JPH0654318B2 - 還元性物質の定量方法及びその定量用試薬 - Google Patents
還元性物質の定量方法及びその定量用試薬Info
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- JPH0654318B2 JPH0654318B2 JP61038554A JP3855486A JPH0654318B2 JP H0654318 B2 JPH0654318 B2 JP H0654318B2 JP 61038554 A JP61038554 A JP 61038554A JP 3855486 A JP3855486 A JP 3855486A JP H0654318 B2 JPH0654318 B2 JP H0654318B2
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は還元性物質の定量方法ならびにその定量用試薬
に関する。
に関する。
生体試料中の還元性物質、例えばアスコルビン酸などの
測定は診断学上重要である。
測定は診断学上重要である。
また酸化還元酵素が関与する多数の反応によつて生成さ
れる還元性物質、例えばニコチンアミドアデニンジヌク
レオチド（ＮＡＤＨ）またはニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチド燐酸（ＮＡＤＰＨ）あるいはスーパーオキ
サイド（▲Ｏ- 2▼）等を測定することにより酵素活性や
基質となる物質の量を知ることは、疾病の診断や治療効
果あるいは疾病の機序を知る上で非常に重要である。
れる還元性物質、例えばニコチンアミドアデニンジヌク
レオチド（ＮＡＤＨ）またはニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチド燐酸（ＮＡＤＰＨ）あるいはスーパーオキ
サイド（▲Ｏ- 2▼）等を測定することにより酵素活性や
基質となる物質の量を知ることは、疾病の診断や治療効
果あるいは疾病の機序を知る上で非常に重要である。
従来、血清又は尿などの生体試料中におけるこれらの還
元性物質の定量法としては簡便な比色定量法が一般に用
いられている。即ちその一つの方法としては、試料中の
還元性物質によりテトラゾリウム塩を環元し、ホルマザ
ンに変換して、これを比色定量する方法が広く用いられ
ている。しかし、この方法は感度が低く、ホルマザンの
吸着性があるなどの問題を有している。
元性物質の定量法としては簡便な比色定量法が一般に用
いられている。即ちその一つの方法としては、試料中の
還元性物質によりテトラゾリウム塩を環元し、ホルマザ
ンに変換して、これを比色定量する方法が広く用いられ
ている。しかし、この方法は感度が低く、ホルマザンの
吸着性があるなどの問題を有している。
また他の方法として、還元性物質（ＮＡＤＨ）により３
価の鉄イオンを２価の鉄イオンに還元し、これに特異的
な金属指示薬（フエロジン）を作用させて、有色のキレ
ート化合物を形成させ、これを測定することにより、還
元性物質（ＮＡＤＨ）の量を測定する方法も知られてい
る（クリニカルケミストリイ，１８巻６９５頁，１９７
２年）。しかしこの方法もかならずしも感度の高いもの
ではなく、微量成分の定量法としては満足のいくもので
はなかつた。
価の鉄イオンを２価の鉄イオンに還元し、これに特異的
な金属指示薬（フエロジン）を作用させて、有色のキレ
ート化合物を形成させ、これを測定することにより、還
元性物質（ＮＡＤＨ）の量を測定する方法も知られてい
る（クリニカルケミストリイ，１８巻６９５頁，１９７
２年）。しかしこの方法もかならずしも感度の高いもの
ではなく、微量成分の定量法としては満足のいくもので
はなかつた。
また鉄以外の金属イオンは水溶液中で酸化型として安定
に存在することが難しいことから、還元性物質の定量に
使用された報告は全くなかつた。
に存在することが難しいことから、還元性物質の定量に
使用された報告は全くなかつた。
本発明者らは斯かる問題点を克服すべく種々検討を行つ
た結果、コバルト錯体が水溶液中で安定に存在し、かつ
金属指示薬と組み合せて用いることにより、極めて高感
度に還元性物質を定量できることを見い出し、本発明を
完成した。
た結果、コバルト錯体が水溶液中で安定に存在し、かつ
金属指示薬と組み合せて用いることにより、極めて高感
度に還元性物質を定量できることを見い出し、本発明を
完成した。
すなわち、本発明は還元性コバルト錯体を還元性物質と
反応させて還元性コバルト錯体に変換せしめ、次いで該
還元性コバルト錯体と金属指示薬とを作用せしめ生成し
た有色性錯体を測定することを特徴とする還元性物質の
定量方法を提供するものである。
反応させて還元性コバルト錯体に変換せしめ、次いで該
還元性コバルト錯体と金属指示薬とを作用せしめ生成し
た有色性錯体を測定することを特徴とする還元性物質の
定量方法を提供するものである。
さらに本発明は酸化型コバルト錯体及び金属指元薬を含
有する還元性物質定量用試薬を提供するものである。
有する還元性物質定量用試薬を提供するものである。
本発明定量方法は、次の反応式(I)によつて示される。
すなわち、被検物質である還元性物質と酸化型コバルト
錯体を反応せしめ、生成した還元性コバルト錯体に金属
指元薬を反応させて生成する有色性錯体の量を測定する
ことにより行なわれる。
錯体を反応せしめ、生成した還元性コバルト錯体に金属
指元薬を反応させて生成する有色性錯体の量を測定する
ことにより行なわれる。
被検物質である還元性物質としては、その物質自身還元
能力を有すれば特に制限されないが、例えばアスコルビ
ン酸、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、スーパーオキサイド、チ
オール化合物等が挙げられる。
能力を有すれば特に制限されないが、例えばアスコルビ
ン酸、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、スーパーオキサイド、チ
オール化合物等が挙げられる。
酸化型コバルト錯体としては、トリス（アセチルアセト
ナト）コバルト(III)、ヘキサアンミンコバルト(III)塩
化物、ヘキサシアノコバルト(III)酸カリウム、ヘキサ
ニトロコバルト(III)酸カリウム等が挙げられるが、こ
れと同様の反応性を有するものであれば、これに限定さ
れるものではない。
ナト）コバルト(III)、ヘキサアンミンコバルト(III)塩
化物、ヘキサシアノコバルト(III)酸カリウム、ヘキサ
ニトロコバルト(III)酸カリウム等が挙げられるが、こ
れと同様の反応性を有するものであれば、これに限定さ
れるものではない。
金属指元薬としては、還元性コバルト錯体との反応によ
つて有色性錯体を生成する能力を有するものであれば特
に限定されないが、例えば４−（２−ピリジルアゾ）−
１，３−ジアミノベンゼン、５−（２−ピリジルアゾ）
−２，４−ジアミノトルエン、２−（２−ピリジルア
ゾ）−５−ジメチルアミノフエノール、２−（２−ピリ
ジルアゾ）−５−ジエチルアミノフエノール、２−（５
−ブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−（Ｎ−プロピル−
Ｎ−スルホプロピルアミノ）フエノール・ナトリウム塩
（以下５−Ｂｒ−ＰＡＰＳと略す）、２−（５−プロモ
ピリジルアゾ）−５−（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホプロ
ピルアミノ）アニリン・ナトリウム塩（以下５−Ｂｒ−
ＰＳＡＡと略す）、１−（２−ピリジルアゾ）−２−ナ
フトール、４−（２−ピリジルアゾ）レゾルシノール、
４−（２−チアゾリルアゾ）−レゾルシノール、２−
（２−チアゾリルアゾ）−ｐ−クレゾール等のアリルア
ゾ誘導体；１−ニトロソ−２−ナフトール、２−ニトロ
ソ−１−ナフトール、２−ニトロソ−１−ナフトール−
４−スルホン酸、１−ニトロソ−２−ナフトール３，６
−ジスルホン酸ナトリウム塩等のニトロソ−ナフトール
誘導体；２−ニトロソ−４−ジメチルアミノフエノール
等のニトロソフエノール誘導体；フエニルフルオロン誘
導体；ピロカテコールバイオレツト誘導体；ピロガロー
ルレツド誘導体；クロマズロールＳ、タイロン、１−フ
エニル−３−メチル−４−ベンゾイル−５−ピラゾロン
等のβ−ジケトン誘導体；Ｎ−ベンゾイル−Ｎ−フエニ
ルヒドロキシルアミン誘導体；３，３′−ビス〔Ｎ，Ｎ
−ジ（カルボキシメチルアミノメチル）〕−Ｏ−クレゾ
ールスルホフタレイン等のフエノール−スルホフタレイ
ン誘導体；アリザリンコンプレクソン等のアントラキノ
ン誘導体；８−キノリノール等のキノリン誘導体；グリ
オキサル・ビス（２−ヒドロキシアニル）誘導体；ジフ
エニルカルバジツド誘導体；ジフエニルカルバゾン誘導
体；ジンコン誘導；５，５−ニトリロジバルビツール酸
誘導体；２，４，６−トリス（２−ピリジル）−Ｓ−ト
リアジン、３−（２−ピリジル）−５，６−ジフエニル
−１，２，４−トリアジン、３−（２−ピリジル）−
５，６−ジフエニル−１，２，４−トリアジン・ジスル
ホン酸ナトリウム塩等のトリアジン誘導体；ジオキシム
誘導体；ジチゾン誘導体；チオキシン誘導体などが挙げ
られる。
つて有色性錯体を生成する能力を有するものであれば特
に限定されないが、例えば４−（２−ピリジルアゾ）−
１，３−ジアミノベンゼン、５−（２−ピリジルアゾ）
−２，４−ジアミノトルエン、２−（２−ピリジルア
ゾ）−５−ジメチルアミノフエノール、２−（２−ピリ
ジルアゾ）−５−ジエチルアミノフエノール、２−（５
−ブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−（Ｎ−プロピル−
Ｎ−スルホプロピルアミノ）フエノール・ナトリウム塩
（以下５−Ｂｒ−ＰＡＰＳと略す）、２−（５−プロモ
ピリジルアゾ）−５−（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホプロ
ピルアミノ）アニリン・ナトリウム塩（以下５−Ｂｒ−
ＰＳＡＡと略す）、１−（２−ピリジルアゾ）−２−ナ
フトール、４−（２−ピリジルアゾ）レゾルシノール、
４−（２−チアゾリルアゾ）−レゾルシノール、２−
（２−チアゾリルアゾ）−ｐ−クレゾール等のアリルア
ゾ誘導体；１−ニトロソ−２−ナフトール、２−ニトロ
ソ−１−ナフトール、２−ニトロソ−１−ナフトール−
４−スルホン酸、１−ニトロソ−２−ナフトール３，６
−ジスルホン酸ナトリウム塩等のニトロソ−ナフトール
誘導体；２−ニトロソ−４−ジメチルアミノフエノール
等のニトロソフエノール誘導体；フエニルフルオロン誘
導体；ピロカテコールバイオレツト誘導体；ピロガロー
ルレツド誘導体；クロマズロールＳ、タイロン、１−フ
エニル−３−メチル−４−ベンゾイル−５−ピラゾロン
等のβ−ジケトン誘導体；Ｎ−ベンゾイル−Ｎ−フエニ
ルヒドロキシルアミン誘導体；３，３′−ビス〔Ｎ，Ｎ
−ジ（カルボキシメチルアミノメチル）〕−Ｏ−クレゾ
ールスルホフタレイン等のフエノール−スルホフタレイ
ン誘導体；アリザリンコンプレクソン等のアントラキノ
ン誘導体；８−キノリノール等のキノリン誘導体；グリ
オキサル・ビス（２−ヒドロキシアニル）誘導体；ジフ
エニルカルバジツド誘導体；ジフエニルカルバゾン誘導
体；ジンコン誘導；５，５−ニトリロジバルビツール酸
誘導体；２，４，６−トリス（２−ピリジル）−Ｓ−ト
リアジン、３−（２−ピリジル）−５，６−ジフエニル
−１，２，４−トリアジン、３−（２−ピリジル）−
５，６−ジフエニル−１，２，４−トリアジン・ジスル
ホン酸ナトリウム塩等のトリアジン誘導体；ジオキシム
誘導体；ジチゾン誘導体；チオキシン誘導体などが挙げ
られる。
本発明定量法を実施するには、一定温度（例えば室温〜
４０℃の任意の温度）下に保持したpH５〜１０の緩衝液
中に被検体、金属指示薬および酸化型コバルト錯体を加
えて反応を行ない、該反応液中に生成した有色性錯体を
光学的手段により測定することにより行なわれる。
４０℃の任意の温度）下に保持したpH５〜１０の緩衝液
中に被検体、金属指示薬および酸化型コバルト錯体を加
えて反応を行ない、該反応液中に生成した有色性錯体を
光学的手段により測定することにより行なわれる。
酸化型コバルト錯体は、反応液中の濃度が０．０１〜１
０ｍｍｏｌ／、好ましくは０．０５〜１ｍｍｏｌ／
となるように添加される。また、金属指示薬は０．０１
〜２００ｍｍｏｌ／、好ましくは５０〜５００μｍｏ
ｌ／の濃度範囲で使用される。
０ｍｍｏｌ／、好ましくは０．０５〜１ｍｍｏｌ／
となるように添加される。また、金属指示薬は０．０１
〜２００ｍｍｏｌ／、好ましくは５０〜５００μｍｏ
ｌ／の濃度範囲で使用される。
緩衝液としては、前記のpH範囲を保持できれば特に制限
されないが、例えば酢酸緩衝液、トリス緩衝液、リン酸
緩衝液、ホウ酸緩衝液、グリシン緩衝液等が用いられ
る。
されないが、例えば酢酸緩衝液、トリス緩衝液、リン酸
緩衝液、ホウ酸緩衝液、グリシン緩衝液等が用いられ
る。
反応液中に生成した有色性錯体を測定して被検体中の還
元性物質を定量するには、まず、生成した錯体に適した
波長で吸光度変化量を測定するか、あるいは一定時間後
に酸もしくはアルカリ溶液または界面活性剤を加え反応
を停止させ、適した波長で吸光度を求める。次いで得ら
れた吸光度から盲検の吸光度を差引いた値をあらかじめ
求めておいた標準液の吸光度と比較し、被検体中の還元
性物質量を求める。
元性物質を定量するには、まず、生成した錯体に適した
波長で吸光度変化量を測定するか、あるいは一定時間後
に酸もしくはアルカリ溶液または界面活性剤を加え反応
を停止させ、適した波長で吸光度を求める。次いで得ら
れた吸光度から盲検の吸光度を差引いた値をあらかじめ
求めておいた標準液の吸光度と比較し、被検体中の還元
性物質量を求める。
本発明定量方法は、被検体中で還元性物質が生成する反
応、例えば脱水素酵素、酸化酵素等とそれらの基質を組
み合せることにより、これらの酵素及び基質の定量も可
能となる。この例を示せば以下の通りである。
応、例えば脱水素酵素、酸化酵素等とそれらの基質を組
み合せることにより、これらの酵素及び基質の定量も可
能となる。この例を示せば以下の通りである。
還元型補酵素の測定（ＮＡＤＨについて） （式中、１−メトキシ−ＰＭＳは１−メトキシ−フエナ
ジンメトサルフエートを示す） 脱水素酵素を使用した体液成分の測定（胆汁酸につい
て） （式中、３α−ＨＳＤは３α−ヒドロキシステロイドデ
ヒドロゲナーゼを示す） 酸化酵素を使用した体液成分の測定（キサンチンにつ
いて） 本発明定量方法の実施にあたつて、予め酸化型コバルト
錯体及び金属指示薬を含有する試薬を調製しておくこと
が便利である。該試薬としては、０．０１〜１０ｍｍｏ
ｌ／、好ましくは０．０５〜１ｍｍｏｌ／の酸化型
コバルト錯体と０．０１〜２００ｍｍｏｌ／、好まし
くは５０〜５００μｍｏｌ／の金属指示薬をpH５〜１
０の緩衝液に加えたものが好ましい。
ジンメトサルフエートを示す） 脱水素酵素を使用した体液成分の測定（胆汁酸につい
て） （式中、３α−ＨＳＤは３α−ヒドロキシステロイドデ
ヒドロゲナーゼを示す） 酸化酵素を使用した体液成分の測定（キサンチンにつ
いて） 本発明定量方法の実施にあたつて、予め酸化型コバルト
錯体及び金属指示薬を含有する試薬を調製しておくこと
が便利である。該試薬としては、０．０１〜１０ｍｍｏ
ｌ／、好ましくは０．０５〜１ｍｍｏｌ／の酸化型
コバルト錯体と０．０１〜２００ｍｍｏｌ／、好まし
くは５０〜５００μｍｏｌ／の金属指示薬をpH５〜１
０の緩衝液に加えたものが好ましい。
本発明によれば還元性物質を極めて高感度で定量するこ
とができる。更に種々の物質（基質）に作用して還元性
物質を生成するような酵素の活性あるいはそのような酵
素反応と連結し得る自体公知の酵素反応に関与する物質
（基質）、酵素、補酵素の量若しくは活性などを容易
に、しかも高感度に定量することができる。
とができる。更に種々の物質（基質）に作用して還元性
物質を生成するような酵素の活性あるいはそのような酵
素反応と連結し得る自体公知の酵素反応に関与する物質
（基質）、酵素、補酵素の量若しくは活性などを容易
に、しかも高感度に定量することができる。
次に実施例を挙げて本発明を説明する。
実施例１ アスコルビン酸の定量 ５００μＭのトリス（アセチルアセトナト）コバルト(I
II)、１２５μＭの５−Ｂｒ−ＰＳＡＡを含む２０ｍＭ
の酢酸緩衝液（pH５．０）１mlにアスコルビン酸を含む
被検体５０μｌを加えて３７℃で３０分間加温後、盲検
を対照として波長６００nmの吸光度を測定する。結果を
表１に示す。
II)、１２５μＭの５−Ｂｒ−ＰＳＡＡを含む２０ｍＭ
の酢酸緩衝液（pH５．０）１mlにアスコルビン酸を含む
被検体５０μｌを加えて３７℃で３０分間加温後、盲検
を対照として波長６００nmの吸光度を測定する。結果を
表１に示す。
検量線は直線を示した。
実施例２ アスコルビン酸の定量 ５０μＭのヘキサアンミンコバルト(III)塩化物、４０
０μＭの２−（５−ブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−
（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホプロピルアミノ）フエノー
ルナトリウム塩（以下５−Ｂｒ−ＰＡＰＳと略す）を含
む２０ｍＭのグリシン緩衝液（pH１１．０）２mlにアス
コルビン酸を含む被検体１０μｌを加えて３７℃で１０
分間加温後、盲検を対照として長５８５ｎｍの吸光度を
測定する。結果を表２に示す。
０μＭの２−（５−ブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−
（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホプロピルアミノ）フエノー
ルナトリウム塩（以下５−Ｂｒ−ＰＡＰＳと略す）を含
む２０ｍＭのグリシン緩衝液（pH１１．０）２mlにアス
コルビン酸を含む被検体１０μｌを加えて３７℃で１０
分間加温後、盲検を対照として長５８５ｎｍの吸光度を
測定する。結果を表２に示す。
実施例３ ＮＡＤＨの定量 ３００μＭのトリス（アセチルアセトナト）コバルト(I
II)、１０μＭの１−メトキシ−フエナジンメトサルフ
エート、２００μＭの５−Ｂｒ−ＰＡＰＳを含む１０ｍ
ｍｏｌ／モノエタノールアミン−塩酸緩衝液（pH９．
５）２．０mlにＮＡＤＨを含む被検液１０μｌを加えて
３７℃で１５分間加温後、盲検を対照として波長５８５
nmで吸光度を測定する。結果を表３に示す。
II)、１０μＭの１−メトキシ−フエナジンメトサルフ
エート、２００μＭの５−Ｂｒ−ＰＡＰＳを含む１０ｍ
ｍｏｌ／モノエタノールアミン−塩酸緩衝液（pH９．
５）２．０mlにＮＡＤＨを含む被検液１０μｌを加えて
３７℃で１５分間加温後、盲検を対照として波長５８５
nmで吸光度を測定する。結果を表３に示す。
検量線は直線となり、良好な定量性を示している。
実施例４ 胆汁酸の定量 ３００μＭのトリス（アセチルアセトナト）コバルト(I
II)、１０μＭの１−メトキシフエナジンメトサルフエ
ート、１ｍＭのニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
（ＮＡＤ）、４５ｍＭのオキサミド酸ナトリウム、１０
０Ｕ／の３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナー
ゼ、２００μＭの５−Ｂｒ−ＰＡＰＳを含む０．０２Ｍ
のモノエタノールアミン−塩酸緩衝液（pH９．５）２．
０mlに胆汁酸を含む被検体１０μｌを加えて３７℃で１
５分間加温後、盲検を対照として波長５８５nmで吸光度
を測定する。なお被検体としてはグリココール酸（以下
ＧＣと略す）を添加した血清を無添加血清で種々の濃度
に希釈して使用し、検量線を求めた。結果を表４に示
す。
II)、１０μＭの１−メトキシフエナジンメトサルフエ
ート、１ｍＭのニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
（ＮＡＤ）、４５ｍＭのオキサミド酸ナトリウム、１０
０Ｕ／の３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナー
ゼ、２００μＭの５−Ｂｒ−ＰＡＰＳを含む０．０２Ｍ
のモノエタノールアミン−塩酸緩衝液（pH９．５）２．
０mlに胆汁酸を含む被検体１０μｌを加えて３７℃で１
５分間加温後、盲検を対照として波長５８５nmで吸光度
を測定する。なお被検体としてはグリココール酸（以下
ＧＣと略す）を添加した血清を無添加血清で種々の濃度
に希釈して使用し、検量線を求めた。結果を表４に示
す。
検量線は直線を示し、良好な定量性を示した。
実施例５ 胆汁酸を本発明方法（実施例４）、ニトロテトラゾリウ
ムブルーを使用した方法(i)及び鉄イオンを使用した法
(ii)によりそれぞれ定量した。各感度の相対比を表５に
示す。
ムブルーを使用した方法(i)及び鉄イオンを使用した法
(ii)によりそれぞれ定量した。各感度の相対比を表５に
示す。
(i)ニトロテトラゾリウムブルーを使用した方法６００
μＭのニトロテトラゾリウムブルー、５００Ｕ／のジ
アホラーゼ、２ｍＭのＮＡＤ、３００ｍＭのオキサミド
酸ナトリウム、１００Ｕ／の３α−ヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼ（３α−ＨＳＤ）を含む６５ｍＭ
のリン酸緩衝液（pH７．０）０．５mlに胆汁酸を含む被
検体２００μｌを加えて３７℃で１０分間加温後、反応
停止液（０．１Ｎ塩酸）０．５mlを加える。５分間放置
後、波長５４０nmで吸光度を測定する。また同一試料に
ついて３α−ＨＳＤを除いた測定試液で同様な操作を行
ない検体ブランク（盲検）とする。
μＭのニトロテトラゾリウムブルー、５００Ｕ／のジ
アホラーゼ、２ｍＭのＮＡＤ、３００ｍＭのオキサミド
酸ナトリウム、１００Ｕ／の３α−ヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼ（３α−ＨＳＤ）を含む６５ｍＭ
のリン酸緩衝液（pH７．０）０．５mlに胆汁酸を含む被
検体２００μｌを加えて３７℃で１０分間加温後、反応
停止液（０．１Ｎ塩酸）０．５mlを加える。５分間放置
後、波長５４０nmで吸光度を測定する。また同一試料に
ついて３α−ＨＳＤを除いた測定試液で同様な操作を行
ない検体ブランク（盲検）とする。
(ii)鉄イオンを使用した方法 ２００μＭの塩化第二鉄、５０μＭの１−メトキシＰＭ
Ｓ、４００μＭのニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ド（ＮＡＤ）、３０ｍＭオキサミド酸ナトリウム、１０
０Ｕ／の３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナー
ゼ（３α−ＨＳＤ）を含む０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液
（pH７．０）１．０mlに胆汁酸を含む被検体１００μｌ
を加えて３７℃で１５分間加温後、波長５６２nmで吸光
度を測定する。また同一試料について３α−ＨＳＤを除
いた測定試液で同様な操作を行ない、検体ブランク（盲
検）とする。
Ｓ、４００μＭのニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ド（ＮＡＤ）、３０ｍＭオキサミド酸ナトリウム、１０
０Ｕ／の３α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナー
ゼ（３α−ＨＳＤ）を含む０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液
（pH７．０）１．０mlに胆汁酸を含む被検体１００μｌ
を加えて３７℃で１５分間加温後、波長５６２nmで吸光
度を測定する。また同一試料について３α−ＨＳＤを除
いた測定試液で同様な操作を行ない、検体ブランク（盲
検）とする。
実施例６ 特開昭５５−１４２２４９号の実施例１に記載の処方、
すなわち、ＣｙＨＤＴＡ２．０ｇ、塩化第２鉄１．２
ｇ、クエン酸ナトリウム５．５ｇ、クエン酸１．３ｇ、
２，２−ジピリジン０．６８ｇ、ＰＶＰ０．８５ｇ、純
水５９．５mlよりなる溶液２ｍｌにアスコルピン酸を１
００ｍｇ／ｄｌ含む被検液１０μｌを加え、３７℃で１
０分間加温後、盲検を対照として波長５２２nmの吸光度
を測定した。その結果を本発明方法（実施例２）との対
比において示せば表６のとおりである。
すなわち、ＣｙＨＤＴＡ２．０ｇ、塩化第２鉄１．２
ｇ、クエン酸ナトリウム５．５ｇ、クエン酸１．３ｇ、
２，２−ジピリジン０．６８ｇ、ＰＶＰ０．８５ｇ、純
水５９．５mlよりなる溶液２ｍｌにアスコルピン酸を１
００ｍｇ／ｄｌ含む被検液１０μｌを加え、３７℃で１
０分間加温後、盲検を対照として波長５２２nmの吸光度
を測定した。その結果を本発明方法（実施例２）との対
比において示せば表６のとおりである。
Claims (2)
- 【請求項１】酸化型コバルト錯体を還元性物質と反応さ
せて還元性コバルト錯体に変換せしめ、次いで該還元性
コバルト錯体と金属指示薬とを作用せしめ生成した有色
性錯体を測定することを特徴とする還元性物質の定量方
法。 - 【請求項２】還元性コバルト錯体及び金属指示薬を含有
する還元性物質定量用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61038554A JPH0654318B2 (ja) | 1986-02-24 | 1986-02-24 | 還元性物質の定量方法及びその定量用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61038554A JPH0654318B2 (ja) | 1986-02-24 | 1986-02-24 | 還元性物質の定量方法及びその定量用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62195559A JPS62195559A (ja) | 1987-08-28 |
| JPH0654318B2 true JPH0654318B2 (ja) | 1994-07-20 |
Family
ID=12528510
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61038554A Expired - Lifetime JPH0654318B2 (ja) | 1986-02-24 | 1986-02-24 | 還元性物質の定量方法及びその定量用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0654318B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2516381B2 (ja) * | 1987-10-26 | 1996-07-24 | 第一化学薬品株式会社 | 過酸化水素の定量方法及びその定量用試薬 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55142249A (en) * | 1979-04-24 | 1980-11-06 | Shionogi & Co Ltd | Reduction type ascorbic acid detecting composition and test piece |
| JPS60137300A (ja) * | 1983-12-26 | 1985-07-20 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | ３α−ヒドロキシステロイドの定量方法 |
-
1986
- 1986-02-24 JP JP61038554A patent/JPH0654318B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62195559A (ja) | 1987-08-28 |
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