JPH06209759A - ジアルデヒド澱粉の表面付着方法及びその生成物 - Google Patents
ジアルデヒド澱粉の表面付着方法及びその生成物Info
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- JPH06209759A JPH06209759A JP5276686A JP27668693A JPH06209759A JP H06209759 A JPH06209759 A JP H06209759A JP 5276686 A JP5276686 A JP 5276686A JP 27668693 A JP27668693 A JP 27668693A JP H06209759 A JPH06209759 A JP H06209759A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 化学的結合を起こさずに表面にジアルデヒド
澱粉を固着させる方法及びその生成物を提供する。 【構成】 ジアルデヒド澱粉の少なくとも一部が表面に
吸着されるよう当該表面上にジアルデヒド澱粉の水溶液
を十分な時間載置し、該水溶液を除去し、約５０℃から
約１５０℃の温度で前記表面を乾燥させて表面へジアル
デヒド澱粉を付着させる。
澱粉を固着させる方法及びその生成物を提供する。 【構成】 ジアルデヒド澱粉の少なくとも一部が表面に
吸着されるよう当該表面上にジアルデヒド澱粉の水溶液
を十分な時間載置し、該水溶液を除去し、約５０℃から
約１５０℃の温度で前記表面を乾燥させて表面へジアル
デヒド澱粉を付着させる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ジアルデヒド澱粉の表
面付着方法及びその生成物に関するものである。
面付着方法及びその生成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】医学的検査や研究を目的とする所望の細
胞を多数成長させるため細胞培養生成物が使用されてい
る。細胞培養生成物中の支持体に適した材料は幾つかあ
るが、一般的にポリマーが最適とされ、広く利用されて
いる。例えば、ポリスチレンは安価であり、光学的にも
透明で低い温度で処理を行うことができる。分子量が大
きな細胞付着タンパク質（CAP's)は支持体の表面に結合
する。そして、ＣＡＰがコートされた表面で細胞が成長
する。ＣＡＰ’ｓに細胞が接合しており、細胞の成長は
ＣＡＰ’ｓが促進する。ＣＡＰ’ｓはポリスチレンなど
の支持体材に簡単に結合する。しかしながら、ＣＡＰ’
ｓは大変高価であり、準凍結温度であっても貯蔵寿命が
短いといった問題がある。
胞を多数成長させるため細胞培養生成物が使用されてい
る。細胞培養生成物中の支持体に適した材料は幾つかあ
るが、一般的にポリマーが最適とされ、広く利用されて
いる。例えば、ポリスチレンは安価であり、光学的にも
透明で低い温度で処理を行うことができる。分子量が大
きな細胞付着タンパク質（CAP's)は支持体の表面に結合
する。そして、ＣＡＰがコートされた表面で細胞が成長
する。ＣＡＰ’ｓに細胞が接合しており、細胞の成長は
ＣＡＰ’ｓが促進する。ＣＡＰ’ｓはポリスチレンなど
の支持体材に簡単に結合する。しかしながら、ＣＡＰ’
ｓは大変高価であり、準凍結温度であっても貯蔵寿命が
短いといった問題がある。
【０００３】近年、これらＣＡＰ’ｓの一部、すなわ
ち、小形ペプチドがＣＡＰ’ｓの細胞付着および成長促
進作用を模倣することが明らかになった。これらのペプ
チドの安定性は極めて優れており、室温でも長期間保存
できるといった利点がある。しかし、ＣＡＰ’ｓとは異
なり、未変性のペプチドではポリスチレンなどの支持体
材に付着し難い。支持体材表面の細胞付着ペプチド（ca
p's)の表面濃度を十分にするには、材料の表面を化学的
に変性する必要がある。細胞培養生成物用支持体として
利用されている材料の大半は比較的安定しており、化学
的に変性し難いものである。化学的変性を行う方法とし
ては、強酸や有毒溶剤、プラズマまたはコロナ放電処理
を用いるのが一般的である。ｃａｐ’ｓを受け入れるよ
ういったん材料を変性すれば、この材料は活性化された
言える。
ち、小形ペプチドがＣＡＰ’ｓの細胞付着および成長促
進作用を模倣することが明らかになった。これらのペプ
チドの安定性は極めて優れており、室温でも長期間保存
できるといった利点がある。しかし、ＣＡＰ’ｓとは異
なり、未変性のペプチドではポリスチレンなどの支持体
材に付着し難い。支持体材表面の細胞付着ペプチド（ca
p's)の表面濃度を十分にするには、材料の表面を化学的
に変性する必要がある。細胞培養生成物用支持体として
利用されている材料の大半は比較的安定しており、化学
的に変性し難いものである。化学的変性を行う方法とし
ては、強酸や有毒溶剤、プラズマまたはコロナ放電処理
を用いるのが一般的である。ｃａｐ’ｓを受け入れるよ
ういったん材料を変性すれば、この材料は活性化された
言える。
【０００４】ジアルデヒド澱粉（DAS)は市販の化合物で
あり、澱粉を過ヨウ素酸で酸化させたものである。ＤＡ
Ｓは、医薬及び生物活性組成物に利用されている。米国
特許３、４９５、０００には、ジアルデヒド澱粉とポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルクロライドまたはエチル
セルロースの混合物からなるマトリックスを用いて経口
投与可能な持続放出医薬組成物が開示されている。薬
剤、ジアルデヒド澱粉、ポリマーは混合され、細粒状に
なっている。
あり、澱粉を過ヨウ素酸で酸化させたものである。ＤＡ
Ｓは、医薬及び生物活性組成物に利用されている。米国
特許３、４９５、０００には、ジアルデヒド澱粉とポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルクロライドまたはエチル
セルロースの混合物からなるマトリックスを用いて経口
投与可能な持続放出医薬組成物が開示されている。薬
剤、ジアルデヒド澱粉、ポリマーは混合され、細粒状に
なっている。
【０００５】酸化度１００％の時には、各基本グルコー
スユニットに対して２個のジアルデヒドグループがＤＡ
Ｓに含まれている。これらジアルデヒドグループはアミ
ン、イミンまたはヒドラジドグループと簡単に反応す
る。米国特許３，７０６，６３３には、ジアルデヒド澱
粉をアルキレンージアミンで濃縮して重合生成物を生成
し、その生成物を還元およびジアゾ化して重合性ポリジ
アゾミウム塩を生成し、さらにこの生成物を活性酵素に
結合させて生成した水溶性酵素活性組成物が開示されて
いる。
スユニットに対して２個のジアルデヒドグループがＤＡ
Ｓに含まれている。これらジアルデヒドグループはアミ
ン、イミンまたはヒドラジドグループと簡単に反応す
る。米国特許３，７０６，６３３には、ジアルデヒド澱
粉をアルキレンージアミンで濃縮して重合生成物を生成
し、その生成物を還元およびジアゾ化して重合性ポリジ
アゾミウム塩を生成し、さらにこの生成物を活性酵素に
結合させて生成した水溶性酵素活性組成物が開示されて
いる。
【０００６】ＤＡＳは写真混合物にも利用されている。
米国特許３，２８４，２０４には写真フィルム中の疎水
性フィルム支持体と親水性エマルジョンを結合させる接
着液が開示されている。この接着液は、ゼラチン、ポリ
マンヌロン酸のアルキレングリコール誘導体、ジアルデ
ヒド澱粉、水、水混和性溶剤または溶剤混合物を成分と
する。
米国特許３，２８４，２０４には写真フィルム中の疎水
性フィルム支持体と親水性エマルジョンを結合させる接
着液が開示されている。この接着液は、ゼラチン、ポリ
マンヌロン酸のアルキレングリコール誘導体、ジアルデ
ヒド澱粉、水、水混和性溶剤または溶剤混合物を成分と
する。
【０００７】Ｙ．Ｉｋａｄａ， Ｈ． Ｉｗａｔａ，
Ｔ． Ｍｉｔａ， Ｓ． Ｎａｇａｏｋａらの論文「酸
化澱粉を用いてポリマー表面にタンパク質をグラフトす
る(grafting)方法」日本生化学物質研究会 １３、 ６
０７−６２２頁 （１９７９）には、ＤＡＳを用いて細
胞培養支持体材の表面を活性させる方法で、支持体を化
学変性させる別のアプローチが示されている。この方法
では、ＤＡＳをＰＶＡヒドロゲルとＥＶＡフィルムにグ
ラフトする。ＰＶＡとＥＶＡは水酸基を含有している。
ＤＡＳ分子は、アルデヒドと水酸基の間で行われるアセ
タール化によりポリマーの表面にグラフトされる。次
に、生物学的活性分子が結合ＤＡＳに付着する。ＤＡＳ
コートが形成されたＥＶＡフィルムの表面にグラフトさ
れているアルファアミラーゼは、アミロースおよび澱粉
の加水分解において顕著な酵素的活性を示すが、この酵
素活性はドラフトされていないもの、例えば、可溶性ア
ルファアミラーゼに比べて極めて低い。
Ｔ． Ｍｉｔａ， Ｓ． Ｎａｇａｏｋａらの論文「酸
化澱粉を用いてポリマー表面にタンパク質をグラフトす
る(grafting)方法」日本生化学物質研究会 １３、 ６
０７−６２２頁 （１９７９）には、ＤＡＳを用いて細
胞培養支持体材の表面を活性させる方法で、支持体を化
学変性させる別のアプローチが示されている。この方法
では、ＤＡＳをＰＶＡヒドロゲルとＥＶＡフィルムにグ
ラフトする。ＰＶＡとＥＶＡは水酸基を含有している。
ＤＡＳ分子は、アルデヒドと水酸基の間で行われるアセ
タール化によりポリマーの表面にグラフトされる。次
に、生物学的活性分子が結合ＤＡＳに付着する。ＤＡＳ
コートが形成されたＥＶＡフィルムの表面にグラフトさ
れているアルファアミラーゼは、アミロースおよび澱粉
の加水分解において顕著な酵素的活性を示すが、この酵
素活性はドラフトされていないもの、例えば、可溶性ア
ルファアミラーゼに比べて極めて低い。
【０００８】Ｉｋａｄａ ｅｔ ａｌ．の方法によれ
ば、支持体材を化学的に変性することなくｃａｐ’ｓを
受取るよう特定の細胞培養支持体材を活性させることが
できるが、この方法では、ＤＡＳと化学的に反応する水
酸基含有ポリマーだけが教示されている。これらＥＶＡ
やＰＶＡのポリマーは、価格や加工の点で細胞培養支持
体材には適していない。最適に活性化された支持体表面
は、活性分子の活動をそれほど阻害することなく活性分
子と生物学的に結合する。
ば、支持体材を化学的に変性することなくｃａｐ’ｓを
受取るよう特定の細胞培養支持体材を活性させることが
できるが、この方法では、ＤＡＳと化学的に反応する水
酸基含有ポリマーだけが教示されている。これらＥＶＡ
やＰＶＡのポリマーは、価格や加工の点で細胞培養支持
体材には適していない。最適に活性化された支持体表面
は、活性分子の活動をそれほど阻害することなく活性分
子と生物学的に結合する。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】従って、化学的変性を
起こさず、また、付着する生物学的な活性分子の生物活
動に極めて有害な影響を与えることなく他の表面、特
に、ポリスチレンの表面へＤＡＳを付着させる方法が要
望されている。
起こさず、また、付着する生物学的な活性分子の生物活
動に極めて有害な影響を与えることなく他の表面、特
に、ポリスチレンの表面へＤＡＳを付着させる方法が要
望されている。
【００１０】本発明は上記従来技術の有する課題に鑑み
なされたものであり、その目的は表面にジアルデヒド澱
粉を付着させる方法を提供することにある。
なされたものであり、その目的は表面にジアルデヒド澱
粉を付着させる方法を提供することにある。
【００１１】本発明の他の目的は、物質が結合可能な支
持体を提供することにある。すなわち、物質が結合可能
で、少なくとも一表面にジアルデヒド澱粉の分子が付着
していることを特徴とする支持体を提供することにあ
る。
持体を提供することにある。すなわち、物質が結合可能
で、少なくとも一表面にジアルデヒド澱粉の分子が付着
していることを特徴とする支持体を提供することにあ
る。
【００１２】本発明のその他の目的は、特定物質を本発
明の支持体に結合させて生成した生成物を提供すること
にある。
明の支持体に結合させて生成した生成物を提供すること
にある。
【００１３】さらに詳細には、本発明の第１の目的は、
取扱いが簡単で簡略なＤＡＳ表面付着方法を提供するこ
とにある。
取扱いが簡単で簡略なＤＡＳ表面付着方法を提供するこ
とにある。
【００１４】第２の目的は、水酸基含有表面材料に限定
されないことを特徴とするＤＡＳ表面付着方法を提供す
ることにある。
されないことを特徴とするＤＡＳ表面付着方法を提供す
ることにある。
【００１５】第３の目的は、ＤＡＳと化学反応する化学
グループを含有する表面材料に限定されないことを特徴
とするＤＡＳ表面付着方法を提供することにある。
グループを含有する表面材料に限定されないことを特徴
とするＤＡＳ表面付着方法を提供することにある。
【００１６】第４の目的は、ポリスチレン、ポリプロピ
レン、ポリエチレンテレフタレート、ポリアロマー、セ
ルロースアセテート、ポリメチルペンテンからなる多数
の表面材料に適用可能であることを特徴とするＤＡＳ表
面付着方法を提供することにある。
レン、ポリエチレンテレフタレート、ポリアロマー、セ
ルロースアセテート、ポリメチルペンテンからなる多数
の表面材料に適用可能であることを特徴とするＤＡＳ表
面付着方法を提供することにある。
【００１７】第５の目的は、アミノシランコートガラス
に適用可能なＤＡＳ表面付着方法を提供することにあ
る。
に適用可能なＤＡＳ表面付着方法を提供することにあ
る。
【００１８】第６の目的は、接着する生物学的活性分子
の活動に著しい悪影響を及ぼすことのないことを特徴と
するＤＡＳ表面付着方法を提供することにある。
の活動に著しい悪影響を及ぼすことのないことを特徴と
するＤＡＳ表面付着方法を提供することにある。
【００１９】第７の目的は、物質が接合可能であり、Ｄ
ＡＳコート面を少なくとも１面有し、前記コート面の材
料は水酸基含有材料に限定されないことを特徴とする支
持体を提供することにある。
ＡＳコート面を少なくとも１面有し、前記コート面の材
料は水酸基含有材料に限定されないことを特徴とする支
持体を提供することにある。
【００２０】第８の目的は、物質が接合可能であり、Ｄ
ＡＳコート面を少なくとも１面有し、また、前記コート
面の材料はＤＡＳと化学反応する化学グループを含有す
る材料に限定されないことを特徴とする支持体を提供す
ることにある。
ＡＳコート面を少なくとも１面有し、また、前記コート
面の材料はＤＡＳと化学反応する化学グループを含有す
る材料に限定されないことを特徴とする支持体を提供す
ることにある。
【００２１】第９の目的は、物質が接合可能であり、Ｄ
ＡＳコート面を少なくとも１面有し、前記コート面の材
料は、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテ
レフタレート、ポリアロマー、セルロースアセテート、
ポリメチルペンテンから選択することが可能であること
を特徴とする支持体を提供することにある。
ＡＳコート面を少なくとも１面有し、前記コート面の材
料は、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテ
レフタレート、ポリアロマー、セルロースアセテート、
ポリメチルペンテンから選択することが可能であること
を特徴とする支持体を提供することにある。
【００２２】第１０の目的は、物質が接合可能であり、
ＤＡＳコート面を少なくとも１面有し、前記コート面は
アミノシランコートガラスでも構わないことを特徴とす
る支持体を提供することにある。
ＤＡＳコート面を少なくとも１面有し、前記コート面は
アミノシランコートガラスでも構わないことを特徴とす
る支持体を提供することにある。
【００２３】第１１の目的は、本発明の支持体のＤＡＳ
コート面に生物学的活性分子を結合させて生成した新規
な細胞培養生成物を提供することにある。
コート面に生物学的活性分子を結合させて生成した新規
な細胞培養生成物を提供することにある。
【００２４】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明の表面へのジアルデヒド澱粉付着方法は、ジ
アルデヒド澱粉の少なくとも一部が表面に吸着されるよ
う前記表面にジアルデヒド澱粉の水性液を十分な時間載
置する段階と、該水性液を除去する段階と、前記表面を
約５０℃から約１５０℃の温度で乾燥する段階とからな
ることを特徴とする。
に、本発明の表面へのジアルデヒド澱粉付着方法は、ジ
アルデヒド澱粉の少なくとも一部が表面に吸着されるよ
う前記表面にジアルデヒド澱粉の水性液を十分な時間載
置する段階と、該水性液を除去する段階と、前記表面を
約５０℃から約１５０℃の温度で乾燥する段階とからな
ることを特徴とする。
【００２５】本発明の支持体は、上記本発明の付着方法
で生成され、少なくとも１つの面にジアルデヒド澱粉を
付着させたものであることを特徴とする。
で生成され、少なくとも１つの面にジアルデヒド澱粉を
付着させたものであることを特徴とする。
【００２６】本発明の生成物は、生物学的活性分子の生
物活動に著しい悪影響を及ぼすことなく本発明の支持体
に前記分子を結合させたものであることを特徴とする。
これらの生物学的活性分子は細胞付着タンパク質（ＣＡ
Ｐ’ｓ）と細胞付着ペプチド（ｃａｐ’ｓ）からなる。
本発明の支持体のＤＡＳコート面にこれらの分子を結合
させることにより、新規な細胞培養生成物が生成され
る。
物活動に著しい悪影響を及ぼすことなく本発明の支持体
に前記分子を結合させたものであることを特徴とする。
これらの生物学的活性分子は細胞付着タンパク質（ＣＡ
Ｐ’ｓ）と細胞付着ペプチド（ｃａｐ’ｓ）からなる。
本発明の支持体のＤＡＳコート面にこれらの分子を結合
させることにより、新規な細胞培養生成物が生成され
る。
【００２７】本発明における生成物とは細胞培養生成物
に限られるものではなく、一または複数の物質を本発明
の支持体に結合させて生成された物質はいずれも含まれ
る。また、本発明は、ゼラチンフィルムを本発明の支持
体のＤＡＳコート面に結合させて生成した写真用フィル
ムの支持体も提供する。
に限られるものではなく、一または複数の物質を本発明
の支持体に結合させて生成された物質はいずれも含まれ
る。また、本発明は、ゼラチンフィルムを本発明の支持
体のＤＡＳコート面に結合させて生成した写真用フィル
ムの支持体も提供する。
【００２８】本発明の方法及び生成物には、細胞培養支
持体材料として特に有用なポリマーを複数利用すること
ができる。例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポ
リエチレンテレフタレート、ポリアロマー、セルロース
アセテート、ポリメチルペンテンなどである。さらに、
本発明の方法及び生成物は、アミノシランコートガラス
を利用できる。本発明の方法及び生成物で利用できるの
は、水酸基含有材料あるいはＤＡＳと化学反応する他の
化学グループに限られるものではない。
持体材料として特に有用なポリマーを複数利用すること
ができる。例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポ
リエチレンテレフタレート、ポリアロマー、セルロース
アセテート、ポリメチルペンテンなどである。さらに、
本発明の方法及び生成物は、アミノシランコートガラス
を利用できる。本発明の方法及び生成物で利用できるの
は、水酸基含有材料あるいはＤＡＳと化学反応する他の
化学グループに限られるものではない。
【００２９】
【実施例】以下、添付図面を参照しながら本発明の好適
実施態様を詳細に説明する。
実施態様を詳細に説明する。
【００３０】本発明の一実施態様において、まずペース
トを生成してＤＡＳの水溶液を準備する。このペースト
は、一定量配分したＤＡＳに少量の水を添加して作成す
る。酸化澱粉が完全に分散するよう還流用水が蓄えられ
た適当なフラスコにＤＡＳペーストを十分時間をかけて
添加する。澄んだＤＡＳ溶液を室温まで急速に冷却す
る。
トを生成してＤＡＳの水溶液を準備する。このペースト
は、一定量配分したＤＡＳに少量の水を添加して作成す
る。酸化澱粉が完全に分散するよう還流用水が蓄えられ
た適当なフラスコにＤＡＳペーストを十分時間をかけて
添加する。澄んだＤＡＳ溶液を室温まで急速に冷却す
る。
【００３１】活性すべき表面に一定量のＤＡＳ溶液を載
置し、ＤＡＳ溶液の少なくとも一部が表面に吸着される
よう十分な時間そのままにしておく。次にＤＡＳ溶液を
別の容器に移しかえ、生成物を約６５℃から７０℃の温
度で適当な時間乾燥させる。
置し、ＤＡＳ溶液の少なくとも一部が表面に吸着される
よう十分な時間そのままにしておく。次にＤＡＳ溶液を
別の容器に移しかえ、生成物を約６５℃から７０℃の温
度で適当な時間乾燥させる。
【００３２】本発明の方法で生成したＤＡＳコート面
に、当該技術分野に精通した者には周知な様々な表面結
合方法によってペプチドまたはタンパク質などの生物的
活性分子を結合することが可能である。好適な方法は、
還元剤と生物的活性分子と適当な緩衝剤を含有したｐＨ
約７の水溶液を前記表面に載置する段階と、前記溶液で
コーティングされた表面を約２０℃から約２５℃の温度
で少なくとも２時間優しくシェイクする段階と、前記溶
液を除去する段階と、約３５℃から約４０℃の温度で約
３０分間前記表面を乾燥する段階とからなる。
に、当該技術分野に精通した者には周知な様々な表面結
合方法によってペプチドまたはタンパク質などの生物的
活性分子を結合することが可能である。好適な方法は、
還元剤と生物的活性分子と適当な緩衝剤を含有したｐＨ
約７の水溶液を前記表面に載置する段階と、前記溶液で
コーティングされた表面を約２０℃から約２５℃の温度
で少なくとも２時間優しくシェイクする段階と、前記溶
液を除去する段階と、約３５℃から約４０℃の温度で約
３０分間前記表面を乾燥する段階とからなる。
【００３３】ＤＡＳの分解は複雑な工程であり、分散、
一次結合分離(primary bond scission) 、分子内反応を
必要とする。蒸気またはマイクロウェーブを用いた方法
を含めてＤＡＳ水溶液が得られる方法であればどのよう
な方法でも実施できる。しかしながら、還流を利用した
上記の方法のほうが好ましい。ＤＡＳの量及び使用する
水の量は必要とするＤＡＳの濃度に応じて異なる。水
０．１０ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ溶液（容積５００ｍｌ）の
場合、澄みきった溶液ができるまで約３０分間沸騰しな
くてはならない。
一次結合分離(primary bond scission) 、分子内反応を
必要とする。蒸気またはマイクロウェーブを用いた方法
を含めてＤＡＳ水溶液が得られる方法であればどのよう
な方法でも実施できる。しかしながら、還流を利用した
上記の方法のほうが好ましい。ＤＡＳの量及び使用する
水の量は必要とするＤＡＳの濃度に応じて異なる。水
０．１０ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ溶液（容積５００ｍｌ）の
場合、澄みきった溶液ができるまで約３０分間沸騰しな
くてはならない。
【００３４】本発明はＤＡＳが様々なポリマーと強く結
合し、反応面を生成するといった発見に基づくものであ
る。ＤＡＳを強力に結合するためには、２段階の工程が
必要である。まず、水分散性ＤＡＳをポリマー表面に物
理的に結合させる。次に、ＤＡＳ溶液を完全に除去した
後、この生成物を中温で乾燥する。酸性または中性水溶
液環境で安定な活性面を生成するには必要最小限の乾燥
を行う必要がある。ＤＡＳコート面はｐＨ値約８．５以
上で劣化する。
合し、反応面を生成するといった発見に基づくものであ
る。ＤＡＳを強力に結合するためには、２段階の工程が
必要である。まず、水分散性ＤＡＳをポリマー表面に物
理的に結合させる。次に、ＤＡＳ溶液を完全に除去した
後、この生成物を中温で乾燥する。酸性または中性水溶
液環境で安定な活性面を生成するには必要最小限の乾燥
を行う必要がある。ＤＡＳコート面はｐＨ値約８．５以
上で劣化する。
【００３５】化学的結合を必要とするＩｋａｄａ ｅｔ
ａｌ．の方法で教示しているようなＰＶＡまたはＥＶ
ＡにＤＡＳをグラフトするのとは異なり、本発明で開示
しているように細胞成長面へのＤＡＳの結合は、物理的
結合、恐らくは疎水性及び酸／塩基相互作用の組み合わ
せによって発生する。つまり、Ｉｋａｄａ ｅｔ ａ
ｌ．の方法では、ＤＡＳが化学的に結合する面を含む水
酸基を提供するのに対して、本発明の方法ではＤＡＳ分
子を吸着する面を提供するものである。本発明の方法は
様々な表面材料に適用することが可能である。例えば、
ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタ
レート、ポリアロマー、セルロースアセテート、ポリメ
チルペンテンなどである。ポリビニルクロライドとポリ
テトラフルオロエチレンの二つの表面材料は本発明の方
法で処理してもＤＡＳを吸着しないことが判明した。Ｄ
ＡＳを吸着及び保持するには全体的に適当な極性を備え
ていなくてはならないことが分かる。
ａｌ．の方法で教示しているようなＰＶＡまたはＥＶ
ＡにＤＡＳをグラフトするのとは異なり、本発明で開示
しているように細胞成長面へのＤＡＳの結合は、物理的
結合、恐らくは疎水性及び酸／塩基相互作用の組み合わ
せによって発生する。つまり、Ｉｋａｄａ ｅｔ ａ
ｌ．の方法では、ＤＡＳが化学的に結合する面を含む水
酸基を提供するのに対して、本発明の方法ではＤＡＳ分
子を吸着する面を提供するものである。本発明の方法は
様々な表面材料に適用することが可能である。例えば、
ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタ
レート、ポリアロマー、セルロースアセテート、ポリメ
チルペンテンなどである。ポリビニルクロライドとポリ
テトラフルオロエチレンの二つの表面材料は本発明の方
法で処理してもＤＡＳを吸着しないことが判明した。Ｄ
ＡＳを吸着及び保持するには全体的に適当な極性を備え
ていなくてはならないことが分かる。
【００３６】本発明の特徴の一つは、中温での加熱段階
後は殆ど不可逆的にＤＡＳはポリマーに接合する。ポリ
スチレンなどの非湿潤面をＤＡＳ溶液に暴露すると、わ
ずか数秒でＤＡＳが付着できるような湿潤性を有する。
しかしながら、この時、ＤＡＳは洗浄によって落ち易
く、加熱処理を行わなければ前記面は再び非湿潤面にな
ってしまう。この処理面は約６５℃から約７５℃の温度
で乾燥するのが好ましい。
後は殆ど不可逆的にＤＡＳはポリマーに接合する。ポリ
スチレンなどの非湿潤面をＤＡＳ溶液に暴露すると、わ
ずか数秒でＤＡＳが付着できるような湿潤性を有する。
しかしながら、この時、ＤＡＳは洗浄によって落ち易
く、加熱処理を行わなければ前記面は再び非湿潤面にな
ってしまう。この処理面は約６５℃から約７５℃の温度
で乾燥するのが好ましい。
【００３７】本発明で使用するＤＡＳは酸化度が高い方
が好ましい。発明者らが行った実験では酸化度が７３％
で水１０％を含有したＳＩＧＭＡ（Ｐ９２６５）から得
たＤＡＳを利用したと報告されている。
が好ましい。発明者らが行った実験では酸化度が７３％
で水１０％を含有したＳＩＧＭＡ（Ｐ９２６５）から得
たＤＡＳを利用したと報告されている。
【００３８】ＤＡＳコート面の反応性アルデヒドグルー
プの表面濃度は、ＤＡＳ溶液用比色法を一部修正した方
法で決定した。発色団と２，４−ジニトロフェニールヒ
ドラジン（ＤＮＰＨ）（ＳＩＧＭＡ Ｄ−２６３０）を
０．２５ｍｇ／ｍｌ（０．９ｍＭ）の濃度の１ＭのＨＣ
ｌで分解し、暗がりで３０分間ＤＡＳコート面と反応さ
せる。ＤＮＰＨ溶液を移し替えて、約１５分間蒸留水で
前記コート面を洗浄し、空気中で乾燥させる。０．１Ｍ
のＮａＯＨを暗がりにて室温で５−１０分間接触させて
ＤＮＰＨ−ＤＡＳ錯体を可溶化する。ＮａＯＨに浸漬し
た後にｐＨ値を２まで減少させた時、３６０ｎｍの波長
での吸光度を読み取った。
プの表面濃度は、ＤＡＳ溶液用比色法を一部修正した方
法で決定した。発色団と２，４−ジニトロフェニールヒ
ドラジン（ＤＮＰＨ）（ＳＩＧＭＡ Ｄ−２６３０）を
０．２５ｍｇ／ｍｌ（０．９ｍＭ）の濃度の１ＭのＨＣ
ｌで分解し、暗がりで３０分間ＤＡＳコート面と反応さ
せる。ＤＮＰＨ溶液を移し替えて、約１５分間蒸留水で
前記コート面を洗浄し、空気中で乾燥させる。０．１Ｍ
のＮａＯＨを暗がりにて室温で５−１０分間接触させて
ＤＮＰＨ−ＤＡＳ錯体を可溶化する。ＮａＯＨに浸漬し
た後にｐＨ値を２まで減少させた時、３６０ｎｍの波長
での吸光度を読み取った。
【００３９】還流ＤＡＳ溶液のコーティング特性は図２
に示すように還流時間に応じて変化する。図２は、ＤＡ
Ｓコート面における３６０ｎｍの波長でのＤＮＰＨ吸光
度値と、面コーティング用ＤＡＳ溶液の沸騰時間との関
係を示している。透明になった後、結合部位の数は時間
と共に減少するが、変化速度は大変小さくなっている。
ＤＡＳコートポリスチレンの結合部位の再現性を良くす
るため、液が透明になった後に５分間ＤＡＳ溶液を沸騰
させる。
に示すように還流時間に応じて変化する。図２は、ＤＡ
Ｓコート面における３６０ｎｍの波長でのＤＮＰＨ吸光
度値と、面コーティング用ＤＡＳ溶液の沸騰時間との関
係を示している。透明になった後、結合部位の数は時間
と共に減少するが、変化速度は大変小さくなっている。
ＤＡＳコートポリスチレンの結合部位の再現性を良くす
るため、液が透明になった後に５分間ＤＡＳ溶液を沸騰
させる。
【００４０】図３から、ＤＡＳ溶液でコーティングし、
一定の温度で沸騰させたＤＡＳコートポリスチレンのバ
ッチを様々に変化させた時に３６０ｎｍの波長で測定し
たＤＮＰＨ吸光度値の変化は小さいということが分か
る。ＤＡＳ溶液のＡ２４０の値（２４０ｎｍでの吸光
度）から、図２に示すように沸騰時間に伴ってＡ２４０
の値が着実に増加するような場合でもＤＡＳ溶液の再現
性が優れていることが分かる。
一定の温度で沸騰させたＤＡＳコートポリスチレンのバ
ッチを様々に変化させた時に３６０ｎｍの波長で測定し
たＤＮＰＨ吸光度値の変化は小さいということが分か
る。ＤＡＳ溶液のＡ２４０の値（２４０ｎｍでの吸光
度）から、図２に示すように沸騰時間に伴ってＡ２４０
の値が着実に増加するような場合でもＤＡＳ溶液の再現
性が優れていることが分かる。
【００４１】ＤＡＳの濃度が高くなるにつれ、ＤＡＳが
表面へ最大量吸着する速度が早くなっている。ポリスチ
レンにＤＡＳが吸着する速度は、吸着したＤＡＳのＤＮ
ＰＨアッセイによって決定される。図４には、０．１０
ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ溶液の場合の結果が示されてい
る。平衡ＤＮＰＨ値を得るには最低約５分の吸着時間が
必要である。最小吸着時間は０．０５ ｍｇ／ｍｌ Ｄ
ＡＳ濃度の場合に約１５分間にまで増加する。平衡ＤＮ
ＰＨ値に到達するための最小吸着時間は使用する面によ
って異なる。
表面へ最大量吸着する速度が早くなっている。ポリスチ
レンにＤＡＳが吸着する速度は、吸着したＤＡＳのＤＮ
ＰＨアッセイによって決定される。図４には、０．１０
ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ溶液の場合の結果が示されてい
る。平衡ＤＮＰＨ値を得るには最低約５分の吸着時間が
必要である。最小吸着時間は０．０５ ｍｇ／ｍｌ Ｄ
ＡＳ濃度の場合に約１５分間にまで増加する。平衡ＤＮ
ＰＨ値に到達するための最小吸着時間は使用する面によ
って異なる。
【００４２】ＤＡＳを水の中に分散した後は、周囲条件
に保ち滅菌された状態で溶液の有効寿命は約１ヶ月であ
る。滅菌および無菌ＤＡＳコートポリスチレンプレート
の貯蔵安定度は、２５℃の温度で相対湿度を３０％、７
０％、９０％にして決定する。その結果が図５及び６に
グラフとして示されている。図から、相対湿度３０％の
時に結合部位（ＢＳ）は約１０％失われ、１ヶ月後これ
より高い相対湿度ではもっと多くの部位が失われた。
に保ち滅菌された状態で溶液の有効寿命は約１ヶ月であ
る。滅菌および無菌ＤＡＳコートポリスチレンプレート
の貯蔵安定度は、２５℃の温度で相対湿度を３０％、７
０％、９０％にして決定する。その結果が図５及び６に
グラフとして示されている。図から、相対湿度３０％の
時に結合部位（ＢＳ）は約１０％失われ、１ヶ月後これ
より高い相対湿度ではもっと多くの部位が失われた。
【００４３】一般的に使用される細胞培養支持体剤とし
てはポリスチレンなどのポリマーが最適であるが、場合
によってはより耐溶剤性の高い支持体が必要となる。ガ
ラスには耐溶剤性が必要な場合に表面材を理想的に成長
させる特性がある。しかしながら、ＤＡＳはガラス支持
体の表面にはさほど吸着されない。本発明ではアミノシ
ランコートガラスの表面を活性化する方法を提供する。
アミノシランコートガラスは周知の方法で製造する。好
適な方法としては、約１Ｔｏｒｒの気圧で酸素プラズマ
中にてガラスを約３０秒間処理する段階と、約６０℃か
ら８０℃の温度で３ーアミノプロピルトリエトキシレン
１０％と水から成る水溶液にガラスを約３時間浸漬する
段階とを備えている。次に、ガラスを水で洗浄し、約５
０℃から１２０℃の温度で約１８−２４時間硬化させ
る。本発明の方法を用いて、ＤＡＳをポリマー面に塗布
するようにアミノシランコートガラスにＤＡＳを塗布す
る。表１は、ＤＡＳコートとポリスチレン、ＤＡＳコー
トガラス、アミノシランコートガラス表面のＤＡＳコー
トとを比較したものである。結合ＤＡＳの量はＤＮＰＨ
アッセイを用いて３６０ｎｍの波長の吸光度で測定す
る。表から、未処理ガラスに比べてアミノシランコート
ガラスではもっと多量のＤＡＳが吸着しているのが分か
る。
てはポリスチレンなどのポリマーが最適であるが、場合
によってはより耐溶剤性の高い支持体が必要となる。ガ
ラスには耐溶剤性が必要な場合に表面材を理想的に成長
させる特性がある。しかしながら、ＤＡＳはガラス支持
体の表面にはさほど吸着されない。本発明ではアミノシ
ランコートガラスの表面を活性化する方法を提供する。
アミノシランコートガラスは周知の方法で製造する。好
適な方法としては、約１Ｔｏｒｒの気圧で酸素プラズマ
中にてガラスを約３０秒間処理する段階と、約６０℃か
ら８０℃の温度で３ーアミノプロピルトリエトキシレン
１０％と水から成る水溶液にガラスを約３時間浸漬する
段階とを備えている。次に、ガラスを水で洗浄し、約５
０℃から１２０℃の温度で約１８−２４時間硬化させ
る。本発明の方法を用いて、ＤＡＳをポリマー面に塗布
するようにアミノシランコートガラスにＤＡＳを塗布す
る。表１は、ＤＡＳコートとポリスチレン、ＤＡＳコー
トガラス、アミノシランコートガラス表面のＤＡＳコー
トとを比較したものである。結合ＤＡＳの量はＤＮＰＨ
アッセイを用いて３６０ｎｍの波長の吸光度で測定す
る。表から、未処理ガラスに比べてアミノシランコート
ガラスではもっと多量のＤＡＳが吸着しているのが分か
る。
【００４４】 表 １ 面 ＤＮＰＨアッセイ値 （ＯＤ ３６０ｎｍ） ポリスチレン／ＤＡＳ ０．０５０ ガラス／ＤＡＳ ０．００９ ガラス／アミノシラン／ＤＡＳ ０．０８０ 本発明のＤＡＳコート面に多数のペプチドを結合するこ
とが可能である。これらのペプチドには、Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ，Ｌｙｓ
−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ，Ａｒｇ−
Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｔｙｒといったペプチドが含
まれる。ポリスチレン面を用いた実験から、一般的に、
リシル残留物のペプチドアルファ−アミンまたはイプシ
ロン−アミンによってＤＡＳのアルデヒドグループにペ
プチドが結合することが分かった。いずれの場合も、窒
素結合用の安定した炭素を生成するには好ましくはＮａ
ＢＨ4 またはＮａＣＮＢＨ3 といった還元剤が必要であ
る。図７には、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ結合ペプチドを用いて得られた結果
が示されている。図において、ペプチドコート面は０．
１０ ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ溶液で生成したＤＡＳコート
ポリスチレン支持体上に形成されている。ペプチドを吸
着し、緩やかに吸着されたペプチドを洗浄した後に金ア
ッセイ法を実施する。当該アッセイには、コート面にコ
ロイド金溶液を付加する段階と当該溶液を室温で２ー４
時間そのままにしておく段階とからなる。使用済みの金
溶液を除去し、プレートを蒸留水で２度洗浄する。次
に、プレートをマイクロプレートリーダー（ＤＹＮＡＴ
ＥＣＨ ＭＲ５０００）にて５３０ｎｍの波長で読み取
る。この結果から、プラトーが溶液１ｍｌ当たり約２０
０μｇのペプチド濃度になるまでペプチド溶液の濃度の
増加に従い結合ペプチドの量も増加する。
とが可能である。これらのペプチドには、Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ，Ｌｙｓ
−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ，Ａｒｇ−
Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｔｙｒといったペプチドが含
まれる。ポリスチレン面を用いた実験から、一般的に、
リシル残留物のペプチドアルファ−アミンまたはイプシ
ロン−アミンによってＤＡＳのアルデヒドグループにペ
プチドが結合することが分かった。いずれの場合も、窒
素結合用の安定した炭素を生成するには好ましくはＮａ
ＢＨ4 またはＮａＣＮＢＨ3 といった還元剤が必要であ
る。図７には、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ結合ペプチドを用いて得られた結果
が示されている。図において、ペプチドコート面は０．
１０ ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ溶液で生成したＤＡＳコート
ポリスチレン支持体上に形成されている。ペプチドを吸
着し、緩やかに吸着されたペプチドを洗浄した後に金ア
ッセイ法を実施する。当該アッセイには、コート面にコ
ロイド金溶液を付加する段階と当該溶液を室温で２ー４
時間そのままにしておく段階とからなる。使用済みの金
溶液を除去し、プレートを蒸留水で２度洗浄する。次
に、プレートをマイクロプレートリーダー（ＤＹＮＡＴ
ＥＣＨ ＭＲ５０００）にて５３０ｎｍの波長で読み取
る。この結果から、プラトーが溶液１ｍｌ当たり約２０
０μｇのペプチド濃度になるまでペプチド溶液の濃度の
増加に従い結合ペプチドの量も増加する。
【００４５】ＤＮＰＨアッセイで得られた値を用いてペ
プチドの質量を見積もる。図１は、０．１０ ｍｇ／ｍ
ｌのＤＡＳ溶液濃度における３ＢＳ／ｎｍ2 の表面濃度
を示している。ＤＮＰＨと同様の反応性をペプチドが有
していると仮定した場合、ペプチド１μｇの表面濃度を
くぼみ（ｗｅｌｌ）単位（９６くぼみ）で算出する。
プチドの質量を見積もる。図１は、０．１０ ｍｇ／ｍ
ｌのＤＡＳ溶液濃度における３ＢＳ／ｎｍ2 の表面濃度
を示している。ＤＮＰＨと同様の反応性をペプチドが有
していると仮定した場合、ペプチド１μｇの表面濃度を
くぼみ（ｗｅｌｌ）単位（９６くぼみ）で算出する。
【００４６】本発明の好適生成物が細胞結合ペプチド
（ｃａｐ’ｓ）に結合した活性面である時、細胞結合タ
ンパク質（ＣＡＰ’Ｓ）に結合した活性面も本発明に含
まれる。本発明のＤＡＳコート面の免疫グロブリン（Ｉ
ｇＧ）タンパク質に対する結合効果を調べる研究が行わ
れた。酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）用支持体として９
６くぼみプレート用コートを使用した。図１３はＤＡＳ
コートポリスチレンに化学的に結合したＩｇＧの抗原性
活動を決定して得られたデータのグラフである。図示さ
れている結果は、０．０２ Ｍ ＮａＣＮＢＨ3 ［．０
２ＣＮ（Ｏ）］を用いてＩｇＧに結合させた未処理ポリ
スチレンサンプルと、０．０５ Ｍ ＮａＣＮＢ
Ｈ3 ［．０５ＣＮ（Ｏ）］を用いてＩｇＧに結合させた
未処理ポリスチレンサンプルと、ガンマ線照射で処理し
０．０５ Ｍ ＮａＣＮＢＨ3 ［．０５ＣＮ（Ｅ）］を
用いてＩｇＧに結合させたポリスチレンサンプルに関す
るものである。これらの結果は、標準ＣＯＲＮＩＮＧ
ＥＬＩＳＡプレートに物理的に結合したＩｇＧから得ら
れた信号のパーセントで表されている。ＤＡＳコーティ
ングしたポリスチレンの最大応答は制御面すなわちガン
マ線照射処理したポリスチレンＥＬＩＳＡ面にほぼ等し
い。
（ｃａｐ’ｓ）に結合した活性面である時、細胞結合タ
ンパク質（ＣＡＰ’Ｓ）に結合した活性面も本発明に含
まれる。本発明のＤＡＳコート面の免疫グロブリン（Ｉ
ｇＧ）タンパク質に対する結合効果を調べる研究が行わ
れた。酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）用支持体として９
６くぼみプレート用コートを使用した。図１３はＤＡＳ
コートポリスチレンに化学的に結合したＩｇＧの抗原性
活動を決定して得られたデータのグラフである。図示さ
れている結果は、０．０２ Ｍ ＮａＣＮＢＨ3 ［．０
２ＣＮ（Ｏ）］を用いてＩｇＧに結合させた未処理ポリ
スチレンサンプルと、０．０５ Ｍ ＮａＣＮＢ
Ｈ3 ［．０５ＣＮ（Ｏ）］を用いてＩｇＧに結合させた
未処理ポリスチレンサンプルと、ガンマ線照射で処理し
０．０５ Ｍ ＮａＣＮＢＨ3 ［．０５ＣＮ（Ｅ）］を
用いてＩｇＧに結合させたポリスチレンサンプルに関す
るものである。これらの結果は、標準ＣＯＲＮＩＮＧ
ＥＬＩＳＡプレートに物理的に結合したＩｇＧから得ら
れた信号のパーセントで表されている。ＤＡＳコーティ
ングしたポリスチレンの最大応答は制御面すなわちガン
マ線照射処理したポリスチレンＥＬＩＳＡ面にほぼ等し
い。
【００４７】牛の血清アルブミンとゼラチン（牛の皮膚
から採取したＳＩＧＭＡ Ｇ１３９３ ２％ ゲル）を
本発明のＤＡＳコートポリスチレン面に結合させること
にも成功した。
から採取したＳＩＧＭＡ Ｇ１３９３ ２％ ゲル）を
本発明のＤＡＳコートポリスチレン面に結合させること
にも成功した。
【００４８】連続または形質変換した細胞系統に応答が
類似しているかどうかを調べるため一次細胞研究を行っ
た。図８から１２は、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ
−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ／ＤＡＳ／ポリスチレン面表
面にて成長させた様々な一次細胞を用いて国立衛生研究
所が行った成長研究結果を示している。図において、図
８はラットの大動脈の平滑筋細胞に関する結果を、図９
は人の舌細胞に関する結果、図１０は人の内皮細胞に関
する結果を示している。図には３つの面に関するデータ
が示されている。つまり、標準空気ープラズマまたはコ
ロナ放電処理したポリスチレン面（制御）、細胞結合ペ
プチドＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｙｓ（．１ ＤＡＳ／１００Ｒ／Ｇ）を結合した
後に０．１０ ｍｇ／ｍｌ溶液を用いてＤＡＳでコーテ
ィングし、１ｍＭのジラード試薬で処理したポリスチレ
ン面と、細胞結合ペプチドＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（．１ ＤＡＳ／１００
Ｒ／Ｈ）を結合した後に０．１０ ｍｇ／ｍｌ溶液を用
いてＤＡＳをコーティングし、４ーヒドラジノベンゼン
サルホン酸で処理したポリスチレン面といった３面であ
る。この場合の結果から、３ー６日経過すると、Ｇｌｙ
−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓペ
プチドが結合した面では制御面の場合のほぼ２倍の成長
があったことが分かった。制御面は標準空気ープラズマ
またはコロナ処理ポリスチレン組織培養面であった。
類似しているかどうかを調べるため一次細胞研究を行っ
た。図８から１２は、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ
−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ／ＤＡＳ／ポリスチレン面表
面にて成長させた様々な一次細胞を用いて国立衛生研究
所が行った成長研究結果を示している。図において、図
８はラットの大動脈の平滑筋細胞に関する結果を、図９
は人の舌細胞に関する結果、図１０は人の内皮細胞に関
する結果を示している。図には３つの面に関するデータ
が示されている。つまり、標準空気ープラズマまたはコ
ロナ放電処理したポリスチレン面（制御）、細胞結合ペ
プチドＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｙｓ（．１ ＤＡＳ／１００Ｒ／Ｇ）を結合した
後に０．１０ ｍｇ／ｍｌ溶液を用いてＤＡＳでコーテ
ィングし、１ｍＭのジラード試薬で処理したポリスチレ
ン面と、細胞結合ペプチドＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（．１ ＤＡＳ／１００
Ｒ／Ｈ）を結合した後に０．１０ ｍｇ／ｍｌ溶液を用
いてＤＡＳをコーティングし、４ーヒドラジノベンゼン
サルホン酸で処理したポリスチレン面といった３面であ
る。この場合の結果から、３ー６日経過すると、Ｇｌｙ
−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓペ
プチドが結合した面では制御面の場合のほぼ２倍の成長
があったことが分かった。制御面は標準空気ープラズマ
またはコロナ処理ポリスチレン組織培養面であった。
【００４９】図１１は人内皮一次細胞（ＨＥＣ）を用い
て行った成長研究を示している。図には３つの面に関す
る結果が示されている。すなわち、標準空気ープラズマ
またはコロナ放電処理したポリスチレン面（制御）、フ
ィブロネクチン層（フィブロネクチン）を有する標準空
気ープラズマまたはコロナ放電処理ポリスチレン面、細
胞結合ペプチドＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（．１ ＤＡＳ／１００Ｒ／Ｇ）を
結合した後に０．１０ ｍｇ／ｍｌ溶液を用いてＤＡＳ
でコーティングし、１ｍＭのジラード試薬で処理したポ
リスチレン面の３面である。この場合、２日間成長させ
た後、制御用の標準空気ープラズマまたはコロナ処理ポ
リスチレン組織培養面よりも約５０％以上の細胞がペプ
チド／ＤＡＳ面に見られた。もっと重要なことは、本発
明のペプチドコート面が、従来技術のフィブロネクチン
層を備えた標準空気ープラズマまたはコロナ処理ポリス
チレン組織培養面に比べて約１５％以上細胞成長を促進
している様子がこのグラフから分かるということであ
る。
て行った成長研究を示している。図には３つの面に関す
る結果が示されている。すなわち、標準空気ープラズマ
またはコロナ放電処理したポリスチレン面（制御）、フ
ィブロネクチン層（フィブロネクチン）を有する標準空
気ープラズマまたはコロナ放電処理ポリスチレン面、細
胞結合ペプチドＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（．１ ＤＡＳ／１００Ｒ／Ｇ）を
結合した後に０．１０ ｍｇ／ｍｌ溶液を用いてＤＡＳ
でコーティングし、１ｍＭのジラード試薬で処理したポ
リスチレン面の３面である。この場合、２日間成長させ
た後、制御用の標準空気ープラズマまたはコロナ処理ポ
リスチレン組織培養面よりも約５０％以上の細胞がペプ
チド／ＤＡＳ面に見られた。もっと重要なことは、本発
明のペプチドコート面が、従来技術のフィブロネクチン
層を備えた標準空気ープラズマまたはコロナ処理ポリス
チレン組織培養面に比べて約１５％以上細胞成長を促進
している様子がこのグラフから分かるということであ
る。
【００５０】表ＩＩは、本発明のＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌ
ｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ／ＤＡＳ／ポリス
チレン面表面で成長した様々な細胞の動作を制御面、標
準空気ープラズマまたはコロナ処理ポリスチレン組織培
養面の表面で見られた成長を百分率で表したものであ
る。
ｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ／ＤＡＳ／ポリス
チレン面表面で成長した様々な細胞の動作を制御面、標
準空気ープラズマまたはコロナ処理ポリスチレン組織培
養面の表面で見られた成長を百分率で表したものであ
る。
【００５１】 表 ＩＩ 細胞のタイプ 制御性能（％） 細胞系統 人の肺（ＭＲＣ５） ９３ 犬の腎臓（ＭＤＣＫ） ９３ マウスの神経芽細胞腫（Ｎｅｕｒｏ−２Ａ） ８７ 猿の腎臓（Ｖｅｒｏ） ６７ 人の卵巣の癌腫（ＰＡ−１） ６８ マウスの結合組織（Ｌ９２９） ２７ 一次細胞 人のさい静脈内皮 １８００−２５００ ラットの大動脈 １７００ 人の舌 １４００ これらのデータから、全体的な成長速度の点で連続細胞
系統培養よりもＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ／ＤＡＳ／ポリスチレン面の方が一
次細胞より有効であることが分かる。
系統培養よりもＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅ
ｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ／ＤＡＳ／ポリスチレン面の方が一
次細胞より有効であることが分かる。
【００５２】図１２に示すように、ペプチド面を用いる
と人の内皮細胞（ＨＥＣ’Ｓ）の結合融合性単一層の生
存度が延びるといった実質的な利点がある。ペプチド面
をフィブロネクチンコート面と比較すると、２０間の定
温放置の後は細胞成長媒質中では顕著な細胞分離は見ら
れず、くぼみ数も４０％増加していた。なお、図１２に
おいて、図には３つの面に関する結果が示されている。
すなわち、標準空気ープラズマまたはコロナ放電処理し
たポリスチレン面（制御）、フィブロネクチン層（フィ
ブロネクチン）を有する標準空気ープラズマまたはコロ
ナ放電処理ポリスチレン面、細胞結合ペプチドＧｌｙ−
Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（．
１ ＤＡＳ／１００Ｒ／Ｇ）を結合した後に０．１０
ｍｇ／ｍｌ溶液を用いてＤＡＳでコーティングし、１ｍ
Ｍのジラード試薬で処理したポリスチレン面の３面であ
る。
と人の内皮細胞（ＨＥＣ’Ｓ）の結合融合性単一層の生
存度が延びるといった実質的な利点がある。ペプチド面
をフィブロネクチンコート面と比較すると、２０間の定
温放置の後は細胞成長媒質中では顕著な細胞分離は見ら
れず、くぼみ数も４０％増加していた。なお、図１２に
おいて、図には３つの面に関する結果が示されている。
すなわち、標準空気ープラズマまたはコロナ放電処理し
たポリスチレン面（制御）、フィブロネクチン層（フィ
ブロネクチン）を有する標準空気ープラズマまたはコロ
ナ放電処理ポリスチレン面、細胞結合ペプチドＧｌｙ−
Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（．
１ ＤＡＳ／１００Ｒ／Ｇ）を結合した後に０．１０
ｍｇ／ｍｌ溶液を用いてＤＡＳでコーティングし、１ｍ
Ｍのジラード試薬で処理したポリスチレン面の３面であ
る。
【００５３】実 験 ＤＡＳ分解 プラスチック計量ボート内で水約２ ｍｌに約０．０５
０ｇのＤＡＳを添加してペーストを生成した。ＤＡＳペ
ーストを１０００ ｍｌ沸騰フラスコに添加して、全体
量が約５００ ｍｌになるまで水を加えた。沸騰フラス
コに還流凝縮器を装着し、ホットプレート上で約５３分
間加熱すると高硬化した。約２５分間沸騰させた後で溶
液は透明になった（全体の加熱時間は約４８分間）。次
に、フラスコを氷浴中で約１５分間冷却した。
０ｇのＤＡＳを添加してペーストを生成した。ＤＡＳペ
ーストを１０００ ｍｌ沸騰フラスコに添加して、全体
量が約５００ ｍｌになるまで水を加えた。沸騰フラス
コに還流凝縮器を装着し、ホットプレート上で約５３分
間加熱すると高硬化した。約２５分間沸騰させた後で溶
液は透明になった（全体の加熱時間は約４８分間）。次
に、フラスコを氷浴中で約１５分間冷却した。
【００５４】ＤＡＳコートと乾燥 ０．１０ ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ水溶液を２４くぼみポリ
スチレンプレートの各くぼみに約２ ｍｌづつ添加し
て、この溶液をプレート内で室温にて約１５分間そのま
まにした。次にこの溶液を移し替えた。アルミニウムプ
レートの表面にポリスチレンプレートを配置し、強制空
気炉（フィッシャー イソテンプ (Fisher Isotemp)）
内で約１５分間６５℃の温度で乾燥した。
スチレンプレートの各くぼみに約２ ｍｌづつ添加し
て、この溶液をプレート内で室温にて約１５分間そのま
まにした。次にこの溶液を移し替えた。アルミニウムプ
レートの表面にポリスチレンプレートを配置し、強制空
気炉（フィッシャー イソテンプ (Fisher Isotemp)）
内で約１５分間６５℃の温度で乾燥した。
【００５５】ガラス表面の化学変性 ２．５４ｃｍ（１インチ） ｘ ７．６２ｃｍ（３イン
チ）のサイズの複数のソーダ石灰ガラス顕微鏡スライド
をプラスモッド(Plasmod) （マーチ インスツルメント
(MARCH INSTRUMENTS) ）内にて約１Ｔｏｒｒの気圧の酸
素中で約３０秒間処理した。次に、濃度１０％の３ーア
ミノプロピルトリエトキシレン（ペトラーチ システム
ズ社 Ａ０７５０）水溶液内に前記スライドを約７０℃
の温度で約１８時間浸漬した。次にこれらのスライドを
水で洗浄し、約９５℃の温度で約１８時間硬化させた。
チ）のサイズの複数のソーダ石灰ガラス顕微鏡スライド
をプラスモッド(Plasmod) （マーチ インスツルメント
(MARCH INSTRUMENTS) ）内にて約１Ｔｏｒｒの気圧の酸
素中で約３０秒間処理した。次に、濃度１０％の３ーア
ミノプロピルトリエトキシレン（ペトラーチ システム
ズ社 Ａ０７５０）水溶液内に前記スライドを約７０℃
の温度で約１８時間浸漬した。次にこれらのスライドを
水で洗浄し、約９５℃の温度で約１８時間硬化させた。
【００５６】アミノシランコートガラスのＤＡＳコート 複数のチャンバースライド（ナンク(Nunc)）表面のくぼ
みから壁(wall)を取り除き、上記引用したシランコート
スライド表面にこの壁を接着する。くぼみ内の各シラン
コートスライドの表面に０．１０ ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ
水溶液を約２ｍｌ載置する。この水溶液を室温にて約１
時間前記スライド表面に放置する。次に溶液を移し替え
る。アルミニウムプレートの表面にスライドを載置し、
強制空気炉（フィッシャー イソテンプ）内で約６５℃
の温度で約１５分間乾燥させた。
みから壁(wall)を取り除き、上記引用したシランコート
スライド表面にこの壁を接着する。くぼみ内の各シラン
コートスライドの表面に０．１０ ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ
水溶液を約２ｍｌ載置する。この水溶液を室温にて約１
時間前記スライド表面に放置する。次に溶液を移し替え
る。アルミニウムプレートの表面にスライドを載置し、
強制空気炉（フィッシャー イソテンプ）内で約６５℃
の温度で約１５分間乾燥させた。
【００５７】ＤＡＳコート面へのペプチドの結合 接着ペプチドＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ
−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（テリオス社(TELIOS, INC.)を約１０
０μｇ／ｍｌ含んだｐＨ約７の１００ ｍＭＭＯＰＳ、
２０ ｍＭ ＮａＣＮＢＨ3 水溶液を生成した。この
水溶液０．２ｍｌを２４くぼみプレートの各くぼみに添
加した。揺動シェーカーテーブルにこのプレートを載置
し、約２２℃の温度で約１８時間放置した。次に、この
溶液をピペットで除去した。ｐＨ７の燐酸塩緩衝塩水で
くぼみを洗浄した。さらに、このプレートを強制空気炉
（フィッシャー イソテンプ）内にて約３０−３５℃の
温度で約１時間乾燥させた。
−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（テリオス社(TELIOS, INC.)を約１０
０μｇ／ｍｌ含んだｐＨ約７の１００ ｍＭＭＯＰＳ、
２０ ｍＭ ＮａＣＮＢＨ3 水溶液を生成した。この
水溶液０．２ｍｌを２４くぼみプレートの各くぼみに添
加した。揺動シェーカーテーブルにこのプレートを載置
し、約２２℃の温度で約１８時間放置した。次に、この
溶液をピペットで除去した。ｐＨ７の燐酸塩緩衝塩水で
くぼみを洗浄した。さらに、このプレートを強制空気炉
（フィッシャー イソテンプ）内にて約３０−３５℃の
温度で約１時間乾燥させた。
【００５８】Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（ＳＩＧＭＡ），Ｇｌｙ−
Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ（ＴＥＬＩＯＳ，ＩＮＣ．），
Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｔｙｒペプチドに
ついても同じ方法を実施した。
Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ（ＴＥＬＩＯＳ，ＩＮＣ．），
Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｔｙｒペプチドに
ついても同じ方法を実施した。
【００５９】ＤＡＳコート面へのタンパク質の結合 ＩｇＧを０．１０ ｍｇ／ｍｌ含んだｐＨ約７の１００
ｍＭ ＭＯＰＳ及び２０ｍＭ ＮａＣＮＢＨ3 とｐＨ約
４．５の１００ｍＭアセテートの水溶液を生成した。２
４くぼみプレートの各くぼみに２ｍｌの溶液を添加し
た。このプレートを揺動シェーカーテーブル上に載置
し、約２２℃の温度で約１８時間放置した。次に、この
水溶液をピペットで除去する。ｐＨ約７の燐酸塩緩衝塩
水でこのくぼみを洗浄した。強制空気炉（フィッシャー
イソテンプ）内にて約３０−３５℃の温度で約１時間
乾燥した。
ｍＭ ＭＯＰＳ及び２０ｍＭ ＮａＣＮＢＨ3 とｐＨ約
４．５の１００ｍＭアセテートの水溶液を生成した。２
４くぼみプレートの各くぼみに２ｍｌの溶液を添加し
た。このプレートを揺動シェーカーテーブル上に載置
し、約２２℃の温度で約１８時間放置した。次に、この
水溶液をピペットで除去する。ｐＨ約７の燐酸塩緩衝塩
水でこのくぼみを洗浄した。強制空気炉（フィッシャー
イソテンプ）内にて約３０−３５℃の温度で約１時間
乾燥した。
【００６０】ＩｇＧの濃度を変化させてこの方法を繰り
返した。同じ濃度のアルブミンについても同じ方法を実
施した。
返した。同じ濃度のアルブミンについても同じ方法を実
施した。
【００６１】細胞成長 上記Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ
−ＬｙｓでコートされたプレートをＶｅｎｄｏｒに送っ
て滅菌した。牛の血清アルブミン（ＢＳＡ）３％と２４
２μｇ／ｍｌのグルタミン（ＤＭＥＭ）を追加したダル
ベッコ変性イーグル培地(Dulbeco's Modified Eagles M
edium)５００μｌを各くぼみに添加し、室温にて約３０
分間定温放置する。ピペットで全てのくぼみから液体を
除去する。０．０２％ＢＳＡと人のへその血管内皮細胞
懸濁液（ＨＵＶＥＣ）２００μｌを加えた１ｍｌのＤＭ
ＥＭを各くぼみに添加する。次に、くぼみを３７℃の温
度で５％ＣＯ2 中にて定温放置を数回行う。定温放置
後、前記液体と未結合細胞をピペットでくぼみから除去
する。燐酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ）２ｍｌを各くぼみに添
加し、次にくぼみを優しくシェイクする。くぼみから前
記液体を除去し、ＰＢＳ洗浄ステップを繰り返す。次
に、各くぼみに０．１％トリプシン１ｍｌを添加する。
１０分後、クールター計数器で剥離した細胞をカウント
する。
−ＬｙｓでコートされたプレートをＶｅｎｄｏｒに送っ
て滅菌した。牛の血清アルブミン（ＢＳＡ）３％と２４
２μｇ／ｍｌのグルタミン（ＤＭＥＭ）を追加したダル
ベッコ変性イーグル培地(Dulbeco's Modified Eagles M
edium)５００μｌを各くぼみに添加し、室温にて約３０
分間定温放置する。ピペットで全てのくぼみから液体を
除去する。０．０２％ＢＳＡと人のへその血管内皮細胞
懸濁液（ＨＵＶＥＣ）２００μｌを加えた１ｍｌのＤＭ
ＥＭを各くぼみに添加する。次に、くぼみを３７℃の温
度で５％ＣＯ2 中にて定温放置を数回行う。定温放置
後、前記液体と未結合細胞をピペットでくぼみから除去
する。燐酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ）２ｍｌを各くぼみに添
加し、次にくぼみを優しくシェイクする。くぼみから前
記液体を除去し、ＰＢＳ洗浄ステップを繰り返す。次
に、各くぼみに０．１％トリプシン１ｍｌを添加する。
１０分後、クールター計数器で剥離した細胞をカウント
する。
【図１】未処理ポリスチレン（ＵＴＰＳ）表面コート用
ＤＡＳ溶液の濃度と該コート面においてＤＮＰＨアッセ
イを用いて測定した３６０ナノメーター(nm)での吸光度
との関係を示したグラフ
ＤＡＳ溶液の濃度と該コート面においてＤＮＰＨアッセ
イを用いて測定した３６０ナノメーター(nm)での吸光度
との関係を示したグラフ
【図２】還流ＤＡＳ溶液の沸騰時間と該溶液の２４０ｎ
ｍの波長での吸光度の関係と、前記沸騰時間とコート面
上においてＤＮＰＨアッセイを用いて測定した３６０ｎ
ｍでの吸光度との関係も示したグラフ
ｍの波長での吸光度の関係と、前記沸騰時間とコート面
上においてＤＮＰＨアッセイを用いて測定した３６０ｎ
ｍでの吸光度との関係も示したグラフ
【図３】バッチ数を変化させながら一定時間沸騰させた
ＤＡＳ溶液と該溶液の２４０ｎｍの波長での吸光度との
関係と、当該バッチと前記コート面上においてＤＮＰＨ
アッセイを用い３６０ｎｍで測定した吸光度との関係も
示したグラフ
ＤＡＳ溶液と該溶液の２４０ｎｍの波長での吸光度との
関係と、当該バッチと前記コート面上においてＤＮＰＨ
アッセイを用い３６０ｎｍで測定した吸光度との関係も
示したグラフ
【図４】０．１０ ｍｇ／ｍｌ ＤＡＳ溶液へのポリス
チレン表面の浸漬時間と、該表面において３６０ｎｍの
波長で測定したＤＮＰＨアッセイ吸光度との関係を示し
たグラフ
チレン表面の浸漬時間と、該表面において３６０ｎｍの
波長で測定したＤＮＰＨアッセイ吸光度との関係を示し
たグラフ
【図５】０．１０ ｍｇ／ｍｌ ＤＡＳ溶液を用いてＤ
ＡＳで生成した未殺菌ＤＡＳコートポリスチレン支持体
の相対湿度（ＲＨ）を３０％、７０％、９０％とした場
合の数日間に及ぶ保存時間と、前記コート面上における
３６０ｎｍの波長で測定したＤＮＰＨアッセイ吸光度と
の関係を示すグラフ
ＡＳで生成した未殺菌ＤＡＳコートポリスチレン支持体
の相対湿度（ＲＨ）を３０％、７０％、９０％とした場
合の数日間に及ぶ保存時間と、前記コート面上における
３６０ｎｍの波長で測定したＤＮＰＨアッセイ吸光度と
の関係を示すグラフ
【図６】０．１０ ｍｇ／ｍｌ ＤＡＳ溶液を用いてＤ
ＡＳで生成したガンマ線照射殺菌処理したＤＡＳコート
ポリスチレン支持体の相対湿度（ＲＨ）を３０％、７０
％、９０％とした場合の数日間に及ぶ保存時間と、３６
０ｎｍの波長で測定した前記コート面のＤＮＰＨアッセ
イ吸光度との関係を示すグラフ
ＡＳで生成したガンマ線照射殺菌処理したＤＡＳコート
ポリスチレン支持体の相対湿度（ＲＨ）を３０％、７０
％、９０％とした場合の数日間に及ぶ保存時間と、３６
０ｎｍの波長で測定した前記コート面のＤＮＰＨアッセ
イ吸光度との関係を示すグラフ
【図７】細胞付着ペプチドＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓを用いたペプチド懸濁液
の濃度と、ペプチドコート面上における５３０ｎｍの波
長で測定した金アッセイ吸光度との関係を示すグラフ
ｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓを用いたペプチド懸濁液
の濃度と、ペプチドコート面上における５３０ｎｍの波
長で測定した金アッセイ吸光度との関係を示すグラフ
【図８】ラットの大動脈の平滑筋細胞に関する結果を１
日の数分の１の成長時間と、表面上でカウントした特定
細胞の数で示したグラフ
日の数分の１の成長時間と、表面上でカウントした特定
細胞の数で示したグラフ
【図９】人の舌細胞に関する結果を１日の数分の１の成
長時間と、表面上でカウントした特定細胞の数で示した
グラフ
長時間と、表面上でカウントした特定細胞の数で示した
グラフ
【図１０】人の内皮細胞に関する結果を１日の数分の１
の成長時間と、表面上でカウントした特定細胞の数で示
したグラフ
の成長時間と、表面上でカウントした特定細胞の数で示
したグラフ
【図１１】数日に及ぶ成長時間と、表面上でカウントし
た人の内皮細胞の値との関係を示すグラフ
た人の内皮細胞の値との関係を示すグラフ
【図１２】２０日間の定温放置と、目立った細胞分離が
発生していない培養プレート内のくぼみ(wells) のパー
セントとの関係を示すグラフ
発生していない培養プレート内のくぼみ(wells) のパー
セントとの関係を示すグラフ
【図１３】ポリスチレン支持体のコーティングに使用し
たＤＡＳ溶液の濃度（単位、ｍｇ／ｍｌ）と、ＤＡＳコ
ートポリスチレン（ＤＡＳ／ＰＳ）支持体に化学的に結
合した免疫グロブリン（Ｉｇｓ）の抗原性活動（標準Ｃ
ＯＲＮＩＮＧ ＥＬＩＳＡプレートに結合した１．５μ
ｇ／ｍｌから得られた吸光度信号のパーセントで表示）
との関係を示すグラフ
たＤＡＳ溶液の濃度（単位、ｍｇ／ｍｌ）と、ＤＡＳコ
ートポリスチレン（ＤＡＳ／ＰＳ）支持体に化学的に結
合した免疫グロブリン（Ｉｇｓ）の抗原性活動（標準Ｃ
ＯＲＮＩＮＧ ＥＬＩＳＡプレートに結合した１．５μ
ｇ／ｍｌから得られた吸光度信号のパーセントで表示）
との関係を示すグラフ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 レロイ エス ハーシュ アメリカ合衆国 ニューヨーク州 14870 ペインテッド ポスト ピーオーボック ス 449 (72)発明者 フランシス マリー スミス アメリカ合衆国 ニューヨーク州 14901 エルマイラ ウェスト フィフス スト リート 202
Claims (20)
- 【請求項１】 ジアルデヒド澱粉の少なくとも一部が表
面に吸着されるよう当該表面上にジアルデヒド澱粉の水
溶液を十分な時間載置する段階と、 該水溶液を除去する段階と、 約５０℃から約１５０℃の温度で前記表面を乾燥させる
段階とからなることを特徴とする表面へのジアルデヒド
澱粉付着方法。 - 【請求項２】 前記ジアルデヒド澱粉水溶液は、 ペーストが生成されるようジアルデヒド澱粉の一部に水
を添加する段階と、 酸化澱粉細粒が水中に十分分散するまで前記ペーストを
水で還流させる段階と、 前記ジアルデヒド澱粉溶液を室温まで急速に冷却する段
階とからなる方法で生成することを特徴とする請求項１
記載のジアルデヒド澱粉表面付着方法。 - 【請求項３】 前記ジアルデヒド澱粉水溶液の濃度は少
なくとも０．０５ｍｇ／ｍｌであり、前記ジアルデヒド
澱粉水溶液に前記表面を少なくとも１５分間暴露するこ
とを特徴とする請求項１記載のジアルデヒド澱粉表面付
着方法。 - 【請求項４】 前記ジアルデヒド澱粉水溶液の濃度は少
なくとも０．１０ｍｇ／ｍｌであり、前記ジアルデヒド
澱粉水溶液に前記表面を少なくとも２分間暴露すること
を特徴とする請求項１記載のジアルデヒド澱粉表面付着
方法。 - 【請求項５】 前記表面を約６５℃から約７５℃の温度
で乾燥させることを特徴とする請求項１記載のジアルデ
ヒド澱粉表面付着方法。 - 【請求項６】 前記表面は、ポリスチレン、ポリプロピ
レン、ポリエチレンテレフタレート、ポリアロマー、セ
ルロース アセテート、ポリメチルペンテンからなるグ
ループから選択したポリマー面であることを特徴とする
請求項１記載のジアルデヒド澱粉表面付着方法。 - 【請求項７】 前記表面は実験器具コンテナーの内部に
配置することを特徴とする請求項６記載のジアルデヒド
澱粉表面付着方法。 - 【請求項８】 前記表面はアミノシランコートガラスで
あることを特徴とする請求項１記載のジアルデヒド澱粉
表面付着方法。 - 【請求項９】 前記アミノシランコートガラスは、 前記ガラスを酸素プラズマ中にて約１Ｔｏｒｒの気圧で
約３０秒間処理する段階と、 約１０％の３−アミノプロピルトリエトキシレンの水溶
液中に前記処理を施したガラスを約６０℃から約８０℃
の温度で約３時間浸漬する段階と、 浸漬後前記ガラスを洗浄する段階と、 洗浄した前記ガラスを約５０℃から１２０℃の温度で約
１８ー２４時間硬化させる段階とからなる方法で生成す
ることを特徴とする請求項８記載のジアルデヒド澱粉表
面付着方法。 - 【請求項１０】 還元剤と生物的活性分子と適当な緩衝
剤を含有するｐＨ約７の溶液を請求項１記載の方法で活
性させた表面の上に載置する段階と、 約２０℃から約２５℃の温度で前記溶液で全体をコート
した前記表面を少なくとも２時間優しくシェイクする段
階と、 前記溶液を除去する段階と、 約３５℃から約４０℃の温度で前記表面を乾燥させる段
階とからなることを特徴とする細胞成長用表面の生成方
法。 - 【請求項１１】 前記生物活性分子は、Ｇｌｙ−Ａｒｇ
−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ，Ｌｙｓ−
Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ，Ａｒｇ−Ｌ
ｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｔｙｒからなるグループから選
択したものであることを特徴とする請求項１０記載の細
胞成長用表面の生成方法。 - 【請求項１２】 ジアルデヒド澱粉の分子が吸着する面
を少なくとも１面備えていることを特徴とする物質結合
可能支持体。 - 【請求項１３】 請求項１の方法で生成した面を少なく
とも１面備えていることを特徴とする物質結合可能支持
体。 - 【請求項１４】 前記支持体は、請求項１の方法で生成
した内面を少なくとも１面備えているフラスコであるこ
とを特徴とする請求項１３記載の支持体。 - 【請求項１５】 前記ジアルデヒド澱粉コート面に結合
した生物活性分子をさらに具備していることを特徴とす
る請求項１３記載の支持体。 - 【請求項１６】 前記生物活性分子は細胞結合ペプチド
であることを特徴とする請求項１５記載の支持体。 - 【請求項１７】 前記細胞結合ペプチドは、Ｇｌｙ−Ａ
ｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ，Ｌｙ
ｓ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ，Ａｒｇ
−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｔｙｒからなるグループか
ら選択したものであることを特徴とする請求項１６記載
の支持体。 - 【請求項１８】 前記生物活性分子は細胞結合タンパク
質であることを特徴とする請求項１５記載の支持体。 - 【請求項１９】 前記細胞結合タンパク質は、免疫グロ
ブリン、牛の血清アルブミンからなるグループから選択
したものであることを特徴とする請求項１８記載の支持
体。 - 【請求項２０】 前記ジアルデヒド澱粉コート面に結合
したゼラチン膜をさらに具備していることを特徴とする
請求項１３記載の支持体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/972,327 US5281660A (en) | 1992-11-05 | 1992-11-05 | Method of attaching dialdehyde starch to a surface and products produced by that method |
| US972327 | 1992-11-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06209759A true JPH06209759A (ja) | 1994-08-02 |
Family
ID=25519524
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5276686A Withdrawn JPH06209759A (ja) | 1992-11-05 | 1993-11-05 | ジアルデヒド澱粉の表面付着方法及びその生成物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5281660A (ja) |
| EP (1) | EP0596315B1 (ja) |
| JP (1) | JPH06209759A (ja) |
| CA (1) | CA2108608A1 (ja) |
| DE (1) | DE69316707T2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| US5931165A (en) * | 1994-09-06 | 1999-08-03 | Fusion Medical Technologies, Inc. | Films having improved characteristics and methods for their preparation and use |
| US6391655B1 (en) * | 1997-07-30 | 2002-05-21 | Corning Incorporated | Oxidized styrenic polymers for DNA binding |
| US6615842B1 (en) | 1998-02-13 | 2003-09-09 | Cerami Consulting Corp. | Methods for removing nucleophilic toxins from tobacco smoke |
| AU759687B2 (en) * | 1998-07-21 | 2003-04-17 | Pharmexa A/S | Coating of solid surfaces with activated polyhydroxypolymers |
| US7041506B2 (en) * | 2001-11-19 | 2006-05-09 | Becton Dickinson And Company | Peptides promoting cell adherence, growth and secretion |
| US7384742B2 (en) * | 2002-08-16 | 2008-06-10 | Decision Biomarkers, Inc. | Substrates for isolating reacting and microscopically analyzing materials |
| WO2009111022A1 (en) * | 2008-03-07 | 2009-09-11 | Corning Incorporated | Hydrophobically modified cellulose ether derivatives for cell culture and release |
Family Cites Families (13)
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