JPH06206846A - 新規生理活性物質ベキノスタチンｃおよびｄ、その製造法およびその用途 - Google Patents
新規生理活性物質ベキノスタチンｃおよびｄ、その製造法およびその用途Info
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- JPH06206846A JPH06206846A JP34627392A JP34627392A JPH06206846A JP H06206846 A JPH06206846 A JP H06206846A JP 34627392 A JP34627392 A JP 34627392A JP 34627392 A JP34627392 A JP 34627392A JP H06206846 A JPH06206846 A JP H06206846A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 グルタチオントランスフェラーゼ阻害剤とし
て有用な新規生理活性物質ベキノスタチンＣおよびＤが
提供される。 【構成】 ストレプトミセス属に属するベキノスタチン
生産菌の培養物から、下記式(I) 【化１】 で表わされる新規生理活性物質ベキノスタチンＣ（Ｒ＝
ＣＯＯＨ）およびＤ（Ｒ＝Ｈ）を得ることができ、これ
ら化合物はグルタチオントランスフェラーゼ阻害剤とし
て、有用である。
て有用な新規生理活性物質ベキノスタチンＣおよびＤが
提供される。 【構成】 ストレプトミセス属に属するベキノスタチン
生産菌の培養物から、下記式(I) 【化１】 で表わされる新規生理活性物質ベキノスタチンＣ（Ｒ＝
ＣＯＯＨ）およびＤ（Ｒ＝Ｈ）を得ることができ、これ
ら化合物はグルタチオントランスフェラーゼ阻害剤とし
て、有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗グルタチオントランス
フェラーゼ作用を有する新規な生理活性物質ベキノスタ
チン（Ｂｅｑｕｉｎｏｓｔａｔｉｎ）ＣおよびＤ、その
製造法およびその用途に関する。
フェラーゼ作用を有する新規な生理活性物質ベキノスタ
チン（Ｂｅｑｕｉｎｏｓｔａｔｉｎ）ＣおよびＤ、その
製造法およびその用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】グルタチオントランスフェラーゼは細胞
膜及び細胞質に局在する酵素である。細胞膜酵素に対す
る阻害物質は、免疫調節作用を持つことが報告されてい
る（Ｔ．Ａｏｙａｇｉ，“Ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉ
ｂｉｔｏｒ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｔ
ｒｏｌ”，Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ
ｓ ｆｒｏｍ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ，ｅｄｓ
ｂｙ Ｍ．Ｅ．Ｂｕｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｕ．Ｇｒａ
ｅｆｅ，第４０３〜４１８頁、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｂ．Ｖ．，Ａｍｓ
ｔｅｒｄａｍ，１９８９年）。したがって、グルタチオ
ントランスフェラーゼに対する阻害物質においても、免
疫調節作用が期待される。さらに、膜結合性グルタチオ
ントランスフェラーゼは、ロイコトリエンＣ4 合成酵素
としても働き、炎症・アレルギー反応に深く関わること
が報告されている〔蛋白質・核酸・酵素、第３３巻、１
５６４〜１５７３頁（１９８８）〕。また、細胞質性グ
ルタチオントランスフェラーゼは、抗癌剤耐性腫瘍細胞
の耐性機構に深く関わることが報告されている〔癌と化
学療法、第１６巻、５９２〜５９８頁（１９８９）〕。
グルタチオントランスフェラーゼ阻害物質としては、イ
ンドメタシン（Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）及びメクロ
フェナン酸（Ｍｅｃｌｏｆｅｎａｍｉｃ ａｃｉｄ）等
が報告されている〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ
Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍ
ｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、第１１２巻、９８０〜９８５頁
（１９８３）〕。
膜及び細胞質に局在する酵素である。細胞膜酵素に対す
る阻害物質は、免疫調節作用を持つことが報告されてい
る（Ｔ．Ａｏｙａｇｉ，“Ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉ
ｂｉｔｏｒ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｔ
ｒｏｌ”，Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ
ｓ ｆｒｏｍ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ，ｅｄｓ
ｂｙ Ｍ．Ｅ．Ｂｕｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｕ．Ｇｒａ
ｅｆｅ，第４０３〜４１８頁、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｂ．Ｖ．，Ａｍｓ
ｔｅｒｄａｍ，１９８９年）。したがって、グルタチオ
ントランスフェラーゼに対する阻害物質においても、免
疫調節作用が期待される。さらに、膜結合性グルタチオ
ントランスフェラーゼは、ロイコトリエンＣ4 合成酵素
としても働き、炎症・アレルギー反応に深く関わること
が報告されている〔蛋白質・核酸・酵素、第３３巻、１
５６４〜１５７３頁（１９８８）〕。また、細胞質性グ
ルタチオントランスフェラーゼは、抗癌剤耐性腫瘍細胞
の耐性機構に深く関わることが報告されている〔癌と化
学療法、第１６巻、５９２〜５９８頁（１９８９）〕。
グルタチオントランスフェラーゼ阻害物質としては、イ
ンドメタシン（Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）及びメクロ
フェナン酸（Ｍｅｃｌｏｆｅｎａｍｉｃ ａｃｉｄ）等
が報告されている〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ
Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍ
ｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、第１１２巻、９８０〜９８５頁
（１９８３）〕。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】インドメタシン及びメ
クロフェナン酸等のグルタチオントランスフェラーゼ阻
害物質は、グルタチオントランスフェラーゼに対する特
異性が低い。したがって、グルタチオントランスフェラ
ーゼに対する特異性の高い阻害物質が望まれている。本
発明の目的は、そのような特異性の高いグルタチオント
ランスフェラーゼ阻害活性を有する生理活性物質、その
製造法及びその用途を提供することにある。
クロフェナン酸等のグルタチオントランスフェラーゼ阻
害物質は、グルタチオントランスフェラーゼに対する特
異性が低い。したがって、グルタチオントランスフェラ
ーゼに対する特異性の高い阻害物質が望まれている。本
発明の目的は、そのような特異性の高いグルタチオント
ランスフェラーゼ阻害活性を有する生理活性物質、その
製造法及びその用途を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明の第１の発明は新規生理活性物質ベキノスタチンＣ
およびＤに関する発明であって、下記式(1) ：
発明の第１の発明は新規生理活性物質ベキノスタチンＣ
およびＤに関する発明であって、下記式(1) ：
【化２】 （式中ＲはＣＯＯＨ又はＨを示す。）で表される化合物
であることを特徴とする生理活性物質ベキノスタチンＣ
およびＤ又はその薬学的に許容し得る塩を提供するもの
である。
であることを特徴とする生理活性物質ベキノスタチンＣ
およびＤ又はその薬学的に許容し得る塩を提供するもの
である。
【０００５】式(1) で表される化合物のうち、ベキノス
タチンＣ（Ｒ＝ＣＯＯＨの化合物）は下記式で表され
る。
タチンＣ（Ｒ＝ＣＯＯＨの化合物）は下記式で表され
る。
【化３】 ベキノスタチンＣの理化学的性質は下記の通りである。 ベキノスタチンＣの理化学的性状 (1) 色及び形状：赤色粉末 (2) 分子式：Ｃ28Ｈ22Ｏ8 (3) 分子量：４８６ ＦＡＢ−ＭＳ（Ｎｅｇａｔｉｖ
ｅ）ｍ／ｚ４８５（Ｍ−Ｈ）- (4) 融点：３０６〜３０８℃（ｄｅｃ．） (5) 紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１に示す。 (6) 赤外線吸収スペクトル：添付図面の図２に示す。 (7) 溶解性：ジメチルスルホキシドに可溶であり、水に
不溶である。 (8) 薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．１２ シリカゲル（メルク社製Ａｒｔ．５７１５）薄層を用
い、展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（４：
１）を用いた。
ｅ）ｍ／ｚ４８５（Ｍ−Ｈ）- (4) 融点：３０６〜３０８℃（ｄｅｃ．） (5) 紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１に示す。 (6) 赤外線吸収スペクトル：添付図面の図２に示す。 (7) 溶解性：ジメチルスルホキシドに可溶であり、水に
不溶である。 (8) 薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．１２ シリカゲル（メルク社製Ａｒｔ．５７１５）薄層を用
い、展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（４：
１）を用いた。
【０００６】式（Ｉ）で表される化合物のうち、ベキノ
スタチンＤ（Ｒ＝Ｈの化合物）は下記式で表される。
スタチンＤ（Ｒ＝Ｈの化合物）は下記式で表される。
【化４】 ベキノスタチンＤの理化学的性質は下記の通りである。 ベキノスタチンＤの理化学的性状 (1) 色及び形状：赤色粉末 (2) 分子式：Ｃ27Ｈ22Ｏ6 (3) 分子量：４４２ ＦＡＢ−ＭＳ（Ｎｅｇａｔｉｖ
ｅ）ｍ／ｚ４４１（Ｍ−Ｈ）- (4) 融点：３１０〜３１２℃（ｄｅｃ．） (5) 紫外線吸収スペクトル：添付図面の図３に示す。 (6) 赤外線吸収スペクトル：添付図面の図４に示す。 (7) 水素核核磁気共鳴スペクトル：添付図面の図５に示
す。 (8) 炭素核核磁気共鳴スペクトル：添付図面の図６に示
す。 (9) 溶解性：ジメチルスルホキシド、メタノールに可溶
であり、水に不溶である。 (10)薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．８４ シリカゲル（メルク社製Ａｒｔ．５７１５）薄層を用
い、展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（４：
１）を用いた。
ｅ）ｍ／ｚ４４１（Ｍ−Ｈ）- (4) 融点：３１０〜３１２℃（ｄｅｃ．） (5) 紫外線吸収スペクトル：添付図面の図３に示す。 (6) 赤外線吸収スペクトル：添付図面の図４に示す。 (7) 水素核核磁気共鳴スペクトル：添付図面の図５に示
す。 (8) 炭素核核磁気共鳴スペクトル：添付図面の図６に示
す。 (9) 溶解性：ジメチルスルホキシド、メタノールに可溶
であり、水に不溶である。 (10)薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：０．８４ シリカゲル（メルク社製Ａｒｔ．５７１５）薄層を用
い、展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（４：
１）を用いた。
【０００７】ベキノスタチンＣおよびＤはその薬学的に
許容し得る塩の形態にあってもよく、このような塩とし
ては、例えばナトリウム、カリウム、リチウムなどのア
ルカリ金属およびカルシウムなどのアルカリ土類金属等
との塩が挙げられる。
許容し得る塩の形態にあってもよく、このような塩とし
ては、例えばナトリウム、カリウム、リチウムなどのア
ルカリ金属およびカルシウムなどのアルカリ土類金属等
との塩が挙げられる。
【０００８】本発明の第２の発明は、新規生理活性物質
ベキノスタチンＣおよびＤの製造法に関する発明であっ
て、ストレプトミセス属に属するベキノスタチン生産菌
を栄養培地中で培養し、その培養物から上記式（Ｉ）で
表される生理活性物質ベキノスタチンＣおよびＤを分離
採取することを特徴とする。本発明に使用されるベキノ
スタチン生産菌の１例としては、本発明者らにより東京
都杉並区の土壌より分離された放線菌であって、ＭＩ３
８４−ＤＦ１２の菌株番号が付された菌株がある。ＭＩ
３８４−ＤＦ１２株の菌学的性状は次の通りである。
ベキノスタチンＣおよびＤの製造法に関する発明であっ
て、ストレプトミセス属に属するベキノスタチン生産菌
を栄養培地中で培養し、その培養物から上記式（Ｉ）で
表される生理活性物質ベキノスタチンＣおよびＤを分離
採取することを特徴とする。本発明に使用されるベキノ
スタチン生産菌の１例としては、本発明者らにより東京
都杉並区の土壌より分離された放線菌であって、ＭＩ３
８４−ＤＦ１２の菌株番号が付された菌株がある。ＭＩ
３８４−ＤＦ１２株の菌学的性状は次の通りである。
【０００９】1. 形態 ＭＩ３８４−ＤＦ１２株は、顕微鏡下で分枝した基中菌
糸より気菌糸を伸長する。気菌糸は通常まっすぐである
が、らせん状の胞子鎖を有し、胞子の連鎖は２０個以上
を数える。特徴的な形態として直径１．５〜６ミクロン
の偽似胞子のう（Ｐｓｅｕｄｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）
を形成する。輪生枝および胞子のうは認められない。胞
子の大きさは約０．５〜０．６×０．７×０．８ミクロ
ンであり、その表面は平滑である。
糸より気菌糸を伸長する。気菌糸は通常まっすぐである
が、らせん状の胞子鎖を有し、胞子の連鎖は２０個以上
を数える。特徴的な形態として直径１．５〜６ミクロン
の偽似胞子のう（Ｐｓｅｕｄｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）
を形成する。輪生枝および胞子のうは認められない。胞
子の大きさは約０．５〜０．６×０．７×０．８ミクロ
ンであり、その表面は平滑である。
【００１０】2. 各種培地における生育状態 色の記載について以下の〔 〕内に示す標準は、コンテ
ィナー・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・
ハーモニー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐ
ｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａのｃｏｌｏｒ
ｈａｒｍｏｎｙ ｍａｎｕａｌ）を用いた。 (1) シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） 発育は明るい茶〔４ｎｇ，Ｌｔ Ｂｒｏｗｎ〕〜暗い茶
〔３ｐｎ，Ｄｋ Ｂｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は、認め
られない。溶解性色素はかすかに茶色味を帯びる。 (2) グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培
養） 発育はうす茶〔３ｉｅ，Ｃａｍｅｌ〕〜赤茶〔５ｕｉ，
Ｒｏｓｅｗｏｏｄ Ｂｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は認め
られない。溶解性色素はわずかにピンク色を帯びる。
ィナー・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・
ハーモニー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐ
ｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａのｃｏｌｏｒ
ｈａｒｍｏｎｙ ｍａｎｕａｌ）を用いた。 (1) シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） 発育は明るい茶〔４ｎｇ，Ｌｔ Ｂｒｏｗｎ〕〜暗い茶
〔３ｐｎ，Ｄｋ Ｂｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は、認め
られない。溶解性色素はかすかに茶色味を帯びる。 (2) グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培
養） 発育はうす茶〔３ｉｅ，Ｃａｍｅｌ〕〜赤茶〔５ｕｉ，
Ｒｏｓｅｗｏｏｄ Ｂｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は認め
られない。溶解性色素はわずかにピンク色を帯びる。
【００１１】(3) グリセリン・アスパラギン寒天培地
（ＩＳＰ−培地５、２７℃培養） 茶灰〔４ｎｉ，Ｓｐｉｃｅ Ｂｒｏｗｎ〕〜暗いオリー
ブ灰〔ｌｐｏ，Ｅｂｏｎｙ〕の発育上に、まばらに白い
気菌糸を着生する。溶解性色素はわずかにピンク色を帯
びる。発育の色調および溶解性色素は０．０５Ｎ−Ｎａ
ＯＨの添加により緑色を帯びるが、０．０５Ｎ−ＨＣｌ
の添加によって変化しなかった。 (4) スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、２
７℃培養） 茶灰〔４ｎｉ，Ｓｐｉｃｅ Ｂｒｏｗｎ〕〜暗い茶〔４
ｐｎ，Ｄｋ Ｂｒｏｗｎ〕の発育上に、綿状の白い気菌
糸を着生する。溶解性色素はかすかに茶色味を帯びる。
発育の色調および溶解性色素は０．０５Ｎ−ＮａＯＨの
添加により緑色を帯びるが、０．０５Ｎ−ＨＣｌの添加
によって変化しなかった。
（ＩＳＰ−培地５、２７℃培養） 茶灰〔４ｎｉ，Ｓｐｉｃｅ Ｂｒｏｗｎ〕〜暗いオリー
ブ灰〔ｌｐｏ，Ｅｂｏｎｙ〕の発育上に、まばらに白い
気菌糸を着生する。溶解性色素はわずかにピンク色を帯
びる。発育の色調および溶解性色素は０．０５Ｎ−Ｎａ
ＯＨの添加により緑色を帯びるが、０．０５Ｎ−ＨＣｌ
の添加によって変化しなかった。 (4) スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、２
７℃培養） 茶灰〔４ｎｉ，Ｓｐｉｃｅ Ｂｒｏｗｎ〕〜暗い茶〔４
ｐｎ，Ｄｋ Ｂｒｏｗｎ〕の発育上に、綿状の白い気菌
糸を着生する。溶解性色素はかすかに茶色味を帯びる。
発育の色調および溶解性色素は０．０５Ｎ−ＮａＯＨの
添加により緑色を帯びるが、０．０５Ｎ−ＨＣｌの添加
によって変化しなかった。
【００１２】(5) チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地
７、２７℃培養） 発育は灰味茶〔３ｎｉ，Ｃｌｏｖｅ Ｂｒｏｗｎ〕〜暗
い茶〔４ｎｌ，ＤｋＢｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は認め
られない。溶解性色素は茶色味を帯びる。 (6) 栄養寒天培地（２７℃培養） 発育はうす茶〔３ｎｇ，Ｙｅｌｌｏｗ Ｍａｐｌｅ〕〜
灰味茶〔３ｎｉ，Ｃｌｏｖｅ Ｂｒｏｗｎ〕、気菌糸の
着生は認められない。溶解性色素は茶色味を帯びる。 (7) イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、２７
℃培養） うす黄茶〔２ｐｇ，Ｍｕｓｔａｒｄ Ｇｏｌｄ〕〜うす
茶〔２ｎｉ，Ｍｕｓｔａｒｄ Ｂｒｏｗｎ〕の発育上
に、白い綿状の気菌糸を着生する。溶解性色素は認めら
れない。
７、２７℃培養） 発育は灰味茶〔３ｎｉ，Ｃｌｏｖｅ Ｂｒｏｗｎ〕〜暗
い茶〔４ｎｌ，ＤｋＢｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は認め
られない。溶解性色素は茶色味を帯びる。 (6) 栄養寒天培地（２７℃培養） 発育はうす茶〔３ｎｇ，Ｙｅｌｌｏｗ Ｍａｐｌｅ〕〜
灰味茶〔３ｎｉ，Ｃｌｏｖｅ Ｂｒｏｗｎ〕、気菌糸の
着生は認められない。溶解性色素は茶色味を帯びる。 (7) イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、２７
℃培養） うす黄茶〔２ｐｇ，Ｍｕｓｔａｒｄ Ｇｏｌｄ〕〜うす
茶〔２ｎｉ，Ｍｕｓｔａｒｄ Ｂｒｏｗｎ〕の発育上
に、白い綿状の気菌糸を着生する。溶解性色素は認めら
れない。
【００１３】(8) オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培
地３、２７℃培養） うすピンク〔５ｂａ，Ｓｈｅｌｌ，Ｐｉｎｋ〕〜うす黄
茶〔２１ｇ，Ｍｕｓｔａｒｄ Ｔａｎ〕の発育上に、明
るい灰色〔１３ｃｂ，Ｐｅａｒｌ Ｇｒａｙ〕の気菌糸
をうっすらとまばらに着生する。溶解性色素はうすピン
クを帯びる。 (9) グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） 発育はピンク〔６ｉｅ，Ｒｅｄｗｏｏｄ〕〜灰味赤〔６
１ｇ，Ｄｋ Ｒｅｄｗｏｏｄ〕、気菌糸の着生は認めら
れない。溶解性色素はわずかにうすピンクを帯びる。 (10) スターチ寒天培地（２７℃培養） 発育はうす茶〔３ｎｇ，Ｙｅｌｌｏｗ Ｍａｐｌｅ〕〜
暗い茶〔４Ｐｎ，ＤｋＢｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は認
められない。溶解性色素はわずかにうすピンクを帯び
る。 (11) リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養） 発育はうすいオリーブ〔１ｌｅ，Ｏｌｉｖｅ Ｙｅｌｌ
ｏｗ〕、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められな
い。
地３、２７℃培養） うすピンク〔５ｂａ，Ｓｈｅｌｌ，Ｐｉｎｋ〕〜うす黄
茶〔２１ｇ，Ｍｕｓｔａｒｄ Ｔａｎ〕の発育上に、明
るい灰色〔１３ｃｂ，Ｐｅａｒｌ Ｇｒａｙ〕の気菌糸
をうっすらとまばらに着生する。溶解性色素はうすピン
クを帯びる。 (9) グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） 発育はピンク〔６ｉｅ，Ｒｅｄｗｏｏｄ〕〜灰味赤〔６
１ｇ，Ｄｋ Ｒｅｄｗｏｏｄ〕、気菌糸の着生は認めら
れない。溶解性色素はわずかにうすピンクを帯びる。 (10) スターチ寒天培地（２７℃培養） 発育はうす茶〔３ｎｇ，Ｙｅｌｌｏｗ Ｍａｐｌｅ〕〜
暗い茶〔４Ｐｎ，ＤｋＢｒｏｗｎ〕、気菌糸の着生は認
められない。溶解性色素はわずかにうすピンクを帯び
る。 (11) リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養） 発育はうすいオリーブ〔１ｌｅ，Ｏｌｉｖｅ Ｙｅｌｌ
ｏｗ〕、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められな
い。
【００１４】 (12) セルロース（濾紙片添加合成液、２７℃培養） 培養後３週間観察したが、生育を認めなかった。 (13) ゼラチン穿刺培養（１５％単純ゼラチン培地、２
０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２４
℃培養） 単純ゼラチン培地の場合は、発育はうす茶、気菌糸は着
生せず、溶解性色素は茶色味を帯びる。グルコース・ペ
プトン・ゼラチン培地では、発育はうす黄茶、気菌糸は
着生せず、溶解性色素は茶色味を帯びる。 (14)脱脂牛乳（３７℃培養） 発育はうす茶、気菌糸は着生せず、溶解性色素は褐色を
呈する。
０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２４
℃培養） 単純ゼラチン培地の場合は、発育はうす茶、気菌糸は着
生せず、溶解性色素は茶色味を帯びる。グルコース・ペ
プトン・ゼラチン培地では、発育はうす黄茶、気菌糸は
着生せず、溶解性色素は茶色味を帯びる。 (14)脱脂牛乳（３７℃培養） 発育はうす茶、気菌糸は着生せず、溶解性色素は褐色を
呈する。
【００１５】3. 生理的性質 (1) 生育温度範囲 イースト・スターチ寒天培地（可溶性デンプン１．０
％、イースト・エキス０．２％、ひも寒天３．０％、pH
７．０）を用い、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３
７℃、５０℃の各温度で試験した結果、２０℃、２４
℃、２７℃、３０℃、３７℃で生育したが、２０℃での
生育は極めて悪く、５０℃では生育しない。生育至適温
度は２７℃〜３０℃付近と思われる。 (2) ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、２０
℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２７℃
培養） １５％単純ゼラチン培地においては、液化を示さず、グ
ルコース・ペプトン・ゼラチン培地では培養後２１日目
に弱い液化を示した。その作用は弱い方である。
％、イースト・エキス０．２％、ひも寒天３．０％、pH
７．０）を用い、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３
７℃、５０℃の各温度で試験した結果、２０℃、２４
℃、２７℃、３０℃、３７℃で生育したが、２０℃での
生育は極めて悪く、５０℃では生育しない。生育至適温
度は２７℃〜３０℃付近と思われる。 (2) ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、２０
℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２７℃
培養） １５％単純ゼラチン培地においては、液化を示さず、グ
ルコース・ペプトン・ゼラチン培地では培養後２１日目
に弱い液化を示した。その作用は弱い方である。
【００１６】(3) スターチの加水分解（スターチ・無
機塩寒天培地及びスターチ寒天培地、いずれも２７℃培
養） いずれの培地でも、培養後３日目には水解性を認めその
作用は中等度である。 (4) 脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 培養後６日目頃よりペプトン化が始まり１３日目頃には
完了する。その作用は中等度〜強い方である。凝固は、
認められない。
機塩寒天培地及びスターチ寒天培地、いずれも２７℃培
養） いずれの培地でも、培養後３日目には水解性を認めその
作用は中等度である。 (4) 脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 培養後６日目頃よりペプトン化が始まり１３日目頃には
完了する。その作用は中等度〜強い方である。凝固は、
認められない。
【００１７】(5) メラニン様色素の生成（トリプトン
・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イー
スト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培
地、 ＩＳＰ−培地７；いずれも２７℃培養） トリプトン・イースト・ブロス（ＩＳＰ−培地１）、ペ
プトン・イースト・鉄寒天培地（ＩＳＰ−培地６）は陽
性、チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７）はわずかにメ
ラニン様色素を生成する。 (6) 炭素減の利用性（プリドハム：ゴトリーブ寒天培
地、ＩＳＰ−培地９、２７℃培養） Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトー
ス、シュクロース、イノシトール、Ｄ−マンニトールを
利用して発育する。Ｄ−キシロースもおそらく利用す
る。ラムノース、ラフィノース、ラクトースは利用しな
い。
・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イー
スト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培
地、 ＩＳＰ−培地７；いずれも２７℃培養） トリプトン・イースト・ブロス（ＩＳＰ−培地１）、ペ
プトン・イースト・鉄寒天培地（ＩＳＰ−培地６）は陽
性、チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７）はわずかにメ
ラニン様色素を生成する。 (6) 炭素減の利用性（プリドハム：ゴトリーブ寒天培
地、ＩＳＰ−培地９、２７℃培養） Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトー
ス、シュクロース、イノシトール、Ｄ−マンニトールを
利用して発育する。Ｄ−キシロースもおそらく利用す
る。ラムノース、ラフィノース、ラクトースは利用しな
い。
【００１８】(7) リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰
寒天培地、２７℃培養） 陰性である。 (8) 硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養） 陽性である。 (9) セルロースの分解（濾紙片添加合成液、２７℃培
養） 生育しない。
寒天培地、２７℃培養） 陰性である。 (8) 硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養） 陽性である。 (9) セルロースの分解（濾紙片添加合成液、２７℃培
養） 生育しない。
【００１９】以上の性状を要約すると、ＭＩ３８４−Ｄ
Ｆ１２株はその形態上、らせん形成および特徴的な偽似
胞子のうを有する気菌糸を伸長する。胞子の連鎖は２０
個以上を数え、その表面は平滑である。種々の培地で、
発育はうす茶〜暗い茶、特定な培地ではピンク色を呈す
る。気菌糸の着生は認めないことが多いが、ＩＳＰ−培
地２、３、４、５では白い気菌糸を着生する。溶解性色
素は、培地によりピンク色を帯びる場合と褐色を帯びる
場合がある。メラニン様色素の生成は陽性、蛋白分解力
は中等度、スターチの水解性も中等度である。
Ｆ１２株はその形態上、らせん形成および特徴的な偽似
胞子のうを有する気菌糸を伸長する。胞子の連鎖は２０
個以上を数え、その表面は平滑である。種々の培地で、
発育はうす茶〜暗い茶、特定な培地ではピンク色を呈す
る。気菌糸の着生は認めないことが多いが、ＩＳＰ−培
地２、３、４、５では白い気菌糸を着生する。溶解性色
素は、培地によりピンク色を帯びる場合と褐色を帯びる
場合がある。メラニン様色素の生成は陽性、蛋白分解力
は中等度、スターチの水解性も中等度である。
【００２０】なお、細胞壁に含まれる２，６−ジアミノ
ピメリン酸はＬＬ−型であった。これらの性状より、Ｍ
Ｉ３８４−ＤＦ１２株はストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ）に属すると考えられる。近縁の既知菌
種を検索すると、ＭＩ３８４−ＤＦ１２株の特徴である
偽似胞子のうを有するものとして次の２種があげられ
た。すなわち、ストレプトミセス・パラドクス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐａｒａｄｏｃｕｓ，Ｉｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，３６巻、５７
３〜５７６頁、１９８６年；Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａ
ｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；８
巻、６１〜６４頁、１９８６年）およびストレプトミセ
ス・ヴィタミノフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｖｉｔａｍｉｎｏｐｈｉｌｌｕｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉ
ｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，３６巻、５７３〜５７６
頁、１９８６年；Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，８巻、６１〜
６４頁、１９８６年；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ，３３巻、５５７〜５６４頁、１９８３
年）である。このうち、ストレプトミセス・ヴィタミノ
フィルスとは、ビタミン要求性において区別された。Ｍ
Ｉ３８４−ＤＦ１２をストレプトミセス・エスピー（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＭＩ３８４−ＤＦ１
２と同定した。
ピメリン酸はＬＬ−型であった。これらの性状より、Ｍ
Ｉ３８４−ＤＦ１２株はストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ）に属すると考えられる。近縁の既知菌
種を検索すると、ＭＩ３８４−ＤＦ１２株の特徴である
偽似胞子のうを有するものとして次の２種があげられ
た。すなわち、ストレプトミセス・パラドクス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐａｒａｄｏｃｕｓ，Ｉｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，３６巻、５７
３〜５７６頁、１９８６年；Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａ
ｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；８
巻、６１〜６４頁、１９８６年）およびストレプトミセ
ス・ヴィタミノフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｖｉｔａｍｉｎｏｐｈｉｌｌｕｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉ
ｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，３６巻、５７３〜５７６
頁、１９８６年；Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，８巻、６１〜
６４頁、１９８６年；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ，３３巻、５５７〜５６４頁、１９８３
年）である。このうち、ストレプトミセス・ヴィタミノ
フィルスとは、ビタミン要求性において区別された。Ｍ
Ｉ３８４−ＤＦ１２をストレプトミセス・エスピー（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＭＩ３８４−ＤＦ１
２と同定した。
【００２１】ＭＩ３８４−ＤＦ１２株を工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託申請し、平成２年２月８日に微
工研菌寄第１１２７０号として受託された。平成３年１
月１８日にブタペスト条約に基づく国際寄託に移管さ
れ、微工研条寄第３２２８号（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２２
８）の受託番号が付与されている。
物工業技術研究所に寄託申請し、平成２年２月８日に微
工研菌寄第１１２７０号として受託された。平成３年１
月１８日にブタペスト条約に基づく国際寄託に移管さ
れ、微工研条寄第３２２８号（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２２
８）の受託番号が付与されている。
【００２２】ＭＩ３８４−ＤＦ１２株は他の放線菌の場
合に見られるように、その性状が変化しやすい。たとえ
ば、ＭＩ３８４−ＤＦ１２株に由来する突然変異株（自
然発生または誘発性）、形質融合体または遺伝子組み換
え体であっても、ベキノスタチンの生産能を有するスト
レプトミセス属の菌はすべて本発明の方法に使用するこ
とができる。
合に見られるように、その性状が変化しやすい。たとえ
ば、ＭＩ３８４−ＤＦ１２株に由来する突然変異株（自
然発生または誘発性）、形質融合体または遺伝子組み換
え体であっても、ベキノスタチンの生産能を有するスト
レプトミセス属の菌はすべて本発明の方法に使用するこ
とができる。
【００２３】本発明の方法では、前記の菌を通常の微生
物が利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。炭素
源としては、グルコース、水飴、デキストリン、シュク
ロース、でんぷん、糖蜜、動・植物油等を使用できる。
また、窒素源としては、大豆粉、小麦、小麦胚芽、コー
ンスティープ・リカー、綿実かす、肉エキス、ペプト
ン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素
等を利用できる。その他、必要に応じ、ナトリウム、コ
バルト、塩素、硫酸、燐酸、及びその他のイオンを生成
することのできる無機塩類を添加することは有効であ
る。また、菌の生育を助け、生理活性物質ベキノスタチ
ンの生産を促進するような有機及び無機物を適当に添加
することができる。
物が利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。炭素
源としては、グルコース、水飴、デキストリン、シュク
ロース、でんぷん、糖蜜、動・植物油等を使用できる。
また、窒素源としては、大豆粉、小麦、小麦胚芽、コー
ンスティープ・リカー、綿実かす、肉エキス、ペプト
ン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素
等を利用できる。その他、必要に応じ、ナトリウム、コ
バルト、塩素、硫酸、燐酸、及びその他のイオンを生成
することのできる無機塩類を添加することは有効であ
る。また、菌の生育を助け、生理活性物質ベキノスタチ
ンの生産を促進するような有機及び無機物を適当に添加
することができる。
【００２４】培養法としては、好気的条件での培養法、
特に深部培養法が適している。培養に適当な温度は１５
〜３７℃であるが、多くの場合、２６〜３０℃付近で培
養する。生理活性物質ベキノスタチンの生産は培地や培
養条件により異なるが、振盪培養、タンク培養とも通常
１〜１０日の間でその蓄積が最高に達する。培養物中の
生理活性物質ベキノスタチンの蓄積量が最高になった時
に、培養を停止し、培養液から目的物質を単離精製す
る。
特に深部培養法が適している。培養に適当な温度は１５
〜３７℃であるが、多くの場合、２６〜３０℃付近で培
養する。生理活性物質ベキノスタチンの生産は培地や培
養条件により異なるが、振盪培養、タンク培養とも通常
１〜１０日の間でその蓄積が最高に達する。培養物中の
生理活性物質ベキノスタチンの蓄積量が最高になった時
に、培養を停止し、培養液から目的物質を単離精製す
る。
【００２５】本発明によって得られるベキノスタチンの
培養液からの採取にあたっては、その性状を利用した通
常の分離手段を適宜組み合わせて抽出して精製すること
ができる。ベキノスタチンＣおよびＤは培養濾液及び菌
体の両方に存在する。培養濾液よりは、酢酸エチル等の
水不混和性の有機溶媒で抽出できる。菌体よりは、メタ
ノール、アセトン等の有機溶剤で抽出後、抽出液を減圧
濃縮し、培養濾液と同様の方法で更に溶媒抽出すること
ができる。
培養液からの採取にあたっては、その性状を利用した通
常の分離手段を適宜組み合わせて抽出して精製すること
ができる。ベキノスタチンＣおよびＤは培養濾液及び菌
体の両方に存在する。培養濾液よりは、酢酸エチル等の
水不混和性の有機溶媒で抽出できる。菌体よりは、メタ
ノール、アセトン等の有機溶剤で抽出後、抽出液を減圧
濃縮し、培養濾液と同様の方法で更に溶媒抽出すること
ができる。
【００２６】上述の方法に加え、脂溶性物質の採取に用
いられる公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、
ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー
よりのかき取り、高速液体クロマトグラフィー等を適宜
組み合わせ、あるいは繰り返すことによってベキノスタ
チンＣ又はＤを純粋に単離することができる。
いられる公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、
ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー
よりのかき取り、高速液体クロマトグラフィー等を適宜
組み合わせ、あるいは繰り返すことによってベキノスタ
チンＣ又はＤを純粋に単離することができる。
【００２７】ベキノスタチンＣ又はＤの薬学的に許容し
得る塩は、公知の方法によって製造することができ、例
えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウ
ム、水酸化カルシウムなどを含む溶液で対応するベキノ
スタチンを処理することによって得ることができる。
得る塩は、公知の方法によって製造することができ、例
えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウ
ム、水酸化カルシウムなどを含む溶液で対応するベキノ
スタチンを処理することによって得ることができる。
【００２８】本発明の第３の発明は、ベキノスタチンＣ
又はＤまたはその薬学的に許容し得る塩及び医薬用添加
剤とからなるグルタチオントランスフェラーゼ阻害剤で
ある。医薬用添加剤は特に制限はなく、一般的に使用さ
れるものが使用できる。
又はＤまたはその薬学的に許容し得る塩及び医薬用添加
剤とからなるグルタチオントランスフェラーゼ阻害剤で
ある。医薬用添加剤は特に制限はなく、一般的に使用さ
れるものが使用できる。
【００２９】組成物中の有効成分（ベキノスタチンＣ又
はＤ）の割合はその剤形などにより異なるので一概には
いえないが、０．０５〜９９％程度まで広範囲に使用す
ることができ、通常注射剤では０．１〜５０％程度であ
り、それ以外の製剤では１％〜６０％程度である。残部
は医薬用添加剤である。
はＤ）の割合はその剤形などにより異なるので一概には
いえないが、０．０５〜９９％程度まで広範囲に使用す
ることができ、通常注射剤では０．１〜５０％程度であ
り、それ以外の製剤では１％〜６０％程度である。残部
は医薬用添加剤である。
【００３０】ベキノスタチンＣ又はＤは以下の試験例に
示すように細胞膜及び細胞質に局在する酵素であるグル
タチオントラスフェラーゼを強く阻害するが、毒性を示
さない。したがって、ベキノスタチンＣ又はＤはグルタ
チオントランスフェラーゼ阻害剤として極めて有用であ
る。
示すように細胞膜及び細胞質に局在する酵素であるグル
タチオントラスフェラーゼを強く阻害するが、毒性を示
さない。したがって、ベキノスタチンＣ又はＤはグルタ
チオントランスフェラーゼ阻害剤として極めて有用であ
る。
【００３１】ベキノスタチンＣ又はＤを、通常、ヒトを
含む温血動物に経口投与あるいは静脈、皮内、筋肉内投
与等の非経口投与でその有効量を投与することにより生
体中のグルタチオントランスフェラーゼの阻害を行うこ
とができる。投与量は投与する対象、投与ルートなどに
よって変動するが通常、０．０５〜１５０mg／kg／日、
０．５〜１００mg／kg／日、好ましくは１〜５０mg／kg
／日である。
含む温血動物に経口投与あるいは静脈、皮内、筋肉内投
与等の非経口投与でその有効量を投与することにより生
体中のグルタチオントランスフェラーゼの阻害を行うこ
とができる。投与量は投与する対象、投与ルートなどに
よって変動するが通常、０．０５〜１５０mg／kg／日、
０．５〜１００mg／kg／日、好ましくは１〜５０mg／kg
／日である。
【００３２】投与する際の製剤としては慣用的に用いら
れている剤形が挙げられる。経口投与の場合には、医薬
用添加剤例えばデンプンなどの通常の賦形剤などととも
に成型された錠剤、顆粒剤、カプセル剤などが用いられ
る。非経口投与の場合には医薬用添加剤例えば生理食塩
水、溶解剤などを用いて製剤化された通常の注射剤など
が用いられる。
れている剤形が挙げられる。経口投与の場合には、医薬
用添加剤例えばデンプンなどの通常の賦形剤などととも
に成型された錠剤、顆粒剤、カプセル剤などが用いられ
る。非経口投与の場合には医薬用添加剤例えば生理食塩
水、溶解剤などを用いて製剤化された通常の注射剤など
が用いられる。
【００３３】
【発明の効果】以上に詳細に説明したように、本発明で
は新規な生理活性物質ベキノスタチンＣ及びＤが提供さ
れ、これらの化合物はグルタチオントランスフェラーゼ
を強く阻害する。したがって、グルタチオントランスフ
ェラーゼ阻害剤として極めて有用である。
は新規な生理活性物質ベキノスタチンＣ及びＤが提供さ
れ、これらの化合物はグルタチオントランスフェラーゼ
を強く阻害する。したがって、グルタチオントランスフ
ェラーゼ阻害剤として極めて有用である。
【００３４】
【実施例】次に実施例によって本発明のベキノスタチン
Ｃ及びＤの製造例及び製剤例を示す。実施例１ 種培地として、ガラクトース２．０％、デキストリン
２．０％、バクト−ソイトン（登録商標）（ディフコ社
製）１．０％、コーンスティープ・リカー（イワキ社
製）０．５％、硫酸アンモニウム０．２％、炭酸カルシ
ウム０．２％、消泡剤としてシリコンＫＭ−７０（信越
化学社製）及び大豆油（局法）の混液（混合割合１：
１）０．０５％を含む培地を用いた。なお、殺菌前の培
地はpH７．４に調整して使用した。
Ｃ及びＤの製造例及び製剤例を示す。実施例１ 種培地として、ガラクトース２．０％、デキストリン
２．０％、バクト−ソイトン（登録商標）（ディフコ社
製）１．０％、コーンスティープ・リカー（イワキ社
製）０．５％、硫酸アンモニウム０．２％、炭酸カルシ
ウム０．２％、消泡剤としてシリコンＫＭ−７０（信越
化学社製）及び大豆油（局法）の混液（混合割合１：
１）０．０５％を含む培地を用いた。なお、殺菌前の培
地はpH７．４に調整して使用した。
【００３５】５００ml容三角フラスコに１１０mlを分注
した前記種培地を１２０℃で２０分間滅菌し、これにス
トレプトミセス・エスピーＭＩ３８４−ＤＦ１２株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１１２７０）の斜面培養の１〜２白金耳を
接種し、３０℃、１８０回転／分の回転式振盪機にて３
日間培養し種培養とした。ついで生産培地としてグリセ
リン２．０％、エスサンミート（味の素社製）１．５
％、燐酸水素二カリウム０．１％、塩化コバルト六水塩
０．０００５％を含む培地（pH６．２、１Ｍ燐酸一カリ
ウムで調整）を５００ml容三角フラスコに１１０mlずつ
分注し、１２０℃で２０分間滅菌し、前記種培養液２ml
ずつを移植し、２７℃で４日間振盪培養した。培養終了
後、培養液３０リットルを６Ｎ塩酸を用いてpH４に調整
して濾過し培養濾液と菌体に分別した。
した前記種培地を１２０℃で２０分間滅菌し、これにス
トレプトミセス・エスピーＭＩ３８４−ＤＦ１２株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１１２７０）の斜面培養の１〜２白金耳を
接種し、３０℃、１８０回転／分の回転式振盪機にて３
日間培養し種培養とした。ついで生産培地としてグリセ
リン２．０％、エスサンミート（味の素社製）１．５
％、燐酸水素二カリウム０．１％、塩化コバルト六水塩
０．０００５％を含む培地（pH６．２、１Ｍ燐酸一カリ
ウムで調整）を５００ml容三角フラスコに１１０mlずつ
分注し、１２０℃で２０分間滅菌し、前記種培養液２ml
ずつを移植し、２７℃で４日間振盪培養した。培養終了
後、培養液３０リットルを６Ｎ塩酸を用いてpH４に調整
して濾過し培養濾液と菌体に分別した。
【００３６】湿菌体に７５％アセトン８リットルを加
え、よく攪拌して有効成分を抽出し、これを濃縮してア
セトンを除去したのち、６Ｎ塩酸でpHを２とし、等量の
酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出液を濃縮して赤
褐色の油状物質４６．３ｇを得た。この粗物質をメタノ
ール２００mlに溶解し、シリカゲル６０（メルク社製、
Ａｒｔ．７７３４）２００ｇを加えて減圧下に濃縮乾固
した。次に、これをクロロホルム：酢酸エチル（４：
１）で懸濁後、あらかじめ同混合溶媒で充填したシリカ
ゲル６０、１３００mlのカラムにかけ、同混合溶媒で洗
浄した。続いて、有効成分を酢酸エチルで溶出し、濃縮
乾固して赤褐色の粗物質１０．９ｇを得た。
え、よく攪拌して有効成分を抽出し、これを濃縮してア
セトンを除去したのち、６Ｎ塩酸でpHを２とし、等量の
酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出液を濃縮して赤
褐色の油状物質４６．３ｇを得た。この粗物質をメタノ
ール２００mlに溶解し、シリカゲル６０（メルク社製、
Ａｒｔ．７７３４）２００ｇを加えて減圧下に濃縮乾固
した。次に、これをクロロホルム：酢酸エチル（４：
１）で懸濁後、あらかじめ同混合溶媒で充填したシリカ
ゲル６０、１３００mlのカラムにかけ、同混合溶媒で洗
浄した。続いて、有効成分を酢酸エチルで溶出し、濃縮
乾固して赤褐色の粗物質１０．９ｇを得た。
【００３７】この粗物質をメタノール５０mlに溶解し、
シリカゲル６０（メルク社製、Ａｒｔ．７７３４）５０
ｇを加えて減圧下に濃縮乾固した。次に、これをクロロ
ホルム：メタノール：２８％アンモニア水（９５：５：
１）で懸濁後、あらかじめ同混合溶媒で充填したシリカ
ゲル６０、５００mlのカラムにかけ、ベキノスタチンＤ
を含む画分を同混合溶媒で溶出し、ベキノスタチンＣを
含む画分をメタノール；２８％アンモニア水（１００：
１）で溶出した。これらの溶出画分を濃縮乾固して、各
々、６８０mg、３４３．８mgの赤褐色粗物質を得た。こ
のうちベキノスタチンＤを含む赤褐色粗物質６８０mgを
少量のメタノール：２８％アンモニア水（１００：１）
に溶解し、あらかじめ同混合溶媒で充填したＹＭＣ−Ｇ
ＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−２００／６０、山村化学研究所
社製）１５０mlのカラムにかけ、有効成分を同混合溶媒
で溶出し、濃縮乾固して赤色の粉末９８．６mgを得た。
この粉末に酢酸エチル２０ml、水２０mlを加え、よく攪
拌して有効成分を抽出し、この酢酸エチル層を濃縮して
赤色の粉末４８．２mgを得た。この粉末を０．５mlのジ
メチルホルムアミドに溶解して、４mlのメタノールを加
えることにより赤色の沈澱が析出し、これを乾燥して、
純粋なベキノスタチンＤの赤色粉末を９．６mg得た。
シリカゲル６０（メルク社製、Ａｒｔ．７７３４）５０
ｇを加えて減圧下に濃縮乾固した。次に、これをクロロ
ホルム：メタノール：２８％アンモニア水（９５：５：
１）で懸濁後、あらかじめ同混合溶媒で充填したシリカ
ゲル６０、５００mlのカラムにかけ、ベキノスタチンＤ
を含む画分を同混合溶媒で溶出し、ベキノスタチンＣを
含む画分をメタノール；２８％アンモニア水（１００：
１）で溶出した。これらの溶出画分を濃縮乾固して、各
々、６８０mg、３４３．８mgの赤褐色粗物質を得た。こ
のうちベキノスタチンＤを含む赤褐色粗物質６８０mgを
少量のメタノール：２８％アンモニア水（１００：１）
に溶解し、あらかじめ同混合溶媒で充填したＹＭＣ−Ｇ
ＥＬ（ＯＤＳ−Ａ６０−２００／６０、山村化学研究所
社製）１５０mlのカラムにかけ、有効成分を同混合溶媒
で溶出し、濃縮乾固して赤色の粉末９８．６mgを得た。
この粉末に酢酸エチル２０ml、水２０mlを加え、よく攪
拌して有効成分を抽出し、この酢酸エチル層を濃縮して
赤色の粉末４８．２mgを得た。この粉末を０．５mlのジ
メチルホルムアミドに溶解して、４mlのメタノールを加
えることにより赤色の沈澱が析出し、これを乾燥して、
純粋なベキノスタチンＤの赤色粉末を９．６mg得た。
【００３８】また、ベキノスタチンＣを含む赤褐色粗物
質３４３．８mgを２mlのメタノール：２８％アンモニア
水（１００：１）に溶解し、ＹＭＣ−ＧＥＬ、２ｇを加
えて濃縮乾固した。次に、これをメタノール：水：２８
％アンモニア水（８０：２０：１）で懸濁後、あらかじ
め同混合溶媒で充填したＹＭＣ−ＧＥＬ、１００mlのカ
ラムにかけ、同混合溶媒で溶出し、これを濃縮してメタ
ノールおよびアンモニアを除去し、２Ｎ塩酸を用いてpH
２に調整した。析出した沈澱を水で洗浄し、乾燥して、
純粋なベキノスタチンＣの赤色粉末を８０．６mg得た。
質３４３．８mgを２mlのメタノール：２８％アンモニア
水（１００：１）に溶解し、ＹＭＣ−ＧＥＬ、２ｇを加
えて濃縮乾固した。次に、これをメタノール：水：２８
％アンモニア水（８０：２０：１）で懸濁後、あらかじ
め同混合溶媒で充填したＹＭＣ−ＧＥＬ、１００mlのカ
ラムにかけ、同混合溶媒で溶出し、これを濃縮してメタ
ノールおよびアンモニアを除去し、２Ｎ塩酸を用いてpH
２に調整した。析出した沈澱を水で洗浄し、乾燥して、
純粋なベキノスタチンＣの赤色粉末を８０．６mg得た。
【００３９】純粋なベキノスタチンＣを用いて、紫外線
吸収スペクトル、赤外線吸収スペクトルを測定し、これ
らのスペクトルを図１、図２に示した。また、純粋なベ
キノスタチンＤを用いて、紫外線吸収スペクトル、赤外
線吸収スペクトル、水素核核磁気共鳴スペクトル及び炭
素核核磁気共鳴スペクトルを測定し、これらのスペクト
ルは図３、図４、図５及び図６に示した。ベキノスタチ
ンＣおよびＤの培養工程ならびに精製工程中での追跡
は、抗グルタチオントランスフェラーゼ活性の測定に基
づいて行った。その方法は、後述する試験例で示すグル
タチオントラスフェラーゼ阻害活性の測定法と同様の方
法を用いた。
吸収スペクトル、赤外線吸収スペクトルを測定し、これ
らのスペクトルを図１、図２に示した。また、純粋なベ
キノスタチンＤを用いて、紫外線吸収スペクトル、赤外
線吸収スペクトル、水素核核磁気共鳴スペクトル及び炭
素核核磁気共鳴スペクトルを測定し、これらのスペクト
ルは図３、図４、図５及び図６に示した。ベキノスタチ
ンＣおよびＤの培養工程ならびに精製工程中での追跡
は、抗グルタチオントランスフェラーゼ活性の測定に基
づいて行った。その方法は、後述する試験例で示すグル
タチオントラスフェラーゼ阻害活性の測定法と同様の方
法を用いた。
【００４０】実施例２ ベキノスタチン３０重量部、結晶乳糖１２０部、結晶セ
ルロース１４７部及びステアリン酸マグネシウム３部を
Ｖ型混合機で打錠し、１錠３００mgの錠剤を得た。
ルロース１４７部及びステアリン酸マグネシウム３部を
Ｖ型混合機で打錠し、１錠３００mgの錠剤を得た。
【００４１】試験例 以下に、ベキノスタチンＣおよびＤがグルタチオントラ
ンスフェラーゼ阻害活性を有し、且つ毒性を示さないこ
とを試験例により示す。
ンスフェラーゼ阻害活性を有し、且つ毒性を示さないこ
とを試験例により示す。
【００４２】試験例１ ベキノスタチンＣおよびＤのグルタチオントランスフェ
ラーゼ阻害活性 グルタチオントランスフェラーゼ阻害活性は、Ｔｈｅ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ、第２４９巻、７１３０〜７１３９頁（１９
７４）に記載の方法の改良法で行った。即ち、試験管に
２０mMグルタチオン（還元型）０．１ml、４０mM １−
クロロ−２，４−ジニトロベンゼン０．０５ml、２００
mMカリウム燐酸緩衝液（pH６．５）１．０ml、検体を含
む水溶液０．１ml、水０．７mlを加えた混合溶液に、Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第４７巻、５６２６〜
５６３０頁（１９８７）に記載の方法を用いて、大腸菌
に発現させ、Ｓ−ヘキシルグルタチオン−セファロース
により精製した人胎盤型グルタチオントランスフェラー
ゼ（ＧＳＴπ）溶液０．０５mlを加え、３０℃、５分間
反応させた。反応後、３４０nmにおける吸光度(a) を測
定した。同時に検体を含まない緩衝液のみを用いた盲検
の吸光度(b) を測定し、グルタチオントランスフェラー
ゼ阻害率を〔（ｂ−ａ）／ｂ〕Ｘ１００により計算し
た。５０％阻害率を示す検体の濃度をＩＣ50の値とし
た。この定量法で純粋なベキノスタチンＣおよびＤは、
おのおの４０．０μｇ／ml、０．６μｇ／mlの濃度でグ
ルタチオントランスフェラーゼを５０％阻害した。
ラーゼ阻害活性 グルタチオントランスフェラーゼ阻害活性は、Ｔｈｅ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ、第２４９巻、７１３０〜７１３９頁（１９
７４）に記載の方法の改良法で行った。即ち、試験管に
２０mMグルタチオン（還元型）０．１ml、４０mM １−
クロロ−２，４−ジニトロベンゼン０．０５ml、２００
mMカリウム燐酸緩衝液（pH６．５）１．０ml、検体を含
む水溶液０．１ml、水０．７mlを加えた混合溶液に、Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第４７巻、５６２６〜
５６３０頁（１９８７）に記載の方法を用いて、大腸菌
に発現させ、Ｓ−ヘキシルグルタチオン−セファロース
により精製した人胎盤型グルタチオントランスフェラー
ゼ（ＧＳＴπ）溶液０．０５mlを加え、３０℃、５分間
反応させた。反応後、３４０nmにおける吸光度(a) を測
定した。同時に検体を含まない緩衝液のみを用いた盲検
の吸光度(b) を測定し、グルタチオントランスフェラー
ゼ阻害率を〔（ｂ−ａ）／ｂ〕Ｘ１００により計算し
た。５０％阻害率を示す検体の濃度をＩＣ50の値とし
た。この定量法で純粋なベキノスタチンＣおよびＤは、
おのおの４０．０μｇ／ml、０．６μｇ／mlの濃度でグ
ルタチオントランスフェラーゼを５０％阻害した。
【００４３】試験例２ ベキノスタチンＣおよびＤの毒性 ベキノスタチンＣおよびＤを、それぞれ、マウスに腹腔
内投与してその毒性を調べたところ、それぞれの１００
mg／kg投与でも毒性を示さなかった。
内投与してその毒性を調べたところ、それぞれの１００
mg／kg投与でも毒性を示さなかった。
【図１】ベキノスタチンＣの１０μｇ／mlエタノール溶
液の紫外線吸収スペクトルを示す。
液の紫外線吸収スペクトルを示す。
【図２】ベキノスタチンＣの臭化カリウム錠内での赤外
線吸収スペクトルを示す。
線吸収スペクトルを示す。
【図３】ベキノスタチンＤの１０μｇ／mlエタノール溶
液の紫外線吸収スペクトルを示す。
液の紫外線吸収スペクトルを示す。
【図４】ベキノスタチンＤの臭化カリウム錠内での赤外
線吸収スペクトルを示す。
線吸収スペクトルを示す。
【図５】ベキノスタチンＤの重ジメチルスルホキシド中
で測定した２００MHz 水素核核磁気共鳴スペクトルを示
す。
で測定した２００MHz 水素核核磁気共鳴スペクトルを示
す。
【図６】ベキノスタチンＤの重ジメチルスルホキシド中
で測定した５０MHz 炭素核核磁気共鳴スペクトルを示
す。
で測定した５０MHz 炭素核核磁気共鳴スペクトルを示
す。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 9/99 (72)発明者 小島 蕗子 東京都文京区大塚３−42−13−601 (72)発明者 青山 貴之 東京都北区志茂３−17−２−302 (72)発明者 舘江 栃郎 東京都北区中十条１−18−８ (72)発明者 山崎 忠雄 埼玉県浦和市上大久保843−７
Claims (3)
- 【請求項１】 下記式（Ｉ） 【化１】 （式中ＲはＣＯＯＨ又はＨを示す。）で表される化合物
であることを特徴とする生理活性物質ベキノスタチンＣ
およびＤ又はその薬理学的に許容し得る塩。 - 【請求項２】 ストレプトミセス属に属するベキノスタ
チン生産菌を栄養培地中で培養し、その培養物からベキ
ノスタチンＣ又はＤを採取することを特徴とする生理活
性物質ベキノスタチンＣおよびＤの製造法。 - 【請求項３】 ベキノスタチンＣ又はＤあるいはその薬
学的に許容し得る塩および医薬用添加剤とからなるグル
タチオントランスフェラーゼ阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34627392A JPH06206846A (ja) | 1992-12-25 | 1992-12-25 | 新規生理活性物質ベキノスタチンｃおよびｄ、その製造法およびその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34627392A JPH06206846A (ja) | 1992-12-25 | 1992-12-25 | 新規生理活性物質ベキノスタチンｃおよびｄ、その製造法およびその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06206846A true JPH06206846A (ja) | 1994-07-26 |
Family
ID=18382291
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34627392A Pending JPH06206846A (ja) | 1992-12-25 | 1992-12-25 | 新規生理活性物質ベキノスタチンｃおよびｄ、その製造法およびその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06206846A (ja) |
-
1992
- 1992-12-25 JP JP34627392A patent/JPH06206846A/ja active Pending
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