zh) * | 2012-06-19 | 2012-09-26 | 湖南农业大学 | 一种红豆杉成熟胚乳诱导单倍体胚乳愈伤组织的方法 |
| JP2012217441A (ja) * | 2011-04-14 | 2012-11-12 | Housetec Inc | タキサン類の生産方法、およびカルス誘導方法 |
| US8338143B2 (en) | 1996-05-24 | 2012-12-25 | Phyton Holdings, Llc | Enhanced production of paclitaxel and taxanes by cell cultures of Taxus species |
-
1993
- 1993-04-14 JP JP5087561A patent/JPH06296493A/ja not_active Withdrawn
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7264951B1 (en) | 1992-02-20 | 2007-09-04 | Phyton, Inc. | Enhanced production of taxol and taxanes by cell cultures of Taxus species |
| US8338143B2 (en) | 1996-05-24 | 2012-12-25 | Phyton Holdings, Llc | Enhanced production of paclitaxel and taxanes by cell cultures of Taxus species |
| JP2012217441A (ja) * | 2011-04-14 | 2012-11-12 | Housetec Inc | タキサン類の生産方法、およびカルス誘導方法 |
| CN102640710A (zh) * | 2012-05-21 | 2012-08-22 | 上海应用技术学院 | 一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法及其所用的培养基 |
| CN102657091A (zh) * | 2012-05-21 | 2012-09-12 | 上海应用技术学院 | 一种南方红豆杉胚离体成苗技术及其所用的培养基 |
| CN102687667A (zh) * | 2012-06-19 | 2012-09-26 | 湖南农业大学 | 一种红豆杉成熟胚乳诱导单倍体胚乳愈伤组织的方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20000704 |