JPH06509541A - 免疫複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 免疫複合体 几ユム五基 本発明は治療上有効な生理活性物質と該物質の生体内における分布容積を約０． ５倍以下に減少させつるモノクローナル抗体との免疫複合体に関する。

ここで分布容積とは、薬剤もしくは生理活性物質を含有するために利用され得る 生体内における見かけの分布容積である。この分布容積は、血液もしくは血漿中 の薬剤濃度に対する生体内の薬剤量と関係しているものであり、洞窟される液体 に依存している。　［Ｌ、　ＧｏｏｄｍａｎおよびＥ、Ｇｉｌｍａｎ　、ザ・フ ァーマコロジカル・ベージユ・オブ・セラボイテイクス（Ｔｈｅ　Ｐｈａｒｍａ ｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｂａ５ｉｓ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ　）、　（ １９８５）、　ＭａｃＭｉｌｌｉａｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ 　、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　、ＮＹ　ｐｐ、２２−２８１生理活性物質はヒトないし は動物などの疾病の治療に有効であるが、反面使用方法を誤ると疾病が治療でき ないばかりが、重篤な副作用をひきおこし、場合によっては、ヒトないしは動物 を死に至らしめることも起こり得る。したがって、生理活性物質を生体に投与し 、ヒトないしは動物などの疾病を治療するためには、該生理活性物質を必要な場 所に、適当な濃度で、適当な時間だけ存在させることを十分考慮する必要がある 。そのためには多くの場合、（１）生理活性物質の使用方法を最適なものとする か、（２）本来の生理活性物質の製剤処方で工夫するか、（３）生理活性物質本 体の構造を修飾することによってまったく別の化合物とするといったことがなさ れる。

（１）の使用方法の工夫の例としては投与方法の変更（静脈内投与。

皮下投与、筋肉的投与、経ロ投与など）を挙げることができるが、薬物の分布、 半減期そのものを変えることはできない。

（２）の製剤処方の例としてはリポソームとマイクロカプセルを挙げることがで きるが、いずれもベシクル中に薬物ないしは薬物溶液を内封させたものであり、 おもに薬物の徐故によって生体内で適当な濃度を保つよう試みたものである。し かしながら、薬物そのものの半減期や分布を変えることは一般にはむずかしい。

（３）の生理活性物質本体の構造を修飾する場合には、生体内半減期、分布、代 謝などの性質を変えることができるが、生理活性物質本体の薬理作用が質、量と もまったく変わってしまうこともある。

生理活性物質の一例として、インターロイキン−２がある（以下、ＩＬ−２と略 称することもある）。ＩＬ−２はレクチンまたは抗原で活性化されたＴ細胞によ って生成される可溶性蛋白質で、ＮＫ細胞、キラーＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、Ｂ 細胞の増殖・分化を促進するなどの作用によって細胞性免疫を強化し、免疫の低 下した状態を正常に戻すのに有用である。ＩＬ−２のこの免疫活性は、癌、細菌 またはウィルス感染、自己免疫疾患、免疫不全等に対する治療に有用である。

しかしながら、ＩＬ−２は生物学的半減期が小さく、分布容積が大きい。例えば ＩＬ−２は人に投与した場合の血液中からの消失半減期は６．９分（Ｍ、　Ｔａ ｏｔｚｅ　ｅｔ　ａｌ、、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　 ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏ１ｏｇｙＬ±１旦、２８６５−２８７５（＋９８５））と報 告されている。ＴＬ−２の分布容積の計算がなされた例は少ないが、Ｉ　Ｌ−２ を投与したときの投与初期の血漿中濃度が低く、特に何らかの理論があるわけで はないが、その原因として血漿中以外に細胞外液にも分布することが一つの原因 として推定されている［Ｃ，Ｂｉｎｄｏｎ　ｅｔ　ａｌ。

ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｂｒ１ｔｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎ ａｌ　ｏｆＣａｎｃｅｒ　）旦、１２３−１３３（１９８３））。このようにサ イトヵインは生体からの消失が早く、分布容積が大きく、実際の治療に際しては 充分な作用を発揮しにくい、あるいは大量の投与量を必要とすることが予想され る。大量に生体に投与した場合には生体全体にＩＬ−２が分布し、副作用が大き くなることが予想される。

このようなＩＬ−２の性質を改善する目的で治療スケジュールを改善する。例え ば全投与量を変えずに、投与回数を増すことによって血中での作用時間を増すこ とが試みられている〔大津ら、キャンサー・イムノロジー・アンド・イムノセラ ビー（Ｃａｎｃｅｒ　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐ ｙ）、且、　７１−８０　（１９８９））。またＩＬ−２の血液中での半減期を 大きくさせる目的で、ＩＬ−２にポリエチレングリコールを結合させる方法があ る（画材ら、特開昭６０−２２６８２１号公報（ヨーロッパ特許公開１５４，３ １６号に相当）、あるいはＮ、Ｋａｔｒｅ　ｅｔ　ａｌ、、ＰＣＴ／ＵＳ　８６ ／　０１２５２（Ｗ０８７００１０５６Ａ））　、　しがしこの場合には分布容 積はＩＬ−２のそれと変わらないので、生体全体にＩＬ−２が分布し、投与量が 同じ場合には副作用は減少しないことも予想される。

ウロキナーゼ生理活性物質は人尿または、人腎細胞組織培養により調製されてお り、プラスミノーゲンを加水分解して直接プラスミンを生成し、フィブリンを溶 解する。制ガン剤との併用、脳血栓および末梢動・静脈閉塞症や急性心筋梗塞の 治療に広く用いられている。プラスミノーゲンの直接的なアクチベーターであり 、投与量は日本では通常約２４００〜約２４万ＩＵ／日が用いられる。人には、 瞬間的に或は持続的に動脈内ないしは静脈内に注入されることが行われている。

さらにウロキナーゼには高分子型ウロキナーゼ、低分子型ウロキナーゼ、プロウ ロキナーゼが知られている。

最大の薬効を得る目的で、全投与量を変えずに、治療スケジュールを改善し、ウ ロキナーゼの血中濃度を一定に保つ試みが行われることもある。例えば、人には 瞬間的に或は１０分程度にわたって、全投与量の１０％を静脈内に投与し、さら に４時間にわたって残り９０％を静脈内に持続注入することによって、血中濃度 を一定とし、最大の効果を得ようとする方法である。しかしこの場合には分布容 積はウロキナーゼのそれと変わらないので、生体全体にウロキナーゼが分布し、 投与量が同じ場合には副作用は減少しないことも予想される。

ウロキナーゼの標的である血栓が血管内に存在することを考えると、血中にウロ キナーゼを長時間高い血中濃度で存在させるためには、ウロキナーゼの半減期を 増加させ、分布容積を約０．５倍以下に著しく小さくするような試みがめられて いる。

一方、モノクローナル抗体を選択して、インターフェロン−αの半減期を長くす るようなモノクローナル抗体−インターフェロン−α免疫複合体を作製する方法 が報告されている（フリンケら、特許出願公表昭６０−５０２１０４、ＰＣＴ／ ＵＳ　８４１０　ｌ　３８９　（ＷＯ８５１００９７４）、およびキャンサー・ リサーチ（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａ　ｒｃｈ）、±５．　２４２１−２４２４． １９８５）。

上記特表昭６０−５０２１０４およびＷＯ３５１００９７４においては、インタ ーフェロン−αを静脈内投与したときの分布容積は２０゜８ｍｌであり、モノク ローナル抗体・インターフェロン−α免疫複合体を投与したときの分布容積は１ ９．２ｍｌとほとんど変化がないことが示されている。　上記Ｃａｎｃｅｒ　Ｒ ｅ５ｅａｒｃｈにはインターフェロン−αを静脈内投与したときの分布容積は１ ７．２ｍｌであるのに比し、モノクローナル抗体・インターフェロン−α免疫複 合体を投与したときの分布容積は１１．９ｍｌとしており、従って、該免疫複合 体の場合には分布容積は０．６９倍にしか減少していない。この程度の減少では 、薬効の増強効果はあったとしても著しいものではない。

生体内での生理活性物質の存在場所、濃度、時間の関係を解析する方法としてフ ァーマコキネチックスがよく用いられ、得られたパラメーターは、生体内での生 理活性物質の存在場所、濃度、時間の関係を表わしている。例えば生理活性物質 を血中に静脈内投与し、生理活性物質の血中濃度を最も簡単な、全ての薬剤投与 が１つのコンパートメントに生ずるようなワンコンパートメントモデルでファー マコキネチカルに解析すると生理活性物質の生体内での分布に関係する分布容積 と半減期に関係する消失速度定数が得られる。

またモノクローナル抗体の一種である二重特異性抗体は既に上記フリンケらの方 法あるいは他でも試みられているが、生体内での分布容積を変化させるような抗 体については未だ報告されていない。

生理活性物質の分布容積を該生理活性物質単独の場合より著しく減少させつるよ うな生理活性物質−モノクローナル抗体免疫複合体ができれば、血中濃度を高く してより有効にその効果を発揮することができ、また副作用を軽減することがで きる。

災五例翌１ 本発明者らは、生体に投与したときの生理活性物質の分布容積を該物質単独投与 の場合より減少させつるモノクローナル抗体−生理活性物質の複合体につき研究 を重ねた結果、生理活性物質の分布容積を約０．５倍以下に減少させ得る免疫複 合体が生理活性物質の生体内での血中濃度を高めることができ、薬効を著しく増 強することができるという知見を得、そのような免疫複合体を得ることに成功し 、本発明を完成した。

本発明は、生理活性物質と、生体内での該物質の分布容積を該物質単独の場合よ り約０．５倍以下に減少させつるモノクローナル抗体との免疫複合体である。

厘１１１１１ダ逸史 第１−１図および１−２図は、実施例２で得られた、ＨＰＬＣのクロマトグラム を示す。すなわち、第１−１図は市販マウスＩｇＧをＧ５−５２０カラムを用い たＨＰＬＣのクロマトグラムである。第１−２図は精製した抗ｒｈＩＬ−２モノ クローナル抗体をＧ５−５２０カラムを用いたＨＰＬＣのクロマトグラムである 。

第２−１．２−２および２−３図は、実施例３で得られたＧ５−５２０カラムを 用いたＨＰＬＣでのクロマトグラムを示す。すなわち、第２−１図は抗ｒｈＩＬ −２モノクローナル抗体の、第２−２図はｒｈＩＬ−２の、第２−３図はｒｈＩ Ｌ−２と抗ｒｈｌＬ−２モノクローナル抗体との免疫複合体（モル比ｌ：２）の 結果をそれぞれ示す。

第３図は、実験例１で得られた、ｒｈＩＬ−２と非特異のマウスＩｇＧの混合液 （重量比ｌ：５）を投与した場合とｒｈｌＬ−２・モノクローナル抗体免疫複合 体を投与した場合との血清中濃度の結果をそれぞれ示す。

第４図は、実験例３で得られた、ｒｈｌＬ−２と非特異のマウスＩｇＧの混合液 （重量比ｌ：５）を投与した場合と、ｒｈＩＬ−２・モノクローナル抗体免疫複 合体を投与した場合との血漿中濃度の結果をそれぞれ示す。

第５図は、実験例６で得られた、ウロキナーゼ・モノクローナル抗体免疫複合体 を投与したときと、ウロキナーゼのみを投与したときの血漿中濃度の結果を示す 。

第６図は、実験例７で得られた、ウロキナーゼ・モノクローナル抗体免疫複合体 を投与したときと、ウロキナーゼのみを投与したときの血漿中濃度を示す。

ましい　、　の０ 生理活性物質は生理活性をもつ物質で、生物体の生活活動を維持し恒常性を保つ と共に、発展させるために必要な物質である。疾病の際にはこのような生理活性 物質を利用することによって、生物体の機能を正常な状態にまで改善することが 可能である。

本発明の生理活性物質としては、たとえばサイトカイン、細胞成長因子、ホルモ ン、酵素等のタンパク、ペプチドや、これらの生理活性を有するミュータント、 フラグメント等が挙げられる。これらのアンタゴニストやアゴニストも挙げるこ とができる。またステロイド類やそのアンタゴニストやアゴニストも挙げること ができる。また、アラキドン酸カスケードも挙げることができる。

サイトカインの例としてはたとえばマクロファージを抗原で活性化して得るイン ターロイキン−１、抗原でＴ細胞を活性化することによって得られるインターロ イキン−２、Ｔ細胞のうち特定のクローンで産生されるインターロイキン−３、 その他、Ｔ細胞によって産生されるインターロイキン−４や、Ｔ細胞代替因子（ ＴＲＦ、またはＢ細胞分化因子（ＢＣＤＦ））、抗原特異的サプレッサー因子（ ＴｓＦ）、可溶性免疫反応抑制因子（ＳＩＲＦ）、サプレッサー誘導因子（Ｓ　 Ｉ　Ｆ）、インターフェロン−γ（Ｉ　ＦＮ−γ）、Ｂ細胞より産生されるＢ細 胞増殖因子（ＢＣＧＦ）、Ｂ細胞分化促進因子（ＢＣ：ＤＦ）、Ｂ細胞増殖抑制 因子（Ｓ　Ｂ　Ｆ）、あるいは、Ｂ細胞やＴ細胞から産生されるといわれるマク ロファージ活性化因子（ＭＡＦ）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、白 血球遊走阻止因子（Ｌ　Ｉ　Ｆ）、リンホトキシン（ＬＴ）、マクロファージな どによって産生されるインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）、顆粒球コロニー刺 激因子（Ｇ−Ｃ３Ｆ）、マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳ　Ｆ）、 単球コロニー刺激因子（Ｍ−Ｃ３Ｆ）、線維芽細胞から産生されるインターフェ ロン−β（Ｉ　ＦＮ−β）などが挙げられるにれらの他にはインターロイキン− ５やインターロイキン−６などの他のインターロイキン類、マクロファージ走化 性因子（ＭＣＦ）、リンパ球遊走因子（ＬＣＦ）などのような走化性因子、血管 透過性因子（ＶＰＦ）などの炎症性リンホカイン、細胞障害性Ｔ細胞から産生き れるバーホリン、リンパ球由来のリンホトキシンなどの殺腫瘍因子なども挙げら れる。

また、細胞成長因子のおもなものとしては、線維芽細胞、平滑筋細胞をおもな標 的とする血小板由来細胞成長因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞、平滑筋細胞、血管 内皮細胞、上皮細胞、軟骨細胞をおもな標的とする上皮細胞成長因子（ＥＧＦ） 、線維芽細胞、平滑筋細胞、血管内皮細胞、上皮細胞をおもな標的とする線維芽 細胞成長因子（ＦＧＦ）、神経細胞をおもな標的とする神経成長因子（ＮＧＦ） 、軟骨細胞をおもな標的とする神経成長因子（ＩＧＦ−ＩおよびＩ　ＧＦ−ＩＩ ）、赤血球を増殖させるエリスロボエチンなどがあげられる。

ホルモンの例としてはティッシュ・プラスミノーゲン・アクチバータ−（ＴＰＡ ）、インスリン、アンジオテンシンＩ、アンジオテンシン■、アンジオテンシン ■、アンジオテンシンロインヒビター、心房性ナトリウム利尿ペプチド、ブラジ キニン、カルシトニン、コルチコトロピン、ダイノルフィン、キヨートルフイン 、エンドルフィン、エンケファリン、セグレチン、成長ホルモン放出因子（ＧＲ Ｆ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨ−ＲＨ）、ニューロテンシン、副甲 状腺ホルモン（ＰＴＨ）、オキシトシン、パップレシン、バットシン、ソマトス タチン、チロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）、ヒト成長ホルモン、甲状腺刺激 ホルモン、プロラグチン、コルチコトロピンが挙げられる。それらのアゴニスト の例としては、たとえばリュープロレリンが挙げられる。

ステロイドの例としては、プロゲストロン、ニストロジエン、副腎皮質ホルモン 、アルドステロン、デキサメサゾン、エストロン、エストラジオール、ジヒドロ テストステロンなどが挙げられる。またステロイド類のアンタゴニストの例とし てはジヒドロテストステロンのアンタゴニストであるオキセンドロンが挙げられ る。アラキドン酸カスケードの例としては、プロスタグランディンＥ、が挙げら れる。

酵素としては、ウロキナーゼ、スーパーオキシドディスムターゼ。

アスパラギナーゼ、アデノシンデアミナーゼなどが挙げられる。

生理活性物質としては、サイトカインおよび酵素が好ましく、なかでもインター ロイキン−２およびウロキナーゼ、プロウロキナーゼが好ましい。　以下に、Ｉ Ｌ−２を詳細に説明する。

生理活性物質がＩＬ−２の場合、該ＩＬ−２としては、哺乳動物由来のものであ ればいずれでもよいが、ＩＬ−２の全分子でもよく、また部分的なフラグメント ペプチドであってもよい。またここで言うＩＬ−２はヒト細胞由来のＩＬ−２複 合体、遺伝子工学的手法によって微生物、動物細胞から得られたＩＬ−２複合体 等製造方法に制限はない。また、遺伝子工学手法によって一部のアミノ酸置換を 行ったもの、および、Ｎ末端側、Ｃ末端側にアミノ酸残基を付加ないし欠損した もの等、本来のヒトＩＬ−２複合体を基本的な分子骨格とするものも含まれる。

さらに詳しくは、該ＩＬ−２としては、ＩＬ−２と同様の活性を有する物質、す なわち、Ｔ細胞をその機能を維持したまま継代維持しつる作用を有する物質が挙 げられる。具体的には、例えば特開昭６１−７８７９９号公報（ヨーロッパ公開 １７６．２９９号に相当）（これらは参考のために本明細書に導入されている） の第１図に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド（Ｉ）（ヒトＩＬ−２） や、その生物学的もしくは免疫学的活性に必要な一部分のアミノ酸配列からなる ポリペプチドでもよい。上記ポリペプチドとしては、例えばポリペプチド（１） のアミノ末端から１個のアミノ酸（ＥＰＣ公開　９１５３９号公報）または４個 のアミノ酸を欠くもの（特開昭６０−１２６０８８号公報、参考のために本明細 書に導入）やカルボキシル末端部の数個のアミノ酸を欠くものなどが挙げられる 。さらに該ポリペプチド（１）の構成アミノ酸の一部が欠損しているか他のアミ ノ酸に置換されたもの、例えば１２５位のシスティン残基がセリン残基に置換さ れたもの［特開昭５９−９３０９３号公報（米国特許第４，５１８，５８４号に 相当）、これらは参考のため本明細書に導入されている］でもよい。

とりわけ、特開昭６１−７８７９９号公報（ヨーロッパ特許公開１７６．２９９ 号）の第１図に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−２を用いるのが好まし く、この場合そのアミノ末端にさらにメチオニン残基（Ｍｅｔ）を有するものと 有さないものとの混合物［特開昭６０−１１５５２８号公報（ヨーロッパ特許公 開１４５，３９０号）、特開昭６１−７８７９９号公報、これらは参考のため本 明細書に導入されている］であってもよく、またアミノ末端にＭｅｔを有さずア ラニン（Ａ１．ａ）で始まるもの［特開昭６１−７８７９９号公報コでもよい。

また、糖鎖を有しているものであってもよい。

さらに、ウロキナーゼについて説明する。ウロキナーゼは高分子型ウロキナーゼ 、低分子型ウロキナーゼ、プロウロキナーゼが知られている。この他のウロキナ ーゼフラグメントであってもよいし、ヒト以外の他の哺乳動物由来のものであっ てもよい。またここで言うウロキナーゼは遺伝子工学的手法によって微生物、動 物細胞から得られるウロキナーゼ等に制限はない。また遺伝子工学的手法によっ て一部のアミノ酸置換を行ったムティンおよびＮ末端、Ｃ末端側にアミノ酸残基 等を付加ないし欠損したもの等本来のウロキナーゼを基本的な分子骨格とするも のも含まれる。

本発明で用いられるモノクローナル抗体は、生理活性物質との免疫複合体とし、 該免疫複合体を生体に投与した際に該物質の生体内での分布容積を該物質単独投 与の場合より約０．５倍以下に減少させうるものであればいずれでもよい。

本発明で用いられるモノクローナル抗体は、さらに免疫複合体としたときに、血 中における半減期を延長しないものでもよく、また延長するものでもよい。

本発明の免疫複合体は、分布容積が約０．５倍以下に減少されているので、生理 活性物質の副作用が減少されることが期待される。

また、本発明の免疫複合体において、半減期を延長するものは、生理活性物質の 持続的効果が期待される。

該モノクローナル抗体は、生理活性物質あるいはその誘導体を免疫原として得ら れた該モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを製造し、該ハイブリドーマを培 養することにより得られる。

本発明で用いられるモノクローナル抗体産生ハイブリドーマの作製にあたっては 、該モノクローナル抗体が生理活性物質に特異的でかつ該生理活性物質と免疫複 合体を形成し、該免疫複合体を生体に投与したときの分布容積が生理活性物質単 独の場合より減少させつるモノクローナル抗体を産生ずるようなものであればい ずれのものでもよい。

なお、該モノクローナル抗体は、生理活性物質の生理活性を中和するものでもよ い。

該ハイブリドーマの作製に用いられる免疫原としては、上述した生理活性物質や 、それらの誘導体［たとえば該物質と同様の作用を有するそれらのミュータント 、フラグメント］、該物質のアンタゴニスト、アゴニストあるいはその誘導体［ たとえばこれらと同様の作用を有するミュータント、フラグメント］などを挙げ ることができる。該誘導体においては、特にフラグメントが好ましい。

また、該免疫原としては、該生理活性物質を熱変性したものでもよく、該熱変性 したものが好ましいことがある。

上記した免疫原をそのまま、あるいはこれにキャリア蛋白を結合させて、動物（ 例、ウサギ、ラット、マウス、モルモットなど）を免疫し抗体産生細胞を得る。

該キャリア蛋白としては、たとえば牛血清アルブミン（ＢＳＡ）、オバルブミン （ＯＶＡ）、キーホールリンペットヘモシアン（ＫＬＨ）、タイログロブリンな どがあげられる。

キャリア蛋白との結合には例えば生理活性物質のシスティンの部分が用いられる 。すなわちキャリア蛋白を予め、例えばＮ−（γ−マレイミドブチリルオキシサ クシニミド）（以下、ＧＭＢＳと略記することがある）でマレイミド化あるいは Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（以下、５Ｐ ＤＰと略記することがある）などでジチオピリジル化することにより、上記生理 活性物質のＣｙｓのＳＨ基を介してキャリア蛋白に化学結合することが可能であ る。

抗体産生ハイブリドーマの作製については、上記の生理活性物質もしくはその誘 導体あるいはこれらとキャリア蛋白との縮合物を常法に従い動物に免疫し、得ら れる抗体産生細胞を骨髄腫細胞などと融合させる方法が用いられる。免疫動物と しては、例えばウサギ、ラット、マウス、モルモットなどが用いられるが、モノ クローナル抗体製造の場合にはマウスが特に好ましく用いられる。接種方法とし ては、通常実施される方法に従えばよく、例えば、マウスに１回約１〜１００μ ｇ、好ましくは約１０〜２５μｇを等容量（０，１ｍ１）の生理食塩水およびフ ロイントの完全アジュバントで乳化して、背部の皮下あるいは腹腔内に２〜３週 毎に約３〜５日後種する方法がとられる。

これらの免疫動物、例えばマウスから抗体価の高い個体を選び、最終免疫約３〜 ５日後に肺臓およびあるいはリンパ節を採取し１、さらに含まれる抗体産生細胞 を骨髄腫細胞と融合させる。融合操作は既知の方法に従い実施でき、融合促進剤 としてはポリエチレングリコール（以下、ＰＥＧと略することがある）やセンダ イウィルスなどが挙げられるが、好ましくはＰＥＧが用いられる。骨髄腫細胞と してはＮ５−１、Ｐ３Ｕ１，５Ｐ２１０など、特にＰ３Ｕ１が好ましく用いられ る。

例えば肺臓細胞と骨髄腫細胞との好ましい比率は約１：１〜１０：１でこれに分 子量約１，０００〜６，０００のＰＥＧが約ｌＯ〜８０％の濃度で添加され、約 ２０〜３７℃、好ましくは約３０〜３７℃で約３〜１０分インキュベートするの が良い。

本発明のハイブリドーマのスクリーニングには種々の方法が使用できる。例えば 、マイクロプレートに生理活性物質を吸着させたのち、ハイブリドーマ培養上清 を添加し、プレートに結合した抗生理活性物質特異抗体を検出する酵素免疫測定 法（以下、ＥＩＡと略記することがある）により培養上清中の抗体価を測定する 。ＨＡＴ（ヒボキサンチン・アミノプテリン・チミジン）添加培地で選別、育種 された抗体活性陽性のハイブリドーマは直ちにクローニングに供されるが、通常 これは限界希釈法などで容易に実施される。クローニング化されたハイブリドー マを選択し、目的とするモノクローナルな抗生理活性物質特異抗体産生ハイブリ ドーマを取得することができる。

生理活性物質または、生理活性物質とモノクローナル抗体を投与した時の薬動力 学パラメーターは常法に従ってめることができる。すなわち該生理活性物質の水 溶液を動物に静脈内投与し、投与一定時間後に採血し、遠沈後得られた血漿中の 該生理活性物質濃度を定量し、この結果を薬動力学パラメーター解析ソフト、例 えばＡ　Ｐ　Ａ　Ｓ　（Ａｕｔｏｍａｔｅｄ　Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ 　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて、解析することによって分布容積 Ｖｄを得ることができる。

例えば、１０μｇのりコンビナンドＩ　Ｌ　−２（ｒＩ　Ｌ　−２）を含有する 免疫複合体の０，１ｍｌの生理食塩水溶液をマウスに静脈内投与し、投与後１５ ．３０分、ｌ、３．６時間後に眼上叢からヘバリナイズしたキャピラリーチュー ブで採血し、遠沈後得られた血漿中のｒＩＬ−２濃度をＥＩＡで測定する。血漿 中濃度の薬動力学パラメーター解析ソフト、例えばＡＰＡＳ（山岡　清、谷用原 裕介（Ｋ、Ｙａｍａｏｋａ、　Ｙ、Ｔａｎｉｇａｗａｒａ）マイコンによる薬物 速度論入門、南江堂　ｐ、１５９．１９８３）を用いて、１−コンパートメント モデル式 ％式％ に近似することができる。ここでＣは血漿中濃度、Ｃ０は時間Ｏに外挿した血漿 中初期濃度、しは投与後の時間、ｋは消失速度定数を示す。

さらに分布容積Ｖｄは投与量をＣ１ｌで除することによって得られる。半減期は 、０．６９３をｋで除することによって得られる。

解析方法の簡便法としては縦軸に血漿中濃度、横軸に時間をとった対数グラフ上 に、測定点をとり、直線に近似した時の縦軸の切辺（血漿中濃度）で投与量を除 することによっても分布容積Ｖｄが得られる。

また血漿中濃度を５０％まで減少させるのに要する時間をめることによって半減 期を得ることができる。

動物としてマウスの代わりに、ラットを用い、１００μｇのｒＩＬ−２を含有す る免疫複合体を同様に投与することも可能であり、採血部位としては、通常の方 法であれば、例えば尾静脈より採血しても構わない。また、血漿の代わりに血清 を用いても同様にパラメーターをめることができる。

ｒＩＬ−２以外の本発明でいう生理活性物質についても上記と同様に行なうこと ができる。

本発明においては、生体内での生理活性物質の分布容積を該物質単独の場合より 約０．５倍以下に減少させつるモノクローナル抗体が用いられる。さらに、約０ ．０５〜０．５倍に減少させうるものが好ましく、約０．１〜０．５倍に減少さ せうるものがさらに好ましく、約０゜１〜０．３倍に減少させうるものが特に好 ましい。

分布容積、消失半減期は、このように動物に静脈内投与した時の経時的な血液、 血清、または血漿中の生理活性物質濃度を解析することで得られ、生理活性物質 の分布、排泄、代謝などを反映している。このように薬動力学パラメーターは生 体と生理活性薬物の関係によって決まるが、投与方法とはまったく無関係である 。いいかえるならば、薬動力学パラメーターは、静脈内投与以外の投与方法、例 えば皮下注射、筋肉的注射、または経口投与などを用いても生理活性物質の分布 、排泄、代謝などにその特徴を示すことが一般的である。

上記した本発明のモノクローナル抗体産生ハイブリドーマの培養は通常、液体培 地中、または動物の腹腔内（例えば、マウス等補乳動物の腹腔内）で公知の方法 により実施できる。培養液および腹水中の抗体の精製については生化学的手法を 組み合わせて用いることによりできる。例えば、細胞培養液もしくは腹水を遠心 分離し、上清を取り出し、塩析（通常は硫酸アンモニウムもしくは硫酸ナトリウ ムを用いる）を実施し、得られた蛋白沈澱物を適当な溶液に溶解し、透析後カラ ムクロマトグラフィー（イオン交換カラム、ゲルろ過カラム、プロティンＡ、ヒ ドロキシアパタイトカラム等）に付し、目的とする抗体を分離精製することがで きる。塩析の代わりに５μｍのフィルターでろ過し、ゲルろ過によって適当な溶 液に置換した後、上記と同様なカラムグロマトグラフィーに付すことも可能であ る。以上のような分離精製操作により、例えば１リツトルの培養上清からタンパ ク重量比で８０％以上の純度の、さらに９０％以上の純度のモノクローナル抗体 を約３〜２０ｍｇ、さらに約５〜２００ｍｇ得ることができる。また、２０ｍ１ の腹水液からは同様のモノクローナル抗体が約５〜３００ｍｇ得られることがあ り、また、３〜ｌｏｏｎｉｇもしくは約３〜２０ｍｇ得られることもある。

以上のようにして得られたモノクローナル抗体はタンパク質として均一である。

上記モノクローナル抗体は、イムノグロブリンＧであることが好ましい。また、 本発明で用いられるモノクローナル抗体としては、ＩｇＧを蛋白分解酵素（ペプ シン等）で処理することにより、得られるＦａｂ、Ｆ　ａｂ’、Ｆ　（ａｂ’　 ）、などのフラグメントとしてもよい。これらのフラグメントは生理活性物質に 対する結合能を有す。

上記製造法に従って作製した種々のモノクローナル抗体と生理活性物質とをモル 比で約１：２となるようにたとえば燐酸緩衝生理食塩水中で混合した免疫複合体 の中から、本発明の免疫複合体を構成するモノクローナル抗体を選択し、さらに 該モノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマを選択した。この時の分布容積 は、的に述べた方法でめることができる。

またモノクローナル抗体の選択にあたっては、モノクローナルと生理活性物質と の免疫複合体の分布容積が生理活性物質の分布容積のｌ：２以下となるように選 択するのが好ましい。

またこのモノクローナル抗体がマウスＩｇＧである場合には、該抗体の抗原認識 部位を含む可変領域をコードするＤＮＡを取得し、これに遺伝子操作技術（Ｚ、 Ｓｔｅｐｌｅｗｓｋｉら：プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミ− ・サイエンス　ニーニスニー（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　 ＵＳＡ）、８５．４８５２　（１９８８））を用いてヒトＩｇＧの定常領域をコ ードする遺伝子を結合させ、マウス−ヒトキメラ抗体を作製することもできる。

かかるキメラ抗体はヒトへの投与に際し、抗原性が小さいため有利に用いられる 。

本発明の抗生理活性物質モノクローナル抗体と該生理活性物質との混合によって 、必要とする免疫複合体が得られる。免疫複合体を得るための混合のモル比は約 １＝２であることが好ましいが、投与に際しては必要に応じて、抗生理活性物質 モノクローナル抗体あるいは該生理活性物質を増すことによって１モル比を約１ ０：　ｌがら約１：５０、好ましくは約５＝１から約１＝５０まで変えることも 可能である。好ましくはモル比を約１０．１〜約１：１０．約１＝１から約１＋ １０あるいは約５：ｌから約ｌ：５とするのが好ましい。混合方法としては、水 溶液として混合し免疫複合体とすることが好ましい。粉末状の抗生理活性物質モ ノクローナル抗体と該生理活性物質とを混合しておき、投与的溶解時に免疫複合 体とする方法も実質的にこの方法の一部である。溶解した免疫複合体は真空乾燥 の方法によって固体とし、用時溶解して用いることもできる。さらに混合方法と して、抗生理活性物質モノクローナル抗体と該生理活性物質とを別個に生体に投 与して、生体内で実質的に免疫複合体とする方法も挙げられる。

さらに本発明は、上述した免疫複合体を含有してなる生理活性薬剤もしくは薬剤 組成物を提供するものである。

すなわち上述のようにして得られた本発明の免疫複合体はそれ自体あるいは適宜 の薬理学的に許容され得る賦形剤、希釈剤などと混合したのち、必要ならば例え ばメンブランフィルタ−等によるろ過滅菌を行い、そのまま液体注射剤とするこ ともできる。あるいは必要により適宜の薬理学的に許容され得る賦形剤、希釈剤 などと混合したのち、必要ならば例えばメンブランフィルタ−等によるろ過滅菌 を行った溶液を真空乾燥して粉末注射剤とし、用時に水ないしは生理食塩水等で 溶解して用いることができる。

また抗生理活性物質モノグローナル抗体のみの溶液にも同様に上記の操作を行い 、液体注射剤および粉末注射剤とすることができる。

賦形剤としては、例えばマニトールを用いることができる。希釈剤としては通常 、水を用い、上記の賦形剤あるいは安定化剤、無痛化剤、保存剤等を適宜配合し て、注射剤としての特性を高めることもできる。

上記安定化剤の例としてはたとえばＨ３Ａ（ヒト血清アルブミン）などが、等張 化剤としてはたとえば食塩、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトールなどが、ｐ 　＋−（調節剤としてはたとえば塩酸、水酸化ナトリウムなどが、安定化剤とし てはたとえばピロ亜硫酸ナトリウム、ロンガリット、メタ亜硫酸水素ナトリウム などが、無痛化剤としてはたとえば塩酸キシロカイン、グロロブタノール、塩酸 プロカインなどが、保存剤としてはたとえばペンシルアルコール、フェノール、 パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピルなどがそれぞれ挙げら れる。

これらの免疫複合体は溶液でも製剤とすることができるが、真空乾燥などによっ て粉末とし用時溶解することもできる。粉末化した製剤は取扱いやすいので好ま しい製剤である。真空乾燥法の例としては凍結乾燥法を挙げることができる。凍 結乾燥をする際には零下１０℃以下に冷却されたサンプルを用いて、実験室では フラスコ中で、工業的にはトレイを用いで、あるいはバイアル中で凍結乾燥させ ることが好ましい。

ここで凍結乾燥法の代わりに、サーバント社（５ｅｒｖａｎｔ）のスピードバッ クコンセントレータ−を用いて乾燥試料を得ることもできる。この場合温度は約 ０〜３０℃が好ましい。真空圧は約２０ｍｍＨｇ以下で行われる。さらに好まし くは、約１０ｍｍＨｇ以下が好ましい。

乾燥させるべき水溶液中には、緩衝作用を持つ塩例えばリン酸塩類を加えること によりｐＨを約３．０〜１０．０とするのが好ましい。あるいは投与時点での注 射剤の浸透圧を生体と等張とするために、通常注射剤として用いられている、塩 化ナトリウム、グルコースなどの等張化剤を加えておくことが好ましい。しかし 、等張化剤を乾燥以前に加えないで、溶解の際に適当な浸透圧を持つ塩水溶液、 グルコース溶液、代用血しょうなどで溶解することが可能である。必要ならば、 チメロサールなどの保存剤を加えることもできる。また、蛋白の安定化の目的で 安定化剤として、ヒト血清アルブミン（Ｈ３Ａ）を加えることも可能である。

このように乾燥して得られた製剤は長期間安定な製剤として、用時に水、塩水溶 液、グルコース溶液、代用血しょうなどで溶解し、注射剤とすることが可能であ る。

また、前記担体等、安定化剤等を添加した注射剤としてもよい。

このように、本発明の薬剤としては、乾燥品で粉末であるものが好ましい。

以上述べた方法で治療上有効な生理活性物質と該物質の分布容積を減少させつる モノクローナル抗体との免疫複合体が得られる。

また、該免疫物質を含有してなる生理活性薬剤が得られる。

本発明の免疫複合体に用いるモノクローナル抗体は、毒性が極めて低いものであ るので、当該複合体も毒性の低いものである。

°本発明の免疫複合体は、それを構成する当該生理活性物質と同様の目的に使用 することができる。たとえば、当該生理活性物質が、癌、免疫異常、炎症、ホル モン調節異常、高血圧または心疾患などの治療に用いることができる場合に、本 発明の免疫複合体をそれと同様の目的に用いることができる６ したがって、本発明の免疫複合体もしくはそれを含有する薬剤を、哺乳動物（例 、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、サル、ヒトなど）に静脈内、皮下 、筋肉内、腹腔内などに投与することができる。

本発明の免疫複合体の投与量は、生理活性物質としての量が該生理活性物質の公 知の投与量となる量あるいはそれ以下の量が挙げられる。

この投与量は担当医もしくはベテランの医者が適当な量を決めるであろう。特許 請求の範囲の免疫複合体のこれらの投与量は「有効量」として引用される。

上記した抗生理法性物質モノクローナル抗体と該生理活性物質とを別個に生体に 投与して、生体内で実質的に免疫複合体とするには、たとえば当該モノクローナ ル抗体を前記と同様にして注射剤に成形したものを、哺乳動物（例、マウス、ラ ット、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、サル、ヒトなど）の静脈内、皮下、筋肉内、腹 腔内などに投与しておき、次に該生理活性物質を前記と同様にして注射剤に成形 したものを静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内などに投与する。この場合二つの投与 ルートは異なってもよい。

該抗生理法性物質モノクローナル抗体と該生理活性物質とのモル比は好ましくは 約ｌＯ：１〜約１：５０、さらに好ましくは約５：１〜約１：５０、さらに好ま しくは約ｌ：ｌ〜約１＝１０あるいは約５゜１〜ｌ：５である。生理活性物質ま たは抗生理法性物質モノクローナル抗体の投与量は、対照となる疾患、症状ある いは投与ルート等によって異なるが、生理活性物質の量は、該生理活性物質の公 知の投与量となる量ないしはそれ以下の量が挙げられる。

例えば、該生理活性物質が抗癌作用を有する場合に、本発明の免疫複合体を癌患 者に静脈内投与する場合には、該生理活性物質として人間に対し一人当り約０． １μｇからｌｏｍｇ、好ましくはｌμｇから１ｍｇが用いられ他の哺乳動物には ０．００２μｇから０．２ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０２　μｇから０．０２ ｍｇ／ｋｇが用いられる。

生理活性物質がウロキナーゼである場合、例えば血栓症患者に静脈内投与する場 合には、１日あたり、該ウロキナーゼとして約０．０１〜０　、　５　ｍ　ｇ　 ／　ｋ　ｇ　、好ましくは約０．０２〜０．２ｍｇ／ｋｇが用いられる。

本発明の免疫複合体は生理活性物質の生体内での分布容積が約０゜５倍以下に減 少されているので、血中濃度を高くし生理活性物質の有効性が著しく高められた ものである。さらに、生理活性物質を血中を中心とする脈管系にとどめることに より副作用が減少される。

この免疫複合体を哺乳動物に投与することによって、癌、感染、免疫異常、炎症 、高血圧、ホルモン調節異常、心疾患などの各種の疾患をより有効に治療するこ とができる。

ウロキナーゼおよびプロウロキナーゼの場合は、それらの生理活性を損なわずに 生体内での該薬物の消失半減期を大きくし、分布容積を該ウロキナーゼないしは プロウロキナーゼ単独の場合より０．５倍以下に著しく減少させるようなウロキ ナーゼモ　ツクローナル抗体免疫複合体が得られ、この発明によって、血中濃度 をより高く保ち、より有効にその効果を発揮することができ、また副作用を軽減 することができる。

以下に実施例、実験例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、これらが本 発明の範囲を制限するものでない。

後述の実施例、実験例で用いられたｒｈＩＬ−２は、形質転換体エシェリヒア・ コ１バＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）　Ｎ４８３０／ｐＴＢ　２８５（Ｉ 　Ｆｏ　１４４３７、ＦＥＲＭ　ＢＰ−８５２）を用い、特開昭６０−１１５５ ２８号公報（ヨーロッパ公開１４５３９０号に相当）あるいは特開昭６１−７８ ７９９号公報（ヨーロッパ公開１７６２９９号に相当）に記載の方法と同様の方 法で製造されたＮ末端にメチオニンを有するものと有しないものとの混合物であ る。

上記形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　Ｎ４８３０／ｐＴ　Ｂ　２ ８５は、昭和６０年４月２５日から財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）に受託番号工 Ｆ０　１４４３７として寄託され、また本微生物は、昭和６０年４月３０日から 通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ＦＲＩ）に受託番号ＦＥＲＭ　Ｐ −８１９９として寄託され、該寄託はブダペスト条約に基づく寄託に切換えられ て受託番号　ＦＥＲＭ　ＢＰ−８５２として同研究所（ＦＲＩ）に保管されてい る。

また、後述の実施例１で得られたマウスハイブリドーマＨＲＬ　１−５２は早成 ２年１月２９日からＩＦＯに受託番号ＩＦＯ５０２２２として寄託され、また本 ハイブリドーマは平成２年　１月３１日がらＦＲＩに受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ− ２７４７として寄託されている。

後述の参考例で用いられたハイブリドーマは、ヨーロッパ特許出願公開第３６３ ７１２号公報に記載された方法で製造することができ、次に示す寄託が行われて いる。

動物細胞　ＩＦＯ番号　ＦＥＲＭ番号 マウスハイブリドーマ　５０１７６　ＢＰ−２０８３ＵＫ　ｌ　−３（１９８８ 年９月２１日）　（１９８８年１０月４日）マウスハイブリドーマ　５０１７７ 　ＢＰ−２０８４ＵＫＩ−８７（１９８８年９月２１日）　（１９８８年１０月 ４日）マウスハイブリドーマ　５０２０８　ＢＰ−２５４８０ＫＩ−６（１９８ ９年８月９日）　（１９８９年８月１１日）実施例１　マウス抗ヒトＩＬ−２モ ノクローナル抗体産生ハイブリドーマの作製 （１）免疫原の調製 ｒｈｌ　Ｌ　−２１ｍｇ／ｍｌ生理食塩水溶液を９０℃で３分間加熱処理し、変 性ヒトＩＬ−２を調製した。凍結保存後、免疫原として用いた。

（２）免疫 熱変性ｒｈＩＬ−２１＋ｎｇ／ｍｌ生理食塩水懸濁液に等量のフロイント完全ア ジュバントを加え、マウス（♀、ｎ＝１０：Ｏ，１ｍｇ１０．２ｍｌ／マウス） の背部および腹部皮下への免疫を開始した。追加免疫は免疫原に等量のフロイン ト不完全アジュバントを加えて、２〜３週毎に５回接種し実施した。

（３）細胞融合 最終免疫後３日で肺臓を摘出し、肺臓細胞懸濁液を常法により調製した（約１０ ″個）。ついでマウス骨髄腫細胞（Ｐ３Ｕ１）２Ｘ　１０’個を添加し、ＰＥＧ ６０００を用いてケーラーとミルスタインの方法［ホーチャー　（Ｎａｔｕｒｅ ）、２５６．４９５　（１９７５）コに準じて細胞融合に供した。

融合終了後、細胞混液をヒボキサンチン・アミノプテリンおよびチミジンを含む 、いわゆるＨＡＴ培地中に懸濁し、１ｏ日間培養した。

以降は、親細胞の選択が終了次第、ＨＡＴ培地からアミノプテリンを除いたＨＴ 培地に代え、培養を続けた。

（４）ハイブリドーマの選択およびクローニング固相にｒｈｌＬ−２を吸着させ たマイクロプレートを用い、ＥＬＩＳＡ法でハイブリドーマ培養上清の抗体価を 測定した。融合１０日から２０日後でハイブリドーマの出現を認め、かっｒｈｌ Ｌ−２に特異結合する抗体がみられた。特に結合活性の強いハイブリドーマにつ いて、限界希釈法によるクローニングに供した。

クローン化したハイブリドーマの培養上清を同様にＥＩＡのスクリーニングに供 し、ｒｈＩＬ−２結合能の強いものを選択した。

ハイブリドーマを用いて、後述の実施例３，４と同様にして種々のｒｈｌＬ−２ との免疫複合体を得て、さらにこれを実施例２に示した方法と同様にしてマウス に投与したときの分布容積を計算し、ｒｈｌＬ−２の分布容積を減少させる抗体 を産生ずるハイブリドーマをスクリーニングした。

これらの結果、ｒｈｌＬ−２に特異結合し、この免疫複合体をマウスに投与した ときのｒｈＩＬ−２の分布容積を減少させる抗体を産生ずるマウスハイブリドー マ）（ＲＬＩ−５２（ＩＦＯ５０２２２，ＦＥＲＭ　ＢＰ−２７４７）が得られ た。この免疫グロブリンクラス、サブグラスはオークターロ二−法による測定で 、いずれもＩｇＧ、であった。

実施例２　抗体調製 Ｂａ１ｂ／Ｃ（♀）マウスにミネラルオイル０．５　を腹腔的投与し、１週後、 実施例１で得られたマウスハイブリドーマＨＲＬＩ−５２（ＩＦＯ５０２２２， ＦＥＲＭ　ＢＰ−２７４７）を１０″″個腹腔内投与した。ハイブリドーマ投与 １０日後から２週後にかけて腹水を採取した。得られた腹水１００ｍ１を遠心分 離し、上清を取り出し、５μｍのフィルターでろ過し、ＰＤ−１０（ファルマシ ア社）を用いたゲルろ過によって、１０ｍＭ　ＭＥＳ緩衝液に置換した後、液体 クロマトグラフィー（ＡＢＲ×カラム、Ｊ、　Ｔ、Ｂａｋｅｒ）を用いて、目的 とする抗体１１４ｍｇを得た。得られた抗体を液体グロマトグラフィー（カラム ：　Ａｓａｈｉｐａｋ　Ｇ５−５２０．旭化成、移動相：　Ｄｕｌｂｅｃｃｏ燐 酸緩衝生理食塩水液、流速：　１ｍｌ／ｍｉｎ、検出：　ＯＤ、、、）にかける と第１図に示すような単一のピークが得られた。この保持時間は市販のマウスＩ 　ｇＧ　（Ｃｈｒ。

ｍｐｕｒｅ　Ｍｏｕｓｅ　ＩｇＧ　、　ｗｈｏｌｅ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ　、　Ｊ ａｃｋｓｏｎ　ＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈＬａｂ、　Ｉｎｃ、）のそれと一 致した。

モノクローナル抗体のｒｈＩＬ−２への結合能は一般的に公知のＥＬＩＳＡ法で 確認した。すなわち、イムノプレートにｒｈｌＬ−２を吸着させたのち、当該モ ノクローナル抗体を添加した。次にＨＲＰ標識標識抗マウス１奢Ｇ加し、オルト フェニレンジアミンの発色により、ｒｈＩＬ−２への結合能を確認した。

実施例３　免疫複合体の調製（液体） 実施例２で得られた抗ＩＬ−２モノクローナル抗体１ｍｇ／ｍｌの１＋ａｌに対 してｒｈｌＬ−２１ｍｇ／ｍｌの０．０５＋ｎｌ、　０．１　ｍｌ、０．２ｍｌ 、または１ｍｌをそれぞれ加えて抗ＩＬ−２モノクローナル抗体：ｒｈＩＬ−２ のモル比が約２＋１．ｌ：１，１：２．　ｌ：１０となるようにした。

これらの混合物をＨＰＬＣ（カラムニＡｓａｈｉｐａｋ　Ｇ５−５２０）で解析 したところ、抗ＩＬ−２モノクローナル抗体１モルに対してｒｈＩＬ−２が約２ モルの量で免疫複合体を形成することが判明した。免疫複合体の上記のモル比は 約ｌ：２であることがわかった。

抗ＩＬ−２モノクローナル抗体１１１１８／ｍｌの１ｍｌに対してＴＬ−２１ｍ ｇ／ｍｌの０．２ｍｌを混合することによって、免疫複合体くモル比的１＝２） を調製した。前述のＨＰ　Ｌ　Ｃ（カラム：Ａｓａｈｉｐａｋ　Ｇ５−５２０） にかけると非結合ｒｈＩＬ−２、非結合型モノグローナル抗体は存在しなかった （第２図）。

この時の免疫複合体のＥＩＡ活性をみるとｒｈＩＬ−２と同等の活性があった。

得られた免疫複合体の生物活性をＭＴＴ法（ｆ（ｉｒｏｋｏ　Ｔａｄａ　ｅＬ　 ａｌ、ジャーナル・オブ・イムノロジカルメソッズ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉ ｍｍｕｎ。

ｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ）、９３，１５７−１６５（１９８６））で調 べると、免疫複合体の凸ＩＬ−２あたりの比活性はｒｈＩＬ−２そのものの比活 性と同じであった。つまり、免疫複合体はｒｈｌＬ−２の生物活性を中和しない ことが判明した。

実施例４　免疫複合体の調製（固体） 抗ＩＬ−２モノクローナル抗体１ｍｇ／ｍｌの１ｍｌとｒｈＩＬ−２１ｍｇ／ｍ ｌの０．２ｍｌを混合し、セントリバックコンセントレータ−で水を蒸発させ免 疫複合体の固体を得た。この時のセントリバックコンセントレータ−のローター 部分には加温しなかった。冷却トラップ部分は一９０℃とし、真空ポンプで５　 ｍｍｆ１ｇ以下となるように減圧した。これに蒸留水１ｍｌを加え再溶解した。

この時のＥＴＡ活性をみるとｒｈｌＬ−２と同等の活性があった。

この例に限られることはないが、免疫複合体の固体を調製するときは抗ＩＬ−２ モノクローナル抗体１モルに対してｒｈｌＬ−２約２モルの割合で液体混合しス ピードバックコンセントレータ−（ＳＡＶＡＮＴ）あるいは凍結乾燥機により水 分を蒸発させて免疫複合体の固体を得ることができる。

実施例５　Ｆ　（ａｂ’　）、の調製（液体）抗ＩＬ−２モノクローナル抗体と Ｓｉｇｍａ社のペプシンを混合し、ｐ）−（３，５，３７℃で１８時間反応させ た。反応を停止後プロティンＡカラムで抗ＩＬ−２モノクローナル抗体のＦ　（ ａｂ’　）、を得た。この抗ＩＬ−２モノクローナル抗体のＦ　（ａｂ’　）、 は実施例２に示されるＥＬＩＳＡ法により、ｒｈＩＬ−２結合能を示した。

実施例６　ｒｈＩ　Ｌ−２−Ｆ（ａｂ’）、免疫複合体の調製（液体）実施例５ で得られた抗ＩＬ−２モノクローナル抗体のＦ（ａｂ’）、１モルに対してｒｈ ｌＬ−２を２モル加え、ｒｈＩＬ−２抗ＩＬ−２モノクローナル抗体Ｆ　（ａｂ ’　）、の免疫複合体を得た。

得られた免疫複合体はＥＩＡ法およびＭＴＴ法で調べると、ｒｈＩＬ−２として の活性を保持していた。

実施例７　Ｆ（ａｂ’）、免疫複合体の調製（固体）液体で得られた抗ＩＬ−２ 複合体モノクローナル抗体Ｆ　（ａｂ’　）、とｒｈｌＬ−２との免疫複合体か らセントリバックコンセントレータ−で水分を蒸発させてＦ　（ａｂ’　）、と ｒｈｌＬ−２との固体状の免疫複合体を得た６ 得られた免疫複合体はＥＩＡ法およびＭＴＴ法で調べると、ｒｈｌｒ、−２とし ての活性を保持していた。

実施例８　Ｆ　（ａｂ’　）、免疫複合体の調製（固体）液体で得られた抗ＩＬ −２モノクローナル抗体Ｆ　（ａｂ’　）、とｒｈｌＬ−２との免疫複合体から 凍結乾燥機で水分を蒸発させてＦ　（ａｂ’　）、とｒｈＩＬ−２との固体状の 免疫複合体を得た。

実施例９ 単球コロニー刺激因子（Ｍ−Ｃ３Ｆ）を用いて実施例１．２と同様にして、抗Ｃ ３Ｆモノクローナル抗体を得て、実施例３と同様にして、Ｃ３Ｆ−抗Ｃ３Ｆモノ クローナル抗体免疫複合体が得られる。

実施例ＩＯ チロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）を用いて実施例１．２と同様にして、抗Ｔ 　ＲＨモノクローナル抗体を得て、実施例３と同様にして、Ｔ　ＲＨ−抗ＴＲＨ モノクローナル抗体免疫複合体が得られる。

実施例１１ オキセンドロンを用いて実施例１．２と同様にして、抗オキセンドロンモノクロ ーナル抗体を得て、実施例３と同様にして、オキセンドロン−抗オキセンドロン モノクローナル抗体免疫複合体が得られる。

実施例１２ エンケファリンを用いて実施例１．２と同様にして、抗エンケファリンモノクロ ーナル抗体を得て、実施例３と同様にして、エンケファリン−抗エンケファリン モノクローナル抗体免疫複合体が得られる。

実施例１３ エリスロポエチンを用いて実施例１．２と同様にして、抗エリスロボエチンモノ クローナル抗体を得て、実施例３と同様にして、エリスロボエチンー抗エリスロ ボエチンモノグローナル抗体免疫複合体が得られる。

実施例１４ リュープロレリンを用いて実施例１．２と同様にして、抗すュープロレリンモノ クローナル抗体を得て、実施例３と同様にして、リュープロレリンー抗すュープ ロレリンモノクローナル抗体免疫複合体が得られる。

実験例１　ラット投与、（ｉｖ） 実施例３で得られた免疫複合体をラットにｒｈｌＬ−２に換算して１００μｇ静 脈内投与した。経時的に採血し、ｒｈＩＬ−２の血清中濃度を測定した（第３図 に一〇−で示す。）。対照実験として抗ＩＬ−２複合体モノクローナル抗体の代 わりに市販マウスＩｇＧとｒｈｌＬ−２を混合したもの（第３図において一〇− で示す。）をラットにｒｈｌＬ−２として１００μｇ静脈投与した。この時の結 果を第３図に示す。

得られたｒｈＩＬ−２の血清中濃度の経時変化をファルマコキネチヵルに解析し たところ免疫複合体投与時のｒｈｌＬ−２の分布容積が対照に較べて約７分の１ 　（約０．１４倍）であった。すなわち、ｒｈｌＬ−２の血液中濃度が約７倍高 かった。これに対して、この免疫複合体投与時のｒｈＩＬ−２の消失速度定数は 対照と変らなかった。すなわち、イムノコンプレックスとしても半減期の変らな かったことを示す。

実験例２　マウス（ｉｖ） 実施例４で得られたｒｈｌＬ−２と抗ＩＬ−２モノクローナル抗体との免疫複合 体を水に溶解しマウスにｒｈＩＬ−２に換算してＩＯμｇを静脈内投与した。経 時的に採血し、ｒｈｌＬ−２の血漿中濃度を測定した。対照実験としてｒｈＩＬ −２−抗ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体の代わりに市販マウスＩｇＧとｒｈ ｌＬ−２を混合したものをマウスにｒｈｌＬ−２として１０μｇを静脈内投与し た。得られたｒｈＩＬ−２の血漿中濃度の経時変化をファルマコキネチヵルに解 析した。結果を第１表に示す。

第１表　ｒｈｌＬ−２と抗ｒｈｌＬ−２モノクローナル抗体との免疫複合体のマ ウスにおける薬動力学パラメーターパラメーター　ｒｈＩＬ−２免疫複合体分布 容積（ｍｌ／ｋｇ）　６００　７０消失速度定数（１／ｈ）　２　２ １−コンパートメントモデル静脈内投与第１表に示したように解析結果から、免 疫複合体のｒｈＩＬ−２の分布容積は対照に較べて約８分の１　（約０．１２倍 ）であることがわかった。このことは実験に用いた免疫複合体を投与した際には 、ｒｈＩＬ−２の水溶液投与の場合と比較して、ｒｈＩＬ−２の分布が変わった ことを示している。また、この免疫複合体投与時のｒｈＩＬ−２の消失速度定数 は対照実験と比較して変らず半減期が変らないことを示す。

実験例３　マウス（ｓｃ） 実施例４で得られた免疫複合体を水に溶解し、ｒｈＩＬ−２に換算して１０μｇ をマウスに皮下投与した。経時的に採血し、ｒｈｌＬ−２の血液中濃度を測定し た。対照実験として複合体の代りにｒｈｌＬ−２と市販のマウスＩｇＧの混合物 を同様にマウスに投与した。結果を第４図に示す。第４図において一〇−はｒｈ ＩＬ−２の結果を、−〇−は免疫複合体の結果をそれぞれ示す。免疫複合体の時 の血中濃度は、第４図に示したように、２４時間以上の間、０．３ｎｇ／ｍ１以 上の高い値を示した。

実験例４　マウス抗腫瘍効果 マウス（Ｂｕｌｂ／Ｃ、７Ｗ、♀）に腫瘍（Ｍｅｕｈ−Ａ）を移植し、移植後７ 日目より、１２日間毎日１回、実施例４で得られた免疫複合体を水に溶かし、ｒ ｈＩＬ−２に換算してｌＯμｇ／マウス／１日を皮下投与した。

対照実験として抗ＩＬ−２複合体モノクローナル抗体の代わりにｒｈＩＩ、−２ を１０μｇ／マウスの皮下に投与した。コントロール群のマウスには処理を施さ なかった。移植後２１１日目マウスより腫瘍を摘出しその重量を測定し、コント ロール群の腫瘍重量に対する比（Ｔ／Ｃ）をめたところ、ｒｈｌＬ−２投与時の Ｔ／Ｃは５７％であったのに対して、免疫複合体投与時のＴ／Ｃは１６％であっ た。このことは、免疫複合体はｒｈＩＬ−２の有効性を大幅に高めていることを 示す。

１−記実験例１．２から明らかなごとく、本発明の免疫複合体は動物内に投与し た時のｒｈｌＬ−２の分布容積は単独で投与した時と比較して減少し、ｒｈｌＬ −２の分布が変わったことが示された。また上記実験例３．４に明らがなように 、この免疫複合体を投与することによって、ｒｈＩＬ−２の有効性を大幅に高め ていることが示された。

実施例１５ 抗ＩＬ−２モノクローナル抗体を過剰に配合した免疫複合体の調製（固体）： 実施例２で得られた抗ＩＬ−２モノクローナル抗体１０ｍｇ／ｍｌの１ｍｌとｒ ｈＩＬ−２１ｍｇ／ｍｌの０．　２ｎ＋１を室温で十分に混合し、免疫複合体含 有の注射薬とし、スピードバックコンセントレータ−で室温下、コールドトラッ プ温度−８０℃、５Ｔｏ　ｒ　ｒ以下で水を蒸発させモノクローナル抗体：ｒｈ ＩＬ−２が約５＝１　（モル比）の免疫複合体含有の粉末状の製剤を得た。これ に蒸留水１ｍｌを加え再溶解した。この時のＥＩＡ活性をみるとｒｈＩＬ−２と 同等の活性があった。

実験例５ マウス（ｓｃ）投与 実施例１５で得られた免疫複合体含有の粉末状の製剤に蒸留水１ｍｌを加え再溶 解し、Ｐ　Ｂ　Ｓ　（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ　５ａｌｉｎｅ　 ）で希釈したのち、ｒｈｌＬ−２に換算して１０μｇをマウスに皮下投与した。

投与３時間後のｒｈｌＬ−２の血清中濃度は、実施例４で得られた免疫複合体を マウスに皮下投与した時（実験例３）のそれの約３．５倍であった。

実施例Ｉ６ 顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−Ｃ３Ｆ）を用いて実施例１．２と同様にして、抗 Ｇ−Ｃ３Ｆモノクローナル抗体を得て、実施例３と同様にして、Ｇ−ＣＳ　Ｆ− 抗Ｇ−Ｃ３Ｆモノクローナル抗体免疫複合体が得られる。

参考例１ 予め０．５　鉱油を腹腔内投与したＢａ１ｂ／ｃマウスに５Ｘ１０６個の抗ウロ キナーゼＭ　ｏ　Ａ　ｂ産生キイブリドーマＵＫＩ−３，ＵＫＩ−８７またはＵ ＫＩ−６を腹腔内接種した。約１０−１５日後に腹水の貯留がみとめられた。抗 体の精製は常法により、４５〜５０％飽和硫酸アンモニウムで分画後、ＤＥＡＥ −セルロースおよびプロティンＡカラムクロマトグラフィーに供し、対応する抗 つロキナーゼＭｏＡｂ抗体ＵＫＩ−３，ＵＫＩ−８７またはＵＫＩ−６を得た。

これらの抗体はＨＰＬＣ（カラム：Ａｓａｈｉｐａｋ　Ｇ５−５２０．溶離液： ＰＢＳ　ｌｎ＋ｌ／ｍ１ｎ）で１０．９分に溶出し、市販のマウスＩｇＧの保持 時間と一致した。

参考例２　フィブリン溶解反応中和試験ウロキナーゼ溶液（最終濃度２５　ｎ　 ｇ　／ｍｌ）に被検抗体希釈液を添加し、３７℃で１時間反応後反応混合液をフ ィブリンアガロースプレートのｌウェル当たり５μｌ注入した。３７℃で２〜６ 時間後にフィブリンの溶解斑（直径）を測定し、ＵＫＩの酵素活性に対する被検 抗体希釈液に含まれるＭ　ｏ　Ａ　ｂの中和能を測定した。

参考例３　ウロキナーゼ酵素活性中和試験ウロキナーゼ溶液（最終１度１．７８ ７１ｇ　／ｍｌ）に被検抗体液を添加し室温で３０分間反応後、合成ペプチド基 質Ｓ−２４４４［１ｍＭ。

ピログルタミル・グリシル・アルギニル・バラニトロアニリド、カビ社（スエー デン）製］を添加した。さらに３７℃で１５分反応後、遊離したバラ・ニトロア ニリド（４０５ｎｍにおける吸光度）を測定した。

参考例４　ＵＫのＥＩＡ測定法 １次抗体としてヤギ抗ＵＫ抗体、２次抗体としてＨＲＰ結合ウサギ抗ＵＫ（Ｆａ ｂ’）を用いるサンドイッチＥＩＡ法によりＵＫｆｉ度を定量した。

実施例１７　免ｄ複合体の調製（液体）ＥＰ−３６３７１２（参考のため本明細 書に導入されている）に記載の抗ウロキナーゼＭ　ｏ　Ａ　ｂ抗体ＵＫＩ−３１ ０ｍｇ／ｍｌの０．６３ｍ１に対して高分子型ウロキナーゼ（日本製薬製造）１ ｍｇ／ｍｌの０．７ｍｌを混合することによって、抗つロキナーゼＭｏＡｂ抗体 ＵＫＩ−３：ウロキナーゼのモル比が３：１となるように燐酸緩衝生理食塩水中 で混合し、免疫複合体を得た。この免疫複合体を１次抗体として抗マウスＩｇＧ 、２次抗体としてＨＲＰ結合ウサつ抗ＵＫ（Ｆａｂ’）を用いるサンドイッチＥ ＩＡ法での定量値が参考例４での定量値と変わらないことから、ウロキナーゼは すべて免疫複合体で存在することが判明した。また参考例４のＵＫのＥＩＡ定量 で抗ウロキナーゼ免疫複合体の定量がウロキナーゼの単独の場合と同様に行える ことが判った。また参考例２および参考例３の方法で得られた免疫複合体の生物 活性を測定すると、免疫複合体のウロキナーゼの比活性はウロキナーゼそのもの の比活性と同じであった。つまり、免疫複合体はウロキナーゼの生物活性を中和 しないことが判明した。

実施例１８　免疫複合体の調製（固体）実施例１７の免疫複合体を凍結乾燥によ り水分を蒸発させて免疫複合体の固体を得た。これに蒸留水ｌ　を加え再溶解し た。この時の参考例４と同様の方法でＥＩＡ活性をみるとウロキナーゼと同等の 活性があった。

実施例１９　Ｆ（ａｂ’）、の調製（液体）抗つロキナーゼＭｏＡｂ抗体ＵＫＩ −３と　Ｓ　ｉ　ｇｍａ社のペプシンを混合し、ｐＨ３，５，３７℃で１８時間 反応させた。反応を停止後プロティンＡカラムで抗ウロキナーゼＭ　ｏ　Ａ　ｂ 抗体ＵＫＩ−３Ｆ（ａ　ｂ　’　）、を得た。このＦ（ａｂ’）、はウロキナー ゼ結合能を有してい抗ウロキナーゼＭｏＡｂＵＫ１−３Ｆ（ａｂ’）、と高分子 型ウロキナーゼ（日本製薬製造）をモル比で３：１となるように燐酸緩衝生理食 塩水中で混合し、免疫複合体を得た。この時の参考例４と同様の方法でＥＩＡ活 性をみるとウロキナーゼと同等の活性があった。

実施例２０　Ｆ（ａｂ’）、免疫複合体の調製（固体）実施例１９の免疫複合体 を凍結乾燥機により水分を蒸発させて免疫複合体の固体を得た。これに蒸留水１ ｍｌを加え再溶解した。

実施例２１　免疫複合体の調製（液体）Ｅｉ）−３６３７１２に記載の抗ウロキ ナーゼＭ　ｏ　Ａ　ｂ抗体ＵＫＩ−８７１０ｍｇ／ｍｌの０．６３ｍ１に対して 高分子型ウロキナーゼ（日本製薬製造）１ｍｇ／ｍｌの０．７ｍｌを混合するこ とによって、抗つロキナーゼＭｏＡｂ抗体ＵＫＩ−８７：ウロキナーゼのモル比 が３＝１となるように燐酸緩衝生理食塩水中で混合し、免疫複合体を得た。

実施例２２　免疫複合体の調製（液体）ＥＰ−３６３７１２に記載の抗ウロキナ ーゼＭ　ｏ　Ａ　ｂ抗体ｔＪＫ１−６　１０ｍｇ／ｍｌの０．６３ｍ１に対して 高分子型ウロキナーゼ（日本製薬製造）１ｍｇ／ｍｌの０．７ｍｌを混合するこ とによって、抗ウロキナーゼＭ　ｏ　Ａ　ｂ抗体ＵＫＩ−６：ウロキナーゼのモ ル比が３：ｌとなるように燐酸緩衝生理食塩水中で混合し、免疫複合体を得た。

実施例２３　免疫複合体の調製（液体）ＥＰ−３６３７１２に記載の抗ウロキナ ーゼＭ　ｏ　Ａ　ｂ抗体ＵＫＩ−３に対して二本鎖低分子型ウロキナーゼ（ＪＣ Ｒ社）を３＝１となるように燐酸緩衝生理食塩水中で混合し、免疫複合体を得た 。

実施例２４　免疫複合体の調製（液体）ＥＰ−３６３７１２に記載の抗つロキナ ーゼＭｏＡｂ抗体ＵＫＩ−３に対してブウロキナーゼを３：１となるように燐酸 緩衝生理食塩水中で混合し、免疫複合体を得た。

実験例６　ラット投与（ｉｖ） 実験例１７で得られた免疫複合体をラット（ｎ＝５）にウロキナーゼに換算して １００μｇ静脈投与した。経時的に採血し、ウロキナーゼの血漿中濃度を測定し た。対照実験としてウロキナーゼのみを１００μｇをラットに静脈投与した。こ の時の結果を第５図に示す。第５図において、Ｏはウロキナーゼのみの、○は免 疫複合体の結果をそれぞれ示す。

得られたウロキナーゼの血漿中濃度の経時変化をファルマコキネチカルに解析し たところ免疫複合体のウロキナーゼの半減期（７２分）は対照実験の半減期（２ ８分）の約２．６倍に増加し、分布容積（２７ｍｌ）は対照実験（９１ｍ１）に 較べて約０．３倍に減少した。

実験例フ　ラット（ｓｃ）投与 実施例１７で得られた免疫複合体をラット（ｎ＝５）にウロキナーゼとして１０ ０μｇ皮下投与した。経時的に採血し、ウロキナーゼの血漿中濃度を測定した。

対照実験としてウロキナーゼを同様にマウスへ投与した。その結果を第６図に示 す。第６図において一〇−は免疫複合体の結果を、−ローはウロキナーゼのみの 結果をそれぞれ示す。

免疫複合体の時の血漿中濃度は、第６図に示したように、４８時間以上の間、０ ．１μｇ／ｍ１以上の高い値を示した。しかしながら、ウロキナーゼのみを投与 した場合、投与後８時間におけるその血漿中濃度は０．１μｇ／ｍｌよりも著し く小さかった。

次の文献が、本出願において種々の観点からその記載を引用されているものであ って、参考のためにここに導入記載されている。

ザ・フｙ−マコロジカル・ベーシス・オブ・セラボイティグス（Ｔｈｅ　Ｐｈａ ｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｂａ５ｉｓ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ　） 、（１９８５）、　ＭａｃＭｉｌｌｉａｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａ ｎｙ　、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　、ＮＹ　ｐｐ、２２−２８ジヤーナル、オフ。イム ノロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＬ土旦旦、　２８６５ −２８７５　（＋９８５）ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キャンサー（Ｂ ｒ１ｔｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　）土工、１２３−１３３（ １９８３）キャンサー・イムノロジー・アンド・イムノセラビー（Ｃａｎｃｅｒ 　Ｉｎ＋ｕ＋ｕｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）、３０． ７１−８０（１９８９）特開昭６０−２２６８２１号公報（ヨーロッパ特許公開 １５４，３１６号に相当） ＰＣＴ／ＵＳ　８６１０　ｌ　２５２（Ｗ０８７００１０５６Ａ）特許出願公表 昭６Ｏ−５０２１０４ ＰＣＴ／ＵＳ８４１０１３８９　（Ｗ０８５１００９７４）キャンサー・リサー チ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）。

±立、　２４２１−２４２４．１９８５特開昭６１−７８７９９号公報（ヨーロ ッパ公開１７６．２９９号に相当） 特開昭６０−１２６０８８号公報 特開昭５９−９３０９３号公報（米国特許第４，５１８，５８４号に相当） 特開昭６０−１１５５２８号公報（ヨーロッパ特許公開１４５，３９０号） マイコンによる薬物速度論入門、南江堂　ｐ、１５９．１９８３プロシーデイン ゲス・オブ・ナショナル・アカデミ−・サイエンスニーニスニー（Ｐｒｏｃ、Ｎ ａｔ、１．　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ）、８５．４８５２ジャーナル・オブ・ イムノロジカル・メソツズ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　１ｍ＋ａｕｎｏｌｏｇｉｃ ａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ）、　９３　、１５７−１６５　（１９８６）時１ｊＪ（ 分）　時間（分） 図２ 時間（分）　時間（分）　時間（分） 図３ 図４ 血漿濃度（μｇ／ｍ　ｌ　） 血漿濃度（μｇ／ｍｌ） 平成４年８月θ　日

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. １．生理活性物質と、該物質の分布容積を該物質単独の場合より約０．５倍以下 に減少させうるモノクローナル抗体との免疫複合体。
2. ２．特許請求の範囲第１項記載の免疫複合体の有効量を含有してなる薬剤。
3. ３．乾燥品で粉末である特許請求の範囲第２項記載の薬剤。
4. ４．生理活性物質がサイトカインである特許請求の範囲第１項記載の免疫複合体 。
5. ５．サイトカインがインターロイキン−２である特許請求の範囲第４項記載の免 疫複合体。
6. ６．生理活性物質が酵素である特許請求の範囲第１項記載の免疫複合体。
7. ７．酵素がウロキナーゼである特許請求の範囲第６項記載の免疫複合体。
8. ８．モノクローナル抗体がイムノグロブリンＧである特許請求の範囲第１項記載 の免疫複合体。
9. ９．モノクローナル抗体がイムノグロブリンＧの抗体活性を有するフラグメント である特許請求の範囲第１項記載の免疫複合体。