JP3631769B2 - フェニル置換２−チアゾリルテトラゾリウム塩指示薬 - Google Patents

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、還元物質、特にニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の測定に有用な色原性テトラゾリウム塩指示薬化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
テトラゾリウム塩は、還元物質に反応する色原指示試薬として十分公知である。還元に際して、テトラゾリウム塩はホルマザン染料生成物に変換される。これらの指示試薬は、種々の広範な分野、特に細胞染色並びに体液中の分析対象物、たとえば尿、乳汁、血清、及び血漿の測定にとりわけ適用されてきた医学的診断の分野における使用が知られている。一般に、体液分析対象物の測定は、試験される試料中に存在する分析対象物の量の関数としてＮＡＤＨが形成される、ＮＡＤ−依存性酵素反応を包含する。その場合、生成したＮＡＤＨの量は、適切なテトラゾリウム塩指示試薬をそのホルマザン染料生成物に還元的に変換することによって、測定し得る。
【０００３】
医学診断試験の分野では、テトラゾリウム塩指示試薬は、種々の異なる種類の製品に有用である。その中で特定されるものは試薬ストリップである。この製品は、特定の分析対象物、例えばグルコース又はコレステロールに反応する化学試薬を含浸され、又は別の方法で混和された紙又はその他の多孔質担体を包含する固体状態用具である。混和された試薬系は、マトリックスに塗布される試料中の分析対象物の量の関数として発色又は変色する色原性指示薬を含有する。その結果生じる測色反応は肉眼で観察され、定性的又は半定量的に読み取られる。定量的結果は、適切な計器（反射率メーター）を用いて、一つ又はそれ以上の特定の波長で、マトリックス表面の反射率を読み取ることにより観察できる。
【０００４】
試験試料中に存在し得る主な妨害物質の吸光度より長い波長で強力な吸光度を有するテトラゾリウム指示試薬を開発する必要性が認識されている。たとえば、ヘモグロビンの色による妨害は、試料が全血である場合に特に問題である。約６４０ｎｍを超える有意の吸収を示す指示試薬が、ヘモグロビン妨害を実質的に克服するために必要である。一般に用いられるテトラゾリウム塩指示試薬は、塩化２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラゾリウム（ＩＮＴ）、塩化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）、及び塩化２，２’，５，５’−テトラフェニル−３，３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−ジフェニレン）ジテトラゾリウム（ＮＢＴ）である。これらの化合物は、４６５〜６０５ｎｍの範囲で最大吸収（ＵＶｍａｘ）を示す。
【０００５】
慣用的に用いられる従来技術のテトラゾリウム塩指示試薬の別の欠点は、それらの測色反応を測定するために用いられる計測の進展に関する。より小型で、安価な反射率メーターの開発は、急速に進歩しつつある。このような計量器のより高価な構成分の一つは、光源、入射光又は反射光の波長を選択又は限定するためのフィルター又はその他の分光要素、及びセンサーから成る光学系である。光学系要素の機能を削除するか、又は組み合わせるか、あるいはより安価な要素、たとえば照明光源にＬＥＤを用いることによって、原価の顕著な節減を実現することができる。しかしながら、市販のＬＥＤは、製造のばらつき及び温度依存性により、有意に変化し得る中心波長を有する光を発する。慣用的に用いられるテトラゾリウム塩指示試薬ＩＮＴ、ＭＴＴ、及びＮＢＴは、それらのＵＶｍａｘを超える領域で強く傾斜する反射スペクトルを有する。したがって、ＬＥＤの製造のばらつきを修正するために各計器を個々に検量しなければ、そして温度によるばらつきを修正するためにテストランを行わねば、検定結果に大きな誤差が生じ得る。
【０００６】
以下は、測色分析における種々のテトラゾリウム塩の使用に関して教示している従来の技術の代表的なものである。Ｔａｎａｋａらの特開昭６１−８４号（Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔ．１０４：２０３４６９ｙ）は、ニッケル（ＩＩ）の存在下における２−（２−ベンゾチアゾリル）−３−（カルボキシフェニル）−５−フェニル−２Ｈ−テトラゾリウムハロゲン化物の還元によって得られるホルマザンキレートを用いるグルコースの検出を記載している。Ｌｉｍｂａｃｈらの西独特許第３，２４７，８９４号（Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔ．１０１：１２５９２９ｖは、グルコース検定におけるＩＮＴの使用に関する。Ｒｉｔｔｅｒｓｄｏｒｆらの西独特許第２，１４７，４６６号は、還元物質、たとえば還元糖、アスコルビン酸、及びケトステロイドの測定における７種の２−（２−ベンゾチアゾリル）−３−フェニル−５−（４−［トリメチルアンモニオ］フェニル）テトラゾリウム塩の使用を記載している。
【０００７】
文献で公知の種々の２−チアゾリルテトラゾリウム塩及び／又はそれらの対応するホルマザンの代表的なものを以下に示す。Ｓｅｒｅｂｒｙａｋｏｖａら，Ｋｈｉｍ．Ｇｅｔｅｒｏｔｓｉｋｌ．Ｓｏｅｄｉｎ．１０：１４０３−１４０５（１９７０）は、ベンゾチアゾリル−３−フェニル−（メチル）−５−ｐ−ニトロ（ジメチルアミノ）フェニルホルマザンの合成及び染色特性を記載している。著者らは、５−フェニルのパラ位置の電子求引性のニトロ基及び１−位置のベンゾチアゾリル基がともに深色移動を示すと記載している。Ｌｉｐｕｎｏｖａら，Ｋｈｉｍ．Ｇｅｔｅｒｏｔｓｉｋｌ．Ｓｏｅｄｉｎ．（１９７１）８３１−８３５は、Ｎ−１−ベンゾチアゾリルホルマザンの可視スペクトルに及ぼすＮ−５−ナフチル又はｏ−トリル基の深色効果を比較している。Ｊｏｈｎｅら，Ｐｈａｒｍａｚｉｅ ３４：７９０−７９４（１９７９）は、ある種の２−（４，５−ジフェニルチアゾール−２−イル）テトラゾリウム塩を記載している。
【０００８】
【本発明の要約】
本発明は、還元によって新規で改良された光学的性質を有するホルマザンを得るチアゾリンテトラジリウム塩を提供する。本発明の化合物は、一般式Ａのものである。
【０００９】
【化８】

【００１０】
（式中、Ｒ^１ 及びＲ^２ の一方又は両方が非置換フェニルであるか、又は独立してアルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アミド、アルキルアミド、アリールアミド、アルキルチオ、アリールチオ、アミノ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシ、シアノ、ハロ、ニトロ、スルホ、スルホンアミド、スルファモイル、トリアルキルアンモニオ、又はウレイドで置換されるフェニルであり、１個のみが置換又は非置換フェニルである場合は、他方は水素又はアルキルであり、Ｒ^２ が置換又は非置換フェニルであるとき、Ｒ^１ はスチリル又はナフチルであってもよく；
Ｒ^３ が：（ａ_１ ）式Ｂ：
【００１１】
【化９】

【００１２】
（式中、Ｑは一重結合又は−ＣＨ＝ＣＨ−であり、
（ｉ）Ｙ^１ はアルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アミド、アルキルアミド、アリールアミド、アルキルチオ、アリールチオ、ハロ、又は水素であり、Ｙ^２ はアルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アミド、アルキルアミド、アリールアミド、アルキルチオ、アリールチオ、アミノ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシル、シアノ、ハロ、水素、ニトロ、スルホ、スルホンアミド、スルファモイル、トリアルキルアンモニオ、又はウレイドであり、Ｙ^３ はアルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アミド、アルキルアミド、アリールアミド、アルキルチオ、アリールチオ、アミノ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボアリールオキシ、カルボキシル、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、スルホ、スルホンアミド、スルファモイル、トリアルキルアンモニオ、又はウレイドであり、Ｙ^４ はアルコキシ、アリールオキシ、ハロ、又は水素であるか、あるいは
（ｉｉ）Ｙ^２ 及びＹ^３ が一緒になってメチレンジオキシ又はイミダゾを形成し、Ｙ^１ 及びＹ^４ が水素である）、
（ｂ_１ ）２−、３−、又は４−ピリジル、
（ｃ_１ ）２−又は３−チエニル、及び
（ｄ_１ ）２−又は３−フラニル
から選択され、そしてＲ^４ が：
（ａ_２ ）式Ｃ：
【００１３】
【化１０】

【００１４】
（式中、Ｙ^５ はアルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アミド、アルキルアミド、アリールアミド、アルキルチオ、アリールチオ、ハロ、水素、ニトロ、又はウレイドであり、Ｙ^６ はアルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アミド、アルキルアミド、アリールアミド、アルキルチオ、アリールチオ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシル、シアノ、ハロ、水素、ニトロ、スルホ、スルホンアミド、スルファモイル、トリアルキルアンモニオ、又はウレイドであり、Ｙ^７ はアルコキシ、アリールオキシ、アミド、アルキルアミド、アリールアミド、アルキルチオ、アリールチオ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボアリールオキシ、カルボキシル、シアノ、ヒドロキシル、ニトロ、フェニルアゾ、スルホ、スルホンアミド、スルファモイル、又はウレイドであり、Ｙ^８ はアルコキシ、アルキル、ハロ、水素又はニトロである）、
（ｂ_２ ）式Ｄ：
【００１５】
【化１１】

【００１６】
（式中、Ｙ^９ はアルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アミド、アルキルアミド、アリールアミド、アルキルチオ、アリールチオ、カルバモイル、カルボアルコキシ、カルボキシル、シアノ、ハロ、水素、ニトロ、フェニルスルホ、フェニルアゾ、スルホ、スルホンアミド、スルファモイル、トリアルキルアンモニオ、又はウレイドである）、
（ｃ_２ ）２−、４−、６−、又は８−キノリル、あるいは２−メチルキノリル、及び
（ｄ_２ ）アントラニル
から選択され；
Ｘは対陰イオンであり；
【００１７】
しかしＲ^１ 及びＲ^２ がいずれも非置換フェニルのときに、（Ａ）Ｑが−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｙ^１ 、Ｙ^２ 、Ｙ^３ 及びＹ^４ がすべて水素であるならば、Ｒ^４ は２−カルボキシフェニルでなく、（Ｂ）Ｙ^５ 及びＹ^８ がいずれも水素であり、Ｙ^６ 又はＹ^７ の一方がカルボキシル又はスルホであり、他方が水素であるならば、Ｒ^３ が非置換フェニル、２−ピリジル又は３−ピリジルでなく、そして（Ｃ）Ｒ^４ が非置換フェニルであるならばＲ^３ が非置換フェニルでない。）
【００１８】
本発明の化合物は、約６００ｎｍを超える、好ましくは約６５０ｎｍを超える広範なプラトーを示す反射スペクトルを特徴とする。このような反射率プラトーにより、反射率を読む試薬ストリップによる分析検定、特に光学測定系が種々の中心波長を有するときの分析検定の精度を向上させる。
【００１９】
【好ましい態様の説明】
以下の定義が対象の開示に適用される：
”Ｃ_１−４ ” − 残基を、たとえば炭素原子を含めた適切な１〜４個の原子を含有する形態に限定するために用いられる。たとえばＣ_１−４ アルキル。
”アルキル” − 一般式Ｃ_ｎ Ｈ_２ｎ＋１の直鎖及び分枝鎖炭化水素残基、好ましくは”低級アルキル”、たとえばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、及びｔｅｒｔ−ブチルのＣ_１−４ アルキル、ならびに高級アルキル、たとえばｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル等。
”アルコキシ” − 残基−ＯＲ（式中、Ｒはアルキルである）。
”アルキルアミド” − 残基−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ’（式中、Ｒ及びＲ’は、同一であっても異なってもよく、アルキルである）。
”アルキルチオ” − 残基−ＳＲ（式中、Ｒはアルキルである）。
”アミド” − 残基−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｈ。
”アミノ” − 残基−ＮＲＲ’（式中、Ｒ及びＲ’は同一であっても異なってもよく、水素又はアルキルである）。
”アリール” − 芳香族炭素環式又は複素環式環又は環系からこのような環又は環系に結合する水素原子を除去することにより誘導される有機残基、たとえばフェニル、ナフチル、ピリジル、オキサゾリル、キノリル、チアゾリル、チエニル、及びフラニルなど。
”アリールアミド” − 残基−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ’（式中、Ｒ及びＲ’は同一であっても異なってもよく、アリールである）。
”アリールオキシ” − 残基−ＯＲ（式中、Ｒはアリールである）。
”アリールチオ” − 残基−ＳＲ（式中、Ｒはアリールである）。
”カルボアルコキシ”−残基−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、Ｒはアルキルである）。
”カルバボアリールオキシ”−残基−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、Ｒはアリールである）。
”カルバモイル” − 残基−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲＲ’（式中、Ｒ及びＲ’は同一であっても異なってもよく、水素又はアルキルである）。
”カルボキシル” − 残基−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ。
”ハロ” − フルオロ、クロロ、及びブロモ。
”イミダゾ” − 二価残基−Ｎ＝ＣＨ−ＮＨ−。
”メチレンジオキシ” − 式−Ｏ−ＣＨ_２ −Ｏ−の二価残基。
”フェニルアゾ” − 残基−Ｎ＝Ｎ−フェニル。
”スチリル” − 残基−ＣＨ＝ＣＨ−Ｒ（式中、Ｒはアリールである）。
”スルホ” − 残基−ＳＯ_３ 。
”スルファミド” − 残基−ＮＲＳＯ_２ Ｒ’（式中、Ｒ及びＲ’は同一であっても異なってもよく、アルキル、アリール、又は水素である）。
”スルファモイル” − 残基−ＳＯ_２ ＮＲＲ’（式中、Ｒ及びＲ’は同一であっても異なってもよく、アルキル、アリール、又は水素である）。
”トリアルキルアンモニオ” − 残基−ＮＲ_３ ^＋（式中、Ｒはアルキルである）。
”ウレイド” − 残基−ＮＲＣ（＝Ｏ）ＮＲ’（式中、Ｒ及びＲ’は同一であっても異なってもよく、アルキル、アリール、又は水素である）。
【００２０】
特に別記しない限り、置換されることもある残基、例えばアルキル、アリール、フェニルアゾ、及びスチリルの場合における上記の用語の使用は、このような残基の合理的に置換された形態、ならびにそれらの非置換形態を包含するように意図されると理解されるべきである。本発明の有用な化合物を生成する合理的な置換は、当業者には明らかであって、いくつか名前を挙げると、アルコキシ、アミノ、アルキルチオ、カルボアルコキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、スルホ、及びスルファモイルといった置換基を含むが、これらに限定されるものではない。
【００２１】
好ましいＲ^１ 及びＲ^２ 残基
Ｒ^１ 及びＲ^２ のフェニル基は多重に置換さることができるが、実際には、通常は１個又は２個の置換基のみが存在する。１個の置換基の場合は、パラ位置であることが好ましい。さらに、合成及びホルマザンの反射スペクトルの観点からは、好ましい化合物は、次のようなものである：
（ｉ）Ｒ^１ 及びＲ^２ がいずれも非置換フェニル又はアルキコシ、アリールオキシ、アルキル、アミド、アルキルアミド、アリールアミド、アルキルチオ、アリーリチオ、カルバモイル、カルボアルキコシ、カルボアリールオキシ、カルボキシ、シアノ、ハロ、トリアルキルアンモニオ及びウレイドから選択される同一の基でパラ置換されるフェニルである、又は
（ｉｉ）Ｒ^１ 及びＲ^２ の一方がアルコキシ又はアリールオキシでパラ置換されるフェニルであり、他方が水素である。
【００２２】
合成された化合物の性質に基づいて最も好ましい化合物は、Ｒ^１ 及びＲ^２ がいずれも非置換フェニルであるか、あるいはＲ^１ が非置換フェニル又はＣ_１−４ アルコキシ、Ｃ_１−４ アルキルもしくはハロでパラ置換されるフェニルであり、Ｒ^２ が水素である。
【００２３】
好ましいＲ^３ 及びＲ^４ 残基
合成及びホルマザンの反射スペクトル特性の見地から、Ｒ^３ は好ましくは：
（ａ_１ ）式Ｅ：
【００２４】
【化１２】

【００２５】
（式中、（ｉ）Ｙ^２ 、Ｙ^３ 及びＹ^４ は各々Ｃ_１−４ アルコキシであり、
（ｉｉ）Ｙ^４ が水素であり、Ｙ^２ 及びＹ^３ がいずれもＣ_１−４ アルコキシであるか、又は一緒になってメチレンジオキシを形成し、あるいは、
（ｉｉｉ）Ｙ^２ 及びＹ^４ がいずれも水素であり、Ｙ^３ がＣ_１−４ アルコキシ、Ｃ_１−４ アルキル、Ｃ_１−４ アルキルアミド、Ｃ_１−４ アルキルチオ、カルバモイル、カルボ（Ｃ_１−４ ）アルコキシ、カルボキシル、シアノ、ハロ、水素、ニトロ、トリ（Ｃ_１−４ ）アルキルアンモニオ、又はウレイドである）の残基、及び
（ｂ_１ ）２−又は３−チエニル
から選択されるものである。
【００２６】
製造された化合物の特性及び合成に基づけば、Ｒ^３ が以下の：
３，４，５−トリメトキシフェニル、
３，４−ジメトキシフェニル、
３，４−メチレンジオキシフェニル、
４−メトキシフェニル、
４−アセトアミドフェニル、
４−メチルチオフェニル、
４−フェニル、
４−ハロフェニル、
４−シアノフェニル、
４−ニトロフェニル、
２−チエニル、及び
３−チエニル
から選択されるのが最も好ましい。
【００２７】
好ましいＲ^４ 残基は、：
（ａ_２ ）上記の式Ｃ
（式中、（ｉ）Ｙ^５ は水素であり、Ｙ^６ 、Ｙ^７ 、及びＹ^８ は各々Ｃ_１−４ アルコキシであり、
（ｉｉ）Ｙ^５ 及びＹ^８ はともに水素であり、Ｙ^６ 及びＹ^７ はともにＣ_１−４ アルコキシであるか、又は一緒になってメチレンジオキシを形成し、
（ｉｉｉ）Ｙ^５ 、Ｙ^６ 及びＹ^８ は各々水素であり、Ｙ^７ はＣ_１−４ アルコキシ、Ｃ_１−４ アルキルアミド、Ｃ_１−４ アルキルチオ、ベンズアミド、カルバモイル、カルボ（Ｃ_１−４ ）アルコキシ、カルボキシル、シアノ、ヒドロキシル、ニトロ、フェニルアゾ、スルホ、スルホンアミド、スルファモイル、又はウレイドであり、
（ｉｖ）Ｙ^５ はアルコキシ又はアルキルであり、Ｙ^６ 及びＹ^８ はいずれも水素であり、Ｙ^７ はＣ_１−４ アルコキシ、Ｃ_１−４ アルキルアミド、Ｃ_１−４ アルキルチオ、ベンズアミド、カルバモイル、カルボ（Ｃ_１−４ ）アルコキシ、カルボキシル、シアノ、水素、ニトロ、フェニルアゾ、又はウレイドであり、
（ｖ）Ｙ^５ 及びＹ^８ はＣ_１−４ アルコキシであり、あるいは
（ｖｉ）Ｙ^５ 及びＹ^８ はＣ_１−４ アルコキシであり、Ｙ^７ はＣ_１−４ アルキルアミド又はベンズアミドである）の残基、及び
（ｂ_２ ）上記の式Ｄ
（式中、Ｙ^９ はＣ_１−４ アルコキシ、Ｃ_１−４ アルキル、Ｃ_１−４ アルキルアミド、Ｃ_１−４ アルキルチオ、シアノ、ハロ、水素、ニトロ、スルホ、スルホンアミド、又はウレイドである）の残基、及び
（ｃ_２ ）８−キノリル
である。
【００２８】
製造された化合物の特性及び合成に基づけば、Ｒ^４ が以下の：
３，４，５−トリメトキシフェニル、
３，４−ジメトキシフェニル、２，４−ジメトキシフェニル、
３，４−メチレンジオキシフェニル、
４−メトキシフェニル、４−アセトアミドフェニル、
４−メチルチオフェニル、４−カルボキシフェニル、
４−ニトロフェニル、２−メトキシフェニル、
２−メトキシ−４−カルボキシフェニル、
２，５−ジメトキシフェニル、
２，５−ジメトキシフェニル−４−ベンズアミドフェニル、
１−ナフチル、４−ニトロ−１−ナフチル、
４−メトキシ−１−ナフチル、８−キノリル、
２−メチル−４−カルボキシフェニル、
４−カルボメトキシフェニル、
４−シアノフェニル、及び
４−シアノ−１−ナフチルから選択されるのが最も好ましい。
【００２９】
対陰イオン
対陰イオンの選択は、主として特定のテトラゾリウム塩の安定性及び溶解性の考察に基づく。概して、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、フルオロホウ酸塩、過塩素酸塩、及び硫酸塩などの無機陰イオン；ならびに酢酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、及びアリールスルホン酸塩（ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩）などの有機陰イオンのような対陰イオンから選択される。
【００３０】
合成方法
テトラゾリウム塩は、文献で十分公知の方法によって合成される（Ｈｏｏｐｅｒ，Ｗ．Ｄ．，Ｒｅｖ．Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，１９６９，１９，２２１；Ｐｕｔｔｅｒ，Ｒ．，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒ Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ−Ｍｕｌｌｅｒ 編，Ｔｈｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ：Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，１９６５，Ｂｄ．１０／３，ｐ．６３３；Ｎｉｎｅｈａｍ，Ａ．Ｗ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，１９５５，ｐｐ．３５５−４８３）。一般に、本発明のテトラゾリウム塩は、まず２−ヒドラジノチアゾールをアルデヒドと反応させ、次にその結果生じたヒドラゾンをジアゾ化アニリンで処理して合成する。その結果生じたホルマザンを、次に十分公知の方法によって酸化して、テトラゾリウム塩にする。その結果として、合成は３つの主な出発原料、すなわちアルデヒド、アニリン、及び２−ヒドラジノチアゾールを包含する。
【００３１】
【化１３】

【００３２】
２−ヒドラジノチアゾールの合成
本発明の１群化合物は、非置換２−ヒドラジノベンゾチアゾール（Ｒ^１ 及びＲ^２ は一緒になって非置換ベンゾ環を形成する）から合成する。２つの方法により４，５−ジフェニル−２−ヒドラジノチアゾールを合成する。１つは、まず２つのアルデヒド間にベンゾイン縮合（１７）物質を形成することによるものである（Ｉｄｅ，Ｗ．Ｓ．，Ｂｕｃｋ，Ｊ．Ｓ．，Ｏｒｇ．Ｒｅａｃｔ．，１９４８，Ｖｏｌ．４，２６９）。この方法で得られないベンゾインは、フェニル置換”アシル陰イオン等価物”と別のアルデヒドを縮合し、その後カルボニル保護基を除去することにより合成する（Ｂｅｒｔｚ，Ｓ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，１９８０，１７，８３１）。特定の例としては、金属化したＯ−トリメチルシリルシアノヒドリン（３）とアリールアルデヒドとの縮合がある。この物質（４）を、酢酸水溶液を用いて脱保護化して、ベンゾイン物質（１）を生じる。
【００３３】
【化１４】

【００３４】
次に、ベンゾイン物質を、塩化チオニルのような慣用試薬を用いてハロゲン化物（２）に変換して、α−ハロケトン（２）を生成し、これをチオウレアと反応させて４，５−ジフェニル−２−アミノチアゾールを生成する（Ｔｒａｕｍａｎｎ，Ｖ．，Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎ．Ｃｈｅｍ．，１８８８，２５０，３１；Ｄｏｄｓｏｎ ら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９４５，６７，２４４２）。これらを、ベンゾ化合物の実施例に関して記載されているように、ヒドラジンを用いて２−ヒドラジノ化合物に変換し得る。
【００３５】
同じα−ハロケトンは、チオシアン酸塩と反応して、α−チオシアノケトン（５）を生じ、それは容易に環化される。たとえば、塩化水素ガスと反応させた場合、２−クロロチアゾール（６）が得られるが、これはヒドラジンと反応して２−ヒドラジノチアゾールを生じる。
【００３６】
【化１５】

【００３７】
あるいは、α−ハロケトンは、ハロケトンをＮ−アリールチオセミカルバゾン（７）で処理することにより、必要なヒドラゾン（８）を直接生成するために用い得る（Ｊｏｈｎ，Ｓ．，Ｓｃｈａｋｓ，Ａ．，Ｈａｒｔｕｎｇ，Ｓ．，Ｓｃｈａｒｆ，Ｋ．−Ｄ．及び Ｎｏｖｅｒ，Ｌ．，Ｐｈａｒｍａｚｉｅ，１９７９，３４，７９０）。
【００３８】
【化１６】

【００３９】
４−位置をアリールで置換され、５−位置をアルキルで置換され又は非置換のチアゾールは、α−ハロケトン及びチオセミカルバゾン又はチオウレアと同様に合成する。
【００４０】
【化１７】

【００４１】
アルデヒドの合成
アルデヒドは、市販品を購入するか、あるいは当業者によく知られた方法で合成することもできる。
【００４２】
たとえば、アリールメタンのベンジル酸化（Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８５；ｐ．１０７９）、アリール酸塩化物（同書 ｐ．３９６）、又はアリール酸誘導体の還元（Ｌａｒｏｃｋ，Ｒ．Ｃ．，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ；ＶＣＨ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９；ｐｐ．６０４−６０５）により、アルデヒドを合成する。
【００４３】
アルデヒドを合成するために、アリールハロゲン化物を用いてもよい。この方法では、金属転位反応は、アルデヒドを生成するために、種々の試薬、例えばジメチルホルムアミドで処理できるアリール金属種を生じる（同書 ｐ．６８１−６８３）。
【００４４】
前述のアリールアルデヒド、酸、メタン、及びハロゲン化合物は、テトラゾリウム塩に転換される前に種々の官能基で誘導される。これは、芳香族求核性置換（Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ Ｏｒｇａｎｉｃ ＣｈｅｍｉｓｔｒｙＴｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８５；ｐｐ．５７６−６０７）、芳香族求電子性置換（同書 ｐｐ．４４７−５１１）、又はヘテロ原子向性金属化反応（Ｇｓｃｈｗｅｎｄ，Ｈ．Ｗ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｈ，Ｒ．， Ｏｒｇａｎｉｃ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７９；Ｖｏｌ．２６，１）によって達成される。
【００４５】
テトラゾリウム塩のアルデヒド部分がフェノール又はアミンを含有する場合は、この基は、これらとテトラゾリウム塩を合成するために用いられるジアゾ化アニリン又は酸化剤との間の反応が起きないよう、保護されねばならない。
【００４６】
これは、酢酸塩としてヒドロキシアリールアルデヒドを保護し、ホルマザンを生成するための一連の反応を実施し、ついでｐＨ１０で酢酸塩を加水分解することによって達成される。ｐＨ５に酸性化し、ついで濾過すると、所望のホルマザンが生じる。
【００４７】
テトラゾリウム塩の合成に際して、その結果生じたホルマザンを酸化剤と反応させる場合は、フェノールをジヒドロピランのような酸性で不安定な基によって保護し（Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎＯｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；１９８１，ｐｐ．８７−１１３）、ついで酸性条件下でテトラゾリウム塩を攪拌することにより、保護基を除去する。
【００４８】
同様に、アルデヒド部分におけるアミンは、それらの反応を阻止するために保護されねばならない。これは、酸性で不安定なカルバミド酸塩を用いることによって、最もよく成し遂げられ（同書 ｐｐ．２１８−２４７）、そのカルバミド酸塩は、酸性条件下でテトラゾリウム塩を攪拌することにより、後に除去される。
【００４９】
アリールアミンの合成
アリールアミンは、対応するニトロ又はアジド化合物の還元（Ｌａｒｏｃｋ，Ｐ．Ｃ．，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ；ＶＣＨ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９；ｐｐ．４１２−４１５又は４０９−４１０）、アリール金属化合物と求電子性窒素試薬間との反応（同書ｐｐ．３９９−４００）、又はアシルアジド又は酸化アミドの転位（同書 ｐｐ．４３１−４３２）により合成する。
【００５０】
アルデヒドの場合と同様に、求電子性及び求核性の芳香族置換を用いて、異なる官能基をアリールアミン又は合成前駆体に導入することができる。
【００５１】
化合物の使用
本発明のテトラジリウム塩化合物の主要な用途は、還元物質の検出のための色原指示薬である。本化合物はＮＡＤＨの検出に特に有益である。ＮＡＤＨは種々の生化学物質に特異的な酵素触媒検出反応で生成されるので、本化合物は医学的診断試験に特に有用である。しかし、一般に他の還元物質、たとえば硫化水素ガス、ジボラン、水素化ヒ素、又は水素化リンの検出も可能である。
【００５２】
本化合物は、約６００ｎｍを超えるその反射スペクトルにおいて広範なプラトーを示すことが見出された。本発明の最も好ましい指示試薬化合物は、約６５０ｎｍを超えるプラトーを有する（すなわち、最も平坦な約５０ｎｍ幅部分が６４０〜６６０ｎｍで始まる）。このような反射率プラトーは、試薬ストリップからの反射率の測定を基準にした分析試験の精度を改良する。
【００５３】
試薬ストリップは、当該分析対象物を含有する液体試験試料と接触させると応答して変色する試験組成物を包含する固体担体マトリックスからなる分析具として、当業界で公知である。このような試験組成物は、本発明の場合、（ａ）分析対象物と反応して還元物質を生じる単数又は複数の試薬、及び（ｂ）このような還元物質により還元されて色原性ホルマザン染料物質を生じ得る、本明細書に記載されているような２−チアゾリルテトラゾリウム塩を包含する。このような試薬ストリップの呈色応答は、肉眼で観察されて半定量的値を示すが、しかしながら、定量的結果は、あらかじめ確定された波長で担体マトリックスの反射率を測定することによって得られる。このような測定は、反応した担体マトリックスを光源で照射し、検出器要素で反射光を測定することにより、担体マトリックスの反射率を検知することを含む。
【００５４】
反射率プラトーを有するテトラゾリウム塩指示試薬の発見は、その光学系（光源、検出器要素、スペクトル制御要素、たとえばフィルター、及びその他の部分の組合）の中心波長のばらつきを受けやすい計器を用いて試薬ストリップからの反射率を読み取る場合に用いて、特に有益である。光学系の中心波長のばらつきは、種々の因子、たとえば主照明光源又はフィルターのようなスペクトル制御要素の中心波長のばらつきによって引き起こされる。たとえば、光源として発光ダイオード（ＬＥＤ）を用いると、放射される光の波長は、一般にひとつの計器内では±４ｎｍ変化し、製造のばらつきのために、異なる計器のＬＥＤ間では±８ｎｍまで変化する。さらに、ＬＥＤは温度効果によっても、同様に中心波長の変化を受けやすい。広帯光源をフィルターとともに用いて中心波長のスペクトル制御を提供する場合、ひとつの計器内のばらつきは一般に１ｎｍ以下であるが、しかしながら計器間では、ばらつきは±６ｎｍという高さである。したがって、本発明は、計器中の検出要素に反応する光の中心波長が約±５ｎｍの範囲のばらつきを受ける場合に適用可能である。
【００５５】
本発明に用いるための試薬ストリップを製造する場合、担体マトリックスの選択、分析対象物と反応して還元物質を生じる試験試薬、及びこのような試薬及びテトラゾリウム指示試薬が担体マトリックスに包含される方法は、試薬ストリップの当業界には十分公知である。ちょうど２〜３の実施例を詳述するために、一般的担体マトリックスは多孔性かつ吸収性の紙、布、ガラス繊維フィルター、重合性膜及びフィルム等である。組込み方法には、１つ又はそれ以上の工程での、溶液、懸濁液、又はその他の液体形態の試験組成物による形成された担体マトリックスの含浸、その後のマトリックスの乾燥；たとえば、フィルム又は膜形成処方物の溶液の注ぎ込み又は層形成による、試験組成物の１つ又はそれ以上の成分の存在下でのマトリックスの形成が含まれる。
【００５６】
【実施例】
以下の実施例で本発明をさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５７】
Ａ．化合物合成
ヒドラゾンの合成
アリールアルデヒドの合成
４，５−ジアリールチアゾール−２−イルヒドラゾン及びアリールアルデヒド
４−アリール−５−アルキル又はハロゲンチアゾール−２−イルヒドラゾン
２００ｍｌのエタノール中の５１０ｍｍｏｌのチオセミカルバゾン、５０ｍｍｏｌのα−クロロケトン及び１００ｍｍｏｌのピリジンを１時間還流した。混合物を室温に冷却し、ついで濾過して、ヒドラゾンを得た。
【００５８】
アリールアルデヒドの合成
４−スチリル−５−アリールチアゾール−２−イルヒドラゾン
１，４−ジアリール−２−オキソ−３−ブテンを、Ｓ．Ａ．Ｆｉｎｅ及びＰ．Ｄ．Ｐｕｌａｓｋｉの、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．３８，１７４３（１９７３）に記された方法で合成した。Ｐ．Ｌ．Ｓｏｕｔｈｗｉｎｋ及びＤ．Ｉ．Ｓａｐｐｅｒの、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９２６（１９５４）に記された方法に従って、１３０ｍｍｏｌの１，４−ジアリール−２−オキシ−３−ブテン、１３０ｍｍｏｌのヨウ素及び２６０ｍｍｏｌのチオセミカルバゾンの混合物を１，２００ｍｌのエタノール中で５時間還流した。混合物を室温に冷却して濾過し、ヒドラゾンを得た。
【００５９】
ホルマザンの合成
６０ｍｌの３Ｎ ＨＣｌ中の８．５ｍｍｏｌのアミンのスラリー又は溶液を５℃に冷却することにより、まずジアゾニウム塩を合成した。次に、５ｍｌの水に溶解した亜硝酸ナトリウム（０．７０ｇ、１０．１５ｍｍｏｌ）を滴下した。３０分攪拌後、混合液を、１２０ｍｌの１：１（容量比）ＤＭＦ−ピリジン混液に溶解した８．５ｍｍｏｌのヒドラゾンの冷（−２５℃）混合液に滴下した。反応は、滴下中は−１５℃より高温にしない。２時間の攪拌を行いつつ、その混合液を室温まで加温した。濾過により、黒色固体としてホルマザンを生じた。不純物は、メタノールで何度も洗浄するか、又はメタノールに溶解した固体を還流し、熱い間に濾過することにより除去することができた。
【００６０】
テトラゾリウム塩の合成
１．５ｍｍｏｌのホルマザンのスラリーを、２０ｍｌの酢酸及び４ｍｌの亜硝酸イソアミルとともに１６〜４８時間攪拌した。次に、その混合液を濾過して、テトラゾリウム塩を得た。その塩が沈殿しない場合は、エテールで希釈すると沈殿を生じた。
【００６１】
Ｂ．試薬ストリップの調製
各指示試薬を試薬ストリップに含浸し、既知量のグルコース又はＮＡＤＨを含有する溶液で試験した。試薬ストリップは、単一の試薬パッドが付着するポリスチレンハンドルからなる。試薬パッドは０．２ｘ０．２インチ四方で、適切な分析対象物を含有する試料のアリコートを用いた場合に計器で読み取れる変色をさせる試薬を含有する。乾相試薬パッドは、実施例のようにセルロース繊維又はナイロン膜から成る固体支持体である。試薬パッドをまず、メタノールのような溶剤に溶解した当該テトラゾリウム塩（０．８Ｍ／リットル）及び洗剤（０．３％）の溶液で含浸した。試薬パッドに含浸される第二溶液は、以下の成分を含有した：
【００６２】
【表１】

【００６３】
０〜３３ｍＭ／リットルの少なくとも５つの異なるグルコース又はＮＡＤＨの濃度を有する約０．０１ｍｌのいくつかの試験溶液（血清、血漿、水溶液）を、乾燥試薬パッドの中央に塗布した。約６０秒の遅滞時間後、各指示試薬の反射スペクトルを、４００〜１１００ｎｍの波長範囲にわたって、５ｎｍ増分で測定した。
【００６４】
Ｃ．実用性データ
以下は、本発明の種々の合成されたテトラゾリウム塩に固有のスペクトル及びその他の分析データの表である。化合物は、それらのトリアゾール残基の形態により、ついでそれらのＲ^４ 置換基により、最後にそれらのＲ^３ 置換基によって、順にまとめられている。たとえば、示された最初の化合物は、Ａ．１．ａ）であり、Ａ式（式中、Ｒ^１ 及びＲ^２ はいずれも４−メトキシフェニルであり、Ｒ^４ はカルボキシフェニルであり、Ｒ^３ は２−チエニルである）を有し；第二の化合物Ｂ．１．ａ）は異なるチアゾリル残基（Ｒ^１ 及びＲ^２ はいずれも非置換フェニルである）を有し、Ｒ^４ はカルボキシフェニルであり、Ｒ^３ は３，４−メチレンジオキシフェニルである；等。
【００６５】
テトラゾリウム塩の反射スペクトルは、それらが観察又は測定される周囲の状況によるものと理解される。個々のテトラゾリウム塩を比較するために、以下のデータは６００ｎｍより大きい波長での反射スペクトルの最も平坦な部分の相対的扁平度の測定値を含み、スペクトルは上記のパートＢに記載されたように調製されたグルコース又はコレステロール試薬ストリップを用いて発生される。スペクトルの相対的扁平度は、下記のように検出された分析対象物のレベルに関して標準化されるＫ／Ｓ単位のデータで表される。
【００６６】
Ｋ／Ｓは、式：（１−Ｒ）^２ ／２Ｒ（式中、Ｒは計器で読み取る反射率単位である）
で定義される。Ｋ／Ｓのパーセント変化（百分率で表される）は、５０ｎｍの範囲にわたる変化を、このような範囲での高及び低Ｋ／Ｓ値の平均で割った値である。
【００６７】
本化合物のプラトー特性は、本発明の目的に関しては、約６００ｎｍを超える波長で始まる３０〜５０ｎｍ波長スパンにわたる約１７％未満の反射スペクトルのパーセント変化（上記の段落に記載されているようなＫ／Ｓにより表される）と理解されるべきである。より好ましい化合物は、約１０％未満のＫ／Ｓのパーセント変化を有するプラトーを示す。最も好ましいのは、テトラゾリウム塩指示試薬が５０ｎｍ波長スパンにわたって約５％又はそれ未満のＫ／Ｓのパーセント変化を示すものである。より傾斜した反射スペクトルを有する化合物は、それでもなお、平坦な位置が６５０ｎｍを超え、より好ましくは６７５ｎｍを超えるときに好ましい。
【００６８】
図面を参照すると、図１〜４は、グルコースの種々の濃度で、従来技術のテトラゾリウム塩ＩＮＴ、ＭＴＴ、及びＮＢＴを還元した場合に生じるホルマザンの反射スペクトルを示す。比較のために、図５は、各種濃度のＮＡＤＨを試験したときの、本発明の化合物（ＫＪＥ１２６４）（下記の表のＡ−１−ａ項を参照）に関する対応スペクトルを示す。本化合物からのホルマザンのスペクトルにおけるプラトーの存在、及び従来の技術からのホルマザンの場合のその不在は、容易に明らかである。
【００６９】
上記の４つの従来技術の化合物は、以下のように６５０〜７００ｎｍの波長範囲にわたるＫ／Ｓのパーセント変化を示す：
ＩＮＴ ７１％
ＭＴＴ １７８％
ＮＢＴ ７３％
ＵＳＳＲ ２８％
【００７０】
ホルマザンに関するパーセントＫ／Ｓが低いほど、テトラゾリウム塩は反射率の測定に、それゆえ分析対象物濃度の測定に用いる光学系の中心波長のばらつきに、より多く対応できる。
【００７１】
以下の非標準的略語を、以後の文中に用いる：
”ＵＶ” − ホルマザンのＵＶ反射スペクトルの最大反射率ピークの波長（ｎｍ）。吸光係数及び測定中に用いる溶剤は、括弧内に示される。
”ｎｍ” − ５０ｎｍ波長スパンにわたるホルマザンの反射スペクトルの最も扁平な部分の位置（開始及び収量波長（ｎｍ）で表される）。
”Ｋ／Ｓ” − 反射スペクトルの上記の最も平坦な５０ｎｍ部分のＫ／Ｓにおけるパーセント変化。反射スペクトルを生じるために用いられる分析対象物の濃度は、括弧内に示される。Ｍｍｏｌは、ｍｍｏｌ／リットルでの濃度を示す。
【００７２】

【００７３】

【００７４】

【００７５】

【００７６】

【００７７】

【００７８】

【００７９】

【００８０】

【００８１】

【００８２】

【００８３】

【００８４】

【００８５】

【００８６】

【００８７】

【００８８】
本発明を、上記に特定的に説明し、例示した。本発明のその他の変更及び修正は、本発明の精神及び範囲を逸脱しない限りにおいてなされ得る。
すなわち、本発明（１）は、式：
【化１９】

｛式中、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ビス（４−メトキシフェニル）チアゾール−２−イル、４，５−ジフェニルチアゾール−２−イル、４−フェニル−チアゾール−２−イル、４−（ｐ−フルオロフェニル）チアゾール−２−イル、４−フェニル−５−メチルチアゾール−２−イル又は４−ナフチル−５−フェニルチアゾール−２−イルになるものであり；Ｒ⁴は、４−カルボキシフェニル、フェニル、３−ピリジル、４−ニトロナフチル又は３，５−ジカルボキシフェニルであり；Ｒ³は、３，４−メチレンジオキシフェニル、４−メトキシフェニル、４−メチルフェニル、２−チエニル、４−フルオロフェニル又は３−チエニルであり；Ｘ^-は対陰イオンであり；還元状態にあるときに、５０nm波長スパン（ここで、該波長スパンの中点は、６４０nm以上にある）にわたるＫ／Ｓパーセント変化が、約１７％以下である｝で示されるテトラゾリウム塩である。
また、本発明（２）は、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ビス（４−メトキシフェニル）チアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が２−チエニルである、前記発明（１）のテトラゾリウム塩である。
更に、本発明（３）は、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ジフェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が、３，４−メチレンジオキシフェニル又は４−メトキシフェニルである、前記発明（１）のテトラゾリウム塩である。
また、本発明（４）は、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ジフェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴がフェニルであり、Ｒ³が２−チエニルである、前記発明（１）のテトラゾリウム塩である。
更に、本発明（５）は、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ジフェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が３−ピリジルであり、Ｒ³が４−メトキシフェニルである、前記発明（１）のテトラゾリウム塩である。
また、本発明（６）は、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ジフェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が４−ニトロナフチルであり、Ｒ³が３−チエニルである、前記発明（１）のテトラゾリウム塩である。
更に、本発明（７）は、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ジフェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が３，５−ジカルボキシフェニルであり、Ｒ³が３，４−メチレンジオキシフェニルである、前記発明（１）のテトラゾリウム塩である。
また、本発明（８）は、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４−フェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が、３，４−メチレンジオキシフェニルである、前記発明（１）のテトラゾリウム塩である。
更に、本発明（９）は、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４−（ｐ−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が、３，４−メチレンジオキシフェニルである、前記発明（１）のテトラゾリウム塩である。
また、本発明（１０）は、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４−フェニル−５−メチルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が、２−チエニル又は４−メチルフェニルである、前記発明（１）のテトラゾリウム塩である。
更に、本発明（１１）は、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４−ナフチル−５−フェニルチアゾール−２−イルであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が、３，４−メチレンジオキシフェニル又は２−チエニルである、前記発明（１）のテトラゾリウム塩である。
また、本発明（１２）は、前記発明（１）〜（１１）のいずれかのテトラゾリウム塩の１種以上を使用することを含む、還元物質の検出方法である。
更に、本発明（１３）は、還元物質がＮＡＤＨである、前記発明（１２）の方法である。
また、本発明（１４）は、還元物質が、硫化水素、ジボラン、水素化ヒ素又は水素化リンである、前記発明（１２）の方法である。
更に、本発明（１５）は、前記発明（１）〜（１１）のいずれかのテトラゾリウム塩を１種以上含有する、テトラゾリウム指示薬である。
【図面の簡単な説明】
【図１】種々のグルコース濃度での、テトラゾリウム塩ＩＮＴを還元した場合に生じたホルマザンの反射スペクトルを示す図である。
【図２】種々のグルコース濃度での、テトラゾリウム塩ＭＴＴを還元した場合に生じたホルマザンの反射スペクトルを示す図である。
【図３】種々のグルコース濃度での、テトラゾリウム塩ＮＢＴを還元した場合に生じたホルマザンの反射スペクトルを示す図である。
【図４】種々のグルコース濃度での、２−（ベンゾチアゾール−２−イル）−３−（１−ナフチル）−５−フェニルテトラゾリウム塩（ＵＳＳＲ）を還元した場合に生じたホルマザンの反射スペクトルを示す図である。
【図５】本発明の化合物２−（４，５−ビス（４−メトキシフェニル）−チアゾール−２−イル）−３−（４−カルボキシフェニル）−５−（２−チエニル）テトラゾリウム塩（ＫＪＥ１２６４）からのホルマザンの対応するスペクトルを示す図である。

Claims (15)

1. 式：
   

   

   ｛式中、Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ビス（４−メトキシフェニル）チアゾール−２−イル、４，５−ジフェニルチアゾール−２−イル、４−フェニル−チアゾール−２−イル、４−（ｐ−フルオロフェニル）チアゾール−２−イル、４−フェニル−５−メチルチアゾール−２−イル又は４−ナフチル−５−フェニルチアゾール−２−イルになるものであり；Ｒ⁴は、４−カルボキシフェニル、フェニル、３−ピリジル、４−ニトロナフチル又は３，５−ジカルボキシフェニルであり；Ｒ³は、３，４−メチレンジオキシフェニル、４−メトキシフェニル、４−メチルフェニル、２−チエニル、４−フルオロフェニル又は３−チエニルであり；Ｘ^-は対陰イオンであり；還元状態にあるときに、５０nm波長スパン（ここで、該波長スパンの中点は、６４０nm以上にある）にわたるＫ／Ｓパーセント変化が、約１７％以下である｝で示されるテトラゾリウム塩。
2. Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ビス（４−メトキシフェニル）チアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が２−チエニルである、請求項１記載のテトラゾリウム塩。
3. Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ジフェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が、３，４−メチレンジオキシフェニル又は４−メトキシフェニルである、請求項１記載のテトラゾリウム塩。
4. Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ジフェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴がフェニルであり、Ｒ³が２−チエニルである、請求項１記載のテトラゾリウム塩。
5. Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ジフェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が３−ピリジルであり、Ｒ³が４−メトキシフェニルである、請求項１記載のテトラゾリウム塩。
6. Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ジフェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が４−ニトロナフチルであり、Ｒ³が３−チエニルである、請求項１記載のテトラゾリウム塩。
7. Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４，５−ジフェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が３，５−ジカルボキシフェニルであり、Ｒ³が３，４−メチレンジオキシフェニルである、請求項１記載のテトラゾリウム塩。
8. Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４−フェニルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が、３，４−メチレンジオキシフェニルである、請求項１記載のテトラゾリウム塩。
9. Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４−（ｐ−フルオロフェニル）チアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が、３，４−メチレンジオキシフェニルである、請求項１記載のテトラゾリウム塩。
10. Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４−フェニル−５−メチルチアゾール−２−イルになるものであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が、２−チエニル又は４−メチルフェニルである、請求項１記載のテトラゾリウム塩。
11. Ｒ¹及びＲ²は、２−チアゾリル基が４−ナフチル−５−フェニルチアゾール−２−イルであり、Ｒ⁴が、４−カルボキシフェニルであり、Ｒ³が、３，４−メチレンジオキシフェニル又は２−チエニルである、請求項１記載のテトラゾリウム塩。
12. 請求項１〜１１のいずれか１項記載のテトラゾリウム塩の１種以上を使用することを含む、還元物質の検出方法。
13. 還元物質がＮＡＤＨである、請求項１２記載の方法。
14. 還元物質が、硫化水素、ジボラン、水素化ヒ素又は水素化リンである、請求項１２記載の方法。
15. 請求項１〜１１のいずれか１項記載のテトラゾリウム塩を１種以上含有する、テトラゾリウム指示薬。

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