JPS63218681A - オリゴマイシンｅ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、制癌活性を有する新規物質であるオリゴマイ
シンＥに関するものである。

（従来の技術および発明が解決しようとする問題点）従
来、オリゴマイシン系化合物としては、例えばストレプ
トマイセス・ジアスタトクロモジネス（ｄｉａｓｔａｔ
ｏｃｈｒｏｍｏｇｙｎｅｓ　）菌〔アンテバイオティク
スアンドケモセラピー（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓａｎｄ
　０ｈ８ｆｆｌＯｔｈ６１ｒａｐ７　、４巻、９６コ頁
、ｌデｓａ年）〕から得られるオリゴマイシンＡ、Ｂ及
びＣ等が知られている。

本発明者らは、各種の微生物を探索し、それらが生産す
る生理活性物質について種々検討したところ、ストレプ
トマイセス属菌が新規化合物であるオリゴマイシンＥを
生産し、しかも本化合物が良好な制癌活性を有すること
を見い出し、本発明を完成するに至った。

（問題点を解決するための手段） 即ち、本発明の要旨は、下記構造式ＣＩ）で示以下本発
明を説明するに、本物質は、ストレプトマイセス属に属
する菌株であって具体的には例えば、ストレプトマイセ
ス　エスピーＲ−コ０７　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
　ｓｐ、　Ｒ−コ０り）を培養することＫよって得られ
る。

このストレプトマイセス　エスピー　Ｒ−２０７は微工
研菌寄第９２３８号（ＦコａＭｐ−’？２３’ｉｌ）と
して寄託されている。

上記ストレプトマイセス　エスピー　Ｒ−コＯりの形態
学的特徴、各種培地上の性状及び生理的、生化学的性質
は以下に示す通シである。

ｌ　形態学的特徴 合成寒天培地上で基生菌糸と気菌糸はよく発達し、分枝
も見られる。その直径は０．６〜／、１μに至る。気菌
糸上に分節屋の長い胞子連鎖を形成する。胞子連鎖の形
態はらせん状に巻いている。胞子の表面は毛状（Ｈａｉ
ｒｙ　）の毛におおわれる。胞子は円筒形〜楕円形で０
．１〜０．ｔ　Ｘ　Ｏ，９〜へ−ＡｆＰｉ。

ユ　各種培地上における生育状態 （各培地、コク℃、／ｌＩ日後の特徴）Ｏイースト・麦
芽寒天培地（工ＳＰ　Ａコ）生育良好、明るい茶灰色〜
白色。気菌糸の生えは悪い。可溶性色素なし。胞子形成
良好。

○オートミール寒天培地（工ＳＰ４．７）生育中程度、
灰味黄茶。気菌糸の生えが悪い。可溶性色素なし。胞子
形成良好。

○スターチ・無機塩寒天培地（Ｉｓｐ巡り）生育旺盛、
明るい茶入から色白。気菌糸の生えが悪い。可溶性色素
なし。胞子形成は良好。

Ｏグリセリン・アスパラギン寒天培地 （工５ｐｓｓ） 生育旺盛、黄味白色。気菌糸旺盛、ビロード状、白色〜
黄味白色。可溶性色素なし。

胞子は形成せず。

０チロシン培地（ＩＳＰＡり） 生育旺盛、黄味茶〜明るい茶灰色又は白色、シワがよっ
ている。気菌糸は旺盛、粉状、明るい茶灰色。可溶性色
素なし。胞子形成良好。

ス ○≠ｐクロース・硝酸塩寒天培地 生育中程度、白色〜茶色。気菌糸は形成せず。可溶性色
素なし。胞子形成良好。

Ｏグルコース・アスパラギン寒天培地 生育中程度、黄味白色。気菌糸旺盛、粉状、白色。可溶
性色素なし。胞子は形成せず。

Ｑ普通寒天培地 生育中程度、黄味白色。気菌糸形成せず。

可溶性色素なし。胞子は形成せず。

○ペネット寒天培地 生育旺盛、黄茶から白色。気菌糸旺盛、粉状、白色。可
溶性色素なし。胞子形成せず。

○リンゴ酸カルシウム寒天培地 生育微弱、白色。気菌糸なし。可溶性色素なし。胞子形
成せず。

ユ　生理的性質 （１）生育温度範囲：ペネット寒天培地上において、２
０℃〜ダＯ℃の温度範囲で生育し、コク℃〜３０℃で良
好に生育する。

（２）ゼラチンの液化：陰性 （３）　　スターチの加水分解：陽性 （４）　　硝酸塩の還元：陽性 （５）　　脱脂乳のペプトン化：陽性（３〜ｌＩ週間後
）脱脂乳の凝固：陰性 （６）耐　　塩　　性：コチの食塩含有培地で生育する
が、弘チ以上では生育しない。

（７）　　メラニン様色素の生成　：メラニン用チロシ
ン寒天培地（岡西培地）上で陰性。

侶　炭素源の資化性 （プリドハム・ゴトリーブの基礎培地）利用性記号 ＋：利用する。　±：疑わしい、−二利用しないＤ−グ
ルコース：＋、Ｄ−キシロース：＋。

Ｌ−アラビノース二十、Ｌ−ラムノース：±。

Ｄ−７ラクトース：＋　、Ｄ−ガラクトースニー。

ラフィノース：＋　、Ｄ−マンニトールニー。

１−イノシトールニー、サ　リ　シ　ン：＋。

ス ー−クロース二一、グリセロールニー。

ソルビトール：士 ぷ　細胞壁組成 ペラカー（Ｂｅａｋｅｒ　）らの方法〔アプライドマイ
クロバイオロジー（Ａｐｐｌ　ＭｉｃｒｏｂｉｏＬ　。

二、コ３ｂ（／９６ｊ））により分析した結果、本菌株
の細胞壁組成の主要成分はＬＬ−Ａｚ　ｐｍ及びグリシ
／を含有する細胞壁タイグエ型であることが判明した。

五　分類学的考察 本菌株、Ｒ−２０７株は、コロニー色調が灰色、メラニ
ン色素（→、胞子形成様式はラセン状（５ｐｉｒａ　）
、胞子表面は毛状（Ｈａｉｒｙ　）の特徴を有し、パー
ジエイズ・マニエアルｔｉｔ版　７ｔｌ、頁に記載され
ているストレプトマイセス属のＧｒａｙ　５ｅｒｉｅｓ
＋　−５ｐｉｒａ　−Ｃｏ１ｏｒ　（→−Ｅｒｓ　ｉ　
ｒｙ群に属する種であることが判明した。

この群の中にはり樵が含まれている。

種の同定のために、この群に含まれる６菌種の基準菌株
、Ｓ、　ｃａｌｖｕｓ　（ＪＣＭ　ＩＩＪＪＡ　）　。

Ｓ、ｃｙａｎｏａｌ＋ｕｓ　　（：ｆＯＭ　　４（ｊＡ
、７）、８．ｆｉｎｌａｙｉ（Ｊ（ＸＭ　ｌＡ２１ｂ＞
、　　Ｓ、ｆｌａｖｅｏｌｕｓ　　Ｃ：ｆＣＭダ０Ｊ−
）。

Ｂ−ｇｅｙｓｉｒｉｅｎｓｉｓ　　（ＪＯＭ　ＱＶ＆＝
）、　　ｓ、ｐａｃｔｕｍ（ｙｃＭｐ、目ざ）を用いて
、走査型電子顕微鏡による胞子表面の観察、各種糖類の
資化性試験を行ない、本菌株Ｒ−２０７と比較した。そ
の結果、本薗株Ｒ−コＱ７株は、胞子表面の構造におい
て、Ｓ、　ｃａｌｖｕｓ　、　８．　ｃｙａｎｏａｌｂ
ｕｓ　。

ｓ、　ｎａｖｅｏｌｕｓ　　及び　ｓ、　ｇｅｙｓｉｒ
ｉｅｎｓｉｓ　　から明確に区別され、Ｓ、　ｆｉｎｌ
ａｙｉ　、　Ｓ、　ｐａｃｔｕｍに類似していた。しか
しながら、表１に示すように、本菌株（Ｒ−４０７）の
糖類の　資化性パターンは、８．　ｆｉｎｌａｙｉ及び
８．　ｐａｃｔｕｍとは異なっていた。

従って、本菌株Ｒ−１０７株はｓｔｒｓｐｔｏｍｙｃｅ
ｅ属の新菌と考えられるが、Ｂｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅａ
属菌の穐レベルの分類学的取扱いについては、多くの論
争のあるところであシ、現段階では新種とすることを差
控えてＲ−２０７株をＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ
、　　と同定した０本発明で使用するストレプトマイセ
ス属に属する菌株は、他の放線菌と同様に、その性質が
変化しやすく、例えば、紫外線やＸＭ、＝）ロシグアニ
ジン等の薬品等により変異し得るが、これら変異株であ
っても本発明の多環性キサントン化合物を生産する性質
を失わない限シ、本発明で使用することができる。

本菌株の培養は、通常の放線菌が利用し得る栄養物を含
有する培地で培養することができる。

炭素源としては、グルコース、水あめ、グリセロール、
デキストリン、スクロース、澱粉、糖蜜、動・植物油等
が使用できる。また、窒素源としては、大豆粉、小麦胚
芽、コーンステイーグリカー、綿実かす、肉エキス、ペ
プトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウム、尿素等が使用できる。その他、必要に応じてナト
リウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コバル
ト、塩素、燐酸、硫酸、或いは、他のイオンを生成し得
る無機塩類等公知の徨々の添加剤を添加することができ
る。

培養は、好気的条件下での培養法、特に、深部培養法が
好適である。培養温度は、通常コＯ〜３７℃、好ましく
は、２６〜３０℃の範囲から選ばれる。

本発明のオリゴマイシンＥの生産は、培地や培養温度等
によって異なるが、振とり培養及びタンク培養とも通常
コ〜ｌＯ日間の培養でその蓄積が最高に達する。

かくして得られた培養液から、常法に従い、溶媒抽出、
カラムクロマトグラフィー、分取薄層クロマトグラフィ
ー等により処理して単離・精製することができる。

本発明のオリゴマイシンＥを制癌剤として用いる場合、
静脈内注射、皮下注射、経口カプセル等の方法で投与さ
れ、投与量は、成人に対し、水溶剤（注射）では、０．
０　／　−／　０１８１／一体重、経口剤では、Ｏ０／
〜７００１８１７に４体重の範囲である。注射、点滴用
製剤とするときは、単位投与量アンプルあるいは添加防
腐剤と共に多投４量容器中に提供される。この製剤は、
懸濁液、溶液、油性又は水性ビヒクル中の乳液のような
形態であってよく、グルコース、ゼラチンのような懸濁
液、レシチン、リノール酸のような安定化剤、アーモン
ド油、ココナツト油のような非水性ビヒクル、ｐ−ヒド
ロキシ安息香酸メチルのような防腐剤を含んでいてもよ
い。

本発明のオリゴマイシンＥを経口投与製剤とするＫは、
カプセルのような腸管からの吸収に好適な形態で提供さ
れることが好ましい。カプセルでは、ゼラチンのような
結合剤、乳糖のような賦形剤、ステアリン酸マグネシウ
ムのような安定剤、馬鈴薯澱粉のような崩壊剤を含有さ
せることができる。また、シクロデキストリンのような
包接剤による包接化合物とし、更に該包接化合物をアク
リル酸メチル・メタアクリル酸共重合体のような腸溶性
皮膜形成物質を用いて皮膜を施すことができる。製剤化
の方法は、注射、点滴用展剤、経口投与用製剤のいずれ
の場合においても常法でよい。

（発明の効果） 本発明のオリゴマイシンＥは、後述するように癌細胞に
対し、その増殖抑制作用を有するので、制癌剤としての
効果が期待され、また、一部の真菌、細菌に対しても増
殖抑制作用を有するので抗菌剤として農薬や飼料添加剤
等への適用が期待される。

（実施例） 以下本発明を実施例を挙げて更に詳細に説明するが、本
発明はその要旨を越えない限υ以下の実施例によって限
定されるものではない。

〔ストレプトマイセス・エスピー・Ｒ−２０７の培養〕
水あめ１１．ｏ％、大豆油０．３％、大豆粉−０θ％、
綿実かす／、０％、サングレイン０．２％、０ａＣ０゜
０．３　　％　、　　ＦｅＳＯ４−りＨρ　　θ、００
／　　％　、　　ｃｏｃｌｔ”　　６　Ｈ，０θ、θθ
θ／チ及びＮａＣ１！＃６Ｈρ　０．０００７％を含有
する攬培地（ｐＨ７，θ）をｌ１ｏ−ずつ２００−の三
角７２７３７０本に分注して、／：１／℃、２０分間高
圧減菌した。

次いで、ＡｃｔｉｎＯｐｌａｎｅｓ　ｓｐ、　Ｒ−３０
１７株を／白金耳ずつ植菌し、２６℃でダ日間、λ１０
回転にて振とり培養した。

得られた稽培養物コ００−を上記橿培地と同一組成の培
地／３７を含む３０ノ容のタンクに移植し、コ？℃で６
日間通気攪拌培養（通気量１００％、−７０回転／分）
した。

得られた培養物Ｉｊｅｔをフィルタープレスでろ過して
ろ液（培養プロス）　／　０．ｇ　ｔを得た。

〔オリゴマイシンＥの単離〕

ストレプトマイセス・エスピー・Ｒ−２０７の培養プロ
ス／　０．ざｔに５Ｎ水酸化ナト’、ｌラム溶液を加え
てｐＨ９に調整した後、酢酸エチル５ｔを用い一回抽出
した。抽出液に硫酸マグネシウムを加えて乾燥後、減圧
下濃縮して褐色油状物７．９９を得た。

本物質をクロロホルム−メタノール（り５：よ）混合液
を展開溶媒とするシリカゲル（１４００９、メルク社製
ａｉｌｉｃａｇｅｌ　６０　）カラムクロマトグラフィ
ーに付し、２０ゴ宛分画した。活性画分（画分番号／１
〜３３）を合し、減圧濃縮して得られた黄色油状物！；
、／ｉのうち２３０ｍ１をブリセップＣｏｇカートリッ
ジ（ガスクロ工業社製）に吸着させ、コＯ％、７５％及
び１００％メタノール各ｌ！−を用いて順次溶出した。

この操作を２０回くり返し、全油状物を分画した０活性
を示す’７１％メタノール画分を合し、減圧濃縮した。

得られた無色油状物ダコｌＩ岬を分取高速液体クロマト
グラフィー（カラム：Ｕｎｉｅｉｌ　Ｑ、　Ｃ／ざ、　
　／　０．７　Ｘ　２！ｒ　Ｏｗｎ　、粒径ｊμｍ：溶
離液：ｊＯ％アセトニトリル；流量：　！ｒ　ｔｔｄ／
ｍ　；検出：Ｒ工検出器）に付した。保持時間７．テ分
前後のピーク相当部を集め、減圧濃縮し活性な化合物７
６■を得た０本物質をエタノールより再結晶することに
より融点ｉｓｏ、ｒ〜／コ／、、ｔ’Ｃの無色板状のオ
リゴマイシンＥｊコ■を得た。

なお、上記の精製・単離操作はＨｅＬａ細胞に対する活
性を指標にしてすべて室温で実施した０かくして得られ
たオリゴマイシンＥの理化学的性質を表２に示した。ま
た、その′Ｈ及び１３ＣＮＭＲスペクトルのデータは、
夫々、表３及び表ダに示す通シであり、以上の結果から
、本物質は前記式（１）に示す構造であることが判った
。

表− ＊高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間条件　
力２ム：　ＤｅｖｅｌＯｓｉｌ　０ＤＳｊ、　　１１．
＆×／３０ｔｗｍ（野村化学社製）； 溶離液：　７５％アセトニトリル； 流量：　／　ｓｇ／ｓｉｔ　： 検出：Ｕｖコ１０ｎｍ 表、？　　’ＨＮＭＲデータＣＩＩＣｌｌ０Ｏ，ＣＤＣ
１，）ａ：δ値、カッコ内は多重度及びカップリング定
数（Ｈ２）。

ｂ＝これらのシグナルは他のシグナルとの重な９の為、
カップリング定数を読むことはできない。

表４（”Ｃ！　ＮＭＲデ―タ　（１００ＭＨ２，Ｃ！Ｄ
Ｃ！１．）参考例１ 〔各種腫瘍細胞増殖抑制試験〕 試料物質オリゴマイシンＥをジメチルスルホオキシドに
溶解し、これを３％仔子牛血清加えたＲＰＭニー／６’
ＩＯ培地で所定濃度に希釈し、テロ大のマイクロプレー
トにｉｏｏμｔ／穴で分注した０ これに／×１０”個／−に調製した各種腫瘍細胞の浮遊
液を１０θμｔ／穴加え、炭酸ガス雰囲気下３７℃でダ
日間培養した。

培養後、浮遊性細胞、即ち、Ｐ−Ｊｉｇ、Ｌ−／２１０
については、ｏ、ｓ　％　）リパンブルー液をｓ。

μｔ／穴加え顕微鏡下で生細胞を数えた。また、付着性
細胞、即ち、ＨｅＬａ、Ｌ−９２９、ＬＭ−２。

Ｂ−／Ａ　、　ＮＵＫ　、　ＨＬＣ！　、　ＫＮ細胞に
ついては、ゲンチアナバイオレット染色液でマイクロプ
レートの底に付着した腫瘍細胞を染色し、水で過剰の染
色液を洗浄後、染色された細胞の色素をエタノール（／
θ０μｔ／穴）で溶出し、その濃度舎分光光度計で測定
した。

細胞数と染色された色素の量は比例するので、上記で測
定した試料の各濃度に対する色素濃度を、浮遊性細胞の
場合は、生細胞数をプロットし、このグラフから対照（
試料物質がない場合）における腫瘍細胞の数（１００９
にとする）の、ｔＯｑ＆に相当する試料物質の濃度をＥ
Ｄ、。とじて求めた。その結果を表３に示した。

表　　！

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記構造式〔 I 〕で示されるオリゴマイシン ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕