JPH06207932A - アリールアゾクロモイオノフォアおよびそれを用いたカルシウムイオンの測定方法 - Google Patents
アリールアゾクロモイオノフォアおよびそれを用いたカルシウムイオンの測定方法Info
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- JPH06207932A JPH06207932A JP5263478A JP26347893A JPH06207932A JP H06207932 A JPH06207932 A JP H06207932A JP 5263478 A JP5263478 A JP 5263478A JP 26347893 A JP26347893 A JP 26347893A JP H06207932 A JPH06207932 A JP H06207932A
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- C09B29/34—Monoazo dyes prepared by diazotising and coupling from other coupling components
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- C09B29/3604—Monoazo dyes prepared by diazotising and coupling from other coupling components from heterocyclic compounds containing only a nitrogen as heteroatom
- C09B29/3617—Monoazo dyes prepared by diazotising and coupling from other coupling components from heterocyclic compounds containing only a nitrogen as heteroatom containing a six-membered heterocyclic with only one nitrogen as heteroatom
- C09B29/3643—Monoazo dyes prepared by diazotising and coupling from other coupling components from heterocyclic compounds containing only a nitrogen as heteroatom containing a six-membered heterocyclic with only one nitrogen as heteroatom from quinolines or hydrogenated quinolines
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
Abstract
(57)【要約】
【構成】 式
【化７】
（式中、Ｘは水素または一価の陽イオンであり、ＹはＨ
またはメトキシであり、Ｒは、化合物の光吸収特性に影
響する環状芳香族有機構造である）で示されるアリール
アゾクロモイオノフォア。また、これらの化合物を使用
してカルシウムイオンを検出する方法。 【効果】 生体試料中のカルシウム濃度が、選択性をも
って測定される。
またはメトキシであり、Ｒは、化合物の光吸収特性に影
響する環状芳香族有機構造である）で示されるアリール
アゾクロモイオノフォア。また、これらの化合物を使用
してカルシウムイオンを検出する方法。 【効果】 生体試料中のカルシウム濃度が、選択性をも
って測定される。
Description
【０００１】
【従来の技術】カルシウムは、体内に見られる元素のう
ち非常に重要なものの一つである。これは、骨格にとっ
て必要なだけでなく、細胞にとっても必要である。人体
内には平均して約１kgのカルシウムがあり、うち９９％
は骨に含まれ、残り１％が血漿、細胞外液および細胞間
区画の中に分散している。しかし、この小さな部分は、
多くの生化学的および生理学的な機能における極めて重
大な役割、例えば細胞調節体およびメッセンジャとして
の役割を演じる。これらの機能には、多くの酵素反応お
よびホルモン反応の調整とともに、骨の形成およびホメ
オスタシス、細胞膜の結着性および透過性の維持、神経
興奮、筋肉収縮ならびに血液凝固がある。
ち非常に重要なものの一つである。これは、骨格にとっ
て必要なだけでなく、細胞にとっても必要である。人体
内には平均して約１kgのカルシウムがあり、うち９９％
は骨に含まれ、残り１％が血漿、細胞外液および細胞間
区画の中に分散している。しかし、この小さな部分は、
多くの生化学的および生理学的な機能における極めて重
大な役割、例えば細胞調節体およびメッセンジャとして
の役割を演じる。これらの機能には、多くの酵素反応お
よびホルモン反応の調整とともに、骨の形成およびホメ
オスタシス、細胞膜の結着性および透過性の維持、神経
興奮、筋肉収縮ならびに血液凝固がある。
【０００２】体液、特に血漿中のカルシウムの濃度は、
非常に狭い範囲内に維持しなければならない。カルシウ
ム濃度は、多数のホルモン、主に副甲状腺ホルモン（Ｐ
ＴＨ）およびカルシトニンによって制御される。ＰＴＨ
は、血漿中のカルシウム濃度の低下に応答して副甲状腺
から放出され、腸および尿細管へのカルシウムの吸収を
間接的に促進し、骨からのカルシウムの導出を高める。
骨組織におけるＰＴＨ活性を抑制するカルシトニンは、
カルシウムイオンの増大に応答して甲状腺によって分泌
される。
非常に狭い範囲内に維持しなければならない。カルシウ
ム濃度は、多数のホルモン、主に副甲状腺ホルモン（Ｐ
ＴＨ）およびカルシトニンによって制御される。ＰＴＨ
は、血漿中のカルシウム濃度の低下に応答して副甲状腺
から放出され、腸および尿細管へのカルシウムの吸収を
間接的に促進し、骨からのカルシウムの導出を高める。
骨組織におけるＰＴＨ活性を抑制するカルシトニンは、
カルシウムイオンの増大に応答して甲状腺によって分泌
される。
【０００３】正常なカルシウム濃度からの逸脱は、ある
種の病気の場合に起こる。正常値を大きく下回るカルシ
ウム濃度は、副甲状腺機能低下症、ビタミンＤ欠乏症ま
たは腎炎を示しているおそれがある。正常値を上回るカ
ルシウム濃度は、副甲状腺機能亢進症、ビタミンＤ中毒
症または骨髄腫を示しているおそれがある。
種の病気の場合に起こる。正常値を大きく下回るカルシ
ウム濃度は、副甲状腺機能低下症、ビタミンＤ欠乏症ま
たは腎炎を示しているおそれがある。正常値を上回るカ
ルシウム濃度は、副甲状腺機能亢進症、ビタミンＤ中毒
症または骨髄腫を示しているおそれがある。
【０００４】血漿中の総カルシウムの正常値は約２．４
mM/Lである。一般に、幼児がもっとも高いカルシウム濃
度を有しており、それは年齢とともにわずかに低下す
る。
mM/Lである。一般に、幼児がもっとも高いカルシウム濃
度を有しており、それは年齢とともにわずかに低下す
る。
【０００５】血清中のカルシウムの測定は、シュウ酸ア
ンモニウムによってカルシウムを沈殿させ、沈殿物を乾
燥、秤量する重量分析法とともに始まった。この方法
は、１９２１年に、シュウ酸カルシウムを酸に溶解さ
せ、過マンガン酸カリウムを用いる滴定によってシュウ
酸塩を測定する技術が報告されたときに改良された。滴
定の間の洗浄手法および温度を標準化してこの方法を改
良したものを、カルシウム測定のための主な手法として
使用していた。かなり正確ではあったが、これらの手法
は多量の血清を必要とし、時間浪費的であった。１９４
０年代には、ムレキシドを指示薬として使用する、より
高感度で迅速な錯滴定法が導入された。他のいくつかの
指示薬、例えばカルコン、カルセイン、メチルチモール
ブルー、エリオクロムブラックＴ、グリオキサールビス
−（２−ヒドロキシアニル）およびアルセナゾIII が続
いて導入された。どの指示薬を使用するかにかかわら
ず、これらの錯滴定法は、多量の血清試料を必要とし、
時間浪費的であり、不明確な終点およびカルシウム以外
の金属イオンによる干渉を欠点にもつものであった。
ンモニウムによってカルシウムを沈殿させ、沈殿物を乾
燥、秤量する重量分析法とともに始まった。この方法
は、１９２１年に、シュウ酸カルシウムを酸に溶解さ
せ、過マンガン酸カリウムを用いる滴定によってシュウ
酸塩を測定する技術が報告されたときに改良された。滴
定の間の洗浄手法および温度を標準化してこの方法を改
良したものを、カルシウム測定のための主な手法として
使用していた。かなり正確ではあったが、これらの手法
は多量の血清を必要とし、時間浪費的であった。１９４
０年代には、ムレキシドを指示薬として使用する、より
高感度で迅速な錯滴定法が導入された。他のいくつかの
指示薬、例えばカルコン、カルセイン、メチルチモール
ブルー、エリオクロムブラックＴ、グリオキサールビス
−（２−ヒドロキシアニル）およびアルセナゾIII が続
いて導入された。どの指示薬を使用するかにかかわら
ず、これらの錯滴定法は、多量の血清試料を必要とし、
時間浪費的であり、不明確な終点およびカルシウム以外
の金属イオンによる干渉を欠点にもつものであった。
【０００６】より最近、滴定法に代わって、種々の金属
色素指示薬を使用する直接的な分光光度法が使用される
ようになった。そのような分光光度法のもっとも一般的
なものは、ο−クレゾールフタレイン錯体（ＣＰＣ）法
である。この方法では、カルシウムがアルカリ性溶液
（ｐＨ１０．５〜１２）中でＣＰＣと結合して濃紫色の
カルシウム−色素錯体を形成させる。色素の吸光度は５
７５nmで増大し、試料中のカルシウムの濃度に比例す
る。この方法の欠点は、pH１０〜１２の範囲で実施しな
ければならないことである。この範囲のpHでは、試薬が
二酸化炭素を吸収して、ベースラインのドリフトを招く
おそれがある。
色素指示薬を使用する直接的な分光光度法が使用される
ようになった。そのような分光光度法のもっとも一般的
なものは、ο−クレゾールフタレイン錯体（ＣＰＣ）法
である。この方法では、カルシウムがアルカリ性溶液
（ｐＨ１０．５〜１２）中でＣＰＣと結合して濃紫色の
カルシウム−色素錯体を形成させる。色素の吸光度は５
７５nmで増大し、試料中のカルシウムの濃度に比例す
る。この方法の欠点は、pH１０〜１２の範囲で実施しな
ければならないことである。この範囲のpHでは、試薬が
二酸化炭素を吸収して、ベースラインのドリフトを招く
おそれがある。
【０００７】アルセナゾIII は、多くの二価および三価
の陽イオンとともに色付き錯体を形成させるが、マグネ
シウムイオンによる大きな干渉を受けることなく、pH
５．５でカルシウムイオンのマイクロモル量を測定する
ために使用することができる。この試薬は、生理pHでの
カルシウムイオンに対する高い親和性、６５０nmでのカ
ルシウム−色素錯体の高い吸光係数および水溶液中での
高い化学安定性を示す。したがって、単一細胞中のカル
シウムのマイクロモル濃度を測定するのに有用な手段と
なった。アルセナゾIII は、研究者たちにより、細胞お
よび細胞画分におけるカルシウム輸送の研究に広く利用
されているが、臨床化学におけるその有用性は、有毒な
ヒ素成分の存在ならびにそれに伴う安全性および環境上
の懸念により、限られたものであった。
の陽イオンとともに色付き錯体を形成させるが、マグネ
シウムイオンによる大きな干渉を受けることなく、pH
５．５でカルシウムイオンのマイクロモル量を測定する
ために使用することができる。この試薬は、生理pHでの
カルシウムイオンに対する高い親和性、６５０nmでのカ
ルシウム−色素錯体の高い吸光係数および水溶液中での
高い化学安定性を示す。したがって、単一細胞中のカル
シウムのマイクロモル濃度を測定するのに有用な手段と
なった。アルセナゾIII は、研究者たちにより、細胞お
よび細胞画分におけるカルシウム輸送の研究に広く利用
されているが、臨床化学におけるその有用性は、有毒な
ヒ素成分の存在ならびにそれに伴う安全性および環境上
の懸念により、限られたものであった。
【０００８】Biochemistry 19, 2396 （1980）におい
て、Tsien は、２−［［２−ビス（エトキシカルボニ
ル）メチル］アミノ］キノリン（ＱＵＩＮ１）およびそ
の６−メトキシ類似体（ＱＵＩＮ２）の製造を報告して
いる。これらの化合物は、蛍光カルシウムイオノフォア
として有用性を有するものとして記載されている。後の
出版物において、Tsien らは、ＱＵＩＮ２の蛍光を監視
することが［Ｃａ++］を測定するのにもっとも一般的な
方法であると記載している。Tsien らはさらに、ＱＵＩ
Ｎ２が非常に重要な生物学的情報を明らかにしたが、そ
の好ましい励起波長３３９nmが短か過ぎるため、その用
途にはいくつか固有の制限があるということを指摘して
いる。また、その吸光係数（＜５，０００）および蛍光
量子収量（０．０３〜０．１４）も低過ぎることを指摘
している。それに加え、満足ゆく結果を得るためには、
細胞からの自己蛍光が数十ミリモル以上のＱＵＩＮ２の
添加量を必要とする。また、ＱＵＩＮ２は、励起波長ま
たは発光波長のいずれにおいても大きなシフトを伴わず
に、その蛍光強度を高めることによってＣａ++を表示す
るということと、強い蛍光を維持しながらも波長をシフ
トすることによってカルシウムに応答する試薬が必要で
あるということとが指摘されている。ＱＵＩＮ２に関し
て報告されているもう一つの欠点は、マグネシウムおよ
び重金属二価陽イオンよりもカルシウムに対する選択性
の改善に関することである。この論文はさらに、スチル
ベン蛍光団と、エチレングリコールビス（β−アミノエ
チルエーテル）（ＥＧＴＡ）および１，２−ビス（ο−
アミノフェノキシ）エタノール−Ｎ，Ｎ，Ｎ′Ｎ′−テ
トラ酢酸（ＢＡＰＴＡ）に特徴的な八配位テトラカルボ
キシレートパターンの配位基とを有する化合物がＱＵＩ
Ｎ２に好ましいということを指摘している。この好まし
さは、いくつかの要因、例えばＣａ++に対する選択性の
改善、ならびにＣａ++結合時にはるかに強い蛍光を波長
シフトとともに示すＢＡＰＴＡおよびＥＧＴＡの能力に
基づいている。これらの化合物の製造および用途はま
た、Tsien らの米国特許第４，６０３，２０９号明細書
に開示されている。
て、Tsien は、２−［［２−ビス（エトキシカルボニ
ル）メチル］アミノ］キノリン（ＱＵＩＮ１）およびそ
の６−メトキシ類似体（ＱＵＩＮ２）の製造を報告して
いる。これらの化合物は、蛍光カルシウムイオノフォア
として有用性を有するものとして記載されている。後の
出版物において、Tsien らは、ＱＵＩＮ２の蛍光を監視
することが［Ｃａ++］を測定するのにもっとも一般的な
方法であると記載している。Tsien らはさらに、ＱＵＩ
Ｎ２が非常に重要な生物学的情報を明らかにしたが、そ
の好ましい励起波長３３９nmが短か過ぎるため、その用
途にはいくつか固有の制限があるということを指摘して
いる。また、その吸光係数（＜５，０００）および蛍光
量子収量（０．０３〜０．１４）も低過ぎることを指摘
している。それに加え、満足ゆく結果を得るためには、
細胞からの自己蛍光が数十ミリモル以上のＱＵＩＮ２の
添加量を必要とする。また、ＱＵＩＮ２は、励起波長ま
たは発光波長のいずれにおいても大きなシフトを伴わず
に、その蛍光強度を高めることによってＣａ++を表示す
るということと、強い蛍光を維持しながらも波長をシフ
トすることによってカルシウムに応答する試薬が必要で
あるということとが指摘されている。ＱＵＩＮ２に関し
て報告されているもう一つの欠点は、マグネシウムおよ
び重金属二価陽イオンよりもカルシウムに対する選択性
の改善に関することである。この論文はさらに、スチル
ベン蛍光団と、エチレングリコールビス（β−アミノエ
チルエーテル）（ＥＧＴＡ）および１，２−ビス（ο−
アミノフェノキシ）エタノール−Ｎ，Ｎ，Ｎ′Ｎ′−テ
トラ酢酸（ＢＡＰＴＡ）に特徴的な八配位テトラカルボ
キシレートパターンの配位基とを有する化合物がＱＵＩ
Ｎ２に好ましいということを指摘している。この好まし
さは、いくつかの要因、例えばＣａ++に対する選択性の
改善、ならびにＣａ++結合時にはるかに強い蛍光を波長
シフトとともに示すＢＡＰＴＡおよびＥＧＴＡの能力に
基づいている。これらの化合物の製造および用途はま
た、Tsien らの米国特許第４，６０３，２０９号明細書
に開示されている。
【０００９】より最近には、Toner らが、ＢＡＰＴＡお
よびＢＡＰＴＡ様化合物の発色性誘導体を米国特許第
４，７９５，７１２号明細書に開示している。Toner ら
は、Tsien の蛍光化合物は、スペクトルの紫外領域にお
いて吸収し、その結果、ＵＶおよび短い可視波長におい
て吸収する体液の通常の成分が、標準的な比色機器およ
び手法ではバックグラウンド干渉を起こすことが多いと
いう欠点を有することを指摘している。Toner らはさら
に、長波長（４００nm越える）で検出することができ、
カルシウムと錯化したときに他の波長にシフトする、選
択性の高いカルシウム錯化合物を得て、ＵＶおよび短波
長可視光吸収種による干渉を受けずにカルシウムの定量
分析を可能にすることが望ましいと論じている。
よびＢＡＰＴＡ様化合物の発色性誘導体を米国特許第
４，７９５，７１２号明細書に開示している。Toner ら
は、Tsien の蛍光化合物は、スペクトルの紫外領域にお
いて吸収し、その結果、ＵＶおよび短い可視波長におい
て吸収する体液の通常の成分が、標準的な比色機器およ
び手法ではバックグラウンド干渉を起こすことが多いと
いう欠点を有することを指摘している。Toner らはさら
に、長波長（４００nm越える）で検出することができ、
カルシウムと錯化したときに他の波長にシフトする、選
択性の高いカルシウム錯化合物を得て、ＵＶおよび短波
長可視光吸収種による干渉を受けずにカルシウムの定量
分析を可能にすることが望ましいと論じている。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、生体
中のカルシウムを測定するのに有用な指示薬を提供する
ことにある。本発明は、ＱＵＩＮ１およびＱＵＩＮ２の
アリールアゾ誘導体が、マグネシウムイオンを含む媒体
中のカルシウムに対して高い選択性を示すため、これら
をＣａ++の比色測定に効果的に使用することができると
いう発見に基づくものである。さらに、これらの化合物
は、同様に誘導体化されたＢＡＰＴＡよりも長波長で光
を吸収し、相当する発色性ＢＡＰＴＡ化合物の場合より
も、非錯化合物に対比して、錯化化合物の最大吸光度に
おいて相当に大きなシフトを示す。
中のカルシウムを測定するのに有用な指示薬を提供する
ことにある。本発明は、ＱＵＩＮ１およびＱＵＩＮ２の
アリールアゾ誘導体が、マグネシウムイオンを含む媒体
中のカルシウムに対して高い選択性を示すため、これら
をＣａ++の比色測定に効果的に使用することができると
いう発見に基づくものである。さらに、これらの化合物
は、同様に誘導体化されたＢＡＰＴＡよりも長波長で光
を吸収し、相当する発色性ＢＡＰＴＡ化合物の場合より
も、非錯化合物に対比して、錯化化合物の最大吸光度に
おいて相当に大きなシフトを示す。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明は、式
【化３】 で示されることを特徴とするアリールアゾカルシウムク
ロモイオノフォアを含む。
ロモイオノフォアを含む。
【００１２】上記式中、Ｘは水素原子または一価の金属
原子であり、Ｙは水素原子またはメトキシ基であり、Ｒ
は、五員もしくは六員の、置換もしくは非置換の芳香環
または複素芳香環の単環であるか、五員もしくは六員
の、置換もしくは非置換の芳香環または複素芳香環との
縮合環である。
原子であり、Ｙは水素原子またはメトキシ基であり、Ｒ
は、五員もしくは六員の、置換もしくは非置換の芳香環
または複素芳香環の単環であるか、五員もしくは六員
の、置換もしくは非置換の芳香環または複素芳香環との
縮合環である。
【００１３】また、本発明の範囲には、これらの発色団
の、カルシウムイオンの定量における用途が含まれる。
の、カルシウムイオンの定量における用途が含まれる。
【００１４】本発明のクロモイオノフォアの合成は、前
述のＹ置換基が水素原子であるところの以下の反応式Ｉ
によって示される。
述のＹ置換基が水素原子であるところの以下の反応式Ｉ
によって示される。
【００１５】
【化４】
【００１６】反応式Ｉを参照すると、カルシウム指示薬
１４〜４１（表２）は、本明細書に述べる方法１または
方法２のいずれかによって製造される。方法１は、芳香
族ジアゾニウム塩Ｒ−Ｎ2 +を１とカップリングさせてア
リールアゾテトラエステル中間体２〜１１（表１）を得
たのち、塩基加水分解を施してカルシウム指示薬１４〜
２３（表２）を得ることを含む。ＱＵＩＮ２の場合、出
発原料１は、６−メトキシ基を有するであろう。
１４〜４１（表２）は、本明細書に述べる方法１または
方法２のいずれかによって製造される。方法１は、芳香
族ジアゾニウム塩Ｒ−Ｎ2 +を１とカップリングさせてア
リールアゾテトラエステル中間体２〜１１（表１）を得
たのち、塩基加水分解を施してカルシウム指示薬１４〜
２３（表２）を得ることを含む。ＱＵＩＮ２の場合、出
発原料１は、６−メトキシ基を有するであろう。
【００１７】
【表１】
【００１８】方法２は、先に、１のエステルを加水分解
して１３を得て、次に、この１３を芳香族ジアゾニウム
塩とカップリングさせて指示薬２４〜４１を得る。アリ
ールアゾ−テトラエステル中間体は結晶性が高く、簡便
な再結晶によって容易に精製することができるため、方
法１が有利である。これらの中間体を好ましい条件のも
とで、すなわち化学量論量またはわずかに過剰の４．０
M のＫＯＨまたはＬｉＯＨをｎ−ブチルアルコール中に
用いる条件のもとで加水分解すると、カルシウム指示薬
化合物が、さらなる精製を必要としない、純粋で捕集し
やすく高い水可溶性の形態で直接得られる。方法２は、
塩基加水分解条件に対して不安定な類似体の合成に関し
て有利である。若干の類似体はいずれかの方法によって
製造することができ、代表的な合成法を以下に示す。す
べての出発原料は、有機合成の当業者にとっては容易に
入手しうるものである。
して１３を得て、次に、この１３を芳香族ジアゾニウム
塩とカップリングさせて指示薬２４〜４１を得る。アリ
ールアゾ−テトラエステル中間体は結晶性が高く、簡便
な再結晶によって容易に精製することができるため、方
法１が有利である。これらの中間体を好ましい条件のも
とで、すなわち化学量論量またはわずかに過剰の４．０
M のＫＯＨまたはＬｉＯＨをｎ−ブチルアルコール中に
用いる条件のもとで加水分解すると、カルシウム指示薬
化合物が、さらなる精製を必要としない、純粋で捕集し
やすく高い水可溶性の形態で直接得られる。方法２は、
塩基加水分解条件に対して不安定な類似体の合成に関し
て有利である。若干の類似体はいずれかの方法によって
製造することができ、代表的な合成法を以下に示す。す
べての出発原料は、有機合成の当業者にとっては容易に
入手しうるものである。
【００１９】カルシウム指示薬化合物４３〜４９（表
２）は、キノリン環に６−メトキシ置換基を含み、当該
技術においては、６位置が置換されていないものをＱＵ
ＩＮ１化合物と呼ぶのに対し、ＱＵＩＮ２化合物として
公知である。これらは、市販のＱＵＩＮ２遊離酸である
化合物４２（Ｘ＝Ｈ；MTM Research Chemicals社、米国
ニューハンプシャー州 Windham）から、方法１を使用し
てこの化合物を適当な芳香族ジアゾニウム塩（Ｒ−
Ｎ2 +）と反応させることによって製造することができ
る。あるいはまた、同じくＭＴＭ社から市販されている
ＱＵＩＮ２テトラエチルエステルを、反応式Ｉ′による
方法２により、まず、芳香族ジアゾニウム塩とカップリ
ングさせてアリールアゾＱＵＩＮ２テトラエステル（例
えば１２）を得て、これを塩基性条件下に加水分解して
カルシウム指示薬化合物（例えば４８）を得てもよい。
２）は、キノリン環に６−メトキシ置換基を含み、当該
技術においては、６位置が置換されていないものをＱＵ
ＩＮ１化合物と呼ぶのに対し、ＱＵＩＮ２化合物として
公知である。これらは、市販のＱＵＩＮ２遊離酸である
化合物４２（Ｘ＝Ｈ；MTM Research Chemicals社、米国
ニューハンプシャー州 Windham）から、方法１を使用し
てこの化合物を適当な芳香族ジアゾニウム塩（Ｒ−
Ｎ2 +）と反応させることによって製造することができ
る。あるいはまた、同じくＭＴＭ社から市販されている
ＱＵＩＮ２テトラエチルエステルを、反応式Ｉ′による
方法２により、まず、芳香族ジアゾニウム塩とカップリ
ングさせてアリールアゾＱＵＩＮ２テトラエステル（例
えば１２）を得て、これを塩基性条件下に加水分解して
カルシウム指示薬化合物（例えば４８）を得てもよい。
【００２０】
【化５】
【００２１】化合物１４〜４１および４３〜４９の構造
および最大吸収の波長を表２に示す。
および最大吸収の波長を表２に示す。
【００２２】
【表２】
【００２３】
【表３】
【００２４】
【表４】
【００２５】
【表５】
【００２６】
【表６】
【００２７】カルシウム指示性化合物、例えば５４〜５
８（表３）は、前述の米国特許第４，７９５，７１２号
明細書に開示されたＢＡＰＴＡのアリールアゾ誘導体で
ある。これらの化合物は、ＢＡＰＴＡテトラエステル化
合物５０から、Ｙ＝５−ＣＨ3 の場合にはJ. Biol. Che
m. 260, 3440（1985）に開示された方法により、あるい
はＹ＝４−tert−Ｃ4 Ｈ9 の場合には前記米国特許第
４，７９５，７１２号明細書に開示された、反応式IIに
示す方法により、製造することができる。
８（表３）は、前述の米国特許第４，７９５，７１２号
明細書に開示されたＢＡＰＴＡのアリールアゾ誘導体で
ある。これらの化合物は、ＢＡＰＴＡテトラエステル化
合物５０から、Ｙ＝５−ＣＨ3 の場合にはJ. Biol. Che
m. 260, 3440（1985）に開示された方法により、あるい
はＹ＝４−tert−Ｃ4 Ｈ9 の場合には前記米国特許第
４，７９５，７１２号明細書に開示された、反応式IIに
示す方法により、製造することができる。
【００２８】
【化６】
【００２９】
【表７】
【００３０】同じ置換アリールアゾ成分をもつＢＡＰＴ
Ａ類似体とＱＵＩＮ類似体とを直接比較することによっ
て、アリールアゾ−ＱＵＩＮ化合物の優れたカルシウム
指示特性を実証するために、５種のアリールアゾ−ＢＡ
ＰＴＡ類似体（５４〜５８）を製造した。表４は、さら
に以下の性能評価で説明する、pH９．０のホウ酸塩緩衝
液中の非錯化（−Ｃａ++）指示薬および金属錯化（＋Ｃ
ａ++）指示薬の可視スペクトルデータをまとめたもので
ある。
Ａ類似体とＱＵＩＮ類似体とを直接比較することによっ
て、アリールアゾ−ＱＵＩＮ化合物の優れたカルシウム
指示特性を実証するために、５種のアリールアゾ−ＢＡ
ＰＴＡ類似体（５４〜５８）を製造した。表４は、さら
に以下の性能評価で説明する、pH９．０のホウ酸塩緩衝
液中の非錯化（−Ｃａ++）指示薬および金属錯化（＋Ｃ
ａ++）指示薬の可視スペクトルデータをまとめたもので
ある。
【００３１】
【表８】
【００３２】表４を参照すると、アリールアゾ−ＱＵＩ
Ｎ化合物が、Ｃａ++と錯化したときに、その最大吸収
（Δλmax ）において、先行技術の相当するアリールア
ゾＢＡＰＴＡ化合物よりも大きなシフトを示すことに注
目することが重要である。表４に示す５対の化合物の場
合、増大したスペクトルシフトの範囲は３０〜５４nmで
あった。
Ｎ化合物が、Ｃａ++と錯化したときに、その最大吸収
（Δλmax ）において、先行技術の相当するアリールア
ゾＢＡＰＴＡ化合物よりも大きなシフトを示すことに注
目することが重要である。表４に示す５対の化合物の場
合、増大したスペクトルシフトの範囲は３０〜５４nmで
あった。
【００３３】色素化学の当業者は、キノリン環系によっ
て与えられる拡大された共役系により、非錯化アリール
アゾ−ＱＵＩＮ化合物のλmax が、相当するアリールア
ゾ−ＢＡＰＴＡ類似体のλmax よりも長波長にあると推
測するかもしれない。しかし、金属錯化アリールアゾ−
ＱＵＩＮ化合物のλmax が、アリールアゾ−ＢＡＰＴＡ
類似体と同波長またはそれよりも短波長にあると推測す
ることはできない。これは、一部には、アリールアゾ−
ＱＵＩＮ指示薬のスペクトルシフトの増大の原因となっ
ており、スペクトルシフトが増大すると、これらの化合
物を生体液中のカルシウムの診断検査に指示薬として使
用する場合に、大きな利点が得られる。
て与えられる拡大された共役系により、非錯化アリール
アゾ−ＱＵＩＮ化合物のλmax が、相当するアリールア
ゾ−ＢＡＰＴＡ類似体のλmax よりも長波長にあると推
測するかもしれない。しかし、金属錯化アリールアゾ−
ＱＵＩＮ化合物のλmax が、アリールアゾ−ＢＡＰＴＡ
類似体と同波長またはそれよりも短波長にあると推測す
ることはできない。これは、一部には、アリールアゾ−
ＱＵＩＮ指示薬のスペクトルシフトの増大の原因となっ
ており、スペクトルシフトが増大すると、これらの化合
物を生体液中のカルシウムの診断検査に指示薬として使
用する場合に、大きな利点が得られる。
【００３４】カルシウムがマグネシウムなど他の金属イ
オンを含む混合物中に高い濃度で存在する場合に、アリ
ールアゾ−ＱＵＩＮ化合物が人間の血液または血漿など
の生体液中のカルシウムの測定に適しているとは全く予
想外である。このように、J.Biological Chem. 260, 34
40 （1985）において、Grynkeiwicz らは、次のように
述べている。「Ｃａ++についてのＱＵＩＮ２の高い有効
親和力は、１０-7M 近くの濃度を測定するのには理想的
であるが、マイクロモル濃度以上では、色素が飽和に近
づき、分解能を失うことをも意味する。」
オンを含む混合物中に高い濃度で存在する場合に、アリ
ールアゾ−ＱＵＩＮ化合物が人間の血液または血漿など
の生体液中のカルシウムの測定に適しているとは全く予
想外である。このように、J.Biological Chem. 260, 34
40 （1985）において、Grynkeiwicz らは、次のように
述べている。「Ｃａ++についてのＱＵＩＮ２の高い有効
親和力は、１０-7M 近くの濃度を測定するのには理想的
であるが、マイクロモル濃度以上では、色素が飽和に近
づき、分解能を失うことをも意味する。」
【００３５】人間の血液中では、Ｃａ++の濃度は１〜２
０mg/dl （２．５×１０-4〜５×１０-3M ）の範囲にあ
ることができ、試料を通常の臨床分析装置上で１００倍
に希釈したときでさえ、最終的なＣａ++濃度はなおも
２．５×１０-6〜５×１０-5Mになり、これは十分にマ
イクロモル範囲である。予想外にも、指示薬を含む分析
試薬溶液の中に試料を１００倍に希釈したときでも、本
発明のアリールアゾ−ＱＵＩＮ化合物は、分解能の損失
を伴わずに血清中の０〜２０mg/dl の範囲のカルシウム
に対して線形の応答を示す。
０mg/dl （２．５×１０-4〜５×１０-3M ）の範囲にあ
ることができ、試料を通常の臨床分析装置上で１００倍
に希釈したときでさえ、最終的なＣａ++濃度はなおも
２．５×１０-6〜５×１０-5Mになり、これは十分にマ
イクロモル範囲である。予想外にも、指示薬を含む分析
試薬溶液の中に試料を１００倍に希釈したときでも、本
発明のアリールアゾ−ＱＵＩＮ化合物は、分解能の損失
を伴わずに血清中の０〜２０mg/dl の範囲のカルシウム
に対して線形の応答を示す。
【００３６】Grynkeiwicz らの参考文献を再び参照する
と、Grynkeiwicz らは、「マグネシウムよりもカルシウ
ムに対するＱＵＩＮ２の選択性が改善されうる」ことを
指摘している。ヒト血清中のＭｇ++濃度は通常カルシウ
ム濃度よりも高く、２．９３mg/dl （１．２×１０-3M
）の高濃度になることもできるため、これは重要な考
えである。Ｍｇ++による干渉は、医療診断におけるアリ
ールアゾ−ＱＵＩＮ指示薬の有用性を限定するであろう
が、これまで我々は、１４などの化合物を含む試薬を使
用する場合、３倍を超える高濃度においても有意な干渉
を見いだしていない。
と、Grynkeiwicz らは、「マグネシウムよりもカルシウ
ムに対するＱＵＩＮ２の選択性が改善されうる」ことを
指摘している。ヒト血清中のＭｇ++濃度は通常カルシウ
ム濃度よりも高く、２．９３mg/dl （１．２×１０-3M
）の高濃度になることもできるため、これは重要な考
えである。Ｍｇ++による干渉は、医療診断におけるアリ
ールアゾ−ＱＵＩＮ指示薬の有用性を限定するであろう
が、これまで我々は、１４などの化合物を含む試薬を使
用する場合、３倍を超える高濃度においても有意な干渉
を見いだしていない。
【００３７】Grynkeiwicz らはまた、「Ｍｇ2+ではなく
Ｃａ2+を結合しようとするより高い選択性が、環がキノ
リン環窒素なしにエーテル結合によって結合されている
ところの関連のテトラカルボキシレートキレート剤にお
いて見られる」と記している。この参考文献が提起する
疑いとは反対に、我々は、アリールアゾ−ＱＵＩＮ化合
物が、生体試料中のカルシウムを測定するための従来技
術の化合物を上回る実質的な利点を提供する非常に有用
な指示薬であることを見いだした。
Ｃａ2+を結合しようとするより高い選択性が、環がキノ
リン環窒素なしにエーテル結合によって結合されている
ところの関連のテトラカルボキシレートキレート剤にお
いて見られる」と記している。この参考文献が提起する
疑いとは反対に、我々は、アリールアゾ−ＱＵＩＮ化合
物が、生体試料中のカルシウムを測定するための従来技
術の化合物を上回る実質的な利点を提供する非常に有用
な指示薬であることを見いだした。
【００３８】上記のように、本発明のアリールアゾ−Ｑ
ＵＩＮ化合物は、一般式Ａ（式中、Ｙは水素原子または
メトキシ基であり、Ｘは水素原子または一価の金属原
子、例えばリチウム、ナトリウムもしくはカリウム、好
ましくはカリウムである）によって示すことができる。
Ｒ成分は、非置換であるか、アルキル、アルコキシ、ハ
ロ、シアノ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、ケト
またはメシルなどの、アゾ染料の構造を完成させ、本発
明の化合物の光吸収特性を発揮させる成分によって置換
されている多様な環状芳香族有機残基のいずれであって
もよい。Ｒの典型的なものは次のものである。
ＵＩＮ化合物は、一般式Ａ（式中、Ｙは水素原子または
メトキシ基であり、Ｘは水素原子または一価の金属原
子、例えばリチウム、ナトリウムもしくはカリウム、好
ましくはカリウムである）によって示すことができる。
Ｒ成分は、非置換であるか、アルキル、アルコキシ、ハ
ロ、シアノ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、ケト
またはメシルなどの、アゾ染料の構造を完成させ、本発
明の化合物の光吸収特性を発揮させる成分によって置換
されている多様な環状芳香族有機残基のいずれであって
もよい。Ｒの典型的なものは次のものである。
【００３９】１．六員の置換または非置換の炭素環式芳
香環、このような六員環の例には、２−ニトロフェニ
ル；２−ニトロ−４−フルオロフェニル；２−ニトロ−
４−クロロフェニル；２−ニトロ−４−トリフルオロメ
チルフェニル；２−ニトロ−４−シアノフェニル；４−
ニトロフェニル；２−フルオロ−４−ニトロフェニル；
２−クロロ−４−ニトロフェニル；３−ニトロ−４−ス
ルホフェニル；２，５−ジクロロ−４−（２′−スルホ
エチルスルホンアミド）フェニル；２−メタン−スルホ
ニル−４−ニトロフェニル；２，４−ジニトロフェニ
ル；２−ニトロ−４−フルオロフェニル；２−クロロ−
５−ニトロフェニルまたは３，５−ジニトロフェニルが
ある。
香環、このような六員環の例には、２−ニトロフェニ
ル；２−ニトロ−４−フルオロフェニル；２−ニトロ−
４−クロロフェニル；２−ニトロ−４−トリフルオロメ
チルフェニル；２−ニトロ−４−シアノフェニル；４−
ニトロフェニル；２−フルオロ−４−ニトロフェニル；
２−クロロ−４−ニトロフェニル；３−ニトロ−４−ス
ルホフェニル；２，５−ジクロロ−４−（２′−スルホ
エチルスルホンアミド）フェニル；２−メタン−スルホ
ニル−４−ニトロフェニル；２，４−ジニトロフェニ
ル；２−ニトロ−４−フルオロフェニル；２−クロロ−
５−ニトロフェニルまたは３，５−ジニトロフェニルが
ある。
【００４０】２．五員または六員の置換または非置換の
複素芳香環、例えば、２−チアゾリル；４−メチル−２
−チアゾリル；４−フェニル−２−チアゾリル；４，５
−ジメチル−２−チアゾリル；４−フェニル−２−チア
ゾリル；５−ニトロ−２−チアゾリル；５−ブロモ−２
−チアゾリル；４−カルボキシメチル−２−チアゾリ
ル；５−ニトロフェニルスルホニル−２−チアゾリル；
２−ピリジル；４，６−ジメチル−２−ピリジル；５−
クロロ−２−ピリジル；５−ブロモ−２−ピリジル；３
−メチル−２−ピリジル；５−ブロモ−３−ニトロ−２
−ピリジル；３−クロロ−５−トリフルオロメチル−２
−ピリジル；３，５−ジクロロ−２−ピリジル；３−ニ
トロ−２−ピリジル；４−ピリジル；２，５，６−トリ
フルオロ−３−クロロ−４−ピリジル；２−メトキシ−
５−ピリジル；２，６−ジメトキシ−３−ピリジル；５
−ニトロ−２−ピリミジル；４−メチル−２−ピリミジ
ル；４，６−ジメチル−２−ピリミジル；４，６−ジメ
トキシ−２−ピリミジル；４−クロロ−６−メチル−２
−ピリミジル；５−メチル−３−イソオキサゾリル；３
−メチル−５−イソオキサゾリル；３−メチル−５−イ
ソチアゾリル；１−エチル−５−ピラゾリル；２−
（１，３，４−チアジアゾリル）；５−エチル−２−
（１，３，４−チアジアゾリル）または３−フェニル−
５−（１，２，４−チアジアゾリル）である。
複素芳香環、例えば、２−チアゾリル；４−メチル−２
−チアゾリル；４−フェニル−２−チアゾリル；４，５
−ジメチル−２−チアゾリル；４−フェニル−２−チア
ゾリル；５−ニトロ−２−チアゾリル；５−ブロモ−２
−チアゾリル；４−カルボキシメチル−２−チアゾリ
ル；５−ニトロフェニルスルホニル−２−チアゾリル；
２−ピリジル；４，６−ジメチル−２−ピリジル；５−
クロロ−２−ピリジル；５−ブロモ−２−ピリジル；３
−メチル−２−ピリジル；５−ブロモ−３−ニトロ−２
−ピリジル；３−クロロ−５−トリフルオロメチル−２
−ピリジル；３，５−ジクロロ−２−ピリジル；３−ニ
トロ−２−ピリジル；４−ピリジル；２，５，６−トリ
フルオロ−３−クロロ−４−ピリジル；２−メトキシ−
５−ピリジル；２，６−ジメトキシ−３−ピリジル；５
−ニトロ−２−ピリミジル；４−メチル−２−ピリミジ
ル；４，６−ジメチル−２−ピリミジル；４，６−ジメ
トキシ−２−ピリミジル；４−クロロ−６−メチル−２
−ピリミジル；５−メチル−３−イソオキサゾリル；３
−メチル−５−イソオキサゾリル；３−メチル−５−イ
ソチアゾリル；１−エチル−５−ピラゾリル；２−
（１，３，４−チアジアゾリル）；５−エチル−２−
（１，３，４−チアジアゾリル）または３−フェニル−
５−（１，２，４−チアジアゾリル）である。
【００４１】３．五員または六員の置換または非置換の
芳香環または複素芳香環との縮合環、例えば、４−トリ
フルオロメチル−６−クロロ−２−ベンゾチアゾリル；
１−ナフチル；６−（２′−ヒドロキシエチルオキシ）
−２−ベンゾチアゾリル；６−tert−ブチル−２−ベン
ゾチアゾリル；４−メチル−５−クロロ−２−ベンゾチ
アゾリル；４，５−ジメチル−２−ベンゾチアゾリル；
２−ベンゾチアゾリル；５−フルオロ−２−ベンゾチア
ゾリル；６−スルホ−２−ベンゾチアゾリル；５，６−
ジクロロ−２−ベンゾチアゾリル；２−β−ナフトチア
ゾリル；４−ブロモ−６−クロロ−２−ベンゾチアゾリ
ル；４，５−ジクロロ−２−ベンゾチアゾリル；６−ニ
トロ−２−ベンゾチアゾリル；４，５，６，７−テトラ
クロロ−２−ベンゾチアゾリル；１−イソキノリニル；
５−イソキノリニル；６−ニトロ−５−キノリニル；５
−クロロ−２−ベンゾオキサゾリル；５，６−ジメチル
−２−ベンゾチアゾリル；６−エトキシ−２−ベンゾチ
アゾリル；６−フルオロ−２−ベンゾチアゾリル；４−
メトキシ−２−ベンゾチアゾリル；６−メトキシ−２−
ベンゾチアゾリル；４−メチル−２−ベンゾチアゾリル
または６−メチル−２−ベンゾチアゾリルである。
芳香環または複素芳香環との縮合環、例えば、４−トリ
フルオロメチル−６−クロロ−２−ベンゾチアゾリル；
１−ナフチル；６−（２′−ヒドロキシエチルオキシ）
−２−ベンゾチアゾリル；６−tert−ブチル−２−ベン
ゾチアゾリル；４−メチル−５−クロロ−２−ベンゾチ
アゾリル；４，５−ジメチル−２−ベンゾチアゾリル；
２−ベンゾチアゾリル；５−フルオロ−２−ベンゾチア
ゾリル；６−スルホ−２−ベンゾチアゾリル；５，６−
ジクロロ−２−ベンゾチアゾリル；２−β−ナフトチア
ゾリル；４−ブロモ−６−クロロ−２−ベンゾチアゾリ
ル；４，５−ジクロロ−２−ベンゾチアゾリル；６−ニ
トロ−２−ベンゾチアゾリル；４，５，６，７−テトラ
クロロ−２−ベンゾチアゾリル；１−イソキノリニル；
５−イソキノリニル；６−ニトロ−５−キノリニル；５
−クロロ−２−ベンゾオキサゾリル；５，６−ジメチル
−２−ベンゾチアゾリル；６−エトキシ−２−ベンゾチ
アゾリル；６−フルオロ−２−ベンゾチアゾリル；４−
メトキシ−２−ベンゾチアゾリル；６−メトキシ−２−
ベンゾチアゾリル；４−メチル−２−ベンゾチアゾリル
または６−メチル−２−ベンゾチアゾリルである。
【００４２】
【発明の効果】本発明のアリールアゾ−ＱＵＩＮ化合物
を指示薬に用いることによって、生体試料中のカルシウ
ムが高選択性をもって測定することができる。
を指示薬に用いることによって、生体試料中のカルシウ
ムが高選択性をもって測定することができる。
【００４３】
【実施例】以下の実施例によって本発明をさらに説明す
る。
る。
【００４４】実施例Ｉ ２−ニトロフェニルアゾ−ＱＵＩＮ１テトラカリウム塩
（１４）およびチアゾリルアゾ−ＱＵＩＮ１（２０）の
合成は、アリールアゾ−ＱＵＩＮ類似体１４〜２３およ
び４８を製造するために使用される方法１の経路の典型
的なものである。
（１４）およびチアゾリルアゾ−ＱＵＩＮ１（２０）の
合成は、アリールアゾ−ＱＵＩＮ類似体１４〜２３およ
び４８を製造するために使用される方法１の経路の典型
的なものである。
【００４５】 ステップＩ（テトラエステル中間体２の合成） ２−ニトロアニリン３００mg（２．１８mmol）および濃
ＨＣｌ水溶液１．２ｍｌを攪拌しながら５０℃で１時間
加熱した。得られたペースト状物を水３．０ｍｌで希釈
し、氷槽中で５分間冷却した。ＮａＮＯ2 １６０mg
（２．２mmol）を水１．０mlに入れた溶液を、攪拌した
溶液に急激に加え、氷槽中に１時間維持した。この明澄
でほぼ無色の溶液を、ＱＵＩＮ１テトラエチルエステル
１（Tsien の方法、Biochemistry 19, 2396, 1980 にし
たがって製造）１．２５g （２．０mmol）をＣＨ3 ＯＨ
４０mlに入れ、−１０℃に維持した撹拌溶液に約２分間
かけて滴下した。反応塊を−１０℃で３０分間攪拌し、
周囲温度まで暖め、一夜攪拌した。反応混合物から分離
した固形物をろ過し、ＣＨ3 ＯＨ／Ｈ2 Ｏ（１：１）２
５０mlで洗浄し、ＣＨ3 ＯＨ６０ml中、周囲温度で１時
間攪拌し、再びろ過した。粗生成物を酢酸エチル（Ｅｔ
ＯＡｃ）５０mlに溶解させ、ヘキサン１００mlで希釈す
ると、固形物が急激に溶液から沈降した。この混合物を
約０℃で一夜冷却し、固形物をろ過によって捕集し、ヘ
キサンで洗浄し、６５℃で減圧乾燥させて、２−ニトロ
フェニルアゾ−ＱＵＩＮ１テトラエチルエステル中間体
化合物（１．１８g 、７６．７％）を赤れんが色の細い
針状物として得た。ｍ．ｐ．１２０〜１２１．５℃。
ＨＣｌ水溶液１．２ｍｌを攪拌しながら５０℃で１時間
加熱した。得られたペースト状物を水３．０ｍｌで希釈
し、氷槽中で５分間冷却した。ＮａＮＯ2 １６０mg
（２．２mmol）を水１．０mlに入れた溶液を、攪拌した
溶液に急激に加え、氷槽中に１時間維持した。この明澄
でほぼ無色の溶液を、ＱＵＩＮ１テトラエチルエステル
１（Tsien の方法、Biochemistry 19, 2396, 1980 にし
たがって製造）１．２５g （２．０mmol）をＣＨ3 ＯＨ
４０mlに入れ、−１０℃に維持した撹拌溶液に約２分間
かけて滴下した。反応塊を−１０℃で３０分間攪拌し、
周囲温度まで暖め、一夜攪拌した。反応混合物から分離
した固形物をろ過し、ＣＨ3 ＯＨ／Ｈ2 Ｏ（１：１）２
５０mlで洗浄し、ＣＨ3 ＯＨ６０ml中、周囲温度で１時
間攪拌し、再びろ過した。粗生成物を酢酸エチル（Ｅｔ
ＯＡｃ）５０mlに溶解させ、ヘキサン１００mlで希釈す
ると、固形物が急激に溶液から沈降した。この混合物を
約０℃で一夜冷却し、固形物をろ過によって捕集し、ヘ
キサンで洗浄し、６５℃で減圧乾燥させて、２−ニトロ
フェニルアゾ−ＱＵＩＮ１テトラエチルエステル中間体
化合物（１．１８g 、７６．７％）を赤れんが色の細い
針状物として得た。ｍ．ｐ．１２０〜１２１．５℃。
【００４６】ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（４：６）中に展開
したシリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレ
ート上でのＲｆ値は０．４であった。 ＩＲ（ＫＢｒ）によるピーク波数（cm-1）は、 3443, 2
983, 1748, 1559, 1531, 1514, 1487, 1402, 1364, 130
6, 1262, 1185, 1027 であった。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）により、δ 9.30（ｄ、Ｊ
＝8.8 Hz、１Ｈ）、8.02（ｄ、Ｊ＝8.8 Hz、１Ｈ）、7.
82〜7.92（ｍ、３Ｈ）、7.68（ｄのｔ、Ｊt ＝7.7 Hzお
よびＪd ＝1.4 Hz、１Ｈ）、7.52（ｄのｔ、Ｊt ＝7.7
HzおよびＪd ＝1.3 Hz、１Ｈ）、6.95（ｄ、Ｊ＝8.8 H
z、１Ｈ）、6.88（ｄ、Ｊ＝8.0 Hz、１Ｈ）、6.75
（ｄ、Ｊ＝1.3 Hz、１Ｈ）、6.70（ｂｒ ｄ、Ｊ＝8.0
Hz、１Ｈ）、5.33（ｓ、２Ｈ）、4.56（ｓ、４Ｈ）、4.
31（ｑ、Ｊ＝7.1 Hz、４Ｈ）、4.22（ｓ、４Ｈ）、3.56
（ｑ、Ｊ＝7.1 Hz、４Ｈ）、2.24（ｓ、３Ｈ）、1.32
（ｔ、Ｊ＝7.1 Hz、６Ｈ）、1.20（ｔ、Ｊ＝7.1 Hz、６
Ｈ）が得られた。13 Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）によりppm で表わされる、
171.5, 170.9, 155.0,150.5, 150.3, 147.4, 145.8, 14
0.0, 139.0, 136.7, 133.0, 132.6, 129.4, 128.5, 12
3.9, 122.0, 120.6, 120.1, 119.1, 115.7, 114.4, 11
2.4, 71.4, 61.2, 60.6, 59.3, 54.0, 20.9, 14.3, 14.
2が得られた。 Ｃ39Ｈ44Ｎ6 Ｏ11について計算した理論値は：Ｃ 60.6
1、Ｈ 5.74 、Ｎ 10.88であり、実測値は：Ｃ 61.00、
Ｈ 5.80 、Ｎ 11.02であった。
したシリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレ
ート上でのＲｆ値は０．４であった。 ＩＲ（ＫＢｒ）によるピーク波数（cm-1）は、 3443, 2
983, 1748, 1559, 1531, 1514, 1487, 1402, 1364, 130
6, 1262, 1185, 1027 であった。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）により、δ 9.30（ｄ、Ｊ
＝8.8 Hz、１Ｈ）、8.02（ｄ、Ｊ＝8.8 Hz、１Ｈ）、7.
82〜7.92（ｍ、３Ｈ）、7.68（ｄのｔ、Ｊt ＝7.7 Hzお
よびＪd ＝1.4 Hz、１Ｈ）、7.52（ｄのｔ、Ｊt ＝7.7
HzおよびＪd ＝1.3 Hz、１Ｈ）、6.95（ｄ、Ｊ＝8.8 H
z、１Ｈ）、6.88（ｄ、Ｊ＝8.0 Hz、１Ｈ）、6.75
（ｄ、Ｊ＝1.3 Hz、１Ｈ）、6.70（ｂｒ ｄ、Ｊ＝8.0
Hz、１Ｈ）、5.33（ｓ、２Ｈ）、4.56（ｓ、４Ｈ）、4.
31（ｑ、Ｊ＝7.1 Hz、４Ｈ）、4.22（ｓ、４Ｈ）、3.56
（ｑ、Ｊ＝7.1 Hz、４Ｈ）、2.24（ｓ、３Ｈ）、1.32
（ｔ、Ｊ＝7.1 Hz、６Ｈ）、1.20（ｔ、Ｊ＝7.1 Hz、６
Ｈ）が得られた。13 Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）によりppm で表わされる、
171.5, 170.9, 155.0,150.5, 150.3, 147.4, 145.8, 14
0.0, 139.0, 136.7, 133.0, 132.6, 129.4, 128.5, 12
3.9, 122.0, 120.6, 120.1, 119.1, 115.7, 114.4, 11
2.4, 71.4, 61.2, 60.6, 59.3, 54.0, 20.9, 14.3, 14.
2が得られた。 Ｃ39Ｈ44Ｎ6 Ｏ11について計算した理論値は：Ｃ 60.6
1、Ｈ 5.74 、Ｎ 10.88であり、実測値は：Ｃ 61.00、
Ｈ 5.80 、Ｎ 11.02であった。
【００４７】ステップ２（１４の合成、Ｘ＝Ｋ） ２−ニトロフェニルアゾ−ＱＵＩＮ１テトラエチルエス
テル（２）１．０００g （１．２９４mmol）およびｎ−
ブチルアルコール（ｎ−ＢｕＯＨ）３５mlを、１００ml
の回収フラスコに入れ、アルゴン下に周囲温度で１０分
間攪拌した。次いで、この懸濁液を４．００M のＫＯＨ
水溶液（高純度半導体級のもの）１．５４ml（６．１６
mmol、４．７５当量）およびさらなるｎ−ＢｕＯＨ７ml
で処理し、アルゴン下に周囲温度で一夜攪拌した。２３
時間後、ＴＬＣ〔シリカゲル；ｎ−ＢｕＯＨ／酢酸（Ｈ
ＯＡｃ）／Ｈ2 Ｏ（４：１：１）生成物Ｒf ＝０．１
６、出発原料Ｒf ＝０．９５〕は、反応が完了したこと
を示した。ｎ−ＢｕＯＨ約２mlを使用してフラスコをす
すぎながら反応塊を遠心管に移し、２０，０００×Ｇで
１０分間遠心分離に付し、そこで、得られたペレットか
ら上澄み液をピペットで取り捨てた。ペレットを音波処
理しながらｎ−ＢｕＯＨ２０ml中に二度再懸濁させ、上
記のように遠心分離に付した。最終的なペレットを、遠
心管中、周囲温度で一夜減圧乾燥させ、粉末化しガラス
瓶に移し、そこで、周囲温度でさらに２日間減圧乾燥さ
せて表題の化合物（１４）１．０３g （９０％）を、処
理に使用した溶媒を微量含む赤れんが色の粉末として得
た。
テル（２）１．０００g （１．２９４mmol）およびｎ−
ブチルアルコール（ｎ−ＢｕＯＨ）３５mlを、１００ml
の回収フラスコに入れ、アルゴン下に周囲温度で１０分
間攪拌した。次いで、この懸濁液を４．００M のＫＯＨ
水溶液（高純度半導体級のもの）１．５４ml（６．１６
mmol、４．７５当量）およびさらなるｎ−ＢｕＯＨ７ml
で処理し、アルゴン下に周囲温度で一夜攪拌した。２３
時間後、ＴＬＣ〔シリカゲル；ｎ−ＢｕＯＨ／酢酸（Ｈ
ＯＡｃ）／Ｈ2 Ｏ（４：１：１）生成物Ｒf ＝０．１
６、出発原料Ｒf ＝０．９５〕は、反応が完了したこと
を示した。ｎ−ＢｕＯＨ約２mlを使用してフラスコをす
すぎながら反応塊を遠心管に移し、２０，０００×Ｇで
１０分間遠心分離に付し、そこで、得られたペレットか
ら上澄み液をピペットで取り捨てた。ペレットを音波処
理しながらｎ−ＢｕＯＨ２０ml中に二度再懸濁させ、上
記のように遠心分離に付した。最終的なペレットを、遠
心管中、周囲温度で一夜減圧乾燥させ、粉末化しガラス
瓶に移し、そこで、周囲温度でさらに２日間減圧乾燥さ
せて表題の化合物（１４）１．０３g （９０％）を、処
理に使用した溶媒を微量含む赤れんが色の粉末として得
た。
【００４８】ＩＲ（ＫＢｒ）によるピーク波数（cm-1）
は、3442（ブロードなピーク）, 2928, 1597, 1507, 13
97, 1286, 1241, 1182であった。1 Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）により、δ 9.20（ｄ、Ｊ＝8.9
Hz、１Ｈ）、8.04（ｄ、Ｊ＝8.1 Hz、１Ｈ）、7.96
（ｄ、Ｊt ＝8.9 Hz、１Ｈ）、7.79〜7.90（ｍ、３
Ｈ）、7.62（ｔのｄ、Ｊt ＝7.7 HzおよびＪd ＝1.5 H
z、１Ｈ）、6.83〜6.90（ｍ、２Ｈ）、6.70〜6.79
（ｍ、２Ｈ）、5.41（ｓ、２Ｈ）、4.42（ｓ、４Ｈ）、
3.95（ｓ、４Ｈ）、2.16（ｓ、３Ｈ）が得られた。13 Ｃ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）によりppm で表わされる、182.
3, 181.3, 157.7, 154.8, 152.1, 148.7, 148.0, 141.
2, 140.9, 140.2, 136.8, 135.2, 134.5, 132.2, 131.
2, 127.2, 124.4, 123.4, 122.7, 121.1, 119.6, 117.
2, 114.4, 73.7, 62.0, 59.8, 22.7 が得られた。 Ｃ31Ｈ24Ｎ6 Ｏ11Ｋ4 ・1/4 ｎ−ＢｕＯＨ・３Ｈ2 Ｏに
ついて計算した理論値は：Ｃ 43.40、Ｈ 3.70 、Ｎ9.49
であり、実測値は：Ｃ 43.27、Ｈ 3.92 、Ｎ9.28であっ
た。
は、3442（ブロードなピーク）, 2928, 1597, 1507, 13
97, 1286, 1241, 1182であった。1 Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）により、δ 9.20（ｄ、Ｊ＝8.9
Hz、１Ｈ）、8.04（ｄ、Ｊ＝8.1 Hz、１Ｈ）、7.96
（ｄ、Ｊt ＝8.9 Hz、１Ｈ）、7.79〜7.90（ｍ、３
Ｈ）、7.62（ｔのｄ、Ｊt ＝7.7 HzおよびＪd ＝1.5 H
z、１Ｈ）、6.83〜6.90（ｍ、２Ｈ）、6.70〜6.79
（ｍ、２Ｈ）、5.41（ｓ、２Ｈ）、4.42（ｓ、４Ｈ）、
3.95（ｓ、４Ｈ）、2.16（ｓ、３Ｈ）が得られた。13 Ｃ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）によりppm で表わされる、182.
3, 181.3, 157.7, 154.8, 152.1, 148.7, 148.0, 141.
2, 140.9, 140.2, 136.8, 135.2, 134.5, 132.2, 131.
2, 127.2, 124.4, 123.4, 122.7, 121.1, 119.6, 117.
2, 114.4, 73.7, 62.0, 59.8, 22.7 が得られた。 Ｃ31Ｈ24Ｎ6 Ｏ11Ｋ4 ・1/4 ｎ−ＢｕＯＨ・３Ｈ2 Ｏに
ついて計算した理論値は：Ｃ 43.40、Ｈ 3.70 、Ｎ9.49
であり、実測値は：Ｃ 43.27、Ｈ 3.92 、Ｎ9.28であっ
た。
【００４９】実施例II チアゾリルアゾ−ＱＵＩＮ１（２０、Ｘ＝Ｋ）の合成 ステップ１（テトラエステル中間体８の合成） Ｈ2 ＳＯ4 ／Ｈ2 Ｏの混合物（容量比７：３）１．０ml
を氷槽中で冷却し、ＮａＮＯ2 （４４．８mg、０．６５
mmol）を加えた。ＡｃＯＨ ０．５ml中の２−アミノチ
アゾール（６６mg、０．６５mmol）溶液を滴下し、この
混合物を０〜５℃で１．５時間攪拌し、Ｈ2 Ｏ１．０ml
で希釈した。さらに４０分間攪拌した後、得られたジア
ゾニウム塩溶液を、１（２５０mg、０．４mmol）を氷冷
ＣＨ3 ＯＨ５．０mlに入れた溶液に１５分にわたって滴
下した。この混合物を０〜５℃で１時間攪拌し、Ｈ2 Ｏ
７５mlで希釈した。分離した橙赤色の固形物をろ過によ
って捕集し、Ｈ2 Ｏ１００mlで洗浄し、乾燥させて８
（２２０mg、７５％）を得た。ＥｔＯＡｃ／ヘキサン
（容量比１：３）から再結晶させると、分析試料が橙赤
色の粉末として得られた。ｍ．ｐ．１００〜１０２℃。
を氷槽中で冷却し、ＮａＮＯ2 （４４．８mg、０．６５
mmol）を加えた。ＡｃＯＨ ０．５ml中の２−アミノチ
アゾール（６６mg、０．６５mmol）溶液を滴下し、この
混合物を０〜５℃で１．５時間攪拌し、Ｈ2 Ｏ１．０ml
で希釈した。さらに４０分間攪拌した後、得られたジア
ゾニウム塩溶液を、１（２５０mg、０．４mmol）を氷冷
ＣＨ3 ＯＨ５．０mlに入れた溶液に１５分にわたって滴
下した。この混合物を０〜５℃で１時間攪拌し、Ｈ2 Ｏ
７５mlで希釈した。分離した橙赤色の固形物をろ過によ
って捕集し、Ｈ2 Ｏ１００mlで洗浄し、乾燥させて８
（２２０mg、７５％）を得た。ＥｔＯＡｃ／ヘキサン
（容量比１：３）から再結晶させると、分析試料が橙赤
色の粉末として得られた。ｍ．ｐ．１００〜１０２℃。
【００５０】ＩＲ（ＣＨＣｌ3 ）によるピーク波数（cm
-1）は、 3001, 2933, 1744, 1559,1506, 1487, 1412,
1373, 1309, 1258, 1192, 1139, 1109, 1024 であっ
た。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）により、δ 9.19（ｄ、Ｊ
＝9.2 Hz、１Ｈ）、8.39（ｄ、Ｊ＝9.2 Hz、１Ｈ）、7.
99（ｄ、Ｊ＝3.5 Hz、１Ｈ）、7.92（ｄ、Ｊ＝8.8 Hz、
１Ｈ）、7.35（ｄ、Ｊ＝3.8 Hz、１Ｈ）、6.86〜6.91
（ｍ、２Ｈ）、6.68〜6.73（ｍ、２Ｈ）、5.26（ｓ、２
Ｈ）、4.66（ｓ、４Ｈ）、4.33（ｑ、Ｊ＝7.1 Hz、４
Ｈ）、4.21（ｓ、４Ｈ）、4.12（ｑ、Ｊ＝7.1 Hz、４
Ｈ）、2.23（ｓ、３Ｈ）、1.34（ｔ、Ｊ＝7.1 Hz、６
Ｈ）、1.21（ｔ、Ｊ＝7.1 Hz、６Ｈ）であった。13 Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）によりppm で表わされる、
171.4, 170.6, 155.2,151.2, 150.3, 143.4, 138.95, 1
38.89, 136.7, 133.0, 132.4, 128.7, 122.0,120.8, 12
0.1, 119.9, 116.4, 114.4, 112.5, 71.3, 61.3, 60.6,
56.4, 54.0,20.9, 14.24, 14.20 が得られた。 Ｃ36Ｈ42Ｎ6 Ｏ9 Ｓについて計算した理論値は：Ｃ 58.
84、Ｈ 5.76 、Ｎ 11.44であり、実測値は：Ｃ 58.85、
Ｈ 5.70 、Ｎ 11.63であった。
-1）は、 3001, 2933, 1744, 1559,1506, 1487, 1412,
1373, 1309, 1258, 1192, 1139, 1109, 1024 であっ
た。1 Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）により、δ 9.19（ｄ、Ｊ
＝9.2 Hz、１Ｈ）、8.39（ｄ、Ｊ＝9.2 Hz、１Ｈ）、7.
99（ｄ、Ｊ＝3.5 Hz、１Ｈ）、7.92（ｄ、Ｊ＝8.8 Hz、
１Ｈ）、7.35（ｄ、Ｊ＝3.8 Hz、１Ｈ）、6.86〜6.91
（ｍ、２Ｈ）、6.68〜6.73（ｍ、２Ｈ）、5.26（ｓ、２
Ｈ）、4.66（ｓ、４Ｈ）、4.33（ｑ、Ｊ＝7.1 Hz、４
Ｈ）、4.21（ｓ、４Ｈ）、4.12（ｑ、Ｊ＝7.1 Hz、４
Ｈ）、2.23（ｓ、３Ｈ）、1.34（ｔ、Ｊ＝7.1 Hz、６
Ｈ）、1.21（ｔ、Ｊ＝7.1 Hz、６Ｈ）であった。13 Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）によりppm で表わされる、
171.4, 170.6, 155.2,151.2, 150.3, 143.4, 138.95, 1
38.89, 136.7, 133.0, 132.4, 128.7, 122.0,120.8, 12
0.1, 119.9, 116.4, 114.4, 112.5, 71.3, 61.3, 60.6,
56.4, 54.0,20.9, 14.24, 14.20 が得られた。 Ｃ36Ｈ42Ｎ6 Ｏ9 Ｓについて計算した理論値は：Ｃ 58.
84、Ｈ 5.76 、Ｎ 11.44であり、実測値は：Ｃ 58.85、
Ｈ 5.70 、Ｎ 11.63であった。
【００５１】ステップ２８ （０．１４４g 、０．１９６mmol）をｎ−ＢｕＯＨ
（８．８ml）に入れた懸濁液を４．０M のＫＯＨ（０．
２４５ml、０．９８mmol、５当量）で周囲温度において
処理した。次いで、反応混合物を５℃で１７時間冷却
し、ｎ−ＢｕＯＨ数mlとともに遠心管に移し、７，５０
０×Ｇで２０分間遠心分離に付した。上澄み液を捨て、
得られたペレットを音波処理しながら新鮮なｎ−ＢｕＯ
Ｈ約３mlに再び懸濁させ、再び遠心分離に付した。この
生成物を、再懸濁／遠心分離により、ＡｃＯＥｔおよび
ヘキサンで洗浄し、６０℃で２時間減圧乾燥（０．１to
rr）させて２０（０．１３３g 、８７％）を暗紫色のテ
トラカリウム塩として得た。
（８．８ml）に入れた懸濁液を４．０M のＫＯＨ（０．
２４５ml、０．９８mmol、５当量）で周囲温度において
処理した。次いで、反応混合物を５℃で１７時間冷却
し、ｎ−ＢｕＯＨ数mlとともに遠心管に移し、７，５０
０×Ｇで２０分間遠心分離に付した。上澄み液を捨て、
得られたペレットを音波処理しながら新鮮なｎ−ＢｕＯ
Ｈ約３mlに再び懸濁させ、再び遠心分離に付した。この
生成物を、再懸濁／遠心分離により、ＡｃＯＥｔおよび
ヘキサンで洗浄し、６０℃で２時間減圧乾燥（０．１to
rr）させて２０（０．１３３g 、８７％）を暗紫色のテ
トラカリウム塩として得た。
【００５２】ＩＲ（ＫＢｒ）によるピーク波数（cm-1）
は 3418 （ブロードなピーク）、1587, 1505, 1396, 12
87, 1247, 1202, 1179, 1136, 1022であった。1 Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）により、δ 9.15（ｄ、Ｊ＝8.9
Hz、１Ｈ）、8.07（ｄ、Ｊ＝9.3 Hz、１Ｈ）、7.81
（ｄ、Ｊ＝3.5 Hz、１Ｈ）、7.72（ｄ、Ｊ＝8.9Hz、１
Ｈ）、7.43（ｄ、Ｊ＝3.5 Hz、１Ｈ）、6.82（ｄ、Ｊ＝
9.3 Hz、１Ｈ）、6.76（ｄ、Ｊ＝0.7 Hz、１Ｈ）、6.62
〜6.70（ｍ、２Ｈ）、5.31（ｓ、２Ｈ）、4.40（ｓ、４
Ｈ）、3.87（ｓ、４Ｈ）、2.10（ｓ、３Ｈ）が得られ
た。13 Ｃ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）によりppm で表わされる、182.
5, 180.6, 157.8, 156.0, 152.1, 145.0, 141.1, 140.
3, 139.6, 135.3, 134.2, 132.0, 124.3, 123.7, 123.
0, 121.0, 120.6, 117.2, 114.8, 73.6, 62.4, 59.7, 2
2.7 が得られた。 Ｃ28Ｈ22Ｎ6 Ｏ9 ＳＫ4 ・1/2 ｎ−ＢｕＯＨ・３Ｈ2 Ｏ
について計算した理論値は：Ｃ 41.60、Ｈ 3.84 、Ｎ9.
70であり、実測値は：Ｃ 41.77、Ｈ 3.81 、Ｎ9.89 で
あった。
は 3418 （ブロードなピーク）、1587, 1505, 1396, 12
87, 1247, 1202, 1179, 1136, 1022であった。1 Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）により、δ 9.15（ｄ、Ｊ＝8.9
Hz、１Ｈ）、8.07（ｄ、Ｊ＝9.3 Hz、１Ｈ）、7.81
（ｄ、Ｊ＝3.5 Hz、１Ｈ）、7.72（ｄ、Ｊ＝8.9Hz、１
Ｈ）、7.43（ｄ、Ｊ＝3.5 Hz、１Ｈ）、6.82（ｄ、Ｊ＝
9.3 Hz、１Ｈ）、6.76（ｄ、Ｊ＝0.7 Hz、１Ｈ）、6.62
〜6.70（ｍ、２Ｈ）、5.31（ｓ、２Ｈ）、4.40（ｓ、４
Ｈ）、3.87（ｓ、４Ｈ）、2.10（ｓ、３Ｈ）が得られ
た。13 Ｃ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）によりppm で表わされる、182.
5, 180.6, 157.8, 156.0, 152.1, 145.0, 141.1, 140.
3, 139.6, 135.3, 134.2, 132.0, 124.3, 123.7, 123.
0, 121.0, 120.6, 117.2, 114.8, 73.6, 62.4, 59.7, 2
2.7 が得られた。 Ｃ28Ｈ22Ｎ6 Ｏ9 ＳＫ4 ・1/2 ｎ−ＢｕＯＨ・３Ｈ2 Ｏ
について計算した理論値は：Ｃ 41.60、Ｈ 3.84 、Ｎ9.
70であり、実測値は：Ｃ 41.77、Ｈ 3.81 、Ｎ9.89 で
あった。
【００５３】以下に説明するベンゾチアゾリル−ＱＵＩ
Ｎ１テトラ酸（３２）および（４−トリフルオロメチル
−６−クロロベンゾチアゾイル）−ＱＵＩＮ１テトラ酸
（３９）の合成は、アリールアゾ−ＱＵＩＮ１類似体２
４〜４１を製造するために使用される方法２の経路の典
型的なものである。
Ｎ１テトラ酸（３２）および（４−トリフルオロメチル
−６−クロロベンゾチアゾイル）−ＱＵＩＮ１テトラ酸
（３９）の合成は、アリールアゾ−ＱＵＩＮ１類似体２
４〜４１を製造するために使用される方法２の経路の典
型的なものである。
【００５４】実施例III ベンゾチアゾリルアゾ−ＱＵＩＮ１テトラ酸３２の合成 ステップ１（ＱＵＩＮ１テトラ酸（１３、Ｘ＝Ｈ）の合
成） ＱＵＩＮ１テトラエチルエステル（１）６．２４g （１
０mmol）をＥｔＯＨ１００mlに溶解させ、５モル過剰の
４M のＫＯＨ水溶液で処理した。反応混合物を４０℃で
１６時間攪拌したのち、ＴＬＣ（シリカゲル、ＥｔＯ
Ｈ：ＡｃＯＨ：Ｈ2 Ｏ（４：１：１））によって反応が
完了したことを判定した。Ｈ2 Ｏを１００ml加えたの
ち、減圧下にＥｔＯＨを蒸発させ、１M のＨＣｌを加え
ることによって溶液のpHを２．５に調節した。テトラ酸
が、半分が結晶質、もう半分がガム状で沈殿し始めた。
２４時間攪拌したのち、完全に結晶質の生成物を単離し
た。
成） ＱＵＩＮ１テトラエチルエステル（１）６．２４g （１
０mmol）をＥｔＯＨ１００mlに溶解させ、５モル過剰の
４M のＫＯＨ水溶液で処理した。反応混合物を４０℃で
１６時間攪拌したのち、ＴＬＣ（シリカゲル、ＥｔＯ
Ｈ：ＡｃＯＨ：Ｈ2 Ｏ（４：１：１））によって反応が
完了したことを判定した。Ｈ2 Ｏを１００ml加えたの
ち、減圧下にＥｔＯＨを蒸発させ、１M のＨＣｌを加え
ることによって溶液のpHを２．５に調節した。テトラ酸
が、半分が結晶質、もう半分がガム状で沈殿し始めた。
２４時間攪拌したのち、完全に結晶質の生成物を単離し
た。
【００５５】1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3 ＯＤ）により、δ
8.22（ｄ、１Ｈ）、7.67（ｄ、１Ｈ）、7.40（ｄ、２
Ｈ）、7.07（ｔ、１Ｈ）、6.85（ｄ、１Ｈ）、6.84
（ｓ、１Ｈ）、6.66（ｄのｄ、１Ｈ）、5.35（ｓ、２
Ｈ）、4.30（ｓ、４Ｈ）、4.07（ｓ、４Ｈ）、2.18
（ｓ、３Ｈ）が得られた。 Ｃ25Ｈ25Ｎ3 Ｏ9 について計算した理論値は：Ｃ 58.7
1、Ｈ 4.93 、Ｎ 8.22であり、実測値は：Ｃ 58.75、Ｈ
4.89 、Ｎ 8.34 であった。
8.22（ｄ、１Ｈ）、7.67（ｄ、１Ｈ）、7.40（ｄ、２
Ｈ）、7.07（ｔ、１Ｈ）、6.85（ｄ、１Ｈ）、6.84
（ｓ、１Ｈ）、6.66（ｄのｄ、１Ｈ）、5.35（ｓ、２
Ｈ）、4.30（ｓ、４Ｈ）、4.07（ｓ、４Ｈ）、2.18
（ｓ、３Ｈ）が得られた。 Ｃ25Ｈ25Ｎ3 Ｏ9 について計算した理論値は：Ｃ 58.7
1、Ｈ 4.93 、Ｎ 8.22であり、実測値は：Ｃ 58.75、Ｈ
4.89 、Ｎ 8.34 であった。
【００５６】ステップ２（ジアゾ化） ２−アミノベンゾチアゾール２２０mg（１．４６mmol）
を音波処理しながらＨ3 ＰＯ4 １５mlとＡｃＯＨ５mlと
の混合物に溶解させ、０℃に冷却し、４０％ニトロシル
硫酸０．２５mlで処理した。反応体を０℃で２時間攪拌
し、続いて少量の尿素を加えた。さらに１時間攪拌する
ことにより、ステップ３で使用するための溶液を用意し
た。
を音波処理しながらＨ3 ＰＯ4 １５mlとＡｃＯＨ５mlと
の混合物に溶解させ、０℃に冷却し、４０％ニトロシル
硫酸０．２５mlで処理した。反応体を０℃で２時間攪拌
し、続いて少量の尿素を加えた。さらに１時間攪拌する
ことにより、ステップ３で使用するための溶液を用意し
た。
【００５７】ステップ３（カップリング） ＱＵＩＮ１テトラ酸（１３、Ｘ＝Ｈ）０．７４７g
（１．４６mmol）を、ＣＨ3 ＯＨ１００mlとＨ2 Ｏ５０
mlとの混合物に溶解させ、−２０℃に冷却し、ステップ
２で得たジアゾニウム溶液で処理した。濃厚ＮａＯＨを
加えることにより、反応混合物のpHを４に維持した。こ
の溶液を周囲温度にまで暖め、pHを２．５に調節した。
減圧下での蒸発によってＣＨ3 ＯＨを除去し、生成物
（３２）をろ過によって捕集した。収量は０．９g 、収
率は９１％であった。
（１．４６mmol）を、ＣＨ3 ＯＨ１００mlとＨ2 Ｏ５０
mlとの混合物に溶解させ、−２０℃に冷却し、ステップ
２で得たジアゾニウム溶液で処理した。濃厚ＮａＯＨを
加えることにより、反応混合物のpHを４に維持した。こ
の溶液を周囲温度にまで暖め、pHを２．５に調節した。
減圧下での蒸発によってＣＨ3 ＯＨを除去し、生成物
（３２）をろ過によって捕集した。収量は０．９g 、収
率は９１％であった。
【００５８】ステップ４（精製） ＫＯＨでpH９に調節したＣＨ3 ＯＨ／Ｈ2 Ｏ（２：３）
の混合溶媒を充填し、展開したＲＰ−２シリカゲルカラ
ム（シラン化シリカゲル６０、粒径０．０６３〜０．２
００mm；E. Merck社製）上でのフラッシュクロマトグラ
フィーにより、不純物を含む３２を精製した。カラムを
適用する前に、テトラ酸を最小容量の展開溶媒中に懸濁
させ、４モル過剰の４M のＫＯＨで処理して均質な溶液
を得た。純粋な生成物を含むカラム画分を捕集し、pH
２．５に酸性化した。減圧下にＣＨ3 ＯＨを除去し、純
粋な３２をろ過によって単離した。
の混合溶媒を充填し、展開したＲＰ−２シリカゲルカラ
ム（シラン化シリカゲル６０、粒径０．０６３〜０．２
００mm；E. Merck社製）上でのフラッシュクロマトグラ
フィーにより、不純物を含む３２を精製した。カラムを
適用する前に、テトラ酸を最小容量の展開溶媒中に懸濁
させ、４モル過剰の４M のＫＯＨで処理して均質な溶液
を得た。純粋な生成物を含むカラム画分を捕集し、pH
２．５に酸性化した。減圧下にＣＨ3 ＯＨを除去し、純
粋な３２をろ過によって単離した。
【００５９】1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3 ＯＤ＋ＤＭＳＯ−ｄ6
）により、δ 9.20（ｄ、１Ｈ）、8.21（ｄ、１
Ｈ）、8.03（ｄ、１Ｈ）、8.00（ｄ、１Ｈ）、7.96
（ｄ、１Ｈ）、7.54（ｔ、１Ｈ）、7.46（ｔ、１Ｈ）、
7.04（ｄ、１Ｈ）、6.89（ｄ、１Ｈ）、6.81（ｄ、１
Ｈ）、6.69（ｄのｄ、１Ｈ）、5.33（ｓ、２Ｈ）、4.67
（ｓ、４Ｈ）、4.13（ｓ、４Ｈ）、2.23（ｓ、３Ｈ）が
得られた。 Ｃ32Ｈ28Ｎ6 Ｏ9 Ｓについて計算した理論値は：Ｃ 57.
14、Ｈ 4.20 、Ｎ 12.50であり、実測値は：Ｃ 57.32、
Ｈ 4.26 、Ｎ 12.71であった。
）により、δ 9.20（ｄ、１Ｈ）、8.21（ｄ、１
Ｈ）、8.03（ｄ、１Ｈ）、8.00（ｄ、１Ｈ）、7.96
（ｄ、１Ｈ）、7.54（ｔ、１Ｈ）、7.46（ｔ、１Ｈ）、
7.04（ｄ、１Ｈ）、6.89（ｄ、１Ｈ）、6.81（ｄ、１
Ｈ）、6.69（ｄのｄ、１Ｈ）、5.33（ｓ、２Ｈ）、4.67
（ｓ、４Ｈ）、4.13（ｓ、４Ｈ）、2.23（ｓ、３Ｈ）が
得られた。 Ｃ32Ｈ28Ｎ6 Ｏ9 Ｓについて計算した理論値は：Ｃ 57.
14、Ｈ 4.20 、Ｎ 12.50であり、実測値は：Ｃ 57.32、
Ｈ 4.26 、Ｎ 12.71であった。
【００６０】実施例IV （４−トリフルオロメチル−６−クロロベンゾチアゾリ
ル−アゾ）−ＱＵＩＮ１テトラ酸（３９）の合成 ステップ１３２ の製造について上述したようにして２−アミノ−４
−トリフルオロメチル−６−クロロベンゾチアゾールを
ジアゾ化した。
ル−アゾ）−ＱＵＩＮ１テトラ酸（３９）の合成 ステップ１３２ の製造について上述したようにして２−アミノ−４
−トリフルオロメチル−６−クロロベンゾチアゾールを
ジアゾ化した。
【００６１】ステップ２ −６０℃で実施し、そして反応pHを制御しなかったこと
を除いては３２の製造に使用した手順にしたがって、Ｑ
ＵＩＮ１テトラ酸（１３）を、ステップ１で製造したジ
アゾニウム溶液とカップリングさせた。収率は８４％で
あった。
を除いては３２の製造に使用した手順にしたがって、Ｑ
ＵＩＮ１テトラ酸（１３）を、ステップ１で製造したジ
アゾニウム溶液とカップリングさせた。収率は８４％で
あった。
【００６２】ステップ３３２ の精製について上述したものと同様にして３９をＲ
Ｐ−２カラムで精製した。
Ｐ−２カラムで精製した。
【００６３】1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3 ＯＤ＋ＤＭＳＯ−ｄ6
）により、δ 9.15（ｄ、１Ｈ）、8.45（ｄ、１
Ｈ）、8.29（ｄ、１Ｈ）、8.07（ｄ、１Ｈ）、7.84
（ｄ、１Ｈ）、7.08（ｄ、１Ｈ）、6.86（ｄ、１Ｈ）、
6.73（ｄ、１Ｈ）、6.62（ｄのｄ、１Ｈ）、5.32（ｓ、
２Ｈ）、4.73（ｓ、４Ｈ）、4.04（ｓ、４Ｈ）、2.19
（ｓ、３Ｈ）が得られた。 Ｃ33Ｈ26ＣｌＦ3 Ｎ6 Ｏ9 Ｓについて計算した理論値
は：Ｃ 51.13、Ｈ 3.38、Ｎ 10.84であり、実測値は：
Ｃ 51.38、Ｈ 3.47 、Ｎ 10.63であった。
）により、δ 9.15（ｄ、１Ｈ）、8.45（ｄ、１
Ｈ）、8.29（ｄ、１Ｈ）、8.07（ｄ、１Ｈ）、7.84
（ｄ、１Ｈ）、7.08（ｄ、１Ｈ）、6.86（ｄ、１Ｈ）、
6.73（ｄ、１Ｈ）、6.62（ｄのｄ、１Ｈ）、5.32（ｓ、
２Ｈ）、4.73（ｓ、４Ｈ）、4.04（ｓ、４Ｈ）、2.19
（ｓ、３Ｈ）が得られた。 Ｃ33Ｈ26ＣｌＦ3 Ｎ6 Ｏ9 Ｓについて計算した理論値
は：Ｃ 51.13、Ｈ 3.38、Ｎ 10.84であり、実測値は：
Ｃ 51.38、Ｈ 3.47 、Ｎ 10.63であった。
【００６４】実施例Ｖ ２−ニトロフェニルアゾＢＡＰＴＡ類似体５４およびチ
アゾリル−ＢＡＰＴＡ類似体５６の合成は、アリールア
ゾＢＡＰＴＡ類似体化合物５４〜５８を製造するために
使用される二つの経路の典型的なものである。
アゾリル−ＢＡＰＴＡ類似体５６の合成は、アリールア
ゾＢＡＰＴＡ類似体化合物５４〜５８を製造するために
使用される二つの経路の典型的なものである。
【００６５】５１の合成５０ （Ｙ＝５−ＣＨ3 ）０．１１０g （０．１９mmol）
［Grynkeiwicz によりJ. Biol. Chem. 260, 3440（198
5）に記載されたようにして製造］をＣＨ3 ＯＨ７５ml
に溶解させ、ろ過し、−４０℃に冷却し、２−ニトロベ
ンゼン−ジアゾニウムテトラフルオロホウ酸塩（０．０
４８g 、０．２mmol）［Doyle およびBrykerによりJ. O
rg. Chem. 44, 1572（1979）に記載されたようにして製
造］を一度に加え、続いてアセトン５mlを加えた。反応
体を−２０℃にまで暖め、この温度で２時間攪拌し、周
囲温度にまで暖めた。反応混合物を減圧下に乾燥するま
で蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィーによって精
製した。ヘキサン／ＥｔｏＡｃ（容量比７：３）で展開
すると、５１（２３mg、１６％）が橙色の固形物として
得られた。ｍ．ｐ．１０５〜１０６℃。
［Grynkeiwicz によりJ. Biol. Chem. 260, 3440（198
5）に記載されたようにして製造］をＣＨ3 ＯＨ７５ml
に溶解させ、ろ過し、−４０℃に冷却し、２−ニトロベ
ンゼン−ジアゾニウムテトラフルオロホウ酸塩（０．０
４８g 、０．２mmol）［Doyle およびBrykerによりJ. O
rg. Chem. 44, 1572（1979）に記載されたようにして製
造］を一度に加え、続いてアセトン５mlを加えた。反応
体を−２０℃にまで暖め、この温度で２時間攪拌し、周
囲温度にまで暖めた。反応混合物を減圧下に乾燥するま
で蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィーによって精
製した。ヘキサン／ＥｔｏＡｃ（容量比７：３）で展開
すると、５１（２３mg、１６％）が橙色の固形物として
得られた。ｍ．ｐ．１０５〜１０６℃。
【００６６】1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）により、δ
7.89（ｂｒ ｄ、Ｊ＝8.1 Hz、１Ｈ）、7.44〜7.69
（ｍ、５Ｈ）、6.75〜6.84（ｍ、２Ｈ）、6.66〜6.70
（ｍ、２Ｈ）、4.35〜4.42（ｍ、２Ｈ）、4.28〜4.35
（ｍ、２Ｈ）、4.25（ｓ、４Ｈ）、4.13（ｓ、４Ｈ）、
4.08（ｑ、Ｊ＝7.1 Hz、４Ｈ）、4.06（ｑ、Ｊ＝7.1 H
z、４Ｈ）、2.26（ｓ、３Ｈ）、1.16（ｔ、Ｊ＝7.1 H
z、６Ｈ）、1.15（ｔ、Ｊ＝7.1 Hz、６Ｈ）が得られ
た。13 Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）によりppm で表わされる、
171.5, 170.9, 150.3,150.0, 147.2, 143.8, 137.1, 13
2.9, 132.1, 129.5, 124.0, 122.3, 122.2, 120.0, 12
1.5, 119.5, 118.7, 118.6, 117.1, 117.0, 114.7, 10
5.1, 77.8, 77.7質量スペクトル67.5, 67.0, 61.3, 61.
1, 60.9, 60.7, 53.9, 53.7, 20.9, 14.1, 14.0が得ら
れた。 質量スペクトル［ＭＳ（ＥＩ法、直接インレット）］に
よるｍ／ｚについての相対強度は、７５１（１１．７
％、Ｍ-+）、６７８（１００％）であった。
7.89（ｂｒ ｄ、Ｊ＝8.1 Hz、１Ｈ）、7.44〜7.69
（ｍ、５Ｈ）、6.75〜6.84（ｍ、２Ｈ）、6.66〜6.70
（ｍ、２Ｈ）、4.35〜4.42（ｍ、２Ｈ）、4.28〜4.35
（ｍ、２Ｈ）、4.25（ｓ、４Ｈ）、4.13（ｓ、４Ｈ）、
4.08（ｑ、Ｊ＝7.1 Hz、４Ｈ）、4.06（ｑ、Ｊ＝7.1 H
z、４Ｈ）、2.26（ｓ、３Ｈ）、1.16（ｔ、Ｊ＝7.1 H
z、６Ｈ）、1.15（ｔ、Ｊ＝7.1 Hz、６Ｈ）が得られ
た。13 Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）によりppm で表わされる、
171.5, 170.9, 150.3,150.0, 147.2, 143.8, 137.1, 13
2.9, 132.1, 129.5, 124.0, 122.3, 122.2, 120.0, 12
1.5, 119.5, 118.7, 118.6, 117.1, 117.0, 114.7, 10
5.1, 77.8, 77.7質量スペクトル67.5, 67.0, 61.3, 61.
1, 60.9, 60.7, 53.9, 53.7, 20.9, 14.1, 14.0が得ら
れた。 質量スペクトル［ＭＳ（ＥＩ法、直接インレット）］に
よるｍ／ｚについての相対強度は、７５１（１１．７
％、Ｍ-+）、６７８（１００％）であった。
【００６７】５４の合成５１ （７．５２mg、０．０１mmol）をｎ−ＢｕＯＨ０．
５mlに入れたものを４M のＬｉＯＨ１７．５μl （７当
量）で処理し、周囲温度で１７．３時間攪拌した。反応
混合物をマイクロ遠心管に移し、７，０００×Ｇで５分
間遠心分離に付した。上澄み液を捨て、得られたペレッ
トをｎ−ＢｕＯＨ０．５mlで洗浄し、続いて、ＡｃＯＥ
ｔ１．０mlに再懸濁して遠心分離を行なった。減圧乾燥
させて５４（５．１mg、７７％）を赤れんが色の粉末と
して得た。
５mlに入れたものを４M のＬｉＯＨ１７．５μl （７当
量）で処理し、周囲温度で１７．３時間攪拌した。反応
混合物をマイクロ遠心管に移し、７，０００×Ｇで５分
間遠心分離に付した。上澄み液を捨て、得られたペレッ
トをｎ−ＢｕＯＨ０．５mlで洗浄し、続いて、ＡｃＯＥ
ｔ１．０mlに再懸濁して遠心分離を行なった。減圧乾燥
させて５４（５．１mg、７７％）を赤れんが色の粉末と
して得た。
【００６８】1Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）により、δ 8.09
（ｄのｄ、Ｊ1 ＝8.2 HzおよびＪ2＝1.1 Hz、１Ｈ）、
7.82（ｄのｔ、Ｊt ＝7.7 HzおよびＪd ＝1.2 Hz、１
Ｈ）、7.62（ｄのｔ、Ｊt ＝7.8 HzおよびＪd ＝1.3 H
z、１Ｈ）、7.48〜7.57（ｍ、２Ｈ）、7.46（ｄ、Ｊ＝
2.2 Hz、１Ｈ）、6.97（ｓ、１Ｈ）、6.7 〜6.80（ｍ、
３Ｈ）、4.40（ｓ、４Ｈ）、4.05（ｓ、４Ｈ）、3.73
（ｓ、４Ｈ）、2.25（ｓ、３Ｈ）が得られた。13 Ｃ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）によりppm で表わされる、182.
6, 181.5, 152.5, 151.6, 148.0, 147.3, 140.6, 137.
5, 135.1, 132.4, 128.8, 127.7, 125.1, 125.0, 122.
9, 121.7, 118.1, 109.5, 70.5, 69.9, 60.2, 60.0, 2
2.7が得られた。
（ｄのｄ、Ｊ1 ＝8.2 HzおよびＪ2＝1.1 Hz、１Ｈ）、
7.82（ｄのｔ、Ｊt ＝7.7 HzおよびＪd ＝1.2 Hz、１
Ｈ）、7.62（ｄのｔ、Ｊt ＝7.8 HzおよびＪd ＝1.3 H
z、１Ｈ）、7.48〜7.57（ｍ、２Ｈ）、7.46（ｄ、Ｊ＝
2.2 Hz、１Ｈ）、6.97（ｓ、１Ｈ）、6.7 〜6.80（ｍ、
３Ｈ）、4.40（ｓ、４Ｈ）、4.05（ｓ、４Ｈ）、3.73
（ｓ、４Ｈ）、2.25（ｓ、３Ｈ）が得られた。13 Ｃ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）によりppm で表わされる、182.
6, 181.5, 152.5, 151.6, 148.0, 147.3, 140.6, 137.
5, 135.1, 132.4, 128.8, 127.7, 125.1, 125.0, 122.
9, 121.7, 118.1, 109.5, 70.5, 69.9, 60.2, 60.0, 2
2.7が得られた。
【００６９】５３（Ｙ＝５−ＣＨ3 、Ｘ＝Ｌｉ）の合成５０ （Ｙ＝５−ＣＨ3 ）０．６０２６g （１．０mmol）
をｍ−ＢｕＯＨ５０mlに懸濁させ、４M のＬｉＯＨ
（１．７５ml、７当量）で処理し、周囲温度で１６時間
攪拌した。白色の固形生成物を７，０００×Ｇでの遠心
分離によって単離し、ｎ−ＢｕＯＨ１０mlで洗浄し、続
いてＡｃＯＥｔ１５ml洗浄し、減圧乾燥させて５３（Ｙ
＝５−ＣＨ3 、Ｘ＝Ｌｉ）を定量的に得た。
をｍ−ＢｕＯＨ５０mlに懸濁させ、４M のＬｉＯＨ
（１．７５ml、７当量）で処理し、周囲温度で１６時間
攪拌した。白色の固形生成物を７，０００×Ｇでの遠心
分離によって単離し、ｎ−ＢｕＯＨ１０mlで洗浄し、続
いてＡｃＯＥｔ１５ml洗浄し、減圧乾燥させて５３（Ｙ
＝５−ＣＨ3 、Ｘ＝Ｌｉ）を定量的に得た。
【００７０】ＩＲ（ＫＢｒ）によるピーク波数（cm-1）
は、3440（ブロードなピーク）, 2928, 1599, 1500, 14
12, 1325, 1250, 1158, 1130, 1041, 985, 925であっ
た。1 Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）により、δ 7.10〜7.14（ｍ、
１Ｈ）、6.90〜7.00（ｍ、３Ｈ）、6.75〜6.85（ｍ、３
Ｈ）、4.37（ｓ、４Ｈ）、3.87（ｓ、４Ｈ）、3.82
（ｓ、４Ｈ）、2.27（ｓ、３Ｈ）が得られた。13 Ｃ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）によりppm で表わされる、182.
6, 152.6, 152.4, 143.3, 140.6, 135.1, 124.9, 124.
3, 121.4, 121.0, 118.0, 117.8, 70.4, 70.1,60.1, 5
9.8, 22.7が得られた。 Ｃ23Ｈ22Ｎ2 Ｏ10Ｌｉ4 ・ＬｉＯＨ・３Ｈ2 Ｏについて
計算した理論値は：Ｃ46.65、Ｈ 4.94 、Ｎ 4.73 であ
り、実測値は：Ｃ 46.32、Ｈ 4.82 、Ｎ 4.52であっ
た。
は、3440（ブロードなピーク）, 2928, 1599, 1500, 14
12, 1325, 1250, 1158, 1130, 1041, 985, 925であっ
た。1 Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）により、δ 7.10〜7.14（ｍ、
１Ｈ）、6.90〜7.00（ｍ、３Ｈ）、6.75〜6.85（ｍ、３
Ｈ）、4.37（ｓ、４Ｈ）、3.87（ｓ、４Ｈ）、3.82
（ｓ、４Ｈ）、2.27（ｓ、３Ｈ）が得られた。13 Ｃ ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）によりppm で表わされる、182.
6, 152.6, 152.4, 143.3, 140.6, 135.1, 124.9, 124.
3, 121.4, 121.0, 118.0, 117.8, 70.4, 70.1,60.1, 5
9.8, 22.7が得られた。 Ｃ23Ｈ22Ｎ2 Ｏ10Ｌｉ4 ・ＬｉＯＨ・３Ｈ2 Ｏについて
計算した理論値は：Ｃ46.65、Ｈ 4.94 、Ｎ 4.73 であ
り、実測値は：Ｃ 46.32、Ｈ 4.82 、Ｎ 4.52であっ
た。
【００７１】５６の合成 ２−アミノチアゾール（２０mg、０．２mmol）をＡｃＯ
Ｈ２００μl に溶解させ、それを、ニトロシル硫酸（３
２mg、０．２５mmol）とＡｃＯＨ（２００μl）とを攪
拌して氷槽中に維持した混合物に滴下した。この混合物
を４５分間攪拌し、その後、少量の尿素を加えた。５分
後、この混合物を、５３（６０mg、０．１mmol）をＨ2
Ｏ１．０mlおよびＣＨ3 ＯＨ０．２５mlに入れて攪拌し
た溶液に滴下し、０〜５℃に維持し、３時間反応させ
た。反応混合物をＡｃＯＥｔ１mlづつで４回抽出し、抽
出物を合わせてＭｇＳＯ4 上で乾燥させ、減圧下に乾燥
するまで蒸発させて５６（４２mg、７０％）を得た。Ｒ
Ｐ−２カラムクロマトグラフィー（３２の合成のステッ
プ４のとおり）によって純粋な生成物を得た。
Ｈ２００μl に溶解させ、それを、ニトロシル硫酸（３
２mg、０．２５mmol）とＡｃＯＨ（２００μl）とを攪
拌して氷槽中に維持した混合物に滴下した。この混合物
を４５分間攪拌し、その後、少量の尿素を加えた。５分
後、この混合物を、５３（６０mg、０．１mmol）をＨ2
Ｏ１．０mlおよびＣＨ3 ＯＨ０．２５mlに入れて攪拌し
た溶液に滴下し、０〜５℃に維持し、３時間反応させ
た。反応混合物をＡｃＯＥｔ１mlづつで４回抽出し、抽
出物を合わせてＭｇＳＯ4 上で乾燥させ、減圧下に乾燥
するまで蒸発させて５６（４２mg、７０％）を得た。Ｒ
Ｐ−２カラムクロマトグラフィー（３２の合成のステッ
プ４のとおり）によって純粋な生成物を得た。
【００７２】1Ｈ ＮＭＲ（ＤＣ3 ＯＤ）により、δ
7.95（ｄ、Ｊ＝3.3 Hz、１Ｈ）、7.57〜7.65（ｍ、３
Ｈ）、6.77〜6.90（ｍ、３Ｈ）、6.68（ｄ、Ｊ＝7.8 H
z、１Ｈ）、4.84（ｓ、４Ｈ；ＣＯＯＨ）、4.25〜4.50
（ｍ、４Ｈ）、4.30（ｓ、４Ｈ）、4.07（ｓ、４Ｈ）、
2.27（ｓ、３Ｈ）が得られた。
7.95（ｄ、Ｊ＝3.3 Hz、１Ｈ）、7.57〜7.65（ｍ、３
Ｈ）、6.77〜6.90（ｍ、３Ｈ）、6.68（ｄ、Ｊ＝7.8 H
z、１Ｈ）、4.84（ｓ、４Ｈ；ＣＯＯＨ）、4.25〜4.50
（ｍ、４Ｈ）、4.30（ｓ、４Ｈ）、4.07（ｓ、４Ｈ）、
2.27（ｓ、３Ｈ）が得られた。
【００７３】最大光吸収の測定 pH９のホウ酸塩緩衝液中で非錯化形態および錯化形態の
カルシウム指示薬化合物１４〜４１および４３〜４９の
最大光吸収を測定した。十分な指示薬を緩衝液に溶解さ
せて、ＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で測定して約１．０〜
２．０の吸光度を得た。１cmの路長および４．０mlの容
量を有する標準のcurvettes の場合、通常は緩衝液４．
０ml中に指示薬が０．１５〜０．３５mg含まれていた。
非錯化形態の最大吸収を測定し、次いでＣａＣｌ2 約
２．０mg（５０〜１００倍過剰モル）を加え、錯化形態
の最大吸収を測定した。
カルシウム指示薬化合物１４〜４１および４３〜４９の
最大光吸収を測定した。十分な指示薬を緩衝液に溶解さ
せて、ＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で測定して約１．０〜
２．０の吸光度を得た。１cmの路長および４．０mlの容
量を有する標準のcurvettes の場合、通常は緩衝液４．
０ml中に指示薬が０．１５〜０．３５mg含まれていた。
非錯化形態の最大吸収を測定し、次いでＣａＣｌ2 約
２．０mg（５０〜１００倍過剰モル）を加え、錯化形態
の最大吸収を測定した。
【００７４】性能評価 Technicon AXON（登録商標）分析装置において、１４の
性能を液状試薬配合物中で評価した。この試薬は、化合
物１４を１００mg/l含むホウ酸塩緩衝液１００mMからな
るものであった。機器のパラメータは次のとおりであっ
た。
性能を液状試薬配合物中で評価した。この試薬は、化合
物１４を１００mg/l含むホウ酸塩緩衝液１００mMからな
るものであった。機器のパラメータは次のとおりであっ
た。
【００７５】 Ｒ１容量 ３５０μl 試料容量 ４μl すすぎ容量 ５０μl 遅延時間 ３分間 フィルタ ５０５／７５０nm 型式 終点／Ａ低下
【００７６】直線性は、０〜２０mg/dl の範囲の濃度の
カルシウム水溶液によって評価した。カルシウム濃度を
５０５nmでの吸光度の変化に対してプロットしたグラフ
が応答の直線性を表す。
カルシウム水溶液によって評価した。カルシウム濃度を
５０５nmでの吸光度の変化に対してプロットしたグラフ
が応答の直線性を表す。
【００７７】 図１のデータを多直線回帰解析すると、式 Ｙ＝０．０６２５Ｘ−０．００１ （ただし、Ｙは、５０５nmでの吸光度Δを７５０nmでの
吸光度で割ったものであり、Ｘは、mg/dl 単位のカルシ
ウム濃度である）が得られる。相関係数（Ｒ）は０．９
９９７である。
吸光度で割ったものであり、Ｘは、mg/dl 単位のカルシ
ウム濃度である）が得られる。相関係数（Ｒ）は０．９
９９７である。
【図１】カルシウム濃度を吸光度に対してプロットした
グラフである。
グラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 31/22 １２４ 7132−2Ｊ (72)発明者 トーマス・ボッカー ドイツ連邦共和国、5653 ライヒリンゲ ン、イム・ロットフェルト 14 (72)発明者 ポール・エフ・コーリー アメリカ合衆国、インデイアナ州、46514、 エルクハート、スプリングブルック・ドラ イブ 1535
Claims (17)
- 【請求項１】 式 【化１】 （式中、Ｘは水素原子または一価の金属原子であり、Ｙ
は水素原子またはメトキシ基であり、Ｒはアゾ染料の構
造を完成させる環状芳香族有機残基である）で示される
ことを特徴とするアリールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項２】 Ｒが、五員もしくは六員の、置換もしく
は非置換の炭素環式芳香環または複素芳香環の単環であ
るか、五員もしくは六員の、置換もしくは非置換の炭素
環式芳香環または複素芳香環との縮合環である請求項１
記載のアリールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項３】 炭素環式芳香環または複素芳香環が、ア
ルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、アリー
ル、ヘテロアリール、ケトまたはメシル成分によって置
換されている請求項１記載のアリールアゾクロモイオノ
フォア。 - 【請求項４】 Ｒが、２−ニトロフェニル；２−ニトロ
−４−フルオロフェニル；２−ニトロ−４−クロロフェ
ニル；２−ニトロ−４−トリフルオロメチルフェニル；
２−ニトロ−４−シアノフェニル；４−ニトロフェニ
ル；２−フルオロ−４−ニトロフェニル；２−クロロ−
４−ニトロフェニル；３−ニトロ−４−スルホフェニ
ル；２，５−ジクロロ−４−（２′−スルホエチルスル
ホンアミド）フェニル；２−メタンスルホニル−４−ニ
トロフェニル；２，４−ジニトロフェニル；２−ニトロ
−４−フルオロフェニル；２−クロロ−５−ニトロフェ
ニルおよび３，５−ジニトロフェニルからなる群より選
択される置換された六員の炭素環式芳香環である請求項
２記載のアリールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項５】 Ｙが水素原子である請求項４記載のアリ
ールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項６】 Ｘがカリウムである請求項４記載のアリ
ールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項７】 Ｒが、２−チアゾリル；４−メチル−２
−チアゾリル；４−フェニル−２−チアゾリル；４，５
−ジメチル−２−チアゾリル；４−フェニル−２−チア
ゾリル；５−ニトロ−２−チアゾリル；５−ブロモ−２
−チアゾリル；４−カルボキシメチル−２−チアゾリ
ル；５−ニトロフェニルスルホニル−２−チアゾリル；
２−ピリジル；４，６−ジメチル−２−ピリジル；５−
クロロ−２−ピリジル；５−ブロモ−２−ピリジル；３
−メチル−２−ピリジル；５−ブロモ−３−ニトロ−２
−ピリジル；３−クロロ−５−トリフルオロメチル−２
−ピリジル；３，５−ジクロロ−２−ピリジル；３−ニ
トロ−２−ピリジル；４−ピリジル；２，５，６−トリ
フルオロ−３−クロロ−４−ピリジル；２−メトキシ−
５−ピリジル；２，６−ジメトキシ−３−ピリジル；５
−ニトロ−２−ピリミジル；４−メチル−２−ピリミジ
ル；４，６−ジメチル−２−ピリミジル；４，６−ジメ
トキシ−２−ピリミジル；４−クロロ−６−メチル−２
−ピリミジル；５−メチル−３−イソオキサゾリル；３
−メチル−５−イソオキサゾリル；３−メチル−５−イ
ソチアゾリル；１−エチル−５−ピラゾリル；２−
（１，３，４−チアジアゾリル）；５−エチル−２−
（１，３，４−チアジアゾリル）および３−フェニル−
５−（１，２，４−チアジアゾリル）からなる群より選
択される五員または六員の複素芳香環の単環である請求
項２記載のアリールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項８】 Ｒが、４−トリフルオロメチル−６−ク
ロロ−２−ベンゾチアゾリル；１−ナフチル；６−
（２′−ヒドロキシエチルオキシ）−２−ベンゾチアゾ
リル；６−tert−ブチル−２−ベンゾチアゾリル；４−
メチル−５−クロロ−２−ベンゾチアゾリル；４，５−
ジメチル−２−ベンゾチアゾリル；２−ベンゾチアゾリ
ル；５−フルオロ−２−ベンゾチアゾリル；６−スルホ
−２−ベンゾチアゾリル；５，６−ジクロロ−２−ベン
ゾチアゾリル；２−β−ナフトチアゾリル；４−ブロモ
−６−クロロ−２−ベンゾチアゾリル；４，５−ジクロ
ロ−２−ベンゾチアゾリル；６−ニトロ−２−ベンゾチ
アゾリルおよび４，５，６，７−テトラクロロ−２−ベ
ンゾチアゾリルからなる群より選択される、五員または
六員の、置換または非置換の炭素環式芳香環または複素
芳香環との縮合環である請求項２記載のアリールアゾク
ロモイオノフォア。 - 【請求項９】 Ｙが水素原子である請求項８記載のアリ
ールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項１０】 Ｘがカリウムである請求項８記載のア
リールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項１１】 Ｒが、１−イソキノリニル；５−イソ
キノリニル；６−ニトロ−５−キノリニル；５−クロロ
−２−ベンゾオキサゾリル；５，６−ジメチル−２−ベ
ンゾチアゾリル；６−エトキシ−２−ベンゾチアゾリ
ル；６−フルオロ−２−ベンゾチアゾリル；４−メトキ
シ−２−ベンゾチアゾリル；６−メトキシ−２−ベンゾ
チアゾリル；４−メチル−２−ベンゾチアゾリルおよび
６−メチル−２−ベンゾチアゾリルからなる群より選択
される、五員または六員の、置換または非置換の炭素環
式芳香環または複素芳香環との縮合環である請求項２記
載のアリールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項１２】 Ｙが水素原子である請求項１１記載の
アリールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項１３】 Ｘがカリウムである請求項１１記載の
アリールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項１４】 Ｙが水素原子であり、Ｒが、２−ニト
ロフェニル；４−ニトロフェニル；２−チアゾリル；
２，４−ジニトロフェニルおよび２−メタンスルホニル
−４−ニトロフェニルからなる群より選択される請求項
１記載のアリールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項１５】 Ｘがリチウム、ナトリウムまたはカリ
ウムである請求項１記載のアリールアゾクロモイオノフ
ォア。 - 【請求項１６】 Ｘがカリウムである請求項１５記載の
アリールアゾクロモイオノフォア。 - 【請求項１７】 カルシウムイオンを含有する疑いのあ
る水性液中のそのようなイオンを検出する方法であっ
て、 その液体を、式 【化２】 （式中、Ｘは水素原子または一価の金属原子であり、Ｙ
は水素原子またはメトキシ基であり、Ｒは、環状芳香族
有機残基である）で示される化合物と接触させ、カルシ
ウムイオンと該化合物との錯化から生じる液体の光学密
度の変化を測定することを特徴とする方法。
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