JPH0630786A - バイスペシフィック抗体 - Google Patents
バイスペシフィック抗体Info
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- JPH0630786A JPH0630786A JP4186874A JP18687492A JPH0630786A JP H0630786 A JPH0630786 A JP H0630786A JP 4186874 A JP4186874 A JP 4186874A JP 18687492 A JP18687492 A JP 18687492A JP H0630786 A JPH0630786 A JP H0630786A
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- JP
- Japan
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- cells
- antibody
- monoclonal antibody
- antigen
- sialyl lewis
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明によれば癌の治療に有効なバイスペシ
フィック抗体を提供する。 【構成】 抗シアリルルイスＡモノクローナル抗体と抗
ＣＤ３モノクローナル抗体とからなり、シアリルルイス
Ａ抗原とＣＤ３とに反応性を有するバイスペシフィック
抗体。
フィック抗体を提供する。 【構成】 抗シアリルルイスＡモノクローナル抗体と抗
ＣＤ３モノクローナル抗体とからなり、シアリルルイス
Ａ抗原とＣＤ３とに反応性を有するバイスペシフィック
抗体。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、癌治療に有用なバイス
ペシフィック抗体を提供する。
ペシフィック抗体を提供する。
【０００２】
【従来の技術】受動腫瘍免疫療法の大きな問題点の一つ
に、エフェクター細胞を腫瘍部位に標的させることの困
難さがある。キラー細胞と標的細胞の両方に反応するバ
イスペシフィック抗体の発展により抗腫瘍エフェクター
細胞を特異的に標的細胞に運ぶ試みがなされている〔ネ
イチャー（Nature),316,354(1985),ネイチャー（Natur
e),314,628(1985) 〕。バイスペシフィック抗体とは、
２つの異なった抗原特異性を認識する、化学的方法また
は細胞融合によって作製された合成抗体である。
に、エフェクター細胞を腫瘍部位に標的させることの困
難さがある。キラー細胞と標的細胞の両方に反応するバ
イスペシフィック抗体の発展により抗腫瘍エフェクター
細胞を特異的に標的細胞に運ぶ試みがなされている〔ネ
イチャー（Nature),316,354(1985),ネイチャー（Natur
e),314,628(1985) 〕。バイスペシフィック抗体とは、
２つの異なった抗原特異性を認識する、化学的方法また
は細胞融合によって作製された合成抗体である。
【０００３】バイスペシフィック抗体を作製する方法と
しては、２つのイムノグロブリン分子をN-サクシンイミ
ジル 3-(2-ピリジルジチオール) プロピオネート〔N-su
ccinimidyl 3-(2-pyridyldithiol)propionate 〕やS-ア
セチルメルカプトサクシニック アシッド アンハイド
ライド(S-acetylmercaptosuccinic acid anhydride）な
どの架橋剤を用いて結合して作製する方法〔ジャーナル
・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（J.Exp.Me
d.),163, 166(1986)〕、イムノグロブリン分子のFabフ
ラグメントどうしを結合して作製する方法〔ヨーロピア
ン・ジャーナル・オブ・イムノロジー(Eur.J.Immuno
l.),19, 1437(1989) 〕などが報告されている。
しては、２つのイムノグロブリン分子をN-サクシンイミ
ジル 3-(2-ピリジルジチオール) プロピオネート〔N-su
ccinimidyl 3-(2-pyridyldithiol)propionate 〕やS-ア
セチルメルカプトサクシニック アシッド アンハイド
ライド(S-acetylmercaptosuccinic acid anhydride）な
どの架橋剤を用いて結合して作製する方法〔ジャーナル
・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（J.Exp.Me
d.),163, 166(1986)〕、イムノグロブリン分子のFabフ
ラグメントどうしを結合して作製する方法〔ヨーロピア
ン・ジャーナル・オブ・イムノロジー(Eur.J.Immuno
l.),19, 1437(1989) 〕などが報告されている。
【０００４】臨床例と実験事実によって抗ＣＤ３モノク
ローナル抗体と抗腫瘍モノクローナル抗体よりなるバイ
スペシフィック抗体を用いた受動腫瘍免疫療法が腫瘍療
法において有効な手段であることが証明されている〔ラ
ンセット(Lancet),335, 368(1990),イムノロジー・トゥ
デー(Immunol. Today), 12, 51(1991)〕。腫瘍細胞に広
く分布している好適な標的分子に対するバイスペシフィ
ック抗体は、受動腫瘍免疫療法との組み合わせで癌治療
に適応可能な治療法として期待される。
ローナル抗体と抗腫瘍モノクローナル抗体よりなるバイ
スペシフィック抗体を用いた受動腫瘍免疫療法が腫瘍療
法において有効な手段であることが証明されている〔ラ
ンセット(Lancet),335, 368(1990),イムノロジー・トゥ
デー(Immunol. Today), 12, 51(1991)〕。腫瘍細胞に広
く分布している好適な標的分子に対するバイスペシフィ
ック抗体は、受動腫瘍免疫療法との組み合わせで癌治療
に適応可能な治療法として期待される。
【０００５】シアリルルイスＡ抗原は、多くのヒト癌細
胞でつくられ、その細胞膜上に発現し、細胞外にも分泌
される糖鎖抗原である〔キャンサー・リサーチ(Cancer
Research),43, 5489(1983)〕。現在までに、シアリルル
イスＡ抗原を認識するモノクローナル抗体は、数種類報
告されている。たとえば、ＮＳ１９−９〔ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J.Biolo.Chem.),
257, 14365(1982)〕、ＣＡ５０〔ブリティッシュ・メデ
ィカル・ジャーナル（British Medical Journal),288,1
479(1984) 〕、ＭＳＷ１１３〔ジャーナル・オブ・バイ
オケミストリー(J.Biochem.),104, 817(1988) 〕、ＣＣ
３Ｃ１９５〔アーチブス・オブ・バイオケミストリー・
アンド・バイオフィジックス(Arch.Biochem.Biophys.),
225, 214(1987) 〕、Ｓｐａｎ−１〔キャンサー(Cance
r),60,1636(1987)〕、ＫＭ２３１（ＡＭＣ−４６２）
〔特開昭63-21562号公報, アンチキャンサー・リサーチ
(Anticancer Research),8,329(1988) 〕などがあげられ
る。これらの中でＫＭ２３１（ＡＭＣ−４６２）は、シ
アリルルイスＡ抗原に対し非常に強い結合活性をもち
〔アンティキャンサー・リサーチ(Anticancer Researc
h),10,1579 (1990)〕、癌の治療に有用であることが報
告されている〔アンティキャンサー・リサーチ(Antican
cer Research),11,2003 (1991)〕。
胞でつくられ、その細胞膜上に発現し、細胞外にも分泌
される糖鎖抗原である〔キャンサー・リサーチ(Cancer
Research),43, 5489(1983)〕。現在までに、シアリルル
イスＡ抗原を認識するモノクローナル抗体は、数種類報
告されている。たとえば、ＮＳ１９−９〔ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J.Biolo.Chem.),
257, 14365(1982)〕、ＣＡ５０〔ブリティッシュ・メデ
ィカル・ジャーナル（British Medical Journal),288,1
479(1984) 〕、ＭＳＷ１１３〔ジャーナル・オブ・バイ
オケミストリー(J.Biochem.),104, 817(1988) 〕、ＣＣ
３Ｃ１９５〔アーチブス・オブ・バイオケミストリー・
アンド・バイオフィジックス(Arch.Biochem.Biophys.),
225, 214(1987) 〕、Ｓｐａｎ−１〔キャンサー(Cance
r),60,1636(1987)〕、ＫＭ２３１（ＡＭＣ−４６２）
〔特開昭63-21562号公報, アンチキャンサー・リサーチ
(Anticancer Research),8,329(1988) 〕などがあげられ
る。これらの中でＫＭ２３１（ＡＭＣ−４６２）は、シ
アリルルイスＡ抗原に対し非常に強い結合活性をもち
〔アンティキャンサー・リサーチ(Anticancer Researc
h),10,1579 (1990)〕、癌の治療に有用であることが報
告されている〔アンティキャンサー・リサーチ(Antican
cer Research),11,2003 (1991)〕。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、癌の
治療に有用なバイスペシフィック抗体を提供することで
ある。
治療に有用なバイスペシフィック抗体を提供することで
ある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、抗シア
リルルイスＡモノクローナル抗体と抗ＣＤ３モノクロー
ナル抗体とからなり、シアリルルイスＡ抗原とＣＤ３と
に反応性を有するバイスペシフィック抗体を提供するこ
とができる。シアリルルイスＡ抗原は、多くのヒト癌に
おいて多量に発現していることが証明されているので、
シアリルルイスＡ抗原とＣＤ３との両方に反応性を有す
るバイスペシフィック抗体は、受動腫瘍免疫療法との組
み合わせで、臨床上治療効果の高いものになることが期
待される。
リルルイスＡモノクローナル抗体と抗ＣＤ３モノクロー
ナル抗体とからなり、シアリルルイスＡ抗原とＣＤ３と
に反応性を有するバイスペシフィック抗体を提供するこ
とができる。シアリルルイスＡ抗原は、多くのヒト癌に
おいて多量に発現していることが証明されているので、
シアリルルイスＡ抗原とＣＤ３との両方に反応性を有す
るバイスペシフィック抗体は、受動腫瘍免疫療法との組
み合わせで、臨床上治療効果の高いものになることが期
待される。
【０００８】以下に本発明を詳細に説明する。本発明
は、抗シアリルルイスＡモノクローナル抗体と抗ＣＤ３
モノクローナル抗体とからなり、シアリルルイスＡ抗原
およびＣＤ３とに反応性を有するバイスペシフィック抗
体に関する。本発明のバイスペシフィック抗体は、ＣＤ
３陽性リンパ球とシアリルルイスＡ抗原を発現する細胞
の両方に反応する活性を有する分子量約100,000 の抗体
である。
は、抗シアリルルイスＡモノクローナル抗体と抗ＣＤ３
モノクローナル抗体とからなり、シアリルルイスＡ抗原
およびＣＤ３とに反応性を有するバイスペシフィック抗
体に関する。本発明のバイスペシフィック抗体は、ＣＤ
３陽性リンパ球とシアリルルイスＡ抗原を発現する細胞
の両方に反応する活性を有する分子量約100,000 の抗体
である。
【０００９】本発明のバイスペシフィック抗体は、次の
ようにして製造される。シアリルルイスＡ抗原に対する
モノクローナル抗体およびＣＤ３に対するモノクローナ
ル抗体を各々蛋白分解酵素たとえば、ペプシン、パパイ
ンなどで処理し、F(ab')2 フラグメントを得る。さらに
これをそれぞれジチオスレイトール(DTT) などを用いて
還元することにより、遊離のＳＨ−基を有するFab'-SH
に変換する。次にどちらか一方のFab'-SH を5,5-ジチオ
ビス 2- ニトロベンゾイック アシッド(DTNB)などで処
理することによりFab'-S-NB に変換する。得られるFab'
-SH とFab'-S-NB を1:1 で混合し、Fast Protein Liqui
d Chromatography(FPLC)などで精製することにより、バ
イスペシフィック抗体を作製する。
ようにして製造される。シアリルルイスＡ抗原に対する
モノクローナル抗体およびＣＤ３に対するモノクローナ
ル抗体を各々蛋白分解酵素たとえば、ペプシン、パパイ
ンなどで処理し、F(ab')2 フラグメントを得る。さらに
これをそれぞれジチオスレイトール(DTT) などを用いて
還元することにより、遊離のＳＨ−基を有するFab'-SH
に変換する。次にどちらか一方のFab'-SH を5,5-ジチオ
ビス 2- ニトロベンゾイック アシッド(DTNB)などで処
理することによりFab'-S-NB に変換する。得られるFab'
-SH とFab'-S-NB を1:1 で混合し、Fast Protein Liqui
d Chromatography(FPLC)などで精製することにより、バ
イスペシフィック抗体を作製する。
【００１０】本発明で用いられる抗シアリルルイスＡモ
ノクローナル抗体は、シアリルルイスＡ抗原に対するモ
ノクローナル抗体であればいずれでもよい。シアリルル
イスＡ抗原に対するモノクローナル抗体の作製は、以下
のとおり行なう。シアリルルイスＡ抗原を高発現してい
るヒト胃癌細胞などを免疫した動物の脾臓細胞とマウス
の骨髄腫細胞を融合させてハイブリドーマを作製しシア
リルルイスＡ抗原を発現している細胞と反応し、シアリ
ルルイスＡ抗原を発現していない細胞と反応しないモノ
クローナル抗体を産生するハイブリドーマを選択する。
該ハイブリドーマを培地で培養するか、マウスに投与し
て該マウスを腹水癌化し、該培養液、または、腹水より
プロテインＡカラムなどで精製したものを抗シアリルル
イスＡモノクローナル抗体の精製抗体として準備する。
または、すでに確立されているＫＭ２３１（特開昭63-2
1562号公報）などのハイブリドーマ株を用いて産生する
こともできる。
ノクローナル抗体は、シアリルルイスＡ抗原に対するモ
ノクローナル抗体であればいずれでもよい。シアリルル
イスＡ抗原に対するモノクローナル抗体の作製は、以下
のとおり行なう。シアリルルイスＡ抗原を高発現してい
るヒト胃癌細胞などを免疫した動物の脾臓細胞とマウス
の骨髄腫細胞を融合させてハイブリドーマを作製しシア
リルルイスＡ抗原を発現している細胞と反応し、シアリ
ルルイスＡ抗原を発現していない細胞と反応しないモノ
クローナル抗体を産生するハイブリドーマを選択する。
該ハイブリドーマを培地で培養するか、マウスに投与し
て該マウスを腹水癌化し、該培養液、または、腹水より
プロテインＡカラムなどで精製したものを抗シアリルル
イスＡモノクローナル抗体の精製抗体として準備する。
または、すでに確立されているＫＭ２３１（特開昭63-2
1562号公報）などのハイブリドーマ株を用いて産生する
こともできる。
【００１１】本発明で用いられる抗ＣＤ３モノクローナ
ル抗体は、ＣＤ３に対するモノクローナル抗体であれば
いずれでもよい。ＣＤ３に対するモノクローナル抗体
は、ヒト末梢血リンパ球を免疫することにより作製可能
であるが、すでに確立されているＯＫＴ３（特公昭63-6
2520号公報）ハイブリドーマ株を用いて産生することが
できる抗ＣＤ３モノクローナル抗体ＯＫＴ３が好まし
い。
ル抗体は、ＣＤ３に対するモノクローナル抗体であれば
いずれでもよい。ＣＤ３に対するモノクローナル抗体
は、ヒト末梢血リンパ球を免疫することにより作製可能
であるが、すでに確立されているＯＫＴ３（特公昭63-6
2520号公報）ハイブリドーマ株を用いて産生することが
できる抗ＣＤ３モノクローナル抗体ＯＫＴ３が好まし
い。
【００１２】以下に、本発明のバイスペシフィック抗体
の製造法を詳細に説明する。
の製造法を詳細に説明する。
【００１３】(1) 動物の免疫と抗体産生細胞の調製 シアリルルイスＡ抗原に対するモノクローナル抗体の作
製：３〜２０週令のマウスまたはラットに抗原（シアリ
ルルイスＡ抗原を高発現している細胞の膜成分）を免疫
して、その動物の脾、リンパ節、末梢血中の抗体産生細
胞を採取する。免疫は、動物の皮下あるいは静脈内ある
いは腹腔内に、適当なアジュバント〔例えば、フロイン
ドの完全アジュバント（ＣｏｍｐｌｅｔｅＦｒｅｕｎ
ｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）または、水酸化アルミニウ
ムゲルと百日咳菌ワクチンなど〕とともに抗原を投与す
ることにより行う。
製：３〜２０週令のマウスまたはラットに抗原（シアリ
ルルイスＡ抗原を高発現している細胞の膜成分）を免疫
して、その動物の脾、リンパ節、末梢血中の抗体産生細
胞を採取する。免疫は、動物の皮下あるいは静脈内ある
いは腹腔内に、適当なアジュバント〔例えば、フロイン
ドの完全アジュバント（ＣｏｍｐｌｅｔｅＦｒｅｕｎ
ｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）または、水酸化アルミニウ
ムゲルと百日咳菌ワクチンなど〕とともに抗原を投与す
ることにより行う。
【００１４】抗原の投与は、１回目の投与の後１〜２週
間おきに５〜１０回行う。各投与後３〜７日目に眼底静
脈叢より採血し、その血清が抗原と反応することを酵素
免疫測定法〔ＥＬＩＳＡ法：抗体実験マニュアル、E.Ha
rlow、D.Lane編、Cold Spring Harbor Laboratory刊、1
988〕などで調べる。免疫に用いた抗原に対し、その血
清が十分な抗体価を示したマウスまたはラットを脾細胞
の供給源として提供する。
間おきに５〜１０回行う。各投与後３〜７日目に眼底静
脈叢より採血し、その血清が抗原と反応することを酵素
免疫測定法〔ＥＬＩＳＡ法：抗体実験マニュアル、E.Ha
rlow、D.Lane編、Cold Spring Harbor Laboratory刊、1
988〕などで調べる。免疫に用いた抗原に対し、その血
清が十分な抗体価を示したマウスまたはラットを脾細胞
の供給源として提供する。
【００１５】ＣＤ３に対するモノクローナル抗体作製：
３〜２０週令のマウスまたはラットに抗原（ヒト末梢リ
ンパ球）を免疫して、その動物の脾、リンパ節、末梢血
中の抗体産生細胞を採取する。免疫は、動物の皮下ある
いは静脈内あるいは腹腔内に、適当なアジュバント〔例
えば、フロインドの完全アジュバント（Ｃｏｍｐｌｅｔ
ｅ Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）または、水
酸化アルミニウムゲルと百日咳菌ワクチンなど〕ととも
に抗原を投与することにより行う。
３〜２０週令のマウスまたはラットに抗原（ヒト末梢リ
ンパ球）を免疫して、その動物の脾、リンパ節、末梢血
中の抗体産生細胞を採取する。免疫は、動物の皮下ある
いは静脈内あるいは腹腔内に、適当なアジュバント〔例
えば、フロインドの完全アジュバント（Ｃｏｍｐｌｅｔ
ｅ Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）または、水
酸化アルミニウムゲルと百日咳菌ワクチンなど〕ととも
に抗原を投与することにより行う。
【００１６】抗原の投与は、１回目の投与の後１〜２週
間おきに５〜１０回行う。各投与後３〜７日目に眼底静
脈叢より採血し、その血清が抗原と反応することを酵素
免疫測定法などで調べる。免疫に用いた抗原に対し、そ
の血清が十分な抗体価を示したマウスまたはラットを脾
細胞の供給源として提供する。脾細胞と骨髄腫細胞の融
合に供するにあたって、抗原物質の最終投与後３〜７日
目に、免疫したマウスまたはラットより脾臓を摘出し、
脾細胞を採取する。脾臓をＭＥＭ培地（日水製薬社製）
中で細断し、ピンセットでほぐし、遠心分離（１２００
ｒｐｍ 、５分）した後、上清を捨て、トリス−塩化ア
ンモニウム緩衝液（ｐＨ７．６５）で１〜２分間処理し
赤血球を除去し、ＭＥＭ培地で３回洗浄して融合用脾細
胞として提供する。
間おきに５〜１０回行う。各投与後３〜７日目に眼底静
脈叢より採血し、その血清が抗原と反応することを酵素
免疫測定法などで調べる。免疫に用いた抗原に対し、そ
の血清が十分な抗体価を示したマウスまたはラットを脾
細胞の供給源として提供する。脾細胞と骨髄腫細胞の融
合に供するにあたって、抗原物質の最終投与後３〜７日
目に、免疫したマウスまたはラットより脾臓を摘出し、
脾細胞を採取する。脾臓をＭＥＭ培地（日水製薬社製）
中で細断し、ピンセットでほぐし、遠心分離（１２００
ｒｐｍ 、５分）した後、上清を捨て、トリス−塩化ア
ンモニウム緩衝液（ｐＨ７．６５）で１〜２分間処理し
赤血球を除去し、ＭＥＭ培地で３回洗浄して融合用脾細
胞として提供する。
【００１７】(2) 骨髄腫細胞の調製 骨髄腫細胞としては、マウスから得られた株化細胞を使
用する。たとえば、８−アザグアニン耐性マウス（ＢＡ
ＬＢ／ｃ由来）骨髄腫細胞株Ｐ３−Ｘ６３Ａｇ８−Ｕ１
（Ｐ３−Ｕ１）〔ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー(Eur.J.Immunol.), 6, 511 (1976) 〕、ＳＰ
２／Ｏ−Ａｇ１４（ＳＰ−２）〔ネイチャー（Nature),
276,269(1978) 〕、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８６５３（６５
３）〔ジャーナル・オブ・イムノロジー(J.Immunol.),1
23 , 1548(1979) 〕、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８（Ｘ６３）
〔ネイチャー（Nature),256,495(1975) 〕などが用いら
れる。これらの細胞株は、８−アザグアニン培地〔ＲＰ
ＭＩ−１６４０培地にグルタミン（１．５ｍＭ）、２−
メルカプトエタノール（５×１０-5Ｍ）、ジェンタマイ
シン（１０μｇ／ｍｌ）および牛胎児血清（ＦＣＳ）
（ＣＳＬ社製、１０％）を加えた培地（以下、正常培地
という。）に、さらに８−アザグアニン（１５μｇ／ｍ
ｌ）を加えた培地〕で継代するが、細胞融合の３〜４日
前に正常培地に継代し、融合時に２×１０7 個以上の細
胞数を確保する。
用する。たとえば、８−アザグアニン耐性マウス（ＢＡ
ＬＢ／ｃ由来）骨髄腫細胞株Ｐ３−Ｘ６３Ａｇ８−Ｕ１
（Ｐ３−Ｕ１）〔ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー(Eur.J.Immunol.), 6, 511 (1976) 〕、ＳＰ
２／Ｏ−Ａｇ１４（ＳＰ−２）〔ネイチャー（Nature),
276,269(1978) 〕、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８６５３（６５
３）〔ジャーナル・オブ・イムノロジー(J.Immunol.),1
23 , 1548(1979) 〕、Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８（Ｘ６３）
〔ネイチャー（Nature),256,495(1975) 〕などが用いら
れる。これらの細胞株は、８−アザグアニン培地〔ＲＰ
ＭＩ−１６４０培地にグルタミン（１．５ｍＭ）、２−
メルカプトエタノール（５×１０-5Ｍ）、ジェンタマイ
シン（１０μｇ／ｍｌ）および牛胎児血清（ＦＣＳ）
（ＣＳＬ社製、１０％）を加えた培地（以下、正常培地
という。）に、さらに８−アザグアニン（１５μｇ／ｍ
ｌ）を加えた培地〕で継代するが、細胞融合の３〜４日
前に正常培地に継代し、融合時に２×１０7 個以上の細
胞数を確保する。
【００１８】(3) 細胞融合 (1) で免疫した抗体産生細胞と(2) で得られた骨髄腫細
胞をＭＥＭ培地またはＰＢＳ（リン酸二ナトリウム１．
８３ｇ、リン酸一カリウム０．２１ｇ、食塩７．６５
ｇ、蒸留水１リットル、ｐＨ７．２）でよく洗浄し、細
胞数が、抗体産生細胞：骨髄腫細胞＝５〜１０：１にな
るよう混合し、遠心分離（１，２００ｒｐｍ、５分）し
た後、上清を捨て、沈澱した細胞群をよくほぐした後、
攪拌しながら、３７℃で、ポリエチレングリコール−
１，０００（ＰＥＧ−１，０００）２ｇ、ＭＥＭ培地２
ｍｌおよびジメチルスルホキシド ０．７ｍｌの混液
０．２〜１ｍｌ／１０8 抗体産生細胞を加え、１〜２分
間毎にＭＥＭ培地１〜２ｍｌを数回加えた後、ＭＥＭ培
地を加えて全量が５０ｍｌになるようにする。遠心分離
（９００ｒｐｍ、５分）後、上清を捨て、ゆるやかに細
胞をほぐした後、メスピペットによる吸込み、吹出しで
ゆるやかに細胞をＨＡＴ培地〔正常培地にヒポキサンチ
ン（１０-4Ｍ）、チミジン（１．５×１０-5Ｍ）および
アミノプテリン（４×１０-7Ｍ ）を加えた培地〕１０
０ｍｌ中に懸濁する。
胞をＭＥＭ培地またはＰＢＳ（リン酸二ナトリウム１．
８３ｇ、リン酸一カリウム０．２１ｇ、食塩７．６５
ｇ、蒸留水１リットル、ｐＨ７．２）でよく洗浄し、細
胞数が、抗体産生細胞：骨髄腫細胞＝５〜１０：１にな
るよう混合し、遠心分離（１，２００ｒｐｍ、５分）し
た後、上清を捨て、沈澱した細胞群をよくほぐした後、
攪拌しながら、３７℃で、ポリエチレングリコール−
１，０００（ＰＥＧ−１，０００）２ｇ、ＭＥＭ培地２
ｍｌおよびジメチルスルホキシド ０．７ｍｌの混液
０．２〜１ｍｌ／１０8 抗体産生細胞を加え、１〜２分
間毎にＭＥＭ培地１〜２ｍｌを数回加えた後、ＭＥＭ培
地を加えて全量が５０ｍｌになるようにする。遠心分離
（９００ｒｐｍ、５分）後、上清を捨て、ゆるやかに細
胞をほぐした後、メスピペットによる吸込み、吹出しで
ゆるやかに細胞をＨＡＴ培地〔正常培地にヒポキサンチ
ン（１０-4Ｍ）、チミジン（１．５×１０-5Ｍ）および
アミノプテリン（４×１０-7Ｍ ）を加えた培地〕１０
０ｍｌ中に懸濁する。
【００１９】この懸濁液を９６穴培養用プレートに１０
０μｌ／穴ずつ分注し、５％ＣＯ2インキュベーター
中、３７℃で７〜１４日間培養する。培養後、培養上清
の一部をとり酵素免疫測定法などにより、シアリルルイ
スＡ抗原を発現している細胞と反応し、シアリルルイス
Ａ抗原を発現していない細胞と反応しないハイブリドー
マを選択する。ついで、限界希釈法によりクローニング
を２回繰り返し〔１回目は、ＨＴ培地（ＨＡＴ培地から
アミノプテリンを除いた培地）、２回目は、正常培地を
使用する〕、安定して強い抗体価の認められたものを抗
シアリルルイスＡモクローナル抗体抗体産生ハイブリド
ーマ株として選択する。
０μｌ／穴ずつ分注し、５％ＣＯ2インキュベーター
中、３７℃で７〜１４日間培養する。培養後、培養上清
の一部をとり酵素免疫測定法などにより、シアリルルイ
スＡ抗原を発現している細胞と反応し、シアリルルイス
Ａ抗原を発現していない細胞と反応しないハイブリドー
マを選択する。ついで、限界希釈法によりクローニング
を２回繰り返し〔１回目は、ＨＴ培地（ＨＡＴ培地から
アミノプテリンを除いた培地）、２回目は、正常培地を
使用する〕、安定して強い抗体価の認められたものを抗
シアリルルイスＡモクローナル抗体抗体産生ハイブリド
ーマ株として選択する。
【００２０】また、同様の方法を用いて、抗ＣＤ３モノ
クローナル抗体産生ハイブリドーマ株を調製する。
クローナル抗体産生ハイブリドーマ株を調製する。
【００２１】(4) モノクローナル抗体の調製 プリスタン処理〔２，６，１０，１４−テトラメチルペ
ンタデカン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ）０．５ｍｌを腹腔内投
与し、２週間飼育する〕した８〜１０週令のマウスまた
はヌードマウスに、(3) で得られた抗シアリルルイスＡ
モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ細胞、および抗
ＣＤ３モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ細胞２×
１０6 〜５×１０7 細胞／匹を腹腔内注射する。１０〜
２１日でハイブリドーマは腹水癌化する。このマウスか
ら腹水を採取し、遠心分離（３，０００ｒｐｍ、５分）
して固形分を除去後、４０〜５０％硫酸アンモニウムで
塩析し、ＤＥＡＥ−セファロースカラム、プロテインＡ
−カラムあるいはセルロファインＧＳＬ２０００（生化
学工業社製）のカラムに通塔し、ＩｇＧあるいは、Ｉｇ
Ｍ画分を集め、精製モノクローナル抗体とする。
ンタデカン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ）０．５ｍｌを腹腔内投
与し、２週間飼育する〕した８〜１０週令のマウスまた
はヌードマウスに、(3) で得られた抗シアリルルイスＡ
モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ細胞、および抗
ＣＤ３モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ細胞２×
１０6 〜５×１０7 細胞／匹を腹腔内注射する。１０〜
２１日でハイブリドーマは腹水癌化する。このマウスか
ら腹水を採取し、遠心分離（３，０００ｒｐｍ、５分）
して固形分を除去後、４０〜５０％硫酸アンモニウムで
塩析し、ＤＥＡＥ−セファロースカラム、プロテインＡ
−カラムあるいはセルロファインＧＳＬ２０００（生化
学工業社製）のカラムに通塔し、ＩｇＧあるいは、Ｉｇ
Ｍ画分を集め、精製モノクローナル抗体とする。
【００２２】抗体のサブクラスの決定は、マウスモノク
ローナル抗体タイピングキット（ザイメット社製）ある
いはラットモノクローナル抗体タイピングキット（ノル
ディックイムノロジー社製）を用いて行う。蛋白量の定
量は、ローリー法および２８０ｎｍでの吸光度より算出
する。
ローナル抗体タイピングキット（ザイメット社製）ある
いはラットモノクローナル抗体タイピングキット（ノル
ディックイムノロジー社製）を用いて行う。蛋白量の定
量は、ローリー法および２８０ｎｍでの吸光度より算出
する。
【００２３】(5) バイスペシフィック抗体の作製 パパインやペプシンを用いて作製した抗ＣＤ３モノクロ
ーナル抗体のF(ab')2フラグメント〔ジャーナル・オブ
・イムノロジー(J.Immunol.),131 , 2895(1983) 〕をDT
Tなどの還元剤を用いて還元する。還元反応は、DTNBで
停止させ、生成されるFab-S-NBをゲルクロマトグラフィ
ーで単離する。蛋白分解酵素であるパパインやペプシン
を用いて作製した抗シアリルルイスＡモノクローナル抗
体のF(ab')2フラグメントはDTTなどの還元剤を用いて還
元し、得られるFab'-SHをゲルクロマトグラフィーで精
製する。
ーナル抗体のF(ab')2フラグメント〔ジャーナル・オブ
・イムノロジー(J.Immunol.),131 , 2895(1983) 〕をDT
Tなどの還元剤を用いて還元する。還元反応は、DTNBで
停止させ、生成されるFab-S-NBをゲルクロマトグラフィ
ーで単離する。蛋白分解酵素であるパパインやペプシン
を用いて作製した抗シアリルルイスＡモノクローナル抗
体のF(ab')2フラグメントはDTTなどの還元剤を用いて還
元し、得られるFab'-SHをゲルクロマトグラフィーで精
製する。
【００２４】Fab'-S-NBとFab'-SHを１：１で混合し、数
時間インキュベーションし、生成される再構成F(ab')2
をゲルクロマトグラフィーで単離し、バイスペシフィッ
ク抗体として以下の実験に供する。
時間インキュベーションし、生成される再構成F(ab')2
をゲルクロマトグラフィーで単離し、バイスペシフィッ
ク抗体として以下の実験に供する。
【００２５】(6) バイスペシフィック抗体の反応性の確
認 (5) で作製されたバイスペシフィック抗体とヒトリンパ
球およびシアリルルイスA抗原陽性細胞との反応性を蛍
光抗体法（抗体実験マニュアル、E.Harlow、D.Lane編、
Cold Spring Harbor Laboratory刊、1988）などにより
調べる。
認 (5) で作製されたバイスペシフィック抗体とヒトリンパ
球およびシアリルルイスA抗原陽性細胞との反応性を蛍
光抗体法（抗体実験マニュアル、E.Harlow、D.Lane編、
Cold Spring Harbor Laboratory刊、1988）などにより
調べる。
【００２６】(7) バイスペシフィック抗体の抗腫瘍効果 ヒト末梢リンパ球からセルソーターを用いて、ＣＤ８陽
性およびＣＤ４陽性Ｔ細胞を分離し、抗ＣＤ３抗体とイ
ンターロイキン−２（IL-2）存在下で培養することによ
りリンパ球を活性化する（以下それぞれ活性化ＣＤ８＋
Ｔ細胞、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞と略す）。活性化ＣＤ８
＋Ｔ細胞または活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞と 51Crで標識した
シアリルルイスＡ抗原陽性細胞をバイスペシフィック抗
体の存在下または非存在下で培養し、死滅細胞から遊離
する51Crのガンマー線を測定することにより抗腫瘍効果
を調べる。
性およびＣＤ４陽性Ｔ細胞を分離し、抗ＣＤ３抗体とイ
ンターロイキン−２（IL-2）存在下で培養することによ
りリンパ球を活性化する（以下それぞれ活性化ＣＤ８＋
Ｔ細胞、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞と略す）。活性化ＣＤ８
＋Ｔ細胞または活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞と 51Crで標識した
シアリルルイスＡ抗原陽性細胞をバイスペシフィック抗
体の存在下または非存在下で培養し、死滅細胞から遊離
する51Crのガンマー線を測定することにより抗腫瘍効果
を調べる。
【００２７】以下に本発明の実施例を示す。
【００２８】
実施例１ 抗シアリルルイスＡモノクローナル抗体については、該
抗体を産生するハイブリドーマＫＭ２３１（ＡＭＣ−４
６２，European Collection of Animal Cell Cultures
寄託番号ECACC 86050801）を用いた。抗ＣＤ３モノクロ
ーナル抗体については、該抗体を産生するハイブリドー
マＯＫＴ３（ATCC番号CRL8001）をATCCより入手して用
いた。
抗体を産生するハイブリドーマＫＭ２３１（ＡＭＣ−４
６２，European Collection of Animal Cell Cultures
寄託番号ECACC 86050801）を用いた。抗ＣＤ３モノクロ
ーナル抗体については、該抗体を産生するハイブリドー
マＯＫＴ３（ATCC番号CRL8001）をATCCより入手して用
いた。
【００２９】(1) モノクローナル抗体の精製 プリスタン処理した８週令ヌード雌マウスにＫＭ２３１
およびＯＫＴ３ハイブリドーマ株を５〜１０×１０6 細
胞／匹それぞれ腹腔内注射した。１０〜２１日後に、ハ
イブリドーマは腹水癌化した。腹水のたまったマウスか
ら、腹水を採取（１〜８ｍｌ／匹）し、遠心分離（３，
０００ｒｐｍ、５分）して固形分を除去した。得られた
腹水を結合緩衝液（1.5Ｍグリシン−3MNaCl, pH9）で透
析後プロテインＡ−セファロースカラム（ファルマシア
社製）に通塔し、カラムを洗浄後溶出緩衝液（0.1Mクエ
ン酸 pH4.0）でIgG画分を溶出した。溶出後塩化ナトリ
ウム０．５Ｍを添加したＰＢＳですみやかに透析し、精
製モノクローナル抗体とした。
およびＯＫＴ３ハイブリドーマ株を５〜１０×１０6 細
胞／匹それぞれ腹腔内注射した。１０〜２１日後に、ハ
イブリドーマは腹水癌化した。腹水のたまったマウスか
ら、腹水を採取（１〜８ｍｌ／匹）し、遠心分離（３，
０００ｒｐｍ、５分）して固形分を除去した。得られた
腹水を結合緩衝液（1.5Ｍグリシン−3MNaCl, pH9）で透
析後プロテインＡ−セファロースカラム（ファルマシア
社製）に通塔し、カラムを洗浄後溶出緩衝液（0.1Mクエ
ン酸 pH4.0）でIgG画分を溶出した。溶出後塩化ナトリ
ウム０．５Ｍを添加したＰＢＳですみやかに透析し、精
製モノクローナル抗体とした。
【００３０】抗体のサブクラスをマウスモノクローナル
抗体タイピングキット（ザイメット社製）で決定したと
ころ、シアリルルイスＡ抗原に反応するモノクローナル
抗体ＫＭ２３１はIgG1、ＣＤ３に対するモノクロナール
抗体ＯＫＴ３は、IgG2aであった。
抗体タイピングキット（ザイメット社製）で決定したと
ころ、シアリルルイスＡ抗原に反応するモノクローナル
抗体ＫＭ２３１はIgG1、ＣＤ３に対するモノクロナール
抗体ＯＫＴ３は、IgG2aであった。
【００３１】(2) バイスペシフィック抗体の作製 モノクローナル抗体ＯＫＴ３をペプシン（Sigma社）で
0.1Mクエン酸緩衝液(pH4.1)中37℃２時間処理し、F(a
b')2フラグメントを調整した。この酵素反応は1MNaHCO3
を加えてpHを８に上げることにより停止させた。また、
モノクローナル抗体ＫＭ２３１は、システイン存在下、
活性化パパイン(Worthington社)で3mMEDTAを含む0.1M酢
酸緩衝液（pH5.5)中、37℃で３時間処理してF(ab')2フ
ラグメントを調製した。この酵素反応は最終濃度10mMに
なるようにヨードアセトアミドを加えて停止させた。こ
のようにして得られた２種のF(ab')2フラグメントをそ
れぞれゲルクロマトグラフィーで精製した。
0.1Mクエン酸緩衝液(pH4.1)中37℃２時間処理し、F(a
b')2フラグメントを調整した。この酵素反応は1MNaHCO3
を加えてpHを８に上げることにより停止させた。また、
モノクローナル抗体ＫＭ２３１は、システイン存在下、
活性化パパイン(Worthington社)で3mMEDTAを含む0.1M酢
酸緩衝液（pH5.5)中、37℃で３時間処理してF(ab')2フ
ラグメントを調製した。この酵素反応は最終濃度10mMに
なるようにヨードアセトアミドを加えて停止させた。こ
のようにして得られた２種のF(ab')2フラグメントをそ
れぞれゲルクロマトグラフィーで精製した。
【００３２】モノクローナル抗体ＯＫＴ３のF(ab')2フ
ラグメントを0.5mMDTTで30分、pH7.5で処理し還元し
た。還元反応は、さらにDTNB（最終濃度5mM）を反応さ
せ、生成したFab'-S-NBをゲルクロマトグラフィー（以
下Fab'-S-NB)で単離した。モノクローナル抗体ＫＭ２３
１のF(ab')2フラグメントはやはり0.5mM DTTを用いて還
元し、Fab'-SHをゲルクロマトグラフィーで精製した。
ラグメントを0.5mMDTTで30分、pH7.5で処理し還元し
た。還元反応は、さらにDTNB（最終濃度5mM）を反応さ
せ、生成したFab'-S-NBをゲルクロマトグラフィー（以
下Fab'-S-NB)で単離した。モノクローナル抗体ＫＭ２３
１のF(ab')2フラグメントはやはり0.5mM DTTを用いて還
元し、Fab'-SHをゲルクロマトグラフィーで精製した。
【００３３】Fab'-S-NBとFab'-SHを１：１で混合し、４
時間室温でインキュベーションし、生成された再構成F
(ab')2をゲルクロマトグラフィーで単離し、バイスペシ
フィック抗体として以下の実験に供した。
時間室温でインキュベーションし、生成された再構成F
(ab')2をゲルクロマトグラフィーで単離し、バイスペシ
フィック抗体として以下の実験に供した。
【００３４】(3) バイスペシフィック抗体の反応性の確
認 (2) で作製されたバイスペシフィック抗体の反応性をヒ
トリンパ球から分離したＴ細胞を抗ＣＤ３抗体とIL-2存
在下で培養することにより活性化した活性化ＣＤ８＋Ｔ
細胞、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞およびシアリルルイスＡ抗
原陽性細胞LS174Tとの反応性を蛍光抗体法（抗体実験マ
ニュアル、E.Harlow、D.Lane編、Cold Spring Harbor L
aboratory刊、1988）で調べた。反応性はフローサイト
メトリー(FACScan)で解析した。結果を図１に示した
が、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞または活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞
に対しては、モノクローナル抗体ＯＫＴ３とバイスペシ
フィック抗体が反応し、モノクローナル抗体ＫＭ２３１
は反応しなかった。さらに、シアリルルイスＡを高発現
する細胞LS174Tに対しては、バイスペシフィック抗体と
モノクローナル抗体ＫＭ２３１は反応するが、モノクロ
ーナル抗体ＯＫＴ３は反応しなかった。このように、作
製されたバイスペシフィック抗体はＣＤ３陽性リンパ球
とシアリルルイスＡ抗原を発現する細胞両方に反応する
活性があることが確かめられた。
認 (2) で作製されたバイスペシフィック抗体の反応性をヒ
トリンパ球から分離したＴ細胞を抗ＣＤ３抗体とIL-2存
在下で培養することにより活性化した活性化ＣＤ８＋Ｔ
細胞、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞およびシアリルルイスＡ抗
原陽性細胞LS174Tとの反応性を蛍光抗体法（抗体実験マ
ニュアル、E.Harlow、D.Lane編、Cold Spring Harbor L
aboratory刊、1988）で調べた。反応性はフローサイト
メトリー(FACScan)で解析した。結果を図１に示した
が、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞または活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞
に対しては、モノクローナル抗体ＯＫＴ３とバイスペシ
フィック抗体が反応し、モノクローナル抗体ＫＭ２３１
は反応しなかった。さらに、シアリルルイスＡを高発現
する細胞LS174Tに対しては、バイスペシフィック抗体と
モノクローナル抗体ＫＭ２３１は反応するが、モノクロ
ーナル抗体ＯＫＴ３は反応しなかった。このように、作
製されたバイスペシフィック抗体はＣＤ３陽性リンパ球
とシアリルルイスＡ抗原を発現する細胞両方に反応する
活性があることが確かめられた。
【００３５】(4) バイスペシフィック抗体の抗腫瘍効果 活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞または活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞と51
Crで標識したシアリルルイスＡ抗原を高発現する細胞
（シアリルルイスＡ抗原陽性細胞）あるいはシアリルル
イスＡ抗原を発現しない細胞（シアリルルイスＡ抗原陰
性細胞）を20：1または10：1 の比率でバイスペシフィ
ック抗体（１μg/ml）の存在下および非存在下で４時間
培養し、死滅細胞から遊離する51Crのガンマー線を測定
することにより抗腫瘍効果を調べた。活性化ＣＤ８＋Ｔ
細胞を用いたときの結果を図２に、活性化ＣＤ４＋Ｔ細
胞を用いたときの結果を図３に示した。
Crで標識したシアリルルイスＡ抗原を高発現する細胞
（シアリルルイスＡ抗原陽性細胞）あるいはシアリルル
イスＡ抗原を発現しない細胞（シアリルルイスＡ抗原陰
性細胞）を20：1または10：1 の比率でバイスペシフィ
ック抗体（１μg/ml）の存在下および非存在下で４時間
培養し、死滅細胞から遊離する51Crのガンマー線を測定
することにより抗腫瘍効果を調べた。活性化ＣＤ８＋Ｔ
細胞を用いたときの結果を図２に、活性化ＣＤ４＋Ｔ細
胞を用いたときの結果を図３に示した。
【００３６】その結果、図２および図３に示すようにシ
アリルルイスＡ抗原陽性細胞 Colo205、LS174T、NUGC
2、HCL-1、KATO III、SW1116は、高率に死滅した。一
方、シアリルルイスＡ抗原陰性細胞 IMR32はほとんど
死滅しなかった。
アリルルイスＡ抗原陽性細胞 Colo205、LS174T、NUGC
2、HCL-1、KATO III、SW1116は、高率に死滅した。一
方、シアリルルイスＡ抗原陰性細胞 IMR32はほとんど
死滅しなかった。
【００３７】
【発明の効果】本発明によれば癌の治療に有効な抗シア
リルルイスＡモノクローナル抗体と抗ＣＤ３モノクロー
ナル抗体よりなるバイスペシフィック抗体を提供でき
る。
リルルイスＡモノクローナル抗体と抗ＣＤ３モノクロー
ナル抗体よりなるバイスペシフィック抗体を提供でき
る。
【図１】 バイスペシフィック抗体と活性化ＣＤ４＋Ｔ
細胞（Ａ）および活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｂ）および細
胞LS174T（Ｃ）との反応性を蛍光抗体法で調べ、フロー
サイトメトリー(FACScan)で解析した結果を示す。ａ；
抗体を反応させないときの蛍光パターン。ｂ；モノクロ
ーナル抗体ＯＫＴ３を反応させたときのパターン。ｃ；
モノクローナル抗体ＫＭ２３１を反応させたときのパタ
ーン。ｄ；バイスペシフィック抗体を反応させたときの
パターン。
細胞（Ａ）および活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｂ）および細
胞LS174T（Ｃ）との反応性を蛍光抗体法で調べ、フロー
サイトメトリー(FACScan)で解析した結果を示す。ａ；
抗体を反応させないときの蛍光パターン。ｂ；モノクロ
ーナル抗体ＯＫＴ３を反応させたときのパターン。ｃ；
モノクローナル抗体ＫＭ２３１を反応させたときのパタ
ーン。ｄ；バイスペシフィック抗体を反応させたときの
パターン。
【図２】 バイスペシフィック抗体存在下または非存在
下における活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の、51Crで標識したシ
アリルルイスＡ抗原陽性あるいは陰性細胞に対する抗腫
瘍効果を示す。白ヌキグラフは、バイスペシフィック抗
体非存在下、斜線グラフは、バイスペシフィック抗体存
在下における細胞障害活性を示す。
下における活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の、51Crで標識したシ
アリルルイスＡ抗原陽性あるいは陰性細胞に対する抗腫
瘍効果を示す。白ヌキグラフは、バイスペシフィック抗
体非存在下、斜線グラフは、バイスペシフィック抗体存
在下における細胞障害活性を示す。
【図３】 バイスペシフィック抗体存在下または非存在
下における活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞の、51Crで標識したシ
アリルルイスＡ抗原陽性あるいは陰性細胞に対する抗腫
瘍効果を示す。白ヌキグラフは、バイスペシフィック抗
体非存在下、斜線グラフは、バイスペシフィック抗体存
在下における細胞障害活性を示す。
下における活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞の、51Crで標識したシ
アリルルイスＡ抗原陽性あるいは陰性細胞に対する抗腫
瘍効果を示す。白ヌキグラフは、バイスペシフィック抗
体非存在下、斜線グラフは、バイスペシフィック抗体存
在下における細胞障害活性を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 5/20 15/06 Ｃ１２Ｐ 21/06 8214−4Ｂ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (3)
- 【請求項１】 抗シアリルルイスＡモノクローナル抗体
と抗ＣＤ３モノクローナル抗体とからなり、シアリルル
イスＡ抗原とＣＤ３とに反応性を有するバイスペシフィ
ック抗体。 - 【請求項２】 抗シアリルルイスＡモノクローナル抗体
がＫＭ２３１である請求項１記載のバイスペシフィック
抗体。 - 【請求項３】 抗ＣＤ３モノクローナル抗体がＯＫＴ３
である請求項１記載のバイスペシフィック抗体。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4186874A JPH0630786A (ja) | 1992-07-14 | 1992-07-14 | バイスペシフィック抗体 |
| CA002100377A CA2100377A1 (en) | 1992-07-14 | 1993-07-13 | Bispecific antibody |
| EP93111232A EP0581108A3 (en) | 1992-07-14 | 1993-07-13 | Bispecific antibody that reacts with sialyl-lea antigen and CD3. |
| AU41957/93A AU4195793A (en) | 1992-07-14 | 1993-07-14 | Bispecific antibody |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4186874A JPH0630786A (ja) | 1992-07-14 | 1992-07-14 | バイスペシフィック抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0630786A true JPH0630786A (ja) | 1994-02-08 |
Family
ID=16196194
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4186874A Withdrawn JPH0630786A (ja) | 1992-07-14 | 1992-07-14 | バイスペシフィック抗体 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0581108A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0630786A (ja) |
| AU (1) | AU4195793A (ja) |
| CA (1) | CA2100377A1 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6249533B1 (en) | 1996-11-29 | 2001-06-19 | Advantest Corporation | Pattern generator |
| JP2007270552A (ja) * | 2006-03-31 | 2007-10-18 | Univ Waseda | 信号処理方法、信号処理プログラムおよび記録媒体 |
| JP2016534735A (ja) * | 2013-08-26 | 2016-11-10 | マブバクス セラピューティクス， インコーポレイテッド | シアリル−Ｌｅｗｉｓ ａに対するヒト抗体をコードする核酸 |
| JP2017516786A (ja) * | 2014-05-28 | 2017-06-22 | エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | ヒト及びカニクイザルｃｄ３イプシロンに結合する抗体 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150231241A1 (en) * | 2012-08-14 | 2015-08-20 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for inducing immune response to disease |
-
1992
- 1992-07-14 JP JP4186874A patent/JPH0630786A/ja not_active Withdrawn
-
1993
- 1993-07-13 CA CA002100377A patent/CA2100377A1/en not_active Abandoned
- 1993-07-13 EP EP93111232A patent/EP0581108A3/en not_active Withdrawn
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