JPH0613560B2 - 高純度牛ラクトフェリンの製造法 - Google Patents
高純度牛ラクトフェリンの製造法Info
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- JPH0613560B2 JPH0613560B2 JP62169332A JP16933287A JPH0613560B2 JP H0613560 B2 JPH0613560 B2 JP H0613560B2 JP 62169332 A JP62169332 A JP 62169332A JP 16933287 A JP16933287 A JP 16933287A JP H0613560 B2 JPH0613560 B2 JP H0613560B2
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- milk
- ion exchanger
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- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
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- A23J1/20—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は高純度牛ラクトフェリンの製造法に関する。
［技術の背景及び従来技術］ ラクトフェリンは乳汁、唾液等の外分泌液中に存在する
鉄結合性の蛋白質であり、乳児や子牛の授乳において鉄
を運搬する蛋白質として栄養学的に重要な働きを担って
いること、及びその鉄結合性の特性ゆえに鉄要求性の高
い病原性細菌に対して強い静菌作用を有することが知ら
れている。即ちラクトフェリンは、乳中に存在する免疫
グロブリンやリゾチーム等と共に、栄養学的見地のみな
らず感染予防の見地からも重要な乳蛋白質である。ラク
トフェリンの乳中における存在形態は鉄の結合の有無に
よって２種のものが知られている。また、ラクトフェリ
ンは初乳には比較的多く含有されているものの、常乳中
の含有は少なく、例えば牛乳１中のラクトフェリンは
約２５０mgと微量含まれているに過ぎない。
鉄結合性の蛋白質であり、乳児や子牛の授乳において鉄
を運搬する蛋白質として栄養学的に重要な働きを担って
いること、及びその鉄結合性の特性ゆえに鉄要求性の高
い病原性細菌に対して強い静菌作用を有することが知ら
れている。即ちラクトフェリンは、乳中に存在する免疫
グロブリンやリゾチーム等と共に、栄養学的見地のみな
らず感染予防の見地からも重要な乳蛋白質である。ラク
トフェリンの乳中における存在形態は鉄の結合の有無に
よって２種のものが知られている。また、ラクトフェリ
ンは初乳には比較的多く含有されているものの、常乳中
の含有は少なく、例えば牛乳１中のラクトフェリンは
約２５０mgと微量含まれているに過ぎない。
このようにラクトフェリンは有益な生理作用を有してい
るにもかかわらず、乳中の含量が少ないため、その工業
的な分離・精製は困難とされてきた。
るにもかかわらず、乳中の含量が少ないため、その工業
的な分離・精製は困難とされてきた。
しかしながら一方では、この有益なラクトフェリンを乳
から分離精製しようとする種々の試みが従来から行なわ
れている。
から分離精製しようとする種々の試みが従来から行なわ
れている。
たとえば、牛乳から脂肪を分離した脱脂乳において、カ
ゼインをpH４．６で等電点沈澱させたカゼイン画分或は
ホエー画分を硫酸アンモニウムで分画し、数種のイオン
交換体でカラム分画して精製する方法（M.L.Grovrs,J.A
m.Chem.Soc.,82巻，3345〜3350頁，1960年；M.L.Grove
s,Biochem.Biophys.Acta.,100巻，154〜162頁，1965
年）、 ラクトパーオキシターゼを精製する方法において、レン
ネットホエーをpH7.0に調製し、弱酸性陽イオン交換樹
脂に接触させて吸着させ、樹脂を分取した後、脱離液で
脱離させ、硫酸アンモニウムで分画し、次いで弱酸性陽
イオン交換樹脂或は燐酸カルシウムのカラム分画を行っ
た際に、不純物として混合されているラクトフェリンが
副次的に分画される方法（M.Morrison et al,J.Biol.Ch
em.,228巻，767〜776頁，1957年；W.G.Gordon et al,Bi
ochem.Biophys.Acta.,60巻，410〜411頁，1962年）、 母乳を硫酸アンモニウムで分画し、その上澄画分に硫酸
アンモニウム鉄を添加し、次いで弱酸性陽イオン交換体
に接触させてカラム分画し、精製する方法（P,Querinje
an et al,Eur.J.Biochem.,20巻，420〜425頁，1971
年）、 また硫酸アンモニウム鉄を含有する水にて母乳を３倍に
希釈し、弱酸性陽イオン交換体に接触させてカラム分画
し、精製する方法（B.G.Johansson,Acta Chem.Scand.,2
3巻，683〜684頁．1969年）等のラクトフェリン分離製
法が報告されている。
ゼインをpH４．６で等電点沈澱させたカゼイン画分或は
ホエー画分を硫酸アンモニウムで分画し、数種のイオン
交換体でカラム分画して精製する方法（M.L.Grovrs,J.A
m.Chem.Soc.,82巻，3345〜3350頁，1960年；M.L.Grove
s,Biochem.Biophys.Acta.,100巻，154〜162頁，1965
年）、 ラクトパーオキシターゼを精製する方法において、レン
ネットホエーをpH7.0に調製し、弱酸性陽イオン交換樹
脂に接触させて吸着させ、樹脂を分取した後、脱離液で
脱離させ、硫酸アンモニウムで分画し、次いで弱酸性陽
イオン交換樹脂或は燐酸カルシウムのカラム分画を行っ
た際に、不純物として混合されているラクトフェリンが
副次的に分画される方法（M.Morrison et al,J.Biol.Ch
em.,228巻，767〜776頁，1957年；W.G.Gordon et al,Bi
ochem.Biophys.Acta.,60巻，410〜411頁，1962年）、 母乳を硫酸アンモニウムで分画し、その上澄画分に硫酸
アンモニウム鉄を添加し、次いで弱酸性陽イオン交換体
に接触させてカラム分画し、精製する方法（P,Querinje
an et al,Eur.J.Biochem.,20巻，420〜425頁，1971
年）、 また硫酸アンモニウム鉄を含有する水にて母乳を３倍に
希釈し、弱酸性陽イオン交換体に接触させてカラム分画
し、精製する方法（B.G.Johansson,Acta Chem.Scand.,2
3巻，683〜684頁．1969年）等のラクトフェリン分離製
法が報告されている。
また、モノクロナール抗牛ラクトフェリン抗体を固定し
て利用するアフィニティークロマトグラフィー法も知ら
れている（特開昭61−145200号公報）。
て利用するアフィニティークロマトグラフィー法も知ら
れている（特開昭61−145200号公報）。
［発明が解決しようとする問題点］ しかしながら、上記した従来のラクトフェリン分離精製
法は、効率が悪いので、工業的規模でラクトフェリンを
大量に製造するには不適当である。
法は、効率が悪いので、工業的規模でラクトフェリンを
大量に製造するには不適当である。
また、これら従来法では、その工程中において何等かの
物質を原料乳中に添加するので、大量の原料乳の品質を
必然的に変化させてしまうと言う欠点を持っていた。例
えば、分画のための硫酸アンモニウムの添加、硫酸ラク
トフェリンの存在形態を鉄結合型に変えるための鉄含有
溶液の添加、pH値の調製のための酸，アルカリ液の添加
などである。更に、ラクトフェリンを精製する上におい
ても、数種のイオン交換体を用いたり、カラムの脱離条
件を種々変化させたり、硫酸アンモニウム分画を用いた
りすることによって、ラクトフェリン以外の物質を除去
して、大量の原料液の品質を変化させ，あるいは複雑な
工程を必要とさせていた。
物質を原料乳中に添加するので、大量の原料乳の品質を
必然的に変化させてしまうと言う欠点を持っていた。例
えば、分画のための硫酸アンモニウムの添加、硫酸ラク
トフェリンの存在形態を鉄結合型に変えるための鉄含有
溶液の添加、pH値の調製のための酸，アルカリ液の添加
などである。更に、ラクトフェリンを精製する上におい
ても、数種のイオン交換体を用いたり、カラムの脱離条
件を種々変化させたり、硫酸アンモニウム分画を用いた
りすることによって、ラクトフェリン以外の物質を除去
して、大量の原料液の品質を変化させ，あるいは複雑な
工程を必要とさせていた。
また、アフィニティークロマトグラフィー法を工業的に
利用するためには抗体を大量に生産することが必要とさ
れるためコスト高となること、及び抗体の安定性が非常
に限られていることから、その工業的な実施は、事実上
きわめて困難であった。
利用するためには抗体を大量に生産することが必要とさ
れるためコスト高となること、及び抗体の安定性が非常
に限られていることから、その工業的な実施は、事実上
きわめて困難であった。
［発明の目的及び発明の要約］ 本発明の目的は、従って、ラクトフェリンの乳からの分
離精製に関する上記従来技術の欠点を改善した新規な牛
ラクトフェリンの製造法を提供することにある。即ち、
原料乳の組成・品質に大きな変化を与えることなく、ま
た複雑な工程を用いることなく、ラクトフェリン（以下
単なるラクトフェリンとの記載は，牛ラクトフェリンを
いう。）を分離精製することのできる工業的製造法を提
供することにある。
離精製に関する上記従来技術の欠点を改善した新規な牛
ラクトフェリンの製造法を提供することにある。即ち、
原料乳の組成・品質に大きな変化を与えることなく、ま
た複雑な工程を用いることなく、ラクトフェリン（以下
単なるラクトフェリンとの記載は，牛ラクトフェリンを
いう。）を分離精製することのできる工業的製造法を提
供することにある。
本発明の方法は、基本的な３工程を含んでいる。即ち、
イオン交換基としてカルボキシメチル基を有し，且つヘ
モグロビン吸着能が３．５ｇ／１００ml以上である弱酸
性陽イオン交換体と原料乳とを接触させて、ラクトフェ
リンを選択的に吸着させる吸着処理、上記イオン交換体
を水で洗浄して、上記イオン交換体に吸着されていない
物質を除去する水洗処理、及び１種類以上の塩類溶液で
上記イオン交換体から吸着された物質を脱離させる脱離
処理である。
イオン交換基としてカルボキシメチル基を有し，且つヘ
モグロビン吸着能が３．５ｇ／１００ml以上である弱酸
性陽イオン交換体と原料乳とを接触させて、ラクトフェ
リンを選択的に吸着させる吸着処理、上記イオン交換体
を水で洗浄して、上記イオン交換体に吸着されていない
物質を除去する水洗処理、及び１種類以上の塩類溶液で
上記イオン交換体から吸着された物質を脱離させる脱離
処理である。
本発明は、原料乳に何等の物質も添加することなく、直
接にイオン交換体で処理するので、大量の原料乳の品質
を変化させることがない。また、イオン交換体を選択す
ることにより、ラクトフェリンを選択的に吸着させるの
で、高純度でラクトフェリンを分離回収することができ
る。
接にイオン交換体で処理するので、大量の原料乳の品質
を変化させることがない。また、イオン交換体を選択す
ることにより、ラクトフェリンを選択的に吸着させるの
で、高純度でラクトフェリンを分離回収することができ
る。
上記の基本的方法において、脱離処理を２段階で行うこ
とができる。第１の脱離処理においては、上記水洗処理
の後に、相対的に低濃度の１種類以上の塩類溶液を用い
て、上記イオン交換体を処理して、吸着された物質の
内、低濃度溶液で脱離され得る不純物を除去する。この
第１の脱離処理を行う場合には、第２の脱離処理は相対
的に高濃度の塩類溶液を用いて行う。
とができる。第１の脱離処理においては、上記水洗処理
の後に、相対的に低濃度の１種類以上の塩類溶液を用い
て、上記イオン交換体を処理して、吸着された物質の
内、低濃度溶液で脱離され得る不純物を除去する。この
第１の脱離処理を行う場合には、第２の脱離処理は相対
的に高濃度の塩類溶液を用いて行う。
本発明の基本的方法によれば、回収された蛋白質中、８
０重量％以上の高純度でラクトフェリンが得られる。
０重量％以上の高純度でラクトフェリンが得られる。
また、脱離処理を２段階で行うことにより、回収された
全蛋白質中、９８重量％以上の高純度の牛ラクトフェリ
ンが得られる。
全蛋白質中、９８重量％以上の高純度の牛ラクトフェリ
ンが得られる。
本発明において用いられるイオン交換体は、イオン交換
基としてカルボキシメチル基を有し、且つヘモグロビン
吸着能が３．５ｇ／１００ml以上の弱酸性陽イオン交換
体を用いることが重要である。尚、上記ヘモグロビン吸
着能の基準については、後に詳述する。
基としてカルボキシメチル基を有し、且つヘモグロビン
吸着能が３．５ｇ／１００ml以上の弱酸性陽イオン交換
体を用いることが重要である。尚、上記ヘモグロビン吸
着能の基準については、後に詳述する。
また、体積変化率が１，５以下のいわゆるハードタイプ
の弱酸性陽イオン交換体を用いるのが望ましく、本発明
方法がカラムを用いて連続的に行なわれる場合には、特
に望ましい。本明細書において用いられている体積変化
率の基準は、Na形におけるイオン交換体を水で膨潤させ
たときのベッドボリュームを、該交換体をイオン強度
０．５の塩化ナトリウム溶液と平衡化したときのベッド
ボリュームで除した値である。
の弱酸性陽イオン交換体を用いるのが望ましく、本発明
方法がカラムを用いて連続的に行なわれる場合には、特
に望ましい。本明細書において用いられている体積変化
率の基準は、Na形におけるイオン交換体を水で膨潤させ
たときのベッドボリュームを、該交換体をイオン強度
０．５の塩化ナトリウム溶液と平衡化したときのベッド
ボリュームで除した値である。
また、吸着処理は、０〜６０℃の温度で行なわれるのが
望ましい。
望ましい。
脱離液としては、塩化ナトリウム，塩化カリウム，塩化
カルシウム，塩化マグネシウム，またはそれらの混合物
よりなる群から選択された塩の溶液を用いることができ
る。
カルシウム，塩化マグネシウム，またはそれらの混合物
よりなる群から選択された塩の溶液を用いることができ
る。
上記の脱離処理を２段階で行う場合には、上記相対的に
低濃度の溶液は、０．４〜２．５％（重量，以下同じ）
の範囲から選択し、上記相対的に高濃度の溶液は、１．
５〜１２％の範囲から選択される。
低濃度の溶液は、０．４〜２．５％（重量，以下同じ）
の範囲から選択し、上記相対的に高濃度の溶液は、１．
５〜１２％の範囲から選択される。
［本発明の具体的な説明］ 以下に本発明の技術構成について詳述する。
本発明は、とりわけ高純度の牛ラクトフェリンを工業的
に製造するのに適している。
に製造するのに適している。
この目的から、本発明においては、ラクトフェリンが存
在している牛乳由来の脱脂乳又はホエーを原料として用
いる。なお、ホエーは甘性ホエー、酸ホエーのいずれで
あってもよい。以下、これらの材料を単に「原料乳」と
言う。望ましくは、原料乳は加熱によって殺菌されてい
ないものを用いる。その理由は牛ラクトフェリンは高温
殺菌により大きく変性する傾向が見られるからである。
在している牛乳由来の脱脂乳又はホエーを原料として用
いる。なお、ホエーは甘性ホエー、酸ホエーのいずれで
あってもよい。以下、これらの材料を単に「原料乳」と
言う。望ましくは、原料乳は加熱によって殺菌されてい
ないものを用いる。その理由は牛ラクトフェリンは高温
殺菌により大きく変性する傾向が見られるからである。
ラクトフェリンはその等電点が７．８であるといわれて
おり、従ってこれにより低いpH域の原料乳においては
（＋）帯電している。即ち、pH６．７の脱脂乳、pH６．
４の甘性ホエー及びpH４．６の酸ホエーのいずれにおい
ても、ラクトフェリンは（＋）帯電している。その
（＋）帯電の傾向は、原料乳のpHが低い程、強い帯電性
を示す。一方、原料乳中の他の多くの蛋白質の等電点は
ラクトフェリンよりも低く、５前後である。従って、脱
脂乳や甘性ホエーのpHにおいては、これらの蛋白質は
（−）帯電しており、酸ホエーのpHにおいては等電点付
近にあるか又は弱い（＋）帯電をしている。
おり、従ってこれにより低いpH域の原料乳においては
（＋）帯電している。即ち、pH６．７の脱脂乳、pH６．
４の甘性ホエー及びpH４．６の酸ホエーのいずれにおい
ても、ラクトフェリンは（＋）帯電している。その
（＋）帯電の傾向は、原料乳のpHが低い程、強い帯電性
を示す。一方、原料乳中の他の多くの蛋白質の等電点は
ラクトフェリンよりも低く、５前後である。従って、脱
脂乳や甘性ホエーのpHにおいては、これらの蛋白質は
（−）帯電しており、酸ホエーのpHにおいては等電点付
近にあるか又は弱い（＋）帯電をしている。
本発明は、これらの蛋白質の帯電性の違いを利用してラ
クトフェリンの分離を行おうとするものである。即ち、
原料乳に含まれる蛋白質中のラクトフェリンとその蛋白
質の帯電性の正負或は帯電性の強弱を利用して、原料乳
から（＋）に帯電したラクトフェリンを選択的にイオン
交換体に吸着させる。従って、本発明においては、陽イ
オン交換体を用いることが必須である。
クトフェリンの分離を行おうとするものである。即ち、
原料乳に含まれる蛋白質中のラクトフェリンとその蛋白
質の帯電性の正負或は帯電性の強弱を利用して、原料乳
から（＋）に帯電したラクトフェリンを選択的にイオン
交換体に吸着させる。従って、本発明においては、陽イ
オン交換体を用いることが必須である。
また、ラクトフェリンは分子量約８万の大きな蛋白質で
ある。本発明方法を工業的に行う場合には、ポーラスな
陽イオン交換体を用いて、ラクトフェリン分子がポーラ
ス構造内に自由に入り得るようにし、大量に吸着される
ようにすることが必要である。
ある。本発明方法を工業的に行う場合には、ポーラスな
陽イオン交換体を用いて、ラクトフェリン分子がポーラ
ス構造内に自由に入り得るようにし、大量に吸着される
ようにすることが必要である。
本発明においては、上記の交換体の多孔性又は吸着性
は、ラクトフェリンに匹敵する大きい分子量を有する典
型的な蛋白質であるヘモグロビン吸着能を指標とするこ
とができる。このヘモグロビン吸着能は下記に説明する
方法によって求められた。
は、ラクトフェリンに匹敵する大きい分子量を有する典
型的な蛋白質であるヘモグロビン吸着能を指標とするこ
とができる。このヘモグロビン吸着能は下記に説明する
方法によって求められた。
即ち、pH５．０に調整した０．０５Ｍクエン酸−クエン
酸ナトリウムの緩衝液に、ヘモグロビン４００mgを溶解
して１００mlのヘモグロビン溶液を調整した。水にて膨
潤したナトリウム形のイオン交換体２mlを同緩衝液にて
平衡化した後、該溶液中に投入した。２５℃にて２時間
撹拌した後、該イオン交換体分取、同緩衝液にて洗浄し
て未吸着のヘモグロビンを回収し、上記回収液中のヘモ
グロビン及び上記ヘモグロビン溶液中に残存するヘモグ
ロビン量を測定して吸着量を求めた。本明細書では、こ
の値を、水にて膨潤したナトリウム形のイオン交換体１
００ml当たりのヘモグロビン吸着量(g)として用いてい
る。
酸ナトリウムの緩衝液に、ヘモグロビン４００mgを溶解
して１００mlのヘモグロビン溶液を調整した。水にて膨
潤したナトリウム形のイオン交換体２mlを同緩衝液にて
平衡化した後、該溶液中に投入した。２５℃にて２時間
撹拌した後、該イオン交換体分取、同緩衝液にて洗浄し
て未吸着のヘモグロビンを回収し、上記回収液中のヘモ
グロビン及び上記ヘモグロビン溶液中に残存するヘモグ
ロビン量を測定して吸着量を求めた。本明細書では、こ
の値を、水にて膨潤したナトリウム形のイオン交換体１
００ml当たりのヘモグロビン吸着量(g)として用いてい
る。
以下に、若干の試験例を説明して、本発明の有効性を例
証する。
証する。
試験１ この試験の目的は、本発明で用いられるのに適した交換
体を例証することである。
体を例証することである。
表１に記載した１０種の市販の陽イオン交換体につい
て、次の要領にてバッチ処理し、ラクトフェリン分離回
収性を試験した。
て、次の要領にてバッチ処理し、ラクトフェリン分離回
収性を試験した。
ナトリウム形のイオン交換体を水で膨潤させて１０mlと
したものを生の脱脂牛乳１kg（pH６．７）に投入した。
この混合液を、４℃で１６時間撹拌した後、該イオン交
換体を分取して水洗した。ついで１０％食塩水１５０ml
でラクトフェリンをイオン交換体から脱離し、この回収
液中のラクトフェリン含量をラウレル（Laurell）法（C
-B.Laurell,Anal.Biochem.,15巻，45頁，1966年）によ
り測定した。その測定結果は表１に併せて示す通りであ
る。
したものを生の脱脂牛乳１kg（pH６．７）に投入した。
この混合液を、４℃で１６時間撹拌した後、該イオン交
換体を分取して水洗した。ついで１０％食塩水１５０ml
でラクトフェリンをイオン交換体から脱離し、この回収
液中のラクトフェリン含量をラウレル（Laurell）法（C
-B.Laurell,Anal.Biochem.,15巻，45頁，1966年）によ
り測定した。その測定結果は表１に併せて示す通りであ
る。
また、イオン交換体による吸着処理後の脱脂乳のpHも併
せて表１に示した。
せて表１に示した。
更に、回収液に含まれる蛋白質に占めるラクトフェリン
含有比率（％）を、回収液の２８０nmにおける総蛋白質
の吸光度に占めるラクトフェリンの吸光度比率（ラクト
フェリン１％液の２８０nmにおける吸光度を１２．７と
して計算）から近似的に求められる。この値を、ラクト
フェリンの純度として表１に示した。
含有比率（％）を、回収液の２８０nmにおける総蛋白質
の吸光度に占めるラクトフェリンの吸光度比率（ラクト
フェリン１％液の２８０nmにおける吸光度を１２．７と
して計算）から近似的に求められる。この値を、ラクト
フェリンの純度として表１に示した。
なお、上記２８０nmにおける吸光度を用いて蛋白質濃度
を測定する手法は広く行なわれている。
を測定する手法は広く行なわれている。
事実、本発明の回収液においては、それに含有される全
蛋白質に対するラクトフェリンの含有率が高いので、上
記２８０nmにおける吸光度比率（％）から近似的に求め
た値は、他の精密な測定方法によって求めた値と殆ど等
しかった。（例えば後記実施例２参照）。
蛋白質に対するラクトフェリンの含有率が高いので、上
記２８０nmにおける吸光度比率（％）から近似的に求め
た値は、他の精密な測定方法によって求めた値と殆ど等
しかった。（例えば後記実施例２参照）。
表１の結果から明らかなように、イオン交換基としてカ
ルボキシメチル基を有し、かつヘモグロビン吸着能力が
３．５ｇ／１００ml以上である弱酸性陽イオン交換体を
用いた実験No．７〜１０においては、いずれも、ラクト
フェリン回収量が大きく、またラクトフェリンの純度も
９０％以上であって高純度のラクトフェリンが得られ
た。これに対し、カルボキシメチル基以外のイオン交換
基を有する弱酸性陽イオン交換体（実験No．１〜４）で
はいずれもラクトフェリン回収量が極めて小さいか、或
は少量回収されてもラクトフェリン純度の低いものであ
った。また、イオン交換基としてカルボキシメチル基を
有するものであっても、ヘモグロビン吸着能力が３．５
ｇ／１００mlに満たない場合（実験No．５〜６）には、
ラクトフェリン回収量もその純度も低いものであった。
ルボキシメチル基を有し、かつヘモグロビン吸着能力が
３．５ｇ／１００ml以上である弱酸性陽イオン交換体を
用いた実験No．７〜１０においては、いずれも、ラクト
フェリン回収量が大きく、またラクトフェリンの純度も
９０％以上であって高純度のラクトフェリンが得られ
た。これに対し、カルボキシメチル基以外のイオン交換
基を有する弱酸性陽イオン交換体（実験No．１〜４）で
はいずれもラクトフェリン回収量が極めて小さいか、或
は少量回収されてもラクトフェリン純度の低いものであ
った。また、イオン交換基としてカルボキシメチル基を
有するものであっても、ヘモグロビン吸着能力が３．５
ｇ／１００mlに満たない場合（実験No．５〜６）には、
ラクトフェリン回収量もその純度も低いものであった。
これらの試験結果により、本発明に用いるべき弱酸性陽
イオン交換体は、上記２つの条件、即ちイオン交換基と
してカルボキシメチル基を有すること、ヘモグロビン吸
着能が３．５ｇ／１００ml以上出あること、を共に満足
するものでなければならないことが判明した。
イオン交換体は、上記２つの条件、即ちイオン交換基と
してカルボキシメチル基を有すること、ヘモグロビン吸
着能が３．５ｇ／１００ml以上出あること、を共に満足
するものでなければならないことが判明した。
また、実験No．７〜１０においては、ラクトフェリンを
吸着処理した後の脱脂乳のpHは殆ど変化せず、また風味
的にも認められなかった。
吸着処理した後の脱脂乳のpHは殆ど変化せず、また風味
的にも認められなかった。
従って、本発明方法は原料乳の品質を損なうことなく，
ラクトフェリンを高純度で製造できることが判明した。
ラクトフェリンを高純度で製造できることが判明した。
試験２ この試験の目的は、本発明において用いられる弱酸性陽
イオン交換体に対して適用し得る対イオンを例証するこ
とである。
イオン交換体に対して適用し得る対イオンを例証するこ
とである。
上記試験１において、本発明で使用し得ることが判明し
た、CM−セロファースFF（ファルマシア製）30mlに、表
２記載の対イオン置換用溶液各５００ｇを通じた後、水
洗して各対イオンを有するイオン交換体を調製した。次
いで、これらイオン交換体を脱脂乳１kgに投入して４℃
で１６時間接触、撹拌し、バッチ処理した後、脱脂を分
取して水洗し、後１０％食塩水３００mlでラクトフェリ
ンを脱離した。この回収液中のラクトフェリン回収量、
ラクトフェリンの純度及びイオン交換体処理後の脱脂乳
pHを測定した結果は、表２に示す通りである。
た、CM−セロファースFF（ファルマシア製）30mlに、表
２記載の対イオン置換用溶液各５００ｇを通じた後、水
洗して各対イオンを有するイオン交換体を調製した。次
いで、これらイオン交換体を脱脂乳１kgに投入して４℃
で１６時間接触、撹拌し、バッチ処理した後、脱脂を分
取して水洗し、後１０％食塩水３００mlでラクトフェリ
ンを脱離した。この回収液中のラクトフェリン回収量、
ラクトフェリンの純度及びイオン交換体処理後の脱脂乳
pHを測定した結果は、表２に示す通りである。
表２の結果から明らかなように、対イオンの形がＨ，N
a，Ｋ，Ca，Mgのいずれの形であっても、ラクトフェリ
ンの回収率は大きく、また回収液の蛋白質に占めるラク
トフェリン純度も８０％以上であって高純度のラクトフ
ェリンが得られた。またラクトフェリンを吸着処理した
後の脱脂乳pHには殆ど変化が見られず、また風味的にも
変化が認められなかった。
a，Ｋ，Ca，Mgのいずれの形であっても、ラクトフェリ
ンの回収率は大きく、また回収液の蛋白質に占めるラク
トフェリン純度も８０％以上であって高純度のラクトフ
ェリンが得られた。またラクトフェリンを吸着処理した
後の脱脂乳pHには殆ど変化が見られず、また風味的にも
変化が認められなかった。
従って、本発明に用いる弱酸性陽イオン交換体の対イオ
ンの形は特に問題とはならず、Ｈ，Na，Ｋ，Ca，Mg等の
いずれの形であってもよいことが判明した。
ンの形は特に問題とはならず、Ｈ，Na，Ｋ，Ca，Mg等の
いずれの形であってもよいことが判明した。
以上の試験結果から、本発明の基本的方法によって、高
純度のラクトフェリンが製造できることが例証された。
純度のラクトフェリンが製造できることが例証された。
試験３ この試験の目的は、本発明の基本方法における脱離処理
を２段階で行うことの有利性を例証することである。
を２段階で行うことの有利性を例証することである。
イオン交換基としてカルボキシメチル基を有し、ヘモグ
ロビン吸着能力が３．９ｇ／１００mlであるCM-セファ
デックスC-５０（ファルマシア製）０．４ｇを水で膨潤
し、１８mlのNa型のイオン交換体に変換し、これをpH
６．７の生の牛脱脂乳２．０kgに投入し、４℃で撹拌・
接触させた。１６時間後、布にてイオン交換体を回収
し、カラムに充填し、水洗して脱脂乳分を除いた後、図
１のグラフの横軸に示す各濃度の塩化ナトリウム溶液５
０mlを低濃度から順次通液し、各流出液を分画し２００
nmにおける吸光度及びラクトフェリン濃度を測定し、そ
の結果を同図に示した。
ロビン吸着能力が３．９ｇ／１００mlであるCM-セファ
デックスC-５０（ファルマシア製）０．４ｇを水で膨潤
し、１８mlのNa型のイオン交換体に変換し、これをpH
６．７の生の牛脱脂乳２．０kgに投入し、４℃で撹拌・
接触させた。１６時間後、布にてイオン交換体を回収
し、カラムに充填し、水洗して脱脂乳分を除いた後、図
１のグラフの横軸に示す各濃度の塩化ナトリウム溶液５
０mlを低濃度から順次通液し、各流出液を分画し２００
nmにおける吸光度及びラクトフェリン濃度を測定し、そ
の結果を同図に示した。
同図の２８０nm吸光度変化から、イオン交換体の蛋白質
の脱離は、通液した流出液の食塩濃度の上昇に伴い２つ
の画分として分画されることが判る。低濃度の塩化ナト
リウム溶液で脱離される第１の画分は、主としてラクト
フェリン以外の成分であり、高濃度の塩化ナトリウム溶
液で脱離される第２の画分は、ラクトフェリンが主たる
成分である。そしてこの２つの画分の境界となる塩化ナ
トリウム溶液の濃度は１．４〜１．６％であることが知
れる。
の脱離は、通液した流出液の食塩濃度の上昇に伴い２つ
の画分として分画されることが判る。低濃度の塩化ナト
リウム溶液で脱離される第１の画分は、主としてラクト
フェリン以外の成分であり、高濃度の塩化ナトリウム溶
液で脱離される第２の画分は、ラクトフェリンが主たる
成分である。そしてこの２つの画分の境界となる塩化ナ
トリウム溶液の濃度は１．４〜１．６％であることが知
れる。
試験３の結果から、脱離工程において、先ずラクトフェ
リン以外の蛋白質を低濃度の塩化ナトリウム溶液で脱離
・分離し、次いで吸着されているラクトフェリンを高濃
度の塩化ナトリウム溶液で回収すれば、高純度のラクト
フェリンを得ることが示唆される。
リン以外の蛋白質を低濃度の塩化ナトリウム溶液で脱離
・分離し、次いで吸着されているラクトフェリンを高濃
度の塩化ナトリウム溶液で回収すれば、高純度のラクト
フェリンを得ることが示唆される。
試験４ この試験の目的は、上述の示唆が正しいことを例証する
ことである。
ことである。
試験３と同様に膨潤させたCM-セファデックス０．４ｇ
を生の牛脱脂乳２．０kgに投入し、４℃で１６時間撹拌
・接触させ、バッチ処理し、布にてイオン交換体を回
収してカラムに充填し、水洗して脱脂乳分を除いた後１
００mlの１．６％塩化ナトリウム溶液をカラムに通液
し、イオン交換体に吸着した第１の画分を脱離・分離さ
せた。その後１００mlの５％塩化ナトリウム溶液をカラ
ムに通液して回収液１００mlを得た。回収液のラクトフ
ェリン濃度は、１７６mg／１００mlであり、２８０nmに
おける吸光度は２．２５であった。従って、回収液中に
ラクトフェリンが１７６mg得られ、その純度は、９９％
（176×0.0127×100/2.25）であった。
を生の牛脱脂乳２．０kgに投入し、４℃で１６時間撹拌
・接触させ、バッチ処理し、布にてイオン交換体を回
収してカラムに充填し、水洗して脱脂乳分を除いた後１
００mlの１．６％塩化ナトリウム溶液をカラムに通液
し、イオン交換体に吸着した第１の画分を脱離・分離さ
せた。その後１００mlの５％塩化ナトリウム溶液をカラ
ムに通液して回収液１００mlを得た。回収液のラクトフ
ェリン濃度は、１７６mg／１００mlであり、２８０nmに
おける吸光度は２．２５であった。従って、回収液中に
ラクトフェリンが１７６mg得られ、その純度は、９９％
（176×0.0127×100/2.25）であった。
この結果から、比較的低濃度の塩類で、ラクトフェリン
以外の蛋白質を予め脱離・除去し、ついで比較的高濃度
の塩類溶液で脱離処理することにより、更に高純度のラ
クトフェリンが製造できることが確認された。
以外の蛋白質を予め脱離・除去し、ついで比較的高濃度
の塩類溶液で脱離処理することにより、更に高純度のラ
クトフェリンが製造できることが確認された。
以上の試験１〜４から、本発明方法により高純度のラク
トフェリンが製造できることが判明した。
トフェリンが製造できることが判明した。
２段階の脱離処理は、ラクトフェリンの純度向上（９８
％以上）に有効であることもまた判明した。
％以上）に有効であることもまた判明した。
また、以上の試験から、低濃度及び高濃度の塩類溶液
は、共に上記の塩化ナトリウム以外に塩化カリウム、塩
化カルシウム、塩化マグネシウム及びこれらの任意の混
合物の内から選ばれた物質を用いて実施することができ
ることも明らかである。また、低濃度及び高濃度の塩類
は互いに異なる種類の塩類を使用できる。そしてこれら
物質の低濃度及び高濃度の範囲としては、塩類により若
干異なるが、それぞれおよそ０．４〜２．５％及び１．
５〜１２％である。
は、共に上記の塩化ナトリウム以外に塩化カリウム、塩
化カルシウム、塩化マグネシウム及びこれらの任意の混
合物の内から選ばれた物質を用いて実施することができ
ることも明らかである。また、低濃度及び高濃度の塩類
は互いに異なる種類の塩類を使用できる。そしてこれら
物質の低濃度及び高濃度の範囲としては、塩類により若
干異なるが、それぞれおよそ０．４〜２．５％及び１．
５〜１２％である。
本発明における原料乳とイオン交換体との接触、即ち吸
着処理は、使用するイオン交換体の後述する通液特性を
考慮したうえでバッチ撹拌法、カラム連続法等の適宜の
方法で行うことができ、原料乳とイオン交換体を十分に
接触させることのできる方法であればいずれも実施可能
である。
着処理は、使用するイオン交換体の後述する通液特性を
考慮したうえでバッチ撹拌法、カラム連続法等の適宜の
方法で行うことができ、原料乳とイオン交換体を十分に
接触させることのできる方法であればいずれも実施可能
である。
原料乳とイオン交換体の混合体積比率は、イオン交換体
の吸着能力に応じ、またバッチ法においては目的に応じ
て任意に、調製することができる。即ち、バッチ法にお
いては、一定量の原料乳から多くの収量を望む場合には
多くのイオン交換体を用い、また一定量のイオン交換体
で多くの収量を望む場合には多くの原料乳を用いること
が適当である。
の吸着能力に応じ、またバッチ法においては目的に応じ
て任意に、調製することができる。即ち、バッチ法にお
いては、一定量の原料乳から多くの収量を望む場合には
多くのイオン交換体を用い、また一定量のイオン交換体
で多くの収量を望む場合には多くの原料乳を用いること
が適当である。
原料乳とイオン交換体の接触時の温度は、６０℃を越え
る高温ではラクトフェリンが次第に変性する傾向を持つ
ため、０〜６０℃とすることが必要である。また、未殺
菌の原料乳にあっては、細菌の繁殖を防ぐため、０〜１
０℃で実施することが望ましい。
る高温ではラクトフェリンが次第に変性する傾向を持つ
ため、０〜６０℃とすることが必要である。また、未殺
菌の原料乳にあっては、細菌の繁殖を防ぐため、０〜１
０℃で実施することが望ましい。
原料乳とイオン交換体の接触時間については、接触時の
温度、採用する接触方式（バッチ法又はカラム連続法）
等を勘案して適宜条件を選択する。
温度、採用する接触方式（バッチ法又はカラム連続法）
等を勘案して適宜条件を選択する。
この接触方式の採用にあたっては、イオン交換体の通液
特性の１つを規定するタイプの相違を考慮することが望
ましい。
特性の１つを規定するタイプの相違を考慮することが望
ましい。
即ち、弱酸性陽イオン交換体は、特性上２つのタイプが
ある。いわゆるハードタイプ及びソフトタイプと呼ばれ
るものである。ハードタイプのイオン交換体は、イオン
強度又はpHによってベッドボリュームはほとんど変化せ
ず、また処理後の流速を上げるなどによりイオン交換体
に圧力を加えても樹脂の圧密化はほとんどなく、イオン
交換体をカラム内に保持して高速流で通液することが可
能である。即ち、ハードタイプのものはバッチ法にも使
用し得るが、特にカラム連続法に適する。一方、ソフト
タイプのイオン交換体はイオン強度又はpHによってベッ
ドボリュームは大きく変化し、また処理液の流速を上げ
るなどにより、イオン交換体に圧力を加えると樹脂は容
易に圧密化し、イオン交換体をカラム内に保持して高速
流で通液することは困難であり、特に脱脂乳やホエー通
液時は他の塩類溶液通液時に比べてイオン交換体層内で
大きな圧力損失を示す。従って、原料乳とイオン交換体
の接触方式としてソフトタイプのイオン交換体はカラム
連続法には不適当であり、専らバッチ法に適する。
ある。いわゆるハードタイプ及びソフトタイプと呼ばれ
るものである。ハードタイプのイオン交換体は、イオン
強度又はpHによってベッドボリュームはほとんど変化せ
ず、また処理後の流速を上げるなどによりイオン交換体
に圧力を加えても樹脂の圧密化はほとんどなく、イオン
交換体をカラム内に保持して高速流で通液することが可
能である。即ち、ハードタイプのものはバッチ法にも使
用し得るが、特にカラム連続法に適する。一方、ソフト
タイプのイオン交換体はイオン強度又はpHによってベッ
ドボリュームは大きく変化し、また処理液の流速を上げ
るなどにより、イオン交換体に圧力を加えると樹脂は容
易に圧密化し、イオン交換体をカラム内に保持して高速
流で通液することは困難であり、特に脱脂乳やホエー通
液時は他の塩類溶液通液時に比べてイオン交換体層内で
大きな圧力損失を示す。従って、原料乳とイオン交換体
の接触方式としてソフトタイプのイオン交換体はカラム
連続法には不適当であり、専らバッチ法に適する。
そして、ハードタイプ及びソフトタイプの性質を表す指
標として、イオン強度の変化に基づくイオン交換体のベ
ッドボリューム変化を用いることができ、本発明ではNa
形の弱酸性陽イオン交換体を水で膨潤させたときのベッ
ドボリュームを、該弱酸性陽イオン交換体がイオン強度
０．５の塩化ナトリウム溶液と平衡化したときのベッド
ボリュームで除した値（以下体積変化率という）を用い
る。
標として、イオン強度の変化に基づくイオン交換体のベ
ッドボリューム変化を用いることができ、本発明ではNa
形の弱酸性陽イオン交換体を水で膨潤させたときのベッ
ドボリュームを、該弱酸性陽イオン交換体がイオン強度
０．５の塩化ナトリウム溶液と平衡化したときのベッド
ボリュームで除した値（以下体積変化率という）を用い
る。
またNa型のイオン交換体は、単に水で完全に湿潤させれ
ばよく、Na型でないイオン交換体の場合には、１０％塩
化ナトリウム溶液を通液してNa型とした後、洗液中に塩
素イオンが検出されなくなるまで水洗すればよい。
ばよく、Na型でないイオン交換体の場合には、１０％塩
化ナトリウム溶液を通液してNa型とした後、洗液中に塩
素イオンが検出されなくなるまで水洗すればよい。
例えば、表１に掲げたイオン交換体のうちハードタイプ
のものはCM-トヨパール650,CM-セロファースFF，セパビ
ーズFP-CM13であり、体積変化はすべて１．０であっ
た。またソフトタイプのものはCM-セデックスC-50であ
り、その体積変化は３．０であった。
のものはCM-トヨパール650,CM-セロファースFF，セパビ
ーズFP-CM13であり、体積変化はすべて１．０であっ
た。またソフトタイプのものはCM-セデックスC-50であ
り、その体積変化は３．０であった。
また本発明では、ハードタイプ及びソフトタイプいずれ
のものであっても、ラクトフェリンを選択的に吸着する
イオン交換体を用いるため、本発明では脱離工程は単一
の操作で実施でき、更に高純度のラクトフェリンを得る
場合においても、２回の操作で実施することができる。
のものであっても、ラクトフェリンを選択的に吸着する
イオン交換体を用いるため、本発明では脱離工程は単一
の操作で実施でき、更に高純度のラクトフェリンを得る
場合においても、２回の操作で実施することができる。
そして、本発明では回収液中の塩類と水の除去は常法に
従って行うことができる。即ち、限外過法、電気透析
法或は他の透析法により所望の程度まで塩類を除去した
後、凍結乾燥或は噴霧乾燥等により水を除去することに
よって行なわれる。
従って行うことができる。即ち、限外過法、電気透析
法或は他の透析法により所望の程度まで塩類を除去した
後、凍結乾燥或は噴霧乾燥等により水を除去することに
よって行なわれる。
以下に本発明の若干の実施例を説明する。
実施例１ イオン交換基としてカルボキシメチル基を有し、ヘモグ
ロビン吸着能力が４．６ｇ／１００ml、体積変化が１．
０であるCM-トヨパール650（東洋ソーダ製）500mlを内
径１０cmのカラムに充填し、１０％食塩水２を通じた
後水洗して、Na型のイオン交換体を調製した。続いてpH
６．７の生の牛脱脂乳６０を温度４℃，４／ｈの流
速でカラム通液した。カラム通過後の脱脂乳はpH６．７
であって変化はなく、外観、風味等にも変化は認められ
なかった。脱脂乳通過後、カラムに水を通じて水洗い
し、脱脂乳分を除いた後、１０％食塩水５を５／ｈ
の流速で通液してイオン交換体吸着成分を脱離し、回収
液５．０を得た。この間ベッドボリュームの変化は認
められなかった。
ロビン吸着能力が４．６ｇ／１００ml、体積変化が１．
０であるCM-トヨパール650（東洋ソーダ製）500mlを内
径１０cmのカラムに充填し、１０％食塩水２を通じた
後水洗して、Na型のイオン交換体を調製した。続いてpH
６．７の生の牛脱脂乳６０を温度４℃，４／ｈの流
速でカラム通液した。カラム通過後の脱脂乳はpH６．７
であって変化はなく、外観、風味等にも変化は認められ
なかった。脱脂乳通過後、カラムに水を通じて水洗い
し、脱脂乳分を除いた後、１０％食塩水５を５／ｈ
の流速で通液してイオン交換体吸着成分を脱離し、回収
液５．０を得た。この間ベッドボリュームの変化は認
められなかった。
回収液のラクトフェリン濃度は３６ml／１００mlであ
り、２８０nmにおける吸光度は０．４９７であった。従
って回収液中にラクトフェリンが１８００mg得られ、そ
のラクトフェリンの純度は９２％（36×0.0127×100/0.
497）であった。
り、２８０nmにおける吸光度は０．４９７であった。従
って回収液中にラクトフェリンが１８００mg得られ、そ
のラクトフェリンの純度は９２％（36×0.0127×100/0.
497）であった。
実施例２ イオン交換基としてカルボキシメチル基を有し、ヘモグ
ロビン吸着能力が、６．１ｇ／１００ml、体積変化が
１．０であるCM-セファロースFF（ファルマシア製）１
をカラムに充填し、２の０．１N HClを通液した後
水洗して、Ｈ形のイオン交換体を調製した。次いで該イ
オン交換体を取り出し、pH６．７の生の牛脱脂乳１００
に投入し、４℃で６時間撹拌、接触させバッチ処理し
た。６時間経過後、過布にてイオン交換体を除去し
た。イオン交換体除去後の脱脂乳はpH６．７であって全
く変化はなく、また外観、風味等の変化も認められなか
った。
ロビン吸着能力が、６．１ｇ／１００ml、体積変化が
１．０であるCM-セファロースFF（ファルマシア製）１
をカラムに充填し、２の０．１N HClを通液した後
水洗して、Ｈ形のイオン交換体を調製した。次いで該イ
オン交換体を取り出し、pH６．７の生の牛脱脂乳１００
に投入し、４℃で６時間撹拌、接触させバッチ処理し
た。６時間経過後、過布にてイオン交換体を除去し
た。イオン交換体除去後の脱脂乳はpH６．７であって全
く変化はなく、また外観、風味等の変化も認められなか
った。
取り出したイオン交換体はカラムに充填し、水を通じて
牛脱脂乳分を除いた後、１０％食塩水５を５／ｈの
流速で通液してイオン交換体吸着成分を脱離し、回収液
５．０を得た。なおこの工程中のベッドボリュウーム
の変化はほとんどみとめられなっかた。回収液のラクト
フェリン濃度は１１０mg／１００mlであり、２８０nmに
おける吸光度は１．４７であった。従って回収液中にラ
クトフェリン５５００mgが得られ、そのラクトフェリン
の純度は９５％（110×0.0127×100/1.47）であった。
牛脱脂乳分を除いた後、１０％食塩水５を５／ｈの
流速で通液してイオン交換体吸着成分を脱離し、回収液
５．０を得た。なおこの工程中のベッドボリュウーム
の変化はほとんどみとめられなっかた。回収液のラクト
フェリン濃度は１１０mg／１００mlであり、２８０nmに
おける吸光度は１．４７であった。従って回収液中にラ
クトフェリン５５００mgが得られ、そのラクトフェリン
の純度は９５％（110×0.0127×100/1.47）であった。
次いで、この回収液４．９を分画分子量２０，０００
を有するDDS社製限外過膜GR61PPを装着したラボモジ
ュールを用いて循環流量８／min.，平均圧力３kg／cm
2で限外過し、次いで水を加えてダイアフィルトレー
ションを行って食塩除去を実施した後、食塩除去濃縮液
を凍結乾燥し、凍結乾燥品４．１ｇを得た。この凍結乾
燥品を精密に分析したところ、水分３．２％，ラクトフ
ェリン９２％，及び灰分０．３％の組成を有していた。
この凍結乾燥品の蛋白質の占めるラクトフェリンの重比
率は、９５％（９２×１００／（１００−３．２−０．
３）であり、回収液の吸光度比率から求めたラクトフェ
リンの純度と等しいことが判った。
を有するDDS社製限外過膜GR61PPを装着したラボモジ
ュールを用いて循環流量８／min.，平均圧力３kg／cm
2で限外過し、次いで水を加えてダイアフィルトレー
ションを行って食塩除去を実施した後、食塩除去濃縮液
を凍結乾燥し、凍結乾燥品４．１ｇを得た。この凍結乾
燥品を精密に分析したところ、水分３．２％，ラクトフ
ェリン９２％，及び灰分０．３％の組成を有していた。
この凍結乾燥品の蛋白質の占めるラクトフェリンの重比
率は、９５％（９２×１００／（１００−３．２−０．
３）であり、回収液の吸光度比率から求めたラクトフェ
リンの純度と等しいことが判った。
実施例３ 脂肪含有量３．０％に調製した牛の乳を７５℃にて１５
秒間殺菌し、後３０℃に冷却し、殺菌乳１００kgを得
た。これに５０mlの水に溶解された５ｇの塩化カルシウ
ムを添加し、１のスターター（ストレプコッカスラク
ティス；Streptococcuslactisを使用）を添加した後、
５００mlの水に溶解されたレンネット２ｇを添加した。
凝固後、カッティング、クッキングを行いホエーを排出
した。得られたホエーを浄化後、７５℃，１５秒の殺菌
を行い、殺菌チーズホエーを製造した。得られた殺菌チ
ーズホエーはpH６．４，ラクトフェリン濃度１９mg／１
００mlであった。
秒間殺菌し、後３０℃に冷却し、殺菌乳１００kgを得
た。これに５０mlの水に溶解された５ｇの塩化カルシウ
ムを添加し、１のスターター（ストレプコッカスラク
ティス；Streptococcuslactisを使用）を添加した後、
５００mlの水に溶解されたレンネット２ｇを添加した。
凝固後、カッティング、クッキングを行いホエーを排出
した。得られたホエーを浄化後、７５℃，１５秒の殺菌
を行い、殺菌チーズホエーを製造した。得られた殺菌チ
ーズホエーはpH６．４，ラクトフェリン濃度１９mg／１
００mlであった。
イオン交換基としてカルボキシメチル基を有し、ヘモグ
ロビン吸着能力が、３．９ｇ／１００ml、体積変化が
３．０であるCM-セファデックスC-50（ファルマシア
製）２．５ｇを水に膨潤し、Na形のイオン交換体とし、
これを上記殺菌チーズホエー５０kgに投入し、４℃にて
１６時間接触、撹拌し、バッチ処理した。１６時間経過
後、過布にてイオン交換体を除去した。イオン交換体
を除去した後の殺菌チーズホエーのpHは６．４であって
変化はなく、また外観、風味等の変化も認められなかっ
た。
ロビン吸着能力が、３．９ｇ／１００ml、体積変化が
３．０であるCM-セファデックスC-50（ファルマシア
製）２．５ｇを水に膨潤し、Na形のイオン交換体とし、
これを上記殺菌チーズホエー５０kgに投入し、４℃にて
１６時間接触、撹拌し、バッチ処理した。１６時間経過
後、過布にてイオン交換体を除去した。イオン交換体
を除去した後の殺菌チーズホエーのpHは６．４であって
変化はなく、また外観、風味等の変化も認められなかっ
た。
取り出したイオン交換体はカラムに充填し、水を通じて
ホエー分を除いた後、０．０５Mクエン酸−クエン酸ナ
トリウムでpH８．０に調製した０．５N塩化カリウム溶
液５００mlを５００ml／ｈの流速で通液してイオン交換
体吸着成分を脱離し、回収液５５０mlを得た。回収液の
ラクトフェリン濃度は２３５mg／１００mlであり、２８
０nmにおける吸光度は３．１９であった。従って回収液
中にラクトフェリン１２９０mgが得られ、そのラクトフ
ェリンの純度は９４％（235×0.0127×100/3.19）であ
った。
ホエー分を除いた後、０．０５Mクエン酸−クエン酸ナ
トリウムでpH８．０に調製した０．５N塩化カリウム溶
液５００mlを５００ml／ｈの流速で通液してイオン交換
体吸着成分を脱離し、回収液５５０mlを得た。回収液の
ラクトフェリン濃度は２３５mg／１００mlであり、２８
０nmにおける吸光度は３．１９であった。従って回収液
中にラクトフェリン１２９０mgが得られ、そのラクトフ
ェリンの純度は９４％（235×0.0127×100/3.19）であ
った。
実施例４ 脂肪含有量３．０％に調製した牛の乳を７５℃にて１５
秒間殺菌し、後３０℃に冷却し、殺菌乳１００kgを得
た。これに５０mlの水に溶解された５ｇの塩化カルシウ
ムを添加し、１のスターター（ストレプトコッカスラ
クティス；Streptococcuslactisを使用）を添加した
後、５００mlの水に溶解されたレンネット２ｇを添加し
た。凝固後、カッティング、クッキングを行いホエーを
排出した。得られたホエーを浄化後、７５℃，１５秒の
殺菌を行い、殺菌チーズホエーを製造した。得られた殺
菌チーズホエーはpH６．４，ラクトフェリン濃度１９mg
／１００mlであった。
秒間殺菌し、後３０℃に冷却し、殺菌乳１００kgを得
た。これに５０mlの水に溶解された５ｇの塩化カルシウ
ムを添加し、１のスターター（ストレプトコッカスラ
クティス；Streptococcuslactisを使用）を添加した
後、５００mlの水に溶解されたレンネット２ｇを添加し
た。凝固後、カッティング、クッキングを行いホエーを
排出した。得られたホエーを浄化後、７５℃，１５秒の
殺菌を行い、殺菌チーズホエーを製造した。得られた殺
菌チーズホエーはpH６．４，ラクトフェリン濃度１９mg
／１００mlであった。
イオン交換基としてカルボキシメチル基を有し、ヘモグ
ロビン吸着能力が３．９ｇ／１００ml、及び体積変化が
３．０であるCM-セファデックスC-50（ファルマシア
製）２．５ｇを水に膨潤し、１１３mlのベッドボリュー
ムを有するNa形のイオン交換体とし、これを上記殺菌チ
ーズホエー５０kgに投入し、４℃にて１６時間接触、撹
拌し、バッチ処理した。１６時間経過後、過布にてイ
オン交換体を除去した。イオン交換体を除去した後の殺
菌チーズホエーのpHは６．４であって変化はなく、また
外観、風味等の変化も認められなかった。
ロビン吸着能力が３．９ｇ／１００ml、及び体積変化が
３．０であるCM-セファデックスC-50（ファルマシア
製）２．５ｇを水に膨潤し、１１３mlのベッドボリュー
ムを有するNa形のイオン交換体とし、これを上記殺菌チ
ーズホエー５０kgに投入し、４℃にて１６時間接触、撹
拌し、バッチ処理した。１６時間経過後、過布にてイ
オン交換体を除去した。イオン交換体を除去した後の殺
菌チーズホエーのpHは６．４であって変化はなく、また
外観、風味等の変化も認められなかった。
取り出したイオン交換体はカラムに充填し、水を通じて
ホエー分を除いた。この時のベッドボリュームは８７ml
であり、体積変化率は１．３（113/87）であった。その
後塩化ナトリウム１０％溶液５００mlを２５０ml／ｈの
流速で通液してイオン交換体吸着成分を脱離し、回収液
５５０mlを得た。この時のベッドボリュームは２４mlで
あり、体積変化率は４．７（113/24）であった。回収液
のラクトフェリン濃度は２２４mg／１００mlであり、２
８０nmにおける吸光度は３．０５であった。従って回収
液中にラクトフェリンが１２３０mg得られ、そのラクト
フェリンの純度は９３％（224×0.0127×100/3.05）で
あった。
ホエー分を除いた。この時のベッドボリュームは８７ml
であり、体積変化率は１．３（113/87）であった。その
後塩化ナトリウム１０％溶液５００mlを２５０ml／ｈの
流速で通液してイオン交換体吸着成分を脱離し、回収液
５５０mlを得た。この時のベッドボリュームは２４mlで
あり、体積変化率は４．７（113/24）であった。回収液
のラクトフェリン濃度は２２４mg／１００mlであり、２
８０nmにおける吸光度は３．０５であった。従って回収
液中にラクトフェリンが１２３０mg得られ、そのラクト
フェリンの純度は９３％（224×0.0127×100/3.05）で
あった。
実施例５ 生の牛脱脂乳を３５℃に加温し、よく撹拌しながら９倍
に希釈した塩酸を滴下してpH４．６に調整し、凝集した
カードを分離解除して酸ホエーを製造した。得られた酸
ホエーはpH４．６でラクトフェリン濃度は２６mg／１０
０mlであった。
に希釈した塩酸を滴下してpH４．６に調整し、凝集した
カードを分離解除して酸ホエーを製造した。得られた酸
ホエーはpH４．６でラクトフェリン濃度は２６mg／１０
０mlであった。
カルボキシルメチル基のイオン交換基を有し、ヘモグロ
ビン吸着能力が、４．５ｇ／１００ml、及び体積変化率
が１．０であるセパビーズFP-CM13（三菱化成製）１０
０mlをカラムに充填し０．１N HCl２００mlを通液した
後、水洗し、Ｈ形のイオン交換体を調製した。次いで該
イオン交換体を取り出し、上記酸ホエー１０に投入
し、４℃で１６時間撹拌、接触させバッチ処理した。１
６時間後、イオン交換体を取り出しカラムに充填した。
イオン交換体を除去後の酸ホエーはpH４．７であってpH
変化は極く僅かであって、また外観、風味等の変化は全
く認められなかった。
ビン吸着能力が、４．５ｇ／１００ml、及び体積変化率
が１．０であるセパビーズFP-CM13（三菱化成製）１０
０mlをカラムに充填し０．１N HCl２００mlを通液した
後、水洗し、Ｈ形のイオン交換体を調製した。次いで該
イオン交換体を取り出し、上記酸ホエー１０に投入
し、４℃で１６時間撹拌、接触させバッチ処理した。１
６時間後、イオン交換体を取り出しカラムに充填した。
イオン交換体を除去後の酸ホエーはpH４．７であってpH
変化は極く僅かであって、また外観、風味等の変化は全
く認められなかった。
充填したイオン交換体は水を通じてホエー分を除いた
後、１０％食塩水５００mlを５００ml／ｈの流速でカラ
ム通液して回収液５００mlを得た。これまでの工程中で
ベッドボリュームの変化はみとめられなっかた。回収液
のラクトフェリン濃度は２８０mg／１００mlであり、２
８０nmにおける吸光度は３．７８であった。従って回収
液中にラクトフェリン１４００mgが得られ、そのラクト
フェリンの純度は９４％（280×0.0127×100/3.78）で
あった。
後、１０％食塩水５００mlを５００ml／ｈの流速でカラ
ム通液して回収液５００mlを得た。これまでの工程中で
ベッドボリュームの変化はみとめられなっかた。回収液
のラクトフェリン濃度は２８０mg／１００mlであり、２
８０nmにおける吸光度は３．７８であった。従って回収
液中にラクトフェリン１４００mgが得られ、そのラクト
フェリンの純度は９４％（280×0.0127×100/3.78）で
あった。
実施例６ イオン交換基としてカルボキシメチル基を有し、ヘモグ
ロビン吸着能が３．９ｇ／１００ml、体積変化率が３．
０であるＣＭ−セファデクスＣ−５０（ファルマシア
製）２５ｇを水にて膨潤させ、Na形の１１３０mlのイオ
ン交換体を得た。これを、５５℃に加温したpH６．７の
生の牛脱脂乳１００kgに投入し、同温度にて１時間接触
・撹拌した。１時間経過後、過布にてイオン交換体を除
去した。イオン交換体を除去した脱脂乳のpHは６．７で
あって変化はなく、また外観、風味等の変化は何等認め
られなかった。
ロビン吸着能が３．９ｇ／１００ml、体積変化率が３．
０であるＣＭ−セファデクスＣ−５０（ファルマシア
製）２５ｇを水にて膨潤させ、Na形の１１３０mlのイオ
ン交換体を得た。これを、５５℃に加温したpH６．７の
生の牛脱脂乳１００kgに投入し、同温度にて１時間接触
・撹拌した。１時間経過後、過布にてイオン交換体を除
去した。イオン交換体を除去した脱脂乳のpHは６．７で
あって変化はなく、また外観、風味等の変化は何等認め
られなかった。
取り出したイオン交換体はカラムに充填し、水を通じて
脱脂乳分を除いた。この時のベッドボリュームは８００
mlであり、体積変化率は１．４（1130/800）であった。
その後５％食塩水７を７／ｈの流速でカラム通液し
てイオン交換体吸着成分を脱離し、回収液７．６を得
た。この時のベッドボリュームは３４０mlであり、体積
変化率は３．３（1130/340）であった。回収液のラクト
フェリン濃度は１３０mg／１００mlであり、２８０nmに
おける吸光度は１．９７であった。従って回収液中にラ
クトフェリンが９．９ｇ得られ、そのラクトフェリンの
純度は８４％（130×0.0127×100/1.97）であった。
脱脂乳分を除いた。この時のベッドボリュームは８００
mlであり、体積変化率は１．４（1130/800）であった。
その後５％食塩水７を７／ｈの流速でカラム通液し
てイオン交換体吸着成分を脱離し、回収液７．６を得
た。この時のベッドボリュームは３４０mlであり、体積
変化率は３．３（1130/340）であった。回収液のラクト
フェリン濃度は１３０mg／１００mlであり、２８０nmに
おける吸光度は１．９７であった。従って回収液中にラ
クトフェリンが９．９ｇ得られ、そのラクトフェリンの
純度は８４％（130×0.0127×100/1.97）であった。
実施例７ カルボキシメチル基のイオン交換基を有し、ヘモグロビ
ン吸着能力が、４．５ｇ／１００ml、及び体積変化が
１．０であるセパビーズFP-CM13（三菱化成製）１００m
lを内径１０cmのカラムに充填し、１２％塩化カリウム
溶液２を通液した後、水洗し、Ｋ型のイオン交換体を
調製した。続いてpH６．７の生の牛脱脂乳９６kgを温度
４℃、６／ｈの流速でカラム通液した。カラム通過後
の脱脂乳はpH６．７であって変化なく、また外観、風味
等にも変化は何等認められなかった。脱脂乳通液後、カ
ラムに水を通じて水洗し、脱脂乳分を除いた後、２．５
％塩化カリウム溶液２０を通じて洗浄不純物を分離し
た、次いで１２％塩化カリウム１０を通じてイオン交
換体吸着成分を脱離し、回収液１０．０を得た。なお
これらの工程中における体積変化はみとめられなっか
た。
ン吸着能力が、４．５ｇ／１００ml、及び体積変化が
１．０であるセパビーズFP-CM13（三菱化成製）１００m
lを内径１０cmのカラムに充填し、１２％塩化カリウム
溶液２を通液した後、水洗し、Ｋ型のイオン交換体を
調製した。続いてpH６．７の生の牛脱脂乳９６kgを温度
４℃、６／ｈの流速でカラム通液した。カラム通過後
の脱脂乳はpH６．７であって変化なく、また外観、風味
等にも変化は何等認められなかった。脱脂乳通液後、カ
ラムに水を通じて水洗し、脱脂乳分を除いた後、２．５
％塩化カリウム溶液２０を通じて洗浄不純物を分離し
た、次いで１２％塩化カリウム１０を通じてイオン交
換体吸着成分を脱離し、回収液１０．０を得た。なお
これらの工程中における体積変化はみとめられなっか
た。
回収液のラクトフェリン濃度は６２mg／１００mlであ
り、２８０nmにおける吸光度は０．７９であった。従っ
て回収液中にラクトフェリン６．２ｇが得られ、そのラ
クトフェリンの純度は９９．７％（62×0.0127×100/0.
79）であった。
り、２８０nmにおける吸光度は０．７９であった。従っ
て回収液中にラクトフェリン６．２ｇが得られ、そのラ
クトフェリンの純度は９９．７％（62×0.0127×100/0.
79）であった。
実施例８ カルボキシメチル基のイオン交換基を有し、ヘモグロビ
ン吸着能力が３．９ｇ／１００mlおよび体積変化が３．
０であるCM-セファデックスC-50（ファルマシア製）
２．５ｇを水に膨潤し、Na形の１１３mlのイオン交換体
とし、これをpH６．７の生脱脂乳１０に投入し、４℃
にて接触・撹拌しバッチ処理した。１６時間後、過布
にてイオン交換体を分離・除去した。イオン交換体除去
した後の脱脂乳のpHは６．７であって変化なく、またこ
の時点でのベッドボリュームは８２mlであり、体積変化
率は１．４（113/82）であった。次いで１．６％塩化ナ
トリウム溶液２．０を通じて洗浄し不純物を分離した
後、５．０％塩化ナトリウム溶液１．０を通じてイオ
ン交換体吸着成分を脱離し、回収液１．１を得た。こ
の時点でのベッドボリュームは３５mlであり、体積変化
率は３．２（113/35）であった。
ン吸着能力が３．９ｇ／１００mlおよび体積変化が３．
０であるCM-セファデックスC-50（ファルマシア製）
２．５ｇを水に膨潤し、Na形の１１３mlのイオン交換体
とし、これをpH６．７の生脱脂乳１０に投入し、４℃
にて接触・撹拌しバッチ処理した。１６時間後、過布
にてイオン交換体を分離・除去した。イオン交換体除去
した後の脱脂乳のpHは６．７であって変化なく、またこ
の時点でのベッドボリュームは８２mlであり、体積変化
率は１．４（113/82）であった。次いで１．６％塩化ナ
トリウム溶液２．０を通じて洗浄し不純物を分離した
後、５．０％塩化ナトリウム溶液１．０を通じてイオ
ン交換体吸着成分を脱離し、回収液１．１を得た。こ
の時点でのベッドボリュームは３５mlであり、体積変化
率は３．２（113/35）であった。
回収液のラクトフェリン濃度は６１mg／１００mlであ
り、２８０nmにおける吸光度は０．７８であった。従っ
て回収液中にラクトフェリンが６７０mg得られ、そのラ
クトフェリンの純度は９９．３％（61×0.0127×100/0.
78）であった。
り、２８０nmにおける吸光度は０．７８であった。従っ
て回収液中にラクトフェリンが６７０mg得られ、そのラ
クトフェリンの純度は９９．３％（61×0.0127×100/0.
78）であった。
次いで、回収液を透析チューブに入れてイオン交換水に
て透析し、塩化ナトリウム除去を実施した後、凍結乾燥
し、凍結乾燥品を６５０mg得た。凍結乾燥品は水分２．
９％、ラクトフェリン９６．２％、及び灰分０．５％の
組成を有していた。この凍結乾燥品の蛋白質に占めるラ
クトフェリンの重量比率は９９．６％（96.2×100(100-
2.9-0.5））であり、回収液の吸光度比率から求めたラ
クトフェリンの純度とほぼ等しいことが分かった。
て透析し、塩化ナトリウム除去を実施した後、凍結乾燥
し、凍結乾燥品を６５０mg得た。凍結乾燥品は水分２．
９％、ラクトフェリン９６．２％、及び灰分０．５％の
組成を有していた。この凍結乾燥品の蛋白質に占めるラ
クトフェリンの重量比率は９９．６％（96.2×100(100-
2.9-0.5））であり、回収液の吸光度比率から求めたラ
クトフェリンの純度とほぼ等しいことが分かった。
実施例９ イオン交換基としてカルボキシメチル基を有し、ヘモグ
ロビン吸着能力が、４．６ｇ／１００ml及び体積変化が
１．０であるCM-トヨパール650C５００mlをカラムに充
填し２．０％塩化マグネシウム水溶液５を通液した
後、水洗し、Mg型のイオン交換体を調整した。次いで該
イオン交換体を取り出し、pH６．７の生の牛脱脂乳５０
に投入し、５５℃で１時間撹拌、接触させバッチ処理
した。過布にてイオン交換体を除去した。イオン交換
体除去後の脱脂乳のpHは６．７であって全く変化はな
く、また外観、風味等の変化も認められなかった。
ロビン吸着能力が、４．６ｇ／１００ml及び体積変化が
１．０であるCM-トヨパール650C５００mlをカラムに充
填し２．０％塩化マグネシウム水溶液５を通液した
後、水洗し、Mg型のイオン交換体を調整した。次いで該
イオン交換体を取り出し、pH６．７の生の牛脱脂乳５０
に投入し、５５℃で１時間撹拌、接触させバッチ処理
した。過布にてイオン交換体を除去した。イオン交換
体除去後の脱脂乳のpHは６．７であって全く変化はな
く、また外観、風味等の変化も認められなかった。
取り出したイオン交換体はカラムに充填し、水を通じて
脱脂乳分を除いた後、０．５５％塩化マグネシウム溶液
１０を通じて洗浄し不純物を分離した後、２．０％塩
化マグネシウム水溶液５．０を通液してイオン交換体
吸着成分を脱離し、回収液５．０を得た。これまでの
工程中におけるイオン交換体のベッドボリュームの変化
は認められなかった。回収液のラクトフェリン濃度は４
５mg／１００mlであり、２８０nmにおける吸光度は０．
５８であった。従って回収液中にラクトフェリンが２２
５０mg得られ、そのラクトフェリンの純度は９８．５％
（45×0.0127×100/0.58）であった。
脱脂乳分を除いた後、０．５５％塩化マグネシウム溶液
１０を通じて洗浄し不純物を分離した後、２．０％塩
化マグネシウム水溶液５．０を通液してイオン交換体
吸着成分を脱離し、回収液５．０を得た。これまでの
工程中におけるイオン交換体のベッドボリュームの変化
は認められなかった。回収液のラクトフェリン濃度は４
５mg／１００mlであり、２８０nmにおける吸光度は０．
５８であった。従って回収液中にラクトフェリンが２２
５０mg得られ、そのラクトフェリンの純度は９８．５％
（45×0.0127×100/0.58）であった。
実施例１０ 生の牛脱脂乳を３５℃に加温し、よく撹拌しながら９倍
に希釈した塩酸を滴下してpH４．６に調整し、凝集した
カードを分離除去して酸ホエーを調整した。得られた酸
ホエーはpH４．６でラクトフェリン濃度は２５mg／１０
０mlであった。
に希釈した塩酸を滴下してpH４．６に調整し、凝集した
カードを分離除去して酸ホエーを調整した。得られた酸
ホエーはpH４．６でラクトフェリン濃度は２５mg／１０
０mlであった。
イオン交換基としてカルボキシメチル基を有し、ヘモグ
ロビン吸着能力が、３．９ｇ／１００ml、及び体積変化
が３．０であるCM-セファデックスC-50（ファルマシア
製）２．５ｇを水に膨潤して、１１３mlのNa形のイオン
交換体とし、更にこの水に塩酸を加えて０．１Ｎ塩酸溶
液とした後、水洗し、Ｈ形のイオン交換体を調製した。
ロビン吸着能力が、３．９ｇ／１００ml、及び体積変化
が３．０であるCM-セファデックスC-50（ファルマシア
製）２．５ｇを水に膨潤して、１１３mlのNa形のイオン
交換体とし、更にこの水に塩酸を加えて０．１Ｎ塩酸溶
液とした後、水洗し、Ｈ形のイオン交換体を調製した。
この時点でのベッドボリュームは７３ml、体積変化率は
１．５（113/73）であった。次いで該イオン交換体を、
上記酸ホエー１０に投入し、４℃で１６時間撹拌、接
触させバッチ処理した。イオン交換体を取り出しカラム
に充填し、水を通じてホエー分を除いた。この時点での
ベッドボリュームは３９ml、体積変化率は２．９（113/
14）であった。
１．５（113/73）であった。次いで該イオン交換体を、
上記酸ホエー１０に投入し、４℃で１６時間撹拌、接
触させバッチ処理した。イオン交換体を取り出しカラム
に充填し、水を通じてホエー分を除いた。この時点での
ベッドボリュームは３９ml、体積変化率は２．９（113/
14）であった。
得られた回収液のラクトフェリン濃度は６１mg／１００
mlであり、２８０nmにおける吸光度は０．７８であっ
た。従って回収液中にラクトフェリンが６１０mg得ら
れ、そのラクトフェリンの純度は９９．３％（61×0.01
27×100/0.78）であった。
mlであり、２８０nmにおける吸光度は０．７８であっ
た。従って回収液中にラクトフェリンが６１０mg得ら
れ、そのラクトフェリンの純度は９９．３％（61×0.01
27×100/0.78）であった。
実施例１１ 実施例７において２．５％塩化カリウム溶液２０を通
じて洗浄し不純物を分離する工程までは、実施例７と同
様に実施した。次いで５％塩化ナトリウム１０を通液
してイオン交換体吸着成分を脱離し、回収液１０．０
を得た。なお、これらの工程におけるベッドボリューム
変化は認められなかった。
じて洗浄し不純物を分離する工程までは、実施例７と同
様に実施した。次いで５％塩化ナトリウム１０を通液
してイオン交換体吸着成分を脱離し、回収液１０．０
を得た。なお、これらの工程におけるベッドボリューム
変化は認められなかった。
回収液のラクトフェリン濃度は６５mg／１００mlであ
り、２８０nmにおける吸光度は０．８３であった。従っ
て回収液中にラクトフェリンが６．５ｇ得られ、そのラ
クトフェリンの純度は９９．５％（65×0.0127×100/0.
83）であった。
り、２８０nmにおける吸光度は０．８３であった。従っ
て回収液中にラクトフェリンが６．５ｇ得られ、そのラ
クトフェリンの純度は９９．５％（65×0.0127×100/0.
83）であった。
［発明の効果］ 本発明によれば次の効果が得られ、産業上の効果に優れ
たものである。
たものである。
（１）原料乳である脱脂乳、ホエーの品質を何等損なう
ことなく、その中に含まれているラクトフェリンを、分
離回収することができる。
ことなく、その中に含まれているラクトフェリンを、分
離回収することができる。
（２）単純な工程により、高純度のラクトフェリンを得
ることができる。
ることができる。
（３）原料乳を大量に処理することができ、ラクトフェ
リンの工業的製造に適した製造法を提供することが可能
となった。
リンの工業的製造に適した製造法を提供することが可能
となった。
添付図面は、異なった濃度の塩化ナトリウム溶液を、低
濃度から順次、水洗後のイオン交換体に通液し、各流出
液を分画して、各流出液の２８０nmにおける吸光度と、
各流出液１００ml中のラクトフェリン濃度とを示すグラ
フである。
濃度から順次、水洗後のイオン交換体に通液し、各流出
液を分画して、各流出液の２８０nmにおける吸光度と、
各流出液１００ml中のラクトフェリン濃度とを示すグラ
フである。
Claims (7)
- 【請求項１】牛乳から調製された脱脂乳またはホエーを
含有する原料乳から牛ラクトフェリンを分離回収して高
純度の牛ラクトフェリンを製造する方法において、 イオン交換基としてカルボキシルメチル基を有し、且つ
ヘモグロビン吸着能が３．５ｇ／１００ml以上である弱
酸性陽イオン交換体に対し、上記原料乳を０〜６０℃の
温度にて接触させる吸着処理と、上記弱酸性陽イオン交
換体を水洗する水洗処理と、上記弱酸性陽イオン交換体
を塩類溶液で処理する脱離処理とを含むことを特徴とす
る、高純度牛ラクトフェリンの製造法。 - 【請求項２】上記弱酸性陽イオン交換体の体積変化率が
１．５以下であること（但し、体積変化率は、Na形にお
ける該交換体を水で膨潤させたときのベッド・ボリュー
ムを、該交換体をイオン強度０．５の塩化ナトリウム溶
液と平衡化したときのベッドボリュームで除した値）を
特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の高純度牛ラク
トフェリンの製造法。 - 【請求項３】ラクトフェリンが、回収された全蛋白質中
８０％以上の純度で得られることを特徴とする特許請求
の範囲第１項または第２項記載の高純度牛ラクトフェリ
ンの製造法。 - 【請求項４】上記脱離処理に用いられる塩類溶液が、塩
化ナトリウム，塩化カリウム，塩化カルシウム，塩化マ
グネシウム及びこれらの混合物からなる群から選ばれた
塩類の溶液であることを特徴とする特許請求の範囲第１
項〜第３項の内、何れか１項記載の高純度牛ラクトフェ
リンの製造方法。 - 【請求項５】上記脱離処理が、上記群から選ばれた塩類
の相対的に低濃度の水溶液で行なわれて、それによって
上記低濃度塩類溶液によって脱離する成分を除去する第
１の脱離処理と、上記群から選ばれた塩類の相対的に高
濃度の水溶液で行なわれて、それによって上記高濃度の
塩類溶液によって脱離する成分を回収する第２の脱離処
理とを含むことを特徴とする、特許請求の範囲第４項記
載の高純度牛ラクトフェリンの製造法。 - 【請求項６】上記相対的に低濃度の水溶液の濃度が０．
４〜２．５重量％であり、上記相対的に高濃度の水溶液
の濃度が１．５〜１２であることを特徴とする特許請求
の範囲第５項記載の高純度牛ラクトフェリンの製造法。 - 【請求項７】ラクトフェリンが、回収された全蛋白質中
９８％の純度で得られることを特徴とする特許請求の範
囲第５項又は第６項記載の高純度牛ラクトフェリンの製
造法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16847886 | 1986-07-17 | ||
| JP61-168478 | 1986-07-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63152400A JPS63152400A (ja) | 1988-06-24 |
| JPH0613560B2 true JPH0613560B2 (ja) | 1994-02-23 |
Family
ID=15868840
Family Applications (1)
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