JPH0669B2 - 光学活性（ｒ）−４−フエニル−２−ブタノ−ルの製造法 - Google Patents
光学活性（ｒ）−４−フエニル−２−ブタノ−ルの製造法Info
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- JPH0669B2 JPH0669B2 JP15709086A JP15709086A JPH0669B2 JP H0669 B2 JPH0669 B2 JP H0669B2 JP 15709086 A JP15709086 A JP 15709086A JP 15709086 A JP15709086 A JP 15709086A JP H0669 B2 JPH0669 B2 JP H0669B2
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、４−フエニル−２−ブタノンを(R)−４−フ
エニル−２−ブタノールに不斉的に還元する能力を有す
るキヤンデイダ属、ゲオトリカム属、ナドソニア属、ピ
キヤ属、サツカロマイセス属、ステフアノアスカス属、
トルロピシス属に属する微生物群から選ばれた微生物に
４−フエニル−２−ブタノンを接触せしめ、生成する
(R)−４−フエニル−２−ブタノールを採取することを
特徴とする(R)−４−フエニル−２−ブタノールの製造
法に関するものである。
エニル−２−ブタノールに不斉的に還元する能力を有す
るキヤンデイダ属、ゲオトリカム属、ナドソニア属、ピ
キヤ属、サツカロマイセス属、ステフアノアスカス属、
トルロピシス属に属する微生物群から選ばれた微生物に
４−フエニル−２−ブタノンを接触せしめ、生成する
(R)−４−フエニル−２−ブタノールを採取することを
特徴とする(R)−４−フエニル−２−ブタノールの製造
法に関するものである。
光学活性な(R)−４−フエニル−２−ブタノールは光学
活性を必要とする医薬、農薬、動物薬、香料などの合成
原料として極めて有用な物質である。
活性を必要とする医薬、農薬、動物薬、香料などの合成
原料として極めて有用な物質である。
光学活性な４−フエニル−２−ブタノールの製法につい
て、ピツカード（R.H.Pickard）らによりラセミ体の４
−フエニル−２−ブタノールのフタル酸エステルを、シ
ンコニジンやブルシン等で光学分割する方法が発表され
ている〔ジヤーナル・オブ・ケミカル・ソサイテイー
（Journal Of Chemical Society）1115頁1914年〕が、
この方法は煩雑であり、かつ収率も悪く工業的製法とし
ては不向きである。
て、ピツカード（R.H.Pickard）らによりラセミ体の４
−フエニル−２−ブタノールのフタル酸エステルを、シ
ンコニジンやブルシン等で光学分割する方法が発表され
ている〔ジヤーナル・オブ・ケミカル・ソサイテイー
（Journal Of Chemical Society）1115頁1914年〕が、
この方法は煩雑であり、かつ収率も悪く工業的製法とし
ては不向きである。
そこで本発明者らは、安価な４−フエニル−２−ブタノ
ンを原料とし、微生物的な不斉還元反応により光学活性
な(R)−４−フエニル−２−ブタノールの生産を計画
し、研究を行つた。その結果、種々の微生物が(R)−４
−フエニル−２−ブタノールに効率良く変換することを
見い出し、本発明を完成した。
ンを原料とし、微生物的な不斉還元反応により光学活性
な(R)−４−フエニル−２−ブタノールの生産を計画
し、研究を行つた。その結果、種々の微生物が(R)−４
−フエニル−２−ブタノールに効率良く変換することを
見い出し、本発明を完成した。
本発明に用いる４−フエニル−２−ブタノンを不斉還元
し、(R)−４−フエニル−２−ブタノールに変換する微
生物は以下に説明する方法によつて見い出すことができ
る。
し、(R)−４−フエニル−２−ブタノールに変換する微
生物は以下に説明する方法によつて見い出すことができ
る。
例えばグルコース４０ｇ、イーストエキス３ｇ、（ＮＨ
４）２ＨＰＯ４ １３ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ ７ｇ、ＭｇＳ
Ｏ４・７Ｈ２Ｏ ０．８ｇ、ＺｎＳＯ４・７２Ｏ ６０
mg、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ９０mg、ＣｕＳＯ４・５Ｈ
２Ｏ ５mg、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ １０mg、ＮａＣｌ
０．１ｇ（１当り）の組成からなるＡ培地３０ml含
有５００ml坂口フラスコに微生物を植え、３０℃で２日
間振とう培養する。その後、遠心分離によつて菌体を集
め、４−フエニル−２−ブタノン0.5％、グルコース５
％を含有するリン酸緩衝液（pH6.0）１５mlに懸濁し、5
00ml坂口フラスコ内で１〜８日間３０℃で振とう反応さ
す。その後、等量の酢酸エチルを加え抽出を行ない生成
した４−フエニル−２−ブタノールをガスクロマトグラ
フイー（カラム：シリコンＯＶ−２１０、φ0.3×200c
m、カラム温度１５０℃、Ｎ２ガス0.5気圧）で分析す
る。一方、４−フエニル−２−ブタノールの光学純度測
定は、酢酸エチルを除去後、ｐ−トルエンスルフオニル
クロライド／ピリジン中でトシル化を行ない、これを高
速液体クロマトグラフイー（カラム：日本分光（株）
製、Chiralcel−OB、溶出溶剤ヘキサン−イソプロパノ
ール（３０：１）、流速1.5ml／min、検出２４０nm）に
より(S)体が１７分(R)体が２７分の保持時間で分離し、
これより光学純度を決定することができる。
４）２ＨＰＯ４ １３ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ ７ｇ、ＭｇＳ
Ｏ４・７Ｈ２Ｏ ０．８ｇ、ＺｎＳＯ４・７２Ｏ ６０
mg、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ９０mg、ＣｕＳＯ４・５Ｈ
２Ｏ ５mg、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ １０mg、ＮａＣｌ
０．１ｇ（１当り）の組成からなるＡ培地３０ml含
有５００ml坂口フラスコに微生物を植え、３０℃で２日
間振とう培養する。その後、遠心分離によつて菌体を集
め、４−フエニル−２−ブタノン0.5％、グルコース５
％を含有するリン酸緩衝液（pH6.0）１５mlに懸濁し、5
00ml坂口フラスコ内で１〜８日間３０℃で振とう反応さ
す。その後、等量の酢酸エチルを加え抽出を行ない生成
した４−フエニル−２−ブタノールをガスクロマトグラ
フイー（カラム：シリコンＯＶ−２１０、φ0.3×200c
m、カラム温度１５０℃、Ｎ２ガス0.5気圧）で分析す
る。一方、４−フエニル−２−ブタノールの光学純度測
定は、酢酸エチルを除去後、ｐ−トルエンスルフオニル
クロライド／ピリジン中でトシル化を行ない、これを高
速液体クロマトグラフイー（カラム：日本分光（株）
製、Chiralcel−OB、溶出溶剤ヘキサン−イソプロパノ
ール（３０：１）、流速1.5ml／min、検出２４０nm）に
より(S)体が１７分(R)体が２７分の保持時間で分離し、
これより光学純度を決定することができる。
本発明に使用しうる微生物として、例えばキヤンデイダ
・パラルゴーザ（Candida pararugosa）ＩＦＯ ０９６
６、ゲオトリカム・キヤンデイダム（Geotrichum candi
dum）ＣＢＳ １８７．６７、ナドソニア・エロンガタ
（Nadsonia elongata）ＩＦＯ ０６６５、ピキヤ・フ
アリノーサ（Pichia farinosa）ＩＦＯ ０９９１、サ
ツカロマイコピシス・リポリテイカ（Saccharomycopsis
lipolytica）ＩＦＯ ０７１７、ステフアノアスカス
・シフエリイ（Stephanoascus ciferrii）ＩＦＯ １８
５４、トルロピシス・グロツペンギエゼリイ（Torulops
is gropengiesseri）ＩＦＯ ０６５９などがある。
・パラルゴーザ（Candida pararugosa）ＩＦＯ ０９６
６、ゲオトリカム・キヤンデイダム（Geotrichum candi
dum）ＣＢＳ １８７．６７、ナドソニア・エロンガタ
（Nadsonia elongata）ＩＦＯ ０６６５、ピキヤ・フ
アリノーサ（Pichia farinosa）ＩＦＯ ０９９１、サ
ツカロマイコピシス・リポリテイカ（Saccharomycopsis
lipolytica）ＩＦＯ ０７１７、ステフアノアスカス
・シフエリイ（Stephanoascus ciferrii）ＩＦＯ １８
５４、トルロピシス・グロツペンギエゼリイ（Torulops
is gropengiesseri）ＩＦＯ ０６５９などがある。
これらの微生物の培養には、通常これらの微生物が資化
しうる栄養源であれば何でも使用しうる。例えばグルコ
ース、シユクロース等の炭水化物；エタノール・グルセ
ロール等のアルコール；パラフイン等の炭化水素；酢
酸、プロピオン酸などの有機酸；大豆油等の炭素源また
はこれらの混合物、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、
コーンステープリカー、硫安、アンモニア等の含窒素無
機、有機栄養源、リン酸塩、マグネシウム、鉄、マンガ
ン、カリ等の無機栄養源、およびビオチン、チアミン等
のビタミン類を適宜配合した通常の培地が用いられる。
培養方法としては栄養培地のphを4.0〜9.5の範囲で好気
的に２０〜４０℃の範囲で１〜５日間培養する。
しうる栄養源であれば何でも使用しうる。例えばグルコ
ース、シユクロース等の炭水化物；エタノール・グルセ
ロール等のアルコール；パラフイン等の炭化水素；酢
酸、プロピオン酸などの有機酸；大豆油等の炭素源また
はこれらの混合物、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、
コーンステープリカー、硫安、アンモニア等の含窒素無
機、有機栄養源、リン酸塩、マグネシウム、鉄、マンガ
ン、カリ等の無機栄養源、およびビオチン、チアミン等
のビタミン類を適宜配合した通常の培地が用いられる。
培養方法としては栄養培地のphを4.0〜9.5の範囲で好気
的に２０〜４０℃の範囲で１〜５日間培養する。
還元反応の方法としては、培養液そのまま、あるいは遠
心分離等により菌体を分離し、これをリン酸緩衝液ある
いは水等に再懸濁したものに４−フエニル−２−ブタノ
ンを添加する方法とがある。この反応の際、グルコー
ス、シユクロース、グリセロール等の炭素源をエネルギ
ー源として添加するとよい。また菌体は生菌体のままで
もよいし、アセトン処理、凍結乾燥等をほどこしたもの
でも良い。また菌体を水不溶性担体に固定化して用いる
こともできる。
心分離等により菌体を分離し、これをリン酸緩衝液ある
いは水等に再懸濁したものに４−フエニル−２−ブタノ
ンを添加する方法とがある。この反応の際、グルコー
ス、シユクロース、グリセロール等の炭素源をエネルギ
ー源として添加するとよい。また菌体は生菌体のままで
もよいし、アセトン処理、凍結乾燥等をほどこしたもの
でも良い。また菌体を水不溶性担体に固定化して用いる
こともできる。
４−フエニル−２−ブタノンはそのまま、あるいは反応
に影響を与えないような有機溶剤、油脂等に溶解して反
応の始めから一括、あるいは分割添加しても良い。反応
はph5〜9の範囲で１０〜６０℃の温度で１〜１２０時間
撹拌下で行なう。
に影響を与えないような有機溶剤、油脂等に溶解して反
応の始めから一括、あるいは分割添加しても良い。反応
はph5〜9の範囲で１０〜６０℃の温度で１〜１２０時間
撹拌下で行なう。
反応によつて生成した(R)−４−フエニル−２−ブタノ
ールの採取は、反応液から直接あるいは菌体分離後、酢
酸エチル、ヘキサン等の溶剤で抽出し、脱水後蒸留する
ことにより高純度の(R)−４−フエニル−２−ブタノー
ルを容易に得ることができる。
ールの採取は、反応液から直接あるいは菌体分離後、酢
酸エチル、ヘキサン等の溶剤で抽出し、脱水後蒸留する
ことにより高純度の(R)−４−フエニル−２−ブタノー
ルを容易に得ることができる。
以下、本発明を具体的に実施例にて説明するが、本発明
はこれら実施例のみに限定されるものでない。
はこれら実施例のみに限定されるものでない。
実施例１ 前記Ａ培地３０mlを５００ml容坂口フラスコに入れ、殺
菌後、表１に示す微生物をそれぞれ植菌した。３０℃で
２日間好気的に振とう培養を行つた。この培養液から菌
体を遠心分離によつて集め、４−フエニル−２−ブタノ
ン0.5％、グルコース５％含有0.1Ｍ−リン酸緩衝液（pH
6.0）１５mlに懸濁し、５００ml坂口フラスコに入れ３
０℃、７２時間振とう反応させた。反応後、反応液から
等量の酢酸エチルで(R)−４−フエニル−２−ブタノー
ルを抽出し、ガスクロマトグラフイーで生成量を分析し
た。次に、酢酸エチルを除去後トシル化し、これをヘキ
サンで抽出し、高速液体クロマトグラフイーにて光学純
度を測定した。その結果を表１に示す。
菌後、表１に示す微生物をそれぞれ植菌した。３０℃で
２日間好気的に振とう培養を行つた。この培養液から菌
体を遠心分離によつて集め、４−フエニル−２−ブタノ
ン0.5％、グルコース５％含有0.1Ｍ−リン酸緩衝液（pH
6.0）１５mlに懸濁し、５００ml坂口フラスコに入れ３
０℃、７２時間振とう反応させた。反応後、反応液から
等量の酢酸エチルで(R)−４−フエニル−２−ブタノー
ルを抽出し、ガスクロマトグラフイーで生成量を分析し
た。次に、酢酸エチルを除去後トシル化し、これをヘキ
サンで抽出し、高速液体クロマトグラフイーにて光学純
度を測定した。その結果を表１に示す。
実施例２ Ａ培地３を含む５容ジヤーフアーメンターにピキヤ
・フアリノーサＩＦＯ ０９９１を植菌し、３０℃、通
気１vvm、撹拌５００rpmにて４８時間培養した。培養終
了後、菌体を遠心分離により集め、1.5の水に懸濁
し、４−フエニル−２−ブタノンを7.5ｇ、グルコース
を７５ｇ添加し、pHをＮａＯＨで6.0に保ちながら３０
℃、撹拌２００rpmで７２時間反応させた。
・フアリノーサＩＦＯ ０９９１を植菌し、３０℃、通
気１vvm、撹拌５００rpmにて４８時間培養した。培養終
了後、菌体を遠心分離により集め、1.5の水に懸濁
し、４−フエニル−２−ブタノンを7.5ｇ、グルコース
を７５ｇ添加し、pHをＮａＯＨで6.0に保ちながら３０
℃、撹拌２００rpmで７２時間反応させた。
反応終了後、等量の酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エ
チル層を無水芒硝で脱水したのち減圧下脱溶剤し、油状
物質8.5ｇを得た。これを蒸留（１３０〜１３５℃／１
４mmHg）し、無色オイル状の(R)−４−フエニル−２−
ブタノール6.2ｇを得た。
チル層を無水芒硝で脱水したのち減圧下脱溶剤し、油状
物質8.5ｇを得た。これを蒸留（１３０〜１３５℃／１
４mmHg）し、無色オイル状の(R)−４−フエニル−２−
ブタノール6.2ｇを得た。
その比旋光度は （ｃ＝５ベンゼン）を示し、そのトシル体の高速液体ク
ロマトグラフイー分析による光学純度は９９％e.e.であ
つた。
ロマトグラフイー分析による光学純度は９９％e.e.であ
つた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 7/22 Ｃ１２Ｒ 1:84） (Ｃ１２Ｐ 7/22 Ｃ１２Ｒ 1:88）
Claims (2)
- 【請求項１】４−フエニル−２−ブタノンを(R)−４−
フエニル−２−ブタノールに不斉的に還元する能力を有
するキヤンデイダ属、ゲオトリカム属、ナドソニア属、
ピキヤ属、サツカロマイコピシス属、ステフアノアスカ
ス属、トルロピシス属に属する微生物から選ばれた微生
物に４−フエニル−２−ブタノンを接触せしめ、生成す
る(R)−４−フエニル−２−ブタノールを採取すること
を特徴とする(R)−４−フエニル−２−ブタノールの製
造法。 - 【請求項２】微生物がキヤンデイダ・パラルゴーザ、ゲ
オトリカム・キヤンデイダム、ナドソニア・エロンガ
タ、ピキヤ・フアリノーサ、サツカロマイコピシス・リ
ポリテイカ、ステフアノアスカス・シフエリイ、トルロ
ピシス・グロペンギエゼリイである特許請求の範囲第１
項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15709086A JPH0669B2 (ja) | 1986-07-03 | 1986-07-03 | 光学活性（ｒ）−４−フエニル−２−ブタノ−ルの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15709086A JPH0669B2 (ja) | 1986-07-03 | 1986-07-03 | 光学活性（ｒ）−４−フエニル−２−ブタノ−ルの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6312288A JPS6312288A (ja) | 1988-01-19 |
| JPH0669B2 true JPH0669B2 (ja) | 1994-01-05 |
Family
ID=15642027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15709086A Expired - Fee Related JPH0669B2 (ja) | 1986-07-03 | 1986-07-03 | 光学活性（ｒ）−４−フエニル−２−ブタノ−ルの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0669B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3529904B2 (ja) * | 1995-06-19 | 2004-05-24 | 鐘淵化学工業株式会社 | 光学活性１−ハロ−３−アミノ−４−フェニル−２−ブタノール誘導体の製造法 |
| GB2377455A (en) | 2001-02-09 | 2003-01-15 | Univ Hull | Method of culturing crypthecodinium cohnii |
| JP4736654B2 (ja) * | 2005-09-09 | 2011-07-27 | 住友化学株式会社 | 還元酵素遺伝子及びその利用 |
| JP4772434B2 (ja) * | 2005-09-09 | 2011-09-14 | 住友化学株式会社 | 光学活性２−ヒドロキシ−５−（４−メトキシフェニル）−ペンタン酸エステルの製造方法 |
-
1986
- 1986-07-03 JP JP15709086A patent/JPH0669B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6312288A (ja) | 1988-01-19 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |