JPH05223825A - メロシアニンタンパク質誤差指示薬 - Google Patents
メロシアニンタンパク質誤差指示薬Info
- Publication number
- JPH05223825A JPH05223825A JP4170040A JP17004092A JPH05223825A JP H05223825 A JPH05223825 A JP H05223825A JP 4170040 A JP4170040 A JP 4170040A JP 17004092 A JP17004092 A JP 17004092A JP H05223825 A JPH05223825 A JP H05223825A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- group
- integer
- sample
- error indicator
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/14—Styryl dyes
- C09B23/145—Styryl dyes the ethylene chain carrying an heterocyclic residue, e.g. heterocycle-CH=CH-C6H5
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/14—Styryl dyes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
- G01N33/521—Single-layer analytical elements
- G01N33/523—Single-layer analytical elements the element being adapted for a specific analyte
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6827—Total protein determination, e.g. albumin in urine
- G01N33/6839—Total protein determination, e.g. albumin in urine involving dyes, e.g. Coomassie blue, bromcresol green
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
- Y10S436/81—Tube, bottle, or dipstick
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 式：化１で示されるメロシアニンタンパク質
の誤差指示薬化合物、該化合物を含むタンパク質検出用
分析試験片及び該試験片を用いるタンパク質検出方法。 （化１） ［式中、ｍは１から６までの整数であり、Ｑは臭素、ヨ
ウ素又は塩素であり、Ｒは硫黄、セレン、酸素、又は基
＝Ｃ（ＣnH2n+1）2（式中、ｎは１から６までの整数で
ある）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -又は水素である］ 【効果】 本発明の試験片は、有機媒体を必要とせず
に、水性液体試料中のタンパク質を検出できるものであ
り、約１５mg/dl から５００mg/dl までのタンパク質の
存在により、試験片がオレンジ色からピンク色へ変色す
るので、容易に変色（タンパク質の存在）を確認するこ
とができる。
の誤差指示薬化合物、該化合物を含むタンパク質検出用
分析試験片及び該試験片を用いるタンパク質検出方法。 （化１） ［式中、ｍは１から６までの整数であり、Ｑは臭素、ヨ
ウ素又は塩素であり、Ｒは硫黄、セレン、酸素、又は基
＝Ｃ（ＣnH2n+1）2（式中、ｎは１から６までの整数で
ある）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -又は水素である］ 【効果】 本発明の試験片は、有機媒体を必要とせず
に、水性液体試料中のタンパク質を検出できるものであ
り、約１５mg/dl から５００mg/dl までのタンパク質の
存在により、試験片がオレンジ色からピンク色へ変色す
るので、容易に変色（タンパク質の存在）を確認するこ
とができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は一般的にタンパク質の検
出に関する。さらに限定すると、本発明は新しい種類の
タンパク質誤差指示薬に関する。
出に関する。さらに限定すると、本発明は新しい種類の
タンパク質誤差指示薬に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】タンパ
ク質の検出は、疾病の診断、医学研究及び産業において
重要なことである。試料中のタンパク質の検出方法には
いくつかの方法がある。タンパク質誤差指示薬を用いる
方法を別にして、タンパク質検出技術の全ては多段階方
法であり、往々にして、きわめて複雑な装置及び数時間
もの時間を必要とする。
ク質の検出は、疾病の診断、医学研究及び産業において
重要なことである。試料中のタンパク質の検出方法には
いくつかの方法がある。タンパク質誤差指示薬を用いる
方法を別にして、タンパク質検出技術の全ては多段階方
法であり、往々にして、きわめて複雑な装置及び数時間
もの時間を必要とする。
【０００３】試料中のタンパク質の測定に一般的に用い
られている技術の１つは、ビウレット法である。
られている技術の１つは、ビウレット法である。
【０００４】この方法によると、試料中のあらゆるタン
パク質を沈降させるために、試料はまず酸性化される。
沈降させたタンパク質は、次に、弱アルカリ性の媒体中
で再溶解され、第２銅イオンを含む溶液中で処理され
る。第２銅イオンとタンパク質のペプチド結合が反応し
て着色したキレートを形成する。次に、この処理した溶
液の吸光度を、分光光度計を用いて測定する。検量吸光
度曲線を用いて、このデータから、試料中のタンパク質
の量を見積る。この方法は、通常、実施するのに１時間
乃至３時間を要する。
パク質を沈降させるために、試料はまず酸性化される。
沈降させたタンパク質は、次に、弱アルカリ性の媒体中
で再溶解され、第２銅イオンを含む溶液中で処理され
る。第２銅イオンとタンパク質のペプチド結合が反応し
て着色したキレートを形成する。次に、この処理した溶
液の吸光度を、分光光度計を用いて測定する。検量吸光
度曲線を用いて、このデータから、試料中のタンパク質
の量を見積る。この方法は、通常、実施するのに１時間
乃至３時間を要する。
【０００５】ビウレット法の１つのバリエーションがロ
ーリー法である。ローリー法によると、沈降させたタン
パク質を再溶解した後、溶液中の全てのフェノール性の
化合物を酸化するために、アルカリ性条件下で、この溶
液にホスホタングストモリブデン酸試薬を加える。実質
的に全てのタンパク質が何らかのフェノール性の化合
物、例えばチロシン、を含むならば、この技術は試料中
のタンパク質を測定することができる。次に、分光光度
計を用いて処理した溶液の吸光度を測定する。検量され
た分光光度計曲線を用いて、その後のその試料中のタン
パク質の量を見積るために、測定した吸光度を用いる。
しかしながら、ＴＲＩＳ、グリシン及びアミド緩衝液と
いったアミン基を含む数多くの緩衝液及びその他の化合
物が、この試験に干渉する。
ーリー法である。ローリー法によると、沈降させたタン
パク質を再溶解した後、溶液中の全てのフェノール性の
化合物を酸化するために、アルカリ性条件下で、この溶
液にホスホタングストモリブデン酸試薬を加える。実質
的に全てのタンパク質が何らかのフェノール性の化合
物、例えばチロシン、を含むならば、この技術は試料中
のタンパク質を測定することができる。次に、分光光度
計を用いて処理した溶液の吸光度を測定する。検量され
た分光光度計曲線を用いて、その後のその試料中のタン
パク質の量を見積るために、測定した吸光度を用いる。
しかしながら、ＴＲＩＳ、グリシン及びアミド緩衝液と
いったアミン基を含む数多くの緩衝液及びその他の化合
物が、この試験に干渉する。
【０００６】試料中のタンパク質の存在の測定に用いら
れるもう１つの方法は、試料の酸性化に続いて濁り度の
測定である。この方法によると、試料の濁り度は、試料
に対して一般的に酸性化剤であるタンパク質沈降剤を加
えた後、分光光度計を用いて測定される。試料の計算上
の濁り度を分光光度計の標準曲線と比較して、試料中の
タンパク質の存在を測定する。この方法に用いられる一
般的な沈降剤には、スルホサリチル酸、トリクロロ酢酸
及びタンニン酸が含まれる。
れるもう１つの方法は、試料の酸性化に続いて濁り度の
測定である。この方法によると、試料の濁り度は、試料
に対して一般的に酸性化剤であるタンパク質沈降剤を加
えた後、分光光度計を用いて測定される。試料の計算上
の濁り度を分光光度計の標準曲線と比較して、試料中の
タンパク質の存在を測定する。この方法に用いられる一
般的な沈降剤には、スルホサリチル酸、トリクロロ酢酸
及びタンニン酸が含まれる。
【０００７】タンパク質誤差指示薬を用いる方法は、試
料中のタンパク質の存在を測定するために広く用いられ
ている。タンパク質誤差指示薬を用いる方法は、安価
で、迅速かつ単純で便利である。ブロモフェノール・ブ
ルー、ブロモクレゾール・グリーン及びコースマッシー
・ブルーのようなフェノールスルホンフタレイン化合物
類はおそらく最も広く用いられているタンパク質誤差指
示薬である。タンパク質誤差指示薬を用いる方法は、往
々にして、タンパク質誤差指示薬が含浸された試薬片を
必要とする。これらの方法によると、この試薬試験片を
少量の試料と接触させる。試料中にタンパク質が存在す
る場合、試験片は単に色変化することによってその存在
を示す。観察される色は、試料中のタンパク質濃度に応
じて変化しうる。
料中のタンパク質の存在を測定するために広く用いられ
ている。タンパク質誤差指示薬を用いる方法は、安価
で、迅速かつ単純で便利である。ブロモフェノール・ブ
ルー、ブロモクレゾール・グリーン及びコースマッシー
・ブルーのようなフェノールスルホンフタレイン化合物
類はおそらく最も広く用いられているタンパク質誤差指
示薬である。タンパク質誤差指示薬を用いる方法は、往
々にして、タンパク質誤差指示薬が含浸された試薬片を
必要とする。これらの方法によると、この試薬試験片を
少量の試料と接触させる。試料中にタンパク質が存在す
る場合、試験片は単に色変化することによってその存在
を示す。観察される色は、試料中のタンパク質濃度に応
じて変化しうる。
【０００８】この可変的色変化は、試料中のタンパク質
を数量化するのに用いられる。上記のタイプの試薬片
は、適正に使用するのに最小限の訓練しか必要としな
い。この試薬試験片は、タンパク質の即座の測定のため
の精確で便利かつ迅速な手段を提供する。これらのよう
な試験紙は、産業、並びに研究及び臨床研究所において
技師により広く用いられている。
を数量化するのに用いられる。上記のタイプの試薬片
は、適正に使用するのに最小限の訓練しか必要としな
い。この試薬試験片は、タンパク質の即座の測定のため
の精確で便利かつ迅速な手段を提供する。これらのよう
な試験紙は、産業、並びに研究及び臨床研究所において
技師により広く用いられている。
【０００９】さらに詳しく言うと、タンパク質誤差指示
薬は、タンパク質の存在により変化するpKa 値をもつイ
オン化可能な基を含むpH指示薬である。フェノールスル
ホンフタレインの場合、イオン化可能な基はフェノール
性のヒドロキシル基である。フェノール性のヒドロキシ
ル基からのプロトンの放出は、試験されている試料中の
タンパク質を示す観察可能な色変化をひき起こす。試料
中のタンパク質の分析測定のために有効であると一般的
にみなされているタンパク質誤差指示薬は、米国特許第
４，０１３，４１６号に記されている。
薬は、タンパク質の存在により変化するpKa 値をもつイ
オン化可能な基を含むpH指示薬である。フェノールスル
ホンフタレインの場合、イオン化可能な基はフェノール
性のヒドロキシル基である。フェノール性のヒドロキシ
ル基からのプロトンの放出は、試験されている試料中の
タンパク質を示す観察可能な色変化をひき起こす。試料
中のタンパク質の分析測定のために有効であると一般的
にみなされているタンパク質誤差指示薬は、米国特許第
４，０１３，４１６号に記されている。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明は、メロシアニン
タンパク質誤差指示薬を提供する。メロシアニンタンパ
ク質誤差指示薬は、新たなクラスのタンパク質誤差指示
薬である。これまで、メロシアニン染料は、タンパク質
誤差指示薬としては未知のものであった。メロシアニン
タンパク質誤差指示薬は、タンパク質の検出のために有
効である。本発明のメロシアニンタンパク質誤差指示薬
は、式：
タンパク質誤差指示薬を提供する。メロシアニンタンパ
ク質誤差指示薬は、新たなクラスのタンパク質誤差指示
薬である。これまで、メロシアニン染料は、タンパク質
誤差指示薬としては未知のものであった。メロシアニン
タンパク質誤差指示薬は、タンパク質の検出のために有
効である。本発明のメロシアニンタンパク質誤差指示薬
は、式：
【００１１】
【化５】
【００１２】［式中、ｍは１から６までの整数であり；
Ｑは臭素、ヨウ素、又は塩素であり；Ｒは硫黄、セレ
ン、酸素又は基＝Ｃ（Ｃn Ｈ2n+1)2（式中、ｎは１から
６までの整数である）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -又は水素
である］で示される化合物である。
Ｑは臭素、ヨウ素、又は塩素であり；Ｒは硫黄、セレ
ン、酸素又は基＝Ｃ（Ｃn Ｈ2n+1)2（式中、ｎは１から
６までの整数である）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -又は水素
である］で示される化合物である。
【００１３】本発明の一実施態様によると、ｍは３又は
４の整数であり、Ｒは基＝Ｃ（ＣＨ3)2 であり、Ｔは基
−ＳＯ3 -である。
４の整数であり、Ｒは基＝Ｃ（ＣＨ3)2 であり、Ｔは基
−ＳＯ3 -である。
【００１４】本発明のもう１つの重要な態様では、液体
試料中のタンパク質の検出のためのメロシアニンタンパ
ク質誤差指示薬を含む分析試薬片が提供される。
試料中のタンパク質の検出のためのメロシアニンタンパ
ク質誤差指示薬を含む分析試薬片が提供される。
【００１５】本発明のさらにもう１つの態様は、液体試
料中のタンパク質の検出方法に関する。この方法は、液
体試料で分析試験片を湿らせる工程を含んでいる。試験
片は、上記のメロシアニンタンパク質誤差指示薬のうち
の少なくとも１つが含浸された吸収性担体で構成されて
いる。次に、何らかの色変化を検出するためにこの試験
片が観察される。色変化が、液体試料中のタンパク質の
存在を示している。
料中のタンパク質の検出方法に関する。この方法は、液
体試料で分析試験片を湿らせる工程を含んでいる。試験
片は、上記のメロシアニンタンパク質誤差指示薬のうち
の少なくとも１つが含浸された吸収性担体で構成されて
いる。次に、何らかの色変化を検出するためにこの試験
片が観察される。色変化が、液体試料中のタンパク質の
存在を示している。
【００１６】本発明は、タンパク質誤差指示薬として有
効な新しいクラスの化合物の発見に関する。本発明の一
態様によると、本発明のメロシアニン化合物はタンパク
質と反応してその結果メロシアニン化合物内に観察可能
な色変化を生じさせることが発見された。本発明のもう
１つの態様によると、流体内のタンパク質の測定のため
の分析試薬片は、本発明の新規なタンパク質誤差指示薬
を吸収性試験紙片に含浸させることによって得ることが
できることが発見された。本発明のさらにもう１つの態
様によると、本発明の新規なタンパク質誤差指示薬が、
水性液体分析において有効であることが発見された。ブ
ロモフェノール・ブルーのような先行技術のタンパク質
誤差指示薬は、試験されている試料中でタンパク質と有
害反応を起こしうる有機溶剤を必要とするため、このこ
とはきわめて有利である。本発明のタンパク質誤差指示
薬は、又３．５以上のpKa 値を有する。本発明の指示薬
を含む液体又は浸し片(dip-stick) 試薬を作る上で広範
囲の緩衝液を使用することができるので、このことは有
利である。
効な新しいクラスの化合物の発見に関する。本発明の一
態様によると、本発明のメロシアニン化合物はタンパク
質と反応してその結果メロシアニン化合物内に観察可能
な色変化を生じさせることが発見された。本発明のもう
１つの態様によると、流体内のタンパク質の測定のため
の分析試薬片は、本発明の新規なタンパク質誤差指示薬
を吸収性試験紙片に含浸させることによって得ることが
できることが発見された。本発明のさらにもう１つの態
様によると、本発明の新規なタンパク質誤差指示薬が、
水性液体分析において有効であることが発見された。ブ
ロモフェノール・ブルーのような先行技術のタンパク質
誤差指示薬は、試験されている試料中でタンパク質と有
害反応を起こしうる有機溶剤を必要とするため、このこ
とはきわめて有利である。本発明のタンパク質誤差指示
薬は、又３．５以上のpKa 値を有する。本発明の指示薬
を含む液体又は浸し片(dip-stick) 試薬を作る上で広範
囲の緩衝液を使用することができるので、このことは有
利である。
【００１７】以下に記述する新規なタンパク質誤差指示
薬は、オレンジ色であり、タンパク質を含む試料と接触
すると、強烈なピンク色に変化する。色の強度は、試料
中のタンパク質の濃度を反映している。生成したピンク
色は、陰性のオレンジ色と明らかに異なっている。本発
明のタンパク質誤差指示薬は、試料中の約１５mg/dlか
ら約５００mg/dl の範囲のタンパク質を陽性として検出
する。
薬は、オレンジ色であり、タンパク質を含む試料と接触
すると、強烈なピンク色に変化する。色の強度は、試料
中のタンパク質の濃度を反映している。生成したピンク
色は、陰性のオレンジ色と明らかに異なっている。本発
明のタンパク質誤差指示薬は、試料中の約１５mg/dlか
ら約５００mg/dl の範囲のタンパク質を陽性として検出
する。
【００１８】オレンジ色からピンク色への観察可能な色
変化から見て、本発明により作製された試験片は、陰性
のオレンジ色からタンパク質が存在する場合に明確に識
別できる全く異なる色を生成することにより、生物学的
流体中のタンパク質を検出するので診断上の補助手段と
なる。このことは、アルブミンの存在する場合に黄色か
ら黄緑色へといったように色の１つの色調から他の色調
へとわずかに変化する、その他の試験片類とは全く異な
る点である。陰性のオレンジ色及び陽性のピンク色の特
性は、液体試料中のタンパク質を検出するために用いら
れているこれまでの方法及び指示薬から大きく異なると
みなされる。さらに限定すると、本発明は、臨床医に対
して、試料中のタンパク質を検出するための信頼できる
方法を提供する。オレンジ色からピンク色への変化は、
結果の解釈を単純化する。このことは、解釈の誤りを少
なくし、従ってユーザーにとっての費用を低減する結果
となる。
変化から見て、本発明により作製された試験片は、陰性
のオレンジ色からタンパク質が存在する場合に明確に識
別できる全く異なる色を生成することにより、生物学的
流体中のタンパク質を検出するので診断上の補助手段と
なる。このことは、アルブミンの存在する場合に黄色か
ら黄緑色へといったように色の１つの色調から他の色調
へとわずかに変化する、その他の試験片類とは全く異な
る点である。陰性のオレンジ色及び陽性のピンク色の特
性は、液体試料中のタンパク質を検出するために用いら
れているこれまでの方法及び指示薬から大きく異なると
みなされる。さらに限定すると、本発明は、臨床医に対
して、試料中のタンパク質を検出するための信頼できる
方法を提供する。オレンジ色からピンク色への変化は、
結果の解釈を単純化する。このことは、解釈の誤りを少
なくし、従ってユーザーにとっての費用を低減する結果
となる。
【００１９】本発明のメロシアニンタンパク質誤差指示
薬は、式：
薬は、式：
【００２０】
【化６】
【００２１】［式中、ｍは１から６までの整数であり、
Ｑは臭素、ヨウ素又は塩素であり、Ｒは硫黄、セレン、
酸素又は基＝Ｃ（Ｃn Ｈ2n+1)2（式中、ｎは１から６ま
での整数である）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -又は水素であ
る］で示される化合物である。より好ましくは、Ｑは臭
素又はヨウ素であり、ｍは２から４までの整数であり、
Ｒは基＝Ｃ（ＣＨ3)2 であり、Ｔは基−ＳＯ3 -である。
最も好ましくは、Ｑはヨウ素であり、ｍは３である。
Ｑは臭素、ヨウ素又は塩素であり、Ｒは硫黄、セレン、
酸素又は基＝Ｃ（Ｃn Ｈ2n+1)2（式中、ｎは１から６ま
での整数である）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -又は水素であ
る］で示される化合物である。より好ましくは、Ｑは臭
素又はヨウ素であり、ｍは２から４までの整数であり、
Ｒは基＝Ｃ（ＣＨ3)2 であり、Ｔは基−ＳＯ3 -である。
最も好ましくは、Ｑはヨウ素であり、ｍは３である。
【００２２】本発明は、タンパク質誤差指示薬としての
メロシアニンクラスの色原体の初めての使用を記述して
おり、従って広範囲の置換誘導体を包含するものである
ことを理解すべきである。本発明の範囲から逸脱するこ
となく、式中の芳香環がさまざまな置換基を有しうると
いうことは明らかであろう。このような置換基は、本発
明のタンパク質誤差指示薬の特性をもつ安定した化合物
を合成する当業者の能力によってのみ制限され、非置換
及び置換アルキル、非置換及び置換アリル、アルコキ
シ、アリルオキシ、ハロ（例えばフッ素、塩素、臭
素）、ニトロ及びジアルキルアミノのような置換アミノ
などの基を含む。
メロシアニンクラスの色原体の初めての使用を記述して
おり、従って広範囲の置換誘導体を包含するものである
ことを理解すべきである。本発明の範囲から逸脱するこ
となく、式中の芳香環がさまざまな置換基を有しうると
いうことは明らかであろう。このような置換基は、本発
明のタンパク質誤差指示薬の特性をもつ安定した化合物
を合成する当業者の能力によってのみ制限され、非置換
及び置換アルキル、非置換及び置換アリル、アルコキ
シ、アリルオキシ、ハロ（例えばフッ素、塩素、臭
素）、ニトロ及びジアルキルアミノのような置換アミノ
などの基を含む。
【００２３】本発明の明細書において、「アルキル」
は、一般式−Ｃn Ｈ2n+1の非置換炭化水素残基の直鎖及
び分枝鎖型を含み、好ましくはメチル、エチル、ｎ−プ
ロピル、イソプロピル、ｎ−ブテル、イソブチル、第３
ブチル、ｎ−ヘキシルなどのｎが６以下の「低級アルキ
ル」脂肪族型及びその置換型を含むことが意図されてい
る。
は、一般式−Ｃn Ｈ2n+1の非置換炭化水素残基の直鎖及
び分枝鎖型を含み、好ましくはメチル、エチル、ｎ−プ
ロピル、イソプロピル、ｎ−ブテル、イソブチル、第３
ブチル、ｎ−ヘキシルなどのｎが６以下の「低級アルキ
ル」脂肪族型及びその置換型を含むことが意図されてい
る。
【００２４】さらに、本発明の明細書において、「アリ
ール」は、芳香族炭化水素環又は環系から水素原子の除
去により誘導された有機残基を含み、又、フェニル及び
ナフチルのような非置換炭化水素環残基並びにそれの置
換型を含むことが意図されている。本発明の目的におい
ては、アリール残基は、本発明のメロシアニンタンパク
質誤差指示薬化合物を提供するのに当業者が選択しうる
１つ又はそれ以上の、同じか又は異なる官能基又は置換
基を有する残基を含む。
ール」は、芳香族炭化水素環又は環系から水素原子の除
去により誘導された有機残基を含み、又、フェニル及び
ナフチルのような非置換炭化水素環残基並びにそれの置
換型を含むことが意図されている。本発明の目的におい
ては、アリール残基は、本発明のメロシアニンタンパク
質誤差指示薬化合物を提供するのに当業者が選択しうる
１つ又はそれ以上の、同じか又は異なる官能基又は置換
基を有する残基を含む。
【００２５】より限定すると、「アリール」及び「アル
キル」が置換される場合、この置換は、当該化合物の有
する有効性の特徴から実質的にそれることのない官能基
で単置換又は多置換されたものを含むことが意図されて
いる。このような官能基には、合成的に導入可能であ
り、そして安定でかつ有効な本発明のメロシアニンタン
パク質誤差指示薬化合物を結果として生じるような化学
基が含まれている。このような官能基の例としては、ハ
ロ（例えば、フッ素、塩素、臭素）、ジアルキルアミノ
のような置換アミノ、ニトロ、アルコキシ、アリルオキ
シ、アルキル及びアリルなどの基が含まれるが、これら
に制限されるわけではない。
キル」が置換される場合、この置換は、当該化合物の有
する有効性の特徴から実質的にそれることのない官能基
で単置換又は多置換されたものを含むことが意図されて
いる。このような官能基には、合成的に導入可能であ
り、そして安定でかつ有効な本発明のメロシアニンタン
パク質誤差指示薬化合物を結果として生じるような化学
基が含まれている。このような官能基の例としては、ハ
ロ（例えば、フッ素、塩素、臭素）、ジアルキルアミノ
のような置換アミノ、ニトロ、アルコキシ、アリルオキ
シ、アルキル及びアリルなどの基が含まれるが、これら
に制限されるわけではない。
【００２６】本発明のメロシアニンタンパク質誤差指示
薬の例としては、１−（ω−スルホナトプロピル）−２
−（４´−ヒドロキシ−３´，５´−ジブロモスチリ
ル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン；１
−（ω−スルホナトブチル）−２−（４´−ヒドロキシ
−３´，５´−ジヨードスチリル）ベンゾチアゾリウム
・ベタイン；１−（ω−スルホナトエチル）−２−（４
´−ヒドロキシ−３´，５´−ジヨードスチリル）−
３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン；１−（ω
−スルホナトプロピル）−２−（４´−ヒドロキシ−３
´−５´−ジヨードスチリル）−３，３−ジメチルイン
ドレニウム・ベタイン；１−（ω−スルホナトブチル）
−２−（４´−ヒドロキシ−３´，５´−ジヨードスチ
リル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン；
及び１−（ｎ−ブチル）−２−（４´−ヒドロキシ−３
´，５´−ジヨードスチリル）−３，３−ジメチルイン
ドレニウム・ヨージドが含まれる。上記のメロシアニン
タンパク質誤差指示薬を合成するための詳細なプロトコ
ルは、実施例の中に記述されている。
薬の例としては、１−（ω−スルホナトプロピル）−２
−（４´−ヒドロキシ−３´，５´−ジブロモスチリ
ル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン；１
−（ω−スルホナトブチル）−２−（４´−ヒドロキシ
−３´，５´−ジヨードスチリル）ベンゾチアゾリウム
・ベタイン；１−（ω−スルホナトエチル）−２−（４
´−ヒドロキシ−３´，５´−ジヨードスチリル）−
３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン；１−（ω
−スルホナトプロピル）−２−（４´−ヒドロキシ−３
´−５´−ジヨードスチリル）−３，３−ジメチルイン
ドレニウム・ベタイン；１−（ω−スルホナトブチル）
−２−（４´−ヒドロキシ−３´，５´−ジヨードスチ
リル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン；
及び１−（ｎ−ブチル）−２−（４´−ヒドロキシ−３
´，５´−ジヨードスチリル）−３，３−ジメチルイン
ドレニウム・ヨージドが含まれる。上記のメロシアニン
タンパク質誤差指示薬を合成するための詳細なプロトコ
ルは、実施例の中に記述されている。
【００２７】図１は、本発明のいくつかのメロシアニン
タンパク質誤差指示薬化合物の合成を一般的に示してい
る。この化学は、直接的なもので、一般に、塩基性反応
条件下での芳香族ヒドロキシアルデヒドと複素環式四級
塩との結合を含む。本発明のメロシアニンタンパク質誤
差指示薬は水溶性である。このことは、これらの指示薬
を、タンパク質を検出すべき水性系、例えば尿、血液、
血清、水性ゲル（電気泳動ゲル）、水溶液などに直接添
加できるので、有利である。メロシアニンタンパク質誤
差指示薬の合成において用いられる一般的な手順が図１
に示されており、又以下の例中に詳しく記述されてい
る。
タンパク質誤差指示薬化合物の合成を一般的に示してい
る。この化学は、直接的なもので、一般に、塩基性反応
条件下での芳香族ヒドロキシアルデヒドと複素環式四級
塩との結合を含む。本発明のメロシアニンタンパク質誤
差指示薬は水溶性である。このことは、これらの指示薬
を、タンパク質を検出すべき水性系、例えば尿、血液、
血清、水性ゲル（電気泳動ゲル）、水溶液などに直接添
加できるので、有利である。メロシアニンタンパク質誤
差指示薬の合成において用いられる一般的な手順が図１
に示されており、又以下の例中に詳しく記述されてい
る。
【００２８】本発明の一態様は、上記のメロシアニンタ
ンパク質誤差指示薬化合物の１つで含浸された吸収性担
体を含む液体試料又はゲルの中のタンパク質検出のため
の分析試験片に関する。この試験片の吸収性担体は、好
ましくはろ紙である。吸収性担体として有効なその他の
材料としては、フェルト、多孔性セラミックス片、及び
米国特許第３，８４６，２４７号に記載の織られたり、
又は編まれたりしているガラス繊維が含まれる。同様に
提案されているのは、木材、布、スポンジ材料及び米国
特許第３，５５２，９２８号に記載の粘土質物質の利用
である。あるいは又、吸収性担体は、さまざまな重合体
フィルム、ガラスなどのような非多孔質のものであって
もよい。このような吸収性担体材料は、全て、その他の
ものと同様に、本発明において用いるのに適している。
しかしながら、ろ紙が特に適しているということがわか
っている。
ンパク質誤差指示薬化合物の１つで含浸された吸収性担
体を含む液体試料又はゲルの中のタンパク質検出のため
の分析試験片に関する。この試験片の吸収性担体は、好
ましくはろ紙である。吸収性担体として有効なその他の
材料としては、フェルト、多孔性セラミックス片、及び
米国特許第３，８４６，２４７号に記載の織られたり、
又は編まれたりしているガラス繊維が含まれる。同様に
提案されているのは、木材、布、スポンジ材料及び米国
特許第３，５５２，９２８号に記載の粘土質物質の利用
である。あるいは又、吸収性担体は、さまざまな重合体
フィルム、ガラスなどのような非多孔質のものであって
もよい。このような吸収性担体材料は、全て、その他の
ものと同様に、本発明において用いるのに適している。
しかしながら、ろ紙が特に適しているということがわか
っている。
【００２９】吸収性細片は、好ましくは緩衝液で含浸さ
れている。約１．５乃至約４．５のpHに調整可能なあら
ゆる緩衝液系が、本発明の実施において有効である。好
ましくは、この緩衝液系は、約２．０から約４．０まで
のpH、最も好ましくは、約３．５のpHに調整されてい
る。この方法によると、この分析試験片を、液体試料又
はゲル試料と接触させる。その後、試験片の色変化を観
察する。色変化が、この試料中のタンパク質の存在を示
している。
れている。約１．５乃至約４．５のpHに調整可能なあら
ゆる緩衝液系が、本発明の実施において有効である。好
ましくは、この緩衝液系は、約２．０から約４．０まで
のpH、最も好ましくは、約３．５のpHに調整されてい
る。この方法によると、この分析試験片を、液体試料又
はゲル試料と接触させる。その後、試験片の色変化を観
察する。色変化が、この試料中のタンパク質の存在を示
している。
【００３０】
【実施例】以下の例は、本発明の好ましい実施態様及び
用途を記述するために提示されるものであり、クレーム
に追加された記載のないかぎり本発明を制限するための
ものではない。
用途を記述するために提示されるものであり、クレーム
に追加された記載のないかぎり本発明を制限するための
ものではない。
【００３１】例１．１−（ω−スルホナトプロピル）−
２−（４´−ヒドロキシ−３´，５´−ジブロモスチリ
ル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン ３，５−ジブロモ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
（Lancaster Synthesis,Ltd., Windham, NH, USA)
（２．０g 、７．１４ミリモル）、１−（ω−スルホナ
トプロピル）−２，３，３−トリメチルインドレニウム
・ベタイン（Belg. 726, 639; CA73: P82538a ）（２．
０g 、７．１１ミリモル）及びピペリジン（０．４ml）
のＥｔＯＨ（３０ml）中の溶液を不活性ガス雰囲気下に
維持した。この溶液を５０分間還流し、氷浴で冷却し
た。反応混合液を真空下に蒸発させ、最小限のメタノー
ル（ＭｅＯＨ）に溶解した。次に、この溶液を、ＭｅＯ
Ｈ／ＣＨＣｌ3(１：４v/v)の展開溶剤を用いるシリカゲ
ル（６００グラム）クロマトグラフィに付した。主要な
紫色の生成物の帯を含む画分を集め、２−プロパノール
（ｉ−ＰｒＯＨ）中の過剰のＨＣｌで酸性化し、紫色か
ら黄金色へ色変化させた。この溶液から溶媒を真空下に
蒸発させた。残留物を高温のＥｔＯＨ（約２５ml）に溶
解し、冷却し結晶化させた。分離した固体をろ過により
収集し、氷温のＥｔＯＨ／ヘキサン（３：１v/v)で洗浄
し、真空乾燥し、黄金色の結晶として分析的に純粋な化
合物１−（ω−スルホナトプロピル）−２−（４′−ヒ
ドロキシ−３′，５′−ジブロモスチリル）−３，３−
ジメチルインドレニウム・ベタイン（０．９６g 、２５
％）を得た。この化合物は、顕著な融点を有していない
が、２００℃以上の温度で黒化した。この化合物を合成
するための上記の方法は、一般的に図１の反応Ａとして
例示されている。
２−（４´−ヒドロキシ−３´，５´−ジブロモスチリ
ル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン ３，５−ジブロモ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
（Lancaster Synthesis,Ltd., Windham, NH, USA)
（２．０g 、７．１４ミリモル）、１−（ω−スルホナ
トプロピル）−２，３，３−トリメチルインドレニウム
・ベタイン（Belg. 726, 639; CA73: P82538a ）（２．
０g 、７．１１ミリモル）及びピペリジン（０．４ml）
のＥｔＯＨ（３０ml）中の溶液を不活性ガス雰囲気下に
維持した。この溶液を５０分間還流し、氷浴で冷却し
た。反応混合液を真空下に蒸発させ、最小限のメタノー
ル（ＭｅＯＨ）に溶解した。次に、この溶液を、ＭｅＯ
Ｈ／ＣＨＣｌ3(１：４v/v)の展開溶剤を用いるシリカゲ
ル（６００グラム）クロマトグラフィに付した。主要な
紫色の生成物の帯を含む画分を集め、２−プロパノール
（ｉ−ＰｒＯＨ）中の過剰のＨＣｌで酸性化し、紫色か
ら黄金色へ色変化させた。この溶液から溶媒を真空下に
蒸発させた。残留物を高温のＥｔＯＨ（約２５ml）に溶
解し、冷却し結晶化させた。分離した固体をろ過により
収集し、氷温のＥｔＯＨ／ヘキサン（３：１v/v)で洗浄
し、真空乾燥し、黄金色の結晶として分析的に純粋な化
合物１−（ω−スルホナトプロピル）−２−（４′−ヒ
ドロキシ−３′，５′−ジブロモスチリル）−３，３−
ジメチルインドレニウム・ベタイン（０．９６g 、２５
％）を得た。この化合物は、顕著な融点を有していない
が、２００℃以上の温度で黒化した。この化合物を合成
するための上記の方法は、一般的に図１の反応Ａとして
例示されている。
【００３２】化合物を同定する分光分析データを下記に
示した。
示した。
【００３３】IR (KBr) cm-1 3438, 3055, 1606, 1577,
1519, 1475, 1406, 1372, 1305,1277, 1212, 1173, 11
24, 7391 H NMR (DMSO-d6)δ 8.58(s, 2H), 8.29(d, J=16.0Hz,
1H), 7.97(d, J=7.7Hz, 1H), 7.84(d of d, J1=2.0Hz
and J2=6.6Hz, 1H),7.67(d, J=16Hz, 1H), 7.54-7.64
(m, 2H), 4.81(t, J=7.6Hz, 2H), 3.77(v. br. s, 1H),
2.63(t, J=6.6Hz,2H), 2.10-2.22(m, 2H), 1.76(s, 6
H)13 C NMR (DMSO-d6) ppm 181.6, 155.6, 151.3, 143.8,
140.9, 135.1,129.2, 129.1, 128.7, 123.0, 115.2, 1
12.5,111.6,52.2, 47.3, 45.5, 25.6, 24.8(一致する３
つの帯）
1519, 1475, 1406, 1372, 1305,1277, 1212, 1173, 11
24, 7391 H NMR (DMSO-d6)δ 8.58(s, 2H), 8.29(d, J=16.0Hz,
1H), 7.97(d, J=7.7Hz, 1H), 7.84(d of d, J1=2.0Hz
and J2=6.6Hz, 1H),7.67(d, J=16Hz, 1H), 7.54-7.64
(m, 2H), 4.81(t, J=7.6Hz, 2H), 3.77(v. br. s, 1H),
2.63(t, J=6.6Hz,2H), 2.10-2.22(m, 2H), 1.76(s, 6
H)13 C NMR (DMSO-d6) ppm 181.6, 155.6, 151.3, 143.8,
140.9, 135.1,129.2, 129.1, 128.7, 123.0, 115.2, 1
12.5,111.6,52.2, 47.3, 45.5, 25.6, 24.8(一致する３
つの帯）
【００３４】分析値：C21H21Br2NO4S ・1/2 EtOH 計算値：C,46.65;H,4.27;N,2.47 実測値：C,46.48;H,4.50;N,2.33
【００３５】例２．１−（ω−スルホナトブチル）−２
−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリ
ル）ベンゾチアゾリウム・ベタイン ３，５−ジヨード−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
（Lancaster SynthesesLtd., Windham, NH, U.S.A.)
（３．７４g 、１０ミリミル）、３−（ω−スルホナト
ブチル）−２−メチルベンゾチアゾリウム・ベタイン(B
rit. 742, 112; CA50: P11149c)（３．７１g 、１３ミ
リモル）及びピペリジン（０．８ml）のＥｔＯＨ（３０
ml）中の混合物を、不活性ガス雰囲気の下に維持した。
この溶液を１時間還流し、次に、室温まで冷却した。反
応混合物を、ｉ−ＰｒＯＨ中の充分な１．９３M の塩酸
で酸性化し、紫から黄色へと色変化させ、その時点で溶
液から固体を分離した。この固体をろ過により収集し、
ＥｔＯＨで洗浄し、乾燥した。次に、この固体を、２M
の水酸化ナトリウム水溶液（５．２ml）を含む温（５５
℃）ＥｔＯＨ／ＭｅＯＨ／Ｈ2 Ｏ（３：２：１v/v/v)
（３００ml）中に溶解し、Celite (Johns-Manville社、
Denver, CO USA）を通してろ過し、３M の塩酸水溶液
（６ml）を付加することにより沈降させた。氷浴で冷却
した後、固体をろ過により収集し、ＥｔＯＨで洗浄し、
真空中で乾燥した。次に、固体を酢酸（ＨＯＡｃ）（６
００ml）の中で煮沸し、ろ過し、１１５℃で真空下に乾
燥し、黄色粉末として分析的に純粋な化合物１−（ω−
スルホナトブチル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′，
５′−ジヨードスチリル）ベンゾチアゾリウム・ベタイ
ン（５．１０g 、７９％）を得た。この化合物を合成す
るための上記の方法は、一般的に図１の反応Ｂとして例
示されている。この化合物を同定する分光分析データを
下記に示した。
−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリ
ル）ベンゾチアゾリウム・ベタイン ３，５−ジヨード−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
（Lancaster SynthesesLtd., Windham, NH, U.S.A.)
（３．７４g 、１０ミリミル）、３−（ω−スルホナト
ブチル）−２−メチルベンゾチアゾリウム・ベタイン(B
rit. 742, 112; CA50: P11149c)（３．７１g 、１３ミ
リモル）及びピペリジン（０．８ml）のＥｔＯＨ（３０
ml）中の混合物を、不活性ガス雰囲気の下に維持した。
この溶液を１時間還流し、次に、室温まで冷却した。反
応混合物を、ｉ−ＰｒＯＨ中の充分な１．９３M の塩酸
で酸性化し、紫から黄色へと色変化させ、その時点で溶
液から固体を分離した。この固体をろ過により収集し、
ＥｔＯＨで洗浄し、乾燥した。次に、この固体を、２M
の水酸化ナトリウム水溶液（５．２ml）を含む温（５５
℃）ＥｔＯＨ／ＭｅＯＨ／Ｈ2 Ｏ（３：２：１v/v/v)
（３００ml）中に溶解し、Celite (Johns-Manville社、
Denver, CO USA）を通してろ過し、３M の塩酸水溶液
（６ml）を付加することにより沈降させた。氷浴で冷却
した後、固体をろ過により収集し、ＥｔＯＨで洗浄し、
真空中で乾燥した。次に、固体を酢酸（ＨＯＡｃ）（６
００ml）の中で煮沸し、ろ過し、１１５℃で真空下に乾
燥し、黄色粉末として分析的に純粋な化合物１−（ω−
スルホナトブチル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′，
５′−ジヨードスチリル）ベンゾチアゾリウム・ベタイ
ン（５．１０g 、７９％）を得た。この化合物を合成す
るための上記の方法は、一般的に図１の反応Ｂとして例
示されている。この化合物を同定する分光分析データを
下記に示した。
【００３６】IR (KBr) cm-1 3436, 1608, 1572, 1529,
1497, 1458, 1396, 1318, 1267,1208, 10381 H NMR (DMSO-d6)δ 8.55(s, 1H), 8.30-8.50(m, 3H),
7.92-8.16(m, 3H),7.73-7.88(m, 2h), 4.95(br. t, J=
7.5Hz, 2H), 2.53(t, J=7.1Hz, 2H), 2.53(t, J=7.1Hz,
2H), 1.98(br.m, 2H), 1.81(q, J=7.0Hz, 2H)13 C NMR (DMSO-d6) ppm 171.4, 159.1, 148.1, 146.1,
141.0, 140.6,131.5, 129.2, 128.0, 123.9, 116.7, 1
12.2, 86.4,50.0, 48.8, 27.2, 21.9(一致する２つの
帯）
1497, 1458, 1396, 1318, 1267,1208, 10381 H NMR (DMSO-d6)δ 8.55(s, 1H), 8.30-8.50(m, 3H),
7.92-8.16(m, 3H),7.73-7.88(m, 2h), 4.95(br. t, J=
7.5Hz, 2H), 2.53(t, J=7.1Hz, 2H), 2.53(t, J=7.1Hz,
2H), 1.98(br.m, 2H), 1.81(q, J=7.0Hz, 2H)13 C NMR (DMSO-d6) ppm 171.4, 159.1, 148.1, 146.1,
141.0, 140.6,131.5, 129.2, 128.0, 123.9, 116.7, 1
12.2, 86.4,50.0, 48.8, 27.2, 21.9(一致する２つの
帯）
【００３７】分析値：C19H17I2NS2O4 計算値：C,35.58;H,2.67;N,2.18 実測値：C,35.52;H,2.75;N,2.06
【００３８】例３．１−（ω−スルホナトエチル）−２
−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリ
ル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン ３，５−ジヨード−４−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド
（３．７３g 、１０ミリミル）、１−（ω−スルホナト
エチル）−２，３，３−トリメチル−インドレニウム臭
化物（US 2,503,776; CA 44; P57381)（１６．６１g ；
１９mmole)及びピペリジン（２．０ml）のＥｔＯＨ／Ｍ
ｅＯＨ（２：１v/v)（６０ml）中の混合物を、不活性ガ
ス雰囲気の下に維持した。この溶液を４時間還流し、室
温まで冷却し、真空下で蒸発させ、褐色残留物を得た。
この褐色残留物をＭｅＯＨ（２〜３ml）中に溶解し、こ
の溶液をトリエチルアミン（ＮＥｔ3)（２ml）で処理
し、ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3(１：４v/v)の展開溶剤を用い
るシリカゲルクロマトグラフィに付した。紫色の生成物
の帯を含む画分を集め、真空下に溶媒を蒸発させた。こ
の粗製生成物をＥｔＯＨ（１０ml）中に溶解し、ｉ−Ｐ
ｒＯＨ中の充分な１．９３M のＨＣｌで酸性化し、紫か
ら黄色への色変化させた。この溶液から溶媒を蒸発させ
た。次に、残留物をＥｔＯＨ／ヘキサン（３：１v/v)中
に溶解し、結晶化するまで冷却した。分離した結晶質の
固体をろ過により収集した。これらの固体を氷冷のＥｔ
ＯＨで、次にＥｔＯＨ／ヘキサンで洗浄した。残留固体
を真空乾燥して１−（ω−スルホナトエチル）−２−
（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリル）
−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン（０．８
０g；１２．８％）を得た。ＥｔＯＨ／ＨＯＡｃからの
再結晶化により、暗赤褐色粉末として分析的に純粋な化
合物を得た。この化合物を合成するための上記の方法
は、一般的に図１の反応Ｃとして例示されている。この
化合物を同定する分光分析データを、下記に示した。
−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリ
ル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン ３，５−ジヨード−４−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド
（３．７３g 、１０ミリミル）、１−（ω−スルホナト
エチル）−２，３，３−トリメチル−インドレニウム臭
化物（US 2,503,776; CA 44; P57381)（１６．６１g ；
１９mmole)及びピペリジン（２．０ml）のＥｔＯＨ／Ｍ
ｅＯＨ（２：１v/v)（６０ml）中の混合物を、不活性ガ
ス雰囲気の下に維持した。この溶液を４時間還流し、室
温まで冷却し、真空下で蒸発させ、褐色残留物を得た。
この褐色残留物をＭｅＯＨ（２〜３ml）中に溶解し、こ
の溶液をトリエチルアミン（ＮＥｔ3)（２ml）で処理
し、ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3(１：４v/v)の展開溶剤を用い
るシリカゲルクロマトグラフィに付した。紫色の生成物
の帯を含む画分を集め、真空下に溶媒を蒸発させた。こ
の粗製生成物をＥｔＯＨ（１０ml）中に溶解し、ｉ−Ｐ
ｒＯＨ中の充分な１．９３M のＨＣｌで酸性化し、紫か
ら黄色への色変化させた。この溶液から溶媒を蒸発させ
た。次に、残留物をＥｔＯＨ／ヘキサン（３：１v/v)中
に溶解し、結晶化するまで冷却した。分離した結晶質の
固体をろ過により収集した。これらの固体を氷冷のＥｔ
ＯＨで、次にＥｔＯＨ／ヘキサンで洗浄した。残留固体
を真空乾燥して１−（ω−スルホナトエチル）−２−
（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリル）
−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン（０．８
０g；１２．８％）を得た。ＥｔＯＨ／ＨＯＡｃからの
再結晶化により、暗赤褐色粉末として分析的に純粋な化
合物を得た。この化合物を合成するための上記の方法
は、一般的に図１の反応Ｃとして例示されている。この
化合物を同定する分光分析データを、下記に示した。
【００３９】IR (KBr) cm-2 3444, 2992, 1608, 1574,
1530, 1469, 1399, 1371, 1327,1296, 1282, 1230, 12
12, 1178, 1141, 1086, 1033, 9641 H NMR (DMSO-d6)δ 8.58(s, 2H), 8.18(d, J=16.3Hz,
1H), 7.69-7.88(m,4H), 7.51-7.62(m, 2H), 4.82(t, J
=5.7Hz, 2H), 3.04(t, J=6.1Hz, 2H), 1.73(s, 6H);13 C NMR (DMSO-d6) ppm 182.4, 160.0, 149.1, 143.6,
141.4, 140.7,130.5, 128.8, 122.8, 115.1, 112.9, 8
7.3, 52.0,47.7, 43.7, 25.4 （一致する４つの帯）
1530, 1469, 1399, 1371, 1327,1296, 1282, 1230, 12
12, 1178, 1141, 1086, 1033, 9641 H NMR (DMSO-d6)δ 8.58(s, 2H), 8.18(d, J=16.3Hz,
1H), 7.69-7.88(m,4H), 7.51-7.62(m, 2H), 4.82(t, J
=5.7Hz, 2H), 3.04(t, J=6.1Hz, 2H), 1.73(s, 6H);13 C NMR (DMSO-d6) ppm 182.4, 160.0, 149.1, 143.6,
141.4, 140.7,130.5, 128.8, 122.8, 115.1, 112.9, 8
7.3, 52.0,47.7, 43.7, 25.4 （一致する４つの帯）
【００４０】分析値：C20H19I2NO4S・1/2 EtOH 計算値：C,39.02;H,3.43;N,2.16 実測値：C,39.25;H,3.47;N,2.25
【００４１】例４．１−（ω−スルホナトプロピル）−
２−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリ
ル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン（Ｓ
ＰＤＩＢ） ３，５−ジヨード−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
（３．７３g 、１１０mmole)、１−（ω−スルホナトプ
ロピル）−２，３，３−トリメチルインドレニウム・ベ
タイン（３．６５g 、１３mmole)及びピペリジン（０．
８ml）のＥｔＯＨ（約５０ml）中の混合物を不活性ガス
雰囲気下に維持した。この溶液を２．７５時間還流し、
次に、氷浴で冷却した。この溶液をｉ−ＰｒＯＨ（５．
０ml）中の１．９３M のＨＣｌで酸性化した。分離した
暗黒色のタールをろ過により収集し、沸とうしたＡｃＯ
Ｈと共に粉砕した。粉砕物を合わせ、真空下に蒸発乾燥
し、ＡｃＯＨ（２０ml）中に溶解し、結晶化させた。分
離した固体をろ過により収集し、ＡｃＯＨで洗浄し、真
空乾燥し、オレンジ色粉末として、１−（ω−スルホナ
トプロピル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′−５′−
ジヨードスチリル）−３，３−ジメチルインドレニウム
・ベタイン（４．３７g 、６８％）を得た。ＡｃＯＨか
ら再結晶し、分析的に純粋な化合物を得た。この化合物
を合成するための上記の方法は、一般的に図１の反応Ｄ
として例示されている。
２−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリ
ル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン（Ｓ
ＰＤＩＢ） ３，５−ジヨード−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
（３．７３g 、１１０mmole)、１−（ω−スルホナトプ
ロピル）−２，３，３−トリメチルインドレニウム・ベ
タイン（３．６５g 、１３mmole)及びピペリジン（０．
８ml）のＥｔＯＨ（約５０ml）中の混合物を不活性ガス
雰囲気下に維持した。この溶液を２．７５時間還流し、
次に、氷浴で冷却した。この溶液をｉ−ＰｒＯＨ（５．
０ml）中の１．９３M のＨＣｌで酸性化した。分離した
暗黒色のタールをろ過により収集し、沸とうしたＡｃＯ
Ｈと共に粉砕した。粉砕物を合わせ、真空下に蒸発乾燥
し、ＡｃＯＨ（２０ml）中に溶解し、結晶化させた。分
離した固体をろ過により収集し、ＡｃＯＨで洗浄し、真
空乾燥し、オレンジ色粉末として、１−（ω−スルホナ
トプロピル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′−５′−
ジヨードスチリル）−３，３−ジメチルインドレニウム
・ベタイン（４．３７g 、６８％）を得た。ＡｃＯＨか
ら再結晶し、分析的に純粋な化合物を得た。この化合物
を合成するための上記の方法は、一般的に図１の反応Ｄ
として例示されている。
【００４２】化合物を同定する分光分析データを、下記
に示した。
に示した。
【００４３】IR (KBr) cm-1 1604, 1572, 1526, 1468,
1402, 1376, 1274, 1214, 1173,766, 722,1 H NMR (DMSO-d6)δ 8.71(s, 2H), 8.21(d, J=15.5Hz,
1H), 7.92(d, J-7.2Hz, 1H), 7.81(d, J=6.6Hz, 1H),
7.50-7.65(m, 3H),4.72-4.82(v. br. m, 2H), 3.57(v.
br. s, 1H), 2.61(t, J=6.5Hz, 2H), 2.07-2.20(v. br.
m, 2H), 1.76(s,6H) 13 C NMR (DMSO-d6) ppm 181.3, 160.6, 151.1, 143.7,
142.0, 140.9,130.0, 129.1, 122.9, 115.0, 110.7, 8
7.4, 52.0,47.3, 45.4, 25.7, 24.7 （一致する４つの
帯）
1402, 1376, 1274, 1214, 1173,766, 722,1 H NMR (DMSO-d6)δ 8.71(s, 2H), 8.21(d, J=15.5Hz,
1H), 7.92(d, J-7.2Hz, 1H), 7.81(d, J=6.6Hz, 1H),
7.50-7.65(m, 3H),4.72-4.82(v. br. m, 2H), 3.57(v.
br. s, 1H), 2.61(t, J=6.5Hz, 2H), 2.07-2.20(v. br.
m, 2H), 1.76(s,6H) 13 C NMR (DMSO-d6) ppm 181.3, 160.6, 151.1, 143.7,
142.0, 140.9,130.0, 129.1, 122.9, 115.0, 110.7, 8
7.4, 52.0,47.3, 45.4, 25.7, 24.7 （一致する４つの
帯）
【００４４】分析値：C21H21I2NO4S・1/2 H2O 計算値：C,39.02;H,3.43;N,2.17 実測値：C,39.01;H,3.46;N,1.94
【００４５】例５．１−（ω−スルホナトブチル）−２
−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリ
ル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン ３，５−ジヨード−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
（１．８７g 、５mmole)、１−（ω−スルホナトブチ
ル）−２，３，３−トリメチルインドレニウム・ベタイ
ン（R.B. Mujumdar 他、Cytometry 10, 11-9 (1989））
（２．３６g 、８mmole)及びピペリジン（０．４ml）の
ＥｔＯＨ（３５ml）中の混合物を、不活性ガス雰囲気下
に維持した。この溶液を２．５時間還流し、次に、室温
まで冷却した。この反応混合物をｉ−ＰｒＯＨ中の過剰
の１．９３M のＨＣｌで酸性化し、真空下に溶媒を蒸発
させ、残留物を得た。この残留物をＥｔＯＨ（１０ml）
中に溶解した。冷蔵庫内に放置すると、固体が混合物か
ら分離した。この固体をろ過により収集し、氷冷のＥｔ
ＯＨ／ヘキサン（３：１v/v)で洗浄し、真空乾燥し、オ
レンジ色固体（３．３６g)を得た。この粗生成物を、沸
とうしたＥｔＯＨ（約３０ml）中に溶解したが、直ちに
再沈殿した。さらに沸とうしたＥｔＯＨ（約２２０ml）
を加えたが、固体は再溶解しなかった。氷冷した後、固
体をろ過により収集し、ＥｔＯＨで洗浄し、真空乾燥
し、オレンジ色粉末として、分析的に純粋な１−（ω−
スルホナトブチル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′，
５′−ジヨードスチリル）−３，３−ジメチルインドレ
ニウム・ベタイン（１．５４g 、４７％）を得た。この
化合物を合成するための上記の方法は、一般的に図１の
反応Ｅとして例示されている。化合物を同定する分光分
析データを、下記に示した。
−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリ
ル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン ３，５−ジヨード−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
（１．８７g 、５mmole)、１−（ω−スルホナトブチ
ル）−２，３，３−トリメチルインドレニウム・ベタイ
ン（R.B. Mujumdar 他、Cytometry 10, 11-9 (1989））
（２．３６g 、８mmole)及びピペリジン（０．４ml）の
ＥｔＯＨ（３５ml）中の混合物を、不活性ガス雰囲気下
に維持した。この溶液を２．５時間還流し、次に、室温
まで冷却した。この反応混合物をｉ−ＰｒＯＨ中の過剰
の１．９３M のＨＣｌで酸性化し、真空下に溶媒を蒸発
させ、残留物を得た。この残留物をＥｔＯＨ（１０ml）
中に溶解した。冷蔵庫内に放置すると、固体が混合物か
ら分離した。この固体をろ過により収集し、氷冷のＥｔ
ＯＨ／ヘキサン（３：１v/v)で洗浄し、真空乾燥し、オ
レンジ色固体（３．３６g)を得た。この粗生成物を、沸
とうしたＥｔＯＨ（約３０ml）中に溶解したが、直ちに
再沈殿した。さらに沸とうしたＥｔＯＨ（約２２０ml）
を加えたが、固体は再溶解しなかった。氷冷した後、固
体をろ過により収集し、ＥｔＯＨで洗浄し、真空乾燥
し、オレンジ色粉末として、分析的に純粋な１−（ω−
スルホナトブチル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′，
５′−ジヨードスチリル）−３，３−ジメチルインドレ
ニウム・ベタイン（１．５４g 、４７％）を得た。この
化合物を合成するための上記の方法は、一般的に図１の
反応Ｅとして例示されている。化合物を同定する分光分
析データを、下記に示した。
【００４６】IR (KBr) cm-1 2977, 1605, 1572, 1525,
1469, 1401, 1372, 1308, 1271,1214, 1182, 1120, 10
34, 769, 714 1 H NMR (DMSO-d6)δ 8.71(s, 2H), 8.24(d, J=16.0Hz,
1H), 7.90-7.97(m,1H), 7.81-7.87(m, 1H), 7.53-7.64
(m, 3H), 4.68(t,J=7.2Hz, 2H), 2.45-2.55(m, 2H), 1.
89-2.00(m, 2H),1.75-1.83(m, 2H), 1.76(s, 6H)13 C NMR (DMSO-d6) ppm 181.3, 160.5, 151.1, 143.7,
141.9, 140.8,130.0 , 129.0, 122.9, 115.2, 110.7,
87.9, 52.0,50.3, 46.2, 27.2, 25.8, 22.3(一致する４
つの帯）
1469, 1401, 1372, 1308, 1271,1214, 1182, 1120, 10
34, 769, 714 1 H NMR (DMSO-d6)δ 8.71(s, 2H), 8.24(d, J=16.0Hz,
1H), 7.90-7.97(m,1H), 7.81-7.87(m, 1H), 7.53-7.64
(m, 3H), 4.68(t,J=7.2Hz, 2H), 2.45-2.55(m, 2H), 1.
89-2.00(m, 2H),1.75-1.83(m, 2H), 1.76(s, 6H)13 C NMR (DMSO-d6) ppm 181.3, 160.5, 151.1, 143.7,
141.9, 140.8,130.0 , 129.0, 122.9, 115.2, 110.7,
87.9, 52.0,50.3, 46.2, 27.2, 25.8, 22.3(一致する４
つの帯）
【００４７】分析値：C22H23I2NO4S 計算値：C,40.57;H,3.56;N,2.15 実測値：C,40.59;H,3.50;N,1.99
【００４８】例６．１−（ｎ−ブチル）−２−（４′−
ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリル）−３，３
−ジメチルインドレニウム・ヨージド ３，５−ジヨード−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
（３．７３、１０mmol)、１−（ｎ−ブチル）−２，
３，３−トリメチルインドレニウム・ヨージド（D.P. M
aisuradze 他、Soobschch. Akad. Nauk Gruz, SSR 50,
77-82 (1968)； CA69: 106526r)（４．４６g 、１３mmo
l）及びピペリジン（０．８ml）のＥｔＯＨ（４０ml）
中の混合物を不活性ガス雰囲気下に維持した。この溶液
を１時間還流し、室温まで冷却した。この溶液を真空下
に乾燥、蒸発し、残留物を得た。この残留物をＥｔＯＨ
（１０ml）中で溶解し、ｉ−ＰｒＯＨ（３．０ml）中の
１．９３M のＨＣｌで処理した。その後、この溶液から
溶媒を再び真空下に蒸発させ、残留物を得た。この残留
物をＥｔＯＨ（４ml）中に溶解した。この溶液を冷蔵
し、自然に結晶を形成させた。分離した結晶状の固体を
ろ過により収集し、氷冷のＥｔＯＨで洗浄し、真空乾燥
し、粗製の１−（ｎ−ブチル）−２−（４′−ヒドロキ
シ−３′，５′−ジヨードスチリル）−３，３−ジメチ
ルインドレニウム・ヨージドを得た。この粗製物を温Ｅ
ｔＯＨ（６０ml）に溶解し、ろ紙を通してろ過し、真空
中で約３０mlまで濃縮した。この溶液を結晶が生成する
まで放置した。分離した結晶状の固体を上記のように収
集し、洗浄し、乾燥し、明るいオレンジ色粉末として分
析的に純粋な１−（ｎ−ブチル）−２−（４′−ヒドロ
キシ−３′，５′−ジヨードスチリル）−３，３−ジメ
チルインドレニウム・ヨージド（３．９０g 、５６％）
を得た。この化合物を合成するための上記の方法は、一
般的に図１の反応Ｆとして例示されている。この化合物
を同定する分光分析データを、下記に示した。
ヒドロキシ−３′，５′−ジヨードスチリル）−３，３
−ジメチルインドレニウム・ヨージド ３，５−ジヨード−４−ヒドロキシベンズアルデヒド
（３．７３、１０mmol)、１−（ｎ−ブチル）−２，
３，３−トリメチルインドレニウム・ヨージド（D.P. M
aisuradze 他、Soobschch. Akad. Nauk Gruz, SSR 50,
77-82 (1968)； CA69: 106526r)（４．４６g 、１３mmo
l）及びピペリジン（０．８ml）のＥｔＯＨ（４０ml）
中の混合物を不活性ガス雰囲気下に維持した。この溶液
を１時間還流し、室温まで冷却した。この溶液を真空下
に乾燥、蒸発し、残留物を得た。この残留物をＥｔＯＨ
（１０ml）中で溶解し、ｉ−ＰｒＯＨ（３．０ml）中の
１．９３M のＨＣｌで処理した。その後、この溶液から
溶媒を再び真空下に蒸発させ、残留物を得た。この残留
物をＥｔＯＨ（４ml）中に溶解した。この溶液を冷蔵
し、自然に結晶を形成させた。分離した結晶状の固体を
ろ過により収集し、氷冷のＥｔＯＨで洗浄し、真空乾燥
し、粗製の１−（ｎ−ブチル）−２−（４′−ヒドロキ
シ−３′，５′−ジヨードスチリル）−３，３−ジメチ
ルインドレニウム・ヨージドを得た。この粗製物を温Ｅ
ｔＯＨ（６０ml）に溶解し、ろ紙を通してろ過し、真空
中で約３０mlまで濃縮した。この溶液を結晶が生成する
まで放置した。分離した結晶状の固体を上記のように収
集し、洗浄し、乾燥し、明るいオレンジ色粉末として分
析的に純粋な１−（ｎ−ブチル）−２−（４′−ヒドロ
キシ−３′，５′−ジヨードスチリル）−３，３−ジメ
チルインドレニウム・ヨージド（３．９０g 、５６％）
を得た。この化合物を合成するための上記の方法は、一
般的に図１の反応Ｆとして例示されている。この化合物
を同定する分光分析データを、下記に示した。
【００４９】IR (KBr) cm-1 3361, 2979, 1605, 1574,
1530, 1463, 1402, 1372, 1320,1250, 1213, 1198, 11
361 H NMR (DMSO-d6)δ 8.63(s, 2H), 8.23(d, J=15.9Hz,
1H), 7.39-7.87(m,6H), 4.65(t, J=7.0, 2H), 1.73-1.
85(m, 2H), 1.76(s,6H), 1.34-1.48(m, 2H), 0.93(t, J
=7.3Hz, 3H)13 C NMR (DMSO-d6) ppm 181.2, 160.7, 150.9, 143.7,
141.7, 140.7,129.8, 129.0, 123.0, 115.0, 110.4, 8
7.7, 52.0,46.1, 30.4, 25.8, 19.2, 13.7(一致する４
つの帯）
1530, 1463, 1402, 1372, 1320,1250, 1213, 1198, 11
361 H NMR (DMSO-d6)δ 8.63(s, 2H), 8.23(d, J=15.9Hz,
1H), 7.39-7.87(m,6H), 4.65(t, J=7.0, 2H), 1.73-1.
85(m, 2H), 1.76(s,6H), 1.34-1.48(m, 2H), 0.93(t, J
=7.3Hz, 3H)13 C NMR (DMSO-d6) ppm 181.2, 160.7, 150.9, 143.7,
141.7, 140.7,129.8, 129.0, 123.0, 115.0, 110.4, 8
7.7, 52.0,46.1, 30.4, 25.8, 19.2, 13.7(一致する４
つの帯）
【００５０】分析値：C22H24I3NO・EtOH 計算値：C,38.68;H,4.06;N,1.89 実測値：C,38.55;H,3.96;N,1.91
【００５１】例７．ヒト血清アルブミン分析における成
績 本発明のメロシアニンタンパク質誤差指示薬化合物の、
液体試料中のタンパク質レベルの測定のための液体分析
における、有効性を、表１に示した。化合物のpKa より
少なくとも０．５単位で低いpHにおいて２００mM−２５
０mMのＮａ+ 又はＫ+ のクエン酸塩緩衝液中にこの化合
物を溶解し、以下に列挙した波長でその吸光度を測定し
た。次に、溶液を充分なヒト血清アルブミンで処理して
アルブミンの濃度を１００mg/dl にし、再び吸光度を測
定した。測定された吸光度の増大（△abs)は、存在する
アルブミンの量に比例し、タンパク質を測定するための
染料の相対的感度を表わすものである。
績 本発明のメロシアニンタンパク質誤差指示薬化合物の、
液体試料中のタンパク質レベルの測定のための液体分析
における、有効性を、表１に示した。化合物のpKa より
少なくとも０．５単位で低いpHにおいて２００mM−２５
０mMのＮａ+ 又はＫ+ のクエン酸塩緩衝液中にこの化合
物を溶解し、以下に列挙した波長でその吸光度を測定し
た。次に、溶液を充分なヒト血清アルブミンで処理して
アルブミンの濃度を１００mg/dl にし、再び吸光度を測
定した。測定された吸光度の増大（△abs)は、存在する
アルブミンの量に比例し、タンパク質を測定するための
染料の相対的感度を表わすものである。
【００５２】
【表１】
【００５３】化合物Ａは、１−（ω−スルホナトプロピ
ル）−２−（４′ヒドロキシ−３′，５′−ジブロモス
チリル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン
である。
ル）−２−（４′ヒドロキシ−３′，５′−ジブロモス
チリル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイン
である。
【００５４】化合物Ｂは、１−（ω−スルホナトブチ
ル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨード
スチリル）ベンゾチアゾリウム・ベタインである。
ル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨード
スチリル）ベンゾチアゾリウム・ベタインである。
【００５５】化合物Ｃは、１−（ω−スルホナトエチ
ル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨード
スチリル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイ
ンである。
ル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨード
スチリル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイ
ンである。
【００５６】化合物Ｄは、１−（ω−スルホナトプロピ
ル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′−５′−ジヨード
スチリル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイ
ンである。
ル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′−５′−ジヨード
スチリル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイ
ンである。
【００５７】化合物Ｅは、１−（ω−スルホナトブチ
ル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨード
スチリル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイ
ンである。
ル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′，５′−ジヨード
スチリル）−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタイ
ンである。
【００５８】例８：試薬片の調製 本発明に論述されている分析用タンパク質試薬片の調製
の１つの方法が、以下に示されている。ここで記載され
ている方法は、タンパク質試薬試験片を大量生産するた
めの連続的方法である。
の１つの方法が、以下に示されている。ここで記載され
ている方法は、タンパク質試薬試験片を大量生産するた
めの連続的方法である。
【００５９】この方法によると、一分あたり約４フィー
トの好ましい速度で、薄い吸収性の紙片がラインを通し
て移動させられる。好ましい紙の１つとしては、Ｅ＆Ｄ
２３７（Ahlstrom Filtration, Inc., Mount Holley Sp
rings, PA, U.S.A.)がある。この紙を、エタノール中に
溶解したメロシアニンタンパク質誤差指示薬ＳＰＤＩＢ
を含むpH２．５の緩衝剤浴中に浸漬する。好ましい一実
施態様によると、この浴は、約０．０３乃至約０．０８
mMのＳＰＤＩＢ、０．５M のクエン酸カリウム緩衝液及
び２０％のエタノールを含む。次に、試験片を、一分あ
たり４フィートの速度で水１インチの空気圧下で６０℃
の温度の乾燥機の中を通す。次に試験片を切断し包装す
る。
トの好ましい速度で、薄い吸収性の紙片がラインを通し
て移動させられる。好ましい紙の１つとしては、Ｅ＆Ｄ
２３７（Ahlstrom Filtration, Inc., Mount Holley Sp
rings, PA, U.S.A.)がある。この紙を、エタノール中に
溶解したメロシアニンタンパク質誤差指示薬ＳＰＤＩＢ
を含むpH２．５の緩衝剤浴中に浸漬する。好ましい一実
施態様によると、この浴は、約０．０３乃至約０．０８
mMのＳＰＤＩＢ、０．５M のクエン酸カリウム緩衝液及
び２０％のエタノールを含む。次に、試験片を、一分あ
たり４フィートの速度で水１インチの空気圧下で６０℃
の温度の乾燥機の中を通す。次に試験片を切断し包装す
る。
【００６０】例９．ＳＰＤＩＢを含む試薬片の用量応答 免疫学的検定によりアルブミンが全く無いことが示され
ている緩衝された液体試料（５０mMのクエン酸カリウ
ム、pH２．５）を、Pentexヒト血清アルブミン（ＨＳ
Ａ）(Miles, Inc., Elkhart, Indiana）を用いてさまざ
まな臨床的に有意なレベルに関連させた。Clinitek２０
０器具（Miles, Inc., Elkhart, Indiana)を用いて、
０．３mMＳＰＤＩＢを含む分析試験片によるタンパク質
測定を行なった。
ている緩衝された液体試料（５０mMのクエン酸カリウ
ム、pH２．５）を、Pentexヒト血清アルブミン（ＨＳ
Ａ）(Miles, Inc., Elkhart, Indiana）を用いてさまざ
まな臨床的に有意なレベルに関連させた。Clinitek２０
０器具（Miles, Inc., Elkhart, Indiana)を用いて、
０．３mMＳＰＤＩＢを含む分析試験片によるタンパク質
測定を行なった。
【００６１】図２に示されているように、分析結果をア
ルブミンレベル間のデルタK/S 単位で表現した。K/S は
以下の式から計算される： Ｋ／Ｓ＝（１−Ｒ）2 ／２Ｒ
ルブミンレベル間のデルタK/S 単位で表現した。K/S は
以下の式から計算される： Ｋ／Ｓ＝（１−Ｒ）2 ／２Ｒ
【００６２】なお、式中、Ｒは試験装置からの反射率の
部分であり、Ｋは定数であり、Ｓは特定の反射媒質の光
散乱係数である。上記の式は、周知のKubelka-Munk方程
式の簡略形である(Gustav Kortum「Reflectance Spectr
oscopy」pp. 106 〜11, Springer Verlas, New York
（１９６９年）参照）。K/S は２５秒(sec.)で測定され
た。
部分であり、Ｋは定数であり、Ｓは特定の反射媒質の光
散乱係数である。上記の式は、周知のKubelka-Munk方程
式の簡略形である(Gustav Kortum「Reflectance Spectr
oscopy」pp. 106 〜11, Springer Verlas, New York
（１９６９年）参照）。K/S は２５秒(sec.)で測定され
た。
【００６３】上記の試薬片を、異なるレベルのタンパク
質に対するその応答について分析した。この研究の結果
は図２に要約されている。図２に示されているように、
本発明の試験片は広範囲のタンパク質濃度に対して感応
性をもっていた。
質に対するその応答について分析した。この研究の結果
は図２に要約されている。図２に示されているように、
本発明の試験片は広範囲のタンパク質濃度に対して感応
性をもっていた。
【００６４】さらに、本発明においては、タンパク質の
レベル間の分離が顕著に認められた。
レベル間の分離が顕著に認められた。
【００６５】本発明は、さまざまな修正及び変形態様が
可能であるものの、一例としてその特定の実施態様を示
しここで詳細に記述してきた。しかしながら、本発明を
ここで開示した特定の態様に制限しようという意図は全
く無く、逆に、本発明は、添付のクレームにより規定さ
れているような本発明の意図及び範囲の中に入る全ての
修正、同等物及び代替案を網羅するものである。
可能であるものの、一例としてその特定の実施態様を示
しここで詳細に記述してきた。しかしながら、本発明を
ここで開示した特定の態様に制限しようという意図は全
く無く、逆に、本発明は、添付のクレームにより規定さ
れているような本発明の意図及び範囲の中に入る全ての
修正、同等物及び代替案を網羅するものである。
【図１】メロシアニンタンパク質誤差指示薬の合成方法
の図式図である。
の図式図である。
【図２】図１つづき。
【図３】pH２．５で０．３mMのＳＰＤＩＢ［１−（ω−
スルホナトプロピル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′
−５′−ジヨードスチリル）−３，３−ジメチルインド
レニウム・ベタイン］を含浸させた分析試験片のアルブ
ミンに対する用量応答曲線である。
スルホナトプロピル）−２−（４′−ヒドロキシ−３′
−５′−ジヨードスチリル）−３，３−ジメチルインド
レニウム・ベタイン］を含浸させた分析試験片のアルブ
ミンに対する用量応答曲線である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 31/00 Ｖ 7906−2Ｊ 31/22 １２２ 9015−2Ｊ
Claims (10)
- 【請求項１】 式： 【化１】 ［式中、ｍは１から６までの整数であり、Ｑは臭素、ヨ
ウ素又は塩素であり、Ｒは硫黄、セレン、酸素、又は基
＝Ｃ（Ｃn Ｈ2n+1)2（式中、ｎは１から６までの整数で
ある）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -又は水素である］で示さ
れるメロシアニンタンパク質誤差指示薬化合物。 - 【請求項２】 １−（ω−スルホナトプロピル）−２−
（４´−ヒドロキシ−３´，５´−ジヨードスチリル）
−３，３−ジメチルインドレニウム・ベタインであるメ
ロシアニンタンパク質誤差指示薬化合物。 - 【請求項３】 メロシアニンタンパク質誤差指示薬を含
浸させた吸収性担体を含む液体試料中のタンパク質検出
用分析試験片。 - 【請求項４】 式： 【化２】 ［式中、ｍは１から６までの整数であり、Ｑは臭素、ヨ
ウ素、又は塩素であり、Ｒは硫黄、セレン、酸素、又は
基＝Ｃ（Ｃn Ｈ2n+1)2（式中、ｎは１から６までの整数
である）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -又は水素である］で示
されるメロシアニンタンパク質誤差指示薬化合物を含浸
させた吸収性担体を含む液体試料中のタンパク質検出用
分析試験片。 - 【請求項５】 ｍが３又は４の整数であり、Ｑは臭素又
はヨウ素であり、Ｒは基＝Ｃ（Ｃn Ｈ2n+1)2（式中、ｎ
は１から３までの整数である）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -
である、請求項４記載の分析試験片。 - 【請求項６】 ｍが整数３であり、Ｒは基＝Ｃ（ＣＨ3)
2 である、請求項４記載の分析試験片。 - 【請求項７】 液体試料中のタンパク質を検出する方法
であって、 ａ）：式 【化３】 ［式中、ｍは１から６までの整数であり、Ｑは臭素、ヨ
ウ素又は塩素であり、Ｒは硫黄、セレン、酸素又は基＝
Ｃ（Ｃn Ｈ2n+1)2（式中、ｎは１から６までの整数であ
る）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -又は水素である］で示され
るメロシアニンタンパク質誤差指示薬化合物を含浸させ
た吸収性担体を含む分析試験片を液体試料で湿らせる工
程、そして ｂ）液体試料中のタンパク質を表示する、試験片のいか
なる色変化をも観察し、記録する工程を含む、検出方
法。 - 【請求項８】 メロシアニンタンパク質誤差指示薬化合
物が１−（ω−スルホナトプロピル）−２−（４´−ヒ
ドロキシ−３´，５´−ジヨードスチリル）−３，３−
ジメチルインドレニウム・ベタインである、請求項７記
載の方法。 - 【請求項９】 試料中のタンパク質を検出する方法であ
って、 ａ）式 【化４】［式中、ｍは１から６までの整数であり、Ｑは
臭素、ヨウ素又は塩素であり、Ｒは硫黄、セレン、酸素
又は基＝Ｃ（Ｃn Ｈ2n+1)2（式中、ｎは１から６までの
整数である）であり、Ｔは基−ＳＯ3 -又は水素である］
で示されるメロシアニンタンパク質誤差指示薬化合物を
試料に加える工程、そして ｂ）試料中のタンパク質を表示する、いかなる色変化を
も観察し、記録する工程を含む、検出方法。 - 【請求項１０】 メロシアニンタンパク質誤差指示薬化
合物が１−（ω−スルホナトプロピル）−２−（４´−
ヒドロキシ−３´，５´−ジヨードスチリル）−３，３
−ジメチルインドレニウム・ベタインである、請求項９
記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/710,955 US5264589A (en) | 1991-06-06 | 1991-06-06 | Merocyanine protein error indicators |
| US710955 | 1991-06-06 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05223825A true JPH05223825A (ja) | 1993-09-03 |
| JP3153831B2 JP3153831B2 (ja) | 2001-04-09 |
Family
ID=24856197
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17004092A Expired - Fee Related JP3153831B2 (ja) | 1991-06-06 | 1992-06-05 | メロシアニンタンパク質誤差指示薬 |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5264589A (ja) |
| EP (1) | EP0517055B1 (ja) |
| JP (1) | JP3153831B2 (ja) |
| KR (1) | KR100231079B1 (ja) |
| AT (1) | ATE143145T1 (ja) |
| AU (1) | AU646571B2 (ja) |
| CA (1) | CA2068002A1 (ja) |
| DE (1) | DE69213827T2 (ja) |
| ES (1) | ES2092596T3 (ja) |
| FI (1) | FI922587A (ja) |
| GR (1) | GR3021141T3 (ja) |
| IE (1) | IE921839A1 (ja) |
| IL (1) | IL101665A (ja) |
| NO (1) | NO922002L (ja) |
| NZ (1) | NZ242732A (ja) |
| TW (1) | TW198023B (ja) |
| ZA (1) | ZA923805B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008096437A (ja) * | 1995-05-19 | 2008-04-24 | Molecular Probes Inc | メロシアニン染料タンパク質染色 |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0517050T3 (ja) * | 1991-06-06 | 1997-03-03 | Bayer Ag | |
| GB9312853D0 (en) * | 1993-06-22 | 1993-08-04 | Euro Celtique Sa | Chemical compounds |
| US5922751A (en) * | 1994-06-24 | 1999-07-13 | Euro-Celtique, S.A. | Aryl pyrazole compound for inhibiting phosphodiesterase IV and methods of using same |
| US5591776A (en) * | 1994-06-24 | 1997-01-07 | Euro-Celtique, S.A. | Pheynl or benzyl-substituted rolipram-based compounds for and method of inhibiting phosphodiesterase IV |
| US5665737B1 (en) * | 1994-10-12 | 1999-02-16 | Euro Celtique Sa | Substituted benzoxazoles |
| US6372770B1 (en) | 1994-10-12 | 2002-04-16 | Euro-Celtique, S.A. | Benzoxazoles |
| DE69531555T2 (de) * | 1994-12-13 | 2004-06-17 | Euroceltique S.A. | Dreifachsubstituierte thioxanthine |
| EP0814809B1 (en) * | 1994-12-13 | 2003-08-13 | Euroceltique S.A. | Aryl thioxanthines |
| US6025361A (en) * | 1994-12-13 | 2000-02-15 | Euro-Celtique, S.A. | Trisubstituted thioxanthines |
| US6166041A (en) * | 1995-10-11 | 2000-12-26 | Euro-Celtique, S.A. | 2-heteroaryl and 2-heterocyclic benzoxazoles as PDE IV inhibitors for the treatment of asthma |
| US6075016A (en) * | 1996-04-10 | 2000-06-13 | Euro-Celtique S.A. | 6,5-fused aromatic ring systems having enhanced phosphodiesterase IV inhibitory activity |
| US5864037A (en) | 1996-06-06 | 1999-01-26 | Euro-Celtique, S.A. | Methods for the synthesis of chemical compounds having PDE-IV inhibitory activity |
| US20030070927A1 (en) * | 1996-07-24 | 2003-04-17 | Merchant Mark E. | Reagents and methods for fluorescent analysis of serum proteins |
| US5744473A (en) * | 1996-09-16 | 1998-04-28 | Euro-Celtique, S.A. | PDE IV inhibitors: "bis-compounds" |
| EP1096248B1 (en) | 1999-10-28 | 2007-01-10 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Method for measuring concentration of a solution |
| JP2001174457A (ja) * | 1999-12-21 | 2001-06-29 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 溶液濃度計測方法、溶液濃度計測装置及び尿検査方法。 |
| JP2001249134A (ja) * | 1999-12-28 | 2001-09-14 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | タンパク質濃度計測用試薬、これを用いたタンパク質濃度計測方法および尿検査方法 |
| US7776529B2 (en) | 2003-12-05 | 2010-08-17 | Life Technologies Corporation | Methine-substituted cyanine dye compounds |
| US7598390B2 (en) | 2005-05-11 | 2009-10-06 | Life Technologies Corporation | Fluorescent chemical compounds having high selectivity for double stranded DNA, and methods for their use |
| US7485466B2 (en) * | 2005-05-31 | 2009-02-03 | The Clorox Company | Protein detection system |
| CN106349146A (zh) * | 2016-08-11 | 2017-01-25 | 潘忠宁 | 一种新型光致变色材料的合成方法 |
| CN111004166A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-04-14 | 苏州络森生物科技有限公司 | 一种spdib的制备方法 |
| CN112876405B (zh) * | 2021-01-18 | 2022-08-02 | 南开大学 | 一类内质网靶向激活型光敏剂的制备方法及应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2102175A1 (de) * | 1971-01-18 | 1972-07-27 | Agfa Gevaert Ag | Sensibilisierte elektrofotografische Schichten |
| DE2510633C3 (de) * | 1975-03-12 | 1978-07-13 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Eiweiß in Körperflüssigkeiten und dafür geeignete Indikatorfarbstoffe |
| US4239495A (en) * | 1979-02-12 | 1980-12-16 | Sherwood Medical Industries Inc. | Determination of protein |
| US4366241A (en) * | 1980-08-07 | 1982-12-28 | Syva Company | Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays |
| JPS57200862A (en) * | 1981-06-05 | 1982-12-09 | Fuji Photo Film Co Ltd | Mutilayer analysis element utilizing unique binding reaction |
| US4568647A (en) * | 1983-10-11 | 1986-02-04 | Eastman Kodak Company | Method and element for albumin assay |
| US4774192A (en) * | 1987-01-28 | 1988-09-27 | Technimed Corporation | A dry reagent delivery system with membrane having porosity gradient |
-
1991
- 1991-06-06 US US07/710,955 patent/US5264589A/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-04-21 IL IL10166592A patent/IL101665A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-04-21 TW TW081103100A patent/TW198023B/zh active
- 1992-05-05 CA CA002068002A patent/CA2068002A1/en not_active Abandoned
- 1992-05-14 NZ NZ242732A patent/NZ242732A/en unknown
- 1992-05-21 NO NO92922002A patent/NO922002L/no unknown
- 1992-05-23 DE DE69213827T patent/DE69213827T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-05-23 ES ES92108738T patent/ES2092596T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-23 AT AT92108738T patent/ATE143145T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-05-23 EP EP92108738A patent/EP0517055B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-25 ZA ZA923805A patent/ZA923805B/xx unknown
- 1992-06-04 AU AU18049/92A patent/AU646571B2/en not_active Ceased
- 1992-06-04 FI FI922587A patent/FI922587A/fi unknown
- 1992-06-04 KR KR1019920009664A patent/KR100231079B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-06-05 JP JP17004092A patent/JP3153831B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-01 IE IE183992A patent/IE921839A1/en unknown
- 1992-12-14 US US07/989,716 patent/US5328850A/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-09-25 GR GR960402507T patent/GR3021141T3/el unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008096437A (ja) * | 1995-05-19 | 2008-04-24 | Molecular Probes Inc | メロシアニン染料タンパク質染色 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0517055B1 (en) | 1996-09-18 |
| KR930000954A (ko) | 1993-01-16 |
| FI922587A (fi) | 1992-12-07 |
| CA2068002A1 (en) | 1992-12-07 |
| AU1804992A (en) | 1993-03-11 |
| EP0517055A1 (en) | 1992-12-09 |
| AU646571B2 (en) | 1994-02-24 |
| GR3021141T3 (en) | 1996-12-31 |
| NO922002D0 (no) | 1992-05-21 |
| KR100231079B1 (ko) | 1999-11-15 |
| FI922587A0 (fi) | 1992-06-04 |
| JP3153831B2 (ja) | 2001-04-09 |
| DE69213827D1 (de) | 1996-10-24 |
| US5264589A (en) | 1993-11-23 |
| NO922002L (no) | 1992-12-07 |
| TW198023B (ja) | 1993-01-11 |
| ZA923805B (en) | 1993-03-10 |
| DE69213827T2 (de) | 1997-01-30 |
| ATE143145T1 (de) | 1996-10-15 |
| ES2092596T3 (es) | 1996-12-01 |
| IE921839A1 (en) | 1992-12-16 |
| IL101665A0 (en) | 1992-12-30 |
| US5328850A (en) | 1994-07-12 |
| NZ242732A (en) | 1994-11-25 |
| IL101665A (en) | 1996-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3153831B2 (ja) | メロシアニンタンパク質誤差指示薬 | |
| JP3224419B2 (ja) | 生体試料中の蛋白質指示薬としてのメロシアニン及びニトロ又はニトロソ置換ポリハロゲン化フェノールスルホンフタレイン | |
| JP3069170B2 (ja) | 反射率プラトーを有するテトラゾリウム塩指示薬を用いる分析方法 | |
| CN110357870B (zh) | 一种用于检测甲醛的荧光分子探针与制备方法、及其荧光试纸的制备方法 | |
| JP3157607B2 (ja) | 生体試料中の蛋白質指示薬としてのニトロ又はニトロソ置換ポリハロゲン化フェノールスルホンフタレイン | |
| JP2700165B2 (ja) | 陽イオン測定のための化合物、試薬および方法 | |
| JP3049129B2 (ja) | 置換２−チアゾリルテトラゾリウム塩指示薬 | |
| JP2749615B2 (ja) | 新規な指示薬化合物、その製造法及び鉄分析系における該化合物の使用 | |
| JP3157560B2 (ja) | ２−ベンゾチアゾリルテトラゾリウム塩指示薬 | |
| US5300637A (en) | 2-benzothiazolyl tetrazolium salt indicators | |
| CA2042416C (en) | Method for the determination of an ion with increased sensitivity, use of substances which are suitable for this and a corresponding agent | |
| KR100232446B1 (ko) | 메로시아닌 단백오차 지시제를 함유하는 단백질 검출용 시험 스트립 | |
| EP0140256B1 (en) | Composition for examining urobilinogen | |
| JP3631769B2 (ja) | フェニル置換２−チアゾリルテトラゾリウム塩指示薬 | |
| US5290536A (en) | Phenyl substituted 2-thiazolyl tetrazolium salt indicators | |
| JP4916003B2 (ja) | アクロレイン及び／又はアクロレイン付加物を検出するための試薬及び方法 | |
| JPS5924155B2 (ja) | Ｎ−（ヒドロキシアルキル）−７−ヒドロキシクマリン−３−カルボキサミド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |