JPH06277090A - 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 - Google Patents
新規ペプチド、それを製造する方法及び用途Info
- Publication number
- JPH06277090A JPH06277090A JP5092551A JP9255193A JPH06277090A JP H06277090 A JPH06277090 A JP H06277090A JP 5092551 A JP5092551 A JP 5092551A JP 9255193 A JP9255193 A JP 9255193A JP H06277090 A JPH06277090 A JP H06277090A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- tyr
- leu
- gly
- angiotensin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は、アンギオテンシン変換酵素阻害作
用をもち血圧降下剤として有用な、新規ペプチド及びそ
の製造法に関する。 【構成】 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨで示され
る新規ペプチドであり、該ペプチドはカゼインを加水分
解することによって製造される。
用をもち血圧降下剤として有用な、新規ペプチド及びそ
の製造法に関する。 【構成】 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨで示され
る新規ペプチドであり、該ペプチドはカゼインを加水分
解することによって製造される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、下記構造を有する新規
なペプチドを提供するものであり、アンギオテンシン変
換酵素阻害剤等として有用なペプチドに関する。 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨ
なペプチドを提供するものであり、アンギオテンシン変
換酵素阻害剤等として有用なペプチドに関する。 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨ
【０００２】
【従来の技術】アンギオテンシン変換酵素は、主として
肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテ
ンシンI（Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−
Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）に作用し
て、アンギオテンシンIのＣ末端よりジペプチド（Ｈｉ
ｓ9−Ｌｅｕ10）を開裂遊離させ、強力な昇圧作用を有
するアンギオテンシンIIを生成させる酵素である。ま
た、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニンを破
壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関与して
いる。従来より、アンギオテンシン変換酵素の活性を阻
害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予防、治
療に有効であると考えられている。最近ではプロリン誘
導体であるカプトプリルが合成され、降圧活性が確認さ
れて以来、種々のアンギオテンシン変換酵素阻害物質の
合成研究が盛んであり、又天然物からの取得も試みられ
ているところである。天然物由来のアンギオテンシン変
換酵素阻害剤は食品あるいは食品原料から得られるので
低毒性で安全性の高い降圧剤となることが期待されるか
らである。
肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテ
ンシンI（Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−
Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）に作用し
て、アンギオテンシンIのＣ末端よりジペプチド（Ｈｉ
ｓ9−Ｌｅｕ10）を開裂遊離させ、強力な昇圧作用を有
するアンギオテンシンIIを生成させる酵素である。ま
た、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニンを破
壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関与して
いる。従来より、アンギオテンシン変換酵素の活性を阻
害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予防、治
療に有効であると考えられている。最近ではプロリン誘
導体であるカプトプリルが合成され、降圧活性が確認さ
れて以来、種々のアンギオテンシン変換酵素阻害物質の
合成研究が盛んであり、又天然物からの取得も試みられ
ているところである。天然物由来のアンギオテンシン変
換酵素阻害剤は食品あるいは食品原料から得られるので
低毒性で安全性の高い降圧剤となることが期待されるか
らである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、天然物
中に見出されるアンギオテンシン変換酵素阻害物質は極
めてまれで、僅かにブラジル産や日本産蛇毒より得られ
たテプロタイド（ノナペプチド，ＳＱ２０８８１）等
や、ストレプトミセス属に属する放線菌の代謝産物ＩＳ
８３（特開昭５８−１７７９２０号公報）が知られてい
るに過ぎない。また、天然物を酵素処理して得られたア
ンギオテンシン変換酵素阻害物質としては、牛乳カゼイ
ンをトリプシンにより分解して得たペプチド類等が知ら
れているが（特開昭５８−１０９４２５号、同５９−４
４３２３号、同５９−４４３２４号、同６１−３６２２
６号、同６１−３６２２７号）新規な阻害物質の開発が
望まれているところである。
中に見出されるアンギオテンシン変換酵素阻害物質は極
めてまれで、僅かにブラジル産や日本産蛇毒より得られ
たテプロタイド（ノナペプチド，ＳＱ２０８８１）等
や、ストレプトミセス属に属する放線菌の代謝産物ＩＳ
８３（特開昭５８−１７７９２０号公報）が知られてい
るに過ぎない。また、天然物を酵素処理して得られたア
ンギオテンシン変換酵素阻害物質としては、牛乳カゼイ
ンをトリプシンにより分解して得たペプチド類等が知ら
れているが（特開昭５８−１０９４２５号、同５９−４
４３２３号、同５９−４４３２４号、同６１−３６２２
６号、同６１−３６２２７号）新規な阻害物質の開発が
望まれているところである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる課
題を解決すべく天然物質で副作用の少ないアンギオテン
シン変換酵素阻害物質を鋭意探索した結果、蛋白質特に
カゼインを特定の酵素で加水分解した組成物中にアンギ
オテンシン変換酵素阻害活性を有する物質の存在をつき
とめ、該物質がＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨより
なるペプチドであることを知見し、本発明を完成した。
題を解決すべく天然物質で副作用の少ないアンギオテン
シン変換酵素阻害物質を鋭意探索した結果、蛋白質特に
カゼインを特定の酵素で加水分解した組成物中にアンギ
オテンシン変換酵素阻害活性を有する物質の存在をつき
とめ、該物質がＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨより
なるペプチドであることを知見し、本発明を完成した。
【０００５】本発明のＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｏ
Ｈよりなるペプチドは文献未載の新規なペプチドであ
り、カゼイン等の蛋白質をサーモライシンによって加水
分解することによって製造され、実用にあたっては組成
物をそのまま用いても良く、あるいは必要に応じて精製
して使用される。更にはペプチド合成の常套手段を適用
して合成することによって製造することもできる。上記
でいうＬｅｕはロイシン、Ｇｌｙはグリシン、Ｔｙｒは
チロシンを意味し、かかるアミノ酸はいずれもＬ−体で
ある。
Ｈよりなるペプチドは文献未載の新規なペプチドであ
り、カゼイン等の蛋白質をサーモライシンによって加水
分解することによって製造され、実用にあたっては組成
物をそのまま用いても良く、あるいは必要に応じて精製
して使用される。更にはペプチド合成の常套手段を適用
して合成することによって製造することもできる。上記
でいうＬｅｕはロイシン、Ｇｌｙはグリシン、Ｔｙｒは
チロシンを意味し、かかるアミノ酸はいずれもＬ−体で
ある。
【０００６】本発明のペプチドは蛋白質をサーモライシ
ンで加水分解することによっても、ペプチド合成法でも
取得できる。蛋白質をサーモライシンで加水分解するに
は、蛋白質の性状により処法は異なるが、難溶性の場合
には熱水に蛋白質を混合し強力な撹拌でホモジナイズ
し、所定量のサーモライシンを加え温度１０〜８５℃程
度で０．１〜４８時間反応を行う。蛋白質としては、動
物由来や微生物由来のもの等が任意に用いられ、特に有
用なものはカゼインである。加水分解液中には本発明の
ペプチド以外に、他のペプチドが存在してるが、これら
は混合物のままで各種の用途に用いられても良く、又、
本発明のペプチドのみを単離して用いても差し支えな
い。単離する場合は加水分解液を遠心分離等の公知の操
作で濾過する。その後抽出、濃縮、乾固などを適用した
後、あるいはせずしてそのまま、種々の吸着剤に対する
吸着親和性の差、種々の溶剤に対する溶解性あるいは溶
解度の差、２種の混ざり合わない液相間における分配の
差、分子の大きさに基づく溶出速度の差、溶液からの析
出性あるいは析出速度の差などを利用する手段を適用し
て目的物を単離するのが好ましい。これらの方法は必要
に応じて単独に用いられ、あるいは任意の順序に組合
せ、また反覆して適用される。
ンで加水分解することによっても、ペプチド合成法でも
取得できる。蛋白質をサーモライシンで加水分解するに
は、蛋白質の性状により処法は異なるが、難溶性の場合
には熱水に蛋白質を混合し強力な撹拌でホモジナイズ
し、所定量のサーモライシンを加え温度１０〜８５℃程
度で０．１〜４８時間反応を行う。蛋白質としては、動
物由来や微生物由来のもの等が任意に用いられ、特に有
用なものはカゼインである。加水分解液中には本発明の
ペプチド以外に、他のペプチドが存在してるが、これら
は混合物のままで各種の用途に用いられても良く、又、
本発明のペプチドのみを単離して用いても差し支えな
い。単離する場合は加水分解液を遠心分離等の公知の操
作で濾過する。その後抽出、濃縮、乾固などを適用した
後、あるいはせずしてそのまま、種々の吸着剤に対する
吸着親和性の差、種々の溶剤に対する溶解性あるいは溶
解度の差、２種の混ざり合わない液相間における分配の
差、分子の大きさに基づく溶出速度の差、溶液からの析
出性あるいは析出速度の差などを利用する手段を適用し
て目的物を単離するのが好ましい。これらの方法は必要
に応じて単独に用いられ、あるいは任意の順序に組合
せ、また反覆して適用される。
【０００７】本発明のペプチドはペプチド合成に通常用
いられる方法、即ち液相法または固相法でペプチド結合
の任意の位置で二分される２種のフラグメントの一方に
相当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方の
フラグメントに相当する反応性アミノ基を有する原料と
をカルボジイミド法、活性エステル法等を用いて縮合さ
せ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基
を除去させることによっても製造し得る。
いられる方法、即ち液相法または固相法でペプチド結合
の任意の位置で二分される２種のフラグメントの一方に
相当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方の
フラグメントに相当する反応性アミノ基を有する原料と
をカルボジイミド法、活性エステル法等を用いて縮合さ
せ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基
を除去させることによっても製造し得る。
【０００８】この反応工程において反応に関与すべきで
ない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−
ブチルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニルイソプロピロ
オキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル等が挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は例えばアルキルエステル、ベンジルエステル等を形成
し得る基が挙げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカ
ルボキシル基はクロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、
Ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合
している。縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の存
在下にあるいはＮ−保護アミノ酸活性エステルまたはペ
プチド活性エステルを用いて実施する。
ない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−
ブチルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニルイソプロピロ
オキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル等が挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は例えばアルキルエステル、ベンジルエステル等を形成
し得る基が挙げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカ
ルボキシル基はクロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、
Ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合
している。縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の存
在下にあるいはＮ−保護アミノ酸活性エステルまたはペ
プチド活性エステルを用いて実施する。
【０００９】縮合反応終了後、保護基は除去されるが、
固相法の場合はさらにペプチドのＣ末端と樹脂との結合
を切断する。更に、本発明のペプチドは通常の方法に従
い精製される。例えばイオン交換クロマトグラフィー、
逆相液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマト
グラフィー等が挙げられる。本発明で使用するペプチド
の投与経路としては、経口投与、非経口投与、直腸内投
与のいずれでもよいが、経口投与が好ましい。本発明の
ペプチドの投与量は、化合物の種類、投与方法、患者の
症状・年令等により異なるが、通常１回０．００１〜１
０００ｍｇ、好ましくは０．０１〜１０ｍｇを１日当た
り１〜３回である。本発明のペプチドは通常、製剤用担
体と混合して調製した製剤の形で投与される。
固相法の場合はさらにペプチドのＣ末端と樹脂との結合
を切断する。更に、本発明のペプチドは通常の方法に従
い精製される。例えばイオン交換クロマトグラフィー、
逆相液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマト
グラフィー等が挙げられる。本発明で使用するペプチド
の投与経路としては、経口投与、非経口投与、直腸内投
与のいずれでもよいが、経口投与が好ましい。本発明の
ペプチドの投与量は、化合物の種類、投与方法、患者の
症状・年令等により異なるが、通常１回０．００１〜１
０００ｍｇ、好ましくは０．０１〜１０ｍｇを１日当た
り１〜３回である。本発明のペプチドは通常、製剤用担
体と混合して調製した製剤の形で投与される。
【００１０】製剤用担体としては、製剤分野において常
用され、かつ本発明のペプチドと反応しない物質が用い
られる。具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マンニッ
ト、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、庶
糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸ア
ルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、
ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロ
ースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、
ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロー
ス、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニル
ピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、
ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベン
トナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エ
ステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸
グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチ
ン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流
動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イ
オン界面活性剤、プロピレングリコール、水等が挙げら
れる。
用され、かつ本発明のペプチドと反応しない物質が用い
られる。具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マンニッ
ト、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、庶
糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸ア
ルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、
ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロ
ースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、
ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロー
ス、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニル
ピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、
ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベン
トナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エ
ステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸
グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチ
ン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流
動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イ
オン界面活性剤、プロピレングリコール、水等が挙げら
れる。
【００１１】剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤
にあっては、用時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸
濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方
法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発
明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応
じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよ
く、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。これらの製
剤は、本発明のペプチドを０．０１％以上、好ましくは
０．５〜７０％の割合で含有することができる。これら
の製剤はまた、治療上価値ある他の成分を含有していて
もよい。
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤
にあっては、用時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸
濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方
法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発
明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応
じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよ
く、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。これらの製
剤は、本発明のペプチドを０．０１％以上、好ましくは
０．５〜７０％の割合で含有することができる。これら
の製剤はまた、治療上価値ある他の成分を含有していて
もよい。
【００１２】
【作用】本発明のペプチドは、新規なペプチドであり優
れたアンギオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血圧降
下作用、ブラジキニン不活化抑制作用を示し本態性高血
圧、腎性高血圧、副腎性高血圧などの高血圧症の予防、
治療剤、これらの疾患の診断剤や各種の病態において用
いられる血圧降下剤、狭心病発作の閾値上昇、心筋梗塞
の減少、うっ血性心不全における病態の改善剤として有
用である。
れたアンギオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血圧降
下作用、ブラジキニン不活化抑制作用を示し本態性高血
圧、腎性高血圧、副腎性高血圧などの高血圧症の予防、
治療剤、これらの疾患の診断剤や各種の病態において用
いられる血圧降下剤、狭心病発作の閾値上昇、心筋梗塞
の減少、うっ血性心不全における病態の改善剤として有
用である。
【００１３】
（Ａ）カゼイン５ｇに水４０ｍｌを加え充分ホモジナイ
ズし、サーモライシンを２０ｍｇ加え３７℃、ｐＨ７で
３時間加水分解反応を行った。１００℃で１０分間煮沸
し、冷却後遠心分離して濃縮し、高速液体クロマトグラ
フィー（ＯＤＳ−，Ｐｈ−及びＣＮ−カラム）により精
製し、ペプチドを得た。本品を気相プロテインシーケン
サー（アブライド バイオシステムズ社製 ４７７ Ａ
型）を用いる自動エドマン分解法を適用してアミノ酸配
列を分析し、下記の構造を得た。 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨ
ズし、サーモライシンを２０ｍｇ加え３７℃、ｐＨ７で
３時間加水分解反応を行った。１００℃で１０分間煮沸
し、冷却後遠心分離して濃縮し、高速液体クロマトグラ
フィー（ＯＤＳ−，Ｐｈ−及びＣＮ−カラム）により精
製し、ペプチドを得た。本品を気相プロテインシーケン
サー（アブライド バイオシステムズ社製 ４７７ Ａ
型）を用いる自動エドマン分解法を適用してアミノ酸配
列を分析し、下記の構造を得た。 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨ
【００１４】該ペプチドの物性値はつぎのとうりであ
る。 ＴＬＣ［ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝１５：
３：１０：１２］ （シリカゲルプレート、ニンヒドリン発色） Ｒｆ：０．５４
る。 ＴＬＣ［ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝１５：
３：１０：１２］ （シリカゲルプレート、ニンヒドリン発色） Ｒｆ：０．５４
【００１５】〔ペプチドの合成〕市販のＢｏｃ（ブトキ
シカルボニル）−Ｔｙｒ（Ｃｌ2−Ｂｚｌ）（ジクロル
ベンジル基）−Ｏ−Ｒｅｓｉｎ（置換率０．４５ｍｅｑ
／ｇ）０．６７ｇをバイオサーチ社のペプチド合成装置
ＳＡＭ２の反応槽に分取し、以下のように合成を行っ
た。４５％トリフルオロ酢酸、２．５％アニソールを含
む塩化メチレン中、２５分間の反応により、Ｂｏｃ基を
除去したのち、塩化メチレンによる洗浄、１０％ジイソ
プロピルエチルアミンを含む塩化メチレンによる中和、
及び塩化メチレンによる洗浄を行った。これと５ｍｌの
０．４Ｍ Ｂｏｃ−Ｇｌｙのジメチルホルムアミド溶
液、５ｍｌの０．４Ｍジイソプロピルカルボジイミドの
塩化メチレン溶液とを混合した後、反応槽に加え、室温
にて２時間撹拌反応させた。
シカルボニル）−Ｔｙｒ（Ｃｌ2−Ｂｚｌ）（ジクロル
ベンジル基）−Ｏ−Ｒｅｓｉｎ（置換率０．４５ｍｅｑ
／ｇ）０．６７ｇをバイオサーチ社のペプチド合成装置
ＳＡＭ２の反応槽に分取し、以下のように合成を行っ
た。４５％トリフルオロ酢酸、２．５％アニソールを含
む塩化メチレン中、２５分間の反応により、Ｂｏｃ基を
除去したのち、塩化メチレンによる洗浄、１０％ジイソ
プロピルエチルアミンを含む塩化メチレンによる中和、
及び塩化メチレンによる洗浄を行った。これと５ｍｌの
０．４Ｍ Ｂｏｃ−Ｇｌｙのジメチルホルムアミド溶
液、５ｍｌの０．４Ｍジイソプロピルカルボジイミドの
塩化メチレン溶液とを混合した後、反応槽に加え、室温
にて２時間撹拌反応させた。
【００１６】得られた樹脂をジメチルホルムアミド、塩
化メチレン、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む
塩化メチレン、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメ
チルホルムアミドとの混合液で洗浄し、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ
−Ｔｙｒ（Ｃｌ2−Ｂｚｌ）−樹脂を得た。引き続き同
様のＢｏｃ基の除去、Ｂｏｃとアミノ酸のカップリング
を繰り返しＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（Ｃｌ2−Ｂｚｌ）
−樹脂を得た。該樹脂を２０ｍｌの１０％アニソールを
含むフッ化水素中で０℃、１時間撹拌し、ペプチドを樹
脂から遊離させた。フッ化水素を減圧留去し、残渣を３
０％酢酸で抽出し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。こ
れをＯＤＳカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ18）による
逆相クロマトグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨ（収量５６．１ｍｇ）を得た。本品
を前記と同一のプロテインシーケンサーにより分析した
結果、上記の組成であることが判明した。
化メチレン、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む
塩化メチレン、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメ
チルホルムアミドとの混合液で洗浄し、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ
−Ｔｙｒ（Ｃｌ2−Ｂｚｌ）−樹脂を得た。引き続き同
様のＢｏｃ基の除去、Ｂｏｃとアミノ酸のカップリング
を繰り返しＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（Ｃｌ2−Ｂｚｌ）
−樹脂を得た。該樹脂を２０ｍｌの１０％アニソールを
含むフッ化水素中で０℃、１時間撹拌し、ペプチドを樹
脂から遊離させた。フッ化水素を減圧留去し、残渣を３
０％酢酸で抽出し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。こ
れをＯＤＳカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ18）による
逆相クロマトグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨ（収量５６．１ｍｇ）を得た。本品
を前記と同一のプロテインシーケンサーにより分析した
結果、上記の組成であることが判明した。
【００１７】該ペプチドの物性値はつぎのとうりであ
る。尚、ＴＬＣの溶媒は以下すべて前記と同一である。 Ｒｆ：０．５４
る。尚、ＴＬＣの溶媒は以下すべて前記と同一である。 Ｒｆ：０．５４
【００１８】（アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測
定）アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定は、Ｃｈ
ｅｕｎｇとＣｕｓｈｍａｎの方法〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｐｈａｒａｍａｃｏｌｏｇｙ ２０，１６３７
(１９７１)〕に準じて以下の方法で行った。 酵素基質；Ｂｚ（ベンジル）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ
（８６ｍｇを水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶解した
溶液） 酵 素；うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製）
（１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍｌ中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液） 上記の酵素基質を１００μｌ、酵素溶液を１２μｌ及び
本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水で全体を２５
０μｌとした後、３７℃で３０分間反応を行った。
定）アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定は、Ｃｈ
ｅｕｎｇとＣｕｓｈｍａｎの方法〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｐｈａｒａｍａｃｏｌｏｇｙ ２０，１６３７
(１９７１)〕に準じて以下の方法で行った。 酵素基質；Ｂｚ（ベンジル）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ
（８６ｍｇを水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶解した
溶液） 酵 素；うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製）
（１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍｌ中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液） 上記の酵素基質を１００μｌ、酵素溶液を１２μｌ及び
本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水で全体を２５
０μｌとした後、３７℃で３０分間反応を行った。
【００１９】反応は１Ｎ−ＨＣｌ ２５０μｌを用いて
終了させた。反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れ
Ｖｏｒｔｅｘで１５秒撹拌し、それを遠心分離した。酢
酸エチル層から１．０ｍｌをとり出して、酢酸エチルを
留去し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し、
抽出された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（Ｏ
Ｄ228）を測定した。阻害率は阻害剤なしで反応したと
きのＯＤ228を１００％とし、反応時間０分のときのＯ
Ｄ228を０％として求め阻害率５０％の時の阻害剤（本
発明のペプチド）の濃度ＩＣ50（μＭ）で活性を表示す
ると１５．５であった。
終了させた。反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れ
Ｖｏｒｔｅｘで１５秒撹拌し、それを遠心分離した。酢
酸エチル層から１．０ｍｌをとり出して、酢酸エチルを
留去し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し、
抽出された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（Ｏ
Ｄ228）を測定した。阻害率は阻害剤なしで反応したと
きのＯＤ228を１００％とし、反応時間０分のときのＯ
Ｄ228を０％として求め阻害率５０％の時の阻害剤（本
発明のペプチド）の濃度ＩＣ50（μＭ）で活性を表示す
ると１５．５であった。
【００２０】
【発明の効果】本発明ではアンギオテンシン変換酵素阻
害剤として有用な、新規なペプチドが得られる。
害剤として有用な、新規なペプチドが得られる。
Claims (4)
- 【請求項１】 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨより
なる新規ペプチド。 - 【請求項２】 蛋白質をサ−モライシンで加水分解する
ことを特徴とするＨ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨよ
りなる新規ペプチドを製造する方法。 - 【請求項３】 蛋白質としてカゼインを使用する請求項
２記載の製造法。 - 【請求項４】 Ｈ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−ＯＨより
なるペプチドを有効成分とするアンギオテンシン変換酵
素阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09255193A JP3465921B2 (ja) | 1993-03-26 | 1993-03-26 | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09255193A JP3465921B2 (ja) | 1993-03-26 | 1993-03-26 | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06277090A true JPH06277090A (ja) | 1994-10-04 |
| JP3465921B2 JP3465921B2 (ja) | 2003-11-10 |
Family
ID=14057542
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP09255193A Expired - Fee Related JP3465921B2 (ja) | 1993-03-26 | 1993-03-26 | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3465921B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005061529A1 (ja) * | 2003-12-01 | 2005-07-07 | Meiji Dairies Corporation | アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチド |
| CN1308459C (zh) * | 2002-11-12 | 2007-04-04 | 陆晓民 | 用粗奶酪为原料制备酪蛋白降血压肽的工艺 |
-
1993
- 1993-03-26 JP JP09255193A patent/JP3465921B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1308459C (zh) * | 2002-11-12 | 2007-04-04 | 陆晓民 | 用粗奶酪为原料制备酪蛋白降血压肽的工艺 |
| WO2005061529A1 (ja) * | 2003-12-01 | 2005-07-07 | Meiji Dairies Corporation | アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチド |
| JPWO2005061529A1 (ja) * | 2003-12-01 | 2007-12-20 | 明治乳業株式会社 | アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチド |
| JP4628958B2 (ja) * | 2003-12-01 | 2011-02-09 | 明治乳業株式会社 | アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチド |
| US8637463B2 (en) | 2003-12-01 | 2014-01-28 | Meiji Dairies Corporation | Peptide inhibiting angiotensin converting enzyme |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3465921B2 (ja) | 2003-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3119674B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JP3465923B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
| JP3009718B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JP3465921B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
| JP3483212B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
| JP3465922B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
| JP3009719B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JP2953634B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JP3474610B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
| JP3465920B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
| JP3012291B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造方法及び用途 | |
| JP3112694B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
| JP2951428B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JP3629038B2 (ja) | アンギオテンシン変換酵素阻害剤 | |
| JP2965683B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
| JP3129523B2 (ja) | 新規ペプチド及びその製造方法 | |
| JP3009720B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JP2965682B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JP3086235B2 (ja) | 新規ペプチド及び用途 | |
| JP3031692B2 (ja) | 新規ペプチド、それを製造する方法及び用途 | |
| JP3992143B2 (ja) | 新規生理活性ペプチド | |
| JPH05331192A (ja) | 新規ペプチド及びそれを製造する方法 | |
| JP3012292B2 (ja) | 新規ペプチド、その製造法及び用途 | |
| JP3112695B2 (ja) | ペプチドの製造方法 | |
| JP2922247B2 (ja) | アンギオテンシン変換酵素阻害剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20070829 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080829 Year of fee payment: 5 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |