JPH06277089A - アンジオテンシン転換酵素阻害ペプチドの製造法 - Google Patents
アンジオテンシン転換酵素阻害ペプチドの製造法Info
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- JPH06277089A JPH06277089A JP5067240A JP6724093A JPH06277089A JP H06277089 A JPH06277089 A JP H06277089A JP 5067240 A JP5067240 A JP 5067240A JP 6724093 A JP6724093 A JP 6724093A JP H06277089 A JPH06277089 A JP H06277089A
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- angiotensin converting
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- angiotensin
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Abstract
(57)【要約】
【目的】鰹節を酵素分解することによりアンジオテンシ
ン転換酵素阻害ペプチド混合物を得る。 【構成】鰹節をアスペルギルス・オリゼー由来のプロテ
アーゼまたはストレプトマイセス・グリセウス由来のプ
ロテアーゼで酵素分解することにより、アンジオテンシ
ン転換酵素阻害ペプチド混合物を得る。
ン転換酵素阻害ペプチド混合物を得る。 【構成】鰹節をアスペルギルス・オリゼー由来のプロテ
アーゼまたはストレプトマイセス・グリセウス由来のプ
ロテアーゼで酵素分解することにより、アンジオテンシ
ン転換酵素阻害ペプチド混合物を得る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はアンジオテンシン転換酵
素阻害ペプチド混合物の製造法に関する。アンジオテン
シン転換酵素は生体内で血圧上昇ペプチドであるアンジ
オテンシンＩＩを生成する酵素であるので、本発明で製
造した食品は血圧降下作用を有した食品として利用で
き、高血圧を抑制できる。
素阻害ペプチド混合物の製造法に関する。アンジオテン
シン転換酵素は生体内で血圧上昇ペプチドであるアンジ
オテンシンＩＩを生成する酵素であるので、本発明で製
造した食品は血圧降下作用を有した食品として利用で
き、高血圧を抑制できる。
【０００２】
【従来の技術】高血圧症は近年患者数が増加している疾
病の一つであり、効果的な予防、治療法の開発が望まれ
ている。生体内での血圧の調節には様々なメカニズムが
関与しているといわれるがそのうちの一つにレニン・ア
ンジオテンシン系が知られている。
病の一つであり、効果的な予防、治療法の開発が望まれ
ている。生体内での血圧の調節には様々なメカニズムが
関与しているといわれるがそのうちの一つにレニン・ア
ンジオテンシン系が知られている。
【０００３】レニン・アンジオテンシン系は血圧を上昇
させる調節系である。腎臓で生成される酵素であるレニ
ンが、血管中でアンジオテシノ−ゲンに作用してアミノ
酸１０個からなるペプチドであるアンジオテンシンＩ
（ＡｓｐーＡｒｇーＶａｌーＴｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−
ＰｒｏーＰｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）を生成する。アンジ
オテンシン転換酵素の作用により、アンジオテンシンＩ
のＣ末端からジペプチドＨｉｓ−Ｌｅｕが遊離し、アミ
ノ酸８個からなるアンジオテンシンＩＩ（Ａｓｐ−Ａｒ
ｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈ
ｅ）が生成する。アンジオテンシンＩＩは血管平滑筋を
収縮させて血圧を上昇させ、副腎皮質からアルドステロ
ンを分泌させ、腎臓でナトリウムを再吸収させることに
よって血圧を上昇させる。
させる調節系である。腎臓で生成される酵素であるレニ
ンが、血管中でアンジオテシノ−ゲンに作用してアミノ
酸１０個からなるペプチドであるアンジオテンシンＩ
（ＡｓｐーＡｒｇーＶａｌーＴｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−
ＰｒｏーＰｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）を生成する。アンジ
オテンシン転換酵素の作用により、アンジオテンシンＩ
のＣ末端からジペプチドＨｉｓ−Ｌｅｕが遊離し、アミ
ノ酸８個からなるアンジオテンシンＩＩ（Ａｓｐ−Ａｒ
ｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈ
ｅ）が生成する。アンジオテンシンＩＩは血管平滑筋を
収縮させて血圧を上昇させ、副腎皮質からアルドステロ
ンを分泌させ、腎臓でナトリウムを再吸収させることに
よって血圧を上昇させる。
【０００４】血圧を下げるメカニズムとしては、カリク
レイン・キニン系が知られているが、ここで生成するキ
ニンは、血管を拡張することによって血圧を降下させ
る。しかしながらこのキニンはアンジオテンシン転換酵
素の作用により分解するので血圧降下が抑制される。
レイン・キニン系が知られているが、ここで生成するキ
ニンは、血管を拡張することによって血圧を降下させ
る。しかしながらこのキニンはアンジオテンシン転換酵
素の作用により分解するので血圧降下が抑制される。
【０００５】このようにレニン・アンジオテンシン系と
カリクレイン・キニン系の両者においてアンジオテンシ
ン転換酵素は血圧を上昇させる。したがってアンジオテ
ンシン転換酵素を阻害することによって血圧上昇を抑え
る試みがなされている。
カリクレイン・キニン系の両者においてアンジオテンシ
ン転換酵素は血圧を上昇させる。したがってアンジオテ
ンシン転換酵素を阻害することによって血圧上昇を抑え
る試みがなされている。
【０００６】
【本発明が解決しようとする問題点】また、近年魚肉の
タンパク質由来のペプチドにアンジオテンシン転換酵素
の阻害作用があることがわかってきている。例えば、特
開昭62-169732ではバチルス属のセリンプロテアーゼ、
バチルス属のエンドプロテアーゼ、植物由来のチオール
プロテアーゼで魚肉または大豆を分解してアンジオテン
シン転換酵素阻害ペプチド混合物を製造する方法が示さ
れている。特開平4-304896ではバチルス・サブチルスの
中性プロテアーゼ、アスペルギルス・ニガーの酸性プロ
テアーゼ、リゾープス・デレマーの酸性プロテアーゼで
鰹や鰹節由来物質を分解する方法が示されている。しか
しながら他の方法も望まれている。
タンパク質由来のペプチドにアンジオテンシン転換酵素
の阻害作用があることがわかってきている。例えば、特
開昭62-169732ではバチルス属のセリンプロテアーゼ、
バチルス属のエンドプロテアーゼ、植物由来のチオール
プロテアーゼで魚肉または大豆を分解してアンジオテン
シン転換酵素阻害ペプチド混合物を製造する方法が示さ
れている。特開平4-304896ではバチルス・サブチルスの
中性プロテアーゼ、アスペルギルス・ニガーの酸性プロ
テアーゼ、リゾープス・デレマーの酸性プロテアーゼで
鰹や鰹節由来物質を分解する方法が示されている。しか
しながら他の方法も望まれている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために種々検討した結果、本発明を完成する
にいたった。
を解決するために種々検討した結果、本発明を完成する
にいたった。
【０００８】すなわち、本発明は、簡単で効果的にアン
ジオテンシン転換酵素阻害ペプチド混合物を製造する方
法と食品への応用に関する。
ジオテンシン転換酵素阻害ペプチド混合物を製造する方
法と食品への応用に関する。
【０００９】本発明で言うアンジオテンシン転換酵素阻
害ペプチド混合物はアスペルギルス・オリゼーのプロテ
アーゼあるいは放線菌由来のプロテアーゼを鰹節に作用
させることにより得られる。なお、ここでいう鰹節は本
枯節、荒節、なまり節を含む。
害ペプチド混合物はアスペルギルス・オリゼーのプロテ
アーゼあるいは放線菌由来のプロテアーゼを鰹節に作用
させることにより得られる。なお、ここでいう鰹節は本
枯節、荒節、なまり節を含む。
【００１０】用いる酵素濃度は節に対して0.1〜5.0％程
度で、４０℃から６０℃で２〜４時間程度が適当であ
る。ペプチドの使用にあたっては単独であるいは食品に
加工して摂取できる。
度で、４０℃から６０℃で２〜４時間程度が適当であ
る。ペプチドの使用にあたっては単独であるいは食品に
加工して摂取できる。
【００１１】
【実施例１】以下、実施例により本発明を具体的に説明
する。鰹本がれ節２０ｇを５ｍｍ程度に粉砕し、１２０
ｇの水を加えた。これに還流管をつけ、沸騰湯浴中で、
１５分間加熱し、温度を５０℃にしてから３Ｎ塩酸でｐ
Ｈを３．０に調整し、天野製薬製のプロテアーゼＭ「ア
マノ」１００ｍｇを添加し、撹拌しながら酵素分解を行
った。酵素添加後、２、３、４時間してから反応液１０
ｍｌを採取し、８５℃で８分間加熱し、酵素を失活させ
て未反応の残渣を７０００ｒ．ｐ．ｍで３分間遠心分離
した上澄を酵素分解液とした。
する。鰹本がれ節２０ｇを５ｍｍ程度に粉砕し、１２０
ｇの水を加えた。これに還流管をつけ、沸騰湯浴中で、
１５分間加熱し、温度を５０℃にしてから３Ｎ塩酸でｐ
Ｈを３．０に調整し、天野製薬製のプロテアーゼＭ「ア
マノ」１００ｍｇを添加し、撹拌しながら酵素分解を行
った。酵素添加後、２、３、４時間してから反応液１０
ｍｌを採取し、８５℃で８分間加熱し、酵素を失活させ
て未反応の残渣を７０００ｒ．ｐ．ｍで３分間遠心分離
した上澄を酵素分解液とした。
【００１２】アンジオテンシン転換酵素阻害の測定は、
Ｌ-ヒプリルヒスチジルロイシンを基質とし、ウサギ肺
由来のアンジオテンシン転換酵素を用いる方法で行っ
た。ガラス製試験管にｐＨ８．３の３００ｍＭ塩化ナト
リウム含有１００ｍＭホウ酸緩衝液２８０μｌに溶解し
た本発明ペプチド混合物入れ、１０分間３７℃で加温し
た。この基質液にウサギ肺アセトンパウダー（シグマ
製）１ｇに１００ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８．３）３０
ｍｌを加え、よく撹拌した後３００００Ｇで２０分遠心
分離した上清をアンジオテンシン転換酵素として１００
μｌを加え３７℃で３０分酵素反応させた。酵素反応を
１Ｎ塩酸２５０μｌを加え停止させ、酢酸エチル（和光
純薬製紫外部吸収スペクトル用）１．５ｍｌを加え、１
５秒間振とうさせて酵素反応で生じた馬尿酸を抽出し、
２５００ｒｐｍで、１０分間遠心分離を行い酢酸エチル
層１．０ｍｌをガラス製試験管に採取した。酢酸エチル
をホットドライバスの中で１２０℃，３０分間加温して
完全に除去した後、蒸留水を加え、島津製作所製ＵＶ−
１６０−０２を用いて２２８ｎｍの吸光度を蒸留水に対
して測定し、酵素反応で生じた馬尿酸の量を求めた。
Ｌ-ヒプリルヒスチジルロイシンを基質とし、ウサギ肺
由来のアンジオテンシン転換酵素を用いる方法で行っ
た。ガラス製試験管にｐＨ８．３の３００ｍＭ塩化ナト
リウム含有１００ｍＭホウ酸緩衝液２８０μｌに溶解し
た本発明ペプチド混合物入れ、１０分間３７℃で加温し
た。この基質液にウサギ肺アセトンパウダー（シグマ
製）１ｇに１００ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８．３）３０
ｍｌを加え、よく撹拌した後３００００Ｇで２０分遠心
分離した上清をアンジオテンシン転換酵素として１００
μｌを加え３７℃で３０分酵素反応させた。酵素反応を
１Ｎ塩酸２５０μｌを加え停止させ、酢酸エチル（和光
純薬製紫外部吸収スペクトル用）１．５ｍｌを加え、１
５秒間振とうさせて酵素反応で生じた馬尿酸を抽出し、
２５００ｒｐｍで、１０分間遠心分離を行い酢酸エチル
層１．０ｍｌをガラス製試験管に採取した。酢酸エチル
をホットドライバスの中で１２０℃，３０分間加温して
完全に除去した後、蒸留水を加え、島津製作所製ＵＶ−
１６０−０２を用いて２２８ｎｍの吸光度を蒸留水に対
して測定し、酵素反応で生じた馬尿酸の量を求めた。
【００１３】アンジオテンシン転換酵素の阻害率は阻害
ペプチド混合物を添加しないで馬尿酸の生成量を測定し
た時の吸光度をＢとし、本発明阻害ペプチドを添加して
測定した時の吸光度をＳとした場合、阻害率（％）＝
（Ｂ−Ｓ）÷Ｂで求めた。なお阻害ペプチドを添加しな
い時の酵素の活性は８ｍＵであった。
ペプチド混合物を添加しないで馬尿酸の生成量を測定し
た時の吸光度をＢとし、本発明阻害ペプチドを添加して
測定した時の吸光度をＳとした場合、阻害率（％）＝
（Ｂ−Ｓ）÷Ｂで求めた。なお阻害ペプチドを添加しな
い時の酵素の活性は８ｍＵであった。
【００１４】この条件でアンジオテンシン転換酵素阻害
活性を測定すると酵素分解開始２時間後で、酵素の活性
を５０％阻害する値であるＩＣ50はタンパク質１７８μ
ｇ／ｍｌ、３時間後では１８０μｇ／ｍｌ、４時間後で
は１２６μｇ／ｍｌであり、酵素分解が進につれてアン
ジオテンシン転換酵素の阻害効果が上昇した。
活性を測定すると酵素分解開始２時間後で、酵素の活性
を５０％阻害する値であるＩＣ50はタンパク質１７８μ
ｇ／ｍｌ、３時間後では１８０μｇ／ｍｌ、４時間後で
は１２６μｇ／ｍｌであり、酵素分解が進につれてアン
ジオテンシン転換酵素の阻害効果が上昇した。
【００１５】
【実施例２】鰹本がれ節２０ｇを５ｍｍ程度に粉砕し、
１２０ｇの水を加えた。これに還流管をつけ、沸騰湯浴
中で、１５分間加熱し、温度を５０℃にしてから４Ｎ水
酸化ナトリウム液でｐＨを７.０に調整し、科研製薬の
アクチナーゼAS１００ｍｇを添加し、撹拌しながら酵素
分解を行った。酵素添加後、２、３、４時間してから反
応液１０ｍｌを採取し、８５℃で８分間加熱し、酵素を
失活させて未反応の残渣を７０００ｒ．ｐ．ｍで３分間
遠心分離した上澄を酵素分解液とした。
１２０ｇの水を加えた。これに還流管をつけ、沸騰湯浴
中で、１５分間加熱し、温度を５０℃にしてから４Ｎ水
酸化ナトリウム液でｐＨを７.０に調整し、科研製薬の
アクチナーゼAS１００ｍｇを添加し、撹拌しながら酵素
分解を行った。酵素添加後、２、３、４時間してから反
応液１０ｍｌを採取し、８５℃で８分間加熱し、酵素を
失活させて未反応の残渣を７０００ｒ．ｐ．ｍで３分間
遠心分離した上澄を酵素分解液とした。
【００１６】アンジオテンシン転換酵素の阻害能は実施
例１と同様に測定した。その結果、酵素分解開始2時間
でＩＣ50はタンパク質３０２μｇ／ｍｌ、３時間後で２
８０μｇ／ｍｌ、４時間後で２５１μｇ／ｍｌとなり、
酵素分解が進むにつれ、アンジオテンシン転換酵素の阻
害効果が上昇した。
例１と同様に測定した。その結果、酵素分解開始2時間
でＩＣ50はタンパク質３０２μｇ／ｍｌ、３時間後で２
８０μｇ／ｍｌ、４時間後で２５１μｇ／ｍｌとなり、
酵素分解が進むにつれ、アンジオテンシン転換酵素の阻
害効果が上昇した。
【００１７】
【発明の効果】以上説明したように本発明によれば鰹節
をアスペルギルス・オリゼー由来のプロテアーゼやスト
レプトマイセス・グリセウス由来のプロテアーゼで分解
することにより、アンジオテンシン転換酵素阻害ペプチ
ドを得ることができる。
をアスペルギルス・オリゼー由来のプロテアーゼやスト
レプトマイセス・グリセウス由来のプロテアーゼで分解
することにより、アンジオテンシン転換酵素阻害ペプチ
ドを得ることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:545）
Claims (2)
- 【請求項１】鰹節をアスペルギルス・オリゼー由来のプ
ロテアーゼで分解することを特徴とするアンジオテンシ
ン転換酵素阻害ペプチド混合物の製造法。 - 【請求項２】鰹節をストレプトマイセス・グリセウス由
来のプロテアーゼで分解することを特徴とするアンジオ
テンシン転換酵素阻害ペプチド混合物の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5067240A JPH06277089A (ja) | 1993-03-26 | 1993-03-26 | アンジオテンシン転換酵素阻害ペプチドの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5067240A JPH06277089A (ja) | 1993-03-26 | 1993-03-26 | アンジオテンシン転換酵素阻害ペプチドの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06277089A true JPH06277089A (ja) | 1994-10-04 |
Family
ID=13339201
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5067240A Pending JPH06277089A (ja) | 1993-03-26 | 1993-03-26 | アンジオテンシン転換酵素阻害ペプチドの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06277089A (ja) |
-
1993
- 1993-03-26 JP JP5067240A patent/JPH06277089A/ja active Pending
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