JPH06506940A

JPH06506940A - 固相ペプチド合成用ハンドルとしての置換ベンズヒドリルアミン

Info

Publication number: JPH06506940A
Application number: JP4510277A
Authority: JP
Inventors: レブル，ミカエル
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1991-04-11
Filing date: 1992-04-10
Publication date: 1994-08-04
Anticipated expiration: 2020-03-30
Also published as: HUT70198A; CA2109433C; CS103091A3; CA2109433A1; ATE139995T1; GR3020463T3; JP3634356B2; DE69211990T2; US5684131A; ES2089548T3; HU222239B1; EP0579785A4; EP0579785B1; DK0579785T3; HU9302867D0; DE69211990D1; WO1992018144A1; EP0579785A1; US5891995A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】固相ペプチド合成用ハンドルとしての置換ベンズヒドリルアミン１、技術分野本発明は固相ペプチド合成用の新規”ハンドル”に関する。このハンドルは、安定形から不安定形に変換されて、温和な条件下での合成の後、またアミノ酸側鎖から保護基を脱保護した後に、担体からのペプチドの開裂をもたらす。このハンドルは置換ベンズヒドリルアミン骨格を基本とする。

２、従来技術ペプチド合成の分野で使用されるように、ハンドルとは、ペプチド断片または第１のアミノ酸をポリマー担体に結合する作用を有する二官能性スペーサと定義される。フィールズおよびノープル（Ｆｉｅｌｄｓ　ａｎｄ　Ｎｏｂｌｅ、　１９９０．　Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｐｅｐｔ、　Ｐｔｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、　３５：１６１−２１４）が記載するように、当該分野では多くの固相樹脂およびハンドルが使用可能である。使用可能であるためには、ハンドルはペプチド合成の反応条件に安定でなければならないが、合成が完了したときには、固相担体からペプチドが開裂できるようなハンドルであることが必要がある。

安定形から不安定形に変換されうるようなハンドルがいくつか報告されており、合成されている。残念なことに、これらのハンドルは実際には広範な応用ができないことが明らかとなった。例えば、４−ペンシルチオフェニル−および４−ペンシルスルホニル−ハンドル（Ｄ、Ｌ、　Ｍａｒｓｈａｌｌ、　［、Ｅ、　Ｌｉｅｎｅｒ：　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　３５、８６７（１９７０））およびスルホンアミド−ハンドル（Ｇ、Ｗ、　Ｋｅｎｎｅｒ。

Ｊ、Ｒ，ＭｃＤｅｒ＋ｎｏｔｔ、　Ｒ，Ｃ，５ｈｅｐｐａｒｄ：　Ｃｈｅｗ、　Ｃｏｍ＋ｎｕｎ、　６３６．　（１９７１））は広範に応用できないことが明らかとなった。その他の側力ぴペプチド、分析、合成、生物学”　（Ｅ、　Ｇｒｏｓｓ、　Ｊ、　Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ（編集）、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ｖｏｌ、２．　ｐ、８８　（１９８０）、ｖｏｌ、３゜ｐ、　２０９　（１９８１））に記載されている。ごく最近になって、４−アルキルチオベンジルアルコールに基づくハンドルが報告され（ヨーロッパ特許２７４，９９８号およびヨーロッパ特許２７４．９９９号；　Ｃｈｅｍ、　Ａｂｓｔｒ、　１１０．１３５７０５　（１９８９））　、ペプチド合成に使用されている。スルホキシド部分を還元した後、４−アルキルチオベンジルエステルを開裂すると遊離のカルボキシル基を有するペプチドが得られる。

しかしながら、上記のハンドルの多くは変換工程で影響を受けるアミノ酸残基に関して明らかな限界をもっている。一般に、ペプチドがトリプトファン、システィン、シスチンおよびメチオニンなどの感受性アミノ酸を含む場合には酸化工程を用いることができない。もう１つの問題はハンドルの”活性化”の途中で起こり得るメチル化と長い開裂時間のためにペプチドが損傷をうけることである。

さらに、現在入手可能なハンドルはＢｏｃおよびＦｍｏｃ合成法のいずれにも適していない。

３、発明の要約本発明はペプチド合成用置換ベンズヒドリルアミンハンドルに関する。このハンドルは酸不安定形または安定形として製造し使用することができる。安定形は樹脂からペプチドを開裂するために酸不安定形に変換することができる。

置換ベンズヒドリルアミンハンドルは以下の一般式（１）：（式中、ａは１から３、Ｘｌは［Ｓ］Ｒ’またはｘ’はＺてあり、Ｘ１基は第１ベンセン環のオルトまたはパラ位にあり、そしてＲ１はアルキル基であり：そしてｂは０から３、Ｘ２は［Ｓ］　Ｒ”であり、Ｘ２基は第２ベンゼン環のオルトまたはパラ位にあり、モしてＲ２はアルキル基であり；そしてＺは、ＸｌがＺでない場合には、Ｘｌによって占められていな０どの位置にあってもよいＲ′、ＯＲ３または［Ｓ］　Ｒ’であり、そしてＲ３は固相担体にカップリングするための反応性官能基からなるアルキル基であり、モしてＸｌが２である場合には、Ｚはオルトまたはパラ位にある［Ｓ］　Ｒ’であり；そしてＣは０または１てあり、ｄは０または１であり、Ｙ　ｉｔ　ＯＲ”であり、そしてＲ４はアルキル基であり：そして［Ｓ］は−８−１−ＳＯ−または−Ｓ　Ｏ２−であり；そしてＤはＨ１保護基またはＮ”−保護アシルである）の化合物である。

本明細書中で”アルキル”とはＣ１からＣ１゜でありうる。

本発明はさらに本発明のハンドルの合成法を提供する。ある態様においては、ヒドロキシまたはメルカプトベンゾフェノンを、フッ化物イオンの存在下にアルカンカルポンン酸のω−ハロエステルと反応させる。ベンゾフェノンカルボニルを次いで慣用の合成法、例えばオキシム合成のためのヒドロキシルアミンなどとの反応によりアミンに変換し、次いで亜鉛などで還元してベンズヒドリルアミンを生成するか、あるいはギ酸アンモニウムなどとの反応により還元的アミノ化を行う。あるいは、ベンゾフェノンをアルコールに還元して、Ｎ“−保護アミノ酸アミドとアミド化することができる。

本発明は従来法に比べて、ペプチド合成用の安定なハンドルを製造し、合成反応終了後はハンドルを不安定にするよう処理することができるという点で顕著な利点を提供する。ハンドルを安定形から不安定形に変換したら、ペプチドを慣用法により固相担体から開裂して使用する。ペプチドは遊離のカルボキシル形よりもむしろカルボキシアミド形で開裂される。酸化ハンドル、すなわち、スルホキシドまたはスルホン形のハンドルは、ペプチド合成に一般に用いられる条件下でもトリフルオロ酢酸などの酸性媒体中でも極めて安定である。スルフィド形に還元すると、ハンドルは酸に不安定となる。好ましい態様においては、スルホキシドまたはスルホンは容易にスルフィドに還元されて、安定形／”ｔンドルを不安定形に変換する。

本発明のハンドルの特に有利な点は、開裂前にアミノ酸側鎖の脱保護ができることである。標準的固相合成では、脱保護および開裂によって生じる陽イオンが開裂ペプチドと反応することができる。ペプチドとこれらの陽イオンとの反応はしばしば収率や純度の低下をもたらす。本発明によると、脱保護されたペプチドが固体担体に留まっているので、脱保護で生じた陽イオンを洗い流すことができる。開裂途中において、陽イオンは開裂ペプチドから離れて固体担体に留まる。

本発明の他の利点は、ハンドルの還元後のペプチドの開裂を一般に用いられるよりもはるかに温和な条件で実施することができる点にある。例えば、標準的Ｂｏｃ合成開裂では強酸、通常はＨＦで処理することを必要とする。本発明でははるかに温和な条件下で最終開裂を行うＢｏｃ合成が可能である。

本発明のさらなる利点は、ハンドルをＦｍｏｃとＢｏｃ合成法のいずれにも用いることができる点である。

本発明のハンドルのさらなる利点は、従来よりも激しくない条件下で開裂によりＣ−末端ペプチドアミドを生成する点である。

（本頁以下余白）４、発明の詳細な説明本発明は、安定であるが、固相担体からのペプチドのその後の開裂のために不安定な形態に変換し得るペプチド合成用のハンドルに関する。ハンドルの安定性はアルキル−硫黄置換基の酸化状態により決定される。

置換ベンズヒドリルアミンハンドルは一般式（■）：ａは１〜３であり、Ｘｌは［ＳコＲ１てあり、またはＸＩはＺてあり、そのＸｌ基は第一ベンゼン環のオルト位またはパラ位にあり、かつＲ’はアルキル基であり、かつｂはＯ〜３であり、ｘ２は［Ｓ］　Ｒ２であり、そのＸ２基は第二ベンゼン環のオルト位またはパラ位にあり、かつＲ２はアルキル基であり、かつＺは、ＸｌがＺでない場合に、Ｘｌにより占められていないあらゆる位置のＲ’ 　、ＯＲ３または［Ｓ］　Ｒ３てあり、かつＲ３は固相担体へのカップリングのための反応性官能基を含むアルキル基であり、そしてＸＩがＺである場合には、Ｚはオルト位またはパラ位の［Ｓ］　Ｒ’であり、かつＣは０または１てあり、かつｄは０または１てあり、ＹはＯＲ’であり、かつＲ４はアルキル基であり、かつ［Ｓ］は−Ｓ−、−５Ｏ＝または一３Ｏ＋−であり、かつＤはＨ１保護基またはＮ″−保護アシルである）により表される。

本明細書に使用される“アルキル”は０１〜ＣＩ。であり得る。

本明細書に使用されるアルキルという用語は０１〜約Ｃ２゜のアルカン、アルケン及びアルキン（即ち、飽和炭化水素及び不飽和炭化水素）を含むが、これらに限定されない。例えば、アルキルは、メチル、エチル、エチニル、プロピル、プロペニル、プロピニル、等であってもよい。本明細書に使用されるアルキル用語は分岐鎖を含むたけてなく、直鎖基、および環状アルキル含む。

本明細書に使用される“ハンドル”という用語は二官能性スペーサーと定義される。ハンドルは、固相担体に結合する一つの官能基を有する。ノ＼：／ドルは、アミノ酸またはペプチド；こ接合し得る第二官能基を有する１３／Ｘンドルは、合成が完結された後（こペプチドの開裂をり２える。

本明細書に使用される“固相担体′という用語は特定の型の担体に限定されない，、むしろ、多数の担体が利用でき、これら（よ当業者に知られている。固相担体は、ンリカゲル、樹脂、誘導体イしプラスチックフィルム、ガラスピーズ、綿、プラスチ・ツクビーズ、アルミナゲルを含む。好適な固相担体は、所望の最終用途および種々の合成プロトコルに対する適性に基いて゛選択し得る。例え（ｆ、ペプチド合成に関して、固相担体として、樹脂、例えば、ｐ−メチルベンズヒドリルアミン（ｐＭＢＨＡ）樹脂（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｎ− ａｔ．Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）　、ポリスチレン（例えば、Ｂａｃｈｅｍ　Ｉｎｃ．、Ｐｅｎ−ｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得られるＰＡＭ−樹脂、等）、ポ１ノ　（ジメチルアクリルアミド）−グラフトスチレン・コージビニルベンゼン（例えば、ＡｍｉｎＯｔｅＣｈ，　Ｃａｎａｄａから得られるポリバイブ（ＰＯＬＹＩ（ＩＰＥ）（商標）樹脂）、ポリアミド樹脂（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得られる）、ポリエチレングリコールでグラフトされたポリスチレン樹脂（テンタゲル（ＴｅｎｔａＧｅｌ）（商標）　、Ｒａｐｐ　Ｐｏｌｙｖ＋ｅｒｅ．Ｔｕｂ−ｉｎｇｅｎ，ドイツ）またはポリジメチルアクリルアミド樹脂（Ｍｉ　ｌｌｉ−ｇｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ　、カリフォルニアから得られる）が挙げられる。

一実施態様において、固相担体は生体内の使用に適（、てい−Ｃもよく、即ち、それはペプチドの直接の適用のためのギヤリヤー・または担体として利用できる（例えば、テンタゲル、Ｒａｐｐ　Ｐｏｌｙｍｅｒｅ。

Ｔｕｂｉｎｇｅｎ，ドイツ）。特別な実施態様において、固相担体は１］に合って、経口消費可能であってもよい。

“ペプチドという用語は、その最も広い意味で本明細博に使用され、１Ｔ一つ以上のサブ、ユニットアミノ酸、アミノ酸類縁体またはペプチド擬態物質の化合物を表す。サブユニットはペプチド結合により連鎖し得る。別の実施態様において、サブユニ、ソトはその他の結合、例えば、エステル、エーテル、等により連鎖し得る。

本明細書に使用される“アミノ酸”という用語は、グリシンおよびＤ光学異性体およびり．光学異性体の両方を含む天然゛アミノ酸および／または非天然即ち合成アミノ酸、・■びにアミノ酸類縁体およびペプチド擬態物質を表す。本明細書に使用されるペプチド擬態物質は、ペプチドの化学構造をもたないでペプチドに似た性質を示す分子である。ペプチドは、Ｄ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸とＬ−アミノ酸の組み合わせ、および種々の“デザイナ−”アミノ酸（例えば、β−メチルアミノ酸、Ｃａ−メチルアミノ酸、およびＮα−メチルアミノ酸、等）を含んでいてもよく、ペプチドに特別な性質をもたらすことができる。更に、特定のカップリング工程で特定のアミノ酸を指定することにより、α−らせん、β−ターン、βシート、γ−ターンを有するペプチド、および環状ペプチドが生成し得る。

４．１．ハンドル本発明のベンズヒドリルアミンハンドルは、スルフィド（ＳＲ’）、スルホキシド（ＳＯＲ”）　、およびスルホン（ｓｏ２Ｒ１）（式中、Ｒ’は１〜約ＩＯ個の炭素原子のアルキル基である）からなる群から選ばれた少なくとも１個の硫黄を含む誘導体で置換されている。スルフィド誘導体、スルホキシド誘導体またはスルホン誘導体は、この出願中で［Ｓ］　Ｒと称される。硫黄含有基は、少な（とも一つのベンゼン環のオルト位またはパラ位で見られる。単一ベンゼン環の２個の硫黄含有基は、オルト−パラ位または両オルト位で見られる。三つの硫黄含有基は、二つのオルト位と一つのパラ位で見られる。ベンゼン環は硫黄含有基で対称的に置換されていてもよいが、そうである必要はない。両方のベンゼン環がパラ位またはオルト位で硫黄含有基を含むことが好ましい。

ハンドルは、固相担体、即ち、ハンドルを使用する固相ペプチド合成用の樹脂への付着のためにリンカ−１Ｚを更に含む。一実施態様において、リンカ−は一つのベンゼン環のオルト位またはパラ位に位置された硫黄含有基（［Ｓ］　Ｒ’　）であり得る。別の実施態様において、リンカ−はオルト位、パラ位またはメタ位に位置されたアルキル基（Ｒ３’）　、アルコキシ基（ＯＲ３）、または硫黄含有基（［Ｓ］　Ｒ’　）であってもよく、但し、ＺがＯまたはＳを含み、かっメタ位にある場合には、ハンドルの安定性に影響しないと考えられることを条件とする。Ｚ上のアルキル基、Ｒ３は１〜約ｌＯ個の炭素原子を有し、かつ樹脂への付着のための官能基、例えば、カルボン酸を含む。

更に別の実施態様において、ハンドルは、硫黄含有基Ｘにより占められていない一つまたは両方のベンゼン環のオルト位またはパラ位にアルコキシ基（ＯＲ’）　、Ｙを含む。基Ｙは、Ｚが　ＯＲ”　（アルコキシ）である場合にオルト位またはパラ位にＺを有する環には存在しない。アルコキシ基は二つのベンゼン環に対称的に配置されていてもよいが、そうである必要はない。アルコキシ基（Ｙ）が存在する場合、単一ベンゼン環のＹ基の数は、その環のＸ基の数より小さいか、またはそれに等しい。Ｙの合計数はベンズヒドリルアミンのＸ基の合計数より小さいか、またはそれに等しく、そしてそれより小さいことが好ましい。Ｙのアルキル部分は１〜約１０個の炭素原子を有する。

本発明は特別な機構に限定されないが、ハンドルの性質は一つ以上のベンゼン環のオルト位またはパラ位の置換基の電子供与特性または電子吸引特性により決定されると考えられる。こうして、電子供与性基、例えば、スルフィド基またはアルコキシ基がパラ位またはオルト位にある場合、電子が供与されて得られるベンズヒドリルカチオンを安定化し得るのでＮ−Ｃ結合のアシドリシスが容易に起こる。逆に、電子吸引性基、例えば、スルホキシドまたはスルホンがパラ位またはオルト位に存在する場合、アシドリシスが起こり得ない。電子供与はメタ位からはそれ程容易に起こらないので、メタ位の置換基はパラ位またはオルト位の置換基よりも大きな効果を及ぼさないと予測される。

スルホキシドまたはスルホン置換基とアルコキシ置換基の両方による置換は、電子吸引性基と電子供与性基のバランスを生じる。

Ｌ、か（７ながら、電子吸引性の酸化された硫黄含有基の数がアルコキシ基の数に少なくとも等しく、好ましくはそれより大きい場合、酸化された硫黄含有基の電子吸引性は更に大きな程度にハンドルの性質に影響すると予測される。アルコキシ基は、それらの電子供与性のために硫黄含有基の還元後にハンドルを開裂するのに有利である。

酸化されたハンドルの安定性および還元されたハンドルの酸不安定性は、一つまたは両方のベンゼン環の硫黄含有基の数を増大することにより増進されると考えられる。こうして、１個より多い酸化された硫黄含有基によるハンドルの増大された電子吸引性は、ハンドルの更に大きな化学安定性をもたらし得る。同様に、１個より多い還元された硫黄含有基の増大された電子供与ポテンシャルは、温和な条件下で開裂を促進し得る。

更に、スルホンを生じるための硫黄含有基の酸化は、スルホキシドへの酸化よりも更に安定なハンドルをもたらすと予測される。

何となれば、スルホンは更に大きな電子吸引性を有するからである。スルホンまたはスルホキシドは還元されてスルフィドを生じ得るので、いずれの酸化状態も本発明のハンドルに適している。

現在のところ、スルホキシド酸化状態が好ましい。

更に別の実施態様において、アミン窒素原子の位置で保護基を有するハンドルが調製し得る。好適な保護基は、ユニの名を挙げると、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）およびＮ−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を含む。ペプチド合成に適したあらゆるアミン保護基が好適である。多くのものがＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｗｉｌｅｙ　Ｉｎｔｅｒｓｃ−ｉｅｎｃｅ：Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９９１．　ｐｐ、　３０９−３６２；並びにＦｉｅｌｄｓおよびＮｏｂｌｅ１９９０、　Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｐｅｐｔ、　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、　３５：１６１−２１４に記載されている。Ｎ−保護ベンズヒドリルアミンは、アミン基の反応性には関係しないで固相担体にカップリングし得る。ハンドルが固相担体にカップリングされた後、保護基は常套の化学反応、例えば、Ｐｍ０Ｃの場合にはジメチルホルムアミド中のピペリジンによる処理、またはＢｏｃの場合にはトリフルオロ酢酸による処理により除去し得る。

別の実施態様において、ハンドルはベンズヒドリルアミドとして、即ちアミンの位置でアシル基を有して調製し得る。本発明に使用されるアシル基はＮ′−保護アミノ酸を含むがこれに限定されず、これはペプチド鎖のその後の延長のために脱保護し得る。

アミノ酸という用語は本明細書で先に定義されたように使用され、Ｄアミノ酸およびＬアミノ酸、グリシン、並びに非天然産のアミノ酸またはアミノ酸類縁体を含む。

Ｘ（またはＺ）がハンドル上でスルホキシド基またはスルホン基として存在する場合、ハンドルは酸性媒体に対して極めて抵抗性である。スルホキシドまたはスルホンからスルフィドへの還元はアシドリシスに対して不安定であるハンドルをもたらす。例えば、このようなハンドルはトリフルオロ酢酸中で開裂し得る。こうして、本発明は酸安定性または酸不安定性であるハンドルを提供し、そして酸安定形態から不安定形態への変換、およびその逆の変換を提供する。

４．２．置換ベンズヒドリルアミンの合成本発明の置換ベンズヒドリルアミンは、下記の方法に従って調製し得る。

４、　２．　ｌ、ベンゾフェノンの調製本発明のハンドルの合成のための出発物質として使用される置換ベンゾフェノンは、例えば、置換安息香酸と置換ベンゼンの縮合反応、即ち、ベンゼンのアシル化により合成により調製し得る。

好適な置換安息香酸は、２−アルキルチオ安息香酸、４−アルキルチオ安息香酸、２．４−ジ（アルキルチオ）安息香酸、２゜４．６−トリ（アルキルチオ）安息香酸、２−（または４−）アルキルチオ−４（または２−）アルコキシ安息香酸、２．４−（または２．６−アルキルチオ）−６（または４）−アルコキシ安息香酸、等を含むが、これらに限定されない。更に、安息香酸は、固相担体にカップリングするための官能基を含むアルキル基（即ち、Ｚ）で２位、３位または４位で置換されていてもよい。

アルキル基に存在する官能基を保護してベンゾフェノンの生成中にその反応を防止するように特別な注意を払う必要がある。例えば、官能基がカルボン酸である場合、それは塩化チオニルとの反応から保護される必要がある。また、安息香酸は２位、３位または４位でヒドロキシ基またはメルカプト（即ち、スルフヒドリル）基で置換されていてもよい。ヒドロキシ基またはメルカプト基は２位または４位にあることが好ましい。置換安息香酸が２位または４位のメルカプト置換基を含む場合、それはアルキルチオ置換基を含む必要はない。何となれば、アルキル化の際に、メルカプト置換基は必要とされる性質を有するアルキルチオ基になるからである。特別な実施態様において、置換安息香酸は２−ヒドロキシ−４− （メチルチオ）安息香酸である。

好適な置換ベンゼン基は、アルキルチオベンゼン（例えば、チオアニソール）、１，３−ジアルキルチオベンゼン、１．　３．　５−トリアルキルチオベンゼン、３−アルコキシ−アルキルチオベンゼン（例えば、３−アルコキシチオアニソール）、５−アルコキシ−１，３−ジアルキルチオベンゼンおよび３−アルコキシ−１，５−ジアルキルチオベンゼンを含むが、これらに限定されない。特別な実施態様において、置換ベンゼンはチオアニソールである。

更に別の実施態様において、安息香酸がリンカ−として使用するためのアルキル基を欠いており、そしてリンカ−を結合するためのアルキル化に適したヒドロキシ基またはメルカプト基を欠いている場合、その置換ベンゼンはこれらの基のいずれかを含むことができる。

多くの変更が、ベンゾフェノンを調製するのに使用し得る置換安息香酸および置換ベンゼンに関して可能である。多くの組み合わせおよび置換が可能であり、本発明により意図されているが、最も簡単な出発物質がしばしば好ましい。何となれば、これらは一般に高価ではなく、入手し易く、しかも望ましくない副反応を受け難いからである。こうして、選択された置換安息香酸および置換ベンゼンは、ベンゼン環のパラ位またはオルト基に少なくとも一つの硫黄を含む置換基、好ましくは両方のベンゼン環に硫黄を含む置換基と、リンカ−またはリンカ−の結合に適した官能基を有するベンゾフェノンを形成する必要がある。

下記の特別な実施態様において、置換安息香酸は塩化チオニル中で加熱されて相当する安息香酸クロリドを生じる。一般にこの反応は、安息香酸を約２モル当量の塩化チオニル中で攪拌しながら約４０℃に約ｌＯ分〜約：３０分間加熱することにより行い得Ｚ０次いて塩化ベンゾイルが約４０℃で非プｏ　ｌ−ン性溶媒、例えば、二塩化エチレンに溶解される（約Ｏ４１〜約ＩＭ）。この溶液が、非プロトン性溶媒（例えば、ジクロロエタン）に約０．２−・約３Ｍで溶解されｔ：等モル量の置換ベンゼン、例えばチオアニソールと混合される。その混合物が０ ℃に冷却され、そして当量の塩化アルミニウムで処理される。その反応混合物が約２０℃に温められ、その時点で温度を調節（２ながら第二、の当量のＡｌＣ１，が添加し得る。その反応混合物が約４０℃＝−５０℃で約１〜・２時間攪拌され、そして通常の方法、例えば、抽出、再結晶、等により処理される。

また、ベンゾフェノンはオルト位またはパラ位への硫黄含有基の付加により、またはアルコキシ置換ベンゾフェノン中の酸素に代わる硫黄の置換により改変し得ることが意図されている。アルコキシ基に代えてスルフィドの交換は、クロロジメチルチオカーバメ・−トによるヒドロキシ基の処理、続いて熱転位およびＳ− アルギル化により起こる。しか（−７ながら、この別法は、固相担体への付着のための単一リンカ−の付着を与え、または単一リンカ−として作用するために非対称に置換されたベンゾフェノンの使用を必要とする。

る場合、そのリンキング基を付加するためのアルキル化が必要とされる。当業界で知られているあらゆるアルギル化方法が本発明の実施に使用（−得る。これらのアルキル化方法は、ハロゲン、特に臭素もしくは塩素、またはその他の良好な脱離基によるアルキルの活性化により行われる。しかしながら、オ゛ルト位のアルキル化が意図されている場合、水素結合を分断する試薬を添加する必要がある。好ましい実施態様において、その試薬はフッ素イオン（Ｆ−）である。

特別な実施態様においＣ，置換ベンシフ１．ノンが極性の非プロトン性溶媒に溶解される。ベンゾフェノンは一つのベンゼン環で２位、３位または４位でヒドロキシ基またはメルカプト（ＳＨ）基で置換される。ベンゾフェノンの濃度は５！ＩＩＭ−ＩＭτあることが好ましく、５０ｍＭ〜０．５Ｍであることが更に好ましい。最適濃度は極性の非プロトン性溶媒の選択、およびその中のベンゾフェノ゛ノの溶解性に依存する。好適な溶媒は、アセトニトリル、ジメヂルポルムアミド、ジオキサン、等、往びにこれらの混合物を含むが１、−れらに限定されない。

ヒドロキシ基またはメルカプト基が２位にある場合、フッ素イオンがその溶液中に存在してアルキル化反応を促進（る。これらのイオンは不活性担体上に用意されていてもよい。下記の特別な実施態様において、そのフッ化物はアルミナ−Ｌのフッ化カリウムの懸濁物として与工られる。別の実施態様において、フッ化物はフッ化テトラエチルアンモニウムとして悸えられる。

この溶液に、アルキル化剤、例えば、アルキルカルボン酸のω−ハロエステルが添加され、これは相当する市販のアルキルカルボン酸のハロゲン化により調製し得る。特別な実施態様において、ブロモ吉草酸メチルが添加される。アルキル化剤はベンゾフェノンの濃度に対してモル過剰で、好ましくは約２０％より大きく過剰、更に好ましくは約４０％より大きく過剰で添加されることが好ましい。アルキル化反応は室温で完結させるために少なくとも約９６時間を要することがある。アルキル化されたベンゾフェノンは、常套の方法、例えば、クロマトグラフィーまたは再結晶により精製でき、またはそれは、例えば、減圧で濃縮された固体物質（例えば、アルミナが存在する場合）から分離でき、そしてそれ以上精製しないで使用し得る。

４．２．３．ベンゾフェノンからベンズヒドリルアミンへの変換置換ベンゾフェノンのカルボニル基はアミン基に変換される。

カルボニルからアミンへの変換は、当業界で知られているあらゆる方法により行うことができ、その方法はオキシム生成、続いて還元を含むか、または、例えば、ギ酸アンモニウムによる還元的アミン化を含むが、これらに限定されない。下記の特別な実施態様において、ベンゾフェノンはヒドロキシルアミンと反応させられてオキシムを生成する。この反応は一般に極性溶媒、好ましくはアルコール、例えば、エタノール中で行われるが、メタノール、プロパツール、２−プロパツール等がまたアルキル化反応に使用されるのとほぼ同じ濃度で置換ベンゾフェノンと共に使用し得る。また、無水の弱塩基、例えば、酢酸ナトリウムが存在してもよい。その反応混合物は約１〜約１５時間、好ましくは約７時間にわたって加熱、還流される。その混合物は、例えば、−夜にわたって放置してもよく、または直ちに処理してもよい。処理に際して、その反応混合物は濾過され、そして減圧で濃縮されて、それ以上精製しないで使用し得る生成物を生じることができる。

そのオキシム生成物は、アルキル化されたベンゾフェノンがオキシム工程で使用されたのとほぼ同じ濃度で約１＝３の比のアルコール（好ましくはエタノール）と２５％のアンモニアに溶解される。

この溶液に、約１０倍モル過剰の粉末亜鉛が添加される。その懸濁液が５０℃に加熱され、約４８時間攪拌される。その懸濁液が濾過され、減圧で濃縮されて置換ベンズヒドリルアミンを生じる。

オキシムの還元により得られたベンズヒドリルアミンは極性溶媒に難溶性または不溶性である。更に、その還元反応が亜鉛で行われる場合、亜鉛が反応混合物中に残る。こうして、硫黄を含む置換基（アルキルスルフィド）の酸化およびアミノ基の保護の前に、ベンズヒドリルアミンを精製することが必要である。精製方法は、例えば、シリカゲルによるクロマトグラフィー、再結晶、分取薄層クロマ；・グラフィー等を含むが、これらに限定されない。

特別な実施態様において、再結晶方法が使用される。不溶性ベンズヒドリルアミンは、トルエンスルホン酸を添加し、こうしてアミンの酸塩を生成することにより可溶化される。この反応は、ベンズヒドリルアミンを約１００〜５００ｍＭ　、好ましくは約１５０ｍＭで適当な溶媒、例えば、メタノール、エタノール、等に溶解することにより行い得る。溶媒中のトルエンスルホン酸（ＴｓＯＨ）の飽和溶液が、好ましくは、制御された添加、例えば、滴下により添加し得る。生成物は、水を含む極性のプロトン性溶媒系　（例えば、３：ｌ　ｖ／ｖのメタノールのようなアルコールと水）に溶解され、そして必要により加熱されて溶解性を増大する。その溶液が約２０℃に冷却された後、酸化剤、例えば、過ヨウ素酸ナトリウム（スルホキシドを生成するため）または過酸化水素（スルホンを生成するため）がＳ原子の当量を基準としてモル過剰で添加される。典型的には、過酸化水素による酸化のための溶媒は氷酢酸である。

過ヨウ素酸ツートリウム酸化中に生成された沈殿が濾過により除去され、そ（２て生成物が濃縮される。

４゜２，４、アミン基の保護更に、本発明はベンズヒドリルアミンの合成後のアミン基の保護を提供″）る３、アミン基の保護は、ｌ＼ンドルを固相担体（こ力・ツブリングする場合にアミンの反応性を防止するのに重要であり得る１、こう（で、本発明は“γミン保護〕１ンドルを提供する。

アミンの好ましい保護基はＢｏｃおよびＦｍｏｅである。し、力）しな力（ら、Ｇｒｅｅｎおよびｗｉｌｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ。

Ｗｉ！ｅｙ　ＩｎＴｅｒＳＣｉｅｎＣｅ：ＮｅＷ　Ｙｏｒｋ、１９９１．ｐｐ、３０９−３６２．並びにＦｉｐｌｄｓおよびＮｏｂｌｅ＋９９０．　ＩｎｔＪ、ＰｅｐｌＰｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、３５：１６１−２１４１こ記載され７ている４ようなその他の保護基がまた意図されて（島る。Ｈｏｅ保護アミンお。４：びＦｍｏｃ保護アミンの合成は直接的であり、当業界で公知τ゛ある。ペプチド合成のためのＮ’″−保護アミ７〕酸は、通常、合成軸、略に応じて、ＢｏｃまたはＦ＋ｎｏｃて保護される。

下記の特別な実施態様において、アミンはＦｍｏｃ保護基で保護される。ベンズ１ニトリルアミ、ンを含む水溶液σ）ｐｌｌが約９（こされ、沈殿した無機塩が濾過により除去され、そ（７で保護Ｆ＋１ＩＯＣ（例λ番ｆ。

Ｆｍｏｅ−１４−Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミジルエステル）が添加される。

Ｆａ＋ｏｃ−ベンズヒドリルアミンが、通常の方法を使用して処理されて所望の純度の生成物を生り、る。

別の実施態様において、ベンズヒドリルアミンはＢｏａ保護基で保護される。一般に、これは常套の方法に従って行い得る。

４．２゜５．ハンドルを調製するための別の経路ベンゾフェノンが上記のセクション４．２．１．に記載されたようにし２て調製される。ベンゾフェノンは、例えば、エタノールまたはその他の同様の溶媒中でホウ水素化ツートリウムによる処理により還元されてベンズヒドリルアルコールを得ることができる。酸性条件下の一般アミドによるベンズヒドリルアルコールの処理は、そのヒドロキシに代えてアミドの置換をもたらす。この結果はベンズしドリルアミンのアシル化に似でいる。

選択されるアミド基は、上記のセクション４．１．に記載されたようなＮ′−保護アミノ酸であることが好ましい。

４．３．ペプチド合成のためのハンドルの使用本発明のハンドルは、ペプチド合成のためにペプチド鎖を固相担体に付着するのに良く適している７、ハンドルは、アルキル基の好適な官能基、例えば、カルボン酸によりあらゆるアミノ樹脂に付着し得る。樹脂のアミンΔ、のカルボン酸官能基の付着は、ペプチド合成に普通使用される技術、例えば、０Ｐｆｐ、　ＨＯ旧まｔ二はその他の活性エステルの調製、カルボジイミドの存在下の縮合、等のいずれかにより進行し得る。また、これらの方法がセクション４゜３．２、てペプチドの合成に関して説明されている。本発明に使用するのに適した固体担体は先に説明されていＺ）。

固相ペプチド合成技術は当業界で公知である。簡単に言えば、Ｎ′−保護アミノ酸がα−カルボニルの位置で活性化され、初期のペプチド−／１ントルー固固相体の脱保護Ｎ′と力・ツブリングされる。そのカップリング反応は当業者に良く知られている技術（例えば、ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ、１９８４，５ｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ。

第二組、Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、　ＩＬ；ＦｉｅｌｄｓおよびＮｏｂｌｅ。

１９９０、”５ｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ　９−ｆｌｕｏｒｅｎ−ｙｌｍｅｔｈｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ、”Ｉｎｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、３５１６１−２１４　；Ｇｅｙｓｅｎら、　１９８７．　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ１０２：２５９−２７４を参照のこと）により行い得る。カップリング、脱保護、および最終的な固相担体からのペプチドの開裂の化学はＮ”−保護基の選択に依存し、保護基は一般にｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）または９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）である。

本発明のハンドルを使用するペプチド合成の好ましい実施態様において、カップリングの完結性が評価されるべきである。カップリングの完結性の評価方法は当業界で公知である。カップリングが完結されなかった場合には、その反応は、第二のカップリングにより、例えば、（ａ）高濃度の活性化されたアミノ酸または異なる活性化機構を使用することにより；（ｂ）異なる溶媒または付加的な溶媒の添加により：または（Ｃ）カオトロピック塩（ＫｌｉｓおよびＳｔｅｗａｒｔ、　１９９０．　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ。

ＲｉｖｉｅｒおよびＭａｒｓｈａｌｌ　（編集）、　ＥＤＳＣＯＭ　Ｐｕｂｌ　１ｓｈｅｒｓ、　ｐｐ、　９０４−９０６を参照のこと）の添加により完結させるべきである。

（本頁以下余白）４．３，１．還元および開裂ペプチド合成の後、ペプチドを固相担体がら開裂しなければならない。本発明のハンドルが還元形である場合には、ＴＦＡなどの酸で処理することにより開裂を行う。Ｆｍｏｃアミノ酸法を用５：　いる場合には、開裂は側鎖の脱保護をもたらすだろう。

謝　あるいは、スルホキシドまたはスルフォンの酸化形でハンドルを用いる場合には、ハンドルを還元して酸不安定ハンドルに変換することができる。当該分野で公知の還元剤を用いることができる。例えば、約ＩＭのトリメチルシリルクロリド／トリフェニルホスフィン／テトラヒドロフランまたはより好ましくはＩＭのトリメチルシリルクロリド／トリフェニルホスフィン／ジクロロメタンを用いてスルホキシドをスルフィドに還元することができる。

ヨウ化すマ’）　ラム（Ｓｍ　Ｉ　２）で処理すると、スルフォンおよびスルホキシドをスルフィドに還元することができる。さらに別の態様においては、臭化シリルで処理することにより還元、脱保護および開裂を同時に行うことができる。別の態様では、ＩＭのトリメチルシリルプロミド／チオアニソール／トリフルオロ酢酸で処理することにより、還元、（Ｆｍｏｃアミノ酸の）脱保護および開裂を同時に行うことができる。

本発明の特に有利な点は開裂前にアミノ酸側鎖が脱保護できる点にある。以下に示す特定の態様においては、脱保護された側鎖が開裂前に反応して環状ペプチドを形成する（下記のセクション７．３および８．参照）。開裂前に環状化することにより、副反応や分子内結合が避けられる。

５、実施例：Ｎ−Ｆｍｏｃ　［２−（カルボキシレートブチル−４メチルスルフイニル）フェニルコメチルアミンを有する固体担体５．１．４．４’−−ビス（メチルチオ）−２−ヒドロキシベンゾフェノン塩化チオニル（５０ｍｌ、６８５ｍｍｏｌ）中の２−ヒドロキシ−４−メチルチオ安息香酸（４５，ＯＯｇ、２２７ｍｍｏ　Ｉ）溶液を撹拌しながら４０℃で１５分間加熱した。１，２−ジクロロエタン（ＥＤＣ）（９０ｍｌ）を加えた後、溶液を減圧下（１５ｍｍ）に５０℃で３０分撹拌した。

固体残渣をＥＤＣ（２５０ｍｌ）中に４０℃で溶解し、ＥＤＣ（１００ｍｌ）中のチオアニソール（２６，７ｍｌ、２２７ｍ、ｍ０１）溶液に加えた。得られる混合物を０℃に冷却し、微細ＡＩＣＬ（３３，Ｏｇ、’１４７ｍｍｏｌ）を０− ５℃で７５分かけて分注した。混合物を放置して２０℃に温めて、２回目のＡｌＣ１＋（３３，７ｇ、２５３ｍｍｏ　ｌ）を３０分以内で加えた（注意・温度が３０℃に上昇すると混合物を冷却しなければならない）。ＡｌＣｌ３の添加が終了すると、反応混合物を４５−５０°Ｃて１．５時間撹拌し、次いて２０°Ｃまで冷却して氷（３００ｇ）と濃塩酸（１８０ｍｌ）の混合物中に注いだ。有機層を留去し、水層を１５分加熱還流し、２０℃まで冷却してＥＤＣ（４ｘ１５０　ｍ　ｌ　）で抽出した。回収した有機層を水（３ｘ５０ｍｌ）、１０％ＮａＨＣＯ＋　（２ｘ　ｌ　５０ｍ１）　、水（１ｘ１５０ｍｌ）、ＩＭ　ＨＣＩ　（１ｘ１５０ｍｌ）および水（２ｘ１５０ｒｎｌ）で洗浄し、Ｍｇ５Ｏ＋で乾燥した。減圧下で溶媒を除去すると、黄色結晶が得られ、これをＥ　ｔＯＨ（２１００ｍ１）から再結晶して黄色生成物（４１，ＯＯｇ、６２％）を得た。融点：　］、　０４−１０６℃。元素分析：　Ｃ１，Ｈ＋４０２Ｓ２（２９０，４１）として計算値、Ｃ６２，０４％、Ｈ４，８６％、８２２．０８％、実測値：Ｃ６１，８６％、Ｈ４，７８％、５２２．０６％ｏ’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）＋　２．５１　ｓ　（３Ｈ，ＳＣＨ，）；２．５４ｓ　（３Ｈ，５ＣＨａ）；６．６０−６．８５ｍ　（２Ｈ１芳香族）ニア、２６−７．６６ｍ（５Ｈ，芳香族）；１２．３５ｓ　（ＬＨ，ＯＨ）。ＭＳ−Ｅｌ：２９０　（Ｍ”、１００）；２７５　（２０）；２４３　（３０）；２２８　（１０）；１８７　（４０’）；　１５１　（３０）；１２４　（５０）；１０５　（ｔｏ）；７７　（１０）；５７　（１０）：４５　（１０）。ＩＲ（ＣＣ１＋）：ｖＣ。

１６２０ｃｍ−’；νｏＨ３０００ｃｍ−’。

水（６００ｍｌ）中のアルミナ（９０ｇ、Ｆｌｕｋａ−Ｔｙｐｅ　５０４Ｃ１酸型）およびフッ化カリウム（三水物）（６０ｇ）の懸濁液を減圧下で蒸発乾固した。残渣を１３５−１４０℃で２４時間乾燥して１２０ｇのＫＦ／Ａ＋２０．を得た。

４．４°−ビス（メチルチオ）−２−ヒドロキシベンゾフェノン（５０，５４ｇ、１７４ｍｍｏｌ）を６０℃でアセトニトリル（８００ｍ１）中に溶解した。溶液を２５℃まで急冷してＫＦ／Ａ　ｌ　２０３　（１２７ｇ）を一度に加えた。

撹拌懸濁液にブロモ吉草酸メチル（３２，４ｍ　ｌ、２２６ｍｍｏ　１）を９０時間以内に分注して加え、撹拌を１２０時間続け、１２０時間後にはＲＰ　ＨＰＬＯ分析で反応が終了していることが示唆された（ＶｙｄａｃＣ二１８カラム、７５％　ＭｅＯＨ，０，］％　ＴＦＡのイソクラチック溶出、出発化合物のＲ，＝１６分、生成物のＲｔ−７分）。懸濁液を濾過して、濾過物をアセトン（２× １０ｍｌ）で洗浄し、濾液を減圧下に濃縮すると黄色生成物を得、これをさらに精製することなく次の段階に用いた。分析用サンプルの融点二６１−６３℃（Ｅ　ｔ　ＯＨ）。Ｒ，＝０．４５　（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ−６０：　４０）　、元素分析：　Ｃ２１Ｈ２ｔＯ＋Ｓｉ　（４０４，５５）として計算値；Ｃ６２，３５％、Ｈ５，９８％、８　１５．８５％、実測値；Ｃ６２，２０％、Ｈ６，０２％、８１５．６２％ｏ’ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）：　１．２５−１．５５ｍ　（４Ｈ，２ＸＣＨ２）；　２．ｌ　５　ｔ　（２Ｈ，ＣＨｔＣＯＯ，Ｊ”＝７．５Ｈｚ）；２．５２ｓ　（３Ｈ，５ＣＨａ）；２．５３ｓ　（３Ｈ，５ＣＨ３）；３．６４ｓ　（３Ｈ，Ｃ００ＣＨｓ）；３．９０ｔ　（２Ｈ，Ｏ＊ＣＨ２，Ｊ　”＝　５　Ｈｚ）　；　６．７９ｄ　（ＩＨ，Ｊ’＝１．５Ｈｚ、芳香族）；　６．８８ｄｄ　（ＩＨ，Ｊ”＝８Ｈｚ、Ｊ’＝１．　５Ｈｚ、芳香族）；７．１８−７．２５ｍ（２Ｈ，芳香族）；　７．３６ｄ　（ＩＨ，Ｊ’＝８Ｈｚ、Ｊ”＝１．５Ｈｚ、芳香族）；７．６４−７．７１ｍ（２Ｈ，芳香族）ｏＥＩ −ＭＳ：４０４　（Ｍ”、３０）；２８９　（２０）；２２７　（４０）；１６７　（３５）；１５１　（３５）；１２４　（２０）；１１５　（１００）；８３　（２０）；５５　（４０）。

上記で生成した粗製５−［３−メチルチオ−１−オキシ−５−（４−メチルチオベンゾイル）フェニル］−吉草酸メチルエステルをジオキサン（６５０ｍ１）中に溶解し、この溶液に４Ｍ　ＮａＯＨ（１３１ｍｌ、５２２ｍｍｏ　ｌ）とメタノール（２００ｍ１）とを加えた。得られる透明溶液を室温で一夜撹拌し、次いで有機溶媒を減圧下で留去した。水溶液を酢酸エチル（Ｅ　ｔ　ＯＡ　ｃ　′）（２ｘｌＯＯｍｌ）で抽出し、水層を３０分間減圧下に置いて微量のＥｔＯＡｃを除去した。２０％　Ｈ＊　Ｓ　Ｏ４をゆっくり加える（ｐＨ２まで）ことにより生成物を沈殿させ、これを水で洗浄して減圧下にＰａ５ｓで乾燥すると、灰白色の粉末（５０，１８ｇ、出発物４，４°−ビス（メチルチオ）−２−ヒドロキシベンゾフェノンを基にして８７％）を得た。分析用サンプルの融点：１１３− １１４℃（Ｅ　ｔ　ＯＨ）。Ｒ，＝０．２２　（石油エーテル：Ｅ　ｔＯＡｃ− ６０：　４０）　。元素分析：　ＣｅｏＨ２ｆｆｉｏ＜Ｓ　ｔ　（３９０，５２）とシテ計算値；Ｃａｔ、５５％、８　５．６８％、８１６．４２％、実測値、Ｃ８１，３，５％、Ｈ５，７９％。

８１６．３９％。Ｅｌ−ＭＳ：３９０　（Ｍ”、５０）；２９０（９０）；２４３　＜５０）；２２７　（４０）：　１６７　（１００）；１５１　（７０）；１２４　（９５）；５５　（６０）。

９６％エタノール（２４０ｍ１）中の５−［３−メチルチオ−１−オキシ−５− （４−メチルチオベンゾイル）フェニル］吉草酸（１８，００ｇ、４６．１ｍｍｏｌ）、無水酢酸ナトリウム（９，４５ｇ、Ｉ１５ｍｍｏｌ）およびヒドロキシルアミン塩酸塩（９，６０ｇ、１３８ｍｍｏｌ）懸濁液を７時間加熱還流した。

室温で一夜放置した後、混合物を濾過して減圧下で濃縮すると白色固体が得られ、これをさらに精製することなく次の工程に用いた。分析用サンプルの融点：１６（３−１７０℃（Ｅ　ｔ　ＯＨ，異性体混合物）　。Ｒ，＝０．　４１　（ＣＨＣ１，：ＭｅＯＨ−１０：　］）］ｏＥＴ−ＭＳ：４０５（Ｍ’、２）；３８７　（２５）；３００　（４５）；２８８　（１００）；２４２　（３０）；２２７　（２０）；１６８　（３０）＋１５１　（４０）；１２４　（１０）；５５　（３５）。

５．５．　［２−（カルボキンレートブチル−４−オキシ’）−４−（メチルチオ）フェニル−４°　−メ升ルチオフェニル］メチルアミン４−）−ルエンスルホネ−１・ −上記のようにして生成した粗製２−（カルボＡ゛シレードブチルー４−オキシ）−４−メチル千オー、１’−メヂルヂオ＝−ペンゾフェノンオキシム（最低量４６、Ｉｒｎｍｏｌ）を、粉末亜鉛（１８，３７ｇ、４６１ｍｍｏ　ｌ）　、エタノール（８０ｍりおよび２５９６アンモニア（２４０ｍｌ）とともに５００　ｍ　ｌのシャンペン瓶に入れノ、−ｏこの懸濁液を５０℃で４８時間磁気撹拌（ −７た。濾過した後、濾過物を減圧下に濃縮して白色固体を得た。、水（３００ｍｌ）を加んた後、Ｅｔａ）（中の飽和トルエンスルホン酸（ＴｓＯＨ）溶液でｐ　Ｉ−（を７に調整し５　懸濁液を濾過しまた。灰白色の生成物を水で洗浄し、次いて約６０℃でエタノール（３００ｍｌ）中に懸濁した。、二の懸濁液にＥｔＯＨ中の飽和Ｔ　ｓ　０１（溶液を滴下して混合物が透明な橙色溶液に変わるまで加えた。冷蔵庫に４８時間放置するとピンク色の結晶が得られ、これを濾取して生成物１　（１８，２ｇ、７０％）を得た。融点：１７８−１８０°Ｃ（分解）　。ＲＩ＝０．　５８　（ｎ　ＢｕＯＨ＋　Ａ　ｃ　ＯＨ：　ＨｚＯ８０：２０：２０）、ＦＡＢ−ＭＳ：３９２　（ｍ＋１）；３７５；２７５；２２７；１３７゜元素分析：　Ｃ２７Ｈｓ　ｓ　Ｎ　Ｏｓ　Ｓ　ｓ　（５８３。

７６）として計算値、Ｃ５７，’５２％、）（５，９％、Ｎ　２．４８％、８１７．０６％、実測値、Ｃ５７，８７％、Ｈ５、６７％、Ｎ２．４０％、Ｓ１７．１］％。

［２−（カルボキシレートブチル−４−オキジ）−４−（メチルチオ）フェ二刀か一４°−メチルチオフェニル−トルエンスルホネート（２０．００ｇ、３　５．５ｒｎｍｏ　１）をメタノール（３２０ｍｌ）と水（１　６　０ｍｌ）との混合物中に懸１’ＥＩした。懸濁液を溶液が透明になるまで加熱し、次いで２０” Ｃａｔで冷却し、水（１４０ｍｌ）中の過ヨウ素酸すトリウム（１５。

１８ｇ、？＋ｍｍｏり溶液を１時間かけて滴下（７て加えた。さらに２時間撹拌を続けた。分離してくるヨウ化ナトリウムを濾過によって除去し、メタノールを減圧ドに留去した。４ＭＮａＯＨを加えて水溶液のｐ　Ｈを９に調整し、この溶液をアセトニトリル（２００ｍ））と混合（７た。混合物を濾過して沈殿した無機塩を除去し，、アセトニトリル（８０ｍｌ）中のフルオｌノニルメチルオキシカルボニルーＮ−ピドロキンスクシンイミデ−１・（Ｆｍ。

Ｃ−スクシンイミデート）（１２．９９ｇ，３８．５ｍ．ｍｏｌ）溶液を迅速に加えた。得られる均一溶液を、ＩＭ　ＮａＯＨでｐＨを８．５−９に調整しながら２５℃で撹拌した。２時間後にはもはやｐＨの変化が起こらなくなり、アセトニトリルを減圧下に除去した。残る水溶液を水（１００ｍｌ）で希釈し、エーテル（４ｘ５０ｍｌ廃棄）で抽出した。水層部分をクロロホルム（１５０ｍｌ）と混合し、水層のｐＨが２になるまで時々振盪しながらＩ　Ｍ　Ｈｒ　Ｓ　Ｏ＋を加えた。次いで水層をクロロホルム（４ｘ５０ｍｌ）で抽出した。有機層を集めて水（１００ｍｌ）で洗浄し、Ｍｇ５Ｏ＋で乾燥し、濃縮すると油状物が得られ、これをメタノール（１５０ｍ１）に溶解して冷蔵庫に一夜放置して、生成物を白色固体として得た。母液を濃縮し、酢酸エチル（５０ｍｌ）を加えて、生成物の第２部分を得た。収率１４．７５ｇ（６５％）。融点＋１３５−１３７℃。Ｒｆ　＝０．　１１　（ＣＨＣｌ＋：ＭｅＯＨ９：　ｌ）。’ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）　：　１．　３　１．　６ｍ　（４Ｈ，ＣＨ，）：　２．Ｉ　７　ｔ　（２Ｈ，ＣＨＩＣｏｏ、Ｊ＝８Ｈｚ）；　２．７５　ｓ　（３Ｈ，５ＯＣＨ＋）；　２．７６ｓ　（３Ｈ，５ＯＣＩ（＋）；　３．８　４．０５ｍ　（２Ｈ，ＯＣＨ＋）；　４，２２　ｔ（ＩＨ，Ｆｍｏｃ−ＣＨ，Ｊ＝８Ｈｚ）；　４．４−４．６ｍ　（２Ｈ，ＣＨ２Ｆｍｏ　ｃ）　；　５．　９５　ｄ　（ＩＨ，Ａ　ｒ＋ｃＨ，、Ｊ　＝９Ｈｚ）；６．２５ｄ　（ＩＨ，ＮＨ，Ｊ＝９Ｈｚ）；７．１０− ７．８０ｍ（１，５Ｈ，芳香族）。元素分析：　Ｃ，、Ｈｌ、ＮＯ，Ｓ２　（６４５，８）として計算値；Ｃ６８，１０％、Ｎ５．４６％。

Ｎ２．１７％、８９．９３％、実測値；Ｃ６８，５５％。

Ｎ５．５０％、Ｎ２．１１％、３９．８９％。

６、実施例・担体上へのハンドルの付着ジメチルホルムアミド（１０ｍ１）中のＮ−Ｆｍｏｃｌ［２−（カルボキシレートブチル−４−オキシ）−４−（メチルスルフィニル）フェニル］−４’−（メチルスルフィニル）フェニル）メチルアミン（２４５ｍｇ、０．３８ｍｍｏ　Ｉ）　、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（５２ｍｇ、０．３８ｍｍｏ　１）　、４−ジメチルアミノピリジン（５ｒｒ３ｇ、　０．　０３８ｍｍｏ　ｌ）およびＮ、Ｎ゛−ジイソプロピルカルボジイミド（５０μｌ、０．３８ｍｍｏｌ）を、ｐ−メチルベンズヒドリルアミン（ｐＭＢＨＡ）樹脂（２００ｍｇ、　０．０７６ｍｍｏｌ）　（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　１ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ、ＫＹ）に加えて懸濁液を一夜振盪した。樹脂をジメチルホルムアミド（５ｘ５　ｍ　ｌ　）で洗浄してジメチルホルムアミド（ｌ　０ｍ１）中の酢酸（４６μＬ　Ｏ，７６ｍｍｏｌ）およびＮ、Ｎ’　−ジイソプロピルカルボジイミド（１１９μｍ、０．７６ｍｍｏ　１）溶液と５時間反応させて残っている遊離のアミノ基をアセチル化した。ジメチルホルムアミド（５ｘ５ｍｌ）、ジクロロメタン（５ｘ　５　ｍ　１）およびメタノール（５ｘ５ｍｌ）で洗浄した後、樹脂を減圧下で乾燥した。分光測光的に概算した置換度は０．３４ｍｍｏｌ／上記のようにして製造した樹脂（１３２ｍｇ）を用いた。一般的合成法は以下の通りである・ハンドル上のＦｍｏｃ保護基をピペリジン／ジメチルホルムアミド（１：１、ｖ／ｖ、１ｘ３分、１ｘｌＯ分）で除去し、次いでジメチルホルムアミドで洗浄した。Ｂｏｃ保護基はトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン／アニソール（５０：　５０　：　ｉ　ｌｘ３分、１ｘ２５分）の混合物で除去し、次いでジクロロメタンで洗浄した。Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール活性エステルをすべての合成に用いた（１０分、予備活性化）。Ｇｌｙ、Ｖａｌおよび１１ｅアミノ酸の場合にはＢｏｃ保護基を用いた。その他の場合には、Ｆｍｏｃ保護基を用いた。

ブロモフェノールブルーてカップリングをモニターした（Ｋｒｃｈｎａｋ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８８．　Ｃｏ１１ｅｃｔ、　Ｃｚｅｃｈ、　Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　５３：２５４２）。

担体からの最終的開裂はＩＭのトリメチルシリルプロミド／チオアニソール／トリフルオロ酢酸の混合物（２時間、０°Ｃ）を用いて行い、次いで水で希釈してジエチルエーテルで抽出した。粗ペプチドを９５％の収率（４３ｍｇ）で得て、これをセファデックスＧ２５上で１Ｍ酢酸を溶出液として用いて精製した。調製用逆相ＨＰＬＣを行って精製ペプチドを６２％の収率（２６，６ｍｇ）で得た。

ＦＡＢ−ＭＳ：１０５６　（Ｍ＋１．）、９４２．８７１．８１４．７１５．６５８．５４５．４７４．３９１．２４５．２１７．１２０ｏアミノ酸分析：Ｔｈｒ　（１，００）、Ｇｉｎ　（１，０２）、Ｐｒｏ　（１，９７）、Ｇｌｙ　（２，００）、Ａｌａ（］、、９５）、Ｖａｌ　（０，９７）、ｌｉｅ　（０，９４）、Ｐｈ実施例６と同様にして製造したｐＭＢＨＡ樹脂（４００ｍｇ、０．０５２ｍｍｏ　Ｉ）を用いてＣ’−０ＸＴを合成した。各カップリングの後、残っている遊離のアミノ基を酢酸／Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール／Ｎ、Ｎ’　 −ジイソプロピルカルボジイミド／Ｎ−メチルイミダゾールの混合物でアセチル化した。用いた一般的合成法は上記８．１．で記載したものと同様である。用いたアミノ酸はすべてＦｍｏｃ−誘導体であった。アミノ酸分析＝Ａｓｐ　（０，９８）、Ｇｌｕ　（１，００）、Ｐｒｏ　（０，９４）、Ｇｌｙ　（１，１３）、Ｃｙｔｈ　（０，５４）、ｌｉｅ　（０，９０）、Ｌｅｕ　（１，０４）、Ｔｙｒ　（０，７５）。

上記で製造したペプチジル樹脂（上記セクション７．２．）（１００ｍｇ、０．Ｏｌ　２ｍｍｏ　１）をジクロロメタン（３ｘ５ｍｌ）で洗浄し、ｔｅｒｔ−ブチル保護基をトリフルオロ酢酸／ジクロロメタン／アニソールの混合物（５０：５０：ｌ、１ｘ３分、１ｘ２５分）で除去し、次いてジクロロメタン（５ｘ５ｍｌ）で洗浄し、７％　Ｎ、Ｎ’　−シイソイプロピルカルボジイミド／ジクロロメタンで中和し、ジクロロメタン（３ｘ５ｍｌ）で洗浄し、最後にＮ、　Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｘ５ｍｌ）で洗浄した。環化はＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール／Ｎ、Ｎ’　−シイソイプロピルカルボジイミド／Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド混合物を用いて担体上で２４時間かけて行い、環状の全てが保護されたペプチドを得た。最終的開裂は５％のｍ−クレゾールを含むＩＭのトリメチルシリルプロミド／チオアニソール／トリフルオロ酢酸混合物を用いて行った（２時間、０℃）。ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させ、濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、セファデックスｇ２５　（１Ｍ酢酸）上で精製して粗生成物１０．６ｍｇ　（８９％）を得て、これを調製用ＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｖｙｄａｃ　Ｃｌ８）上で精製して精製Ｃ’−０ＸＴを４．５ｍｇ（３８％）得た。アミノ酸分析：Ａｓｐ　（０，９９）、Ｇｌｕ　（１，００）、Ｐｒｏ　（０，９５）、Ｇｌｙ　（０，９９）、ｃｙｔｈ（１，０２）、Ｉ　ｌｅ　（０，９６）、Ｌｅｕ　（１，１０）、　Ｔｙｒ　（０，９３）、ＭＳ　（ＦＡＢ）＝９９０　（Ｍ＋Ｈ）。

８、実施例：　Ｃ’−０ＸＴ前駆体の２段階脱保護上記で製造したペプチジル− 樹脂（上記セクション７、　２．　）（１００ｍｇ、０．０１２ｍｍｏ　ｌ）を２５℃で１Ｍトリメチルシリルクロリド／トリフェニルホスフィン／テトラヒドロフランの混合物（２ｍｌ）で２時間処理した。次いで樹脂をジクロロメタン（５ｘ５ｍｌ）で洗浄し、２５℃、３０分でペプチドをトリフルオロ酢酸／ｍ−クレゾール混合物（９５：５）（２，５ｍ１）を用いて樹脂から開裂した。蒸発乾固した後、ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させることにより粉末を得て、これをセファデックスＧ２５（１Ｍ酢酸）上で精製し、次いで調製用ＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｖｙｄａｃ　Ｃ１８）によって精製して精製Ｈ２Ｎ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ　（ＣＩＺ−Ａｂｕ−ＯＨ）−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｎｌ２を６．５ｍｇ（４３％）得た。アミノ酸分析：Ａｓｐ　（１，０４）、Ｇｌｕ　（１，０４）。

Ｐｒｏ　（０，９５）、Ｇｌｙ　（１，０３）、Ｃｙｔｈ　（０，９４）、Ｉｌｅ　（０，８８）、Ｌｅｕ　（１，１１）、Ｔｙｒ　（０，８５）。ＭＳ　（ＦＡＢ）＝　Ｉ　ｌ　７６　（Ｍ十Ｈ）。

本発明は本明細書に記載する特定の態様にその範囲を限定されるものではない。

実際、本明細書に記載するものに加えて本発明の各種修飾が上記の記載ならびに添付の図から当業者には明らかであろう。このような修飾は付属の請求の範囲に含まれる。

本明細書に引用する各種文献ならびにその記載は参照としてそのすべてを本明細書中に包含される。

国際調査報告フロントページの続きＣ０７Ｋ　７１０６　ＺＮＡ　Ｚ　８３１８−４Ｈ／／　Ｃ０７Ｋ　９９：００（７２）発明者　パテツク、マーセルアメリカ合衆国　８５７３７　アリシナ州　チＩ

Claims

【特許請求の範囲】

１．一般式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、ａは１−３であり、Ｘ１は〔Ｓ〕Ｒ１であるか、またはＸ１はＺであって、Ｘ１基は第１ベンゼン環のオルトまたはパラ位にあり、そしてＲ１はアルキル基である；ｂは１−３であり、Ｘ２は〔Ｓ〕Ｒ２であって、Ｘ２基は第２ベンゼン環のオルトまたはパラ位にあり、そしてＲ２はアルキル基である；ＺはＲ３、ＯＲ３または〔Ｓ〕Ｒ３であって、Ｘ１がＺでない場合にＸ１によって占められていない任意の位置にあり、そしてＲ３は固相担体へカップリングするための反応性官能基を含むアルキル基であり、ここでＸ１がＺである場合、Ｚはオルトまたはパラ位にある〔Ｓ〕Ｒ３である；ｃは０または１で、ｄは０または１であり、Ｙ基はＸ１またはＸ２によって占められていないオルトまたはパラ位にあり、ＹはＯＲ４で、Ｒ４はアルキル基である；〔Ｓ〕は−Ｓ−、−ＳＯ−または−ＳＯ２−である；そしてＤはＨ、保護基またはＮα−保護アシルである〕で表されるペプチド合成用のハンドル。
２．ａが１で、Ｘ１がパラ位にあり、ｂが１で、Ｘ２がパラ位にある、請求項１記載のハンドル。
３．Ｚがオルト位にあるＯＲ３である、請求項１記載のハンドル。
４．〔Ｓ〕が−Ｓ−である、請求項１記載のハンドル。
５．〔Ｓ〕が−ＳＯ−または−ＳＯ２−である、請求項１記載のハンドル。
６．Ｐが保護基である、請求項１記載のハンドル。
７．ｃが１で、ｄが０で、Ｙがオルト位にある、請求項１記載のハンドル。
８．ｃが０で、ｄが１で、Ｙがオルト位にある、請求項１記載のハンドル。
９．一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｚは〔Ｓ〕Ｒ４またはＯＲ４で、Ｒ４は固相担体へカップリングするための反応性官能基を含むアルキル基であり；Ｒ１はアルキル基で、〔Ｓ〕は−Ｓ −、−ＳＯ−または−ＳＯ２−であり；そしてＤはＨ、保護基またはＮα−保護アシルアミンである〕で表されるペプチド合成用のハンドル。
１０．ＺがＯＲ４である、請求項９記載のハンドル。
１１．請求項１記載のハンドルを含む固相担体。
１２．請求項９記載のハンドルを含む固相担体。
１３．次の工程：（ａ）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、ａは１で、Ｘ１はオルトまたはパラ位にあり、あるいはａは２で、Ｘ１はオルトおよびパラ位にあり、Ｘは〔Ｓ〕Ｒ１で、Ｒ１はアルキル基であり、そして〔Ｓ〕は−Ｓ−、−ＳＯ−または−ＳＯ２−である〕の安息香酸を活性化すること；（ｂ）工程（ａ）で製造した塩化ベンゾイルを式：▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、ｂは０−３で、Ｘ２は〔Ｓ〕Ｒ２であるが、ただしｂが１より大である場合、Ｘ２は互いに対してパラまたはオルトであり、Ｒ２はアルキル基であり、そして〔Ｓ〕は−Ｓ−、−ＳＯ−または−ＳＯ２−である〕の置換ベンゼンと反応させること；（ｃ）工程（ｂ）の混合物を２モル当量のＡｌＣｌ３で処理すること；（ｄ）工程（ｃ）の生成物の−〇Ｈ基をアルキル化すること；（ｅ）工程（ｄ）の生成物をヒドロキシルアミンと反応させてオキシムを生成すること；および（ｆ）該オキシムを還元してベンズヒドリルアミンを生成すること；から成るペプチド合成用ハンドルの製造方法。
１４．次の工程：（ｇ）水溶液中で約ｐＨ９において工程（ｆ）のべンズヒドリルアミンを活性化ＦＭＯＣと反応させること；をさらに含む、請求項１３記載の方法。
１５．請求項１または９記載のハンドルを樹脂に結合させることから成るペプチド合成用樹脂の製造方法。
１６．樹脂−ハンドル複合体を酸化することをさらに含む、請求項１５記載の方法。
１７．次の工程：（ａ）請求項１または９記載の脱保護された酸化ハンドルに活性化アミノ酸をカップリングさせること；（ｂ）ハンドル−アミノ酸複合体を還元すること；および（ｃ）ペプチドを開裂し、脱保護すること；から成るペプチド合成法。
１８．ペプチドを脱保護する工程が還元工程（ｂ）に先行する、請求項１７記載の方法。
１９．還元工程（ｂ）に先立って１個より多い活性化アミノ酸がペプチドにカップリングされる、請求項１７記載の方法。
２０．脱保護工程に先立って１個より多い活性化アミノ酸がペプチドにカップリングされる、請求項１８記載の方法。