JPS5924155B2 - Ｎ−（ヒドロキシアルキル）−７−ヒドロキシクマリン−３−カルボキサミド - Google Patents
Ｎ−（ヒドロキシアルキル）−７−ヒドロキシクマリン−３−カルボキサミドInfo
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- JPS5924155B2 JPS5924155B2 JP56054496A JP5449681A JPS5924155B2 JP S5924155 B2 JPS5924155 B2 JP S5924155B2 JP 56054496 A JP56054496 A JP 56054496A JP 5449681 A JP5449681 A JP 5449681A JP S5924155 B2 JPS5924155 B2 JP S5924155B2
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
- C07D311/06—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2
- C07D311/08—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring
- C07D311/16—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring substituted in position 7
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- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/968—High energy substrates, e.g. fluorescent, chemiluminescent, radioactive
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、或る種の均一系螢光免疫分析試験法において
装置の較正手段として有用な螢光クマリン誘導体に関す
る。
装置の較正手段として有用な螢光クマリン誘導体に関す
る。
特に、本発明の化合物は、或る種の均一系酵素基質標識
化螢光免疫分析法において装置の較正手段として用いる
のに有利な水溶性及び分光特性を有するものである。１
９７９年の９月にＡＭＥＳＴＤＡＴＭ系列の治療薬品分
析試験キット（マイルス・ラボラトリーズ・インコーポ
レーテツド、インジアナ州、エルク・・一ト）の最初の
製品が紹介された。
化螢光免疫分析法において装置の較正手段として用いる
のに有利な水溶性及び分光特性を有するものである。１
９７９年の９月にＡＭＥＳＴＤＡＴＭ系列の治療薬品分
析試験キット（マイルス・ラボラトリーズ・インコーポ
レーテツド、インジアナ州、エルク・・一ト）の最初の
製品が紹介された。
すなわち、ＡＭＥＳＴＤＡゲンタマイシン試験キットが
それである。この試験キットに用いられる分析法は均一
系酵素基質標識化螢光免疫分析（ＳＬＦＩＡ）技術であ
る。
それである。この試験キットに用いられる分析法は均一
系酵素基質標識化螢光免疫分析（ＳＬＦＩＡ）技術であ
る。
゛゛均一系’’と呼ばれるのは放射性免疫分析（ＲＩＡ
）のような不均一系技術の場合と異なり、分析の際に分
離工程を必要としないからである。この試験キットにお
ける主たる試薬は螢光発色性酵素基質ウンベリフエリル
ーーβ−Ｄ−ガラクトシドの誘導体に共有的に結合され
たシソマイシン（ゲンタマイシンのような免疫化学挙動
を有するアミノグリコシド抗生物質）よりなる標識化複
合体である。この螢光発色性ゲンタマイシン試薬（ＦＧ
Ｒ）は分析条件下では非螢光性であるが、β−ガラクト
シダーゼを触媒と、する加水分解の結果螢光性生成物が
得られる。ゲンタマイシンに対する抗体がＦＧＲと結合
すると、ＦＧＲはβ−ガラクトシダーゼに対する基質と
しては実質的に不活性となる。一定量のＦＧＲ、一定限
度量の抗体及びゲンタマイシンを含有する試験試料によ
り次の競争的結合反応が確立される：すなわち、試験試
料中のゲンタマイシンがＦＧＲと競争して抗体と結合す
る。
）のような不均一系技術の場合と異なり、分析の際に分
離工程を必要としないからである。この試験キットにお
ける主たる試薬は螢光発色性酵素基質ウンベリフエリル
ーーβ−Ｄ−ガラクトシドの誘導体に共有的に結合され
たシソマイシン（ゲンタマイシンのような免疫化学挙動
を有するアミノグリコシド抗生物質）よりなる標識化複
合体である。この螢光発色性ゲンタマイシン試薬（ＦＧ
Ｒ）は分析条件下では非螢光性であるが、β−ガラクト
シダーゼを触媒と、する加水分解の結果螢光性生成物が
得られる。ゲンタマイシンに対する抗体がＦＧＲと結合
すると、ＦＧＲはβ−ガラクトシダーゼに対する基質と
しては実質的に不活性となる。一定量のＦＧＲ、一定限
度量の抗体及びゲンタマイシンを含有する試験試料によ
り次の競争的結合反応が確立される：すなわち、試験試
料中のゲンタマイシンがＦＧＲと競争して抗体と結合す
る。
抗体に結合しないＦＧＲはβ−ガラクトシダーゼによつ
て加水分解され螢光性物質を生成する。従つて、生成さ
れる螢光は試料中のゲンタマイシン量に依存することに
なる。螢光強度は検量線によつてゲンタマ １イシン量
と関係付けられる。螢光は螢光光度計により測定され任
意の螢光単位で記録される。
て加水分解され螢光性物質を生成する。従つて、生成さ
れる螢光は試料中のゲンタマイシン量に依存することに
なる。螢光強度は検量線によつてゲンタマ １イシン量
と関係付けられる。螢光は螢光光度計により測定され任
意の螢光単位で記録される。
最初の実際の分析結果を読取る前にオペレーターが機器
を適当な目盛倍率器にセツトできるように、ＡＭＥＳＴ
ＤＡゲンタマイシン製品には螢光性化合物Ｎ−（フエニ
ル）−J■■成る範囲調整溶液（ＲＡＳ）を内蔵してい
る。
を適当な目盛倍率器にセツトできるように、ＡＭＥＳＴ
ＤＡゲンタマイシン製品には螢光性化合物Ｎ−（フエニ
ル）−J■■成る範囲調整溶液（ＲＡＳ）を内蔵してい
る。
ＲＡＳ中のこの螢光性化合物の濃度は、分析条件、すな
わち室温、励起波長４００ｎｍ及び発光波長 二４５０
ｎｍ１において、所定稀釈容量のＲＡＳの螢光強度が検
量線上の最大ゲンタマイシン濃度の螢光強度に近似する
ようにセツトされる。従つて、オペレーターは実際の分
析実験における最大使用可能目盛に機器を予めセツトし
ておくことができる。更に、一連のＲＡＳ稀釈濃度を測
定し、観察される螢光度とＲＡＳ濃度間の相関々係の期
待される直線性をチエツクすることにより機器の性能を
試験することもできる。このＲＡＳ化合物、Ｎ−（フエ
ニル）−Jメ[ヒドロキシクマリン一３−カルボキサミド
は市販されており分光特性もよいが、水溶性が製造目的
上極めて劣るものである。
わち室温、励起波長４００ｎｍ及び発光波長 二４５０
ｎｍ１において、所定稀釈容量のＲＡＳの螢光強度が検
量線上の最大ゲンタマイシン濃度の螢光強度に近似する
ようにセツトされる。従つて、オペレーターは実際の分
析実験における最大使用可能目盛に機器を予めセツトし
ておくことができる。更に、一連のＲＡＳ稀釈濃度を測
定し、観察される螢光度とＲＡＳ濃度間の相関々係の期
待される直線性をチエツクすることにより機器の性能を
試験することもできる。このＲＡＳ化合物、Ｎ−（フエ
ニル）−Jメ[ヒドロキシクマリン一３−カルボキサミド
は市販されており分光特性もよいが、水溶性が製造目的
上極めて劣るものである。
従つて、本発明の目的は、範囲調整溶液に使用するに適
した分光特性を有し、水溶性の増加した化合物であつて
、その合成が余り複雑でない化合物を提供することであ
る。本発明は、下記一般式で示される化合物を提供する
：（式中、Ｒはヒドロキシ置換低級アルキル基、すなわ
ち、モノ一又はポリ−ヒドロキシ置換基であり、低級ア
ルキル基とは、直鎖又は分岐の炭素数１〜６のアルキル
基を表わす）。
した分光特性を有し、水溶性の増加した化合物であつて
、その合成が余り複雑でない化合物を提供することであ
る。本発明は、下記一般式で示される化合物を提供する
：（式中、Ｒはヒドロキシ置換低級アルキル基、すなわ
ち、モノ一又はポリ−ヒドロキシ置換基であり、低級ア
ルキル基とは、直鎖又は分岐の炭素数１〜６のアルキル
基を表わす）。
好ましいＮ一（ヒドロキシアルキル）−Jメ[ヒドロキシ
クマリン一３−カルボキサミドにおいては、Ｒは＋ＣＨ
２＋ＮＯＨ（ｎは２〜６の整数、通常２〜４の整数、最
も好ましくは２である）。
クマリン一３−カルボキサミドにおいては、Ｒは＋ＣＨ
２＋ＮＯＨ（ｎは２〜６の整数、通常２〜４の整数、最
も好ましくは２である）。
本発明の化合物は、Ｎ−（フエニル）−Jメ[ヒドロキシ
クマリン一３−カルボキサミドに比べて等モルベースで
約２倍の螢光度及び約２００倍の水溶性を有する。本発
明の化合物は、７ーヒドロキシクマリン一３−カルボニ
ルクロライド〔シヤーマン等、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．４
Ｏ：８０３（１９６８）〕を適当なアミノアルカノール
と非水溶媒、通常ジオキサン中、低温、通常０℃近辺に
おいて調製するのが便利である。
クマリン一３−カルボキサミドに比べて等モルベースで
約２倍の螢光度及び約２００倍の水溶性を有する。本発
明の化合物は、７ーヒドロキシクマリン一３−カルボニ
ルクロライド〔シヤーマン等、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．４
Ｏ：８０３（１９６８）〕を適当なアミノアルカノール
と非水溶媒、通常ジオキサン中、低温、通常０℃近辺に
おいて調製するのが便利である。
このアミノアルカノールはモノー又はポリ−ヒドロキシ
置換された、直鎖又は分岐低級アルカン（炭素数１〜６
）である。かＸるアミノアルカノールの代表例は２−ア
ミノプロパノール、３−アミノプロパノール、２−アミ
ノ−１−ブタノール、３−アミノ−１−ブタノール、４
−アミノ−１−ブタノール、２−アミノ−２ーメチル−
１−プロパノール、２−（アミノメチル）一２−プロパ
ノール、２−アミノ−４−メチル１−ペンタノール、５
−アミノ−１−ペンタノール、６−アミノ−１−ヘキサ
ノール及びトリス一（ヒドロキシメチル）−アミノメタ
ン等がある。好ましいアミノアルカノールはモノ一置換
直鎖アルカノールであり、２−アミノエタノールが最も
好ましい。以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、これは本発明を限定するものではない。
置換された、直鎖又は分岐低級アルカン（炭素数１〜６
）である。かＸるアミノアルカノールの代表例は２−ア
ミノプロパノール、３−アミノプロパノール、２−アミ
ノ−１−ブタノール、３−アミノ−１−ブタノール、４
−アミノ−１−ブタノール、２−アミノ−２ーメチル−
１−プロパノール、２−（アミノメチル）一２−プロパ
ノール、２−アミノ−４−メチル１−ペンタノール、５
−アミノ−１−ペンタノール、６−アミノ−１−ヘキサ
ノール及びトリス一（ヒドロキシメチル）−アミノメタ
ン等がある。好ましいアミノアルカノールはモノ一置換
直鎖アルカノールであり、２−アミノエタノールが最も
好ましい。以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、これは本発明を限定するものではない。
実施例 １Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Jメ[ヒドロ
キシクマリン一３−カルボキサミドの調製３．０５７（
０．０５モル）の２−アミノエタノールを３０ｍ１のジ
オキサンに溶解した低温溶液を撹拌しながら）これに２
．２７（０．０１モル）の７ーヒドロキシクマリン一３
−カルボニルクロライド〔シャーマン等、Ａｎａｌ．Ｃ
ｈｅｍ．４Ｏ：８０３（１９６８）〕を７５ｍ１のジオ
キサンに懸濁させた懸濁液を添加した。
キシクマリン一３−カルボキサミドの調製３．０５７（
０．０５モル）の２−アミノエタノールを３０ｍ１のジ
オキサンに溶解した低温溶液を撹拌しながら）これに２
．２７（０．０１モル）の７ーヒドロキシクマリン一３
−カルボニルクロライド〔シャーマン等、Ａｎａｌ．Ｃ
ｈｅｍ．４Ｏ：８０３（１９６８）〕を７５ｍ１のジオ
キサンに懸濁させた懸濁液を添加した。
この混合物をＯ℃で３０分間撹拌したところ、その間に
濃厚な油状物が析出し、これをスパチユラでかき混ぜた
ところ固化した。ジオキサンをデカンテーシヨンで除去
し、沈澱を水に溶解した。この水溶液のＰＨを氷酢酸で
７．０に調整したところ黄褐色の固体が析出した。この
固体析出物を水から再結晶させてＮ−（２−ヒドロキシ
エチル）一Jメ[ヒドロキシクマリン一３−カルボキサミ
ドが１，３ｙ（収率５２％）、白色固体として得られた
。Ｍ．ｐ．：２４４−２４５℃ｏ生成物の元素分析およ
び赤外スペクトル値を次に示す。元素分析値（Ｃ，２Ｈ
ｌｌＮＯ５として）ｚ計算値：Ｃｌ５７．８３；Ｈ、４
．４５；Ｎｌ５．６２実験値：Ｃｌ５７．８３；Ｈｌ４
．４７；Ｎｌ５．５７赤外スペクトル（ＫＣｌ）：１７
００ｃｍ−１（ラクトンＣＯ）；１６２０及び１５４５
ｃｍ−１（アミドＣＯ）範囲調整溶液への使用 Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Jメ[ヒドロキシクマリ
ン一３−カルボキサミドをギ酸緩衝液に溶解して範囲調
整溶液（ＲＡＳ）を形成した。
濃厚な油状物が析出し、これをスパチユラでかき混ぜた
ところ固化した。ジオキサンをデカンテーシヨンで除去
し、沈澱を水に溶解した。この水溶液のＰＨを氷酢酸で
７．０に調整したところ黄褐色の固体が析出した。この
固体析出物を水から再結晶させてＮ−（２−ヒドロキシ
エチル）一Jメ[ヒドロキシクマリン一３−カルボキサミ
ドが１，３ｙ（収率５２％）、白色固体として得られた
。Ｍ．ｐ．：２４４−２４５℃ｏ生成物の元素分析およ
び赤外スペクトル値を次に示す。元素分析値（Ｃ，２Ｈ
ｌｌＮＯ５として）ｚ計算値：Ｃｌ５７．８３；Ｈ、４
．４５；Ｎｌ５．６２実験値：Ｃｌ５７．８３；Ｈｌ４
．４７；Ｎｌ５．５７赤外スペクトル（ＫＣｌ）：１７
００ｃｍ−１（ラクトンＣＯ）；１６２０及び１５４５
ｃｍ−１（アミドＣＯ）範囲調整溶液への使用 Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Jメ[ヒドロキシクマリ
ン一３−カルボキサミドをギ酸緩衝液に溶解して範囲調
整溶液（ＲＡＳ）を形成した。
カルボキサミド誘導体の濃度は３ｍ１の緩衝液を１００
μ′のＲＡＳと混合して得られた溶液の螢光度がＡＭＥ
ＳＴＤＡ試験キツト（マイルス・ラボラトリーズ・イン
コーポレーテツド、インジァナ州、エルクハート）の分
析試験における最高標準螢光度にほマ等しくなるように
した。このＲＡＳをＡＭＥＳＴＤＡ分析に先立つて行わ
れたアミンコーボウマン分光螢光光度計（アメリカン・
インスツルメント、メアリーランド州、シルバースプリ
ングス）の設定及び螢光度チエツク試験に用いた。この
試験の概要は次の通りである。
μ′のＲＡＳと混合して得られた溶液の螢光度がＡＭＥ
ＳＴＤＡ試験キツト（マイルス・ラボラトリーズ・イン
コーポレーテツド、インジァナ州、エルクハート）の分
析試験における最高標準螢光度にほマ等しくなるように
した。このＲＡＳをＡＭＥＳＴＤＡ分析に先立つて行わ
れたアミンコーボウマン分光螢光光度計（アメリカン・
インスツルメント、メアリーランド州、シルバースプリ
ングス）の設定及び螢光度チエツク試験に用いた。この
試験の概要は次の通りである。
１．分光螢光光度計をメーカーの指示通りに準備操作を
行う；２．励起単色器を４００ｎｍに、発光単色器を４
５０ｎｍに設定する：３．光検知器からの光を避け、１
メートルマルチプラ一（ＭｅｔｅｒＭｕｌｔｉｐｌｌｅ
ｒ）゛を゛ゼロ調整゛位置にセツトする。
行う；２．励起単色器を４００ｎｍに、発光単色器を４
５０ｎｍに設定する：３．光検知器からの光を避け、１
メートルマルチプラ一（ＭｅｔｅｒＭｕｌｔｉｐｌｌｅ
ｒ）゛を゛ゼロ調整゛位置にセツトする。
゛ゼロ調整゛ノブを用いてメートルをゼロにする。４．
゛メートルマルチプラ一゜”を最高増幅設定にし、メー
トルを゛暗電流゛ノブを用いてゼロ％透過率に調整する
。
゛メートルマルチプラ一゜”を最高増幅設定にし、メー
トルを゛暗電流゛ノブを用いてゼロ％透過率に調整する
。
５．３．０ｍ１の稀釈緩衝液（０．０５Ｍビシン緩衝液
、ＰＨ８．５、０．１％ナトリウムアジド含有）をそれ
ぞれＯ、２５、５０、７５及び１００の印をつけた５本
のスペクトロペツト使い捨てプラスチツク製キユベツト
（エバーグリーン・サイエンテイフイツク製、カリホル
ニア州、ロスアンジエルス）の各々にピペツトで入れる
。
、ＰＨ８．５、０．１％ナトリウムアジド含有）をそれ
ぞれＯ、２５、５０、７５及び１００の印をつけた５本
のスペクトロペツト使い捨てプラスチツク製キユベツト
（エバーグリーン・サイエンテイフイツク製、カリホル
ニア州、ロスアンジエルス）の各々にピペツトで入れる
。
６．ＲＡＳを正確に２５、５０、７５及び１００μｌず
つ、それぞれの印のあるキユベツトに添加する。
つ、それぞれの印のあるキユベツトに添加する。
各キユベツトの内容物をおだやかに混合する。混合後、
５分間待つて螢光度の読取りを行う。７，゛１００゛の
印のキユベツトを分光螢光光度計にセツトし、適当な゛
感度゛調整の設定をした場合に、１００％の読取りを与
える゛メニトルマルチプラ一゛の設定を選択する。
５分間待つて螢光度の読取りを行う。７，゛１００゛の
印のキユベツトを分光螢光光度計にセツトし、適当な゛
感度゛調整の設定をした場合に、１００％の読取りを与
える゛メニトルマルチプラ一゛の設定を選択する。
８．残りのキユベツトの螢光強度を測定し、読取りを記
録する。
録する。
９．線形グラフ用紙に螢光強度値をｙ軸に、ＲＡＳの量
をμｌ′（−ｘ軸にプロツトする。
をμｌ′（−ｘ軸にプロツトする。
妥当な技術が用いられ、機器が正常に運転されているな
らば上記プロツトは直線になる。１０．線形応答が得ら
れるならば、未知物質の測定を現存する機器設定により
行うことができる。
らば上記プロツトは直線になる。１０．線形応答が得ら
れるならば、未知物質の測定を現存する機器設定により
行うことができる。
ＡＭＥＳＴＤＡ試験キツト分析の準備設定に当り、上記
ＲＡＳを用いたところ螢光度対ＲＡＳμｌの直線プロツ
トが得られた。
ＲＡＳを用いたところ螢光度対ＲＡＳμｌの直線プロツ
トが得られた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記一般式で示される化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒはヒドロキシ置換低級アルキル基を表わす）
。 ２ Ｒが■ＣＨ＿２■＿ｎＯＨ（ｎは２〜６の整数）で
ある特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ３ Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−７−ヒドロキシク
マリン−３−カルボキサミドである特許請求の範囲第２
項記載の化合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/140,019 US4273715A (en) | 1980-04-14 | 1980-04-14 | N-(hydroxyalkyl)-7-hydroxycoumarin-3-carboxamides |
| US140019 | 1987-12-31 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS574982A JPS574982A (en) | 1982-01-11 |
| JPS5924155B2 true JPS5924155B2 (ja) | 1984-06-07 |
Family
ID=22489350
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56054496A Expired JPS5924155B2 (ja) | 1980-04-14 | 1981-04-13 | Ｎ−（ヒドロキシアルキル）−７−ヒドロキシクマリン−３−カルボキサミド |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4273715A (ja) |
| EP (1) | EP0037979B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5924155B2 (ja) |
| CA (1) | CA1150286A (ja) |
| DE (1) | DE3162740D1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4857455A (en) * | 1982-11-26 | 1989-08-15 | Syntex (U.S.A) Inc. | Method for the determination of peroxidase using fluorogenic substrates |
| US5482986A (en) * | 1993-07-22 | 1996-01-09 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Benzopyran compound and use of the same |
| US5998593A (en) * | 1998-03-10 | 1999-12-07 | Abbott Laboratories | Fluorescent enzyme substrates |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1369991A (fr) * | 1963-04-05 | 1964-08-21 | Lipha | Nouvelles carboxamides-3 hydroxy-4 coumarines et leurs procédés de préparation |
| US3511856A (en) * | 1968-06-24 | 1970-05-12 | Dow Chemical Co | 3-(alkoxyphenylcarbamoyl)-4-hydroxycoumarins |
| US4078075A (en) * | 1976-09-20 | 1978-03-07 | Ciba-Geigy Corporation | Insecticidally active 3-N-(4-trifluoromethylphenyl)-carbamoyl-4-hydroxy-coumarin |
-
1980
- 1980-04-14 US US06/140,019 patent/US4273715A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-11-28 CA CA000365725A patent/CA1150286A/en not_active Expired
-
1981
- 1981-04-03 EP EP81102511A patent/EP0037979B1/en not_active Expired
- 1981-04-03 DE DE8181102511T patent/DE3162740D1/de not_active Expired
- 1981-04-13 JP JP56054496A patent/JPS5924155B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3162740D1 (de) | 1984-04-26 |
| US4273715A (en) | 1981-06-16 |
| JPS574982A (en) | 1982-01-11 |
| EP0037979A3 (en) | 1982-06-02 |
| EP0037979A2 (en) | 1981-10-21 |
| EP0037979B1 (en) | 1984-03-21 |
| CA1150286A (en) | 1983-07-19 |
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