JPH06503557A - 抗ガストリン活性を有するグルタミン酸、アスパラギン酸及び２−アミノアジピン酸のアミド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗ガストリン活性を有するグルタミン酸、アスパラギン酸及び２−アミノアジピ ン酸のアミド誘導体 本発明は、ガストリン又はそれと関連する他のペプチドに対するアンタゴニスト 活性を有する、以下の式で表すことのできる化合物に関する・［式中、ｒは１− ３であり、 Ｒ１は、−又は二置換フェニル基であってその置換基が塩素、直鎖及び分枝鎖状 Ｃ，−Ｃ，アルキル基、ンアノ、ニトロ、メトキシ及びトリフルオロメチル基の 中から選ばれるものであるフェニル基、２（β）−ナフチル基、又はメチル及び 塩素によって−又は二置換されていることがあるフリル、チオフェニル、ピロリ ル、ピリジニル及びピリジニル−Ｎ−オキシド基、インドリル（２−又は３−イ ル）、チオナフチル（２−又は３−イル）、ベンゾフラニル（２−又は３−イル ）、キノリニル（２−又は３−イル）、及びイソキノリニル（３−イル）基の中 から選ばれる、窒素、酸素又はイオウなどのへテロ原子を１つ含む単環式及び二 環式へテロ環基であり、 Ｒ２は、以下の（１）−（５）の中から選ばれる基である：［式中、ｍ及びｎは 個別に１−３の間の値を取ることができるが、形成される環は少なくとも５個の 原子から構成されるものであり、Ｘ及びＹは個別に、（ＣＨ−Ｒ３）ｚ、（ＣＨ ＝ＣＨ）、ＴＣＨ２及びＣＨ，Ｔの中から選ばれる基であり、 ここに、Ｔは０、Ｓ、ＮＨ−Ｃ（０）、又はＣ（○）−ＮＨであり、Ｒ３は（１ 別１：、Ｈ，ＣＨ３、Ｃ２Ｈ，、ＯＣＨ，、ＯＣ，Ｈ，、ＣＨｚＯＨ及びＯＨの 中から選ばれる基であり、 ２はＯ−３の値を取ることができるが、形成される環は少な（とも３個の原子か ら構成されるものである〕 で示されるヘテロ環スピロ基、 ［式中、ｍＳｎ、Ｘ、Ｙ及びＲ３は上記（１）における定義と同意義であり、Ｑ はＨ及びＣＨ，の中から個別に選ぶことのできる基であるコで示される二環式ス ピロアミノ基、 ［式中、ｍ及びｎは１−３の中から個別に選ぶことのできる値であり、Ｘ、Ｙ及 びＲ３は上記（１）における定義と同意義である］で示される二環式アミノ基（ 縮合）、 ４）式。

［式中、ｍ及びｎは１−３の中から個別に選ぶことのできる値であり、Ｘ、ＹＳ Ｒ３及びＱは上記（１）における定義と同意義である］で示される二環式アミノ 基（縮合）、 ５）式： ％式％） ［式中、Ｗは叶２であり、ＬはＨ１メチル、又はメトキシ基であり、Ａｄはアダ マンチル（１−又は２−イル）基であるコで示されるアダマンチル・アルキルア ミノ基］。

請求の範囲に記載している化合物の立体化学は、式（１）中、星印で示してしＸ る不斉中心においてラセミ型（Ｒ，Ｓ）であることができ、又は好ましく（マ右 回り（Ｒ）であり、モしてｒは２が好ましく、Ｒ１は、３−クロロフェニル及び ３゜５−ジクロロフェニルの中から選ばれる基が好ましく、Ｒ２は８−アザスピ ロ［４，５コデカンー８−イル及び１−アダマンチル−２−アミノエタンの中力 ）ら選（ぼれる基が好ましい。

本発明の化合物は、ガストリン（「リトルガストリン」又１；！Ｇ−１７）及び 、その生物学的に活性な末端ペプチド配列であるペンタガスト１ノン番二対して 強力なアンタゴニスト活性を示す。

ガストリンは、腔及び十二指腸の粘膜細胞から分泌されるポ１ノペプチドホルモ ンであり、その分泌は特に迷走神経の興奮による神経メカニズムによって誘導さ れる。

ガストリンが分泌されれば、主として底粘液に位置する聖夜細胞ヘガストリンは 血流を介して到達し、次いで細胞膜に結合することによってそのレセプターを活 性化させる。この活性化は塩酸の生成反応を開始させ、それを胃腔に分泌させる 。

この系が過剰に反応すると、胃酸が過剰分泌され、それは生物に有害作用を及ぼ す場合がある。しかし、その作用は特定のアンタゴニストの使用によって弱める ことができる。

本発明の化合物は、試験した種々の動物種のインビボにおいて、用量依存的にペ ンタガストリンによって誘導される分泌刺激を阻害する、酸分泌に対する高レベ ルの活性を有している。この活性はカルバコール又はヒスタミンによって誘導さ れる分泌を阻害しないので、特異的な活性である。

高ガストリン血症状態（ｈｙｐｅｒｇａｓｔｒｉｎａｅｍｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉ ｏｎ）によって誘導される過剰ガストリン分泌が原因の潰瘍又は胃−十二指腸炎 、シーリンガ−・エリソン症候群を処置及び予防し、又はガストリン活性におけ る酸分泌の刺激を阻害するのが有益である高ガストリン血症によって活性化され るある種の腫瘍を処置するうえで好都合に使用できる。

本発明化合物は、ＣＮＳレベルでのガストリン結合性をインビトロにおいて阻害 するインヒビターとして役立つという重要な活性に基づき、ガストリン又は例え ばコレシストキニン（ＣＣＫ）などのガストリンと関連する他の生物活性ペプチ ドの生理学的ニューロンレベルでの不均衡が原因であるある種の精神病にも有効 である可能性も示唆された。

Ｒ１における適切な置換基によって特に左右されるが、本発明化合物の中には、 その顕著な抗−ＣＣＫ活性が抗ガストリン活性と相俟って、胆管ジスキネジー、 大腸炎、膵臓炎などのヒトの疾患を処置し、又は例えば白内障の外科手術時に又 は慢性の眼炎症によって誘導される縮瞳を処置し予防するうえで特に適切なもの がある。

不斉中心がＲ（右）型である本発明の化合物を製造する方法は、以下に示す工程 によって特徴付けられる。

（ａ）　不活性無水溶媒中、−１５℃から１５℃の温度にて、Ｎ−カルボベンズ オキシ−Ｄ−グルタミン酸のγ−ペンシルエステルを式：Ｈ−Ｒ２（式中　Ｒ２ は前記と同１！義）で示されるアミン化合物と混合無水物法によって反応させ、 式（Ｉ［［）で示される化合物を製造しく以下の反応式を参照）、（ｂ）　式（ ＩＩＩ）で示される化合物を不活性溶媒中に溶解し、それを、触媒的に活性な量 の水素添加触媒の存在下、環境温度及び気圧下に、単一工程によって脱ベンノル 化して脱カルボベンズオキシル化し、式（ｎ）で示される誘導体を製造しく以下 の反応式を参照）、 （Ｃ）　ノヨソテンーバウマン条件下に式（Ｉ［）で示される誘導体を当量の式 、Ｒ１−Ｃ０ＣＩ（ここに、Ｒ１は前記の定義と同意義）で示されるアシル・ク ロリド体と０−１５℃の温度で反応させ、得られた反応塊から式（Ｉ）で示され るアミド化合物を回収する。

本発明方法の一連の工程は以下の反応式によって図式化される：（ｎ）　（１） （零）Ｒ型（右回り）の不斉中心 アミド化工程（ａ）は、好ましくは一１５℃から一１０℃の温度にて１力＼ら２ ４時間、好ましくは６時間、各反応体の化学量論的比率で行う。この反応を行う １；好ましい溶媒はクロロホルム、ンオキサン、又はテトラヒドロフランである 。

水素添加工程（ｂ）は好ましくは、化合物（■）１モル当たり０．０２から０． ００１原子（炭素の支持下）の存在下、水素気流を１から１２時間、好ましく（ マロ時間存在させて環境温度及び圧力下に行う。アシル化工程（ｃ）は好ましく （マ、約５℃の温度にて１から２４時間、好ましくは１２時間行う。

本発明をさらに詳細に説明するため、以下に実施例を記載する。

実施例１ 刃顛七辺りへ４±セニぢＬづ二」３び囚臼±Ｌメ！た二影ゴ凹二±２土裕乞江！ ＝ペソ止ゼニゼＩ（情響に化合物Ａ　＋　） Ｎ−カルボベンズオキシ−Ｄ−グルタミン酸のγ−ベンジルエステルｇ（領　１ モル）を無水テトラヒドロフラン２５０冨ｌ中に溶解し、得られｔこ溶液を一１ ０℃に冷却し、撹拌下にトリエチルアミン１０．　１ｇ　（０，１モル）を加え た。次ぎに、−１０℃のままでクロロギ酸エチル１０．　８ｇ　（０，１モル） を加えた。温度を一１０℃に２０分間保持し、次いで８−アザスピロ［４，５］ デカン１３．　９ｇ　（０，１モル）を加えた。混合物の温度を環境温度に昇温 させつつ、得られた混合物をさらに６時間撹拌した。次に、この混合物を蒸発乾 固し、得られた残留物を酢酸エチル中に取った。

次いで、２Ｎ塩酸、重炭酸ナトリウム、最後に水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で 乾熾した。少量になるまで濃縮し、油状残留物を得た。このようにして得た粗製 の生成物は、さらに精製することな（以後の工程に直接使用できる程に純粋であ った。

ＴＬＣ：　Ｒｆｆ［０，５９（ベンゼン−酢酸エチル　７／３　：　ｖ／ｖ）生 成物　３９．　４ｇ、収率８０％。

以下の式（ｍ）で示されるすべての化合物は上記と同じ方法によって合成した（ 上記の反応式を参照）。以下の表Ａには、得られた化合物の幾つかをそれらの同 定特性の幾つかと共に列挙している。

！−八 化合物　Ｒ２組成式　融点（℃）　ＴＬＣ（Ｒｆ値）ヘンヤンー酢酸エチル（７ ／３：ｖ／ｖ）Ａｔ　８−７ザスピ０　［４，５］デカン−８−イルＣ２９Ｈ３ ６Ｎ２０５　油状物　０．５９Ａ３　２−７ｆ、７．ヒｏ［４，４コ／　＋　ン −２（ルＣ２８Ｈ３４Ｎ２０５　油状物０．３９Ａ４　２−７ザスピ０　［４， ５］デカン−２−イルＣ２９＋１３６Ｎ２０５　油状物　０．４１Ａ５　３−７ ミ／−スピロ［５，５］ウンデカンＣ３１Ｂ４ＯＮ２０５　ｍ状物０．６６Ａ７ 　イソキノリン−２−イル−デカヒドロ　Ｃ２９Ｈ３６Ｎ２０５　油状物　０． ４８Ａｌｌｔ　１−７ダマンチルー２−７ミノーエタンＣ３２Ｈ４ＯＮ２０５　 ７ロー７７　０．６６実施例２ （Ｒ）４−アミノ−５−（８−アザスピロ［４，５］デカン−８−イル）−５− オキソペンタン酸の製造（表Ｂ中、化合物Ｂ、）（Ｒ）４−カルポベンズオキシ ーアミノ−５−（８−アザスピロ［４，５］デカン−８−イル−５−オキソペン タン酸のベンジルエステル（化合物Ａｌ）４９゜２ｇ（０，１モル）をメタノー ル５００Ｉｌ中に溶解し、それに１０％パラジウム炭素１ｇを加え、環境１度に ６時間水素気流で水素添加した。触媒を濾別し、メタノールを減圧蒸留した。得 られた油状残留物（分子量２８６．４）はアセトンに取ると結晶化し、それを濾 別して、クロマトグラフィー純度が９５％以上の化合物を入手した。

ＴＬＣ：　Ｒｆ値　０．　５４　（ｎ−ブタノール−酢酸−水　５／２／２　： 　ｖ／Ｖ） 融点：１７４−１７５℃ 旋光度　（α）２°Ｄ＝−１０’　（メタノール中、ｃ＝３％）生成物　２３． ６ｇｏ収率８８％。

以下の式（ｎ）で示されるすべての化合物は上記と同じ方法によって合成した（ 反応式を参照）。

以下の表Ｂにて、得られた化合物を幾つかの同定特性と共に列挙している。

実施例３ ４−　［３−（クロロベンゾイル）−アミノ］−５−（８−アザスピロ［４，５ ］デカン−８−イル）−５−オキソペンタン酸（Ｒ＝右回り）の製造（表Ｃ中、 化合物Ｃ） （Ｒ）４−アミノ−５−（８−アザスピロ［４，５］デカン−８−イル）−５− オキソペンタン酸（化合物Ｂｌ）２６．８ｇ　（領　１モル）を水３０ＯＮＥ中 に懸濁し、次いで炭酸ナトリウム１０．　６ｇ　（０，１モル）を添加して撹拌 下に溶解した。次ぎに、撹拌下、０℃において３−クロロベンゾイル・クロリド １７゜５ｇ（０，１モル）を１時間かけて加えた。

得られた混合物を１２時間反応させた。

次いで、希塩酸によってその混合物をコンゴーレッドになるまで酸性にし、生成 された沈殿物を濾別して、アセトニトリルにより結晶化した。

融点＋１４５−１４６℃　ＴＬＣ［塩化メチレン−エタノール　１：１（ｖ／ｖ ）］：Ｒｆ値　０．８１ 生成物　３３．　４ｇ。

組成式：Ｃ２、Ｈ２７ＣＩ　Ｎｚ０４（分子量４０６．９）収率　８２％ 旋光度、（α）”Ｄ＝−１５°　（メタノール中、ｃ＝３．０％）式（１）で示 されるすべての化合物は同じ方法によって合成した（上記の反応式を参照）。

以下の表Ｃには、このようにして得られた化合物の幾つかの同定特性と、得られ た収率（方法全体として計算）とを列挙している。

固定相として０ＤＳ−Ｃ−１８カラムを、移動相として０．０２５Ｍリン酸緩衝 液（ｐＨ６，５）−アセトニトリルを、分離溶媒としてＬ−フェニルアラニンア ミドを使用してＨＰＬＣ分析を行い、上記の立体保存的な合成方法によって得ら れた化合物の光学純度を確認した。

表Ｃに記載した化合物はすべてについて、光学純度が９５％以上であることが判 明した。例えば、Ｃ１化合物は上記の条件下に保持時間１１．４５分、及び光学 純度９９．６％を有していた。参考のため、Ｓ−シリーズ（左回り）誘導体であ りＣ１化合物の光学的反対物である化合物Ｃ３２の保持時間を示せば、上記と同 じ実験条件下で１０．８分である。

不斉中心を有する本発明の誘導体をラセミ形態で合成する方法は、以下の工程に よって特徴付けられる： て製造される式。

［式中、ｒ及びＲ１は上記と同意義である］で示される分子内無水物を、水、酢 酸エチル、ジオキサン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、又はこれらの混 液などの溶媒中、−２０℃から３０℃の温度にて式：Ｈ−Ｒ２（ここに、Ｒ２は 上記と同意義である）で示されるアミン化合物とモル比１−５で反応させ、次い で分別結晶化法又は他の通常の方法によって、得られた反応塊から式（１）で示 される化合物を回収する。

本発明をさらに詳細に説明するため、以下に実施例を記載する。

（Ｄ、Ｌ）３−クロロベンゾイル・グルタミン酸無水物２６．　８ｇ　（０，１ モル）を反応容器に入れ、水１００ｗ１中に懸濁した。

得られた懸濁液を約５℃に冷却し、１．４−ジチア−８−アザスピロ［４，５］ デカン−８−イル３５ｇ　（０，２モル）を約１５分かけて滴加した。この混合 物を同温度で３時間反応させ、氷酢酸で酸性にする。次いで、濾過し、中性にな るまで水で洗浄し、乾燥した。このようにして得られた粗生成物をアセトニトリ ルから結晶化した。これにより、生成物３２．３ｇを得た。

組成式：　Ｃ＋５ＨｚｓＣＩＮ２０４Ｓｚ　（分子量４４２．８）　収率　７３ ％融点　１６９−１７０℃　ＴＬＣ（イソアミル・アルコール−アセトン−水５ ／２／１−Ｖ／Ｖ）・　Ｒｆ値　０．７９このようにして合成した化合物の幾つ かを以下の表りに例示し、さらにそれらの同定特性と収率とを列挙する。

次に、インビボ及びインビトロの両方における一連の薬理試験によって本発明化 合物の薬理活性、特に抗ガストリン機構によって行われる酸分泌に対する活性の 分析を行ったので、以下にそれを説明する。

麻酔ラットにおける抗分泌活性 ウレタンで麻酔した体重的２００ｇの雄性ラットを使用し、ラットでの抗分泌活 性を調べた。胃酸分泌はペンタガストリンによって刺激させた。Ｋ、　Ｓ、　Ｌ ａｉ　［Ｇｕｔ５、　（１９６４）、３２７−３４１］の方法を若干の修正を加 えて行った。

気管切開の後、食道と十二指腸にカニユーレを挿入した。０．２５ｍＭ水酸化ナ トリウムの微温溶液（３７℃）を潅流させ、それを蛎動ポンプによって１菖ｌ／ 分の一定流速にて胃へ通した。２０分間安定化させた後、生理溶液に溶解した刺 激物質を投与量３０μｇ／ｋｇ／時で１２０分潅流させた（容量０．９５ｗ１／ 時）。

６０分（基礎刺激）の潅流の後、試験する本発明生成物を静脈内ポーラス（１゜ ■、）として投与し、刺激物質の潅流をさらに６０分続行した。酸分泌を時間の 関数として連続的に記録した。

本発明生成物の活性は、生成物投与後に分泌される酸度の減少パーセンテイジ、 即ちペンタガストリンのみを存在させた際の最初の６０分間の採取にて測定され る基準酸度から減少するその減少％として算定した。

試験するアンタゴニスト化合物を種々の用量で投与し、ＩＤ５０、即ちペンタガ ストリンの効果を５０％抑制できる用量（ｍｇ／ｋｇ　１．Ｖ、）を計算できる ようにした。

このようにして得られた結果を以下の表（表１）に示すが、ここでは、３０μｇ ／ｋｇ／時のペンタガストリンで刺激した際の化合物の活性を、ＩＤ５０として 表している。

抗ガストリン活性は、グルタミン酸（ｒ＝２）誘導体及びＲ＋が３−クロロフェ ニル又は３．５−ジクロロフェニルである場合及びアミン基Ｒ２がアサスピロ［ ４５コー８−イル基又は２−アミノ−１−アダマンチルエチル基（化合物Ｃ１、 Ｃ５、Ｃ３０及びＣ３１を参照）の場合に、特に良好であった。この実験モデル では、本発明化合物の最も良好な活性は参考抗ガストリン化合物であるプロゲル ミド（ｐｒｏｇｌｕａ＋１ｄｅ）よりも３０倍活性であることに留意すべきであ る。さらに留意すべき点は、ＣＣＫアンタゴニストであるロルグルミド（ｌｏｒ ｇｌｕｍｉｄｅ）はＣ１化合物のＳンリーズ光学反対物であるＣ３２化合物と同 様に用量１００ｍｇ／ｋｇまで完全に不活性である点であり、このことは興味深 いことに抗ガストリン活性が立体特異的であることを示している。ガストリン分 泌に対する本発明化合物の活性は、それらの抗ガストリン活性と特異的に関連し ている。実際、上記の実験モデルでは、本発明化合物は刺激物質としてカルバコ ール（３０μｇ／ｋｇ／時）又はヒスタミン（２，８ｍｇ／ｋｇ／時）を使用し た場合には完全に不活性であったので、本発明化合物は抗コリン作働活性あるい は抗ヒスタミン（抗Ｈｚ）活性のいずれも有していない。本発明化合物の低毒性 を考慮すれば、本化合物の活性はより際立ってくる。例えば、化合物Ｃ５はラッ トにおいて約４００＋＋ｇ／ｋｇのＬＤ５０　１Ｖを有している。従って、この 場合の平均致死量（ＬＤ５０）は、同じ方法で投与する抗ガストリン用量（ＩＤ ５０）よりも約２５倍高い。

覚醒イヌにおける抗分泌活性 ラットでの抗ガストリン活性を確かめるため、最も活性な請求の範囲記載の化合 物の幾つかを第２の動物種、イヌにて試験し、種特異的な現象である可能性を排 除した。

約１０ｋｇ体重の雄性ピーグル大を使用し、比較的大きな弯曲レベルの胃痩管術 を腔領域近（に施し、長さ５　ｃｍ、幅２ｃｍのカニユーレ鋼を挿入し、青汁を 体外から採取できるようにした。手術から回復させるため１力月おき、適切に条 件調整した後、用量３μｇ／ｋｇ／時のペンタガストリンを用いて動物を処置し た。生理的溶液にこの刺激物質を溶解し、それを１８０分間、速度１．　９ｍｌ ／時で大腿静脈に潅流させた。６０分間潅流させた後（基準刺激）、試験する生 成物を生理的溶液（１＊Ｉ／ｋｇ）に溶解し、それを反対側の静脈にポーラスと して同時投与し、刺激物質の潅流をさらに１２０分間続行した。酸分泌を時間の 関数として連続して記録した。

生成物の活性は、ポーラスとしての生成物投与後０−６０分及び６０−１２０分 それぞれについて、ペンタガストリンのみを存在させた際の最初の６０分間の採 取にて測定される基準酸度と比較し、生成物投与後に分泌される酸度が減少する 減少％として算定した。

試験する化合物（Ｃ−１及びＣ−５）を種々の用量で投与し、ＩＤ５０、即ちペ ンタガストリンの効果を５０％抑制できる用量（＋＋ｇ／ｋｇ　１．Ｖ、）を計 算できるようにした。

このようにして得られた結果を以下の表（表２）に示す。ここでは、３μｇ／ｋ ｇ／時のペンタガストリンでの刺激下に投与する種々の用量についての、基準（ ４匹の動物から入手した値に基づいて計算した平均±標準偏差）からの変動％、 及びＩＤ５０として計算した化合物の活性、及び実験データに基づいて計算した 回帰線の相関係数を表している。

表　２：　前層管を有する覚醒イヌにおける、ペンタガストリン（３０μｇ　／ ｋｇ／時）によって誘発される胃酸分泌に対するアンタゴニスト活性（■１０　 −３８．９±７．９　−１４Ｊ±８．５２０　−４９．５±４．２　−２６．１ ±６．４３０　−６１．１±１２．５　−５６．７±１９．５４０　−６３．４ ±１１．５　−４３．４±１０．３６０　−７４．２±５．６　−７９．９±１ ，６ＩＤ５０ｍｇ／Ｋｇ−１９，７ＩＤ５０ｍｇ／Ｋｇ＝３１．５１０　−５９ ．５±５．０　−３１．９±１．３３０　−６７．８±４．８　−４８．１±１ ．７ＩＤ５０　ｍｇ／Ｋｇ＝８．９　ＩＤ５０　ｍｇ／Ｋｇ＝３２．５化合物Ｃ −１及びＣ−５はまた、ペンタガストリンによって誘導されるイヌにおける胃酸 分泌の強力なインヒビターであることが示されている。実際、これらの化合物は ポーラスとして投与した後、第１の時間で用量依存的に散出力を阻害し、化合物 Ｃ−１及びＣ−５のＩＤ５０はそれぞれ約２０及び１０票ｇ／ｋｇであった。

これらの活性は、ポーラスの静脈投与後の第２の時間（１２０−１８０分間の時 間）でさえも顕著に保持されており、ＩＤ５０は固化合物共に約３０ｍｇ／ｋｇ であった。

マウスの大脳皮質膜におけるガストリンレセプター部位へのペンタガストリンの 結合性を阻害する本発明化合物の幾つかのその阻害能を評価した。リガンドとし てトリチル化ペンタガストリン［β−アラニル−３−３Ｈ（Ｎ）］を使用した。

マウスの皮質組織を２０容量のトリス緩衝液（ｐＨ７，７）中でホモジナイズし た（冷状態）。洗浄し、遠心分離した後、得られた最終ペレットを、特にＴＲｌ ５．ＢＳＡ及びバシトラシン（Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ）を含有している２０容量 の結合緩衝液中に再懸濁した。次いで、このようにして得られた膜０．４冨ｎを 放射活性トレーサー及び試験化合物と共に３７℃で４０分間インキュベートした 。

上清の液を遠心によって除去した後、ペレットに関連する放射活性を液体シンチ レータ−（β−カウンター）によって測定した。１０−５Ｍペンタガストリンが 存在、及び存在しない場合の結合性は、特異的結合性が相違していた。

得られた結果を以下の表３に示すが、ここでは、試験した化合物のＩＣ５０、即 ちトリチル化ペンタガストリンの５０％をレセプターから解離させることのでき るアンタゴニストの濃度（モル／リットル）を示している。

本発明の化合物の中には、マウスの皮質膜のレセプターへのペンタガストリンの 結合を強力に阻害するインヒビターであるものがあると、表３のデータから認め ることができる。実際、最も活性な化合物は、特異的アンタゴニスト（ペンタガ ストリン）よりも約１０倍低く、ＣＣＫ−アンタゴニストであるロルグルミドよ りも約１００倍強力である。Ｒシリーズに属する誘導体（例えば、Ｃ−１化合物 ）は、相当するＳエナンチオマーよりも約５０倍活性であった（Ｃ１及びＣＳ２ 化合物を比較）。

一般には、本発明化合物の末梢と中枢の抗ガストリン活性間にはある種の相関性 があり、このことから、これら２つのタイプのレセプターは極めて類似している と予想することができる。しかし、ペンタガストリンによって刺激される胃分泌 物の阻害（表１参照）及び皮質膜へのペンタガストリンの結合性の阻害（表３参 照）という、この２つのタイプの活性は常に完全に相関しているわけではない。

つまり、例えば、末梢ガストリン（胃分泌物）レセプターに対してはＣ２化合物 よりも約１５倍活性であるＣ１化合物は、中枢ではＣ２の１７３しか活性でない 。同様に、末梢ペンタガストリンインヒビターとしてはＣ−３０化合物よりも若 干活性であるＣ５化合物は、中枢レセプターに対してはそれよりも３倍活性が低 い。

中枢レセプター部位からペンタガストリンを解離させる、幾つかの本発明化合物 の考慮すべき活性は、本発明の生成物がガストリンの生理学的ニューロンレベル での不均衡に起因する大脳障害を処置するうえに使用できる可能性を示唆してい るので、実際上の利用可能性があることを予想することができる。

抗コレシストキニン（抗−ＣＣＫ）活性本発明化合物の分子配置がガストリン同 様にＣＣＫに対するアンタゴニスト活性を提示するうえで適切であるという仮説 を確かめるため、幾つかの本発明化合物の抗収縮活性を、インビトロにおいてＣ ＣＫ−８によって刺激したモルモットの胆嚢を用いて試験した。

モルモットの胆嚢の縦長ストリップを、Ｋ　ｒｅｂｓが存在する温度３２℃の単 離器官のための浴に入れ、酸素−ｃｏ、混合物（３５−５Ｖ／Ｖ）によって連続 的に酸素処理した。

カー変力装置によって等良性収縮を測定し、それを記録した。

濃度１０μｇ　／　ｍ　ｌのＣＣＫ−８を使用して胆嚢を収縮させた；　このＣ ＣＫの収縮作用に対する試験化合物のアンタゴニスト活性は種々の濃度を用いて 測定し、それにより、ＩＣ５０、即ちＣＣＫの収縮作用を５０％拮抗できる化合 物のμｇ／菖ｌ濃度を決定した。

得られた結果を以下の表に示す。これには、試験化合物及び、各試験化合物につ いて少なくとも３回行った試験結果について回帰法によって計算した測定ＩＣ５ ０を示している。

Ｌ二　単位μｇｈｌ！のＩＣ５Ｑとして表したモルモットの胆嚢に対すＣ５３４ ，８ Ｃ２０Ｑ、５ Ｃ２１０，２ Ｃ２９２３４ Ｃ３０５９ Ｄ２　１０ｇ ０ルグルミド　０．０６ 特許請求しているいくつかの化合物、例えば化合物ｃ−Ｂ、Ｃ−１０，Ｃ−１９ 、Ｃ−２０及びＣ−２１は、比較のために選択した特異的ＣＣＫアンタゴニスト であるロルグルミドによって示される濃度よりも少ない濃度において、ＣＣＫ− ８の収縮活性を拮抗することが上記表の調査結果から認められる。

ペンタガストリンによって誘導される腫瘍性大腸細胞の増殖速度に対する阻害勿 ！ ガストリンは、消化性上皮に対する属性効果（ｔｒｏｐｈｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ） を有している。

ガストリン（又はペンタガストリン、生理的ホルモンの生物学的に活性なタンパ ク質）をラットに慢性的に投与すると、底及び大腸粘膜の過形成が起こる。最近 になって、ガストリンは化学物質の誘導によって生成されるマウスの移植大腸癌 この前提に基づけば、本発明のガストリン特異的なアンタゴニストは、実験的に 誘発させた胃腸癌の発育を拮抗できるのではないかと期待される。

上記の試験にて最も活性であった化合物の中の、本発明のガストリンアンタゴニ ストの１つである化合物Ｃ−５をこの目的に選択した。体重２０−２５ｇの雄性 マウスの肩甲骨開領域に、マウス大腸腺癌の腫瘍細胞８Ｘ１０’の＠濁物を皮下 接種した。

各８匹の４群を使用した。即ち、対照群、ペンタガストリン２５０μｇ／ｋｇで １日２回処置する動物の１群、及びこのペンタガストリンに加えて１日２回、そ れぞれ３及び１０ｍｇ／ｋｇ　ｉ、ｐの化合物Ｃ−５で処置する動物の２つの群 である。

２１日後に動物を殺し、底粘膜及び腫瘍を取り出し、重量を測定し、抽出してＤ ＮＡを測定した。得られた結果を以下の表５に示す。

上記表５のデータは、ペンタガストリンが底粘膜の有意な過形成を誘発し、大腸 癌の重量及びそのＤＮＡ含量を有意に増大させることを示している。化合物Ｃ− ５はこのペンタガストリンの上記属性効果の両者を有意にかつ用量依存的に阻害 することができる。

、、、　、−＝Ｎ、　ＰＣＴ／ＥＰ　９１１０２３４２フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｃ２３５１５２７１ ０６−４Ｈ ２３７／２２　７１０６−４Ｈ ２３７／３６　７１０６−４Ｈ Ｃ０７Ｄ　２０９１５４　９２８４−４Ｃ２１５／４８　７０１９−４Ｃ ２１７１０２７４３１−４Ｃ ２２１／２０　７４３１−４Ｃ ４９１／１１３　７０１９−４Ｃ ４９５／１０　９１６５−４Ｃ ４９７／１０　９１６５−４Ｃ （７２）発明者　ロバティ、クラウデイオ・ルシオイタリア国（ミラノ）、アイ −２００５２モンツア、ビア・カニ　８番 Ｉ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．以下の式で表すことのできる化合物：▲数式、化学式、表等があります▼（ Ｉ）［式中、ｒは１−３であり、 Ｒ１は、塩素、直鎖及び分枝鎖状Ｃ１−Ｃ４アルキル基、シアノ、ニトロ、メト キシ及びトリフルオロメチル基の中から選ばれる置換基によって置換されている −又は二置換フェニル基、２（β）−ナフチル基、又はメチル及び塩素によって 一又は二置換されていることがあるフリル、チオフェニル、ビロリル、ビリジニ ル及びピリジニル−Ｎ−オキシド基、インドリル（２−又は３−イル）、チオナ フチル（２−又は３−イル）、ベンゾフラニル（２−又は３−イル）、キノリニ ル（２−又は３−イル）、及びインキノリニル（３−イル）基の中から選ばれる 、窒素、酸素又はイオウなどのヘテロ原子を１つ含む単環式及び二環式ヘテロ環 基であり、 Ｒ２は、以下の（ａ）−（ｅ）の中から選ばれる基である；（ａ）式； ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｍ及びｎは個別に１−３の間の値を取ることができるが、形成される環 は少なくとも５個の原子から構成されるものであり、Ｘ及びＹは個別に、（ＣＨ −Ｒ３）ｚ、（ＣＨ＝ＣＨ）、ＴＣＨ２及びＣＨ２Ｔの中から選ばれる基であり 、 ここに、ＴはＯ、Ｓ、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）、又はＣ（Ｏ）−ＮＨであり、Ｒ３は個別 に、Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、ＯＣＨ３、ＯＣ２Ｈ５、ＣＨ２ＯＨ及びＯＨの中か ら選ばれる基であり、 ｚは０−３の値を取ることができるが、形成される環は少なくとも３個の原子か ら構成されるものである］ で示されるヘテロ環スピロ基、 （ｂ）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｍ、ｎ、Ｘ、Ｙ及びＲ３は上記（ａ）における定義と同意義であり、Ｑ はＨ及びＣＨ３の中から個別に選ぶことのできる基である］で示される二環式ス ピロアミノ基、 （ｃ）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｍ及びｎは個別に１−３の中から選ぶことのできる値であり、Ｘ、Ｙ及 びＲ３は上記（ａ）における定義と同意義である］で示される二環式アミノ基（ 縮合）、 （ｄ）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｍ及びｎは個別に１−３の中から選ぶことのできる値であり、Ｘ、Ｙ、 Ｒ３及びＱは上記（ａ）における定義と同意義である］で示される二環式アミン 基（縮合）、 （ｅ）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｗは０−２であり、ＬはＨ、メチル、又はメトキシ基であり、Ａｄはア ダマンチル（１−又は２−イル）基である］で示されるアダマンチル・アルキル アミノ基。 但し、ここに記載の化合物の立体化学は、式（Ｉ）中、星印で示している不斉中 心においてラセミ型（Ｒ，Ｓ）であることができ、又は好ましくは右回り（Ｒ） である。］ ２．Ｒ１が３−クロロフェニル又は３，５−ジクロロフェニル基であり、Ｒ２が ８−アザスピロ［４．５］デカン−８−イル及び１−アダマンチル−２−アミノ エタンの中から選ばれる華であり、不斉中心の立体化学がラセミ型（Ｒ，Ｓ）で あることができ、又は好ましくは右回り（Ｒ）である請求項１に記載の化合物。 ３．請求項１に記載の化合物又はその製薬的に許容され得る塩を少なくとも１つ 活性成分として含有する医薬調製物。 ４．潰瘍に対する活性に応じて処置に使用され得る請求項３に記載の医薬調製物 。 ５．ガストリン及び、それに関連する他の生物活性ポリペプチドによって引き起 こされている腫瘍疾患の処置に使用される請求項３に記載の医薬調製物。 ６．ガストリン又は、それに関連する他の生物活性ポリペプチドの生理学的ニュ ーロンレベルの不均衡に関連するＣＮＳの病理学的状態を処置するための請求項 ３に記載の医薬調製物。 ７．胆管ジスキネジー、大腸炎及び膵臓炎などの消化系の疾患を処置するために 使用される請求項３に記載の医薬調製物。 ８．白内障の外科的処置又は慢性眼炎症によって引き起こされる縮瞳などの眼状 態を処置し、予防するために使用される請求項３に記載の医薬調製物。 ９．ビヒクル、結合剤、芳香剤、崩壊剤、保存剤、湿潤剤、及びそれらの混合物 の中から選ばれる製薬的に許容され得る不活性成分をも含有している請求項３に 記載の医薬調製物。 １０．ｒ、Ｒ１及びＲ２が請求項１における定義と同意義であり、不斉中心（式 （１）中、星印で示している）における置換分が（Ｒ）立体配座である式（Ｉ） で示される誘導体の製造方法であって、以下の立体保存的工程からなることを特 徴とする方法； （ａ）不活性無水溶媒中、−１５℃から１５℃の温度にて、Ｎ−方ルボベンズオ キシ−Ｄ−グルタミン酸のγ−ベンジルエステルを式；Ｈ−Ｒ２（式中、Ｒ２は 前記と同意義）で示されるアミン化合物と混合無水物法によって反応させ、得ら れた反応塊から式（ＩＩＩ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩＩ）で示される化合物を回収し、 （ｂ）上記式（ＩＩＩ）の化合物を不活性溶媒中に溶解し、それを、触媒的に活 性な量の水素添加触媒の存在下、環境温度及び圧力下に水素と反応させて、式（ ＩＩＩ）の化合物を脱ベンジル化及び脱カルポベンズオキシル化し、得られた反 応塊から式（ＩＩ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）で示される化合物を回収し、 （ｃ）ショッテン−バウマン条件下に式（ＩＩ）で示される勝導体を等モル量の 式：Ｒ１−ＣＯ−Ｃｌ（ここに、Ｒ１は請求項１における定義と同意義）で示さ れるアシル・クロリド体と０−１５℃の温度で反応させ、得られた反応塊からＲ （右回り）立体配座の式（Ｉ）で示される誘導体を回収する。 １１．ｒ、Ｒ１及びＲ２が請求項１における定義と同意義であり、不斉中心（星 印で示している）における置換分が（Ｒ，Ｓ）立体配座である式（Ｉ）で示され る誘導体を製造する方法であって、 （ａ）式（ＩＩ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ｒ及びＲ１は前記と同意義である］で示される分子内無水物を−１０℃ から１０℃の温度にて式：Ｈ−Ｒ２（ここに、Ｒ２は前記と同意義）で示される ２級アミンとモル比１−５で反応させ、得られた反応塊から式（Ｉ）で示される 化合物を回収することを特徴とする方法。