JPH06135830A - フラボノイド誘導体を含有する抗高血圧薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 非ペプチド系のアンギオテンシン変換酵素抑
制剤及びそれを利用する抗高血圧薬組成物を提供する。 【構成】 フラボノイド誘導体を活性成分とし、薬理学
的に許容される担体を含有する抗高血圧薬組成物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、フラボノイド誘導体の
新用途、特に高血圧の治療剤としてフラボノイド誘導体
を含有する抗高血圧薬組成物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】フラボノイド誘導体は従来から公知であ
る。また、木蘭科（Ｍａｇｎｏｌｉａｃｅａｅ）の植物
の属する辛夷（Ｍａｇｎｏｌｉａｅ ｆｌｏｓ）、厚朴
（Ｍａｇｎｏｌｉａｅ ｃｏｒｔｅｋ（ＪＰＸＩ））な
どの水やアルコールの抽出液を、静脈内、筋肉内又は腹
腔内に投与することにより、麻酔したラットの血圧を降
下させる現象も既に知られている。その他、竜胆科（Ｇ
ｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）植物の抽出液も類似した抗高
血圧作用があることが知られている。しかしながら、今
までは、これら漢方薬の一体どの様な有効成分が抗高血
圧として作用するかは未知であり、まして、フラボノイ
ド誘導体が抗高血圧剤として有用であることを知ってい
る人もいない。

【０００３】高血圧は、世界全人類にとって健康問題と
して注目されている。時代の進歩と商工業の発達に伴
い、各側面からのストレスが増加しつつある。そのため
に、高血圧を患っているに人々が年々急増していると同
時に、発病の年齢層も逐次低下している。この現象はい
わゆる先進国においては更に深刻であり、特に、長期的
高血圧によって誘発される併発疾患、例えば心臓病、脳
卒中、腎臓病及び心筋の血管に関わる疾患が懸念されて
いる。この問題を解決するために、抗高血圧治療薬の開
発や研究が、世界各地の医薬界で重要な課題として実施
されている。

【０００４】多くの種類の抗高血圧薬が今までに開発さ
れ市販されており、その作用及び効果から分類すると、
利尿剤（Ｄｉｕｒｅｔｉｃｓ）、アドレナジックシステ
ム抑制剤（Ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ Ｓｙｓｔｅｍ Ｉｎ
ｈｉｂｉｔｏｒｓ）、カルシウムチャンネル拮抗剤（Ｃ
ａｌｃｉｕｍ Ｃｈａｎｎｅｌ Ａｎｔａｇｏｎｉｓ
ｔ）等があるが、これらは古くから開発された典型的な
血圧降下剤である。最近は、アンギオテンシン変換酵素
の抑制剤（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ｃｏｎｖｅｒｔｉ
ｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ；Ａ．Ｃ．
Ｅ．Ｉ．）である血圧降下剤が広く使用されている。

【０００５】アンギオテンシン変換酵素（Ａｎｇｉｏｔ
ｅｎｓｉｎ ＣｏｎｖｅｒｔｉｎｇＥｎｚｙｍｅ：Ａ．
Ｃ．Ｅ）は生体内においてアンギオテンシンＩ（ＡＩ）
を加水分解してアンギオテンシンII（ＡII）に変換する
作用がある。アンギオテンシンＩ（ＡＩ）がアンギオテ
ンシンII（ＡII）に変換されると、ＡIIは血管の平滑筋
細胞におけるＡII受容体と結合し、平滑筋細胞内に一連
の反応をもたらし、細胞内のカルシウムイオン濃度を向
上させ、最後に血管の平滑筋を収縮させて血圧を上昇さ
せる。また、血管のブラジキニン（Ｂｒａｄｙｋｉｎｉ
ｎ）を加水分解して失活させるカイニナーゼII（Ｋｉｎ
ｉｎａｓｅII）も事実上Ａ．Ｃ．Ｅと同種の酵素である
ことが証明されて解明された。Ａ．Ｃ．Ｅの作用によ
り、ＡＩがＡIIに変換されて血液中に含有されるＡII濃
度の上昇を促進させると共に、血液中のブラジキニンを
分解して血液中の濃度を降下させると、最後には、この
共同作用の故に、血管の平滑筋は収縮の頻度を増加し、
血圧が上昇する結果となる。即ち、血液中におけるＡ．
Ｃ．Ｅの活性を有効に抑制することができれば、ブラジ
キニンの濃度を有効に向上させ、且つ、ＡIIの濃度を有
効に降下させることになるので、血圧を降下させること
ができる。これがＡ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．剤の基本作用メカニ
ズムである。

【０００６】Ａ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．（カプトプリル（Ｃａｐ
ｔｏｐｒｉｌ））がクッシュマン（Ｃｕｓｈｍａｎ）ら
より１９７７年に初めて開発されて以来、今まで既に多
種のＡ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．が市販されており、例えば、エナ
ラプリル（Ｅｎａｌａｐｒｉｌ）、リシノプリル（Ｌｉ
ｓｉｎｏｐｒｉｌ）等がある。しかし、厳密には、これ
らのＡ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．はすべてペプチド又はペプチドの
類似物であり、非ペプチド類のＡ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．はほと
んど開発されていないのが現状である。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本願発明者らはＡ．
Ｃ．Ｅ．に対する抑制作用に着眼し、通常の漢方薬や医
薬植物を選別した上検討した結果、非ペプチド類である
フラボノイド誘導体が、Ａ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．特性を有する
ことを見出し、本発明を完成するに至った。

【０００８】即ち本発明は、フラボノイド誘導体の新用
途の開発を主たる目的とする。

【０００９】本発明のさらなる目的は、フラボノイド誘
導体の抗高血圧治療剤や抗高血圧薬組成物、アンギオテ
ンシン変換酵素の抑制剤組成物としての実用的な使用で
ある。

【００１０】即ち、本発明はフラボノイド誘導体の抗高
血圧用途に関するものであり、該用途はＡ．Ｃ．Ｅ．
Ｉ．特性の有無やＡ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．特性の如何によって
試験することができる。

【００１１】本発明の抗高血圧薬組成物又はアンギオテ
ンシン変換酵素の抑制剤組成物は、フラボノイド誘導体
を活性成分とし、薬理学的に許容される担体も含まれて
いる。

【００１２】本発明の医薬組成物はいかなる方法で投与
しても良く、例えば錠剤、丸剤、粒剤、カプセル剤、液
剤又は粉剤等による経口投与、並びに皮内、皮下、筋肉
又は静脈等に適用する注射剤として投与しても良い。

【００１３】本発明に用いられるフラボノイド誘導体
は、例えば表１に記載の化合物群から１種以上選択して
使用することができる。

【００１４】表 １ フラボノイド誘導体 （１）パツレチン−３，７−ジラムノース配糖体

【００１５】

【化１】

【００１６】（２）パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−
７，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノース配糖体〕

【００１７】

【化２】

【００１８】（３）パツレチン−３，Ｏ−〔３−Ｏ−ア
セチルラムノシル〕−７−Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラム
ノース配糖体〕

【００１９】

【化３】

【００２０】（４）パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−
７，Ｏ−〔３，４−Ｏ−ジアセチルラムノース配糖体〕

【００２１】

【化４】

【００２２】（５）クリンソスプレノール−Ｄ

【００２３】

【化５】

【００２４】（６）フィゼチン

【００２５】

【化６】

【００２６】（７）クエルセチン

【００２７】

【化７】

【００２８】（８）クエルシトリン

【００２９】

【化８】

【００３０】（９）モリン

【００３１】

【化９】

【００３２】（１０）ミリセチン

【００３３】

【化１０】

【００３４】（１１）ミリシトリン

【００３５】

【化１１】

【００３６】上記表１に記載の１１種のフラボノイド誘
導体及びその他のフラボノイド誘導体のＡ．Ｃ．Ｅ．
Ｉ．や抗高血圧薬として用途は、これまでにどの文献に
も記載されておらず、示唆すらされていない。フラボノ
イド誘導体のＡ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．特性及び抗高血圧効果
は、本発明者らにより初めて見出されたものである。

【００３７】本発明者らは、試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ）実験によりこの１１種のフラボノイド誘導体がすべ
てＡ．Ｃ．Ｅ．抑制作用を有することを明らかにすると
ともに、フラボノイド誘導体が概して顕著なＡ．Ｃ．
Ｅ．Ｉ．特性を有することを見出した。この実験に基づ
き、本発明者らは更にこの１１種の中からフィゼチンを
選択し、動物を用いた生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）実験を
行ない、フィゼチンが抗高血圧効果を有することを確認
した。これら試験管内及び生体内実験により、Ａ．Ｃ．
Ｅ．Ｉ．が抗高血圧効果と顕著な相関性を有することが
明らかとなった。即ち、この相関関係から、表１に記載
の１１種及びその他のフラボノイド誘導体が抗高血圧効
果を有することが示されるのである。

【００３８】上記実験における１１種のフラボノイド誘
導体は、それぞれ下記のようにして得られた。具体的に
は、パツレチンシリーズは植物カランコエ グラシリス
ハンセ〔Ｋａｌａｎｃｈｏｅ Ｇｒａｃｉｌｉｓ Ｈ
ａｎｃｅ（ベンケイソウ科（Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａ
ｅ））〕から抽出し、クリンソスプレノール−Ｄは植物
アルテミシア アニュア（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ Ａｎｎ
ｕａ）から抽出し、フィゼチン、クエルセチン及びクエ
ルシトリンはそれぞれアルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃ
ｈ）、シグマ（Ｓｉｇｍａ）、東京化成工業（株）から
入手し、そして、モリン、ミリセチン及びミリシトリン
はすべてセルヴァ（Ｓｅｒｖａ）から入手した。

【００３９】薬理学的に許容される担体は、投与経路及
び剤型によって異なるが、特に限定されることなく、有
効成分を希釈してヒトに適用する量を担持することがで
きるものであれば良く、当業者により任意に選択するこ
とができる。

【００４０】錠剤、粒剤又は粉剤を製造する場合の担体
は、従来から使用されている担体より選ぶことができ
る。例えば、賦形剤としてラクトース、スクロース、グ
ルコース、澱粉、結晶状繊維等、結合剤としてヒドロキ
シプロピルセルロース、メチルセルロース、ゼラチン、
トラガカント、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム
等、崩壊剤として澱粉、ヒドロキシメチルセルロース、
炭酸カルシウム等、そして潤滑剤としてステアリン酸マ
グネシウム、タルク、ステアリン酸等が挙げられる。錠
剤は従来の塗布方法による糖衣錠やコーティング錠、二
重錠、多重錠等の形で提供することができる。粒剤や粉
剤も必要に応じ従来の方法によりコーティングした形で
提供することができる。

【００４１】丸剤を製造する場合の担体は、従来から使
用されている担体から選ぶことができる。例えば、賦形
剤には甘草粉、グルコース、小麦粉等、結合剤にはグリ
セリン、水、シロップ、アラビアゴム、トラガカント、
ゼラチン等、崩壊剤には薬用酵素、グズウコン、昆布粉
等が挙げられる。

【００４２】カプセル剤を製造する場合の担体は、従来
から使用されている担体から選ぶことができる。例え
ば、賦形剤にはラクトース、オリーブ油、大豆油等が挙
げられる。

【００４３】経口用の液剤は水溶性のものでも良く、油
溶性の懸濁液や溶液、シロップ等でも良い。これらの液
体製品を製造するために使用する添加剤は従来の添加剤
で良く、例えば、懸濁剤にはソルビトールシロップ、メ
チルセルロース、ゼラチン、カルボキシメチルセルロー
ス等、乳化剤にはレクチン、ソルビタンモノオレアー
ト、アラビアゴム等が挙げられる。

【００４４】注射溶液剤は、胃腸を経由しないいかなる
液剤、例えば水溶性や油溶性賦形剤に担持されている注
射可能な懸濁液、溶液または乳化液でも良く、懸濁剤、
安定剤、分散剤及び／又は他の処方剤を含有しても良
い。

【００４５】坐剤を製造する場合の担体は、従来から使
用されている担体から選ぶことができる。例えば、カカ
オバター、グリセロ−ゼラチン、マクロゴール（Ｍａｃ
ｒｏｇｏｌ）等が挙げられ、必要に応じで乳化剤又は懸
濁剤も使用できる。これ以外に、他の添加剤、例えば色
素、矯味剤（ｃｏｒｒｉｇｅｎｔ）等を本発明の組成物
に混入して使用することもできる。

【００４６】本発明の医薬組成物は、その活性成分（即
ちフラボノイド誘導体）を基準として計算すると、成人
の一日当たりの投与量が、経口の場合薬１〜４０ｍｇ／
ｋｇ体重程度、好ましくは１０〜２０ｍｇ／ｋｇ体重程
度、注射により胃腸以外に投与する場合約０．１〜１０
ｍｇ／ｋｇ体重程度、好ましくは０．５〜５ｍｇ／ｋｇ
体重程度である。

【００４７】

【実施例】フラボノイド誘導体の製造例 前述のように、本発明の実験に使用された１１種のフラ
ボノイド誘導体は、それぞれ下記のように得た。即ち、
フィゼチン、クエルセチン及びクエルシトリンはそれぞ
れアルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ）、シグマ（Ｓｉｇｍ
ａ）、東京化成工業（株）から入手し、モリン、ミリセ
チン及びミリシトリンはすべてセルヴァ（Ｓｅｒｖａ）
から入手したが、パツレチンシリーズは、植物カランコ
エ グラシリス ハンセ〔Ｋａｌａｎｎｃｈｏｅ Ｇｒ
ａｃｉｌｉｓ Ｈａｎｃｅ（ベンケイソウ科（Ｃｒａｓ
ｓｕｌａｃｅａｅ））〕から抽出し、クリンソスプレノ
ール−Ｄは植物アルテミシア アニュア（Ａｒｔｅｍｉ
ｓｉａ Ａｎｎｕａ）から抽出した。

【００４８】以下、植物カランコエ グラシリス ハン
セ〔Ｋａｌａｎｎｃｈｏｅ Ｇｒａｃｉｌｉｓ Ｈａｎ
ｃｅ（Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｅ）〕を抽出してパツレ
チンシリーズのフラボノイド誘導体が得られる過程を記
載する。

【００４９】乾燥した植物粉末２．５ｋｇを９５％のエ
タノールに浸漬した後、濾過し、該エタノールの浸漬液
を減圧下に濃縮することにより粘稠なゲル体を得た。該
ゲル体を逐次石油エーテル、クロロホルム、酢酸エチル
及びｎ−ヘキサノールで処理して、それぞれに可溶の部
分を抽出した。酢酸エチルの溶出部分１５ｇを取ってカ
ラムクロマトグラフィー精製に供した。１回目の精製
は、吸着剤としてポリアミドを使用し、溶出液として最
初にクロロホルムを、そしてメタノールを逐次添加して
メタノールの含有比率を１，２，４，１０，２０，５
０，７５及び１００％の順に徐々に上げていき、合計９
５部の収集液を得た。フラボノイド誘導体を含有してい
る部分（２．３２８ｇ）を更に、シリカゲルを吸着剤と
した２回目のカラムクロマトグラフィー精製に供した。
まず、ＣＨＣｌ₃ ：ＣＨ₃ ＯＨ：ブタノン（１００：１
０：５）の溶出液を使用し、そしてメタノールの含有量
を逐次増加させ、溶出液の極性を徐々に上げていった。
得られたフラボノイド誘導体含有の部分を、更にセファ
デックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ） ＬＨ−２０を使用した
３回目のカラムクロマトグラフィー精製に供し、メタノ
ールを用いて溶出した。この３回の精製により、下記本
発明のフラボノイド誘導体を得た。ＵＶ、ＩＲ、ＮＭ
Ｒ、ＭＳにより純度を分析したところ、９５％以上であ
ると判明した。

【００５０】 （１）パツレチン−３，７−ジラムノース配糖体 ２５ｍｇ （２）パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−７，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノー ス配糖体〕 １８ｍｇ （３）パツレチン−３，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノシル〕−７−Ｏ−〔３− Ｏ−アセチルラムノース配糖体〕 １０ｍｇ （４）パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−７，Ｏ−〔３，４−Ｏ−ジアセチルラ ムノース配糖体〕 １２ｍｇ。

【００５１】上記獲得された４種の化合物のスペクトル
データを下記に示す。これらのデータから、４種のパツ
レチンシリーズのフラボノイド誘導体が得られているこ
とが判明する。

【００５２】（１）パツレチン−３，７−ジラムノース
配糖体

【００５３】

【化１２】

【００５４】ＵＶ ＭｅＯＨ／ｍａｘ ｎｍ：２６０，
２６８ｓｈ，３５２；（ＮａＯＭｅ）２６７，３９５；
（ＡｌＣｌ₃ ）２７８，４５０；（ＡｌＣｌ₃ ＋ＨＣ
ｌ）２７５，３０５ｓｈ，３６０；（ＮａＯＡｃ）２６
７，３９０；（ＮａＯＡｃ＋Ｈ₃ ＢＯ₃ ）２６６，３９
０。

【００５５】¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ：１
２．４（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−５），７．３７（１Ｈ，ｄ，
Ｊ−２，Ｈ−２′），７．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２，
Ｊ＝９，Ｈ−６′），６．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ−９，Ｈ
−５′），６．６４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），５．５７
（１Ｈ，ｄ，Ｊ−１，Ｈ−１′′′），５．２３（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−１′′），３．８５（３Ｈ，ｓ，
ＯＣＨ₃ −６），３−４（ｍ，糖のプロトン），１．１
４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７，ＣＨ₃ −６′′′），０．８６
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７，ＣＨ₃ −６′′）。

【００５６】¹³Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ：１７
８．０（Ｃ−４），１５７．６（Ｃ−２），１５５．７
（Ｃ−７），１５４．５（Ｃ−５），１４８．６（Ｃ−
９），１４８．２（Ｃ−４′），１４５．２（Ｃ−
３′），１３４．５（Ｃ−３），１２９．２（Ｃ−
６），１２１．２（Ｃ−１′），１２０．６（Ｃ−
６′），１１５．５（Ｃ−５′），１１５．５（Ｃ−
２′），１０５．４（Ｃ−１０），９８．５（Ｃ−
８），１０２．０（Ｃ−１′′），９８．８（Ｃ−
１′′′），７１．４（Ｃ−４′′），７１．１（Ｃ−
４′′′），７０．６（Ｃ−２′′），７０．６（Ｃ−
３′′），７０．３（Ｃ−５′′），７０．０（Ｃ−
２′′′），７０．０（Ｃ−３′′′），６９．９（Ｃ
−５′′′），６１．３（Ｃ−ＯＣＨ₃ −６），１７．
８（Ｃ−ＣＨ₃ −６′′），１７．４（Ｃ−ＣＨ₃ −
６′′′）。

【００５７】ＦＡＢＭＳ Ｍ／ｚ（ｒｅｌ．ｉｎ
ｔ．）：６２５（Ｍ＋Ｈ）⁺ （３０），４７９〔（Ｍ＋
Ｈ）−１４６〕⁺ （４６），３３３〔（Ｍ＋Ｈ）−２９
２〕⁺ （ＡＨ）⁺ （１００），３１７（Ａ−１５）
⁺ （３５），１８９（１５），１４７（３０）。

【００５８】（２）パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−
７，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノース配糖体〕

【００５９】

【化１３】

【００６０】ＵＶ ＭｅＯＨ／ｍａｘ ｎｍ：２５９，
２６８ ｓｈ，３６０；（ＮａＯＭｅ）２６６，３９
８；（ＡｌＣｌ₃ ）２８０，３１０，４５０；（ＡｌＣ
ｌ₃ ＋ＨＣｌ）２７８，３１０，３６０；（ＮａＯＡ
ｃ）２６８，３９６；（ＮａＯＡｃ＋Ｈ₃ ＢＯ₃ ）２６
８，３９６。

【００６１】¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ：１
２．４（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−５），７．４０（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝２，Ｈ−２′），７．３５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ−２，
Ｊ−９，Ｈ−６′），６．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９，Ｈ
−５′），６．６９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），５．６５
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−１′′′），５．２８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−１′′），５．０３（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝２，Ｊ＝１０，Ｈ−３′′′），４．１５（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−２′′′），４．０４（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−２′′），３−４（５Ｈ，ｍ，糖のプ
ロトン），１．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ₃ −６），２．
１２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＯＣＨ₃ −３′′′），１．２０
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７，ＣＨ₃ −６′′′），０．８８
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７，ＣＨ₃ −６′′）。

【００６２】¹³Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ：１７
８．３（Ｃ−４），１７０．３（Ｃ−ＯＣＯＣＨ₃ −
３′′′），１５７．８（Ｃ−２），１５５．８（Ｃ−
７），１５４．４（Ｃ−５），１４８．８（Ｃ−９），
１４８．３（Ｃ−４′），１４５．４（Ｃ−３′），１
３４．６（Ｃ−３），１２９．６（Ｃ−６），１２１．
４（Ｃ−１′），１２０．７（Ｃ−６′），１１５．７
（Ｃ−５′），１１５．６（Ｃ−２′），１０５．８
（Ｃ−１０），９８．８（Ｃ−８），１０２．１（Ｃ−
１′′），９８．８（Ｃ−１′′′），７３．８（Ｃ−
３′′′），７１．３（Ｃ−４′′），７０．７（Ｃ−
２′′），７０．５（Ｃ−３′′），７０．４（Ｃ−
５′′），７０．１（Ｃ−５′′′），６０．６（Ｃ−
２′′′），６７．４（Ｃ−４′′′），６１．５（Ｃ
−ＯＣＨ₃ −６），２１（Ｃ−ＯＣＯＣＨ₃ −
３′′′），１７．９（Ｃ−ＣＨ₃ −６′′），１７．
６（Ｃ−ＣＨ₃−６′′′）。

【００６３】ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ（ｒｅｌ．ｉｎ
ｔ．），６６７（Ｍ＋Ｈ）⁺ （２６），５２１〔（Ｍ＋
Ｈ）−１４６〕⁺ （４４），３３３〔（Ｍ＋Ｈ）−３３
４〕⁺ （１００），３１７（Ａ−１５）⁺ （３４），１
８９（３４），１４７（１１）。

【００６４】（３）パツレチン−３，Ｏ−〔３−Ｏ−ア
セチルラムノシル〕−７−Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラム
ノース配糖体〕

【００６５】

【化１４】

【００６６】ＵＶ ＭｅＯＨ／ｍａｘ ｎｍ：２５９，
２６８ ｓｈ，３６０；（ＮａＯＭｅ）２６６，３９
８；（ＡｌＣｌ₃ ）２８０，３１０，４５０；（ＡｌＣ
ｌ₃ ＋ＨＣｌ）２７８，３１０，３６０；（ＮａＯＡ
ｃ）２６８，３９６；（ＮａＯＡｃ＋Ｈ₃ ＢＯ₃ ）２６
８，３９６。

【００６７】¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ：１
２．４（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−５），７．４０（１Ｈ，ｄ，
Ｊ−２，Ｈ−２′），７．３５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ−２，
Ｊ−９，Ｈ−６′），６．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ−９，Ｈ
−５′），６．６９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），５．６５
（１Ｈ，ｄ，Ｊ−１，Ｈ−１′′′），５．２８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−１′′），５．０３（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝２，Ｊ＝１０，Ｈ−３′′′），４．１５（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−２′′′），４．０４（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−２′′），３−４（５Ｈ，ｍ，糖のプ
ロトン），３．９１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ₃ −６），２．
１２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＯＣＨ₃ −３′′′），１．２０
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７，ＣＨ₃ −６′′′），０．８８
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７，ＣＨ₃ −６′′）。

【００６８】¹³Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ：１７
８．３（Ｃ−４），１７０．３（Ｃ−ＯＣＯＣＨ₃ −
３′′′），１５７．８（Ｃ−２），１５５．８（Ｃ−
７），１５４．４（Ｃ−５），１４８．８（Ｃ−９），
１４８（Ｃ−４′），１４５．４（Ｃ−３′），１３
４．６（Ｃ−３），１２９．６（Ｃ−６），１２１．４
（Ｃ−１′），１２０．７（Ｃ−６′），１１５．７
（Ｃ−５′），１１５．６（Ｃ−２′），１０５．８
（Ｃ−１０），９８．８（Ｃ−８），１０２．１（Ｃ−
１′′），９８．８（Ｃ−１′′′），７３．８（Ｃ−
３′′′），７１．３（Ｃ−４′′），７０．７（Ｃ−
２′′），７０．５（Ｃ−３′′），７０．４（Ｃ−
５′′），７０．１（Ｃ−５′′′），６８．６（Ｃ−
２′′′），６７．４（Ｃ−４′′′），６１．５（Ｃ
−ＯＣＨ₃ −６），２１．２（Ｃ−ＯＣＯＣＨ₃ −
３′′′），１７．９（Ｃ−ＣＨ₃ −６′′），１７．
６（Ｃ−ＣＨ₃ −６′′′）。

【００６９】ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ（ｒｅｌ．ｉｎ
ｔ．）：６６７（Ｍ＋Ｈ）⁺ （２６），５２１〔（Ｍ＋
Ｈ）−１４６〕⁺ （４４），３３３〔（Ｍ＋Ｈ）−３３
４〕⁺ （ＡＨ）⁺ （１００），３１７（Ａ−１５）
⁺ （３４），１８９（３４），１４７（１１）。

【００７０】（４）パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−
７，Ｏ−〔３，４−Ｏ−ジアセチルラムノース配糖体〕

【００７１】

【化１５】

【００７２】ＵＶ ＭｅＯＨ／ｍａｘ ｎｍ：２６０，
２６８，３５８；（ＮａＯＭｅ）２６６，３９８；（Ａ
ｌＣｌ₃ ）２８０，４５０；（ＡｌＣｌ₃ ＋ＨＣｌ）２
８０，３６０；（ＮａＯＡｃ）２６６，３９０；（Ｎａ
ＯＡｃ＋Ｈ₃ ＢＯ₃ ）２６６，３９０。

【００７３】¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ：１
２．４（１Ｈ，ｓ，ＯＨ−５），７．４１（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝２，Ｈ−２′），７．３７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２，
Ｊ＝９，Ｈ−６′），６．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９，Ｈ
−５′），６．７４（３Ｈ，ｓ，Ｈ−８），５．７５
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−１′′′），５．２９（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−１′′），５．２０（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ−２，Ｊ＝１０，Ｈ−３′′′），５．１５（１
Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０，Ｈ−４′′′），４．２５（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１，Ｈ−２′′′），４．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１，Ｈ−２′′），３−４（４Ｈ，ｍ，糖のプロト
ン），３．９２（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ₃ −６），２．０８
（３Ｈ，ｓ，ＯＣＯＣＨ ₃ −３′′′），２．０７（３
Ｈ，ｓ，ＯＣＯＣＨ ₃−４′′′），１．１１（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７，ＣＨ₃ −６′′′），０．８８（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７，ＣＨ₃ −６′′）。

【００７４】¹³Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ：１７
８．３（Ｃ−４），１７０．１（Ｃ−ＯＣＯＣＨ₃ −
３′′′），１６９．８（Ｃ−ＯＣＯＣＨ₃ −
４′′′），１５７．９（Ｃ−２），１５５．９（Ｃ−
７），１５４．０（Ｃ−５），１４８．９（Ｃ−９），
１４８．４（Ｃ−４′），１４５．４（Ｃ−３′），１
３４．７（Ｃ−３），１２９．７（Ｃ−６），１２１．
４（Ｃ−１′），１２０．７（Ｃ−６′），１１５．７
（Ｃ−５′），１１５．７（Ｃ−２′），１０６．１
（Ｃ−１０），９８．５（Ｃ−８），１０２．１（Ｃ−
１′′），９９．１（Ｃ−１′′′），７１．３（Ｃ−
４′′′），７１．１（Ｃ−４′′），７０．８（Ｃ−
２′′），７０．５（Ｃ−３′′），７０．２（Ｃ−
５′′），７０．０（Ｃ−３′′′），６７．７（Ｃ−
５′′′），６７．３（Ｃ−２′′′），６１．６（Ｃ
−ＯＣＨ₃ −６），２０．９（Ｃ−ＯＣＯＣＨ ₃ −
３′′′），２０．６（Ｃ−ＯＣＯＣＨ₃ −
４′′′），１７．６（Ｃ−ＣＨ₃ −６′′），１７．
４（Ｃ−ＣＨ₃ −６′′′）。

【００７５】ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ（ｒｅｌ．ｉｎ
ｔ．）：７０９（Ｍ＋Ｈ）⁺ （９），５６３〔（Ｍ＋
Ｈ）−１４６〕⁺ （２６），３３３〔（Ｍ＋Ｈ）−２３
０〕⁺ （ＡＨ）⁺ （１００），３１７（Ａ−１５）
⁺ （２６），２３１（２７），１７１（２６），１４７
（７），１８９（６）。

【００７６】次に、植物アルテミシア アニュア（Ａｒ
ｔｅｍｉｓｉａ Ａｎｎｕａ）を抽出してクリンソスプ
レノール−Ｄが得られる過程を記載する。

【００７７】植物アルテミシア アニュア（Ａｒｔｅｍ
ｉｓｉａ Ａｎｎｕａ）１９ｋｇをメタノールに浸漬
し、該メタノール浸漬液を９７０ｇに濃縮した後、Ｈ₂
ＯとＣＨＣｌ₃ との２層溶液を用いて抽出し、さらにＣ
ＨＣｌ₃ 層の抽出液２２４ｇをポリクラール（Ｐｏｌｙ
ｃｌａｒ） ＡＴカラムに注入してＣＨＣｌ₃ ・ＭｅＯ
Ｈを用いて溶出して、クリンソスプレノール−Ｄを３５
ｇ得た。

【００７８】以上により得られた化合物のスペクトルデ
ータを下記に示す。このデータから、クリンソスプレノ
ール−Ｄが得られていることが判明する。

【００７９】

【化１６】

【００８０】ＵＶ（λｍａｘ，ｎｍ）： ＭｅＯＨ：２１４，２６０，３５２； ＭｅＯＮａ：２１４，２７０，４０２↑； ＡｌＣｌ₃ ：２１８，２８０，４４０； ＡｌＣｌ₃ ／ＨＣｌ：２１８，２７０，３７０； ＮａＯＡｃ：２１２，２７３，４２０； ＮａＯＡｃ／ホウ酸：２１２，２７０，３８６。

【００８１】ＭＳ：３６０（１００％），３４５（５７
％），３１７（１６％），１８１（１３％），１５３
（１７％），１３７（２７％），１２１（８％）。

【００８２】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：７．７０
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２，Ｈ−２′），７．５３（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝９＆ Ｊ＝２，Ｈ−６′），６．９３（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９，Ｈ−５′），６．５４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−
８），３．９６（３Ｈ，ｓ，７−ＯＭｅ），３．８９
（３Ｈ，ｓ，３−ＯＭｅ），３．８５（３Ｈ，ｓ，６−
ＯＭｅ）。

【００８３】核オーバーハウザー効果（ＮＯＥ）：照射
（ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ） ３．９６，６．５４ 増大
（ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）；照射 ３．８９，３．８
５増大。

【００８４】フラボノイド誘導体のＡ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．活性試験 ＊フラボノイド誘導体のＡ．Ｃ．Ｅ．抑制活性の検討 Ａ．Ｃ．Ｅ．活性は、１９７１年にクッシュマン及びチ
ェウング（Ｃｕｓｈｍａｎ ａｎｄ Ｃｈｅｕｎｇ）が
開発した方法に基づいて測定することができる。該試験
における、Ａ．Ｃ．Ｅ．の酵素反応時に必要な基質とし
ては、ＡＩの合成類似物：ヒプリル−Ｌ−ヒスチジル−
Ｌ−ロイシン（Ｈｉｐｐｕｒｙｌ−Ｌ−Ｈｉｓｔｉｄｙ
ｌ−Ｌ−Ｌｅｕｃｉｎｅ）を用いた。酵素反応によって
加水分解した後、生成物の馬尿酸（Ｈｉｐｐｕｒｉｃ
Ａｃｉｄ）及び２個のアミノ酸を含有するペプチド鎖を
得た。従って、Ａ．Ｃ．Ｅ．活性は、反応溶液中に生成
された馬尿酸の量から決定した。Ａ．Ｃ．Ｅ．の１単位
は、３７℃、ｐＨ８．３の水溶液中にて１分子当たり１
μモルの馬尿酸を生成する量、とする。即ち、１単位の
Ａ．Ｃ．Ｅ．＝１μモル馬尿酸／分（３７℃，ｐＨ８．
３）となる。馬尿酸及び基質は全てベンゼン環を１個含
有するため、両者とも２２８ｎｍの波長を吸収すること
ができる。しかし、吸光係数が互いに近過ぎるために、
この波長で基質と生成物とを区別することはできない。
そのため、クッシュマン及びチェウング（Ｃｕｓｈｍａ
ｎ ａｎｄ Ｃｈｅｕｎｇ）による方法では、酢酸エチ
ルを使用して反応溶液中から馬尿酸を抽出し、そして酢
酸エチルの高揮発性を利用して加熱により酢酸エチルを
蒸発させ、最後に緩衝液を加えて馬尿酸を溶解させた
後、２２８ｎｍの波長におけるその吸光値を測定する。
しかしながら、酢酸エチルで抽出をする場合、数回に分
けて実施しなければならず、過程が煩雑であるので、こ
の試験方法は再現性が低いのみならず、精度も良好では
ない。勿論、ＨＰＬＣが普及している現在、ＨＰＬＣに
より基質と馬尿酸とを分離すると共に、積分法によって
馬尿酸の含有量を計算する方法も多く用いられている。
この試験方法は精度が良いだけでなく、再現性も極めて
高いが、分析に長時間かかるという欠点がある。そのた
め、頻繁に反復される操作には適してはいない。

【００８５】本実験は、鈴木らが１９７０年に開発した
方法に基づいて修飾を施し、２，４，６−トリクロロ−
ｓ−トリアジン（即ちＴＴ試薬、トアヌクロライド及び
塩化シアヌルとも称される）を指示薬として検出した。
ＴＴ試薬はもともとグリシンを定量するためのものであ
るが、Ｎ末端が未修飾のグリシンとは反応しないので、
グリシンを定量する前に予めグリシンのＮ末端を安息香
酸で処理し、Ｎ−ベンゾイル−Ｌ−グリシン（即ち馬尿
酸）を形成させた。その後、Ｎ−ベンゾイル−Ｌ−グリ
シンのＣ末端にあるカルボキシル基をＴＴ試薬上にある
塩素原子で置換することにより重合反応を完成させ、共
有結合の複合物を形成させた。該複合物のみが３８２ｎ
ｍの可視光区域において最大の吸光を示すことに対し
て、反応溶液中に存在しているヒプリル−Ｌ−ヒスチジ
ル−Ｌ−ロイシン（Ｈｉｐｐｕｒｙｌ−Ｌ−Ｈｉｓｔｉ
ｄｙｌ−Ｌ−Ｌｅｕｃｉｎｅ）、馬尿酸生成物及び１，
４−ジオキサンに溶解しているＴＴ試薬は全て該波長を
吸収しないため、この検出方法は精度が高いのみなら
ず、測定も速やかに実施できるので、大量を選択的に抽
出するのに適している。

【００８６】実験に必要な緩衝溶液の成分を下記に示
す。

【００８７】１．緩衝溶液Ａ：亜リン酸カリウム８０ｍ
Ｍ、水素化カリウム３００ｍＭ、塩化第一コバルト（ｃ
ｏｂａｌｔｏｕｓ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）６２５μＭ；ｐ
Ｈ８．３ 用途：Ａ．Ｃ．Ｅ．及び基質の調製に使用。

【００８８】２．緩衝溶液Ｂ：亜リン酸カリウム８０ｍ
Ｍ；ｐＨ８．３ 用途：反応生成物と指示薬との発色反応に使用。

【００８９】３．ＴＴ試薬：１％（ｗ／ｗ）の２，４，
６−トリクロロ−ｓ−トリアジンを１００％の１，４−
ジオキサンに混合してなる溶液 用途：発色反応に用いられる指示薬。

【００９０】４．Ａ．Ｃ．Ｅ．溶液の調製：兎の肺中か
ら精製された３．６ｍｇのＡ．Ｃ．Ｅ．を１０ｍｌの緩
衝溶液Ａに溶解して得た酵素溶液１０ｍｌを、更に９０
ｍｌの緩衝溶液Ａで希釈し、総容積１００ｍｌ、酵素濃
度０．０３６ｍｇ／ｍｌとした。５０本の微量遠心分離
管にそれぞれ２ｍｌずつ入れ、−２０℃にて保存した。
この条件で６ケ月以上保存しても、活性に影響はない。

【００９１】５．基質の調製：ヒプリル−Ｌ−ヒスチジ
ル−Ｌ−ロイシン（Ｈｉｐｐｕｒｙｌ−Ｌ−Ｈｉｓｔｉ
ｄｙｌ−Ｌ−Ｌｅｕｃｉｎｅ）を酵素の基質とした。氷
浴において緩衝溶液Ａで希釈し、濃度を６２５０μＭに
調整した。

【００９２】分析方法：Ａ．Ｃ．Ｅ．の試験管内におけ
る活性試験及び酵素反応の生成物馬尿酸の測定は、それ
ぞれクッシュマン ディー． ダブリュー．（Ｃｕｓｈ
ｍａｎ Ｄ．Ｗ．）（１９７１）及びシュウイチ スズ
キら（Ｓｈｕｉｃｈｉ Ｓｕｚｕｋｉ，ｅｔ ａｌ）
（１９７０）が開発した方法を修飾して実施した。

【００９３】１．定性分析 （１）上記のようにして得られた各種のフラボノイド誘
導体又は他の試料を、１００％のＤＭＳＯで最大の飽和
濃度になるように調製した後、濃度０．０３６ｍｇ／ｍ
ｌの酵素水溶液５０ｍｌに３７５０μＭの基質２００μ
ｌ、試料１．２５μｌを加えて混合した。得られた溶液
を１ｍｌの微量遠心分離管において１０分間反応させた
後、０．１ｍｌの反応液を取りだし、それに１０μｌの
１Ｎ ＨＣｌを加えて反応を停止させ、１５分後、０．
４ｍｌ／１％（ｗ／ｗ）のＴＴ試薬及び０．５ｍｌの緩
衝溶液Ｂを加えて均一に混合させた。１０分後、光電比
色計（Ｐｈｏｔｏｅｌｅｃｔｒｏ−ｃｏｌｏｒｉｍｅｔ
ｅｒ）にて３８２ｎｍの波長の吸光度（ absorbance ）
を測定した。ブランクテストは、酵素を添加しなかった
以外は同ステップで行なった。

【００９４】（２）対照グループの試験は、１００％の
ＤＭＳＯを１．２５ｍｌとした以外は（１）と同ステッ
プで実施した。

【００９５】本発明の上記定性分析法により、２００種
余りの漢方薬及び薬用植物の抽出成分からのＡ．Ｃ．
Ｅ．抑制活性を有するフラボノイド誘導体を初歩的に選
んだ（即ち、一時スクリーニングを行なった）。

【００９６】２．Ａ．Ｃ．Ｅ．抑制活性の定量分析 上記各種のフラボノイド誘導体又は他の試料を１００％
のＤＭＳＯで希釈し、沈殿が生じないように一連の異な
る倍率の希釈液を調製し、各濃度下におけるＡ．Ｃ．
Ｅ．抑制の程度を調べた。横軸を濃度、縦軸を酵素の活
性残存率とし、図１のように、Ａ．Ｃ．Ｅ．の抑制曲線
図を作製した。この図から、内挿法により、酵素の残存
率が５０％（即ち抑制率５０％）である濃度を求め、そ
れをＩＣ₅₀（抑制率５０％時の濃度）とした。ＩＣ
₅₀は、その値が低いほど抑制効果が高いことを示すもの
である。

【００９７】酵素活性残存率＝（Ａ−Ａ^o ／Ａ_c −Ａ^o
Ｃ）×１００％ 〔式中、Ａ ＝実験グループの波長３８２ｎｍにおける
吸光度（ absorbance ） Ａ^o ＝実験グループの波長３８２ｎｍにおけるブランク
吸光度 Ａ_c ＝対照グループの波長３８２ｎｍにおける吸光度 Ａ^o Ｃ＝対照グループの波長３８２ｎｍにおけるブラン
ク吸光度を各々示す。〕 各曲線から求めたＩＣ₅₀を下記表２に示す。表２から明
らかなように、本発明の代表的なフラボノイド誘導体１
１種のＩＣ₅₀は、全て最終濃度４００μＭ以下の値であ
る。

【００９８】即ち、本発明のフラボノイド誘導体は、こ
のＩＣ₅₀＝４００μＭ以下を基準として、上記の最初に
選抜した群から選出した。

【００９９】 表 ２ フラボノイド誘導体 ＩＣ₅₀（μＭ） Ｋｉ（μＭ） （１）パツレチン−３，７−ジラムノース １１２ ９９ 配糖体 （２）パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル− ８２ ７５ ７，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノース配 糖体〕 （３）パツレチン−３，Ｏ−〔３−Ｏ−ア ４２ ５１ セチルラムノシル〕−７−Ｏ−〔３−Ｏ− アセチルラムノース配糖体〕 （４）パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル− ９ １３ ７，Ｏ−〔３，４−Ｏ−ジアセチルラムノ ース配糖体〕 （５）クリンソスプレノール−Ｄ １４２ １１３ （６）フィゼチン １５０ １２０ （７）クエルセチン １６７ １４５ （８）クエルシトリン １８５ １６０ （９）モリン ３４９ ２９６ （１０）ミリセチン ２４２ ２１８ （１１）ミリシトリン ３６６ ３０７。

【０１００】３．酵素動力論（ｅｎｚｙｍｅ ｋｉｎｅ
ｔｉｃｓ）の検討 （１）上記各種のフラボノイド誘導体のＡ．Ｃ．Ｅ．抑
制タイプを求めるために、下記の酵素動力論試験を行な
った。実験は各成分につき二つの抑制濃度を選んで行な
われた。

【０１０１】（２）基質濃度を固定し、最終濃度をそれ
ぞれ５００μＭ、１０００μＭ、１５００μＭ、２００
０μＭ、２５００μＭとした。反応時間は１０分間及び
１５分間の２点とし、３８２ｎｍの波長におけるそれぞ
れの吸光度を求めた。

【０１０２】反応速度（Ｖ）は、単位時間における吸光
度の変化量とする。

【０１０３】 Ｖ＝ΔＯ．Ｄ．（３８２ｎｍ）／ΔＴ（ｍｉｎ） 但し、ΔＯ．Ｄ．（３８２ｎｍ）：３８２ｎｍの波長に
おける、２点の反応時間の吸光度の変化量 ΔＴ（ｍｉｎ）：時間間隔 以上から、二つの異なる抑制濃度における酵素反応速度
と基質濃度との関係を求めた。

【０１０４】（３）下記のように、基質濃度（Ｓ）と反
応速度（Ｖ）との線形回帰線〔ラインウィーヴァー−バ
ーク（Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋ）曲線図〕を作
成した。

【０１０５】１）１／Ｓを横軸Ｘ、１／Ｖを縦軸Ｙとし
て、線形回帰線（ラインウィーヴァー−バーク曲線図）
を作成した。各試料において、２種の抑制濃度と対照試
験との３直線の交点がＸ軸上にあるかＹ軸上にあるかに
より、それぞれ競争型であるか非競争型であるかを判断
した。

【０１０６】２）回帰線の勾配と切片（ｉｎｔｅｒｃｅ
ｐｔ）とで下記ミカエリス メンテン（Ｍｉｃｈａｅｌ
ｉｓ Ｍｅｎｔｅｎ）式に基づき、抑制剤−酵素複合体
の解離常数（Ｋｉ）を求めた。

【０１０７】上記方法に従い、本発明の代表的なフラボ
ノイド誘導体１１種のラインウィーヴァー−バークのプ
ロット（Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋ Ｐｌｏｔ）
を求めた（図２〜図４参照）。

【０１０８】図２〜図４から、本発明のフラボノイド誘
導体は非競争型であることが明らかである。

【０１０９】各直線の勾配及び切片を、下記非競争型の
ミカエリス メンテン（Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ Ｍｅｎｔ
ｅｎ）式（ｂ）に当てはめて計算し、それぞれの解離常
数（Ｋｉ）を求めた結果を、表２に示した。

【０１１０】（ａ）競争型抑制（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖ
ｅ ｔｙｐｅ） １／Ｖ＝Ｋｍ／Ｖｍａｘ・（１＋Ｉ／Ｋｉ）・１／Ｓ＋
１／Ｖｍａｘ 但し、Ｖ：反応速度 Ｉ：抑制剤の濃度 Ｖｍａｘ：最大の反応速度 Ｋｍ：基質−酵素複合体
解離常数 Ｓ：基質濃度 Ｋｉ：抑制剤−酵素複合
体解離常数。

【０１１１】Ｉ＝０の時（即ち対照グループの直線） １／Ｖ＝Ｋｍ／Ｖｍａｘ・１／Ｓ＋１／Ｖｍａｘ＝Ｍ₁
・１／Ｓ＋ｂ 但し、Ｍ：勾配 ｂ：切片。

【０１１２】Ｉ＝Ｉ₁ の時（即ち実験グループの抑制濃
度直線） １／Ｖ＝Ｋｍ／Ｖｍａｘ・（１＋Ｉ／Ｋｉ）・１／Ｓ＋
１／Ｖｍａｘ ＝Ｍ₁ ・（１＋Ｉ₁ ／Ｋｉ）・１／Ｓ＋ｂ＝Ｍ₂ ・１／
Ｓ＋ｂ。

【０１１３】∴１＋Ｉ／Ｋｉ＝Ｍ₂ ／Ｍ₁ ＝実験グループの抑制濃度直線勾配／対照グループの直
線勾配。

【０１１４】（ｂ）非競争型抑制（Ｎｏｎ−ｃｏｍｐｅ
ｔｉｔｉｖｅ ｔｙｐｅ） 下記ミカエリス メンテン（Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ Ｍｅ
ｎｔｅｎ）式に基づいて計算した。

【０１１５】１／Ｖ＝（１＋Ｉ／Ｋｉ）・Ｋｍ／Ｖｍａ
ｘ・１／Ｓ＋（１＋Ｉ／Ｋｉ）・１／Ｖｍａｘ。

【０１１６】Ｉ＝０の時（即ち対照グループの直線） １／Ｖ＝Ｋｍ／Ｖｍａｘ・１／Ｓ＋１／Ｖｍａｘ＝Ｍ₁
・１／Ｓ＋ｂ 但し、Ｍ：勾配 ｂ：切片。

【０１１７】Ｉ＝Ｉ₁ の時（即ち実験グループの直線） １／Ｖ＝（１＋Ｉ／Ｋｉ）・Ｋｍ／Ｖｍａｘ・１／Ｓ＋
（１＋Ｉ／Ｋｉ）・１／Ｖｍａｘ ＝（１＋Ｉ₁ ／Ｋｉ）・Ｍ・１／Ｓ＋（１＋Ｉ／Ｋｉ）
・ｂ ＝Ｍ・１／Ｓ＋ｂ。

【０１１８】∴Ｍ／Ｍ＝ｂ／ｂ ＝実験グループの抑制濃度直線勾配／対照グループの直
線勾配 ＝１＋Ｉ／Ｋｉ。

【０１１９】実験中、構造的に検討すると、下記の事実
を見出した（表１及び表２参照）。

【０１２０】パツレチンシリーズにおいて、Ｃ₃ 及びＣ
₇ が両方ともグリコシル基（ｇｌｙｃｏｓｙｌ）を有す
る場合、その抑制作用がもっとも強い。

【０１２１】クリンソスプレノール−Ｄで見られるよう
に、Ｃ₃ 及びＣ₇ が両方ともメトキシ基を有する場合、
その抑制作用も強い。

【０１２２】また、Ｃ₃ にヒドロキシル基を有する場
合、Ｃ₃ にグリコシル基を有する場合に比べると、その
抑制作用は強い。しかし、Ｃ₅ 又はＣ₇ にヒドロキシル
基を有していても、抑制活性は示さない。さらに、Ｃ₇
のみにグリコシル基又はヒドロキシル基を有していても
抑制活性は示さず、Ｃ₃ も共にグリコシル基やメトキシ
ル基を有しなければ、顕著な抑制作用は示さない。

【０１２３】Ｃ₃ ′にヒドロキシル基を有することも、
抑制作用を示す条件の一つと考えられる。ヒドロキシル
基の代わりにメトキシル基を結合させた場合、抑制作用
は低下する傾向にある。

【０１２４】Ｃ₅ ′にヒドロキシル基が結合した場合、
抑制作用は低下する。

【０１２５】Ｃ₂ とＣ₃ との間の二重結合も、抑制効果
を強化させる作用があるように見受けられる。

【０１２６】上記に示すように、本発明に適用されるフ
ラボノイド誘導体は実施例の１１種化合物に限られるこ
とがなく、フラボノイド誘導体であれば、抑制作用の程
度が若干異なってはいてもＡ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．特性を有
し、アンギオテンシン変換酵素の抑制剤ないし抗高血圧
薬として使用され得ることが論理的に推察できる。

【０１２７】 ＊フラボノイド誘導体の抗高血圧生体内試験 上記Ａ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．試験から、フラボノイド誘導体が
抗高血圧薬として使用できることが明らかとなったが、
本発明者らは、念のために、その中のフィゼチンを選択
して生体内試験を行なった。生体内試験は動物試験と
し、成熟した雄のラット（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ
Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ Ｒａｔ：Ｓ．Ｈ．Ｒ．）
を供試動物とした。

【０１２８】１）Ｓ．Ｈ．Ｒ．に、７０分間に亘り５分
毎に２００×１０^-9ｇ／ｋｇ体重のＡＩを静脈より投与
して血圧を暫時上昇させ、毎回のＡＩ投与前後の血圧変
化を測定した結果、毎回のＡＩ投与による血圧の上昇程
度はほぼ同じであった。このことから、Ｓ．Ｈ．Ｒ．の
体内におけるＡＩの代謝が非常に速く、体内蓄積の恐れ
がないことが分かる。

【０１２９】５０μｌのＤＭＳＯを投与した前後５分間
のＡＩによる血圧上昇を比較したところ、投与の前後と
も同程度であった。また、５０μｌのＤＭＳＯを投与す
ると基礎血圧（安静時における拡張期及び収縮期の血
圧）が上昇したが、５分以内には速やかに投与前の正常
血圧に回復したので、ＤＭＳＯの投与がＡＩによる血圧
上昇に影響を与えないことが分かった。

【０１３０】２）フィゼチンに関しては、２０ｍｇ／ｋ
ｇ及び４０ｍｇ／ｋｇ投与時のそれぞれの抑制状況から
すると、用量依存性（ｄｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）
が認められたが、基礎血圧の降下及び効果持続時間とも
極めて少なかった。この点については、カプトプリル
（Ｃａｐｔｏｐｒｉｌ）の作用と類似している。

【０１３１】３）該試験は、実験動物が完全に目が覚め
ている時に行なった。それは、供試薬剤に対する麻酔剤
の可能な作用を避けるためであった。また、実験動物を
驚かせず、且つ、実験動物に大きな傷口を与えて大量の
出血をもたらせないよう、投薬（静脈）及び測定（動
脈）はすべてＳ．Ｈ．Ｒ．の尾部より施した。これは、
動物がおびえたり大量に出血すること全てが、動物の血
圧に影響を及ぼすからである。

【０１３２】上記実験の結果を図５及び図６に示す。

【０１３３】図５に示すように、フィゼチンは２０ｍｇ
／ｋｇ体重及び４０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で確かにＡ
Ｉがもたらす血圧上昇を抑制することができる。

【０１３４】また、図６に示すように、抑制強度及び効
果持続時間ともに、フィゼチンの投与量が増加するに従
って変化することが分かる。

【０１３５】これらのことから、フィゼチン及びその他
のフラボノイド誘導体が確かに抗高血圧効果を示すこと
が証明できる。

【０１３６】抗高血圧薬組成物の調製 前述のように、本発明は従来の調薬法に基づいて適当な
添加剤を加え、必要に応じた剤型を調製することができ
る。例として、下記処方例が挙げられる。

【０１３７】 １）カプセル剤例 パツレチン−３，７−ジラムノース配糖体 ２５０ｍｇ ラクトース １０００ｍｇ 澱粉 ７５０ｍｇ 該カプセル剤は、成人の場合、普通１回１錠、１日３回
服用することができる。

【０１３８】 ２）錠剤 パツレチン−３，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラ ムノシル〕−７−Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラ ムノース配糖体〕 １５０ｍｇ ラクトース ７５０ｍｇ 澱粉 １０００ｍｇ ゼラチン ２００ｍｇ 該錠剤は、成人の場合、普通１回１錠、１日２回服用す
ることができる。

【０１３９】 ３）注射剤 パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−７，Ｏ− 〔３−Ｏ−アセチルラムノース配糖体〕 ３０ｍｇ グルコース １００ｍｇ 生理食塩水 ２０００ｍｇ 該注射剤は、成人の場合、一日当たり１〜２ショットを
投薬することができる。

【０１４０】上述のように、本発明者らは、フラボノイ
ド誘導体がＡ．Ｃ．Ｅ．Ｉ．作用及び抗高血圧効果を有
することを見出したことに基づき、Ａ．Ｃ．Ｅ．抑制剤
及び抗高血圧薬組成物を発明するに至った。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例の１１種のフラボノイド誘導体の抑制
曲線図である。その中において、（Ａ）中：●−●はパ
ツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−７，Ｏ−〔３，４−Ｏ
−ジアセチルラムノース配糖体〕を、▲−▲はパツレチ
ン−３，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノシル〕−７−Ｏ
−〔３−Ｏ−アセチルラムノース配糖体〕を、■−■は
パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−７，Ｏ−〔３−Ｏ−
アセチルラムノース配糖体〕を、▼−▼はパツレチン−
３，７−ジラムノース配糖体を、◆−◆はクリンソスプ
レノール−Ｄを示し、また、（Ｂ）中：●−●はフィゼ
チンを、▲−▲はクエルセチンを、■−■はクエルシト
リンを、▼−▼はミリセチンを、◆−◆はモリンを、◇
−◇はミリシトリンを各々示す。

【図２】 パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−７，Ｏ−
〔３，４−Ｏ−ジアセチルラムノース配糖体〕、パツレ
チン−３，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノシル〕−７−
Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノース配糖体〕、パツレチ
ン−３，Ｏ−ラムノシル−７，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチル
ラムノース配糖体〕及びパツレチン−３，Ｏ−ラムノシ
ル−７，Ｏ−〔３，４−Ｏ−ジアセチルラムノース配糖
体〕のラインウィーヴァー−バーク（Ｌｉｎｅｗｅａｖ
ｅｒ−Ｂｕｒｋ）曲線図である。その中において（Ａ）
はパツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−７，Ｏ−〔３，４
−Ｏ−ジアセチルラムノース配糖体〕であり、〇−〇は
０．５％（Ｖ／Ｖ） ＤＭＳＯ溶液を、●−●は１４
μＭ投与時を、△−△は２８μＭ投与時を示し、（Ｂ）
はパツレチン−３，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノシ
ル〕−７−Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノース配糖体〕
であり、〇−〇は０．５％（Ｖ／Ｖ） ＤＭＳＯ溶液
を、●−●は４２μＭ投与時を、△−△は８４μＭ投与
時を示し、（Ｃ）はパツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−
７，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノース配糖体〕であ
り、〇−〇は０．５％（Ｖ／Ｖ） ＤＭＳＯ溶液を、
●−●は４５μＭ投与時を、△−△は９０μＭ投与時を
示し、（Ｄ）はパツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−７，
Ｏ−〔３，４−Ｏ−ジアセチルラムノース配糖体〕であ
り、〇−〇は０．５％（Ｖ／Ｖ） ＤＭＳＯ溶液を、
●−●は４８μＭ投与時を、△−△は９６μＭ投与時を
各々示す。

【図３】 クリンソスプレノール−Ｄ、フィゼチン、ク
エルセチン及びクエルシトリンのラインウィーヴァー−
バーク（Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋ）曲線図であ
る。その中において（Ａ）はクリンソスプレノール−Ｄ
であり、〇−〇は０．５％（Ｖ／Ｖ） ＤＭＳＯ溶液
を、●−●は８６μＭ投与時を、△−△は１７μＭ投与
時を示し、（Ｂ）はフィゼチンであり、〇−〇は０．５
％（Ｖ／Ｖ） ＤＭＳＯ溶液を、●−●は９９μＭ投
与時を、△−△は１９８μＭ投与時を示し、（Ｃ）はク
エルセチンであり、〇−〇は０．５％（Ｖ／Ｖ） Ｄ
ＭＳＯ溶液を、●−●は１０４μＭ投与時を、△−△は
２０９μＭ投与時を示し、（Ｄ）はクエルシトリンであ
り、〇−〇は０．５％（Ｖ／Ｖ） ＤＭＳＯ溶液を、
●−●は１１３μＭ投与時を、△−△は２２７μＭ投与
時を各々示す。

【図４】 ミリセチン、モリン及びミリセトリンのライ
ンウィーヴァー−バーク（Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕ
ｒｋ）曲線図である。その中において（Ａ）はミリセチ
ンであり、〇−〇は０．５％（Ｖ／Ｖ） ＤＭＳＯ溶
液を、●−●は１２５μＭ投与時を、△−△は２５１μ
Ｍ投与時を示し、（Ｂ）はモリンであり、〇−〇は０．
５％（Ｖ／Ｖ） ＤＭＳＯ溶液を、●−●は１４７μ
Ｍ投与時を、△−△は２９５μＭ投与時を示し、（Ｃ）
はミリセトリンであり、〇−〇は０．５％（Ｖ／Ｖ）
ＤＭＳＯ溶液を、●−●は１６０μＭ投与時を、△−
△は３２０μＭ投与時を各々示す。

【図５】 フィゼチンを２０ｍｇ／ｋｇ体重及び４０ｍ
ｇ／ｋｇ体重の投与量でそれぞれ静脈経由によりＳ．
Ｈ．Ｒ．に投与し、ＡＩによりもたらされた血圧上昇に
対する抑制作用の状況を示す図である。その中において
（Ａ）中：▲は２００ｎｇ／ｋｇのＡＩ投与時を、△は
２０ｍｇ／ｋｇのＡＩ投与時を示し、（Ｂ）中：▲は２
００ｎｇ／ｋｇのＡＩ投与時を、△は４０ｍｇ／ｋｇの
ＡＩ投与時を各々示す。

【図６】 フィゼチンを静脈経由によりＳ．Ｈ．Ｒ．に
投与した時のフィゼチンの抑制率の経時変化を示す図で
ある。その中において、▲−▲は２０ｍｇ／ｋｇ投与時
を、●−●は４０ｍｇ／ｋｇ投与時を各々示す。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 有効量のフラボノイド誘導体及び薬理学
   的に許容される担体を含有する抗高血圧薬組成物。
2. 【請求項２】 有効量のフラボノイド誘導体及び薬理学
   的に許容される担体を含有する、アンギオテンシン変換
   酵素の抑制剤組成物。
3. 【請求項３】 フラボノイド誘導体が、パツレチン−
   ３，７−ジラムノース配糖体、パツレチン−３，Ｏ−ラ
   ムノシル−７，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノース配糖
   体〕、パツレチン−３，Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノ
   シル〕−７−Ｏ−〔３−Ｏ−アセチルラムノース配糖
   体〕、パツレチン−３，Ｏ−ラムノシル−７，Ｏ−
   〔３，４−Ｏ−ジアセチルラムノース配糖体〕、クリン
   ソスプレノール−Ｄ、フィゼチン、クエルセチン、クエ
   ルシトリン、モリン、ミリセチン及びミリシトリンから
   なる群から選ばれる１個以上の化合物である請求項１又
   は請求項２に記載の組成物。
4. 【請求項４】 経口投与する場合の有効量が１〜４０ｍ
   ｇ／ｋｇである請求項３に記載の組成物。
5. 【請求項５】 経口投与する場合の有効量が１０〜２０
   ｍｇ／ｋｇである請求項４に記載の組成物。
6. 【請求項６】 注射により投与する場合の有効量が０．
   １〜１０ｍｇ／ｋｇである請求項３に記載の組成物。
7. 【請求項７】 注射により投与する場合の有効量が０．
   ５〜５ｍｇ／ｋｇである請求項６に記載の組成物。
8. 【請求項８】 フラボノイド誘導体がフィゼチンである
   請求項３に記載の組成物。