JPH06508601A - 新規なコーヒー酸誘導体であるオラポシド、およびそれを含有する化粧品用組成物、又は薬剤用組成物、特に皮膚科学用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 なカフェイン　で　るオ　ポシド　およびそれを　る　ａまたは　、に 本発明は、本質的には新規なカフェイン酸誘導体である、オラｌンド（ｏｒｉｐ ｏｓｉｄｅ　）　、およびそれを含有する化粧品用組成物、薬剤用組成物、特に 皮膚科学用組成物に関するものである。

より詳しくは、本発明の新規な誘導体であるオラボシドは、ハマウ７ボ（Ｏｒｏ ｂｓｎｅｈａｅｅａｅ　）科の植物から抽出されるカフェイン酸誘導体である。

本発明はさらに、オラポシド誘導体、特にアシル化誘導体、およびそれを含有す る植物抽出液、特にハマウソボ類、ラボムノニスティ（Ｒａｐｕ＋＋　ｇｅｎｔ ｓｔａｅ）から抽出された植物抽出液に関する。

今日既になされている発明では、カフェイン酸誘導体はクロロフィルを含有して いないハマウノボ、寄生植物である顕花植物からの抽出液中に存在すると開示さ れている（文献：＾ｎｄｒａｙ　ｅｔ　ａｔ、、　１９８０．　ＩＩ　Ｆａｒｓ ａｅｏ、　１．１−３０：　Ｂｒ１ｄｅｌ　ａｎｄＣｈａｒａｕｘ、　１９２４ ．　Ｃ，Ｒ，＾ｅａｄ、　Ｓｅｔ、　１７８．１８３９を参照）が、それらの構 造は解明にされていなかった。

カフェイン酸（または３．４−ノヒドロキシケイヒ酸（３，４−ｄｉｈｙｄｒｏ ｘｙｅｉｎｎａｍｉｅ　ａｃｉｄ）　）およびそれらのいくつかの天然に存在す る誘導体の薬学上の効果は、すでに数多くの研究対象となっている。キムラらは 、数多くのタノニノ類の効果、特にカフェイン酸、およびヨモギから抽出される カフニオイルキナ酸誘導体（ｃａ［ｅｏｙｌｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｄｅｒｉ ｖａｔｉｖｅｓ　）の効果について研究（Ｐｌａｎｌａ　Ｍｅｄｉａ、１９８４ ．４７３−４７７　）　しており、ラツノの肝臓中のミドコノドリアおよびミク ロノームにおける脂質の過酸化を抑制する効果について論証している。ロイコト リエフ　（ｌｅｕｃｏＬ口ｅｎｅ　）代：ＩＩｔｉよびアラキン酸代謝に伴うリ ポキノゲナーゼに対するこれら分子の抑制効果、わよび喘豐のような炎症状帖に あるときそれらが治療に有用からしれないということとは、キムラおよびオカダ らによって文献（Ｊ、　ｏｒ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｅｔｓ、１９８７． 　Ｓｏ、３９２−３９９　）　ｌこ紀さオｔて０る。

異なるカフニオイル誘導体はそれらの構造が真なるように、広い分野で使用され ているのて、この種の新しい分子を薬学上研究すること、または他の植物からえ られる新しい分子を研究すること、さらに新規な薬学上の活性または改良された 効果について研究することは有意義である。

したがって、明かに興味深い特性を有する新規な化合物は、寄生植物である種々 のエニンダ（サイティス　スコパリウスＩＩ　（Ｃｙｔｌｓｕｓ　５ｃｏｐｉｒ ｌｕｓ　）およびパーがノ類（ｐｕｔｚａｎｓ　）　）のようなハマウッポ科の 植物と、レンズ豆、インゲン豆、およびナス科（トマト類、ナス類）のような食 用植物とから抽出することにより得られる。上記ハフウツボ（ｂｒｏｏ■ｔａｐ ｅ　）は、幹、花を咲かせる穂からなる多年生植物であり、植物全体としては２ ０ｃｍから１００ｃｍの高さに連りし、その幹に沿って芽鱗があり、その端部に は球根があるが、その球根は芽鱗で覆われている。植物全体としてはへテａサイ ドカフェイン＃銹導体（ｈｅｔｅｒｏｉｌｄｅ　ｃａｒｒｅｌｃｅｓｔｅｒ　ｄ ｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　）に富んでいる。小さな根として巻きひげによって主た る植物の根に付いている球根、器官は、最も高い１１１度の上記へテロサイドカ フエイ／＃誘導体を含んでいる。

ハマウノヂ、ラビ１−ムジェニスタ＃ｂｉら抽出される物質は、例えば植物の抽 出液、または植物の細胞をアルコールに浸すことによって、純粋な結晶として得 られる。その分子構造を駆足できる従来からある種々の方法（クロマトグラフィ 分離、融点測定、ＮＭＲスペクトル、質量スペクトル、ｘｔ＊スペクトル、ＩＲ スペクトル、ＵＶスペクトル、および種々の生化学分析）により分析する。上記 分析法により導き出された式は以下の通りである：３−０−（α−し−ラムノビ ラ／ノル）−［２−（３，４−ジヒドロキ／フェニル）−１，２−エチリデン３ −β−Ｄ−グルコピラ／／ド　４−力７Ｌイン酸エステルである。

上記物質、”オライ／ド（ｏｒａｐｏｓｉｄｅ　）＋と呼ばれるべきｒ！Ａ１１ ｔであるが、この物質は以下に示す式（１）によって示される。ただし下記式（ １）中、Ｒは水素原子を示す。

本発明はまた、式（＋）で表される誘導体、ただし式（１）中、１つ以上のＲは 独立して水素原子、低（Ｃ，−Ｃ，）アルキル基、特にメチル基、またはアシル 基、特にＣ，−Ｃ，を有する基、特にアセチル基を示す、に関するものである。

他の好ましい特性によれば、ベンゼン環のＯＲ基のみがアルキル化、特にメチル 化されている。

グルコピラｌシル環、またはうムノピラフシル環のＯＲ基のみがアシル化、特に アセチル化されていることが好ましい。

オラポノドまたはその誘導体は、ハマウツボ（Ｏｒｏｂｘｎｃｈａｃｅａｅ　） 科の植物、特にハマウツボ（ｂｒｏｏｗｒｉｐｅ　）である、ラボムシニスティ から抽出されることが特に好ましい。

この種の誘導体は、当業者にとって周知の方法によって得ることができる。

特に、オラポンドの過アセチル化誘導体は、簡単な方法で得ることができる。

その方法とは、先ず無水酢酸ｌに朗してビリジ／＋が加えられた溶液にオラボ／ ドの結晶を溶かす。これを室温で１晩放置する。翌日、それを濾過し、さらに得 られた本発明にかかる誘導体を再び溶かし、凍結乾燥させる。この挿作により、 オラボ／ドの過アセチル化誘導体、つまりグルコビラ／ノル環またはラム／ピラ ノシル環のＯＲ基がすべてアシル化された化合物が得られる。

上記すラボノドおよびさきに述べた誘導体は、ラジカルを捕獲する効果、抗酸化 効果、特に脂質の過酸化防止効果、アルドースレダクターゼ抑制効果、５−リヂ キ／ゲナーゼ抑制効果、ドパ−デカルホキ／ラーゼ抑制効果、アドレナリン作用 性β−プロブキング効果、抗振せん効果、抗アレルギー、および鎮痛効果・抗バ クテリア効果、抗菌効果のような数多くの化学的効果、生化学的効果を存してお り、さらにＵＶＡおよびＵＶＢ放射の広い吸収帯を有し、それらはソーラーフィ ルターを使用することにより、より有効的に使用できるということも思いがけず 発見された。

したがって、オラポ／ド、その誘導体、およびそれを含有する植物抽出液は、特 に薬剤分野、化粧品分野、食料品分野において有用である。

本発明の第二の特性によれば、本発明は化粧品用組成物、薬剤用！Ｉｌ成物、特 ｌこ皮膚科学用組成物であって、活性成分として、上記式■、ただし式中、ｔａ ＵのＲは独立して水素原子、低Ｃ，−ＣＳアルキル基、特にメチル基、またはア ンｌし基、特にＣ，−Ｃ，であるアシル基、特に了セチル基、で表されるオライ シドまたはその誘導体を含有していることを特徴とする組成物、または植物抽出 液に関するものである。グルコピラノシル１またはラムノピラノンル環のＯＲ基 のみがアシル化、特にアセチル化されたようなアシル化誘導体が好ましい。また 、ベンゼン環のＯＲ基のみがアルキル化、特にメチル化されたようなアルキル化 誘導体であることも好ましい。

本発明の好ましい具体例では、さきに述べたオラボ／ドまたはその誘導体は、最 終的な組成物中に、約０００１重量％から約＋ｏｆＩＩ量％、好ましくは０、Ｉ ｉｉ置％から５重量％の割合で含有されている。

さらに、特別な具体例によれば、本発明にかかる組成物はフリーラジカルを捕獲 する効果、アルドースレダクターゼ抑制効果、５−リヂキ／ゲナーゼ抑制効果、 ドーバーデカルヂキ／ラー七抑制効果、β−ブσ２カーのように作用する効果、 震えを防止する効果、または紫外線であるＯＶＡ放Ｑ１およびｔｌＶＢ放ｑ１放 線１する効果を有している。

好ましい変形例によれば、先に説明されたような本発明にかかる組成物は、化粧 品用組成物または薬物用組成物中に、特別な抗・シクテリア用保存薬または抗菌 用保存あを含有していないばかりでなく、どの様な特別な抗酸化剤さえ、特Ｃ二 脂質の酸化に対する抗酸化剤さえも含有していない。

もちろん、組成は目的によって変えることができる。したがって組成物＋！、注 射により投与する様な形状、経口投与、または局部的に外用することによる外部 処置に適した形状等に処方されるであろう。このため、この処方にはに形削が適 切であり、賦形剤は化粧品用にまたは薬剤用に含有できるものである。

本発明にかかる組成物は、特に皮膚の老化防止、およびしばしば日焼けによる紅 斑をともなう炎症状況を治療することに効果を有している。事実、外部からの何 か、たとえば紫外線放射、酸素還元などが原因となりでいるいくつかの代謝状況 、または代謝障害は不完全であり、フリーラジカル杉成の結果起こるものであり 、細胞膜のリン脂質の劣化を引き起こす。フリーラジカル生成は、細胞老化を招 く種々の生理学状の状況、たとえば癌腫瘍、炎症、および肝臓中毒の過程を引き 起こす。

したがって、本発明にかかる組成物は、局部的外用および全身に投与することに より、特に炎症、その中でも特に過剰に日光に当たったことによる炎症を治療す ること、細胞老化をフントロールすること、１ｌｔ７＋こ皮膚老化の原因である 皮膚に当たる放１１４ｓＩを減少させること、紫外線であるυＶＡ放射およびＵ ＶＢ放射に対して皮膚を保護すること、皮膚への色素沈着を防止および治療する ことがてきる。それらはさらに、どの様な原因であるかにかかわらず、肝臓中毒 、および糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）　、特に真性糖尿病（ｄｉａｂｅｔｓ　ｍ ｅｌｌｉ＋ｕｓ）およびしばしば糖尿病に関連して起きる水晶体障害に対しても 効果を存しており、さらに鎮痛剤、抗アレルギー剤、向精神薬、抗バーキンンン 症候群薬、および抗高血圧剤として効果的である。

抗震え治療、特にパーキンツノ病にかかる本発明の特別な具体例によれば、先に 述べた組成物もまた、Ｌ−ドーパの治療上効果的な置を含有している。事実、先 に示された式１で表されるオラボ／ドおよびその誘導体は、その抗震え活性にお いてＬ−ドーパとしての活性可能性を有しており、特にｒ４−＋７ノノ病に対し て効果を有している。上記し一ドーパに関係した式！で表されるオラボノドおよ びその誘導体は、動物やヒトにおいて震え誘発因子によって生じる震えを実験的 に減少させることができる。パーキンツノ病において、（舞踏病型の）異常な動 きの改善・　し−ドー、ｆにより治療したことによる第二の障害の改善力Ｃみら れｔこ。

本発明は、幾つかの具体例を参照して以下により詳しく説明されるであろう。

それら具体例は単に説明するために記されているのであうで、本発明の範囲を制 限するものではない。これら実施例は添付された何枚かの図面を参照してｔする 。

その図面とは、以下に示す通りである。

図１は、処理後、３時間および７時間経過したときの培養媒体上の４、！０・肝 細胞（８日培養）により減少したＬＤＨ（ラクターゼデヒドロゲナーゼ）の量を 示す図である。２つの帯状グラフのブロックの参照番号ｌは、対照としての未処 理培養地により得られた結果を示している。＃照番号２は、１０−’Ｍという濃 度のニトロキンニル（ｎｉｔｒｏｘｙｎｌｌ）で処理された培養地を使用して得 られた帯状グラフのブロックを示している。参照番号３は、１０−′Ｍという濃 度のニトロキンニル、および５、ｌＯ−％Ｍという濃度のベルパスコシト（ｖｅ ｒｂａｓｃｏ＠１ｄｅ）で処理された溶媒地を使用して得られた帯状グラフのブ ロックを示している。参照番号４は、１０−’Ｍという濃度のニトロキンニル（ ｎｉｔｒｏｘｙｎｌｌ）　ｓおよび５．１０−’Ｍという濃度のオラボシドで処 理された溶媒地を使用して得られた帯状グラフのブロックを示している。そして 参照番号５は、１０”Ｍという濃度のニトロキンニル、および５．１０−’Ｍと いう濃度のアレナリオ／ド（ａｒｅｎａｒｉｏｓｈｉｄｏ　）で処理された溶媒 地を使用して得られた帯状グラフのブロックを示している。ニトロキンニルは、 肝要性試薬であり、ベルパスコシト（ｖｅｒｂａｓｃｏｓｉｄｅ）およびアレナ リオ／ド（ａｒｅｎａｒｉｏｓｈｉｄｏ　）はカフエイフ酸以外のへテロノドエ ステＩし類であり、それらは当菓者にとって周知のものである。

図２は、処理後、３時間、７時間、および２４時間経過したときの培養媒体上の ４．１０’肝細胞（２４時間培養）により減少したＬＤＨ（ラクターゼデヒドロ ゲナーゼ）の量を示す図である。上記図１に示されているように、参照番号１は 未処理培養地を使用して得られた結果を示しており、参照番号２は１０−’Ｍク ロロ士ルムで処理された培養地を使用して得られた結果を示し、参照番号３はＩ Ｏ−′クロロ士ルム、および５．１０−５Ｍという濃度のオラボ／ドとを組み合 わせて処理した培養地から得られた結果を示している。クロロホｌレムもまた肝 要性試薬である■３は、反応媒体中の５．１０−’Ｍと（１う濃度の翼なるフェ ノール性化合物による肝臓ミクロゾームの１Ｊポ過酸（ヒの抑＊１を示して−す る。＊Ｓ番号１は、フェノール性化合物を含有して（１な（１対照ロツトにより 得られた帯状グラフのプロ１りを示して−する。Ｉ！照番号２１１ベル、（スコ ンドにより得られた結果を示してもする。１番号３１！、オラボンド偽こより得 られ？：結果を示している。参照番号４ζよ、アレナ１７オンドから得られた結 果を示している。参照番号５１！、ロスマＩＪン酸（ｒｏｓｓｘｒｉｎｌｃ　ａ ｃｉｄ　）から得られた結果を示して（する。参照番号５１１、イ・ノクロａツ エン酸くｉｓｏｅｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ　）から得られた結果を示し て（する。１＃照番号７１１、テコリン酸（ｃｈｉｃｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　）　 ｂｙら得られｔこ結果を示してる。参照番号８はカフェイン酸から得られた結果 を示し、を照番号９番よビタミンＥ（α−トフ７　エンール）から得られた結果 を示してｔする。上！己ヘルｔ＜　Ｘコシド、オラボシド、およびアレナーノオ シド１ｉ、カフェイン酸のへテロンドエステルであり、引用された酸−カフエイ ノ酸以外のエステｌしであ図４は、翼なる濃度のオラボンド１こよるラビットの 烏千臓ミロ゛／−ムシこ対するリボ過酸化の抑制を示して一為る。１番号１１１ 、オラポンドを含有していない参戸ロットから得られｔ、、桔県を示して（＼る 。参照番号２１１５．１０−’Ｍというａ度のオラボ／ド（こよりｉｌｌられｔ こ結果を示す。参照番号３はＩＱ−’Ｍと（１う濃度のオラボ／ド１こよりＩＩ られｊこ結果を示す。

参照番号４は５．ｔｏ−＠ＭとＬｌう＃Ｉｊｌ：のオラポノドｔこより得られｔ こｌ古渠を示す。参照番号５４２．１０−’ＭとＬｌう濃度のオラポ７１゛によ りｉｌられた結果を示す。参照番号５＋１ｌＯ−’Ｍと（１う濃度のオラボノト ′砿こより得られた結果を示す。

Ｌ巨匠上 亀敬胤邸東Δ旦聚−阻呈五■五、オラボンｙｃｏ　、オヨｒｊノ確原Ｕは、石油 から得られたエーテルて脱脂された粉末状の植ｔ！１ｌ（ｔ・マウノボ）である 。この粉末を、５０℃において、植物粉末４００ｇに対して１０リフドルの割合 で、８０％エタノール、または８０％メタノールに浸す。そして、得られた抽出 液を濃縮し、後に凍結乾燥する。凍結乾燥された抽出液は、”粗／１マウツヂ抽 出液”と呼ばれる。この″粗ハマウツボ抽出液１は、３重量％から５重量％のオ ラボソドを含有している。

ろ過後、１０％メタ重亜硫酸塩溶液の生成したばかりの新鮮な水性ｆａ液２０ｍ １を、すばやく上記アルコール性残さに添加する。−晩４℃に放置した後、抽出 液をろ過し、ついでアルコールを除去するようにして濃縮する。抽出液は現段階 では水性であるが、この抽出液を、過酸化物を含有していないエチルエーテル・ 石油から得られるエーテル（３：１）の混合物を用いて最終的に脱脂する。この ようにして得られた脱脂抽出液を、２０す、トルの酢酸エチルを用いて繰り返し 脱脂する（塩化カルシウムで再蒸留する）。この”酢酸エチル”相を硫酸ナトリ ウム（純粋で、乾燥している）を用いて乾燥させ、ついで化合させ、乾燥させる ために真空下で蒸発させる。得られた粉末状の残さ、色はクリーミーホワイトで ある。この粉末状の残渣は”精製〆・マウツボ抽出液２と呼ばれ、電量で約３０ ％のオラｆ／ドを含有している。このｔｌｌｌ！２抽出液を熱水に溶解し、得ら れた溶液を室温で結晶化させ、そしてさらに精製するために、＋４℃に放置する 。

、−れら得られた結晶を乾燥させ、５％エタノール−９５％水からなる混合物の 鉄水に再び溶解させ、冷やして再結晶する。この操作を数回繰り返す。

純ｒ＞　’；結晶として得られた成分を種々の生化学分析、物理分析、薯４学分 析にか１ブる０その回転力（ｒｏｔａｔｉｏｎ　ｐｏｗｅｒ）は（ａ＞””　＝ −＋　＋０．３　（メタノ−１し）である。溶解温度は２ブ０℃であった。’　 ＨＮ　Ｍ　Ｒスペクトル（１’ＰＭ中の６）　＋１、Ｌノ下の通りである。

７．４６　ａｎｄ　６．１８　（２Ｎ、２ｘｄ、　Ｊ　＝　１６　Ｈｚ、　Ｉｒ ａｎｓ　Ｒ−Ｃｌ−１＝　ＣＨ−Ｒｔｘｓｎｄ）。

５（ＩＨｌｄ、Ｊ　＝目（ｚ、　Ｈ−Ｉ　Ｒ１＋ａ）、　４．９２（ＩＨ，ｔ） ＝　９．５　Ｈｚ、　Ｈ−３Ｇｌｃ）。

４．５７（ＩＨ，＋ノー　２．５．９　Ｈ乙Ｈ−Ｔ　アグリコン）４．５５（Ｉ ｈ、ｄ、Ｊ　＝　７．８１−１ｚ、　Ｈ−Ｔ　Ｇｌｃ）、４．０５（ＩＮ、＋） 　＝　９．５１−１ｚ、　ｌ−１−３Ｇｌｃ）B ３．９４−３．７１（２Ｈ，ｍ、Ｊ　＝　１２　也２Ｈ−６Ｇｌｃ）。

３．５７（ＩＩ上ｄｄ、Ｊ　＝　１．３１（ｚ、　Ｈ−２°Ｒｂａ）、　３．４ ５（ＩＨ，ｍ、８．８’　アグリコン）３．３８（ＩＨｌｄｄ、Ｊ　＝　７．８ ，９．５１（ｚ、　Ｈ−２Ｇｌｃ）、　１０５（３Ｈ，ｄＪ　＝　６町３Ｈ、Ｉ 　Ｒｈａ）フントロンウピフン８６０（商標）型の装置を用いて、得られた物質 のＵＶスペクトルを測定したところ、３３０ｎｍでＬＩＶＡの最大吸収が見られ 、２９゜ｎｍでｔＪＶＢピークが見られた。Ｉ壽−ノルＭＣＸ　（商標）と、オ ラヂンドとを比較するために、微分によるＵＶＢビーク面積を比較した結果、オ ラヂ／ドのＵｖＢ吸収活性はバーノルＭ（Ｘ（商標）のそれの０，４倍であると いうことが判った。もし、オラポシドのＵＶＡビーク面積を微分化し、バーノル Ｉ　７８９（商４ｊ＋）のそれと比較したなら、オラボンドのＯＶＡピークはバ ーノルｌ　７８９（商標）の０．２倍であることが判るであろう。上記結果、お よび質量スペクトル、Ｘ線スペクトル、ＩＲスペクトルの結果は、オラボンドが ３−０−（α−Ｌ−ラムノピラノラフ）　−［２−（３，４−ノヒドロキシフェ ニル）−１，２−エチリデン］−β−Ｄ−グｌレコピラノノド（ａ−０−（α− Ｌ−ｒｈａｓｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−［２−（３、４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ｐｈｅｎｙｌ）−１，２−ｅｔｈｙｌｉｄｅｎｅｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｅｏｐｙｒ ａｎｏｓｉｄｅ）の４−カフェイン酸エステルであるということを示している。

Ｋ良外主 培　地上でラビットの　細　を　いてのオラヂ／ドの一！　・についての試験１ 巳支狭 選択された実験モデルでは、第１培養地上でのラビットの肝細胞により、乳酸デ ヒドロゲナーゼ（Ｌ　Ｄ　ＩＩ　）のリリースについて調査された。このＬ　Ｄ 　＋（リリ−スは肝細胞老化マーカーを示すものである。

上記肝細胞はニトロキンニル（１０−’から１０−’そル）、またはクロロホル ム（Ｉ　Ｏ−’から１０−’）で慎重に中毒にした。

オポランドの効果は最終濃ｆｌｊｏ、ｏｓｍＭの培養地で評価された。

図１は、オラポシドはニトロキンル中毒の肝細胞によるＬＤＨのリリースをかな り減少させることができるということを示している。図２は、クロロホルムで処 理された細胞への少ないが明らかなる効果があること、そして中毒効果も少々あ ることを示している。

オラヂ／ド自体は１００μＭという濃度でさえも細胞中毒はない。

！巨匠ｌ ラビットの　ミクロ／−ムにおける１ボ　１１０ｃｒＯ旧ｄａｌｉｏｎ　に２と 工五且亘 リポ過酸化反応はラビフトの肝臓ミクロゾームがＮＡＤＰＨの存在下で培養され るときに起こる。

ミクロゾームは、Ｍ音波によ１て肝細胞を製造することによって再びカバーする 事ができる。

リポ過酸化は、ブラサーら（文献：＾ｎｇｌｙｔ、　Ｂｉｏｃｈｅｔ　Ｈ，１６ ，３５９−３６４）による方法に従って、７０ニルジアルデヒドの生成を通して 評価された。

この反応は、５．１０−’Ｍの一度のカフェイン酸またはオラヂ／ドが存在しな い場合（λ１解）、存在する場合、または５．１（１−’Ｍの１１１度のα−Ｆ フフメロール（／クラ）（抑制活性が知られているので２４ＶＪ、となる）が存 在する場合に起こ図３は、カフェイン酸、およびα−トコフェロ−ルが同等の抑 制活性を有していること、およびオライ／ドが高い抑制効１（＋ｏｏ％）を有し ていることを明らかに示している。

５０％抑制を得るために必要なオラボンドの投与量は、１０−’Ｍ（図４参照） である。

さらに、フリーラフカルジェネレイタ−（ＣＣＩＪＩよび）１，０．　）による 脂質膜の酸化は効果を増した。ごれらの状況下での、オラポ／ドによる抑制効果 はＣＣ１，では１００％であり、Ｈ２Ｏ，では９０％である。

爽胤匠土 バクテリア　および　の カフェイン酸およびその誘導体のいくつかはバクテリアや菌の成長を抑制すると いうことは知られている。この特性はｌ０ＩｉＫのバクテリアを含む翼なる４０ 種とオラヂシドとの組み合わせ、および２５種の菌を含む興なる２５＃！とオラ ポ／ドとの組み合わせで確認されている。

０．５ｍｇ／ｍ１以上の投与量ですべてのバクテリア橿を１００％の割合で抑制 できた。テストされたバクテリア橿は、黄色ぶどう球菌、連鎖ｐｅａ＜グループ Ａ、グループｏ）、大＠鴫、肺炎かんＩＩ　Ｕｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｗ ｓｏｎｉａｅ　）　、プロテウス属の一種、プロビデンシア属の一種、霊菌、エ ンテロバクタ−クロアカー（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ｃｌｏａｅａｅ）　、 緑ａｍ、サルモネラｍ（チフス菌および／ぐラチフスｍ）である。

より詳細な調査が２９種のバクテリアを使用して行われ、黄色ブドウ球菌では０ ．０６ｍｇ／ｍｌの濃度では７０％抑制であり、０．１２ｍｇ／ｍｌでは８０％ 抑制であった。

抗菌活性については、通常植物に含有されているミク０ｓｔｌｉをス１ｔとして テストされｔこ。アゾロ菌ｔｆｉ（ｆことえばアｌレテマリアテニニ−イス（ａ ｇｅ園ａｒｉａ　ｔｅｎ旧Ｓ）、フザリウムアベノ七つム（Ｆｕｓａｒｉｕ■ａ ｖｅｎｃｅｕｓ　）　、　ノオトリコムカノデイダム（Ｇｅｏｒｒｌｃｏ會ｅａ ｎｄｉｄｕｓ）等）、ムコール目（ｔことえば、ムコ−ｌレムモト′（Ｍｕｅｏ ｒ　ｍｕｃｅｄｏ）　、カニノガーメラエレガン（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌ ａ　ｅｌｅｇａｎｓ）　、す／パスニグリダン（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｎｉｇｒｉ ｃｉｎｓ）等）、エンド１１１ｍ　（ｌことえ１ｆ、力ンンダリボリテイカ（Ｃ ａｎｄｉｄａ　１ｉｐｏｌｙｔｉｃａ）　、普通酵母等）、ペレクトａｍ（Ｐｌ ｅｃｔｏｍｙｃｅ＋ｅｓ　）　（ＰＩえば、アスペルギルスクラ／（タス（＾５ ｐｅｒ（Ｉｌｌｕｓｃｌａｖｘｔｕｓ）　、黒色アスペルギルス、ベニンリウム クリソゲナム（Ｐｅｎｉｃｌｌｌｉｕ■ｃｈｒｙｉｏｇｅｎｕｍ　）　、ベニン リウムルプラム（Ｐ、　ｒｕｂｒｕｓ　）等）、およびピレノ菌類（たとえば、 ／ヤートミナムグロボスム（Ｃｈａｅｔｏｍｌｕ＠ｇｌｏｂｏｇｕ＊）　、ンー ダリアヒミコラ（ＳｏｒｄａｒＩａ　ｈｉｓｌｅｏｌａ　）等）を含む２５＃ｌ について行われたＯテストされた分子　成長す、抑制まｔユ、ｉ　ＭＩＣＩこよ り減少されるｆ！　成長ｂ（抑制される擾（％）　＜　ｔｏ　ｍｇ／ｍｌ （％） Ｏス？リン酸　ｔｏｏ　９６ （ＲｏｓｍａｒｉｎｉＣａｃｉｄ） オライ、ド　９２６４ 力フエイノＭ　８３　５２ クロロゲニン酸　８０４０ に紅色ｌ アルドース　−　Ａ、Ｒと　Ｉ　る　の　テスト　ＥＣ１，１，１，２１」 酵素抑制は、生成の動物、およびう、ノから得られた新鮮な水晶体力１ら単離さ れｆ：　ｔｆｌ酵素抽出液を用いて試験管内で評価しｔ二。反応原理１よ以下に 示す通りである。

八Ｒ クリセルフルテ゛ヒト＋　ＮＡＩ］’ｌ（←グリセ。−ルＩＮへ団。

この反応はｐＨ−６，２、室温で起こり、吸光度１１３４０ｎｍで屓噌定された 。

テストされた分子は、２倍の蒸留水に溶解された。

グリ上ロールの測定結果を通して得られた結果は、ＩＣ５０（酵素活性を５０％ 抑制する濃度）として示されている。

結果を以下の表に示す。

Ｊツ透述轟庄 テストされた分子　１ｃ　５０　（ｃｎｏｌ　Ｘ　Ｌ’）ｔ９４ンＶ　（１）　 １．５ｘ　１０’（２）　１．６５　ｘ　ｔｏ　’ −＜７．ｚ＜Ｊ　）　７ｙ　（＋）　１．６　Ｘ　１０’（Ｖｅｒｂａｓｃｏｓ ｉｄｅ）　（２）　Ｉ６Ｘ【０’ｒしｔ９ｔ／Ｖ　（１）　２．３８ｘ　ＩＱ’ （＾ｒｅｎａｒｉｏｓｉｄｅ）　（２）　１．４７　ｘ　１０’Ａ、Ｒ−ラ　ノ 　ノの　ｒ へｒｂパｘ″Ｖ　１７３ｘｌｏ・ （Ｖｅｒｂａｓｅｏｓｉｄｅ） 翼なるＰ１類のヘテロンドカフェイン酸エステルら（ｈｅｔｅｒｏｇｉｄｅ　ｃ ａＲａｌｃｅｓｔｅｒｉ　）　（＋　）および（２）のアルドース還元酵素抑制 活性は、２＄１の異なる実験方法で評価された。

１迫 上記４橿の分子は、う１ソおよび畜生から得られたアルドース還元酵素を抑制し ている。最も活性を有する分子は、１．６ＸＩＯ−’モル／リットルのＩＣ５０ であるオラポ／ドである。今日市場で頻繁に市販されて効果があるとされている 分子であるツルビニル（Ｓｏｒｂｉｎｉ　ｌ　：商標）の１つで以下に示す構造 を有する合成分子よりも、より活性を有していると思われる。その構造とは、６ −フルオロスビロクロマンー４．４′−イミダ／リン−２’、５’　−フォノ（ ６（ｌ　ｕｏｒｏｓｐｉｒｏｃｈｒｏｍａｎａ−４，４’　−ｉｓ　１ｄｉｚｏ ｌ　ｉ　ｎｅ−２’　、　Ｓ−ｄ　１ｏｎｅ）であり、Ｉb５０は ５ＸＩＯ”モル／リフドルである。

爽施且旦 ケラチ／サイト立　−でのオラポンドの　フリーラッカＩし　の鴎 オラヂ／ドの抗フリーラジカル活性は、周知の抗フリーラフカル剤と比較して、 培養地上でのヒトのケラチ／サイト線において調査された。

抗フリーラジカル剤の保護活性は、細胞を酸素化フリーラジカル源と接触させた 後、培養地（細胞嗅脂質のリポ過酸化を反射させる）上のモノアルデヒド（ＭＡ Ｄ）を測定することによって評価された（Ｚ、Ａ　ブレイサーらの方法に従う、 文献＋　＋９６６＾ｎａ１．　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｉｇ、　３５９−６４先に引用 した）。

物質の細胞中毒もまた、高濃度でのラクターゼデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の測 定によって調べられた（文献：’Ｚ、　Ｉｋｌｉｎ　Ｃｈｅｔ　１９７０．８． ６５８およびにｆｉｎＢｌｏｅｈｅｗ、１９）２．１０．１８２を参照）。

これらの結果をもとに、抗フリーラジカル活性と、細胞中毒Ｍ［ｉとの両方の基 準で分子を細胞レベルでクラス分けした。

艷１扛り正亙汰 Ｍ＝ 一細胞：鱗状の癌から得られたヒトのケラチノサイトー培養地：小牛の胎児から 得られた血清（イノターメブド社１２）の５％が添加されたベーンブクな培養地 、ＤＭＥＭ（１／２）、ＨＡＭ　ＦＩ２方Ａ１ および几 培養地は６０ｍｍのペトリ皿（ＮＵＮＣ）で用意され、種子の密度は１ｃｍ２あ たり５０００細胞の割合である。

種を蒔いてから１週間後、細胞のとけ込んだ単層を、ｐＨが８である、ビタミン ｃをＩＱ−３Ｍ、Ｆｅ５Ｏａ　をＩＯ−’Ｍ金含有ている酸素化リフヵルジェネ レイターを含有する溶液５ｏｏリブトルで処理し、さらにテスト中の分子にＰＢ Ｓ緩ｉｔｉ液を添加したく反応媒体）。

３７℃で２時間に渡って培養させた後、この培養地をＭＤＡの測定のため回収し た。

Ｌ上」Ｊｌ吐定 ２００μＭでＤＭＳＯが含有されている溶液を有する培養地と、ある量の溶媒を 含有している対照培養地とで化合物をテストした。

抗フリーラジカル分子で毎日処理された培養地のＬＤＨリリースの量を、２４時 間後、および６日後に測定した。

培養地から得られた上澄み液を、ピルビン酸ナトリウムおよびＮＡＤＨと接触さ せ、分光測定法によりＬＤＨ活性の動態を測定した（ボエヒュリンガーキット（ Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　ｋｍ　）。

ＬＤＨ活性はＯＤ／ｍ１ｎ（ＯＤは光学的密度を意味する）の増加により明らか になった。ＬＤＨ活性は、分子の細胞中毒を反映している。

Ｋ止ム二■定 細胞を２時間にわたつて保温した後、５００μ直の反応媒体をサノプルとし、５ ３２μｍでＭＤＡを測定するために、チオバルビッール酸を添加した。

結果は、ＭＤＡ生成の抑制％で示されている。

ｉム旦しバ友血！ 周」エムＬ区級迫 Ｉ４：′ｇＣ１ｏｌｏｘｉｃｉｌ これは、２００μＭの３ｆ！の物質でテストされた。結果は、スＩＰＨ（＋Ｄｙ ｓ。

）とともに、接触させてから第１回の３日後のＯＤ増加を％で示しである。

ＤＩ　Ｄ２　Ｄ３ αトフフエロール　１９±２　８３二２０５４二８’３’Ｔ　８００　：　８０ 　Ｉｌｌ　！　＋５オラボンド　０　０　０ （３橿の測定方法による平均） ＢＨＴの高い細胞中毒は第１日目からＬＤＨのリリースが高いことから納得がい く、ということに注意すべきである。また、α−トコフェノールは、ＢＨＴと比 較すると細胞中毒が少ない。そしてオラボシドは、細胞中毒を起こさないという ことを示している。

址１人囚社主 この測定は、反応混合物で２時間保温された、１００μＭという濃度の３種の物 質において行われた。生成されたＭＤＡは分光光度計により測定され、その結果 は、対照（反応媒体のみ）と比較して、この物質の生成を抑制する％として表さ れている。

抗ラジカル物質の保護力は、以下の通り評価された。

＊５ｆ／ド　（Ｗ１３９）　ニア０４：３％−（第２実験）　０１１５％。

（３汗の測定方法による東向） オラポ／ドの保護力はＢＨＴのそれと同等であり、α−トコフェロールのそれと 比較して少々落ちることが示されている。

１溝 培養地の上澄み液のＭＤＡを測定して得られた結果から、われわれは１００μＭ の濃度のオラポシドの抗フリーラジカル活性を評価することができる。それはＢ ＩＴと同程度であるが、α−トフフエロールよりも少々効果が落ちる。

しかしながら、上記２橿の対照物質と興なり、２００μＭという一度まて細胞中 音を起こさないということは注目すべき事項である。

本発明にかかるオラポンドおよびその誘導体を含有する数多くの化粧品用組成、 または薬剤用組成を以下に示す。

特に記載しない限り、「％」は「重量％」を示す。

裏良匹Ｌ −ζ′　るゲル（抗炎症性） ｗ％ −２，５％グリセリンを含有するカルボポル９４０＠ゲル７０％−合計１００％ にするために必要なＨ２０Ｉ（）Ｏ％裏胤区１ 区１良久エニ血 合計！００％にするために必要な 従来の防腐剤を含む水と香料と抗酸化剤　・　・−・　・・　１００％（°）オ ラポンドを含有するりボゾームの組成は以下の通りである。

オラポンドは水相中に存在する。

ｉＬ＆匠ｌ マークライトニングセーラム 大１止 １ヱ！眠ロー９Ｌ二 ・精製されたハマヮノヂ抽出液 （実施例１中の＞　１０％ 微粉末ヶ、７２％ 一非イオ／性乳化１１１１５％ 一オイ、、ｌ　３０％ 中拍ゲル２５％を含むカルボポル９４０＠０２％ 一ノリプノ　５％ ゛合計１００％にするための 防腐剤を含む水と抗酸化剤と香料　１００％大遣ＪＬＬＬ 墓μｍ宣 先に記載された式（りで表されるオラポンドまたＩ！その誘導体を６００ｍｇ含 有する経口投与用のカプセルは、従来から用ｔＩられて（する補にニ剤を使用し てカプセル化された。

得られｔコカプセルは、特に〆ぐ一キン・ノン病の治ｌｌ１ｌＩこ対して使用さ れ、１日あｔこり、４か９６カプセル投与された。そ装置ｌｉｔ日あｔこり、身 体１ｋｇ１こ文１して１ｍｇから６ｍｇの純粋ｆｉオラヂ／ドを含有して−する 。

本発明はまＩコ、化粧品用組成物または薬剤用組成物、特４こ皮膚１斗学用組成 物であって、化粧品としてまたは薬剤として含有できる補にニ剤、主薬、Ｍ斤番 剤に、先述べたオラヂ／ドまたはその誘導体の効果的ｆｉ　ｌ　ｂζ混合されて （することを特徴トする１ＩＩｆＬ物に関するものである。ｏ、ｏｏｔｌ凱％カ １ら杓東０徂黴％、より（干ましくは０１ｆ！盟％から約５重量％のオラボ７ド まｔこ１ｉその誘導体力（、上８己混合物、特に局所治療に使用される成分に含 有されてＬすることｂｉ好ましＬｌ。

さらに、本発明は、何等かの原因により発生しｌこ７１ノーラジカＪしｆこよっ て生じた状況を処置するための方法であって、好ましＬｉｚ状で、先にｇ己した 式！で表されるオラポシドまたはその誘導体の効果的な置を上記状況の１つを被 っている患者に投与することからなる方法に関するものである。

この治療プロセスの１つの具体例によれば、特に局部治療用成分として使用する 場合、０．００１重量％から約ＩＯ重量％、より好ましくはＯ，１重量％から約 ５重量％の先に述べたオラポシドまたはそのＭ導体が投与される０特別な具体例 によれば、炎症、特に過剰に太陽に晒されたことが原因である炎症は、好ましい 結果を得るために、先に述べた式！で表されるオラボシドまたはその誘導体の好 ましい量を局部的に外用したり、経口投与、ａｉｉｔ投与、または注射したりす ることによって治療される。

本発明の他の変形によれば、老化した細胞、特に老化した皮膚および放制が引き 起こした老化は、好ましい結果を得るために、先に述べた式１で表されるオラボ ンドまたはその誘導体の好ましい量を局部に外用することによって治療または防 止できる。

本発明の他の変形によれば、好ましい紫外線プロテクト効果を得るために、先に 述べた式１で表されるオラボシドまたはその誘導体の好ましい量を局部に外用す ることによって、皮膚は紫外線であるυＶＡおよびＵＶＢ放射に対して保護され る。

本発明の他の変形によれば、皮膚への色素沈着は、先に述べた式！で表されるオ ラボ／ドまたはその誘導体の好ましい量を局部に外用することによって、防止ま た（１治療される。

本発明の他の具体例によれば、好ましい効果を得るために、先に述べた式■で表 されるオラヂ／ドまたはその誘導体の好ましい皿を投与、好ましくは経口投与、 または注射することによって、何らかの原因によって生じた肝臓中毒を治療する ことができる。

本発明の他の具体例によれば、Ｉ！尿病、特に真性糖尿病、または糖尿病に関係 した水晶体障害は、先に述べた式Ｉで表されるオラヂ／ドまたはその誘導体の好 ましい量を、そのような状況にあるも者に好ましい杉状で、投与することによっ て治療することができる。

本発明の他の具体例によれば、痛みは、先に述べた式Ｉで表されるオラボンドま たはその誘導体の好ましい量を、そのような痛みを被むっでいる患者に好ましい 形状で投与することによって治療することができる。

本発明の他の具体例によれば、抗アレルギー治療は、先に述べた式！で表される オラポノドまたはその誘導体の好ましい量を、アレルギーを有する患者に好まし い形状で投与することによって行うことができる。

本発明の他の具体例によれば、パーキンソン病は、先に述べた式Ｉで表されるオ ラポンドまたはその誘導体の好ましい置、好ましくはα−ドーＩ４と組み合わせ て、バーキノツノ病患者に好ましい形状で、投与することによって治療すること ができる。

本発明の他の具体例によれば、抗高血圧治療は、先に述べた式ｉで表されるオラ ヂ７ドまたはその誘導体の好ましい量を、動脈高血圧患者に好ましい形状で投与 することによって行うことができる。

本発明の他の具体例によれば、抗−振せん治療は、先に述べた式Ｉで表されるオ ラポンドまたはその誘導体の好ましい量を、振せん、特にパーキンソン病かりく る振せんを有する患者に、好ましい形状で投与することによって行うことができ る。

本発明の他の具体例によれば、先に述べたスミで表されるオラヂ／ドまたはその 誘導体の好ましい量を、充分な精神作用効果を得るために、好ましい形状で、告 者に投与することができる。

国際調査報告 ―喘−−〜−−ａ−ｅ＋−ＰＣＴ／ＦＲ９１１００２２９国際調査報告 フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　“庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３１／７０ 　ＡＤＡ　８３１４−４Ｃ３５／７８　ＡＡＮ　Ｒ７８２２−４ＣＡＢＥ　Ｊ　 ７８２２−４Ｃ ＡＥＤ　Ｃ７８２２−４Ｃ Ｉ

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. １．下記式Ｉ ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（ただし、式中、１つまたはそれ以上 のＲは独立して、水素原子、低Ｃ１−Ｃ５アルキル基、特にメチル基、またはア シル基、特にＣ１−Ｃ６である基、特にアセチル基を示す） で表されるオラポシドまたはその鋳導体からなることを特徴とする新規なカフェ イン酸誘導体。
2. ２．前記グリコピラノシル環、またはラムノピラノシル環のＯＲ基のみがアシル 化、特にアセチル化されていることを特徴とする請求項１記載の化合物。
3. ３．前記ベンゼン環のＯＲ基のみがアルキル化、特にメチル化されていることを 特徴とする請求項１または請求項２記載の化合物。
4. ４．前記オラポンル（またはオラポシド）またはその誘導体が、ハマウツボ（ｏ ｒｏｂａｎｃｈａｃａｅ）科の植物、特にハマウツボ（ｂｒｏｏｍｒａｐｅ）で あるラプムジェニスタ（Ｒａｐｕｍ　ｇｅｎｊｓｔａｅ）から抽出されることを 特徴とする請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の化合物。
5. ５．活性成分として、請求項１から請求項４までのいずれか１項に記載の式Ｉで 表されるオラポシドまたはその誘導体を含有していることを特徴とする化粧品用 組成物、または薬剤用組成物、特に皮膚学用組成物。
6. ６．最終的な組成物の全重量に対して、前記オラポシドまたはその誘導体が約０ ．００１重量％から約１０重量％、好ましくは約０．１重量％から約５重量％含 有されていることを特徴とする請求項４記載の組成物。
7. ７．抗フリーラジカル活性を有することを特徴とする請求項５または請求項６に 記載の組成物。
8. ８．抗炎症活性を有することを特徴とする請求項５または請求項６に記載の組成 物。
9. ９．肝臟保護活性を有することを特徴とする請求項５または請求項６に記載の組 成物。
10. １０．抗細胞老化活性、特に皮膚細胞、放射に晒されることによる皮膚老化に対 する活性を有することを特徴とする請求項５または請求項６に記載の組成物。
11. １１．色素沈着を治療するまたは防止する効果を有していることを特徴とする請 求項５または請求項６に記載の組成物。
12. １２．アルドースレダクターゼ抑制活性を有することを特徴とする請求項５また は請求項６に記載の組成物。
13. １３．５−リポキシゲナーゼ抑制活性を有することを特徴とする請求項５または 請求項６に記載の組成物。
14. １４．ド−バ−デカルボ手シラーゼ抑制活性を有することを特徴とする請求項５ または請求項６に記載の組成物。
15. １５．β−ブロッカー活性を有することを特徴とする請求項５または請求項６に 記載組成物。
16. １６．紫外線であるＵＶＡおよびＵＶＢ放射を濾過する特性を有することを特徴 とする請求項５または請求項６に記載の組成物。
17. １７．鎮痛性の活性を有することを特徴とする請求項５または請求項６に記載の 組成物。
18. １８．抗アレルギー活性を有することを特徴とする請求項５または請求項６に記 載の組成物。
19. １９．抗震え活性を有することを特徴とする請求項５または請求項６に記載の組 成物。
20. ２０．向精神活性を有することを特徴とする請求項５または請求項６に記載の組 成物。
21. ２１．抗高血圧活性を有することを特徴とする請求項５または請求項６に記載の 組成物。
22. ２２．オラポシドまたはその誘導体が抗バクテリア活性または抗酸化活性を有し ているために、いずれの抗バクテリアまたは抗菌保存剤および／または抗酸化保 存剤も含有されていないことを特徴とする請求項５または請求項６に記載の組成 物。