JPH06508141A

JPH06508141A - 新規免疫抑制化合物

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Publication number: JPH06508141A
Application number: JP5500497A
Authority: JP
Inventors: ドゥフィー，ジョン　ピー．
Original assignee: バーテックスファーマシューティカルズインコーポレイテッド
Priority date: 1991-05-24
Filing date: 1992-05-26
Publication date: 1994-09-14
Anticipated expiration: 2016-05-08
Also published as: AU2185092A; WO1992021313A3; EP0587756A1; WO1992021313A2; MX9202466A; CA2102178A1; JP3163104B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ム及朋！口り反術後の移植片拒絶は、骨髄および組織の移植の成功に影響する主要な合併症である。しかし、免疫抑制療法の使用により、組織移植における移植片拒絶は顕著に低減され得る。

広範な種類の疾患が「自己免疫疾患」として特性付けられ得る。このような疾患は組織片拒絶に類似するが、ただし、この拒絶は自己の組織に対する拒絶であることが異なる。免疫抑制療法は、この不適切な自己拒絶を防ぐためにも用いられ得る。

移植片拒絶を防ぐための免疫抑制剤として広く受け入れられているものに、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）がある。これは真菌類の代謝により産生される天然物であり、臨床組織移植において有効な免疫抑制活性を有することが証明されている。ＣａＩｎｅ、Ｒ，Ｙ、ら、Ｂｒ、Ｍｅｄ、Ｊ、２８２：９３４−９３６　（１９８１）；　Ｗｈｉｔｅ、Ｄ。

Ｊ、Ｃ，財工旺２４：３２２−３３４　（１９Ｂ２＞。ＣｓＡは免疫抑制剤療法で広く用いられているが、その使用（特に高投与量での）は、腎毒性、肝毒性、および他の中枢神経系障害を包含する副作用を伴うことが多い。

果を得ており、このことは、これらの疾患における自己免疫治療を確実にした。

１）　眼科学；　ブドウ膜炎、ベーチェ・アト病、およびグレーヴズ眼症。

Ｗｅｅｔｍａｎ、Ａ、Ｐ、ら、しμ幻■４Ｈ−４８９（１９８２）。

グレーヴズ眼症。

Ｎｕｓｓｅｎｂｌａｔｔ、Ｒ，Ｂ、ら、イ１幻」２３５−２３８　（１９８３）。

ブドウ膜炎。

Ｆｒｅｎｃｈ−Ｃｏｎｓｔａｎｔ、Ｃ，ら、１１すＩ４５４　（１９８３）。

バーチエツト病０３ａｎｄｅｒｓ、Ｍ、ら、イエ■」４５４−４５５　（１９８３）。

バーチエツト病Ｏ記：　シクロスポリンＡは、日本では現在ベーチェ、ット病の治療に対して認可されている。これは、この化合物の治療性が示された最初の自己免疫疾患である。

２）　皮膚科学：　乾］を含む種々の自己免疫皮膚疾患。

Ｚａｂｅｌ、　Ｐ、ら、ホ匹鮎３４３　（１９川。急性皮膚筋炎。

ｖａｎ　Ｊｏｏｓｔ、Ｔ、ら、ｒｅ　、Ｄ　ｒｍａｔ　、ＬＬｌ：１６６−１６７　（１９Ｂ？）。アトピー性皮膚疾患。

Ａｐｐｌｅｂｏｏｍ、Ｔ、ら、Ａｖｅｒ、Ｊ、Ｍｅｄ、８２：８６６−８６７　（１９Ｂ？）。

強皮症。

Ｌｏｇａｎ、　Ｒ，Ａ、およびＲ，Ｄ、Ｒ，Ｃａｍｏ、　Ｊ、　Ｒｏ　、　Ｓｏｃ、　Ｍｅｄ、　ＰＪ：４Ｌ？−４１８（１９８Ｂ）。湿疹。

Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、Ｃ，Ｅ、Ｍ、ら、ｔｔ、Ｍｅｄ、Ｊ二２９３ニア３１−７３２　（１１８６）。乾釘。

Ｅｌｌｉｓ、Ｃ，！４．ら、Ｊ、Ａｗｅ　、Ｍｅｄ、Ａｓｓ　ｃ　ｌｉｉ：３１１０−３１１６（１９Ｈ）。乾鱒。

３）血液病学：　貧自を含む種々の疾患。

Ｔｏｅｔｔｅｒｌａｎ、　Ｔ、Ｈｌら、ｕ鳳旦、　６９３　（１９８４）。赤芽球ろう（ＰＲＣＡ）。

Ｓｔｒｙｃｋｍａｎｓ、Ｐ、Ａ、ら、　Ｎ　ｗ　ｎ　、Ｊ　Ｍ　、３１ｉ：６５５−６５６（１９８４）。形成不全性貧血。

Ｇｌｕｃｋｍａｎ、Ｅ、ら、　Ｂｏｎｅ　Ｍａｒｒｏｗ　Ｔｒａｎｓ　１ａｎｔ　旦　５ｕｐｐ１．　１゜２４１　（１９８ｇ）。形成不全性貧血。

４）　胃腸病学／肝臓学：　原発性肝硬変、自己免疫肝炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、および他の胃腸に関、する自己免疫疾患。

Ｗｉｅｓｎｅｒ、Ｒ，Ｈ，ら、　＄　ヱ：１０２５．　Ａｂｓｔ、＃９．　（１９８７）。原発性胆汁性肝硬変。

Ｈｙａｍｓ、Ｊ、Ｓ、ら、Ｇａ５ｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ　９３：８９０−８９３　（１９Ｂ？）。

自己免疫肝炎。

Ａ１１ｉｓｏｎ、Ｍ、Ｃ，ら、Ｌａｎｃｅｔ、９０２−９０３　（１９８４）。

クローン病。

Ｂｒｙｎｓｋｏｖ、Ｊ、ら、Ｇａ５ｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ　９２：１３３０　（１９８７）。

クローン病。

Ｐｏｒｒｏ、Ｇ、Ｂ、ら、１ｔａ１．　Ｊ、Ｇａ５ｔｒｏｅｎｔｅｒｏ１．　１９：４０−４１　（１９８７）。潰瘍性大腸炎。

５）神経学：　筋萎縮側索硬化（ＡＬＳ、「ローゲーリ・ツク病」）、重症筋無力症、および多発性硬化症。

ＡｐｐｅＬ、Ｓ、Ｉ（、ら、　虹ａＬ」ｌ虹立Ｌ４５：３８１−３８６　（１９８Ｂ）。

ＡＬＳ。

Ｔｌｎｄａｌｌ、Ｒ，Ｓ、Ａ、ら、Ｎｅｗ　、Ｊ、Ｍｅｄ、３１６：７１９−７２４　（１９８７）。重症筋無力症。

Ａｎｎ、　Ｎｅｕｒａｌ、　２４．　Ｎｏ、１．　ｐ、Ｌａ９．　ｍ　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｐ１７４　（１９８８）。多発性硬化症。

Ｄｏ＋ｉｗａｓｃｈ、Ｄ、　ら、　１１隻Ｌ９１ｑ且Ｌ　３８　５ｕｐｐ１．　２．　２８−２９　（１９８ｇ）。多発性硬化症。

６）　ネフローゼ症候群：　ネフローゼ症候群、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、および関連病。

Ｗａｔｚｏｎ、Ａ、Ｒ，ら、Ｃｉｎ、Ｎｅ　ｈｒｏ　、２５：２７３−２７４　（１９８６）。

ネフローゼ症候群。

Ｔｅｊａｎｉ、Ａ、ら、ロｊユリニ土ｌ工３３ニア２９−７３４　（１９８８）。

ネフローゼ症候群。

Ｍｅｙｒｉｅｒ、Ａ、ら、シ１ル■上■１」工部二２０．　５ｕｐｐ１．４　（ＢｏｏｋＩＩ＋）、　２５９−２６１　（１９８８）。ネフローゼ症候群。

ＬａＧｒｕｅ、Ｇ、ら、ム且Ｉ男Ｌ４４：３８２−３８２　（１９８６）。ＭＰＧＮ。

７）慢性関節リウマチ（ＲＡ）Ｈａｒｐｅｒ、Ｊ、１．ら、ｊｌ（１９８１−９８２（１９８４）。ＲＡ。

Ｖａｎ　Ｒｉｊｔｈｏｖｅｎ、ＡＪ、ら、Ａｎｎ、Ｒｈｅｕｍ、Ｄ’ｓ、４５ニア２６−７３１（１９８６）。ＲＡｏＤｏｕｇａｄｏｓ、ｋＡ、ら、Ａｎｎ、Ｒｈｅｕ＋＊、Ｄｉｓ、４７：１２７− １３３　（１９ＢＢ）。

ＲＡ。

８）　インスリン依存性糖尿病（ＩＩ）ＤＭ）Ｓｔｉｌｌｅｒ、Ｃ，Ｒ，ら、鈷江立四１ｉｐ：１３６２（３６７（１９８４）。

ＩＤＤＭ。

Ａｓ５ａｎ、Ｒ，ら、Ｌａｎｃｅｔ、６７−７！　（１，９８５）。ＩＤＤＭ。

Ｂｏｕｇｎｅｒｅｓ、Ｐ、Ｆ、ら、Ｎｅｗ　Ｅｎ　１．　Ｊ、Ｍｅｄ、３１８：６６３−６７０　（１９８１１）。　ＩＤＤＭｏＤｉａｂｅｔｅｓ　３７：１５７４−１５８２　（１９８ｇ）。ＩＤＤＭ。

多くの獣医学上の疾患もまた、自己免疫疾患として特性付けられている。上記のような自己免疫疾患は、哺乳動物において観察され得る。　Ｐａｐａ、　Ｆ、Ｏ，ら、Ｅ　ｕｉｎｅ　Ｙｅｔ、　Ｊ、　２２：１４５−１４６　（１９９０）種馬における自己免疫血統の不受胎能；　Ｇｏｒｍａｎ、　Ｎ、Ｔ、およびり、Ｌ、　Ｗｅｒｎｅｒ、Ｂｒ１ｔ、　Ｙｅｔ、ユ１４２：４０３−４１０．４９１− ４９７．および４９Ｂ−５０５＜１９８６）イヌおよびネコの免疫媒介による疾患；　Ｇｅｏｒｇｅ、　Ｌ、Ｗ、およびＳ、Ｌ、　Ｗｈｉｔｅ、、ｆｉｅｔ、　Ｃ１’ｎ、　Ｎ。

ｒｔｈ　Ａｍｅｒ、　６：２０３−２１３　（１９８４）大型哺乳動物における自己免疫皮膚病；　Ｂｅｎｎｅｔｔ、　Ｄ、、Ｉｎ、　Ｐｒａｃｔ、　ｉニア４ −８６　（１９８４）イヌにおける自己免疫疾患；　Ｈａｌｌｉｖｅｌｌ、　Ｒ，Ｅ、、Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｙｅｔ、５ｓｏｃ。

４１８１：１０８ｇ−１０９６（１９８２）家畜動物における自己免疫疾患。

ＣｓＡが免疫抑制をもたらす機構は確立されている。インビトロでは、ＣｓＡは、リンホカイン（例えばインターロイキン２（ＩＬ−２））の放出を抑制し［Ｂｕｎｊｅｓ、　Ｄ、ら、Ｅｕｒ、　Ｊ、Ｉ　ｍｕｎｏｌ、　１１゜：６５７−６６１　（１９８１＞］、そしてヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞のクローン拡大を防ぐ［１，ａｒｓｓｏｎ、　Ｅ、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１２４２８２８−２８３３　（１９８０）］。ＣｓＡは細胞質ゾルタンパク質のシクロフィリンに結合し、そしてそのタンパク質のプロリル−ペプチジル　シス−トランスイソメラーゼ（ＰＰＩアーゼ）活性を阻害することが示されている。Ｆｉｓｃｈｅｒ、　Ｇ、ら、■ｕ］３３７：４７６−４７８（１９８９）；　Ｔａｋａｈａｓｂｉ、Ｎ　ら、１１厖１３３ユニ４７３−４７５　（１９８９）。ＰＰＩアーゼは、プロリル残基のペプチド結合の回転異性化を触媒することにより、Ｔ細胞活性化を媒介し得る。

最近、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅ　ｔｏｗ　ｃｅｓ）カラ単４１すｔ’Ｌ、ＰＫ−５０６と呼ばれる別の天然産生物が、有効な免疫抑制剤であることが証明されている。Ｔａｎａｋａ、　Ｈ，ら、Ｊ、　Ａｇｅ、　Ｃｈｅｔ　Ｓｏｃ！　１０９：５０３１−５０３３　（１９８７）、　ＰＫ−５０６はＩＬ−２＜７）産生を抑制し、混合リンパ球反応を抑制し、シクロスポリンＡよりも１００倍低（Ｘ濃度でインビトロでの細胞傷害性Ｔ細胞の発生を抑制する。

Ｋｉｎｏ、Ｔ、ら、Ｌ−ムｎｔｔｂｉｏｔ、ＩＳ：ＩＺ５６−１２６５　（１９Ｂ？）。ＰＫ−５０６もまたＰＰＩアーゼ活性を阻害するが、シクロスポリンＡとは構造的に異なり、シクロフィリンとは異なる結合タンノｆり質（ＦにＢＰ）　と結合する。Ｈａｒｄｉｎｇ、　Ｍ、ｌｆ、ら、Ｌｕシ１３４１ニア５８−７６０　（１９ｇ９）；　５ｉｅｋｉｅｒｋａ、　Ｊ、Ｊ、、Ｎａｔｕｒｅ　■ニア５５−７５７　（１９８９＞。

及匪二斐且本発明は、ＰＫ−５０６結合タンパク質（ＦＩ（ＢＰ）に対する親和性を有する、新規なりラスの免疫抑制化合物１こ関する。このタンパク質に結合すると、免疫抑制化合物は、Ｆ）ｆＢＰのプロリルペプチジルシス−トランスイソメラーゼ（ロタマーセ；　ｒｏｔａｍａｓｅ）活性を阻害し、そしてＴ細胞活性化を抑制する。このように、本発明の化合物は、骨髄および組織の移植にお番する移植片拒絶を防ぐまたは顕著に低減するために、およびヒトおよび他の哺乳動物にみられる自己免疫疾患の治療に使用するための免疫抑制剤として用いられ得る。

ｌ艶旦Ｕ久説里本発明は、スルホナミド置換基を有しており、式Ｉで表される新規なりラスの免疫抑制化合物および薬学的に受容可能なその塩に関する：ココテ、ＡはＣＨ２、酸素、ＮＨ，またはＮ−（ＣＩ−Ｃ４７ルキル）テあり；ＢおよびＤはそれぞれ独立して、Ａｒ、水素、（ＣＩ−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルケニル、（Ｃ５−Ｃ７）− シクロアルキルで置換された（ＣＩ−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキルまたはアルケニル、（Ｃ５−Ｃ７）−シクロアルケニルで置換された（Ｃ１−Ｃ６）− 直鎖または分枝のアルキルまたはアルケニル、またはＡｒ置換（ＣＩ−Ｃ６）− 直鎖または分枝のアルキルまたはアルケニル（ここで各々の場合において、アルキルまたはアルケニル鎖の１つまたは２つのＣＨ２基は、酸素、硫黄、ＳＯおよびＳＯ２からなる群から選択される１〜２個のへテロ原子を、化学的に合理的な置換型で含有し得る）、またはであり、但し、ＢおよびＤの両方が水素ではなく；ここで、Ｑは水素、（ＣＩ−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキル、または（ＣＩ−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルケニルであり；ここで、ＴはＡｒまたは３位および４位で以下の置換基を有する５〜７員環シクロアルキルであり、該置換基が、それぞれ、水素、ヒドロキシル、０−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、０−（ＣＩ−Ｃ４）−アルケニル、およびカルボニルからなる群から選択される、シクロアルキルであり；ここで、Ａｒはフェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、２−フリル、３−フリル、２−チェニル、３−チェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、単環および二環のへテロ環系からなる群から選択され、ここで個々のへテロ環のサイズは５員環または６員環であり、一方または両方の環中に、ＯＳＮ、およびＳからそれぞれ選択される１〜４個のへテロ原子を含有し得；ここで、Ａｒは、１〜３個の置換基を含有し得、該置換基は、水素、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ１−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキル、（Ｃ２−Ｃ６）−直鎖または分枝ノアルケニル、Ｏ−’（Ｃ１ −Ｃ４）−直鎖また１；！　分枝（７）アルキル、０−（Ｃ２−Ｃ４）−直鎖または分枝のアルケニル、０−ベンジル、Ｏ−フェニル、１．２−メチレンジオキシ、アミノ、カルボキシル、およびフェニルからなる群がら選択される；ここで、Ｅは（ＣＩ−Ｃ６）−直鎖または分枝メチルキル、（Ｃ１−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルケニル、（Ｃ５−Ｃ７）−シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ４）−直鎖または分枝のアルキルまたは（ＣＩ−Ｃ４）４鎖または分枝のアルケニルで置換された（Ｃ５−Ｃ７）−シクロアルケニル、［（Ｃ２−Ｃ４）−７ルキルまたは（Ｃ２−Ｃ４）−７／Ｌ、ヶニル］−Ａｒ、またはＡｒ　（Ａｒは上記と同様）であり；ここで、Ｊは水素、またはｃｌまたはｃ２アルキル、またはベンシルであり；には（ＣＩ−Ｃ４）−直鎖または分枝のアルキル、ベンジル、またはシクロヘキシルメチルであり；またはＪおよびＫは、−緒になって、その中に酸素、硫黄、ｓｏｌ　またはｓ。

２置換基を含み得る５〜７員環のへテロ環を形成し得；そしてｎは０〜３である。

１位（式■）の立体配置は、（Ｒ）または（Ｓ）であり、好ましくは（Ｓ）である。２位の立体配置は、（Ｒ）または（Ｓ）である。

本発明の化合物は、無機または有機の酸および塩基から誘導される塩の形で用いられ得る。このような酸の塩の中には、以下に挙げるものが包含される：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、ブタン酸塩、クエン酸塩、カンファー酸塩（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ）、カンファースルホン酸塩（ｃａＢｈｏｒｓｕｌｆｏｎａｔｅＬ　シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリ七ロリン酸塩、ヘミ硫酸塩（ｈｅｍｉｓｕｌｆａｔｅ）、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルポン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモエート（ｐａｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩。塩基塩には、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩およびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩およびマグネシウム塩）、有機塩基（例えば、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン）による塩、アミノ酸（例えばアルギニン、リジン）による塩などが包含される。

また、塩基性窒素含有基は、低級アルキルハロゲン化物（例えば、メチル、エチル、プロピル、およびブチルクロライド、ブロマイド、およびアイオダイド）；　シアルキルスルフエート（例えば、ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびシアミルスルフェート）、長鎖ハロゲン化物（例えば、デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリルクロライド、ブロマイド、およびアイオダイド）、アラルキルハロゲン化物（例えば、ベンジルおよびフェネチルブロマイド）などのような試薬で４級化され得る。

好ましくは、この化合物は、約７５０原子質量単位（ａ、　ｍ、　ｕ）未満の分子量を有し、さらに好ましくは、５００ａ、　ｖｈ、　ｕ、未満の分子量を有する。Ｊ置換基およびに置換基が一緒になってヘテロ環を形成している化合物の例が、表１に示されている。表１に示されるように、ｎ＝１である場合、化合物は５員環のへテロ環系であり；そしてｎ＝２である場合、この化合物は６員環のへテロ環系である。

（以下余白）表ユニ」１１隻番号　ｎｍ　Ｂ　Ｄ　Ｅ２　１　０　水素　フエ二ｋ　７ｚニル３　１　０　水素フェニル　４−メチルフェニル４　２　０　水素　フェニｋ　４−メチにフェニル５　２　０　水素　３−フェニルフ゛０ビル　４−メチルフェニル６　２　０　水素　３−フェニル７°０ビル　４−メトキシフェニル７　２　０　水素　３−フェニル７°口Ｅ° ル　２−チェニル９　２　０　水素　３−７ｚ二６７°ａｈ’＊　４−７にオ０７に二１１０　２　０　水素　３−フェニル７°０ビル　フェニル１１　２　０　水素　３−フェニルプロピル１２　２　０　水素　３−フェニルプロピル　２ −メトキシフェニル１３　２　０　水素　３−フェニルプロピル　３．５−シ゛メト今ジフェニル１５　２　０　水素　３−フェニルプロピル１６　２　ｌ　水素　３−７１ニル７°ａピル　１−す７チル１７　２　０　水素　３−７ｘニルブ０ビル　８−４／リルｔフｆル１９　２　０　水素　４−フェノキシフェニル　４−メトキシフェニル２０　２　０　水素　４−７エ／＋７７エ二ル　４−メチルフェニル２１　２　０　水素　３−フェノキシフェニル　２−チェニル２２　２　０　水素３−７エハシフエニル　８−４７リル２３　２　０　水素　３−フェノキシフェニル　４−ヨードフェニル２５　２　０　水素　３−フェノキノフェニル　ヘ′ンシ゛ル２６　２　０　水素　３−フェノキンフェニル　２−す７チル２７　２　０　へ゛ンシ゛ル　３−フェニル７°０ビル　４−スルオ０フエニル２８　２　０　２−フェニルエチル　３−フェニルプロピル　４−スルオ０フエニル２９　２　０　３−フェニル７°０ピル　３−フェニル７°０ビル　４−メチルフェニル３０　２　０　３−フェニル７°ロヒ“ル　３−フェニル７°０ビル　４−ニド０フエニル３１　２　０　３−フェニルプロピル３２　２　０　３−フェニルプロピル　３−フェニル７°０ビル　４−クロロフェニル３３　２　０　３−フェニルブ０ヒ゛ル　３−７ｘニルプロピル３４　２　０　３−フェニル７゛口ビル　３−７工ニル７°口七°ル　４−スルオ０フエニル３５　２　０　３−７ｚニルフ゛ロヒ゛ル　３−フェニル７゛ロピル　２− チェニル３６　２　０　水素　３−フェニル７゛０ヒ゛ル　Ｅ−スチレニル本発明の免疫抑制化合物は、リンパ球、特に１９７１球の細胞質ゾルに存在するＦに一５０６結合タンパク質に対する親和性を有する。この免疫抑制化合物は、ＦＫＢＰと結合すると、この結合タンパク質のプロリルペプチジルシス−トランスイソメラーゼ活性を阻害し、ＦＫＢＰによって媒介されるリンパ球活性化を抑制するように作用する。ある特定のＰＫ−５０６結合タンパク質が、Ｗａｒｄｉｎｇ，　Ｍ．Ｗ．ら、Ｎａｔｕｒｅ　３４１ニア５ｇー７６０’　（１９８９）によって同定されており、Ｆ）ｆＢＰに対する化合物の結合親和性を評価するための標準物質として用いられ得る。しかし、本発明の化合物は、他のＰＫ−５０６結合タンパク質に対する親和性を有し得る。さらに、プロリルペプチジルシス−トランスイソメラーゼの阻害は、ＰＫ−５０６結合タンパク質への結合を表し得る。

ヒトＰＫー５０６結合タンパク質は、Ｈａｒｄｉｎｇ，　Ｍ．Ｗ．ら、ｈ旦■３４１ニア５Ｂ−７６０　（１９８９）によって記載されるようにして得られ得る。見かけのＫｄ値は、Ｈａｒｄｉｎｇらの記載に従って行われる競合しト２０結合アッセイで、リボ−ティングリガンドとして、３２−［１−＋４ｃｌ−ベンゾイルＦＫ−５０６を用いて；またはＳｉｅｋｉｅｒｋａ，　Ｊ．Ｊ、ら、Ｎａｔｕｒｅ　３４１ニア５５−７５７　（１９８９）によって記載されるようにして、［３旧ジヒドロ−ＰＫ−５０６を用いて、測定され得る。本発明の化合物のうち２つの化合物のＦＫＢＰに対する結合親和性が、実施例の部に報告されている。このデータは後者の方法を用いて得た。この方法では、［３月ジヒドロ−ＦＫ −５０６のＰＫ−５０６結合タンパク質への結合と競合させて、非標識化合物の親和性を測定した。

ＦＫＢＰのＰＰＩアーゼ（ロタマーゼ）酵素活性の阻害（見かけの「Ｋ、」値）もまた、ｌａｒｄｉｎｇ、　Ｍ、Ｌら、Ｎａｔｕｒｅ　３４１ニア５８−７６０（１９３９）または５ｉｅｋｉｅｒｋａ、ｌｊ、ら、Ｎａｔｕｒｅ　３４１ニア５５−７５７　（１９８９）のいずれかに記載される方法に従って測定され得る。モデル基質であるＮ−スクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐ−ニトロアニリドのプロリン−アラニンペプチド結合シス−トランス異性化（ま、基質のトランス型から４−ニトロアニリドを遊離させる、キモトリプシンとの結合ア・ノセ伺こおいて、分光光度計でモニターされる。Ｆｉｓｃｈｅｒ、　Ｇ、ら、Ｎａｔｕｒｅ　３３ユニ４７６−４７８　（１９８９）。反応の程度に応じて阻害剤を種々の濃度で添加して生じた阻害結果を測定し、阻害剤濃度を関数として１久遠度定数１こおける変化を分析すると、見かけのに１値が概算できる。

本発明の化合物は、さらにインビトロでの細胞生物学的実験において特性付けられ得る。これによると、これらの化合物は、機能および用途において、シクロスポリンＡおよびＰＫ−５０６との類似が明らかである。（表２参照）。

（以下余白） −１−λ １　）　Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ、Ｎ、ら、ｒａｎｓ　ａｎｔａｔｉｏｎ　４７：３５６−３５９　（１９８９）に類似したアッセイ。アッセイは、０ＫＴ３抗体（抗ＣＤ３；これはＣＤ３との相互作用により刺激を行う）によって刺激され、Ｆｉｃｏｌ　１−Ｈｙｐａｑｕｅ密度遠心沈澱法によって単離された新鮮なヒト末梢血液リン／ｆ球を使用する。刺激ζよ、放射性チミジン［（３Ｈ）ＴｄＲ］の増殖細胞への取り込みを、４８．０００〜７５゜０００　ｃｐｓの非抑制の制御信号を用いて、測定する。１ｃｓｓ値＋１、様々な薬剤濃度で観測される増殖の阻害により評価される。

２）上記に類似するが、Ｔ細胞レセプタ（ＴＣＲ）の抗体およびＣＤ２の抗体により刺激されるＴ細胞クローンを使用するアッセイ。刺激は、放射性チミジン［（３Ｈ）ＴｄＲ］の増殖細胞への取り込みを、２３，０００　ｃｐｓの非抑制の制御信号を用（１て測定する。

ＩＣ５ｅ値は、様々な薬剤濃度で観測される増殖の阻害により評価される。

３）　Ｓｈｉ、　Ｙら、Ｎａｔｕｒｅ　３３９：６２５−６２６　（１９８９＞によるアッセイ。

このアッセイは上述のものに類似したＴ細胞）１イブリドーマを使用する。このアッセイでは、Ｔ細胞ハイブリドーマにおける、活性が誘導された（抗ＣＤ３）細胞の死（上述のように染色した後の生存細胞を計数することによって評価される）が測定される。このＴ細胞パイブリドーマは、未分化の胸腺細胞内で生じることが知られている効果を模倣する。ここでは、シクロスポリンＡおよびＦＫ− ５０６がこの細胞死を阻害する能力を、シクロスポリン様のおよび／またはＦＫ −５０６様の作用メカニズムを有する化合物の感受性の指標として使用する。化学的には関連するがメカニズムは異なる免疫抑制剤ラバマイシンはこのアツセイでは不活性である。

４　）　ＤｕＭｏｎｔ、Ｆら、Ｊ、１ｍｍｕｎｏ１．　１＋μ：２５１−２５８　（１９９０）ｉこよるアッセイ。このア、セイはＩＬ−２に反応したＣＴＬＬ細胞の刺激を測定する。増殖は（３）１）ＴｄＲの取り込みによって測定される。シクロスポリンＡおよびＦＫ−５０６に類似したメカニズムによって作用する免疫抑制剤は、これらは内生のＩＬ−２の生成を阻害することによって機能するため、このＩＬ−２により駆動されるプロセスにおいては阻害しなζ１゜このアッセイでは、この障害を克服するために外因性のＩＬ−２が与えられる。化学的には関連するがメカニズム（よ異なる免疫抑制剤ラバマインンはこのアッセイでは活性である。

これらアッセイおよび実施例の項目で示すアツセイは、本発明の化合物の細胞活性を示すために使用され得る。本発明の化合物は、メカニズムが類似していない免疫抑制剤ラバマイシンとは対照的に、免疫抑制を含む細胞活性においてシクロスポリンＡおよびＦＫ−５０６の両方に類似していることが示されている。さらに、観測された細胞活性は、ＦＫＢＰ結合活性およびＰＰＩアーゼ（ロタマーゼ）活性の阻害ニついて観測された活性と量的に一致する。

従って、化合物は臓器拒絶の予防または慢性移植片拒絶のる免疫抑制剤として使用し得る。

本発明の免疫抑制化合物は、骨髄または臓器移植を受ける患者に、もしくは様々な自己免疫疾患における場合のように、患者の免疫反応を実質的に低減または抑制するのが望ましい他の理由で、定期的に投与し得る。本発明の化合物はまた、様々な哺乳類の自己免疫疾患の治療のためにヒト以外の哺乳類にも投与し得る。

本発明の新規の化合物は、Ｔ細胞、特に「ヘルパーＪＴ細胞として特徴付けられるＴ細胞の、抗原に刺激された成長およびクローン増殖の抑制において著しい活性を有する。この活性は、臓器移植拒絶を初期に予防する場合に、拒絶の発現期間に移植臓器を救う場合に、および不適切な自己免疫反応に関連することが知られているいくつかの自己免疫疾患のいずれかを治療する場合に有用である。これらの自己免疫疾患としては、ブドウ膜炎、ベーチェット病、グレープズ眼症、乾側、急性皮膚筋炎、アトピー性皮膚疾患、強皮症、湿疹、赤芽球ろう、形成不全性貧血、原発性肝硬変、自己免疫性肝炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、筋萎縮性側索硬化症、重症筋無力症、多発性硬化症、ネフローゼ症候群、膜性増殖性糸球体腎炎、慢性関節リウマチ、およびインスリン依存性糖尿病がある。上記の自己免疫疾患のすべてにおいて、治療は徴候を低減させまた疾患の進行を遅らせるのに効果的である。

インスリン依存性糖尿病の場合には、下記に述べるような治療を、天然インスリンの生成が完全に停止して外来インスリンへの完全な依存へと移行する前に始めると最も効果的である。

これらの目的のために、本発明の化合物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーにより、局部的に、直腸を介して、鼻腔を介して、口腔を介して、膣を介して、または移植レザバーを用いて、従来の非毒性で薬学的に受容可能な担体、アジュバント、および賦形剤を含む投薬処方で投与され得る。

本明細書で用いる非経口という用語は、皮下、静脈、筋肉内、胸骨内、および頭蓋内への注射または注入の方法を含む。

これら薬学的組成物は、無菌の注射可能な調製物の形態（例えば無菌の注射可能な水性または油性の懸濁液）であり得る。この懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用する当該分野で既知の方法により処方し得る。無菌の注射可能な調製物はまた、例えば、１．３−ブタネジオール溶液のような、非毒性で非経口投与可能な希釈液または溶媒中の無菌の注射可能な溶液または懸濁液であり得る。使用し得る受容可能な媒体および溶媒としては、水、リンゲル氏溶液、および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の不揮発性オイルが溶媒または懸濁媒体として従来と同様に使用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含むあらゆるブランドの不揮発性オイルを使用し得る。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体のような脂肪酸は、オリーブ油またはひまし油のような天然の薬学的に受容可能なオイルと同様に、特にポリオキシエチル化された形態で、注射可能な調製物に使用される。これらオイル溶液または懸濁液はまた、Ｐｈ、　Ｒｅ１ｙまたは同様のアルコールのような４％Ｍフルコール希釈液または分散液を含有し得る。

この化合物は、例えばカプセルまたは錠剤の形態で、もしくは懸濁液または溶液として経口投与し得る。錠剤を経口投与する場合には、通常使用される賦形剤としてはラクトースおよびコーンスターチがある。典型的には、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤もまた添加し得る。カプセル形態での経口投与では、有用な希釈剤としてはラクトースおよび乾燥コーンスターチがある。経口使用のために懸濁液が必要なときは、活性成分は乳化剤および懸濁剤と組み合わせられる。必要に応じて、ある種の甘味料および／または着香料および／または着色料を添加し得る。

本発明の化合物はまた、薬剤の直腸投与のための生薬の形態で投与され得る。これらの組成物は、室温では固体であるが直腸の温度で液体となりこれにより直腸内で溶解して薬剤を放出する適切な非刺激性賦形剤と薬剤とを混合することによって調製し得る。このような材料としては、ココアｔｚＨター、蜜蝋、およびポリエチレングリコールがある。

本発明の化合物はまた、特に治療の対象となる症状が局部的な付与により容易に到達し得る領域または器官、例えば目、皮膚、または下部腸管の自己免疫疾患に関するものであるときは、局部的に投与し得る。これら領域の各々に対する適切な局部的処方物は容易に調製し得る。

眼病での使用のためには、化合物は等強性のｐＨ調整された減菌食塩水中の微粒子化懸濁液、または好ましくは、等強性のｐＨｇ［整された滅菌食塩水中の溶液として、塩化ベンジルアルコニウムのような保存料を添加してまたは添加せずに処方し得る。眼病での使用の他の方法としては、化合物はペトロラタムのような軟膏剤として処方し得る。

皮膚に局部的に付与するためには、この化合物は、例えば以下の物質、すなわち、鉱物油、液状ペトロラタム、白色ペトロラタム、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ワ、ツクス、および水のうちの１種またはそれ以上の物質の混合物中に化合物を懸濁または溶解させた適切な軟膏剤として処方し得る。もしくは、この化合物は、例えば以下の物質、すなわち、鉱物油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、および水のうちの１種またはそれ以上の混合物中に活性化合物を懸濁または溶解させた適切なローシプンまたはクリーム剤として処方し得る。

下部腸管のための局部的な付与は、直腸への生薬処方（上記参照）または適切な浣腸側処方で実施され得る。

上記の症状の治療には活性成分化合物を一日当り約０，０１から１００謹ｇ／ｋｇの投与レベルが有用である。キャリア材料と組み合わせて単一の投薬形態を生成し得る活性成分の量は、治療されるホストおよび投与の特定の形態により異なる。

しかし、ある特定の患者のための特定の投与量レベルは、使用する特定の化合物の活性度、年齢、体重、健康状態、性別、治療食、投与時間、排泄頻度、薬剤の組み合せ、および治療を行う特定の疾患の重症度を含む様々な要因に依存する。

この化合物はまた、さらに免疫抑制効果を得るために、メチルプレドニザロンアセテートのようなステロイドと組み合わせて投与し得る。このステロイドは経口的に、静脈を介して、直腸を介して、局部的に、または吸入により投与される。

０．１〜５　＠ｇ／ｋｇ／日の投薬量（メチルプレドニザロンアセテートに基づ（）を使用し得る。初期負荷投与量は１００〜５００　Ｂとし得る。ステロイドの投与量は臨床の症状により高い投与量から低い投与量へと時間の経過により減量し得る。

化合物は、ラバマイシン、アザチオプリン、１５−デオキシスペルグアリン（１５−ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）　Ｓ　シフ０スポリ７．　ＦＫ−５０６、またはこれらの組み合せのような池の免疫抑制薬剤と共に投与して、免疫抑制効果を高め得る。シクロボリンとＦＫ−５０６とを一緒に投与することは、これら免疫抑制剤の共同投与の結果束じるとされる禁忌のため避けるべきである。他の免疫抑制薬剤の投薬レベルは、前述の要因および薬剤の組み合せにより得られる免疫抑制効果に依存する。

ヒトＴリンパ球のＣＤ３表面抗原に対するネズミのモノクローナル抗体である０ＫＴ３もまた、特に腎臓移植において、急性同種移植片拒絶反応を抑制することおよびなくすことのために、本発明の化合物とともに静脈投与により共同投与し得る。

本発明を以下の実施例によりさらに詳しく述べる。これら実施例は如何なる意味でも本発明を限定するものではない。

（以下余白）案１１匹 ■ プロトン核磁気共鳴（’ＨＮＭＲ）スペクトルをＢｒｕｋａｒ　ＡＭＸ５００を用いて５００ＭＨｚで記録した。化学シフトは、ＭｅｎＳｌ　（δ　００）に関連してｐｐｍ　（δ）で報告している。分析用高速液体クロマトグラフィー　（ＨＰＬＣ）は、Ｗａｔｅｒｓ　６００ＥまたはＨａｖｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄ　１０５０の液体クロマトグラフを用いた。

支立且上５−３−フェニルブチルＮ−４−メチルスルポニルービベコレーーＬ」１廊と１底５−３−フェニルブチルビベコレート３８乾燥ベンゼン５０ｍＬ中の（Ｓ）−ピペコリン酸の酒石酸塩（Ｅｇｂｅｒｔｓｏｎ、　ＭおよびＳ、Ｊ、　Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ、　Ｊ、　Ｏｒ　、　Ｃｅｔ　５４：１１　（１９８９））　５．０ｇ　（１７，９ｍ＋ａｏｌ）のスラリーに、４−フェニル−１−ブタノール（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　１３．８ｇ　（８９，５霞■ｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸モノヒトレート（ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）　３．７６ｇ　（１９、ｌｌｓｍｏｌ）を加え、得られた混合物をＤｅａｎ　５ｔａｒｋ　ｔｒａｐでの還流で一晩加熱した。得られた均質な溶液を濃縮し、４：１のエーテル：酢酸エチル１００■Ｌ中に溶解し、０．５Ｎ　ＨＣＩで抽出した。この酸性の水層を４＝１のエーテル：酢酸エチル１０ｈＬで洗浄し、３０％ＮＨａＯＨ８，ＯｍＬを加えて塩基性化し、次いで酢酸エチル中に抽出した。集めた有機抽出物を塩溶液（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し、Ｍｇ５Ｏａで乾燥し、濃縮し、オイルとして遊離アミン　（３８）　４．５ｇを得た。’）ＩＮＭＲは構造と一致する。

Ｓ−３−フェニルブチルＮ−４−メチルスルホニル　ピペコレーΣユ■ ＣＨ２Ｃｌ２０．５１１Ｌ中の遊離アミン（３８）　３０ｍｇ　（０，１２ｍ■ ｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン２２μＬ　（０，１３ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホニルクロライド２４＋ｉｇ　（０，１３ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１時間攪拌した。この反応混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフしくヘキサン中の５％酢酸エチルから１００％酢酸エチルへの勾配により溶出）、オイルとしてスルホンアミド（５）　２９■ｇを得た。

この化合物を以下に図示する。’ＨＮＭＲ（５００Ｍｌ（Ｚ　ＣＤＣ１３）　δ ７．６２　（ｄ）、７．２９−７．０９　（＋＊）、４．７１　（ｂｒ　ｄ）、４．０２−３．９５　（ｍ）、３．９１−３．８３　（ｍ）、３．７１　（ｂｒ　ｄ）、３．２１−３．１２　（ｍ）、２．５８　（ｔ）、２．４６　（Ｓ）、２．１０　（ｂｒ　ｄ）、１．７５−１．６６　（１）、１．６５−１．４０　（１）、ＩＪＯ−１，１５（＋ｍ）。

実ｍＳ−１７−ジフェニル−４−ヘブ　ニルＮ−４−メトキシスルホニル０℃で、ＣＨ２Ｃｌ２２０１Ｌ中の４−フェニル−１−ブタノール（Ａｌｄｒｉａｈ　Ｃｈｅ＋ｌ１ｃａｌ　Ｃｏ、）　３．２＋＋Ｌ　（２０，８＋ｎｏｌ）の溶液に、粉末状の３Ａモレキ二ラーシーブ３．２ｇを加え、次いでピリジニウムクロロクロメ−）　（ＦＣＣ）　５．３７ｇ　（２４，９−謁ｏ１）を加えた。得られた懸濁液を０℃で１時間攪拌し、その時点でさらにＰｃｃを２．１６ｇ　（１０，０＋＊ｍｏｌ）加え、そしてこの反応混合物を室温に温めた。雰囲気温度で０．５時間攪拌した後、この反応混合物をエーテルで希釈し、セライトを通して濾過し、粗生成物２．５ｇを得た。フラッシュクロマトグラフィーにより（ヘキサン中の５％酢酸エチルにより溶出）、アルデヒド（３９＞　７００ｍｇを得た。’ＨＮＭＲは構造と一致する。

３−フェニル−１−プロピルマグネシウムブロマイド　４゜室温で、ＴＨＦ　５０ｉ＋Ｌ中のマグネシウムくず７３６ｍｇ　（３０，３ｇｍｏｌ）の懸濁液に１．２−ジブロモエタン５ｏμＬを加え、次いで１−ブロモ−３−フェニルプロパン（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）　５．５ｇ　（２５，１霞■ ｏｌ）を−滴ずつ加えた。この懸濁液を室温で０．５時間攪拌した後、上澄み液をカニユーレを通して１００ｍＬ貯蔵容器に移し、次いでグリニヤール試薬（４ｏ）の０．５Ｍ　ＴＨＦ溶液として用いた。

７−ジフェニル−４−へブ　ノール　４１０℃で、ＴＨＦ　５．０鵬Ｌ中の４− フェニル−１−ブタノール（ｂｕｔａｎａｌ）（３９）　７００ｍｇ　（４，’ Ｉｍｍｏｌ）の溶液に、３−フェニル−１−プロピルマグネシウムブロマイド　（４０）　１０．０鵬Ｌ（５，０箇■ｏｌ）を加え、得られた混合物を０℃で０．５時間攪拌した。次いで、混合物を飽和ＮＨＪＣＩの滴下により反応停止し、そしてエーテルで希釈した。

相に分離し、有機層を水および塩溶液で洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥した。

濃縮により、オイルとしてアルコール（４１）　１．１２ｇを得た。この化合物の１■ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣ１３）は構造に一致していた。

５−Ｂｏｃ−ビイコリルー１フージフエニル−４−ヘプ　ニルエステ正−１ｕ室温で、ＣＨ２Ｃｌ２５．０ＩＩＬ中の（Ｓ）−Ｂｏｃ−Ｌ−ピベコリル酸１６４ｍｇ（０，７２ｍｍｏｌ）の溶液に、アルコール４１の１７４ｍｇ　（０，６５＋ｉｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロライド（ＥＤＣ）　１４０＋ａｇ　（０，７２ｇｍｏｌ）、および触媒量のＮ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を加えた。この反応混合物を雰囲気温度で０．５時間攪拌し、次いでそのままシリカゲルカラムにかけた。ヘキサン中の１０％酢酸エチルによる溶出により、オイルとしてエステル（４２）　７６．２ｍｇを得た。’Ｉ（ＮＭＲは構造と一致する。

−１７−ジフェニル−４−ヘブ　ニルピペコレート　４３雰囲気温度で、ＣＨ２Ｃｌ２１．ＯＩＬ中の（４２）の４７ｍｇ　（０，１０ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸１．０■Ｌを加えた。室温で０．５時間攪拌した後、飽和に２ＣＯ３の滴下により得られた溶液を中和した。

層を分離し、そして有機相を水で洗浄し、Ｍｇ５Ｏｉで乾燥し、そして濃縮し、オイルとしてアミン　（４３）　２：３ｍｇを得た。’ＨＮＭＲは構造と一致する。

Ｓ−１７−ジフェニル−４−ヘプ　ニルトートメトキシスルホニル　ピペコレート　３３ＣＨ２Ｃ１２１，０鵬Ｌ中の遊離アミン　（４３）　１２．１ｍｇ　（０，０３１ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン６．０μＬ　（０，０３５ｍｍｏｌ）および４−メトキシベンゼンスルホニルクロライド７．１■ｇ（０，０３４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１時間攪拌した。この反応混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフしくヘキサン中の５％酢酸エチルにより溶出）、オイルとしてスルホンアミド　（３３）　１０．５ｍｇを得た。（３３）の構造を以下に示す。’ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ　ＣＤＣ１３）　６７．４３−７．３３　（ｂｒ　ｄ）、７．０９−６．９７　（ｍ）、６゜９６−６．８３　（１）、６．５４　（ｂｒ　ｄ）、４．６１　（ｂｒ　ｄ）、４．４８　（Ｓ）、３．５８−３．４５　（ｍ）、３．０１−２．９２　（ｂｒ　ｔ）、２．３９−２．２５　（ｂｒ　ｔ）、１．８８　（ｂｒｄ）、１．５９−１．４７　（ｂｒ　ｄ）、１．４６−１．１９　（ｓ）、１．０６−０．９５　（ｍ）。

（以下余白）実】ｌｌｌおよび１新鮮す末ｔｆｌ　血ｍ　リｙ　ｔ＜球（Ｐ　Ｂ　Ｌ）を、ＬｅｕｋｏＰａｋ細胞、または試験によりＨＴＶ陰性および肝炎陰性とされた無作為の正常献血者の全血から単離し、そして、）ｌｉｓｔｏｐａｑｕｅ　１０７？　（Ｓｉｇ＋＊ａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ）を用℃）た密度遠１ｃ、１分離によって分離した。マウスＣＴＬＬ細胞毒性Ｔ細胞系およびヒトＪｕｒｋａｔＴ細胞系（よＡ　Ｔ　ＣＣ（ＣＴＬＬ−２ＡＴＣＣＴｌＢ２１４．　ＪｔｌＲＫＡＴ　ＣＬＯＮＥ　Ｅ６−Ｉ　ＡＴＣＣＴｌＢ１５２）力）らのものである。新鮮なＰＢＬの活性化のために用いられるヒト同種異系（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ）Ｂ細胞系は、２つの完全に異なるＨＬＡ／＼プロタイプを持つ正常健康成人献血者からの、ＥＢ’／−升ニ質転換された１ノン／４球である。すべての細胞系は、Ｇｉｂｃｏ　Ｍｙｃｏｔｅｃｔ試験キ・ノドを用〜）てマイコプラズマ汚染の存在をル−チン試験し、マイコプラズマが存在していな直と力（示されて（為る。培養培地番よ、ペニシリン（５０Ｕ／ｍｌ）およびストレプトマイシン（５０ｇｇ／ｍ　ｌ　）、Ｌ−グルタミン　２ｍＭ、２メルカプトエタノール（５ｘｌ□−ｓ）、１０％の熱不活性化されたＦＣ３、およびｌｏｍＭ　ＨＥＰＥＳを含むＲＰＭ　Ｉ　１６４０　（Ｇｉｂｃｏ。

Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ、　ＮＹ）からなる。

ム　゛および゛すべての化学ストックをＤＭＳＯに溶解した。化合物の適定は、ｌμＭまたは１０ｇＭのストック溶液からの複数の３倍希薄溶液を用いて、個々のアッセイが行われる培地、即ち、最終希薄される濃度の完全ＲＰＭＩまたはＨＢ１０４中で行った。

ＭＴ！ＬＬ！：１工ＭＴＴアッセイは、完全なミトコンドリアによるテトラゾリウム塩の還元に基づいて、成長するリンパ系および非リンパ系の細胞系への化合物の毒性を測定する比色定量技術である（Ｍｏｓｓｍａｎ、　Ｔ、、　Ｊ、　Ｉｎ１ｕｎｏ１．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　６５＋５５（１９８３））。無血清培地（ＨＢ１０４．　ＨＡＮＡ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃ、　Ｉｎｃ、）中の、異なる濃度の試験化合物の存在下または不在下での細胞の生存能力を、ＭＴＴ　（３−［４，５−ジメチル−チアゾイル−２−イル］２．５−ジフェニル−テトラゾリウムブロマイド）を用いて評価した。３日間の毒性アッセイ培養期間の終了の４時間前に、２０μｌのＭＴＴ色素（ｐＨ７，２のＰＢＳ中で５ｍｇ／　ｍ　！　）を各マイクロタイターウェルに加えた。インキュベーション時間の終了時に、各ウェルから、大部分の培養培地を注意深く吸引して取り出した。次いで１００μｌの酸性化したイソプロピルアルコール（０，０４Ｎ　ＨＣＩ）を加えて染料を可溶化し、そして５７０ｎｍで吸光度を読み、６３０ｎｍでの吸光度を引くことで校正した（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ＤｅｖｉｃｅｓＴｈｅｒｍｏｍａｘ　ｐｌａｔｅ　ｒｅａｄｅｒ　ａｎｄ　Ｓｏｆｔｍａｘ　ｓｏｆｔｖａｒｅｐｒｏｇｒａｍ、　Ｍｅｎｌｏ　Ｐａｒｋ、　ＣＡ）。結果を対照（薬品を含まない培地）の平均吸光度と比較し、そして５０％毒性を生じる投与量（ＴＣ５９）を計算した。

ア・セイ　ＰＭＡ　および　０ＫＴ３９６ウエル丸底プレートにおいて、１ウエルあたりの最終容量を２００μｌとし、異なる濃度の試験化合物および対照薬品（ＣｓＡ、　ＦＫ５０６．　Ｐａｇａｇ＋ｙｃｉｎ）の存在下または不在下で、５Ｘ１０′個の細胞を０ＫＴ３　（最終希釈度１０−’）、またはＰＭＡ（Ｌｏｎｇ／ｍｌ）とアイオノマイシン（２５０ｎｇ／ｍｌ）で刺激することによって、有糸分裂促進剤に応答するヒ）ＰＢＬの増殖に対する試験化合物の阻害効果を評価した（Ｗａｉｔｈｅ、　Ｗ、　Ｋ、およびに、　Ｈｉｒｓｅｈｈｏｒｎ、実験免疫学ハンドブック、第３版Ｂｌａｃｋｖｅｌｌ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、　０ｘｆｏｒｄ（１９７８）；　Ｍｉｓｈｅｌｌ、　Ｂ、Ｂ、およびＳ、Ｍ、　Ｓｈｉｉｇｉ、細胞免疫学における選択された方法Ｗ、Ｈ，Ｆｒｅｅｍａｎ　ａｎｄ　Ｃｏ、、　Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、　ＣＡ　（１９８０））。４８時間のインキュベーション（３７°Ｃ１特表千６−５０８１４１　（１１）５％Ｃ０２）の後、細胞をｌμＣｉの３Ｈチミジンでパルスし、２４時間後にＴｏｍ　Ｔｅｋセルハーベスタ−（ｃｅｌｌ　ｈａｒｖｅｓｔｅｒ）で採取し、そしてＬＫＢβシンチレーションカウンタで計数した。化合物をヒト末檎血液リンパ球の増殖を阻害する能力に関して評価した。結果（ｃｐｍ）を培地のみの対照と比較し、そして計数を５０％減少させる濃度（ＩＣｓｅ）を計算した。

ＭＬ　パイオア・・セイ　ＬＢ　およ　ＪＶＭ初期の混合されたリンパ球反応において抗原活性化されたＰＢＬの増殖を、異なる濃度の試験された化合物および対照薬品の存在下または不在下で評価した。９６ウエル丸底プレート中で１ウエルあたりの最終容量を２００μｌとし、５×１０４個の新鮮ＰＢＬを、マイトマイシンＣ処理された同種異系のＥＢＶ−形質転換されたβリンパ球芽球（ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｌｄ）　５×１０３個の細胞、ＬＢおよびＪＶＭによって刺激した（Ｍｉｓｈｅｌｌ、　Ｂ、Ｂ、およびＳ、Ｍ、　Ｓｈｉｉｇｉ、細胞免疫学における選択された方法Ｗ、Ｈ，Ｆｒｅｅｍａｎ　ａｎｄ　Ｃｏ、、　Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、　ＣＡ　（１９８０）；　Ｎｅ１ｓｏｎ、Ｐ、Ａ、ら、、　ａｎｓ　１ａｎｔａｔ’ｏｎ　５０：２８６　（１９９０））　ａ培養を６８目にパルスし、２４時間後に回収して前セクシ言ンと同様に計数した。化合物を混合リンパ球反応における増殖を阻害する能力に関して評価した。

（以下余白）ＩＬ−２マイクロア・セイ　ＣＴＬＬ試験化合物が、サイトカイン使用の後のＴ細胞活性化プロセスを抑制するか否かを決定するために、ＩＬ−２依存性ＣＴＬＬ−２０マウスＴ細胞系（ＡＴＣＣ）の増殖応答を評価した（Ｇｉｌｌｉｓ、　Ｓ、ら、、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏ　１２０：２０２７　（１９７８））。

ＣｓＡおよびＦＫ５０６は、活性化されたＴ細胞によってＩＬ〜２の生産を阻害するが、ラバマイシン（Ｒａｐａｍｙｃ　ｉｎ）はＩＬ−２の使用を妨害する。

従って、ラバマイシンはＣＴＴＬのＩＬ−２依存性増殖を阻害し、そしてＣｓＡおよびＦＫ５０６は阻害しない（Ｄｕｍｏｎｔ、　Ｆ、　Ｊ、ら、、　Ｊ、１ｍｍｕ　ｏｌｏ■ｕｉ：２５１　（１９９０））。３Ｘ１０’個のＣＴＬＬを、ＩＵ／ｍｌのヒト組換えＩ　Ｌ　−２（Ｇｅｎｚｙｍｅ、　ｒｌＬ−２）の存在下で、異なる濃度の試験化合物および対照薬品に２４時間さらした。薬品を添加した４時間後に、細胞を１μＣＩの３Ｈ−チミジンでパルスし、さらに２０時間インキュベートしく３７’Ｃ，５％Ｃ０２）、次いで前述したように、回収および計数した。

級来これらのアッセイの結果を以下の表３に述べた。

（以下余白）一一玉」ニーｌＺジｌ茎丸Ｋ１ｎｍ　Ｋｄｎｎ　ＰＭＡ　０ＫＴ３　ＬＢ　ｊＶＭ　ＣＴＬＬ２　１６．０００　ＨＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００３　２．５００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００４　１．５００　１０００　＞１０，０００　＞１０，０００　）４０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００５　１３０　ＮＤ　５，０００　コ、５００　＞１０，０００　＞１０，０００　フ、５００６　１８０　ＮＤ　）４０，０００　＞１０．０００　９，０００　４，５００　１，０００７　２００　ＮＤ　＞１０，０００　ｓ、ｏｏｏ　＞１０．Ｏｏｏ　＞１０，０００　）４０，０００Ｂ　２，４００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１ｏ、ｏｏｏ　＞１ｏ、ｏｏｏ　＞１０，０００　＞ｔｏ、ｏｏ。

９　１００　９０　＞ｘｏ、ｏｏｏ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００１０　２００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　）４０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００１１　２．２００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　ＩＩ、０００　＞１０，０００　＞：ｔｏ、０００１２　８．０００　ＮＤ　＞１０，０００　）４０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００１３　３．０００　ＮＤ　＞１０，０００　）４０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００１４　２４０　ＮＤ　＞１０，０００　８，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００１５　６．０００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００１６　９００　ＮＤ　＞１０，０００　＞ｉｏ、ｏｏＱ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００１７　＞１００，０００　ＨＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００１８　２．０００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１．０．０００　＞１０，０００　＞１０，０００１９　５．０００　ＨＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００２０　２．０００　ＮＤ　＞１０，０００　：＋４０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００２１　５００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞ｔｏ、ｏｏＱ　＞ｌｏ、ｏｏ。

（Ｌス王ネ・）表　コニ　７’ｙ’ｔ！イ＆１％　ｔ％テ―Ｎｏ、　Ｋ１ｎｍ　Ｋｄｎｍ　ＰＭＡ　ＯＫＴコ　ＬＢ　ＪＶＭ　ＣＴ１．Ｌ２２　＞１ｏｏ、０００　ＮＤ　）Ｌｏ、０００　＞１ｏ、ｏｏｏ　＞１ｏ、ｏｏｏ　＞１０，０００　＞１０．０００２３　２．０００　ＮＤ　＞１０．ＯＯｏ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．Ｏｏ。

２４　９００　ＮＤ　＞１０，０００　）４０，０００　４，０００　＞１０，０００　＞１０，０００２５　１．９ｏｏ　ＮＤ　９，０００　＞１０．ｏｏｏ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００２６　２．０００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　、＞１０，０００　＞１０，０００２７　１２．０００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００２８　１．５００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００２９　１．７００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１口、ｏｏｏ　＞１ｏ、ｏｏｏ　＞１０，０００　＞１０，０００３０　：ｌ、０００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００３１　６．０００　ＮＤ　＞１０．０００　８，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　〉ｏｏ、０００３２　Ｂ、０００　ＨＤ　＞１０，０００　）４０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００３３　５．０００　ＮＤ　フ、５００　９，５００　７．５００　＞１０，０００　＞１０，０００３４　７００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０．０００１５　２．５００　ＨＤ　＞１０，０００＞１０，０００　ＨＤ　＞１０．０００　９，０００３６　４００　ＮＤ　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００　＞１０，０００（以’Ｆ４：ｆ１）等」１阻ルーチンによる実験をそれ以上行うことなく、本明細書で述べた本発明の特定の実施態様に対する多くの等価物を、当業者は認識し得、あるいは確がめ得る。そのような等価物は、以下の請求項に包含されることが意図される：補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成５年１１月２ｔＦ日

Claims

【特許請求の範囲】

１．以下に示す式で表される、免疫抑制活性を有する化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ および薬学的に受容可能なその塩：ここで、ＡはＣＨ２、酸素、ＮＨ、またはＮ−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）であり；ここで、ＢおよびＤはそれぞれ独立して、Ａｒ、水素、（Ｃ１−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルケニル、（Ｃ５− Ｃ７）−シクロアルキルで置換された（Ｃ１−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキルまたはアルケニル、（Ｃ５−Ｃ７）−シクロアルケニルで置換された（Ｃ１− Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキルまたはアルケニル、またはＡｒで置換された（Ｃ１−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキルまたはアルケニルであり（ここで各々の場合において、アルキルまたはアルケニル鎖の１つまたは２つのＣＨ２基は、酸素、硫黄、ＳＯ、およびＳＯ２からなる群から選択される１〜２個のヘテロ原子で、化学的に合理的な置換型で含有し得る）、または ▲数式、化学式、表等があります▼ であり、但し、ＢおよびＤの両方が水素ではなく；ここで、Ｑは水素、（Ｃ１− Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキル、または（Ｃ１−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルケニルであり；ここで、ＴはＡｒまたは３位および４位で置換基を有する５〜７員環シクロアルキルであり、該置換基が、それぞれ、水素、ヒドロキシル、０−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、０−（Ｃ１−Ｃ４）−アルケニル、およびカルボニルからなる群から選択される、シクロアルキルであり；ここで、Ａｒはフェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、単環および二環のヘテロ環系からなる群から選択され、ここで個々のヘテロ環のサイズは５員環または６員環であり、一方または両方の環中に、Ｏ、Ｎ、およびＳからそれぞれ選択される１〜４個のヘテロ原子を含有し得；ここで、Ａｒは、１〜３個の置換基を含有し得、該置換基は、水素、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ１−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキル、（Ｃ２−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルケニル、０−（Ｃ１− Ｃ４）−直鎖または分枝のアルキル、０−（Ｃ２−Ｃ４）−直鎖または分枝のアルケニル、０−ベンジル、０−フェニル、１，２−メチレンジオキシ、アミノ、カルボキシル、およびフェニルからなる群から選択される；ここで、Ｅは（Ｃ１ −Ｃ６）−直鎖または分枝のアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）−直鎖または分枝のアルケニル、（Ｃ５−Ｃ７）−シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ４）−直鎖または分枝のアルキルまたは（Ｃ１−Ｃ４）−直鎖または分枝のアルケニルで置換された（Ｃ５−Ｃ７）−シクロアルケニル、［（Ｃ２−Ｃ４）−アルキルまたは（Ｃ２−Ｃ４）−アルケニル］−Ａｒ、またはＡｒ（Ａｒは上記と同様）であり；ここで、ｊは水素、またはＣ１またはＣ２アルキル、またはベンジルであり；Ｋは（Ｃ１−Ｃ４）−直鎖または分枝のアルキル、ベンジル、またはシクロヘキシルメチルであり；またはＪおよびＫは、一緒になって、その中に酸素、硫黄、ＳＯ、またはＳＯ２置換基を含み得る５〜７員環のヘテロ環を形成し得；ここで、ｎは０〜３であり；そしてここで、１位および２位の炭素での立体配置は、（Ｒ）または（Ｓ）である。
２．ＦＫ−５０６結合タンパク質に対する親和性を有する、請求項１に記載の免疫抑制化合物。
３．前記ＦＫ−５０６結合タンパク質のプロリルペプチジルシスートランスイソメラーゼ活性を阻害し得る、請求項１に記載の免疫抑制化合物。
４．約７５０ａｍｕ未満の分子量を有する、請求項１に記載の免疫抑制化合物。
５．約５００ａｍｕ未満の分子量を有する、請求項４に記載の免疫抑制化合物。
６．１位の炭素での立体配置がＳである、請求項１に記載の免疫抑制化合物。
７．ＪおよびＫが一緒になって、以下に示す式で表される、請求項１に記載の免疫抑制化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ ここで、ｎは１または２であり、ｍは０〜１である。
８．Ｂが、水素、ベンジル、２−フェニルエチル、および３−フェニルプロピルからなる群から選択され；Ｄが、フェニル、３−フェニルプロピル、４−フェノキシフェニル、および４−フェノキシフェニルからなる群から選択され；そしてＥがフェニル、４−メチルフェニル、４−メトキシフェニル、２−チエニル、２，４，６−トリイソプロピルフェニル、４−フルオロフェニル、３−メトキシフェニル、２−メトキシフェニル、３，５−ジメトキシフェニル、３，４，５−トリメトキシフェニル、メチル、１−ナフチル、８−キノリル、１−（５−Ｎ，Ｎ −ルジメチルアミノ）−ナフチル、４−ヨードフェニル、２，４，６−トリメチルフェニル、ベンジル、４−ニトロフェニル、２−ニトロフェニル、４−クロロフェニル、およびＥ−スチレニルからなる群から選択される、請求項７に記載の免疫抑制化合物。
９．表１に示される任意の構造によって表され、免疫抑制活性を有し、そしてＦＫ−５０６結合タンパク質に対する親和性を有する化合物。
１０．ＦＸ−５０６結合タンパク質に対する親和性を有しており、約７５０ａｍｕ未満の分子量を有する請求項１に記載の免疫抑制化合物を、生理学的に受容可能な媒体中に含有する、哺乳動物において免疫応答を抑制するのに用いられる組成物。
１１．哺乳動物の免疫応答を抑制する際に用いられる医薬品の製造のための、ＦＫ−５０６結合タンパク質に対する親和性を有し、約７５０ａｍｕ未満の分子量を有する請求項１に記載の免疫抑制化合物の生理学的に受容可能な媒体中での使用。
１２．前記抑制されるべき免疫応答が、自己免疫応答または移植片拒絶に関連する免疫応答である、請求項１０および１１のいずれかに記載の組成物または使用。
１３．前記免疫抑制化合物が、表１に示される構造により表される、請求項１０、１１、および１２のいずれかに記載の組成物または使用。
１４．シクロスポリン、ラバマイシン、ＦＫ５０６、１５−デオキシスペルグアリン、ＯＫＴ３、およびアザチオプリンからなる群から選択される免疫抑制剤をさらに含有する、請求項１０、１１、１２、および１３のいずれかに記載の組成物または使用。
１５．ステロイドをさらに含有する、請求項１０、１１、１２、１３、および１４のいずれかに記載の組成物または使用。