JPH0584089A - 光学活性１，４−ジヒドロピリジン化合物の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニ
ル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン
酸 ３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エステル
５−（３−ニトロオキシプロピル）エステル（以下、化
合物Ａ）の医薬品として好ましい光学異性体のみを製造
するための極めて重要な製造中間体の製造法を提供する
こと。 【構成】 ２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニ
ル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン
酸 ビス（２−ニコチノイルアミノエチル）エステルま
たはその塩に、１，４−ジヒドロピリジン環の３位およ
び５位に結合したカルボン酸エステルを不斉加水分解す
る能力を有する酵素を作用させて不斉加水分解し、光学
活性（−）−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェ
ニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボ
ン酸 ３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エステル
を製造する方法。本発明化合物は、狭心症、高血圧等の
予防および治療薬として有用な光学活性な化合物Ａの極
めて重要な製造中間体である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は光学活性１，４−ジヒド
ロピリジン化合物の製造中間体の製造法に関し、さらに
詳しくは医薬として極めて有用な光学活性１，４−ジヒ
ドロピリジン化合物を製造する際の重要な光学活性１，
４−ジヒドロピリジン製造中間体の製造法に関するもの
である。

【０００２】

【従来の技術】１，４−ジヒドロピリジン系化合物のジ
ヒドロピリジン環の３位と５位に結合した２つのカルボ
ン酸エステルが互いに異なるものは、その４位に不斉炭
素を持っており、２種の光学異性体が存在する。最近、
この系統の化合物の生物学的性質が詳細に検討された結
果、それぞれの光学異性体間に薬理活性、体内動態、安
全性などに差のあることが報告されてきている。このよ
うな不斉炭素を有する化合物を医薬品として使用する場
合、生体に対して余計な負荷を与えないという意味か
ら、医薬品として好ましい一方の異性体のみを生体に与
えるという考え方が一般的になりつつある。

【０００３】従来、様々な光学活性１，４−ジヒドロピ
リジン化合物の製造法が報告されているが、これらは次
の２種の方法に大別される。すなわち、光学活性な化合
物と塩を形成させたのち分別結晶化により光学分割する
方法、および不斉炭素を持つ化合物を結合させてジアス
テレオマーに誘導しこれを分離するという方法である。
しかしながら、分別結晶化による光学分割は、シンコニ
ジン、シンコニンなどの高価な分割剤を使用しなければ
ならず、加えて数回の結晶化を要するなど操作が頻雑な
ため、目的物の収率低下を招くなどの欠点を有している
［特開昭６３−１８５９６０号公報、特開昭６４−５２
７５７号公報、特開平１−２５４６６１号公報、Ｃｈｅ
ｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，第２８巻，第２８０９頁
（１９８０年）など］。また、ジアステレオマーに誘導
して分離するという方法は、高価な光学活性化合物を原
料としたり、反応行程が長く複雑であるなどの欠点を有
している［特開昭６１−４３１８７号公報、特開平２−
１１５９２号公報など］。いずれの方法を採るにして
も、頻雑な操作を経て、しかも所望の光学異性体は最大
で５０％の収率でしか得られない。

【０００４】２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェ
ニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボ
ン酸 ３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エステル
５−（３−ニトロオキシプロピル）エステル（以下、
化合物Ａと称することがある。）およびその塩は、特開
平２−２２３５８０号公報にそのラセミ体の製造法とカ
ルシウム拮抗剤としての薬理作用が開示されている。化
合物Ａは、選択的冠血管拡張作用があり、かつ薬効の持
続性において優れ、さらにｃ−ＧＭＰ増加作用を併せ持
つことから、虚血性心疾患や高血圧症などの予防および
治療薬として期待されている。また、その構造上、化合
物Ａに光学異性体が存在し、その一方の異性体のみが医
薬品として好ましいことは予想されることである。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、化合
物Ａの医薬品として好ましい光学異性体のみを製造する
ための極めて重要な製造中間体の製造法を提供すること
にある。

【０００６】

【問題を解決するための手段】本発明者らは、光学活性
な化合物Ａの製造に際し、酵素を用いる方法を鋭意研究
した。その結果、その研究過程において、容易に製造で
きる化合物を原料とし、アスペルギルス属、ペニシリウ
ム属、ストレプトマイセス属およびバチルス属に属する
微生物が産生する加水分解酵素、動物の臓器から調製さ
れた加水分解酵素ならびに植物から調製された加水分解
酵素を用いることにより、好ましい旋光度を示す化合物
Ａの製造中間体を高収率で、しかも高い光学純度で与え
ることを見いだし本発明を完成した。

【０００７】すなわち、本発明は、２，６−ジメチル−
４−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジ
ン−３，５−ジカルボン酸 ビス（２−ニコチノイルア
ミノエチル）エステルまたはその塩に、２，６−ジメチ
ル−４−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピ
リジン−３，５−ジカルボン酸 ビス（２−ニコチノイ
ルアミノエチル）エステルまたはその塩の３位および５
位に結合したカルボン酸エステルを不斉加水分解する能
力を有する酵素を作用させて不斉加水分解し、（−）−
２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−１，
４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン酸 ３−
（２−ニコチノイルアミノエチル）エステルを回収する
ことを特徴とする光学活性（−）−２，６−ジメチル−
４−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジ
ン−３，５−ジカルボン酸 ３−（２−ニコチノイルア
ミノエチル）エステルの製造法である。

【０００８】本発明において塩とは、塩酸塩、硫酸塩ま
たは硝酸塩である。また、本発明で使用される酵素と
は、アスペルギルス属、ペニシリウム属、ストレプトマ
イセス属、バチルス属に属する微生物の生産する酵素、
動物の臓器から調製された酵素および植物から調製され
た酵素で、本発明の目的を達し得るものであればどのよ
うなものでもよく、特に限定されるものではない。

【０００９】これらの微生物起源の酵素の中には市販の
ものがあり、容易に入手することができる。市販の酵素
の具体例としては、たとえば、アスペルギルス属（Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）由来の酵素；プロ
テアーゼＡ「アマノ」、プロテアーゼＭ「アマノ」，ア
スペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｍｅｌｌｅｕ
ｓ）由来の酵素；プロテアーゼＰ「アマノ」、セアプロ
ーゼ「アマノ」，アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ ｓｐ．）由来の酵素；セルラーゼＡ「アマ
ノ」、アシラーゼ「アマノ」１５０００、ビオザイムＡ
（登録商標）「アマノ」、デアミザイム（登録商標）
「アマノ」、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｓｐ．）由来の酵素；ヌクレアーゼ「アマノ」（以
上、天野製薬社製），アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ）由来の酵素；プロテアーゼタ
イプＸＩＸ；（シグマ社製），ストレプトマイセス属
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）由来の
酵素；アクチナーゼＥ（科研製薬社製）、プロテアーゼ
タイプ ＸＩＶ（シグマ社製），ストレプトマイセス
属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃａｅｓｐｉｔｏｓｕ
ｓ）由来の酵素；プロテアーゼ タイプ ＩＶ（シグマ
社製），バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎ
ｉｆｏｒｍｉｓ）由来の酵素；サブチリシンＡ（ノボ社
製）、プロテイナーゼ（フルカ社製）、プロテアーゼ
タイプＶＩＩＩ（シグマ社製），バチルス属（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来の酵素；アルカリプ
ロテアーゼ（ナガセ生化学工業社製）、プロテイナーゼ
（フルカ社製）などが挙げられる。

【００１０】また、動物の臓器から調製された酵素の中
には市販のものがあり、これも容易に入手することがで
きる。市販の酵素の具体例としては、たとえば豚肝臓エ
ステラーゼ（シグマ社製）、膵臓リパーゼ（東京化成工
業社製）などが挙げられる。植物から調製された酵素の
中には市販のものがあり、これも容易に入手することが
できる。市販の酵素の具体例としては、たとえば、ピー
ナッツのホスホリパーゼ（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ
Ｄ）（ルセルナ・ケム社製）、パインアップルのプロ
テアーゼ（Ｂｒｏｍｅｌａｉｎ）（シグマ社製）などが
挙げられる。さらに、東京化成工業社製のプロテアーゼ
が挙げられる。また、本酵素反応には種々の添加剤を用
いることができ、１，１０−ｏ−フェナンスロリンの添
加が特に有効である。この添加剤の使用により、反応速
度を向上させ、また必要な酵素量を低減させることがで
きる。

【００１１】次に、本発明の酵素反応を説明するが、基
本的には用いる酵素の至適条件にあわせてそれぞれ設定
するものであり、ここでは一般的な反応条件について説
明する。本発明の製造法は、上記微生物を培養した培養
液、培養液から分離した菌体、酵素を含有する培養濾
液、または各種酵素分離法によって菌体もしくは培養濾
液から分離した粗製酵素、さらに精製した精製酵素と、
２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−１，
４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン酸 ビス
（２−ニコチノイルアミノエチル）エステルまたはその
塩を水溶液中で、攪拌または振とうすることにより行わ
れる。

【００１２】反応液としては、リン酸緩衝液、トリス−
塩酸緩衝液などの緩衝液の使用が、反応液のｐＨを一定
に保つ上で好ましい。緩衝液の濃度は、緩衝液の種類に
よっても異なるが、２Ｍ以下が好ましい。また、緩衝液
を使用せずに反応を行うこともでき、この際は水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウムなどの水溶液を用いて、ｐＨ
スタットにより反応液のｐＨをコントロールするのが好
ましい。反応条件は、使用する酵素にあわせて設定すれ
ばよい。たとえばプロテアーゼＰを使用したときの各種
条件は、ｐＨが６．０〜８．０であり、最も好ましくは
ｐＨ７．０〜７．５である。反応温度は２５℃〜５０℃
で反応させるが、最も好ましくは３０℃〜３５℃であ
る。反応液中の基質の濃度は、反応液に対し、０．０５
〜２５重量％である。使用する酵素の量は、酵素の力価
および基質の量に応じて適宜決定すればよい。反応時間
は、ＴＬＣ分析またはＨＰＬＣ分析などにより反応の進
行状況を確かめながら設定すればよい。

【００１３】また、本酵素反応では基質溶解補助剤とし
て種々の有機溶媒を使用することができる。添加できる
有機溶媒としては、アセトン、メチルエチルケトン、ジ
メチルスルホキシド、ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド、アセトニトリルなどがあげられ、これらは
単独、または２種類以上用いてもよい。本酵素反応に有
機溶媒を添加する場合、酵素活性を低下させることのな
い範囲で添加する必要がある。たとえばアセトンを添加
する場合、反応液に対して１〜１５％の濃度で添加する
ことができるが、最も望ましくは４〜６％である。有機
溶媒の添加時期としては、反応開始時、反応途中いずれ
でもよい。また、ラウリル硫酸ナトリウム、トリトンＸ
１００，ツイーン８０などの界面活性剤、ポリエチレン
グリコール＃４００、アラビアゴム、レシチンなどのエ
マルジョン化剤などをもちいることもできる。

【００１４】さらに、本酵素反応を実施するにあたり基
質を反応初期に一度に添加すると、基質が沈澱、凝集
し、反応の進行が阻害される。この解決策として、基質
（塩酸塩、硫酸塩または硝酸塩）を水に溶かして、これ
を酵素液に少量ずつ連続的に添加するという方法が大き
な効果を示した。この基質の連続添加と上記有機溶媒の
添加を合わせて行う場合には、基質濃度が低い反応初期
に有機溶媒を添加するよりは、むしろ反応途中に添加す
るのが望ましい。上記、基質溶解補助剤の使用と基質の
連続添加により、最終的な基質の仕込濃度を大幅に上昇
させることができる。

【００１５】また、本酵素反応に種々の添加剤を使用す
ることにより、反応速度を上昇させ、かつ使用酵素量を
低減することができる。使用酵素がプロテアーゼＰの場
合、種々の有機試薬、金属イオンを添加して検討したと
ころ、１，１０−ｏ−フェナンスロリンが特に優れた効
果を示した。１，１０−ｏ−フェナンスロリンは反応開
始前、ジメチルスルホキシド、アセトンなどの有機溶媒
に溶解して酵素液に加えることができ、その使用量とし
ては、反応液に対して１ｍＭ〜１０ｍＭの濃度で添加す
るのが有効であり、最適な濃度は１ｍＭ〜４ｍＭであ
る。反応終了後、反応液を１規定リン酸の添加でｐＨ
５．０に合わせ、酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出し、
必要に応じてカラムクロマトグラフィーなどで精製し目
的物を単離することができる。

【００１６】

【発明の効果】本発明により、簡便で高収率、しかも高
い光学純度で光学活性（左旋性）な化合物Ａの製造中間
体を供給することができる。特に、本発明方法では使用
する原料（プロキラルな化合物）と生成物が１：１の収
支関係にあり、従来の光学分割法のように所望の光学異
性体の収率が最大で５０％という欠点を有しないことが
最大の特長である。さらに、本発明方法は、穏和な条件
で反応が進行することから特別な反応装置を要しないこ
と、高価な分割剤を必要としないこと、反応後の廃液の
処理が容易なことなど、従来法に較べて極めて有利な利
点を有する。

【００１７】この光学活性な製造中間体を用いることに
より、極めて容易かつ収率よく光学活性な化合物Ａを製
造することができる。すなわち、３−ニトロオキシプロ
ピル−１−ブロミドまたは３−ニトロオキシプロピルア
ルコールと反応させて、光学活性な化合物Ａに導くこと
ができる。ここで得られる光学活性な化合物Ａは、医薬
品として好ましい異性体（左旋性）である。左旋性の化
合物Ａはラセミ体および右旋性の化合物Ａに比べ、カル
シウムチャンネル結合能、冠血流量増加作用、心拍数抑
制作用および降圧作用の試験などにおいて格段にその作
用が優れている。従って、本発明の中間体により製造さ
れる左旋性の光学活性を有する化合物Ａは、狭心症、高
血圧等の予防および治療薬として極めて有用である。

【００１８】

【実施例】以下、本発明を実施例および参考例によって
説明するが、本発明は実施例のみによって限定されるも
のではない。

【００１９】なお、反応生成物の確認は、以下に示すＴ
ＬＣ法およびＨＰＬＣ法により行った。 ＴＬＣ；ＴＬＣプレート ＲＰ−１８（メルク社製） 展開溶媒：ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏ＝８／２ ＨＰＬＣ；カラム ＯＤＳ Ｃ₁₈（４．６φ×１５０ｍ
ｍ） 溶離液 ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏ＝１／１ 流速 １ｍｌ／ｍｉｎ 温度 ５０℃ 検出 ＵＶ ２４０ｎｍ

【００２０】また、光学純度は、旋光度の測定またはキ
ラルカラムを使用するＨＰＬＣ分析により決定した。Ｈ
ＰＬＣ分析は以下の条件で行った。 分析条件；カラム ＵＬＴＲＯＮ ＥＳ−ＯＶＭ（４．
６φ×１５０ｍｍ）（信和化工社製） 溶離液 ｉ−ＰｒＯＨ／２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
３．０）＝１／９ 流速 １ｍｌ／ｍｉｎ 温度 ２５℃ 検出 ＵＶ ２４０ｎｍ

【００２１】実施例１ プロテアーゼＰ２０ｇおよび２，６−ジメチル−４−
（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−
３，５−ジカルボン酸 ビス（２−ニコチノイルアミノ
エチル）エステル・２塩酸塩１ｇを水１Ｌに溶解し、こ
の溶液を１規定水酸化ナトリウム溶液の添加でｐＨ７．
５に調製し、３０℃にて撹拌した。ｐＨスタットにてｐ
Ｈを７．５に保ちながら２４時間撹拌した後、１規定燐
酸を添加してｐＨを５．０に調製し、酢酸エチル１Ｌで
２回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し
た後、濾過、濃縮して得られた残渣を逆相クロマトグラ
フィー［カラム：ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８
（４０−６３μｍ）（メルク社製）、溶出液：ＭｅＯＨ
／Ｈ₂Ｏ＝６／４］で精製し、（−）−２，６−ジメチ
ル−４−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピ
リジン−３，５−ジカルボン酸 ３−（２−ニコチノイ
ルアミノエチル）エステル５７４ｍｇ（収率：８５％）
を淡黄色泡状物質として得た。

【００２２】ｍ．ｐ． １１６〜１１９℃ ［α］Ｄ³⁰ −７７．９゜（ｃ＝１．１３，ＭｅＯＨ） ＨＰＬＣ法により測定した光学収率は１００％であっ
た。 ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆，２００Ｍｚ） δ（ｐｐ
ｍ）；２．２８（６Ｈ，ｓ），３．５１（２Ｈ，ｑ，Ｊ
＝６Ｈｚ），４．１３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ），４．
９９（１Ｈ，ｓ），７．４２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈ
ｚ），７．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，８Ｈｚ），
７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．９３（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．９８（１Ｈ，ｓ），８．１３
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），８．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
５Ｈｚ），８．５７〜８．７８（１Ｈ，ｍ），８．９４
（１Ｈ，ｓ），８．９６（１Ｈ，ｓ），１１．８３（１
Ｈ，ｂｒｓ）

【００２３】実施例２〜１４ 表１に示す酵素２０ｍｇを２ｍｌの燐酸緩衝液（２０ｍ
Ｍ，ｐＨ７．５）に溶解し、２０μｌの水に溶解した
２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−１，
４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン酸 ビス
（２−ニコチノイルアミノエチル）エステル・２塩酸塩
１ｍｇを加えた。この反応液を３０℃にて２４時間振と
うし、得られた反応混合物を１規定燐酸でｐＨを５．０
に調製した後、酢酸エチル２ｍｌで抽出した。有機層を
濃縮して得られた残渣をＨＰＬＣ分析し、収率を算出し
た。さらに目的物のモノカルボン酸に相当する部分をＨ
ＰＬＣで分取し、光学活性カラムを用いるＨＰＬＣ法で
光学収率を算出した。結果を表１に示した。

【００２４】

【表１】

【００２５】

【００２６】実施例３ プロテアーゼＰ６．０ｇを水５００ｍｌに溶解し、この
溶液に１０ｍｌのジメチルスルホキシドに溶解した１，
１０−ｏ−フェナンスロリン０．３ｇを加えた。この溶
液を０．５規定水酸化ナトリウム水溶液の添加によりｐ
Ｈ７．５にした。上記酵素液を３０℃にて攪拌しなが
ら、これに水５０ｍｌに溶解した２，６−ジメチル−４
−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン
−３，５−ジカルボン酸 ビス（２−ニコチノイルアミ
ノエチル）エステル・２塩酸塩６．０ｇを基質が析出し
ない様に少しずつ連続的に加えた。基質の添加に伴い反
応液のｐＨが低下するが、ｐＨスタットにより０．５規
定水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨを７．５に保
持した。４８時間後、基質の添加が終了した時点で、Ｈ
ＰＬＣにより反応の進行を確かめたところ、ほぼ完全に
基質が消失していた。反応液に１規定燐酸を添加してｐ
Ｈを５．０に調製し、酢酸エチル３００ｍｌで２回抽出
した。酢酸エチル層を２００ｍｌまで濃縮した後、１規
定水酸化ナトリウム水溶液２００ｍｌで２回抽出した。
得られた水酸化ナトリウム溶液を一度酢酸エチル１００
ｍｌで洗浄した後、再び１規定燐酸の添加によりｐＨ
５．０とし、酢酸エチル１００ｍｌで２回抽出した。酢
酸エチル層を合わせて飽和食塩水で洗浄した後、無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、濾過、濃縮して、（−）−
２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−３−
（２−ニコチノイルアミノエトキシカルボニル）−１，
４−ジヒドロピリジン−５−カルボン酸３．７４ｇ（収
率：９２％）を得た。

【００２７】参考例１ （−）−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニ
ル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン
酸 ３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エステル２
５０ｍｇのジメチルホルムアミド１０ｍｌ溶液に３−ニ
トロオキシプロピル−１−ブロミド１２０ｍｇと炭酸カ
リウム９０ｍｇを加え、室温で１０時間撹拌した。反応
溶液を水にあけ、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、
炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、乾燥し、溶媒
を留去した。残留物を酢酸エチル１０ｍｌに溶解したの
ち、４規定塩酸酢酸エチル溶液０．２ｍｌを加え、１時
間撹拌した。生成した不溶物を濾過し、減圧乾燥して目
的とする（−）−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロ
フェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカ
ルボン酸 ３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エス
テル ５−（３−ニトロオキシプロピル）エステル塩酸
塩２４０ｍｇを得た。 ｍ．Ｐ． １２６〜１２８℃ ［α］Ｄ²⁵ −２５．２°（ｃ＝１．１２，ＭｅＯ
Ｈ）

【００２８】参考例２ （−）−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニ
ル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン
酸 ３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エステル２
５０ｍｇの塩化メチレン１０ｍｌ溶液に無水酢酸１６０
ｍｇとモレキュラーシーブス３Ａ２５０ｍｇを加え、１
時間撹拌した。不溶物を濾過したのち、濾液に３−ニト
ロオキシプロピルアルコール１００ｍｇと塩化アセチル
１滴を加えて、３時間撹拌した。反応溶液を水にあけ、
塩化メチレンで抽出し、有機層を炭酸水素ナトリウム水
溶液で洗浄したのち、乾燥した。溶媒を留去したのち、
上記参考例１と同様の方法により処理して、目的とする
（−）−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニ
ル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン
酸３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エステル ５
−（３−ニトロオキシプロピル）エステル塩酸塩２３０
ｍｇを得た。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 花田 和紀 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフ
   ェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカル
   ボン酸 ビス（２−ニコチノイルアミノエチル）エステ
   ルまたはその塩に、２，６−ジメチル−４−（３−ニト
   ロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジ
   カルボン酸 ビス（２−ニコチノイルアミノエチル）エ
   ステルまたはその塩の３位および５位に結合したカルボ
   ン酸エステルを不斉加水分解する能力を有する酵素を作
   用させて不斉加水分解し、（−）−２，６−ジメチル−
   ４−（３−ニトロフェニル）−１，４−ジヒドロピリジ
   ン−３，５−ジカルボン酸 ３−（２−ニコチノイルア
   ミノエチル）エステルを回収することを特徴とする光学
   活性（−）−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェ
   ニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボ
   ン酸 ３−（２−ニコチノイルアミノエチル）エステル
   の製造法。
2. 【請求項２】 ２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフ
   ェニル）−１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカル
   ボン酸 ビス（２−ニコチノイルアミノエチル）エステ
   ルの塩が塩酸塩、硫酸塩または硝酸塩であることを特徴
   とする請求項１記載の製造法。
3. 【請求項３】 酵素がアスペルギルス属、ペニシリウム
   属、ストレプトマイセス属およびバチルス属からなる群
   から選ばれる微生物から得られる酵素である請求項１記
   載の製造法。
4. 【請求項４】 酵素がアスペルギルス オリザエ、アス
   ペルギルス メレウス、アスペルギルス ソジャエ、ス
   トレプトマイセス グリセウス、ストレプトマイセス
   カスピトサス、バチルス リケニホルミスまたはバチル
   ス サブチリスから得られる酵素である請求項１記載の
   製造法。
5. 【請求項５】 酵素が動物の臓器から調製された酵素で
   ある請求項１記載の製造法。
6. 【請求項６】 酵素が植物から調製された酵素である請
   求項１記載の製造法。
7. 【請求項７】 １，１０−ｏ−フェナンスロリンを添加
   することを特徴とする請求項１記載の製造法。